JPS5983056A - ジゴキシゲニン免疫原複合体に対する抗体およびそれらを用いるジゴキシン測定免疫試験法 - Google Patents

ジゴキシゲニン免疫原複合体に対する抗体およびそれらを用いるジゴキシン測定免疫試験法

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JPS5983056A
JPS5983056A JP58174442A JP17444283A JPS5983056A JP S5983056 A JPS5983056 A JP S5983056A JP 58174442 A JP58174442 A JP 58174442A JP 17444283 A JP17444283 A JP 17444283A JP S5983056 A JPS5983056 A JP S5983056A
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Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は、ジコギシゲニン誘導体、特に、従来の免疫原
性担体材に結合したカルボキシ−およびアミノ−官能基
化誘導体からなる免疫原複合体に関し、かつ、かかる免
疫原複合体に対して産ノ１された抗−ジコキシン抗体に
関する。かかる抗体は、生物学的液体中のジゴキシンＡ
１１ｌ　’＋ｉｆ川の免疫試験においてイ１用である。
本発明はまた、特に好ましい免疫試験手法において有用
な標識化ジ」ギシケニン複合体に関する。
薬剤治療を受ている患者の血流中のジゴキシン７１６１
Ｋを監視することが、医学的に価値のあること１オ既に
認められているところである。免疫試験は、例えば、血
清またはプラズマのような血液試料中のジゴキシンを測
定するために用いられる現４１品もバ通の方法であり、
試験試料中の薬剤に対する抗−ジゴキシン抗体の特異的
結合に基づいている。
ジゴキシンは、アグリコン、ジゴキシン抗体およびＣ−
３（＜ｉでアグリコンと連結した３個のグリコシ１：性
ジギトキソース残基からなる強心性グリコシドである。
グリコシドはハプテンであり、すなわち、例えば、異種
動物からのアルブミンのような蛋白質等の免疫原性担体
材との複合体の形で、宿主動物に注入されなければ、抗
体産生を刺激することはできない。抗−ジゴキシン抗体
を産生するための従来の免疫原複合体は、末端グリコシ
ド残）＾の修ｉＩ（物を介して担体に化学的に結合した
グリコシドからなる。末端残基は過ヨウ素酸で酸化され
、開環し、担体中の遊離アミノ基と容易に結合しうるジ
アルデヒド誘導体を生成する［パトラ−およびシｘ　７
　（Ｂｕｔｌｅｒ　ａｎｄ　Ｃｈｅｎｌ、Ｐｒｏｃ、Ｎ
ａｔｌ。
Ａｃａｄ、Ｓｃｉ、アメリカ合衆国５７ａニア１頁（１
９８７）。
ならびにスミス等（Ｓｍｉｔｈ　ｅｔ　ａｌ）、Ｂｉｏ
ｃｈｅ＋ａ　９巻：３３１頁（＋９７０）］。結果とし
て得られるものはジコキシンー担体複合体である。
関連する強心性グリコシド、すなわち、ジギトキシンに
対する抗体は、担体と０〜３位で結合するアグリコンの
複合体から産生されている。アグリコン３−０−サクシ
ノイルージギトキシゲニンは、従来手法により蛋白質担
体に結合されている［オリバー等（Ｏｌｉｖｅｒ　ｅｔ
　ａｌｌ、　Ｊ、Ｃｌ１ｎ、Ｉｎｖｅｇｔ、　４７巻：
ｌ０３５頁（＋９８８）］。
３−置換ジゴキシン抗体およびジキトキシゲニン誘導体
が提案されており、免疫試験の実施において、抗〜ジゴ
キシン抗体および抗−ジギトキシン抗体と連係して用い
るための標識化複合体を製造する目的のために用いられ
ている。この従来技術の代表的なものは、米国特許第３
，９８１，９８２号および第４，０ｆｆ４，２２７号な
らびに種々の非放射性標識化複合体と関連する米国特許
ｔｆｔＪ４，０３９，３８５号、第４，２１３．１１９
３号および第４，２７３，８８８号である。
米国特許第４，２１７，２８０号および第４，２１９，
５４９号には、種々の３−アミノ−３−デオキシジゴキ
シゲニン誘導体の合成および強心剤療法におけるそれら
の使用について述べられている。３−ジゴキシン抗体の
＃Ａｊｆ４については、タムおよびガブラー（Ｔａｎ＋
ａｎｄ　　Ｇｕｂｌｅｒｌ　、ｌ１ｅｌｖ、Ｃｂｉｍ、
Ａｃｔａ　　４２　　＠　：２３９頁（＋１１５９）な
らびにシミズおよびミツハシ、　Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏ
ｎ　２４’／（３：４２０７頁（＋９８８）より知られ
る。ブヂックおよびケー−−ッヒ（Ｂｏｕｔｉｑｕｅ　
ａｉｄ　Ｋｏｅｎｉｇ）　、Ｂｕｌｌ、　Ｃｂｅｓ。
５−ｑｃ、Ｆｒ、　＋９７３（２）、第２部、７５ｏ頁
には、ステロイドケトン類の還元的アミン化が述べられ
ている。アルデヒド類およびケトン類の還元的アミノ化
における水素化シアノ硼素ナトリウムの使用については
、ボルナ等（Ｂｏｒｃｈ　ｅｔ　ａｌ）、Ｊ、Ａｍｅｒ
、Ｃｈｅｍ、Ｓｏｃ、９３巻：　２９８７頁（１９７１
）に記載されている。３−アミツカＪｌ／デ／！Ｊドａ
ｌｉ、ハン４ｊ　−等（Ｉｌａｎｇｅｒ　ｅｔ　ａｔ）
　。
１１ｅｌｖ、Ｃｈｉｍ、Ａｃｔａ　５１３（８）＠　：
２７１］２　頁（ＩＥ１７３）ニよ’Ｊ　製造された。
本発明は、従来の免疫原性担体材に結合した３−［Ｎ−
（カルボキシアルキル）］−］アミノー３−デオキシジ
ゴキシゲニまたは３−［Ｎ−（アミノアルキル月−アミ
ノー３−デオキシジゴキシゲニン誘導体からなるジゴキ
シゲニン免疫原複合体を提供する。提供される免疫原は
一般式： （式中、Ｃａｒｒｉｅｒは担体材、Ｒは結合または連結
基、見およびｍの一方はｌで他方は０．ｎは２からｌＯ
までの整数、およびＰは平均して１がら約５０までであ
る。）の免疫原である。連結基Ｒが結合の場合は、ジゴ
キシゲニン誘導体は、例えば、誘導体の７ミノ基または
カルボキシル基および但体上のそれぞれカルボキシル基
またはアミン基とのアミド連結により、直接、担体材に
結合し、力）かる場合にはＪｌｑ体材仕材通常、蛋白質
またはボ１ノペプチドである。架橋基Ｒが、単純な結合
以外の場合、広汎な従来構造、例えば、ジゴキシゲニン
部分のアミン末端基またはカルボキシル末端基を、通常
、アミン基またはカルボキシル基である、１１１体」−
の適ｐＪな基に連結する二官能性結合剤の残基からなっ
てもよい。
従来の抗血清またはモノクローナル手法により、かかる
複合体に対して産生された抗−ジョ゛キシン抗体もまた
提供される。かかる抗体は、ジゴキシン測定用の、免疫
試験法ならびに試験キットおよび試験具のような試薬に
おいて有用である。
特に好ましい均−系、非放射性免疫試験手法番こおいて
有用な標識化複合体も、かかる標識化複合体および免疫
原複合体の合成に用いられる新規なジゴキシゲニン誘導
体と同様に提供される。
ト官能基化−アミ／−３−デオキシジゴキシゲニン誘導
体は、式： （式中、Ｚはアミノまたはカルボキシルであり、ｎは２
から１０までの整数である。）のカルボキシアルキル誘
導体またはアミノアルキル誘導体である。かかる誘導体
は、水素化シアノ硼素ナトリウムの存在下で、適切なα
、ω−アルカンジアミンまたはω−アミノアルカン酸を
用いて３−ジョキシゲノンを還元的にアミノ化すること
により製造される。
好ましい実施態様においては、官能基化ジゴキシゲニン
誘導体は、アミド結合またはペプチド結合の形成により
、担体材中の相当するアミノ基またはカルボキシル基に
、直接、結合する。結果として得られる好ましい免疫原
複合体は、式：（式中、Ｃａｒｒｉｅｒおよびｎは先に
定義したとうりであり、Ｙは、通常、免疫原性蛋白質ま
たは免疫原性ポリペプチドである担体材上のカルボキシ
ル基またはアミノ基を、ジゴキシゲニン部分に連結−４
−るアミド基であり、Ｐは、平均して、ｌから４１１体
トの利用しうるアミド結合部位（例えば、結合条件の下
Ｃ１場合次第で、利用しうるカルボキシルノ、（または
アミン基）の数までであり、通常、約５０未溝である。
）を有する。
カルボキシル基−含イ目月体にジゴキシゲニン誘４体を
直接に１合さゼるために利用しうるペプチド縮合反応は
周知であり、制限なしに、カルボジイミド反応［エール
ネ等（Ａｈｅｒｎｅ　ｅｔ　ａｌ）　Ｂｒ１ｔ、Ｊ。
Ｃｌ１ｎ、　Ｐｈａｒｍ、３　巻：５＋（頁（１９７１
３）および５ｃｉｅｎｃｅ＋４４０１３４４頁（１９７
４）　］、混合無水物反応［エルラン刀−等（Ｅｒｌａ
ｎｇｅｒ　ｅｔ　ａｌｌ、Ｍｅｔｈｏｄｓ　ｉｎＩＩＩ
ｌｍｕｎｏｌｏ　ｙ　ａｎｄ　ＩＩｌ１ｍｕｎｏｃｈｅ
ｍｉｓｔｒｙウィリアムズおよびチェイス編アカデミツ
ク・プレスｉｅｄ　。
Ｗｉｌｌｉａｍｓ　ａｎｄ　Ｃｈａｓｅ、Ａｃａｄｅｍ
ｉｃ　Ｐｒｅｓｓ）　　にューヨーク　＋９６７）１４
９頁］、ならびに酸アジドおよび活性エステル反応（コ
ツプル（Ｋｏｐｐｌｅ）、江■」μａｎｄ　Ａｍ１ｎｏ
　Ａｃ１ｄｓ　、タブリュー・エイ・ベンジアミン舎イ
ンコーボレーテッＦ（Ｗ、＾、ＢｅｎｊａｍｉｎＩｎｃ
、ｌ　　（＝ｊ、−ヨーク　１９６ｆｔ）］　を包含す
る。
ＣＩ　ｉｎ、ｃｈｅｍ、２２巻　ニア２６頁（１９７８
）も参照されたり）。
また、ジコキシゲニン誘導体は、その一端で、誘導体の
アミノ基またはカルボキシル基との結合を形成し、その
他端で、担体１−に存在する適切な官能基との結合を形
成する従来の連結試薬を使用して結合させることができ
る。例え１え、アミン１１店４体をアミン巨大分子に結
合させるために、ヒスイミテーＩ・９Ｆ＋、ビスイソシ
アネート類、およびグ共ｌタールアＪレデヒＦ’　（Ｉ
ｍｍｕｎｏｃｂｅｍ、６巻：５３頁（＋９Ｈ）］　をは
しめとする二官能ｔ１結合試薬は周知でＩｉ）る。他の
イＩ用な結合反応は、例えば、−に連のコｙ　７”ルの
論文；ロウエおよびディーン　（Ｌｏｖｅａｎｄ　Ｄｅ
ａｎｌ　、　Ａｆｆｉｎｉｔ　　Ｃｈｒｏｍａｔｏ　ｒ
ａ　ｈ　　ジゴン會ワイリー・アンドｅサンズ（Ｊｏｈ
ｎ　Ｗｉｌｅｙ　ａｎｄ！１ｉｏｎｓ）　　にューヨー
ク　１９７４）’　、ミーンズおよび　フ、　イ　−ニ
ー　　（Ｍｅａｎｓ　　ａｎｄ　　Ｆｅｅｎｅｙｌ、　
　　Ｇｈｅｍｉｃａｌｔｌｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ｏ
ｆ　Ｐｒｏｔｅｉｎｓ、ホルデンーデー（１１ｏｌｄｅ
ｎ−Ｄａｙｌ　（サンフランシス：Ｉ　　１９７１）；
ならびにクレイザー等ｔＧｌａｚｅｒ　ｅｔ　ａｌｌ、
Ｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ｏｌ　
Ｐｒｏｔｅｉｎｓ　、　エルセピア（Ｅｌｓｅｖｉｅｒ
ｌにューヨーク　＋９７５）等の文献に十分に検δ・１
されている。
１式の１１１ｐはＪｌｊ体に結合しているジゴキシゲニ
ン部分の数、すなわち、免疫原のエピト−プ密度（Ｅｐ
ｉｔｏｐｉｃ　ｄｅｎｓｉｔｙ）を表わし、通常の状ｆ
ｎ；では、・１１均して、■から約５０までであり、さ
らに普通には、■から約２０となるであろう。免疫原の
合成および抗体応答の、容易さおよび再現性を考慮すれ
ば、最適のエピト−プ密度は、約２ないし約１５゜さら
に通常には、４ないしＩＯになる。
免疫原性担体材は、ジコキシケニン誘導体に結合させる
ために利用しうる官能基をイ１する、従来公知のものの
いずれからも選択することができる。十分な大きさおよ
び免疫原性を有する、炭水化物類、多糖類、リボ多糖類
、核酸類等のような他の４Ａ料もまた同様に用いること
かできるが、はとんどの場合、１１．１体は蛋白質また
はポリペプチドであろう。大部分、免疫原性蛋白質類お
よび免疫原性ポリペプチド類は、４，０００および１０
，０００，０００の間の、好ましくは、１５，０００よ
り大きい、さらに通常には、５０，０００より大きい分
子量を右するであろう。通常、−・つの動物種から取り
出された蛋白質類は、他種の血液流に導入された際、免
疫原性を示すであろう。特に、有用な蛋白質類は、アル
ブミン類、グロブリン類、酵素類、ヘモシアニン類、グ
ロブリン類、有為の非蛋白質ｆ’ｌ成分を有する蛋白Ｊ
ＩＪ、類、例えば°、グリコ蛋白質類等である。
分子Ｉｐ　カ、３０．００ＱｔｉＪ：び２（ｔｏ、００
０　（７）間テアルアルブミン類およびクロプリン類は
、特に、好ましい。さらに、従来の免疫原性担体材およ
び／＼ジブテン類、それらに結合させるための手法に関
する（シー市水Ｑｌｉについては、次のものを参照して
もよい：パーカー（Ｐａｒｋｅｒｌ、Ｒａｄｉｏｉｍｍ
ｕｎｏａｇｓａ　　ｏｆＢｉｏｌｏ　１ｃａｌｌｙ　Ａ
ｃｔｉｖｅ　Ｃｏｍｏｕｎｄｓ　、プレンティス−ホー
ル（イングルウッド曹クリブス、ニュー・シャーシー、
アメリカ合衆国、１９７ｅ（Ｐｒｅｎｔｉｃｅ−Ｈａｌ
ｌ（Ｅｎｇｌｅｗｏｏｄ　Ｃｌ１ｆｆｓ、Ｎｅｗ　Ｊｅ
ｒｓｅｙ　ＵＳＡ、ＩＥ１７ｆｌ）ｌ；パトラ−（Ｂｕ
ｔｌｅｒ）Ｊ、Ｉｍｍｕｎｏｌ、Ｍｅ’ｔｈ、　７巻：
１−２４頁（！１１７４）　、ワインリプおよびシュロ
フ（Ｗｅｉｎｒｙｂａｎｄ　　５ｈｒｏｆｆｌ　　Ｄｒ
ｕ　　　Ｍｅｔａｂ、Ｒｅｖ、ｌＯｌｊ３　　：　　２
７１−２［１３頁（＋９７５）　、ブｏ　−１−７およ
びストロング（Ｂｒｏｕｇｈｔｏｎａｎｄ　Ｓｔｒｏｎ
ｇｌ　、　Ｃｌ１ｎ、　Ｃｈｅ＋ｓ、　２２巻ニア２Ｂ
−７３２頁（１９７６）　；　　ならびに、プレイフェ
ア等　（ＰｌａｙｆａｉｒｅＬ　ａｔ）、　Ｂｒ、Ｍｅ
ｄ、Ｂｕｌｌ、　３０巻：２４−３１頁（＋９７４）。
木免１５゛ト原複合体を用いての特異的抗体の産生は、
いかなる従来手法に従ってもよい。抗体生成を誘導する
ノ＾本的な態様を記載した数多くのテキストが人手可能
であり、例えばパーカー（Ｐａｒｋｅｒ）Ｒａｄｉｏｉ
ｎｍｕｎｏａｓｓａ　　ｏｆ　Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｌ
ｙ＾ｃｔｉｖｅｄプレンチスーホール（イングルウッド
ークリフス、ニュー−シャーシー、アメリカ合衆国１９
７８）（Ｐｒｅｎｔｉｃｅ−Ｈａｌｌ　（Ｅｎｇｌｅ、
ｗｏｏｄ　Ｃｌ１ｆｆｓ。
Ｎｅｗ　Ｊｅｒｓｅｙ、ＵＳＡ、１９７８）ｌ　を参照
してもよい。通常の場合、ラビット、ヤギ、マウス、モ
ルモット、またはウマのような宿主動物に、１またはそ
れ以にの種々の部位に、通常、アジュへンｉ・との混合
物として、免疫原複合体を注射する。さらに、注射を、
同一部位にまたは異なる部位に、定期的間隔でまたは不
定期的間隔で施こし、その後、受容しうる適宜量が達成
されたと測定されるまで、抗体適宜量を評価するために
採血される。宿主動物から採血して、適νＪ最の特異的
抗１ｒ１１清をｆＩする。必要ならば、抗血清が実際の
試験の遂行に用いるのにａ　！ｕＪだと考えられ・るま
で、−Ｉｌ特ｙＡ的抗体のような望ましくない物質を除
去するために、精製ｒＶ＋“を行っ・Ｃもよい。
抗体は、体細胞融合反応法、（Ｓｏｍａｔｉｃ　ｃｅｌ
ｌｈｖｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ　ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ
　）によってもａ＋られ、かかる抗体は５通常、モノク
ローナル抗体と呼はれる。かかるモノクローナル抗体手
法についての概説は、Ｌ　ｍ　ｈｏｃｙｔｅ　Ｉｔ　ｂ
ｒｉｄｏｍａｓ　、メルヂャース’ｒ”＝編、スフ゛リ
ン刀−−フェルラーグ（ｅｄ　。
Ｍｅｌｃｈｅｒｓ　ｅｔ　ａｌ、Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖ
ｅｒｌａｇｌ　　にューヨーク１９７８）　；　Ｎａｔ
ｕｒｅ　２ｓｅ春：　４８５頁（＋９７７）、および５
ｉ−ｃ　ｉμヨ２０８巻；８８２頁（１９１１０）に見
出される。
本発明の免疫原から産生される抗体は、凝集反１べ＼、
法、放用件免疫試験、不均一系酵素免疫試験（３に国特
許第３．ｆｉ５４，０９０号参照）平均−系イ１を光免
役試験（米国特許第４，２０１．７Ｈ号；　ｔ５４，１
３３．［１３９すｔ；　、１：　ヒｆｆ１３，９９２．
Ｅ１３１　号参照）　オ、Ｊ：　ヒ均−系（公卿操作を
含まない）免疫試験をはじめとする、ジゴキシン測＞ｉ
−川の免疫試験法、および相当する試薬に用いることが
できる。節後のものは、特に、々ｒましく、蛍光減光ま
たは増加（米国特許第４、ｌ［ｉｏ、０１１３号参照）
、蛍光偏光（Ｊ　、Ｅｘｐ、Ｍｅｄ、＋２２７１１０２
９頁（ＩＨ５）参照）、酵素基質−標識化免疫試験（米
国特許第４，２７９，９９２号および英国特許明細舎弟
１，５５２，８０７号参照）、補欠分子族−標識化免疫
試験（米国特許第４．２３８．５６５号参照）、例えば
阻害物標識（米国特許第４，１３４，９？２号およＵ第
４．２７３，８６８号参照）を用いる酵素活性調整物−
標識化免疫試験、酵素−標識化免疫試験（米国時δ１第
３，８１７，８３７吋参照）、エネルキー移動免疫試験
（米国特許第３．９９ｆｌ、３４５号参ｊｉｐ、）、化
学的−励起ｔ＋’光免疫試験（米国特許第４，２３８，
１９５号参照）および二重抗体立体障害免疫試験（米国
特許第３．９３５，０７４号および第３，９Ｈ，９４３
号参！！９）のような手法を包含する。
さらに、本発明の誘導体は、１．記の種々の免疫試験を
遂行するのに必要とされる標識化複合体を製造するのに
用いることができる。標準方法により、適切な？Ａ誘導
体、放射性標識化することもできまたは蛍光性部分を用
いて標識化することもできる。同様に、例えば、酵素基
質、補欠分子族、酵素活性調整物または酵素（蛋白質で
あり、かつ、１−述の免疫原性担体に同様にＲ１合され
うるちの）のような好ましい均一系手法のための適切な
標識部分を、誘導体と結合させて、標識化複合体を１１
成することができる。
〃ｒましい標識化複合体の一形式は、一般式：（式中、
βＧＯ（ＧＯ）−は １ であり、ｎは先に定義したとうりである。）を右する、
β−ガラクトシル−ウンベリフェロン（βＧυ）で標識
されたものである。好ましくは、かかる複合体は、適す
ノな３−［Ｎ−（アミノアルキル）］−］アミノー３−
デオキシジゴキシゲニン誘？ｑとβＧＵ−カルボン酢（
米国特許第４，２２８，９７８　吟）との従来のペプチ
ド縮合により製造される。βＧＵ−標識化複合体は、基
質−標識化蛍光性免疫試験における標識化試薬としてイ
ｉ用である（ＳＬＦＩ＾　米国持前第４’、２７９，９
９２号参照）。
別の形式の標識化複合体は、一般式： １１＋ｉ　ｂｏｓｅ　−（１’ｂｏｓ　、ｌ−一几ｉ１
ｘ＞ｆｌａｖｉｎ（式中、Ｒｉｂｏｓｅ−（Ｐｈｏｓ）
２−　Ｒｉｂｏｆｌａｖｉｎは、ＦＡＩ）中のりポフラ
ビンーピロホスフェート−リボース残基を表わし、ｒは
２から１０までの整勿であり、ｎは先に定義したとうり
である。）を右する。フラヒンアテニンジヌクレオチド
（ＦＡＤ）で標識化さ１ｔたものである。かかる複合体
は、適切なＮ１（−ω−アミノアルキル−ＦＡＤ銹導体
（米国時Ｗ　第４．２５５．５Ｅｉｅ号）と適切なＮ−
（カルボキシアルキル）−アミノ−３−デオキシジゴキ
シゲニン誘４　体とのペプチドｌｉｔ合により製造され
る。ＦＡＤ−標識化複合体は、アポ酵素再活性化免疫試
験系における標識化試薬として有用である（ＡＰＩＳ　
　米国特許第４．２３８．５６５時参照）。
本発明の試薬は、本発明により包含される所望のンゴキ
シン免疫試験法を行うのに必要とされる１べての必須の
化学的な要素からなる。試薬または系は、試薬間での両
立ができる範囲で組成物もＬ　＜　ｌ１ｌｊｉｉ！合物
として箱詰め状の市販品の形で；試１１ｔ・！１．の形
で；または、試験キｙ）すなわち必要な試薬を保管する
ｌまたはそれ以−１−の容器の箱詰め組合セとして提供
される。試薬には、所９の結合反応系に適切な試薬、例
えば、本発明の抗体および標識化複合体が含まれる。勿
論、この試薬は、唇種１液、希釈剤、標準液等のような
当業者に公知の、かつ、商業−１−およびユーザーの立
場からψましい他の物質を含有することもできる。特に
好ましいものは、（ａ）本発明の抗−ジゴキシン抗体お
よび（ｂ）抗体と結合する際変化する検出可能な性質を
有する標識化ジゴキシゲニン複合体からなる本発明の均
一系競争結合免疫試験用の試験キットである。また、試
薬組成物およびそれを包含せしめた、固体状ＪＬＪ体材
仕材なる試験具が好ましい。
種々の形のかかる試験具は、ヨーロンパ特許出願第５１
，２１３号として公開されている、１８８０年１０Ｊ］
３０１（出願の米国特許出願第２０２，３７８号に記載
されている。好ましい試験キ７）および試験具に用いら
れる特異的標識は、上述のように、用いられる手法に依
るであろう。
ここに、本発明を説明するが、ハ′の実施例により限定
されるものではない。
１庭１Ｊ ジコキシゲニン誘導体の製造 ３−Ｎ−（６−アミノヘキシル　アミノ−３−デオキシ
ジゴキシゲニン ３−シゴキシゲノン　［タムおよびカプラー（Ｔａｔａ
ａｎｄ　Ｇｕｂｌｅｒｌ　、１ｌｅｌｖ、ｃｈｉｍ、Ａ
ｃｔａ　４２巻＝２３８頁（１９５９）ならひにシミズ
およびミツハシＴｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ　２４ｉｆ：４
２０７頁（１９ｆ（８）　Ｉｆグラム（ｇ）（２，５８
ｍｍｏｌ）、１、［１−ヘキサンジアミン３．２１ｇ　
（２７，６Ｈｍｏｌ）、およびメタノール（Ｃ）１３０
）１）５０・ミリリットル（ｍｌ）の混合物を氷酢酸で
ｐＨ１３に調節し、水素化シアノ硼素ナトリウ１．１２
５ミリグラム（ｍｇ）（１，９９ｍｒｏｌ）で処理した
。−晩＋１’ｌ！拌後、混合物をシリカゲル（Ｓ　１０
２　）　５　ｇにＰ面吸着させＳ　＋　０２−８０　［
イー・メルク（Ｅ、Ｍｅｒｋｌ、西ドイツ］を用いてク
ロマトグラフィーにかけ、先ス２：ｌ：　Ｉ　りｔ：＋
　０　ホＡｙ　ムＣＣＨＣｌ　、）−ＣＨ３０）１−１
４％水酸化アンモニウム（Ｎ　ＩＩ　４０１１　）　３
リツｉ・ル（Ｌ）で、ついＣ１２：Ｉ：１ｃＩｌｃ、ｕ
　　−ｃｏ　０１１−２１１％ＮＨ４Ｏ＋１混合物３Ｌ
テ溶出３ した。／ｌｌ動物２種類の３αおよびβ−異性体の１つ
の部分分離を行なった。この生成物を含む両分をひとま
とめにし、濃縮し、インプロパノ−ルー１・ｌ（エーテ
ル−ヘキサン）より無定形白色粉末どしで沈澱させた。
収ｆ？！３３８　ｍ　ｇ　（２７駕）。
分析：Ｃ２９Ｈ２８Ｎ２０４１／２Ｈ２０として、削算
値　　Ｃ，６９，９！ｌ；Ｈ，＋０．０８；Ｎ、５．８
３実験値　　Ｃ，ｆ（９，ｆｔ８．）Ｉ、　９．Ｅｉｌ
、Ｎ、５．７１’ＨＮＭＲ（９０ｍｌｌｚ　、ＤＭＳＯ
−ｄｅ）　’δＱ、８１（（ｓ、３Ｈ）；０．８５　　
（ｓ、３１１）；　　　１．２９（ｍ、２８ｔｌ）：２
．３５　　（ｍ、３ｔｌ）；　　　７．＋１　　（ｍ、
７Ｈ）；４．０９　（ｍ、１旧；　　４．８７　（ｓ、
２ｌ−１）；５．８１　　（ｓ、ＬＨ）。
ＩＲ（ＫＣＬ）　　　：　　２Ｂ４０，２８７０．１７
４０．１６２５．１３９５゜１０２５ｃｍ’ ＣＩＩ　３０　Ｉｔ　３０　ｍ　Ｉ中の３−ジコ上シゲ
ノ７３００ｍｇ　（０，７７ｍｍｏｌ）および６−アミ
ノカプロン酸５Ｈｍｇ（３，８８ｍｍｏｌ）のけん濁液
に、水素化シアノ硼素すトリウｉ、２５３ｍｇを添加し
た。混合物を一晩室温でＩＷ任した。反応混合物の反応
を水０．５ｍ　ｌで停止にし、減圧−トで蒸発させた。
残香をＩ　Ｏｍ　Ｉ　ＣＩ！　３０１１に採取しＳ　＋
　０２１　ｇ　、１−に予備吸着させ、Ｓ　ｉ　Ｏ２の
３．５ｔｌ８ｃｍのカラｌ・を用いてクロマトグラフィ
ーにかけ、１．：Ｌ：Ｉ：の０１１０文、　−ＣＩｆ　
３０　Ｈ−濃Ｎ　Ｉｆ　４０　Ｈ混合物を用いて溶出し
た。所望の生成物を含有する両分をひとまとめにし、蒸
発させて、無色ガラス状物質５Ｈｍｇを？１また。試料
を水２ｍｌに溶解し、セファデックス（５ｅｐｈａｄｅ
ｘ”　ｌ　Ｌｔｌ−２０［ファルマシアφピスカタウェ
イ・ニューシャーシー・アメリカ合衆国（Ｐｈａｒｍａ
ｃｉａ、Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ、ＮＪ、ＵＳＡＩＩの２
．５！９０ＣＩ１１のカラトを用いてクロマトグラフィ
ーにかけ、水で溶出した。Ｃ−３異性体の混合物として
の生成物を含有する両分をひとまとめにし、ついで蒸発
させた。生成物をＣＩｆ　３０　Ｈ／エーテルー石油エ
ーテルより白色粉末として得た。収量２７９ｍｇ（７２
％）。ｍｐ　１？２＝１８０℃。
分析：Ｃ２゜Ｈ４５ＮＯ６１／２＋１として、１：１ｑ
値：Ｃ，ｅ８．ｏｌ；Ｈ，９，０４；Ｎ、２．７３実験
イｄｉ　：Ｃ，８８，＋４；１４，９．２８；Ｎ、２．
４７１１０（ＭＲ（９０ｍ１ｌｚ、ＤＨ８Ｏ−ｄ６）：
　　δ０．６５　（ｓ、３Ｈ）；０．８５（ｓ、３１１
）；　１．３８　（ｍ、３１Ｈ）；２．５　（ｍ、２）
１）；　２．９７　（ｍ、１０）；３．２３　（ｍ、２
Ｂ）；　　４．０２　（Ｈ，、Ｏ）；４．８７　　（ｓ
、２１１）；　　　５．８２　　（ｓ、ＩＨ）ＩＲ（Ｍ
ＣＩ）　　：　　２９４０．２８Ｆ１０．１７８０．１
７４５，１ｆ１２５゜１５７０．１４５５．１４００ｃ
ｍ’ 夫」自排ヱ 抗−ジゴキシン抗体の製造 ３−Ｎ−（５−カルボキシペンデル）アミノ−３−デオ
キシジゴキシゲニン　１３　ミリグラムを、トリーｎ−
−ｊｆルアミン　フル１を含有する乾燥ジメチルポルム
アミド　０．３ｍｌに溶解し、この７１ｇ合物を水浴中
で冷却した。クロロギ酸エチル１０マイクロリツ）・ル
（ｋｌ）を添加し、１５分間反応さぜた。この反応混合
物を、　１．ＯＮ＊酸化ナトリウム（ＮａＯＨ）　１２
５μ、１を含有する水Ｓｍｌ中に溶解した仔ウシ血清ア
ルブミン　１２５ｍｇの攪拌溶液に摘ドした。２４時間
後、反応物を、　０．１Ｍリン酸ナトリウＬ１緩衝液（
ｐ＋４７．ｏ）テ平衡化した５ｅｐｈａｄｅｘ”　Ｇ−
２５（相）〔ファルマシア（Ｐｈａｒｍａｃｉａｌｌの
２．５Ｘ　５５ｃｍカラムを用いてクロマトグラフィー
にかけ、両分１０．５ｍｌを採集した。画分１３の２８
０ナノメーＩ・ル（ｎｍ）での吸光１（（を記録した。
また、この両分の２００ｇ＋を連破ｉｅＱ、８ｍｌ　と
混合し、　３４０から４５０ｎ、ｍまでの吸光スペクト
ルを記録した。このスペクトルから得た３８０ｎｍでの
吸光度を用いて、ジゴキシゲニン誘導体の３８Ｏｒ＋ｎ
＋でのミリモル吸光係数を　３．２と見做して、仔つシ
面清アルブミンと結合したジゴキシゲニン誘導体のＭを
１１１１１　した。ハプテン：蛋白質のモル比は８，６
であった。
クロマトグラフィーからの画分１２ないし１５をひとま
とめにし、免疫化に用いた。このひとまとめにしたもの
を　０．１Ｍリン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ７０）で希
釈し、０．４ｍｇ／ｍｌの蛋白質濃度を得た。この免疫
原ｌミリリットルをフロイント完全アジュパンｌ−１ｍ
１と合わせ、ラビットに皮下ｔＩ射を施した。ブースタ
ー免疫化を４週間間隔で行ない、これらの免疫原をフロ
インド不完全アジュバントと合わせた。ブースターの一
週間後に、試験採血を行なった。最初の免疫化後５ケ月
後には、適切な滴定１４１の抗血清を畳た。
γ胤狙」 標識化ジゴキシゲニン複合体の製造 シゲニン ジメチルホルムアミド５ｍｌ中の７−β−カラクＩ・シ
ルクマリン−３−カルボン酸（米国特ａ１第４．２２８
，９７８号）　２４３ｍｇ（０，ｆ（ｅｍＩＩｌｏｌ）
およびＮ−ヒト゛ロキシサクシンイミＦ　８４ｍｇ（０
，７３ｍｍｏｌ）に、ジシクロへキシルカルボジイミド
１４３ｍｇ（Ｏ１３９ａ＋ｍｏｌ）をアルゴン気体下、
０°Ｃで添加した。混合物を４時間に亘って０℃から室
温まで温めた。この混合物に３−Ｎ−（６−アミンヘキ
シル）アミノ−３−デオキシジゴキシゲニン３２２ｍｇ
（０，ｆｌθｍｍｏ　ｌ　）を１后加し、得られた溶液
を一晩攪拌した。粗反応混合物をシリツク・ニー・アー
ル（登録商標５ｉｌｉｃＡＲｏ）ＣＧ−７［マリンクロ
ット・セント・ルイスφミズーリΦアメリカ合衆国（Ｍ
ａｌｌｉｎｃｋｒｏｄｔ、　Ｓｔ、Ｌｏｕｉｓ、Ｍｉｓ
ｓｏｕｒｉ　ＵＳＡＩＩＩｇ、ｌ−に吸着させ、かつ、
エタノールで充填された５ｉｌｉｃＡＲ”　ＣＣ−７（
１’）　２．５Ｘ　８０ｃｍカラムに施した。カラムを
、エタノール２Ｌより　４＝１エタノール−１１’ＶＩ
　トリエチル炭酸水素アンモニウム（ｐＨ７，５）ｉ合
物２１、まで徐々に変化する直線勾配溶液を用いて溶出
した。生成物を含有する両分をひとまとめにし、ノ入発
させ、ついで生成物をメタノール−１°１工−テル／石
油エーテルより沈殿させた。
ＩＩＭ　ＩＨｔ　　ｌ　２４ｍｇ。試料を、エタノール
で充填されたセフｙデリクス（登録商標　５ｅｐｈａｄ
ｅｘθ）Ｌ［（−２０１フアルマシア（ＰｈａｒＩｌｌ
ａｃｉａ）］の２．５Ｘ　６０ｃｍカラムに施し、エタ
ノールを用いて溶出した。溶媒を蒸発させ、メタノール
−１：１エーテル／ヘキサンより沈殿させて、生成物を
得た。収１７２ｍｇ（１３％）　。
ｍｐ１５２°Ｃ（分解）。
分析”　４５Ｈｅ２Ｎ２０１３　・４■２０として、、
１算値：　Ｃ，５９，５；　Ｈ，？、８；　Ｎ、　３．
１実験値：　Ｃ，５９，７；　Ｈ，７，ｏ；　Ｎ、　３
．８’）Ｉ　ＮＨＲ（９０ｍＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ８）：
　δＱ、ｔ１５（ｓ、３）１）；０．８６（ｓ、３１１
）；　１．３５（ｍ、２６１１）；２．３（ｍ、２１１
）；　３．５５（ｍ、１３１１）；４．０８（ＩＩｌ、
２１１）；　４．ｆ１９（ｍ、３１１）；４．８７（ｓ
、２Ｈ）；　５．０４（ｄ、Ｊ＝７Ｈｚ、ＩＨ）；５．
８２（ｓ、ＩＨ）；　ｅ、４１（ｍ、ＩＭ）；７．１５
（ｓ、ＩＨ）；　７．２１（ｄ、Ｊ＝８Ｈｚ、ＩＨ）；
７．９３（ｄ、Ｊ＝８）１ｚ、ｌ１ｌ）；８．８３（ｂ
ｔ、Ｊ＝６ｔｌｚ、！ｔｌ）；８．８２（ｓ、ＩＨ）。
ＩＲ（ＫＣＩ）：　　１７３５．　１７１０．　１８４
５．　　Ｉｆｌ１５．　１５４５゜１２２０．１０７５
ｃｍ−’　　。
ジゴキシゲニン−ＦＡＤ 乾燥ジメチルホルムアミド９．５ｍｌ中の３−Ｎ−（５
−カルボキシペンチル）アミノ−３−テスオキシジコキ
シゲニン２５．２Ｂ（５０ＪＬｍｏｌ）およびＮ−ヒド
ロキシサクシンイミドｅ、３ｎ＋ｇ（５ｅ川ｍｍｏｌ）
に、乾燥ジメチルスルホキシドＯ，ｅｍｌ’中に溶解し
たジシクロへキシルカルボジイミド　１０．８ｍｇ（５
２ｇ　ｍｏｌ）溶液を、アルゴン気体ド、０°Ｃで添加
した。反応物を、０°Ｃで３０分ついで室温で３０分子
ｆ＋！拌した。水　１ｍｌに溶解したＮ８−（！！−ア
ミノヘキシル）−フラヒンアデニンジヌクレオチド（米
国特許第４，２５５．５Ｈ吟）１０メＬｍｏｌ溶液を、
１−記溶液に添加し、−ンシ）で、混合物を室温で一晩
撹拌した。次に、灰石混合物を水で４５０ｍ１　まで希
釈し、ＤＥＡＥ−セルロース（炭酸水素１１１型）の　
１．５Ｘ３０センチメートル（ｃｍ）カラムに施した。
カラムを、２．８＋ｎｌ／分の流速で、Ｉｆ２０１．５
１．よ！ＪＯ，１Ｍトリエチル炭酸水素アンモニウム（
ｐＨ７，５）１．５Ｌまで徐々に変化する直線勾配溶液
を用いで溶出した。！７ｎ＋ｌ／分の両分を採取した。
生成物を含有する両分１６〜３２をひとまとめにし、濃
縮し、ついでｐ１１７．０、容Ｊｉ２５ｍｌに調整した
。４５０ｎｍ番ζお（Ｊる吸光度測定（ｏ、ｅ８ｏ）よ
り、１１，３としてのＦＡＤのミリモル吸光係数を基と
して、収量は１．９０３　ｇｍｏｌ（収率１８％）と算
出された。
実ＵしイＬＡ ジコヤシゲニン−ＦＡＤの特性 シボキシゲニンカルポン酸誘導体のＮＯＳエステルおよ
びアミンへキシル−ＦＡＤの反応混合物試才１（１０ル
１）を、イソ酪酸−１１２０−１−リエチルアミン（７
０・２９・１）を用いて、薄層クロマトグラフィーにか
けた。Ｒｆ＝０．２のスポットをプレートより削り取り
、０．１　Ｍリン酸塩緩衝液（ｐＨ７，０）１．０ｍｌ
中にけん尚させた。」−澄の・部０．３５ｍ１を、０、
ＩＭ　　リン酸緩衝液（ｐＨ７，０）２．１ｍＭ　　３
．５−ジクロル−２−ヒドロキシベンゼンスルホン酸ナ
トリウム １．１％（ｗハ）　仔ウシ血清アルブミン２１ｇｇ／ｍ
ｌ　　ペルオキシダーゼ ０、１０５Ｍ　　グルコース よりなるグルコースオキシダーゼ試験試薬　１００ル１
と混合した。２マイクロモル（ｇ　Ｍ）ＦＡＤ結合部位
；　１０％（ｖ／ｖ）グリセロール；４マイクロモル（
ｇＭ）４−アミノアンチピリン、０．１モル（Ｍ）　リ
ン酸塩（ｐＨ７，０）よりなるアポグルコースオキシダ
ーゼ試薬を調製した。ジゴキシンに対する抗血清（アｉ
・ランティック嗜アンティボディズ、スケアポロウ、メ
イン・アメリカ合衆国（ＡｔｌａｎｔｉｃＡｎｔｉｂｏ
ｄｉｅｓ、Ｓｃａｒｂｏｒｏｕｇｈ、）ｌａｉｎｅ　ｔ
ｌｓ＾））を０．１Ｍリン酸ＬＵＸ　（ｐＨ７，’Ｏ）
で１０倍に希釈して用いた。０．１Ｍリン酸塩（ｐＨ７
，０）に溶解したジゴキシン（１３０ｇｌ’ｌ）溶液を
同一！ａ衝液を用いて希釈した。
アポ酵素試薬および希釈ジゴキシン抗血ｒｋ１００マイ
クロリッｉ・ル（ｇ　ｌ）を、使い捨て９ｆ能なキュベ
ントの−・隅に置いて試験を行なったｅ緩衝液または希
釈ジゴキシン濃度　（１０ｇｌ＞を反対の一隅に置いた
うグルコースオキシダーゼ試験試薬１．９０ｍ１を添加
して反応を開始した。試験物を２５°Ｃで１０分間温４
し、　５２Ｑｒ＋Ｉ１１での吸光度を記録した。ジゴキ
シンの最終濃度はｅ５ｎＭであった。
ｆｆｌＡ５２０ｎｍ（１０分後戸 −７９７７４０ ５４Ｇ３　　　　　７１＋１１ １０　　　　　　　　３９１　　　　　５０５２０　　
　　　　　　３５４　　　　　３７８３０　　　　　　
　　３４４　　　　　３３９ｔ２回の実験値を、標識が
ない場合の空活性爪（Ｉｌｌ　Ａ　５２０□＝＋ｏ５）
に対して補正したものの平均害−梅Ｊｆｆ ３−ト（５−カルボキシペンチル）アミノ−３−デスオ
キシショキシゲニンに対する抗血清の滴定標識化複合体
としてβ−ＧＯ−ジゴキシゲニン複合体を用いる基質−
標識化蛍光免疫試験（ＳＬＦＩ＾；米国特許第４，２７
８，９９２号参照）法で滴定を行なった。５０ｎｌｌ八
イシン緩衝液（ｐＨ８，３）３ミリリンドルを６個のキ
ュベントに旧り取り、下記に掲げた容量の抗血清を適切
なキュベントに添加した。次に、　３４０＋＋ｍでの吸
光度が０．０１のβ−ＧＵ−ジゴキシゲニン　１００ｇ
１を淫加した。最後に、イー−コリｉＥ、ｃｏｌｉｌよ
り得られたβ−カラクトシダーセ　１００ｐＬｌを添加
し、ついで反応物を室温で２０分間放置した。（１７１
１１位の酵素活性は２５°Ｃで、５０ｎＮパイシン緩衝
液（ｐｉｔ　８．３）中で、１分間当り０−ニトロフェ
ニル−β−ガラクトシターゼ　ＩｐＬｍｏｌ　を加水分
解する。）この温４期間の最後に、励起として４ＱＯｎ
ｍ光を、発光として　４５０ｎｍ光を用いてイ１ｆ光を
記録し。
た。
０　　　　　　　　　　　　　　　　　　９４１　　　
　　　　　　　　　　　　　　８０２　　　　　　　　
　　　　　　　　　６６５　　　　　　　　　　　　　
　　　　３２１０　　　　　　　　　　　　　　　　　
３５２０　　　　　　　　　　　　　　　　　３２抗而
枯濃度が増加するにつれ蛍光が減少した。
すなわち、抗体がβ−ＧＵ−ジゴキシゲニン複合体に４
１、合していることを示している。
凋凰皇」 ジゴキシン免疫試験 ５０ｍＭ０ｍＭバイシンＰ：液（ｐｉｔ　ｆｌ、３）３
．０ｍｌ　を含有するヤーユヘ７１に、種々のＭの２ル
ｈジゴキシンを棒加し、Ｆ記に掲げた最終濃度のジゴキ
シンを得た。パイシンに溶解したβ−カラクトシダーゼ
（０，６中ｆ隻“ｌ／ｍｌ）　１００マイクロリットル
を各キュベン１に添加し、反応物を室温で２０分間放置
した。この期間終了時にｉｌｔ光を記録した。次の結果
がｆＩＩられた。
３９ ７．８　　　　　　　　４４ ５５２ ８６５ ＋５２　　　　　　　　　８５ ジゴキシン濃度が増加するにつれ、蛍光が増加し、ジゴ
キシンおよびβ−ＧＵ−ジゴキシゲニン複合体が、抗体
結合部位に対して拮抗していることを示している。

Claims (1)

  1. 【特許請求の範囲】 ■１式： （式中、Ｃａｒｒｉｅｒは免疫原性担体材、Ｒは結合ま
    たは連結基、見およびｍの一方はｌで他方は０、ｎは２
    かも１０までの整数、およびＰは平均して１から約５０
    までである。）で示されることを特徴とするジゴキシゲ
    ニン免疫原複合体。 ２、Ｒが、結合または水素を除くｌないし２０個の原子
    からなる原子鎖である特許請求の範囲８８１項記載の複
    合体。 ３、Ｒが、ジゴギシゲニン部分のアミン末端基またはカ
    ルボキシル末端基を、担体村上のアミノ基またはカルボ
    キシル基に連結する二官能性結合試薬の残基である特許
    請求の範囲第１項記載の複合体。 ４、該担体材が、免疫原性蛋白質または免疫性ポリペプ
    チドである特許請求の範囲第１項ないし第３項のいずれ
    かに記載の複合体。 ５、式： （式中、Ｃａｒｒｉｅｒは免疫原性蛋白質１１体材また
    は免疫原性ポリペプチド担体材であり、Ｙは、担仕材Ｊ
    二のカルボキシル基またはアミン基を、ジゴギシゲニン
    部分に連結するアミド基であり、ｎは２からｌＯまでの
    整数であり、Ｐは、平均してｌから担体材」二の利用し
    うるアミド結合部位の数までである。）で示されること
    を特徴とするジゴキシゲニン免疫原複合体。 ６、ｐが、平均してｌおよび約５０の間である特許請求
    の範囲ｗＳ５項記載の複合体。 ７、該担体材が、アルブミンである＃詐請求の範囲ｆｊ
    Ｓ５項記載の複合体。 ８．７ミド基Ｙ中の窒素原子が、担体材中のアミン基か
    らのものであり、アミＦ基Ｙ中の炭素原ｒが、式中のア
    ルキレン基と結合している特許請求の範囲第６項または
    第７項記載の複合体。 ９、ｎが５である特許請求の範囲第８項記載の複合体。 １０、式： （式中、Ｃａｒｒｉｅｒは免疫原性担体材、Ｒは結合ま
    たは連結基、文およびｍの一方は１で他方は０、ｎは２
    から１０までの整数、およびｐは平均してｌから約５０
    までである。）で示されるジゴキシゲニン免疫原複合体
    に対して産生されたことを特徴とする抗体。 Ｉｌ、式： （式中、Ｃａｒｒｉｅｒ　Ｉｔ免疫原性蛋白質担体材ま
    たは免４ジ原慴ポリペプチド担体材であり、Ｙは、担体
    材１．０カルボキシル八またはアミツノＡを、ジ」キシ
    ケニン部分に連結するアミド基であり、ｎは２か６１０
    までの整数であり、ｐは、平均してｌから４１１体材上
    の利用しうるアミド結合部位の数までである。）で示さ
    れるジゴキシゲニン免疫原複合体ｌこ対して産生された
    ことを特徴とする抗体。 １２、該式中、該アミド基Ｙ中の窒素原子が、該ＪＩｊ
    体材中材中ミン基からのものであり、該アミド基Ｙ中の
    ）ｋ素原子が、式中のアルキレン基と結合１、ており、
    ｎが５であり、Ｐが平均してｌおよび約５０の間である
    特許請求の範囲第１１項記載の抗体。 １３該式中、１ｔＡｃａｒｒｉｅｒがアルブミンであり
    、該アミｌ”　Ｊ、（Ｙ中の窒素部ｒ−が、アルブミン
    中のアミン基からのものであり、該アミド基Ｙ中の炭素
    １１；ｊ　（か、式中のアルキレン基と結合しており、
    ｎか５である！ｔ！ｒ　＋ｉ’ｒ請求の範囲第１＋　ｚ
    ｌｉ記戦の抗体。 １４、ｊ（、・ （式中、ｎが２から１０までの整数である。）で示され
    ることを特徴とするジゴキシゲニン誘導体。 １５、　　ｎが６である特許請求の範囲第１４項記載の
    誘導体。 １６、ジコキシンに対する抗体として、式；（式中、Ｃ
    ａｒｒｉｅｒは免疫原性４ｔ４体材、Ｒは結合または連
    結基、立およびｍの一方はｌで他方は０、ｎは２からｌ
    Ｏまでの整数、およびｐは平均しでｌから約５０までで
    ある。）で示されるジゴキシケニン免疫原複合体に対し
    て産生された抗体を用いることを特徴とするジゴキシン
    測定用免疫試験法・ ！？、ジゴキシンに対する抗体として、式：（式中、Ｃ
    ａｒｒｉｅｒは免疫原性蛋白ｇ１．担体材または免疫原
    性ポリペプチド担体材であり、Ｙは、担体材」６のカル
    ボキシル基またはアミン基を、ジコキシゲニン部分に連
    結するアミド基であり、ｎは２からＩＯまでの整数であ
    り、ｐは、平均してｌから担体材にの利用しうるアミド
    結合部位の数までである。）で示されるジゴキシゲニン
    免疫原複合体に対して産生された抗体を用いることを特
    徴とするジゴキシン測定用免疫試験法。 ＋８．該式中、該アミド基Ｙ中の窒素原子が、該担体材
    中のアミノ基からのものであり、該アミド基Ｙ中の炭素
    原子が、式中のアルキレン基と結合Ｉ７ており、ｎが５
    であり、ｐが平均してｌおよび約５０の間である特許請
    求の範囲第１７項記載の試験ｌ去　。 １９、該式中、該Ｃａｒｒｉｅｒがアルブミンであり、
    該アミド基Ｙ中の窒素原子が、アルブミン中のアミ７基
    からのものであり、該アミＩ−基Ｙ中の炭素原子が、式
    中リアルキレン基と結合しており、ｎが５である特許請
    求の範囲第１７項記載の試験法。 ２０、ジゴキシンに対する抗体として、式：（式中、Ｃ
    ａｒｒｉｅｒは免疫原性担体材、Ｒは結合または連結基
    、見およびｍの一方はｌで他方は０、ｎは２から１０ま
    での整数、およびｐは平均してｌから約５０までである
    。）で示されるジゴキシゲニン免疫原複合体に対して産
    生された抗体を用いることを特徴とする免疫試験による
    ジゴキシン測定用試薬。 ２１、ジゴキシンに対する抗体として、式：（式中、Ｃ
    ａｒｒｉｅｒは免疫原性蛋白質担体材または免疫原性ポ
    リペプチド担体材であり、Ｙは、担体村上のカルボキシ
    ル基またはアミノ基を、ジゴキシゲニン部分に連結する
    アミド基であり、ｎは２からｌＯまでの整数であり、ｐ
    は、平均してｌから担体村上の利用しうるアミド結合部
    位の数までである。）で示されるジゴキシゲニン免疫原
    複合体に対して産生された抗体を用いることを特徴とす
    る免疫試験によるジゴキシン測定用試薬８２２、該式中
    、該アミド＆Ｙ巾の窒素原子が、該担体４　中の７ミノ
    基からのものであり、該アミド＆Ｙ中の炭素原子が、式
    中のアルキレン基と結合しており、ｎが５であり、ｐが
    平均してｌおよび約５０の間である特許請求の範囲第２
    １項記載の試薬。 ２３、該式中、該ｃａｒｒｉｅｒがアルブミンであり、
    該アミド基Ｙ中の窒素原子が、アルブミン中のアミ７基
    からのものであり、該アミド基Ｙ中の炭素１’Ｋ　ｒが
    、人中のアルキレン基と結合しており、ｎが５である特
    許請求の範囲第２１項記載の試薬。 ２４、（ａ）式； （式中、Ｃａｒｒｉｅｒは免疫原性担体材、Ｒは結合ま
    たは連結基、見およびｍの一方はｌで他方は０、ｎは２
    からｌＯまでの整数、およびｐは平均して１から約５０
    までである。）で示されるジゴキシゲニン免疫原複合体
    に対して産生された抗体および、（ｂ）該抗体と結合す
    る際変化する検出可能な性質を有する、標識化ジゴキシ
    ン複合体または標識化ジゴキシゲニン複合体からなるこ
    とを特徴とする、均一系免疫試験によるジゴキシン測定
    用試験キット。 ２５、（ａ）式： （式中、Ｇａｒｒｉｅｒは免疫原性蛋白質担体材または
    免疫原性ポリペプチド担体創であり、Ｙは、担体村上の
    カルボキシル基またはアミ７基を、ジコキシゲニン部分
    に連結するアミ１：基であり、ｎは２かう１０までの整
    数であり、ｐは、平均して１から担体村上の利用しうる
    アミド結合部位の数までである。）で示されるジゴキシ
    ゲニン免疫原複合体に対して産生された抗体および、（
    ｂ）該抗体と１１１合する際変化する検出可能な性質を
    有する。標識化ジゴキシン複合体または標識化ジゴキシ
    ゲニン複合体からなることを特徴とする、均一・系免疫
    試験によるジゴキシン４（１１定用試験キ・ント６２６
    　　該式中、該アミド基Ｙ中の窒素用（子が、該１１１
    体旧中のアミノ基からのものであり、該アミ１′基Ｙ中
    の炭素原ｒが１式中のアルキレンノルと結合しており、
    ｎが５であり、ｐが平均してｌおよび約５０の間である
    特許請求の範囲第２５項記載の試験キット。 ２７、該式１１１、該Ｃａｒｒｉｅｒがアルブミンであ
    り、該アミドＪ、ｌ；　Ｙ中の窒素原子が、アルブミン
    中のアミツノ、（力臼ろのものであり、該アミトノ＾Ｙ
    中の炭素ＩＩ；Ｃｒが、人中のアルキレン基と結合して
    おり、ｎか５である特許請求の範囲第２５　ＪＪ’ｉ記
    戦の試験キ・２１　。 ２１Ｊ、（ａ）式： （式中、Ｃａｒｒｉｅｒは免疫原性４０体材、Ｒは結合
    または連結基、見およびｍの一方はｌで他方は０、ｎは
    ２からＩＯまでの整数、およびｐは平均して１から約５
    ０までである。）で示されるジゴキシゲニン免疫原複合
    体に対して産生された抗体および該抗体と結合する際変
    化する検出可能な性質を有する標識化ジゴキシン複合体
    または標識化ジゴキシゲニン複合体、ならびに、（ｂ）
    該試薬組成物を包含せしめた固体状１１体部月からなる
    ことを特徴とする、均一系免疫試験によるジゴキシン測
    定用試験具。 ２９、（ａ）式： （式中、Ｃａｒｒｉｅｒは免疫原性蛋白質担体材または
    免疫原性ポリペプチド担体材であり、Ｙは、担体材Ｉ−
    のカルボキシル基またはアミノ基を、ジゴキシゲニン部
    分に連結するアミド基であり、ｎは２から１０までの整
    数であり、ｐは、平均してｌかも１［１仕材１−の利用
    しうるアミド結合部位の数までである。）で示されるジ
    ゴキシゲニン免疫原複合体に対して産生された抗体およ
    び該抗体と結合するＶ５変化する検出Ｉｌｌ能な性質を
    有する標識化ジゴキシン複合体または標識化ジゴキシゲ
    ニン複合体、ならびに、（ｂ）、ＩＡ試薬組成物を包含
    せしめた固体状担体部材からなることを特徴とする、均
    一系免疫試験によるジ」キシン測定用試験具。 ３０、該式中、該アミド基Ｙ中の窒素原子が、該Ｊ旦体
    ＋４　中のアミ７基からのものであり、該アミド７ｊｔ
    ＩＹ中の炭素原子が、式中のアルキレン基と結合してお
    り、ｎが５であり、ｐが平均してｌおよび約５０の間で
    ある特許請求の範囲ｆｔ５２９項記載の試験具。 ３１、該式中、該Ｃａｒｒｉｅｒがアルブミンであり、
    該アミド＆Ｙ中の窒素原子が、アルブミン中のアミノ基
    からのものであり、該アミド基Ｙ中の炭素原子が、式中
    のアルキレン基と結合しており、ｎが５である特許請求
    の範囲第２８項記載の試験具。 ３２、式： （式中、βＧＵ−（ＣＯ）−は、 １ であり、かつｎは２からｌＯまでの整数である。）で示
    されることを特徴とするβ−ガラクトシルーウンへリフ
    ェロンージゴキシゲニン複合体。 ３３、ｎが６である特許請求の範囲第３２項記載の複合
    体。 ３４、式： ％式％ （式中、Ｒｉｂｏｓｅ−（Ｐｈｏｓ）２−Ｒｉｂｏｆｌ
    ａｖｉ　ｎは、フラビンアデニンジヌクレオチド中のり
    ポフラビンーピロフォスフェイトーリポース残基を表わ
    し、ｒは２から１０までの整数であり、ｎは２からｌＯ
    までの整数である。）で示されることを特命とするフラ
    ビンアデニンジヌクレオチドージゴキシゲニン複合体。 ３５、ｎが５である特許請求の範囲第３４項記戦の複合
    体。 ３６、ｒか６である＃＋ｊ訂請求の範囲ｔ５３４項また
    は第３５項記載の複合体。
JP58174442A 1982-09-23 1983-09-22 ジゴキシゲニン免疫原複合体に対する抗体およびそれらを用いるジゴキシン測定免疫試験法 Granted JPS5983056A (ja)

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