JPS5984162A - 免疫分析法 - Google Patents

免疫分析法

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JPS5984162A
JPS5984162A JP57195115A JP19511582A JPS5984162A JP S5984162 A JPS5984162 A JP S5984162A JP 57195115 A JP57195115 A JP 57195115A JP 19511582 A JP19511582 A JP 19511582A JP S5984162 A JPS5984162 A JP S5984162A
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microcapsules
analysis
membrane
antigen
antibody
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Kyuji Mutsukawa
六川　玖治
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Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〔発明の技術分野〕 この発明は、免疫分析法に関する。
〔発明の技術的背景とその問題点〕
従来の免疫分析法として、たとえばラジオイムノアッセ
イ法、エンザイムイムノアッセイ法等がある。
これらの免疫分析法は、その原理からして、同一被検試
料につき複数の項目を同時に分析することが困難である
。
したがって、被検試料中の各種成分につき免疫分析をし
ようとする場合、分析項目毎に、被検試料を希釈し、被
検試料中の特定成分と試薬との反応を行ない、ついで反
応生成物の定量等を行なわねばならない。このように、
従来の免疫分析法は、各種成分の分析につき、試料、試
薬の必要量が多くなり、また、煩雑な操作と長い分析時
間とを必要とした。
〔発明の目的〕
この発明は前記事情に鑑みてなされたものであり、サン
プリングしたー被検試料で、複数の分析項目につき同時
に免疫分析をすることのできる免疫分析法を提供するこ
とを目的とするものである。
〔発明の概要〕
前記目的を達成するためのこの発明の概要は、補体活性
により溶解作用を受ける膜に抗体を結合すると共に内部
に互いに化学的に不活性の分別可能な物質をそれぞれ封
入する複数種のマイクロカプセル表抗原または抗体を有
する被検試料とを混合し、生起する抗原抗体反応により
活性化された補体の溶解作用による膜の溶解によって複
数のマイクロカプセルより遊離した前記分別可能な複数
種の物質を分析することにより被検試料中の複数種の抗
原または抗体を分析することを特徴とするものである。
〔発明の実施例〕
この発明においては、先ず、補体活性により溶解作用を
受ける膜に抗体（または抗原）を結合すると共に内部に
互いに化学的に不活性の分別可能な物質をそれぞれ−Ｎ
人可能な複Ｉｎのマイクロカプセルを用意する。
前ｎｊ３マイクロカプセルとしては、動物たとえば羊の
赤血球を好適に用いることがてきる。なお、他の動物の
赤血球あるいは赤血球以外の動物細胞であっても、細胞
膜に抗体（または抗原）を結合し７、また、細胞内に互
いに化学的に不活性の分別可能な物質を収容することが
できれば、この発明におけるマイクロカプセルとして使
用することができる。また、さらに、人工膜としてリポ
ソームも使用することができる。
膜たとえば細胞膜に結合する抗体（または抗原）は、被
検試料中の抗原（または抗体）と特異的な抗原抗体反応
を惹起するものが適宜に選ばれる。
たとえば、試料中の抗原がＩｇＧであるときは、抗ＩＩ
Ｇ抗体が挙げられる。また、細胞膜に結合する抗体は被
検試料についての分析項目に応じて適宜に決定すること
ができるのであって、免疫グロブリンの分析を行なう場
合、被検試料である血液中に免疫グロブリンとしてＩＩ
Ｇ、　Ｉ、ｑＡ、　ＩｇＭ、　ＩＩＤおよびＩＩＥの５
種類が存在するので、抗ＩＩＧ抗体、抗ＩＩＡ抗体、抗
１９Ｍ抗体、抗ＩＩＤ抗体および抗１ｇＥ抗体が挙げら
れる。
また、マイクロカプセル内に封入する物質は、互いに化
学的に不活性であり、かつ、同一系内に共存していても
電気的、化学的手段によりそれぞれ分離して分析するこ
とができるものであればよく、たとえば、糖、７２ノ酸
、カルボン酸、ペプチド、多糖類、酵素、蛋白質、核酸
等から適宜に選択することができる。特に、アミノ酸と
しては、グリシン、セリン、トリプトファン、リジン、
グルタミン酸が挙げられる。さらに、グルコース、リシ
ン、乳酸、コリン等をマイクロカプセル内に封入しても
よい。
免疫グロブリンの分析をする場合、グリシンを封入した
マイクロカプセル、セリンを封入したマイクロカプセル
、トリプトファンを封入したマイクロカプセル、リジン
を封入したマイクロカプセルおよびグルタミン酸を封入
したマイクロカプセルをｗ！４製するのが好ましい。と
いうのは、後述のように、封入した物質がマイクロカプ
セル外に放出されても、互いに反応することなく共存し
、かつ、分離手段たとえばクロマトグラフにより分析可
能な程度に十分に分離することができるからである。
マイクロカプセル内に封入する物質の量は、マイクロカ
プセル調製時に自由に調整可能である（吉沢　満：生化
学５３（９）　−１０６６（１９８１））。
従って測定対象の抗原（又は抗体）の濃度範囲に応じて
、マイクロカプセル内に収容する物質の濃度を適宜に調
整する事ができる。通常、抗体（または抗原）量に対し
てマイクロカプセル内に封入する物質は、大過剰である
。
免疫グロブリンの分析をする場合、ＩＩＧの標識物質（
マーカ）としてグリシン、ＩＩＡのマーカドしてセリン
、　　ｆｌＭのマーカとしてトリプトファン、ＩＩＤの
マーカとしてリジンおよび１９Ｅのマーカとしてグルタ
ミン酸を用いるとき、マイクロカプセル内に封入するグ
リシンの濃度に対し、他のマイクロカプセル内に封入す
るセリンおよびトリプトファンそれぞれの濃度を２〜１
０倍にし、また、グルタミン酸の濃度を２０〜１００倍
にし、さらに、リジンの濃度を１００〜ｉ、ｏｏｏ倍に
するのが好ましい。このようＫそれぞれの濃度を相違さ
せるのは、１ｙＧ、　ＩＩＡ、　１９Ｍ％１９Ｄおよび
ＩＩＢそれぞれの血中濃度が、１４．５５．２．４４．
１．６６．０．０３および０．２９　ｍ！Ｉ／ｍｌであ
り、それぞれの血中濃度が大きく相違して本分析可能と
するためである。
また、各測定項目に対するマーカとして、互いに分子量
の異なる水溶性高分子を用いることもできる０前記水溶
性高分子として、蛋白質、酵素、多糖、核酸、その他の
合成高分子が挙げられる〇マイクロカプセルの材質によ
っては、前記セリン等のアミノ酸等の低分子物質が漏出
してしまうことがあるので、そのようなマイクロカプセ
ルには、前記水溶性高分子を封入するのが好ましいので
ある０水溶性高分子の組み合せとして、免疫グロブリン
の分析の場合、ＩｇＤのマーカとしてチトクロームＣ（
分子量：　１２，４０ｏ）、ＩｙＥのマーカとしてキモ
トリプシノーゲン（分子量：２５，０００）、ＩｇＭの
マーカとしてオパルプミン（分子量：４５，０００）、
ＩｑＡのマーカとして牛血清アルブミン（分子量：６７
．５００）およびＩＩＧのマーカとしてカルボキシメチ
ルセルラーゼ（分子ｆｌ＝ニア５，０００）が挙げられ
る。水溶性高分子の分別は、分子篩を用いて行なうこと
ができる。
マイクロカプセルたとえば羊の赤血球の細胞膜し、赤血
球内に酵素たとえばグルコースオキシターゼを収納した
細胞の調製は、たとえば次のようにして行なうことがで
きる。
先ず、動物たとえばウサギ、ヤギ、マウス、２−フェト
プロティン抗体が産°生される。注射後適当な期間の経
過後、その動物より所定量の血液を清を得る。なお、抗
原抗体反応の特異性を向上させるために、前記抗血清を
さらに精製してもよい。
一方、他の動物たとえばヒツジから所定量の血液を採取
してこれを精製し、等張渡たとえば０．１５Ｊｆの濃度
の塩を含有するバッファ液（７）Ｈ７）と混合すること
により赤崩球をサスペンドした等張渡な得る。この等供
液中にサスペンドした赤血球中には細胞液、ミトコンド
リア等が含まれているので、常法である透析法によって
赤血球内から細胞液等を排出して赤血球内に酵素である
グルコアミラーゼを収容する。収容するグルコアミラー
ゼの量は、後述する免疫分析測定法の必要に応じて適宜
に決に結合する赤血球を有する等張渡が得られる。この
場合、赤血球膜が抗体を吸着しにくい時は、グルタルア
ルデヒドや無水コハク酸の様な２価性試薬、ウッドワー
ド試薬の様なペプチド試薬等と共に処理する事により、
膜表面に抗原（又は抗体）を結合させる事ができる。
抗体を細胞膜に結合すると共に内部にトリプトフルタミ
ｙ酸を封入した羊の赤血球のマイクロカプセルをそれぞ
れ前記と同様にｐｌ　’２４し、ついで５種のマイクロ
カプセルの混合物を用意する。
この発明においては、以上のようにして調製した複数種
のマイクロカプセルの混合物と被検試料たとえば血液試
料とを混合することにより抗原抗体反応を惹起させ、抗
原抗体反応により活性化された補体の膜溶解作用により
膜を破壊し、これによって複数種のマイクロカプセル内
に封入されていた複数種の物質を系内に遊離させる。
免疫グロブリンの分析の場合、前記５種のマイクロカプ
セルの混合物と血液試料とを混合すると、系内にグリシ
ン、セリン、トリプトファン、リジンおよびグルタミン
酸が遊離する。
なお、補体は、通常、血液試料中に含まれているが複数
種のマイクロカプセルの混合物と被検試料との混合に際
して、補体をさらに添加することを要する。その場合の
補体は、動物の血液中に含まれているものを使用するこ
とができ、たとえばモルモットの血清を補体含有液とし
てそのまま使用することができる。
次いで、この発明においては、系内に遊離した物質を適
宜の手段により定量する。
遊離物質の定量手段として、たとえば、ガスクロマトグ
ラフィ、液クロマトグラフィ等のクロマトグラフィ、イ
オン選択性電極等の電気化学的方法、吸光度分析等の光
学的方法が挙げられる。これらのうち、いずれの方法に
よるかは、遊離する物質に応じて適宜に決定することが
できる。
免疫グロブリンの分析の場合、遊離物質がセリン、グリ
シン、トリプトファン、リジンおよびグルタミン酸等の
アミノ酸であるとき、これらの定量を液体クロマトグラ
フィで分別することにより行なうのが良い。また、別法
として、遊離物質を含有する液を５分割し、缶液に対応
する酵素を添加することにより生成するＨ、Ｏ！を分光
学的手段あるいは電気化学的手段で定量してもよい。
以上詳述したように、この発明においては、被検試料中
の濃度が異なる各種成分たとえば各種の抗原成分の定量
分析がそれぞれ異なる抗体を膜に結合すると共に内部に
分別分析可能かつ相互に化学的不活性の物質を封入する
複数■ｊのマイクロカプセルの混合物と被検試料とを混
合することにより惹起する抗原抗体反応により遊離する
前記物質の定量によって行なわれる。
以上の手順による分析法は、それ自体公知の自動化学分
析装置で好適に実施することができるばかりか、この出
願人により先に提案したところの、特願昭５７年第１３
５４８７号および特願昭５７年第１４０１９６号明細書
に記載された装置で実施することもできる。
前記構成の免疫分析法によると、１被倹試料につき１回
の分析操作で複数成分についての定量分析を同時に行に
うことができるので、分析操作の簡略化および分析時間
の短縮を図ることができる。
まだ、この発明の分析法を自動化学分析装置により行な
うと、さらに、簡便かつ高速で定量分析をすることがで
きる。
以上この発明の実施例について詳述したが、この発明は
前記実施例に限定されるものではなく、この発明の要旨
を変更しない範囲内で適宜に変形して実施することがで
きるのは、いうまでもない。
この発明の方法は、免疫グロブリン測定のみに限定され
ず、各種ホルモン、サイクリックヌクレオチド類、薬物
等の複敬項目の同時測定に適用することができる。
〔発明の効果〕
この発明によると、従来困難であった１回の分析操作に
よる複数項目の同時分析が可能になった。

Claims (1)

    【特許請求の範囲】
  1. 補体活性により溶解作用を受ける膜に抗体を結合すると
    共に内部に互いに化学的に不活性の分別可能な物質をそ
    れぞれ封入する複数種のマイクロカプセルと抗原または
    抗体を有する被検試料とを混合し、生起する抗原抗体反
    応により活性化された補体の溶解作用による膜の溶解に
    よって複数のマイクロカプセルより遊離した前記分別可
    能な複数種の物質を分、析することにより被検試料中の
    複数種の抗原または抗体を分析することを特徴とする免
    疫分析法。
JP57195115A 1982-11-05 1982-11-05 免疫分析法 Pending JPS5984162A (ja)

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DE8383110877T DE3381054D1 (de) 1982-11-05 1983-10-31 Immunoessay.
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