JPS5985285A - 酸素耐性水素細菌の製造方法 - Google Patents
酸素耐性水素細菌の製造方法Info
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- JPS5985285A JPS5985285A JP19412282A JP19412282A JPS5985285A JP S5985285 A JPS5985285 A JP S5985285A JP 19412282 A JP19412282 A JP 19412282A JP 19412282 A JP19412282 A JP 19412282A JP S5985285 A JPS5985285 A JP S5985285A
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- hydrogen
- bacteria
- gas
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は酸素耐性水素細菌の製造方法に関するものであ
り、より詳しくはキサントバクターに属する水素細菌を
高濃度酸素ガス、水素ガス及び炭酸ガスからなる混合ガ
スの存在下、固体平板培地に培養して酸素耐性菌に形質
転換せしめ、これを採取する方法に関するものである。
り、より詳しくはキサントバクターに属する水素細菌を
高濃度酸素ガス、水素ガス及び炭酸ガスからなる混合ガ
スの存在下、固体平板培地に培養して酸素耐性菌に形質
転換せしめ、これを採取する方法に関するものである。
従来、炭酸ガスを炭素源として利用可能な微生物を培養
して微生物蛋白を回収せんとする場合、水素細菌が有利
であると言われている。その理由は原料中に不純物がな
くクリーンであるため微生物蛋白を飼料として利用する
際、毒性の問題が少ないこと、水素細菌の増殖速度が独
立栄養細菌の中で特に速いことなどが挙げられる。
して微生物蛋白を回収せんとする場合、水素細菌が有利
であると言われている。その理由は原料中に不純物がな
くクリーンであるため微生物蛋白を飼料として利用する
際、毒性の問題が少ないこと、水素細菌の増殖速度が独
立栄養細菌の中で特に速いことなどが挙げられる。
しかしながら、水素細菌は高濃度酸素条件下では一般に
生育が阻害されるという難点があり、培養開始時の菌濃
度が低い時には溶存酸素の利用が少ないため、特に酸素
の影響を受けやすいという欠点がある、このため水素細
菌を大量培養する際には培養開始時の酸素濃度を２〜３
％と低く押え、菌の増殖に伴って徐々に酸素濃度を２０
〜３０％に上げなければならないという煩しさがあった
。
生育が阻害されるという難点があり、培養開始時の菌濃
度が低い時には溶存酸素の利用が少ないため、特に酸素
の影響を受けやすいという欠点がある、このため水素細
菌を大量培養する際には培養開始時の酸素濃度を２〜３
％と低く押え、菌の増殖に伴って徐々に酸素濃度を２０
〜３０％に上げなければならないという煩しさがあった
。
そこで、本発明者らは酸素耐性を有する水素細菌を得る
目的をもって研究したところ、先に自然界より分離した
キサントバクターに属する細菌を一定条件下で処理する
ことにより酸素耐性を有する形質転換菌として変異させ
、かつ該菌は培地上に黄色大型コロニーを形成すること
を見出し、容易に釣菌できることを認め本発明を完成す
るに至った。
目的をもって研究したところ、先に自然界より分離した
キサントバクターに属する細菌を一定条件下で処理する
ことにより酸素耐性を有する形質転換菌として変異させ
、かつ該菌は培地上に黄色大型コロニーを形成すること
を見出し、容易に釣菌できることを認め本発明を完成す
るに至った。
すなわち、本発明は、前記のキサントバクター属に属す
る水素細菌を酸素ガス４０〜６０％、水素ガス３０〜５
５％、炭酸ガス５〜１０％からなる混合ガスの存在下、
固体平板培地に培養し培地上に黄色大型コロニーを形成
せしめこれを採取することを特徴とする酸素耐性水素細
菌の製造方法に関するものである。ここで培養に使われ
る固体培地としては通常の無機栄養源を含有する寒天培
地が利用される。次に混合ガスの濃度組成は通常、酸素
ガスが４０〜６０％、水素ガスが３０〜５５％、炭酸ガ
スが５〜１０％の範囲で利用されるが、この範囲は臨界
的なものではなく所望する酸素耐性菌の酸素耐性の程度
に応じ適宜変更することができる。すなわち、酸素感受
性菌から酸素耐性菌への形質転換の程度は培養時の酸素
濃度に応じて決めることができる。また、培養日数は酸
素濃度により異なり７〜１０日目頃になると培地上に培
養初期から形成されていた白色小型のコロニーの中から
黄色大型コロニーが形成され、形質転換菌は黄色大型コ
ロニーとして表現されるため視忍により容易に釣菌し分
離回収することができる。
る水素細菌を酸素ガス４０〜６０％、水素ガス３０〜５
５％、炭酸ガス５〜１０％からなる混合ガスの存在下、
固体平板培地に培養し培地上に黄色大型コロニーを形成
せしめこれを採取することを特徴とする酸素耐性水素細
菌の製造方法に関するものである。ここで培養に使われ
る固体培地としては通常の無機栄養源を含有する寒天培
地が利用される。次に混合ガスの濃度組成は通常、酸素
ガスが４０〜６０％、水素ガスが３０〜５５％、炭酸ガ
スが５〜１０％の範囲で利用されるが、この範囲は臨界
的なものではなく所望する酸素耐性菌の酸素耐性の程度
に応じ適宜変更することができる。すなわち、酸素感受
性菌から酸素耐性菌への形質転換の程度は培養時の酸素
濃度に応じて決めることができる。また、培養日数は酸
素濃度により異なり７〜１０日目頃になると培地上に培
養初期から形成されていた白色小型のコロニーの中から
黄色大型コロニーが形成され、形質転換菌は黄色大型コ
ロニーとして表現されるため視忍により容易に釣菌し分
離回収することができる。
このようにして一旦、形質転換された菌は低酸素濃度下
で植え継いでもその形質は全く失われることはない。
で植え継いでもその形質は全く失われることはない。
酸素耐性水素細菌は、大量培養に際し、従来の水素際菌
の如く、培養開始時の酸素濃度を低く押える必要はなく
、一貫して所望する酸素濃度下で培養することができる
点、さらに菌濃度が高くなった時点でも、酸素阻害の影
響を全く考慮することなく、高酸素濃度の混合ガスを供
給すすことができる等を特徴とし、大量培養操作を簡便
にした実施価値は大である。
の如く、培養開始時の酸素濃度を低く押える必要はなく
、一貫して所望する酸素濃度下で培養することができる
点、さらに菌濃度が高くなった時点でも、酸素阻害の影
響を全く考慮することなく、高酸素濃度の混合ガスを供
給すすことができる等を特徴とし、大量培養操作を簡便
にした実施価値は大である。
以下、本酸素耐性水素細菌の菌学的性質を示す。
（ａ）形態
（１）細胞の形及び大きさ、 肉体寒天培地 ３０℃
２日間培養０．６〜０．８×１．５〜３．０μの桿菌、
直状又は曲状（２）細胞の多形成、７日間培養で短桿菌
となる。
２日間培養０．６〜０．８×１．５〜３．０μの桿菌、
直状又は曲状（２）細胞の多形成、７日間培養で短桿菌
となる。
（３）運動性無し
（４）胞子形成無し
（５）グラム陰性
（６）非抗酸性
（７）コハク酸添加培地で培養すると分岐細胞が見られ
る（８）貯蔵物質としてポリ−β−ハイドロキシ酪酸（
ＰＨＢ）を蓄積する。
る（８）貯蔵物質としてポリ−β−ハイドロキシ酪酸（
ＰＨＢ）を蓄積する。
（ｂ）生育状態
（１）肉汁寒天平板培養：黄色、平滑、光沢あり、円形
のコロニーを形成する、色素の拡散なし。
のコロニーを形成する、色素の拡散なし。
（２）肉汁寒天斜面培養：肉汁寒天平板培養と同じ（３
）肉汁液体培養：表面発育無し、粘質物生成のため培養
液の粘性がやや増加する。
）肉汁液体培養：表面発育無し、粘質物生成のため培養
液の粘性がやや増加する。
（４）肉汁ゼラチン穿刺培養：生育せず、液化もなし。
（５）リトマル・ミルク：凝固、液化なし、長時間培養
するとアルカリ性となる。
するとアルカリ性となる。
（ｃ）生理学的性質
（１）硝酸塩の還元 ＋
（２）脱窒反応 ＋
（３）ＭＲテスト −
（４）ＶＰテスト −
（５）インドール生成 −
（６）硫化水素の生成 −
（７）デンプンの加水分解 −
（８）クエン酸の利用 （Ｋｏｓｅｒ培地、Ｃｈｒｉｓｔｅｎｓｅｎ培地） ＋
（９）無機窒素源の利用 （硝酸塩、アンモニウム塩） ＋
（１０）色素の生成 非
水溶性黄色色素生成（１１）ウレアーゼ
＋（１２）オキシダーゼ
＋（１４）生育の範囲
ｐＨ６．０〜９．５温度２５〜３７℃ （１５）酸素に対する態度 好
気性（１６）Ｏ−Ｆテスト （Ｈｕｇｈ Ｌｅｉｆｓｏｎ法による） −
（１７）糖類からの酸及びガスの生成 −
（１８）無機化合物のみの固体又は液体培地中で、水素
ガス、酸素ガス、炭酸ガスの共存下で生育 （１９）メタノール、エタノール、ｎ−プロパノール、
ｎ−ブタノール、ギ酸、酢酸、プロピオン酸、コハク酸
、グルコン酸などのアルコール類、有機酸類を唯一の炭
素源として生育（２０）窒素ガス固定能力あり。
（２）脱窒反応 ＋
（３）ＭＲテスト −
（４）ＶＰテスト −
（５）インドール生成 −
（６）硫化水素の生成 −
（７）デンプンの加水分解 −
（８）クエン酸の利用 （Ｋｏｓｅｒ培地、Ｃｈｒｉｓｔｅｎｓｅｎ培地） ＋
（９）無機窒素源の利用 （硝酸塩、アンモニウム塩） ＋
（１０）色素の生成 非
水溶性黄色色素生成（１１）ウレアーゼ
＋（１２）オキシダーゼ
＋（１４）生育の範囲
ｐＨ６．０〜９．５温度２５〜３７℃ （１５）酸素に対する態度 好
気性（１６）Ｏ−Ｆテスト （Ｈｕｇｈ Ｌｅｉｆｓｏｎ法による） −
（１７）糖類からの酸及びガスの生成 −
（１８）無機化合物のみの固体又は液体培地中で、水素
ガス、酸素ガス、炭酸ガスの共存下で生育 （１９）メタノール、エタノール、ｎ−プロパノール、
ｎ−ブタノール、ギ酸、酢酸、プロピオン酸、コハク酸
、グルコン酸などのアルコール類、有機酸類を唯一の炭
素源として生育（２０）窒素ガス固定能力あり。
以上の菌学的性質から、インターナショナルジャーナル
オブシステマティクバクテリオロジー，Ｖｏｌ．２８，
Ｎｏ．４（１９７８）（Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ
Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｓｙｓｔｅｍａｔｉｃ Ｂａｃ
ｔｅｒｉｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．２８，Ｎｏ．４（１９７
８））に徹して、検討した結果、本菌株はキサントバク
ターに属することが認められた。
オブシステマティクバクテリオロジー，Ｖｏｌ．２８，
Ｎｏ．４（１９７８）（Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ
Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｓｙｓｔｅｍａｔｉｃ Ｂａｃ
ｔｅｒｉｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．２８，Ｎｏ．４（１９７
８））に徹して、検討した結果、本菌株はキサントバク
ターに属することが認められた。
しかしながら、酸素耐性については、形質転換前の親株
は酸素感受性菌であるのに対し、本菌株は酸素耐性を有
していることが認められ、明らかに酸素感受性から酸素
耐性菌に形質転換されていることを示している。
は酸素感受性菌であるのに対し、本菌株は酸素耐性を有
していることが認められ、明らかに酸素感受性から酸素
耐性菌に形質転換されていることを示している。
なお、本菌株はキサントバクターＹ−３８株、ＦＥＲＭ
−Ｐ６７２４として工業技術院微生物工業技術研究所に
寄託されている。また、本菌株の親株キサントバクター
Ｙ−３２もＦＥＲＭ−Ｐ６７２３として寄託されている
。
−Ｐ６７２４として工業技術院微生物工業技術研究所に
寄託されている。また、本菌株の親株キサントバクター
Ｙ−３２もＦＥＲＭ−Ｐ６７２３として寄託されている
。
以下、実施例により本発明を具体的に説明する。
実施例１（酸素耐性変位株の製造）
キサントバクターＹ−３２株、（ＦＲＥＭ−Ｐ６７２３
、酸素感受性水素細菌）の１白金耳を寒天平板培地に画
線し、デシケータ中にて酸素ガス、水素ガス、炭酸ガス
の種々の組成の混合ガス下、３５℃で培養した。
、酸素感受性水素細菌）の１白金耳を寒天平板培地に画
線し、デシケータ中にて酸素ガス、水素ガス、炭酸ガス
の種々の組成の混合ガス下、３５℃で培養した。
培地組成は、蒸溜水１ｌ中に、リン酸一カリウム３００
ｍｇ、リン酸二カリウム４００ｍｇ、尿素１ｇ、硫酸マ
グネシウム２００ｍｇ、硫酸第一鉄５０ｍｇ、硫酸亜鉛
０．０５ｍｇ、モリブデン酸ナトリウム０．１ｍｇ、を
含むもので、ｐＨは７．０、培養２〜３日目に、いずれ
の混合ガス下で培養した平板培地上にも、小型白色コロ
ニーが形成された。
ｍｇ、リン酸二カリウム４００ｍｇ、尿素１ｇ、硫酸マ
グネシウム２００ｍｇ、硫酸第一鉄５０ｍｇ、硫酸亜鉛
０．０５ｍｇ、モリブデン酸ナトリウム０．１ｍｇ、を
含むもので、ｐＨは７．０、培養２〜３日目に、いずれ
の混合ガス下で培養した平板培地上にも、小型白色コロ
ニーが形成された。
さらに培養を続けたところ小型白色コロニーの中から表
１に示したように大型黄色コロニーが形成された。
１に示したように大型黄色コロニーが形成された。
表１
これら各種の大型黄色コロニーの単一コロニーを、新た
に平板培地上に画線し、そのコロニーが生育した混合ガ
スと同じ組成の混合ガス下で培養したところ、すべて２
〜３日目に大型黄色コロニーのみを形成した。
に平板培地上に画線し、そのコロニーが生育した混合ガ
スと同じ組成の混合ガス下で培養したところ、すべて２
〜３日目に大型黄色コロニーのみを形成した。
このことは、表１に示した各種の大型黄色コロニーが純
粋な酸素耐性菌で構成されていることを示した。各種酸
素濃度から得た酸素耐性菌の菌学的性質は同一であった
。
粋な酸素耐性菌で構成されていることを示した。各種酸
素濃度から得た酸素耐性菌の菌学的性質は同一であった
。
実施例２（酸素耐性試験）
実施例１で得たキサントバクターＹ−３８株（ＦＥＲＭ
−Ｐ６７２４）と、親株のキサントバクターＹ−３２か
ぶ（ＦＥＲＭ−Ｐ６７２３）について、液体培養におけ
る生育試験を行った。生育試験は、１ｌのフラスコに実
施例１と同じ組成の培養液１０ｍｌを入れ、乾燥重量と
して０．３ｍｇ相当量を接種した。フラスコ内の気相を
表２に示した混合ガスで置換し、３５℃で振盪培養した
。菌の生育は４５０ｎｍにおける吸光度の増加により判
定した。培養３日後における生育の有無を表２に示す。
−Ｐ６７２４）と、親株のキサントバクターＹ−３２か
ぶ（ＦＥＲＭ−Ｐ６７２３）について、液体培養におけ
る生育試験を行った。生育試験は、１ｌのフラスコに実
施例１と同じ組成の培養液１０ｍｌを入れ、乾燥重量と
して０．３ｍｇ相当量を接種した。フラスコ内の気相を
表２に示した混合ガスで置換し、３５℃で振盪培養した
。菌の生育は４５０ｎｍにおける吸光度の増加により判
定した。培養３日後における生育の有無を表２に示す。
＋は生育が認められるもの−は認められなかったものを
示す。
示す。
表２
表２に示すごとく、Ｙ−３２株は全く生育を示さなかっ
たのに対し、Ｙ−３８株は培養開始後直ちに生育を開始
し、酸素耐性の性質を示した。
たのに対し、Ｙ−３８株は培養開始後直ちに生育を開始
し、酸素耐性の性質を示した。
特許出願人 工学技術院長 石坂誠
指定代理人工学技術員微生物工業技術研究所長高原義■
Claims (1)
- キサントバクター属に属する水素細菌を酸素ガス４０か
ら６０％、水素ガス３０〜５５％、炭酸ガス５〜１０％
からなる混合ガスの存在下、固体平板培地に培養し培地
上に黄色大型コロニーを形成せしめこれを採取すること
を特徴とする酸素耐性水素細菌の製造方法
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP19412282A JPS5951995B2 (ja) | 1982-11-05 | 1982-11-05 | 酸素耐性水素細菌の製造方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP19412282A JPS5951995B2 (ja) | 1982-11-05 | 1982-11-05 | 酸素耐性水素細菌の製造方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS5985285A true JPS5985285A (ja) | 1984-05-17 |
| JPS5951995B2 JPS5951995B2 (ja) | 1984-12-17 |
Family
ID=16319273
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP19412282A Expired JPS5951995B2 (ja) | 1982-11-05 | 1982-11-05 | 酸素耐性水素細菌の製造方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS5951995B2 (ja) |
Families Citing this family (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS60164593U (ja) * | 1984-04-12 | 1985-11-01 | ト−ソ−株式会社 | スライドパネル |
| JPH01179929U (ja) * | 1988-06-01 | 1989-12-25 |
-
1982
- 1982-11-05 JP JP19412282A patent/JPS5951995B2/ja not_active Expired
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS5951995B2 (ja) | 1984-12-17 |
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