JPS5988100A

JPS5988100A - Ｇｏｔ活性測定用試験片

Info

Publication number: JPS5988100A
Application number: JP19826182A
Authority: JP
Inventors: Mitsuhiro Nozaki; 野崎　光洋; Toshiharu Yagi; 八木　年晴; Kenzo Motosugi; 本杉　健三
Original assignee: Unitika Ltd
Current assignee: Unitika Ltd
Priority date: 1982-11-10
Filing date: 1982-11-10
Publication date: 1984-05-21

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】本発明は、ＧＯＴ（アスパラギン酸アミノトランスフェ
ラーゼ又はアヌパフギン酸トランスアミナーセ、別名グ
ルタミン酸−オキザロ酢酸トランスアミナーゼ。）活性
を測定する際に供する新規かつ簡便な試験片に関するも
のである。

血清中のＧＯＴ活性度は、心筋硬塞、筋肉疾患。

肝臓疾患等の疾患ｔこより増大することが知られており
、臨床検査の中で重要な項目となっている。

ＧＯＴ活性は、従来さまざまな方法で測定されており９
例えば現在、臨床化学分析において広く利用されている
のは、ライＦマンーフフンヶル法とカルメン法との２つ
の方法である。このうち、アメリカン・ジャーナル・オ
プ・クリニカルパソロジー誌（Ａｍｅｒ、Ｊ、Ｃ１１ｎ
、Ｐａｔｈｏｌ、　）第２８巻、５６頁（１９５７年）
に記載されているライトマン−フランケル法とは、アス
パラギン酸と２−オキソゲルタール酸とを基質としてグ
ルタミン酸とオキザロ酢酸とを生成させ、オキザロ酢酸
をジニトロフェニルヒドラジンｔこよって発色させ、そ
の吸光度を測定する方法である。しかし、この方法はジ
ニトロフェニルヒドラジン（こよる発色が、オキザロ酢
酸ｔこ特異的ではないという致命的な欠点を有している
。また、ジャーナル・オプ・クリニカル・インペア？イ
ゲイＶヨ７誌（、Ｔ、Ｃ１１ｎ、Ｉｎｖｅｒｔ、）第３
４巻、１６１頁（１９５５年）に記載されているカルメ
ン法は、　ＧＯＴ反応により生成したオキザロ酢酸をリ
ンゴ酸脱水素酵素によりリンゴ酸に変換する際に酸化さ
れる補酵素ＮＡＤＴ（の量を、紫外部の吸光度により測
定するという方法である。この方法はＧＯＴ活性を正確
に測定できる点で信頼性は高いが測定に際し使用する試
薬が高価であるばかりか。

測定操作に長時間を必要とし、さらに大量の被検液を必
要とする等の欠点を有している。

以上述べた測定方法以外に例えば、アナリテイカ〃・バ
イオケミストリー誌（Ａｎａｌ、Ｂｉｏｃｈｅｍ、　）
第１０巻、１４６頁（１９８１年）に記載されている方
法も知られている。すなわち、基質としてＬ−システィ
ンスルフィン酸と２−オキソゲルタール酸とを用いるも
のであり、　　ＧＯＴ反応により生成した亜硫酸イオン
が、中！Ｉｌｌ　を子連搬体を介してテトラゾリウム塩
化合物を還元し、ホルマザンを形成するので、その発色
度によりＧＯＴ活性度を求める方法である。しかしなが
ら、この方法は測定ｔこ先立ち、被検液に電気泳動を施
さねばならず、操作が煩雑であるという欠点を有してい
る。

また１以上の測定方法は、いずれも多量の被検液を必要
とするため、臨床検査の際に大＠に採血しなければなら
ず、被検者にとって苦痛になるということで欠点を有し
ている。

本発明者らは、かかる事情に鑑み、少量の血液で精度良
く、シかも簡便なＧＯＴ活性の測定ｔこりいて鋭意研究
を重ねた結果、（ＡＬＬ−システィンスルフィン酸と（
Ｂ）２−オキソゲルタール酸又はオキザロ酢酸と（Ｃ）
発色剤とからなる試験片が、極く微量の・被検液でも被
検液中のＧＯＴの含量１こ応じて着色し、　　ＧＯＴ活
性が測定できることを見出し９本発明を完成した。

すなわち１本発明はｆＡＩ　Ｌ−システィンスルフィン
酸と（Ｂ）２−オキソゲルタール酸又はオキザロ酢酸と
（Ｃ）発色剤とからなるＧＯＴ活性測定用試験片である
。

本発明の試験片に用いる素材としては１例えば紙、天然
及び合成繊維からなる織布並びに各種樹脂などが使用可
能であるが、特に吸水性を有することが望ましい。そ？
大きさは、好ましくは５ｄ以下、さらに好ましくは３ｄ
ＬＪ下、最適には２ｄ程度であり、形は四角９円形のど
のようなものでもよい。

本発明の試験片を作製するには１例えば上記の素材にＬ
−システィンスルフィン酸と２−オキソゲルタール酸又
はオキザロ酢酸と発色剤、緩衝剤及び必要に応じて安定
化剤などの混合溶液を含浸せしめればよい。また、含浸
せしめたのち、自然乾燥、真空乾燥又は凍結乾燥しても
よい。このときの混合溶液の組成としては、Ｌ−システ
ィンスルフィン酸を好ましくは１ｍＭ以上、さらｔこ好
ましくは１０〜１００ｍＭ、最適には２０−７５ｍＭ含
み、２−オキソゲルタール酸又はオキザロ酢酸を好まし
くは１ｍＭ以上、さらに好ましくは２〜５０ｍＭ、最適
には３〜１５ｍＭ含むことが望ましい。また、緩衝剤を
好ましくは５ｍＭ以上、さらに好ましくは１０〜２５０
ｍＭ、最適には５０〜１５０ｍＭ含むものである。その
混合溶液のｐＨは好ましくは７以上、さらに好ましくは
７〜１０．最適には７．５〜８．５の範囲であり、この
ため緩衝液としては２例えばトリス−塩酸緩衝液が使用
できるが、上記ｐＨ範囲を保つ緩衝剤であればどのよう
なものでも使用できる。また、必要に応じて添加する安
定剤としては、天然及び合成により得られる水溶性高分
子が使用でき１例えば牛血溝ア〃プミン、ポリビニルア
ルコール、ポリエチレングリコールなどが好ましく用い
られる。

これら安定化剤は好ましくは０．００１　Ｗ／Ｖ％以上
。

さらに好ましくは０．０１〜５　Ｗ／Ｖ％、最適しこは
０．０５〜２　Ｗ／Ｖ　９６含めばよい。また９発色剤
としては。

亜硫酸イオンにより発色するものであればいかなるもの
でもよい。そのようなものとしては９例えばフェナジン
メトサルフェートあるいは１−メトキシフェナジンメト
サルフェートを、好ましくは０．００１　Ｗ／Ｖ％以上
、さらに好ましくは０．００２−０．ＩＷ／Ｖ％、最適
には０．００５−０．０５　Ｗ／Ｖ％含み、テトラゾリ
ウム塩化合物を０．００４　Ｗ／Ｖ％以上、さらに好ま
しくは０．０１〜１．ＯＷ／Ｖ％、最適には０．０２〜
０．２Ｗ／Ｖ　４含む混合溶液が使用できる。テトラゾ
リウム塩化合物の具体例としては、ニトロテトラゾリウ
ムブルー、テトラニトロプルーテトフゾリウム及びテト
ラゾリウムグルーなどがあげられる。

本発明の試験片を使用するに際しては、　ＧＯＴの基質
、緩衝剤９発色剤を含む試験片１ｃ　ＧＯＴを含む被検
液の極く少量、すなわち好ましくは２５μ４以下、さら
に好ましくは１０μｌ以下、最適には１〜５μｌを滴下
し、室温に放置し発色するまでの時間を計測すればよい
。被検液としてはＧＯＴを含む液体であればよく９例え
ば血清、尿、唾液並びに微生物細胞抽出液などがあげら
れる。

本発明のＧＯＴ活性測定用試験片を用いれば、極めて微
容量の被検液中のＧＯＴ活性度を、簡便に。

なおかつ短時間のうちに知ることができる。この血清中
のＧＯＴ活性度の測定は、臨床検査の分野で重要な項目
であり、このように極めて微容量の血清でＧＯＴ活性度
の測定が可能であるということは臨床検査に際し採血量
を減少することが可能であり、このことは被検者の肉体
的苦痛の軽減を意味するものであり、医療産業上ｔこと
どまらず人道的観点からも大きな意義を有するものであ
る。

次に本発明を実施例により具体的１こ説明する。

実施例１０．１　Ｍ　）リス−塩酸緩衝液（ｐＨ８，１）、　　
０．１　ＭＬ−システィンヌルフィン酸ナトリウム、５
ｍＭ２−オキソゲルタール酸、　　０．０１’　Ｗ／Ｖ
％フエナジンメトサルフエー）　、　　０．０４　Ｗ／
Ｖ％ニトロプルーテトヲゾリウムからなる反応溶液２５
μｌを、濾紙（１０×１００　）に滴下しＧＯＴ活性測
定用試験片を作製し池次に１人血清１μｌを上記試験片
ｔこ滴下し室温に放置し１発色する”までの時間を計測
した。その結果を第１図に示す。

第１図は、あらかじめ力〃メン法により測定したＧＯＴ
活性度と９本発明の試験片で発色に要した時間とを示し
ており、その間には相関が認められ本発明の試験片によ
り簡便にＧＯＴ活性度を測定できることが明らかである
。

実施例２０．１　Ｍ　）リス−塩酸緩衝液（ｐＨ８，１）、　　
０．Ｉ　ＭＬ−システィンスルフィン酸ナトリウム、５
＋ｎＭ２−オキソグルタール酸、　　０．０１Ｗ／Ｖ＊
１−メトキシフエナジンメトサルフエー）　、　　０．
０４　Ｗ／Ｖ％ニトロプルーテトフゾリウムからなる反
応溶液２５μｌを木綿布（１ｏ　ｘ　１ｇｍ＋）に滴下
しＧＯＴ活性用試験片を作製した。

次に、　ＧＯＴを含む１０ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ７）
を被検液とし、その１μｌを上記試験片に滴下し室温に
放置し９発色するまでの時間を計測した。

その結果、測定値と被検液中のＧＯＴ含量との間には第
１図と同様な相関が認められた。すなわちカルメン法ｔ
こよる測定値が２５．４１及び７６−Ｌ−ット／Ｌのと
き９発色に要した時間はそれぞれ９．　７．５゜４．６
分であり１本発明の試験片により被検液中のＧＯＴ含量
を簡便に測定できた。

実施例３０．１　Ｍ　）リス−塩酸緩衝液（ｐＨ８，１）、　　
０．１　ＭＬ−システィンスルフィン酸ナトリウムの混
合溶液に濾紙片（１０Ｘ　１０１１＋１）を浸漬したの
ち、この濾紙片を真空乾燥した。５　ｍＭ　２−オキソ
ゲルタール酸、　　０．０１１７１％フェナジンメトサ
ルフェート。

０．０４　Ｗ／Ｖ％ニトロプルーテトヲゾリウムからな
る混合溶液２５μｌを上記乾燥濾紙片に滴下し、　　Ｇ
ＯＴ活性測定用試験片とした。

次に、　　ＧＯＴを含む１０ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ７
）を被検液とし、その１μｌを上記試験片に滴下し室温
に放置し１発色するまでの時間を計測した。

その結果、測定値と被検液中のＧＯＴ含量との間ｔこは
第１図と同様な相関が認められ１本発明の試験片により
ＧＯＴ含量の簡易測定が可能であった。

すなわち、被検液中のＧＯＴ含量が５５．８２及び１３
０ユニツ）／Ｌのとき９発色に要する時間はそれぞれ６
゜４．２．５分であった。

実施例４０．１　Ｍ　Ｌ−システィンフルフィン酸ナトリウム。

５ｎｌ１Ｍｚ−オキソゲルタール酸、　　０．Ｉ　Ｗ／
Ｖ　％ポリビニμアルコールの混合溶液に濾紙片（１０
Ｘ１０　ｆｉ）を浸漬したのち、この濾紙片を凍結乾燥
した。

０．１　Ｍ　）　９　ｙ、−塩酸緩衝液（ｐＨ８，１）
　、　　０．０１　Ｗ／Ｖ％フエナジンメトサ〃フェー
）　、　　０．０４　Ｗ／Ｖ％ニトログルーテトフゾリ
ウムの混合溶液２５μｌを上記乾燥濾紙片に滴下し、　
　ＧＯＴ活性測定用試験片とした。

この試験片に人血清１μＥを滴下し９発色するまでの時
間を計測したところ、力〃メン法により求めた血清中Ｇ
ＯＴ含量が３１．４０及び５′５ユニツ）／Ｌのとき１
発色に要する時間はそれぞれ９，８，６．５分であった
。すなわち２本実施例ｔこおいても第１図と同様な相関
が得られ１本発明の試験片によってＧＯＴ活性の簡易測
定が可能であった。

【図面の簡単な説明】

第１図はカルメン法により測定した血清中のＧＯＴ含量
（縦軸）と本発明の試験片が着色するのにこ要した時間
（ｙｔ軸）との関係を示す図である。特許出願人　ユニチカ株式会社１１− 滉　１　口

Claims

【特許請求の範囲】

（１）　（薊し−システィンヌルフィン酸と（Ｂ）　２
−オキソゲルタール酸又はオキザロ酢酸と（Ｃ１発色剤
とからなるＧＯＴ活性測定用試験片。