JPS589675B2 - ビセイブツノバイヨウホウホウ - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】 この発明はアルカリゲネス属に属し、メタノールを資化
しうる微生物をメタノールを主炭素源とする栄養培地に
培養する方法に関するものである。

アルカリゲネス属に属するものであってメタノールを資
化しうる微生物は知られていない。

本発明者らはアルカリゲネス属に属する新規な微生物が
メタノールを資化して増殖することを見出したものであ
る。

本発明に使用する微生物の菌学的諸性質は以下の通りで
ある。

Ａｌｃａｌｉｇｅｎｅｓ ａｕｔｏｎｉｔｒｉｆｉｃａ
ｎｓ ｎｏｖ．ｓｐ． ｓｔｒａｉｎＭｌ５（アルカリ
ゲネス オートニトリフイカンス 分離番号Ｍ１５）Ａ
Ｊ３９４２（微工研菌奇第３１８０号） 形態的特徴 ダラム陰性、運動性を有する桿菌、０．６〜０．８×２
．５〜４．０ミクロン胞子形成せず、非坑酸性で細胞の
多形性は認められないが、長い周鞭毛を有している。

リトマスミルクは変化せず。イーストエキストラクト０
．４％、マルツエキストラクイ１． Ｏ ％、グルコー
ス０．４係の寒天培地上で生育させた場合の若い細胞に
は、スダンブラックＢで染色される顆粒が見られるのが
特徴である。

コロニーの形態 水素をエネルギー源、炭酸ガスを炭素源として独立栄養
的に無機合成培地上で１４日間生育させた場合のコロニ
ー形態は、円形、直径３ｍｍ程度、表面は平滑で、半レ
ンズ状であり、周縁部は全縁であり、黄灰色で不透明で
ある。

また肉汁寒天上で１０日間生育させた場合は、花状、皺
状、円錐状、鋸歯状、顆粒状で直径Ｌｍｗ程度の黄色、
不透明のコロニーを形成した。

肉汁寒天培養：生育せず 肉汁液体培養：生育せず 肉汁ゼラチン穿刺培養：生育せず 生理的性質 ・ 水素を酸化するエネルギーを利用して炭酸ガスを固
定し、独立栄養的に生育する。

・ カタラーゼ活性：陽性、 ・ オキシダーゼ活性：陽性、 ・ デンプンの加水分解活性：陰性、 ・ クエン酸の利用：利用せず ・ ウレアーゼ：陰性 ・ 生育至適ＰＨ範囲：５．５〜７．５ ・ ゼラチンの加水分解活性：陰性、 ・ 硫化水素の生成：陰性、 ・ 硝酸塩からの亜硝酸の生成：陽性、 ・ 脱窒反応：陰性、 ・ ＭＲテスト：陰性、 ・ ｖｐテスト：陰性、 ・ インドールの生成：なし、 ・ 無機窒素源：利用する、 ・ 色素の生成：無し、 ・ Ｏ−Ｆテスト：変化無し、 ・ Ｈ２をエネルギー源、炭酸ガスを炭素源として独立
栄養的に生育する場合に、窒素ガスを唯一の窒素源とす
ることができる。

・ 各種糖類から酸及びガスの生成は認められない。

コハク酸、酢酸、メタノール、エタノールオヨびグリセ
ロールの資化性がある。

クエン酸、グルコン酸、マロン酸、蓚酸、蟻酸、パラお
よびメタヒドロキシ安息香酸、およびフェノールの資化
性は認められなかった。

好気性 生育適温３０〜３５℃、３７℃でも生育する。

ＤＮＡのＧＣ含量 ６４．４％ 本菌は形態的および生理的特徴よりアルカリゲネス属に
属する菌株と考えられる。

アルカリゲネスに属する水素細菌として、バージエイス
・マニュアル第８版にはアルカリゲネス・ユートローハ
ス（Ａｌｃａｌｉｇｅｎｅｓ ｅｕｔｒｏｐｈｕｅ ）
、およびアルカリゲネス０パラドクサス（Ａｌｃａｌｉ
ｇｅｎｅｓ ｐａｒａｄｏｘｕｓ）が記載されているが
、本菌はカロチノイド色素を有さない点からアルカリゲ
゛ネス、バラドクサスとはことなっており糖の資化性を
有さないこと、空中窒素の固定能を有すること、メタノ
ールの資化性、を有すること、パラおよびメクヒドロキ
シ安息香酸、フェノールなどの資化性がないことからア
ルカリゲネス・ユートローハスとは異っている。

また鞭毛の着生状態においても、アルカリゲネス・ユー
トローハスは鞭毛の本数の少ない、いわゆるｄｅｇｅｎ
ｅｒａｔｅｐｅｒｉｔｒｉｃｈｏｕｓ ｆｌａｇｅｌｌ
ａであるのに対し、本菌は、通常の周鞭毛ｐｅｒｉｔｒ
ｉｃｈｏｕｓ ｆｌａｇｅ−１１ａである点も異なり、
アルカリゲネスに属する新菌種と考えてよい。

また、空中窒素固定能を有する犬山ら（％開昭４８−３
３０８３）のヒドロケノモナス属の菌株や、コゴトフら
（アルヒーフ，フェア．ミクロビオロギ− ９７ ，３
５９−３６２（１９７４））の菌株とは運動性を有する
こと、カロチノイド色素を生成しないことなど、大きく
異なっており、本菌株は従来知られていない水素細菌で
あり、本発明者らはアルカリゲネス・オートニトリフイ
カンスと命名した。

次に本発明の実施方法について述べる。

本発明に使用する微生物は、アルカリゲネス属に属する
微生物であり、例えばＡＪ ３９４２などである。

培地としては、リン酸塩、マグネシウム塩、カルシウム
塩、鉄塩などの無機化合物の水溶液にメタノールを添加
したものを使用する。

添加するメタノールの濃度は０．０５から５％の範囲で
あり、望ましくは０．１〜３％である。

培地中には必要に応じ、少量の有機栄養源、例えば、イ
ーストエキス、コーンステイープリカー等を含有せしめ
てもよい。

培地は殺菌可能な容器に入れ殺菌後、微生物を接種する
。

容器内には少なくとも酸素ガスを含むようにする。

酸素ガスの替りに空気を使用することももちろん可能で
あり、微生物を阻害しないその他不純物が気相中に含ま
れていても差支えない。

培養は静置、振とう通気攪拌等のいずれの方法で行って
もよい。

培養温度は２５〜４０℃、培養時のｐＨは６０〜８．０
に保つ。

培地中へのメタノールの添加は培養開始時に０．０５〜
５％の濃度で添加してその後培養途上では追加添加しな
い方法でもよいが、高濃度のメタノールは生育阻害を起
こすため、培養初期より培地中に高濃度のメタノールを
添加することは望ましくないため、培養初期のメタノー
ル添加濃度を低く保ち、培養途上で遂次添加する、いわ
ゆる流加培養を行うのが望ましい。

生育した菌体は遠心分離等適当な方法で回収する。

また培養液上澄よりアミノ酸・有機酸等の代謝生産物を
回収することも可能である。

以下さらに、詳細に実施例をもって説明する。

実施例 １ 培地として（ＮＨ４）２ＳＯ４２ｇ／ｌ、ＫＨ２ＰＯ４
０．３ｇ／ｌ、Ｎａ２ＨＰＯ４・１２Ｈ２Ｏ１．３ｇ／
ｌ、ＭｇＳＯ４・７Ｈ２Ｏ０．２ｇ／ｌ、ＦｅＳＯ４・
７Ｈ２Ｏ１０ｍｇ／ｌ，ＣａＣ１２・２Ｈ２Ｏ１０ｍｇ
／ｌ脱イオン水１ｌｐＨ７．２の組成のものを５００ｄ
容、振盪フラスコに２０ｍｌ宛入れ、殺菌後、別に戸過
殺菌したメタノールを２％になるように添加し、アルカ
リゲネス・オートニトリフイカンスＡＪ３９４２を接種
した。

これを３５℃にて培盪培養をした。培養途上で生育に伴
うｐＨの低下をアンモニアにより中和しつつ７２時間培
養後、フラスコ内の培養液ＬＯｒｎｌをとり遠心分離に
より７４１ｒｌ９の乾燥菌体を得た。

実施例 ２ 実施例ｌと同様の培地４００ｍｌをｌｌ容小型ガラス製
ジャーに入れ、殺菌後アルカリゲネス・オートニトリフ
イカンスＡＪ３９４２を接種し、培養温度３５℃、攪拌
数１ ２ ０ Ｏｒｐｍ通気量％ＶＶｍで培養を開始し
た。

メタノールは培養開始時に２係となるように添加した。

培養中、培地のｐＨは６．８になるようにアンモニアガ
スにて制御した。

７２時間後培養液１００ｍｌをとり遠心分離により０．
６５ｇの乾燥菌体を得た。

また培地中の残存メタノールは０．３１％であり、菌体
の対消費メタノール収率は、３８％であった。

実施例 ３ 実施例２と同様の方法で培養を行った。

但し、培養開始時のメタノール添加濃度は０．５係とし
、培養２４時間、３６時間、４８時間、６０時間、７２
時間にそれぞれ、２ｇのメタノールを追過添加していわ
ゆる流加培養し、９６時間後に、培養液１００ｍｌをと
り遠心分離により１．２５ｇｇの乾燥菌体を得た。

培養中に添加したメタノール量は、総計で１００ｍｌ当
り３ｇであった。

培養後の培地中残存メタノール濃度は０．０５％であり
、菌体の対消費メタノール収率は４２％であった。

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. １ アルカリゲネス属に属し、メタノールを資化しうる
   微生物をメタノールを主炭素源とする栄養培地に培養す
   ることを特徴とする微生物の培養方法。