JPS5998681A - Ｇｏｔ，ｇｐｔ，ｌｄｈの活性測定装置 - Google Patents
Ｇｏｔ，ｇｐｔ，ｌｄｈの活性測定装置Info
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- JPS5998681A JPS5998681A JP57209665A JP20966582A JPS5998681A JP S5998681 A JPS5998681 A JP S5998681A JP 57209665 A JP57209665 A JP 57209665A JP 20966582 A JP20966582 A JP 20966582A JP S5998681 A JPS5998681 A JP S5998681A
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
〔発明の技術分野〕
本発明は電気化学的手法を用い１本の電極を備えた１つ
の測定系でＧＯＴ 、 ＧＰＴ 、 Ｌｌ））ｌの３種
類の酵素活性を測定する装置に関するものである。
の測定系でＧＯＴ 、 ＧＰＴ 、 Ｌｌ））ｌの３種
類の酵素活性を測定する装置に関するものである。
従来、酵素活性の測定は、ある酵素を含む試料液と、そ
の酵素の基質を含む溶液と、更に他の酵素、補酵素およ
び発色試薬等を添加してなる反応系において、酵素作用
によりに、素基質に化学反応を行なわせ、そのときの反
応系の吸光度を測定する方法で行なわれていた。
の酵素の基質を含む溶液と、更に他の酵素、補酵素およ
び発色試薬等を添加してなる反応系において、酵素作用
によりに、素基質に化学反応を行なわせ、そのときの反
応系の吸光度を測定する方法で行なわれていた。
例えばＧＰＴの酵素活性を測定する場合、ＧＰＴをその
基質と接触させ、該ＧＰＴの酵素作用によりピルビン酸
を生成し、そのピルビン酸をＬＤＨの酵素作用によって
還元する。このとき、この反応系に所定濃度のニコチン
酸アミドアデニンヌクレオチド（ＮＡＩ）Ｈ）を共存さ
せておくと、時間の経過とともに該ＮＡＩ）Ｉ−ｉが減
少し、その濃度が低下する。その濃度変化は波長３４０
邸におけるＮＡＩ）Ｈの吸光度測定から知ることができ
る。従って間接的にＧＰＴの酵素活性を測定できること
にな、る。
基質と接触させ、該ＧＰＴの酵素作用によりピルビン酸
を生成し、そのピルビン酸をＬＤＨの酵素作用によって
還元する。このとき、この反応系に所定濃度のニコチン
酸アミドアデニンヌクレオチド（ＮＡＩ）Ｈ）を共存さ
せておくと、時間の経過とともに該ＮＡＩ）Ｉ−ｉが減
少し、その濃度が低下する。その濃度変化は波長３４０
邸におけるＮＡＩ）Ｈの吸光度測定から知ることができ
る。従って間接的にＧＰＴの酵素活性を測定できること
にな、る。
しかしながら、この眩光度測定法にあっては、ＮＡＩ）
Ｈ、Ｌｌ）Ｈ、あるいは容積の発色試薬など烏価な試薬
を必要とし、しかもこれら試薬を測定後、廃棄せざるを
得ないため測定コストが高い。また懸濁物を含む反応系
に対しては吸光反測定が不可能となるため、それらの試
料を測定する場合、予め懸濁物の除去など前処理を必要
とする。
Ｈ、Ｌｌ）Ｈ、あるいは容積の発色試薬など烏価な試薬
を必要とし、しかもこれら試薬を測定後、廃棄せざるを
得ないため測定コストが高い。また懸濁物を含む反応系
に対しては吸光反測定が不可能となるため、それらの試
料を測定する場合、予め懸濁物の除去など前処理を必要
とする。
このような吸光度測定の欠点を解決するために電気化学
的測定法を応用した装置が従来、提案されている（％同
昭５６−９７８６４号参照）。
的測定法を応用した装置が従来、提案されている（％同
昭５６−９７８６４号参照）。
この装置は、試料中の酵素が関与して生成若しくは消滅
する物質（検知物質）に作用する酵素を固定した膜を添
着した酵素電極を２本相互に離間して配置したフローシ
ステムである。この装置では、試料中に当初から含まれ
ていた検知物質の与える電気信号をベース値とし、更に
試料中の酵素の作用によって、該酵素の活性に対応して
生成若しくは消滅した物質（検知物質）の与える電気信
号を測定し、ベース値との差から試料中の酵素の活性を
測定するものである。
する物質（検知物質）に作用する酵素を固定した膜を添
着した酵素電極を２本相互に離間して配置したフローシ
ステムである。この装置では、試料中に当初から含まれ
ていた検知物質の与える電気信号をベース値とし、更に
試料中の酵素の作用によって、該酵素の活性に対応して
生成若しくは消滅した物質（検知物質）の与える電気信
号を測定し、ベース値との差から試料中の酵素の活性を
測定するものである。
しかしながら、この装置では２本の酵素−極を用いてベ
ース値と測定値を群１定するため、両者の出力調整が難
しく、また操作が極めて煩雑である。
ース値と測定値を群１定するため、両者の出力調整が難
しく、また操作が極めて煩雑である。
すなわち、感度、応答速度、ゲイン等の電極特性が、両
電極において同じでなく、またその特性の経時変化も同
一でないため、測定時において両電極の出力調整を行な
っても、得られた検量線の直線性、直線領域に相違があ
り、測定誤差を生じることがあった。またフローシステ
ムの液流路内に２本の電極なオ目互に離間して配置しで
あるので、液流路内で試料の拡散に基づく希釈現象が発
生し、下流の電極位置では検知物質の濃度が低下し、特
に低活性の酵素を含む微量試料の場合には、両電極の出
力調整、差動増幅時にあっては、その調整は極めて困難
となる。
電極において同じでなく、またその特性の経時変化も同
一でないため、測定時において両電極の出力調整を行な
っても、得られた検量線の直線性、直線領域に相違があ
り、測定誤差を生じることがあった。またフローシステ
ムの液流路内に２本の電極なオ目互に離間して配置しで
あるので、液流路内で試料の拡散に基づく希釈現象が発
生し、下流の電極位置では検知物質の濃度が低下し、特
に低活性の酵素を含む微量試料の場合には、両電極の出
力調整、差動増幅時にあっては、その調整は極めて困難
となる。
また、液流路内に酵素基質含有緩衝液を一定の流速で流
し、ここに試料液を注入し、両者が流路内を流れる間に
酵素と基質とを接触させて、酵素作用により減少若しく
は増加した検知物質の与える電気信号を下流に配設した
電極で検出して酵素の活性を測定する装置も提案されて
いる（％公昭５６−９２４４５ 、９２４４６号参照）
０しかしながらこの装置では、試料注入口と電極間の欣
＃ｒ、路は酊糸と基質の反応の場であるため、長い反応
時間を必要とする低活性酵素の場合は液流路が長くなる
。また、流路が長くなれば、注入した試料の流路での希
釈が進み、その結果、試料注入ｉを増すか、より流路を
長くして反応時間を長くしなければならないという不都
合か生じる。
し、ここに試料液を注入し、両者が流路内を流れる間に
酵素と基質とを接触させて、酵素作用により減少若しく
は増加した検知物質の与える電気信号を下流に配設した
電極で検出して酵素の活性を測定する装置も提案されて
いる（％公昭５６−９２４４５ 、９２４４６号参照）
０しかしながらこの装置では、試料注入口と電極間の欣
＃ｒ、路は酊糸と基質の反応の場であるため、長い反応
時間を必要とする低活性酵素の場合は液流路が長くなる
。また、流路が長くなれば、注入した試料の流路での希
釈が進み、その結果、試料注入ｉを増すか、より流路を
長くして反応時間を長くしなければならないという不都
合か生じる。
またこれとは別に１本の電極を用いて酩素活性を測定す
る装置も提案されている（特開昭５６−９２４４５号参
照）。すなわち、一定ｖ１シ速で溶液流路内をフローセ
ルに向って流れる基質溶液に所定量の酔素試料溶叡を注
入し、該流路内で両者の反応を進行せしめ、そのときの
酵素の作用により生成若しくは消滅する検知物質の濃度
変化を１本の電極で電気信号として測定する装置である
。
る装置も提案されている（特開昭５６−９２４４５号参
照）。すなわち、一定ｖ１シ速で溶液流路内をフローセ
ルに向って流れる基質溶液に所定量の酔素試料溶叡を注
入し、該流路内で両者の反応を進行せしめ、そのときの
酵素の作用により生成若しくは消滅する検知物質の濃度
変化を１本の電極で電気信号として測定する装置である
。
しかしながら、この場合、試料溶成中にＩｌｌ定対象と
する酵素以外の電極感応物質が予め含治されていると電
極は該物質にも感応し、その濃度を電気信号として検出
するので、予め含有されている一極感応物賀濃度に相当
する誤差を生じ、酵素の活性測定が不正確になる欠点が
あったＯ またこれら従来の活性測定装置は何れもＣｌ０Ｔ 。
する酵素以外の電極感応物質が予め含治されていると電
極は該物質にも感応し、その濃度を電気信号として検出
するので、予め含有されている一極感応物賀濃度に相当
する誤差を生じ、酵素の活性測定が不正確になる欠点が
あったＯ またこれら従来の活性測定装置は何れもＣｌ０Ｔ 。
ＧＰＴ 、 Ｌｌ））ｉを夫々別個の装置により測定す
るものであり、測定時間がかかる上、装置の操作が煩雑
であり、特に簡便迅速な検査が振求される臨床検査にお
いて問題があった。
るものであり、測定時間がかかる上、装置の操作が煩雑
であり、特に簡便迅速な検査が振求される臨床検査にお
いて問題があった。
本発明は、従来の欠点を改善し、１本電極を用いた電気
化学的手法により、３欅の酵素活性を１つの測定系で測
定でき、装置の９５１Ｂ３化を図ると共に、測定操作が
容易で且つ鳥梢度１工ＧＯＴ。
化学的手法により、３欅の酵素活性を１つの測定系で測
定でき、装置の９５１Ｂ３化を図ると共に、測定操作が
容易で且つ鳥梢度１工ＧＯＴ。
ＧＰＴ 、 ＬＬ）Ｈの活性化測定装置を提供するもの
である。
である。
本発明はＧＯＴ 、 ＧＰＴ 、 ＬＤＨの作用により
直接的に生成、あるいは他の酵素との組み合せにより生
成するピルビン酸な１本の電極を用いた一つの電気化学
測定系により計測することを特徴とするものである。
直接的に生成、あるいは他の酵素との組み合せにより生
成するピルビン酸な１本の電極を用いた一つの電気化学
測定系により計測することを特徴とするものである。
即ち本発明装置は
ω ＧＯＴ 、 ＧＰＴ 、 Ｌｌ）Ｈの各反応液を選
択的に切換えて送液する反応液供給部と、 ■ ＧＯＴにより生成されたオキサル酢酸をピルビン酸
に変換する変換部と、 ■ １本電極で構成されたピルビン酸測定部と、■ 該
測定部に緩衝液を供給する緩衝液供給部と、 ■ 該緩衝液供給部に前記反応液供給部から送液された
反応液を供給する流路切換部と、から構成されている。
択的に切換えて送液する反応液供給部と、 ■ ＧＯＴにより生成されたオキサル酢酸をピルビン酸
に変換する変換部と、 ■ １本電極で構成されたピルビン酸測定部と、■ 該
測定部に緩衝液を供給する緩衝液供給部と、 ■ 該緩衝液供給部に前記反応液供給部から送液された
反応液を供給する流路切換部と、から構成されている。
不発ＩＵＫオイ−ＣＧＯＴ、ＧＰ’ｌ’、ＬＩ）Ｈノ１
１％素Ｋ、夫々に対応する基質を反応させてピルビン酸
を生成させるが、ＧＯＴは一段階の反応でピルビン酸を
生成することができないので他の酵素を反応させてピル
ビン酸を生成する。
１％素Ｋ、夫々に対応する基質を反応させてピルビン酸
を生成させるが、ＧＯＴは一段階の反応でピルビン酸を
生成することができないので他の酵素を反応させてピル
ビン酸を生成する。
この場合ＧＯＴに対する基質としてはＬ−アスパラギン
酸とα−ケトグルタル酸の混合液を用い、更にピルビン
酸を生成させるためにオキサル酢酸脱炭酸酵素を用いる
。
酸とα−ケトグルタル酸の混合液を用い、更にピルビン
酸を生成させるためにオキサル酢酸脱炭酸酵素を用いる
。
またＧＰＴに対する基質としてはＬ−アラニンとα−ケ
トグルタル酸の混合液を用いる。
トグルタル酸の混合液を用いる。
更にＬＤＨに対する基質としてはＮＡＤと乳酸リチウム
を用いる。
を用いる。
本発明においてピルビン酸測定部としては、例えは、■
ピルビン酸オキシダーゼを微粒子等に固定化して形成し
た力２ムあるいはチューブ内壁に固定化したものと、酸
素または過酸化水素を検出する電気化学測定電極を組合
上た装置、または■ピルビン酸オキシターゼを固定化し
た膜と、酸素または過酸化水素を検知する電気化学測定
電極を組み合せた装置などピルビン酸濃度を測定できる
ものであれば何れのものでも良〜１゜ 本発明装置を用いて各酵素活性を測定する方法について
その原理を簡単に説明する。
ピルビン酸オキシダーゼを微粒子等に固定化して形成し
た力２ムあるいはチューブ内壁に固定化したものと、酸
素または過酸化水素を検出する電気化学測定電極を組合
上た装置、または■ピルビン酸オキシターゼを固定化し
た膜と、酸素または過酸化水素を検知する電気化学測定
電極を組み合せた装置などピルビン酸濃度を測定できる
ものであれば何れのものでも良〜１゜ 本発明装置を用いて各酵素活性を測定する方法について
その原理を簡単に説明する。
（１） ｏ ｏ ’ｒ活性測定の場合Ｌ−アスパラギ
ン酸＋α−ケトグルタル酸［Ｉ）ＧＰ’ｌ’活性測定の
場合 １ノーアラニン＋α−ケトグルタル酸 Ｑｌｊ）Ｌｌ）Ｈ活性測定の場合 上記各反応により生成されたピルビン酸を、酸素または
過酸化水素の生成若しくは消滅した濃度変化としてピル
ビン酸測定部で夫々測定１゛ることによりＧＯＴ 、
ＧＰＴ 、 ＬＤＨの各酵素の活性を調べることができ
る。
ン酸＋α−ケトグルタル酸［Ｉ）ＧＰ’ｌ’活性測定の
場合 １ノーアラニン＋α−ケトグルタル酸 Ｑｌｊ）Ｌｌ）Ｈ活性測定の場合 上記各反応により生成されたピルビン酸を、酸素または
過酸化水素の生成若しくは消滅した濃度変化としてピル
ビン酸測定部で夫々測定１゛ることによりＧＯＴ 、
ＧＰＴ 、 ＬＤＨの各酵素の活性を調べることができ
る。
次に本発明装置の一例を図面を参照して説明する。
図において１はＧＯＴ反応液槽、２はＧＰＴ反応液桶、
３はＬＤＨ反応液槽で、これらは流路４ａ、４ｂ、４ｃ
を介して流路切換パルプ５に接続されている。６は前記
ＧＯＴ反応液槽ｌと、流路切換パルプ５との間の流路４
ａの中間に設けられた、ピルビン酸変換部となるオキサ
ル酢酸脱炭酸酵素（ＯＡＣ）固定化カラムである。
３はＬＤＨ反応液槽で、これらは流路４ａ、４ｂ、４ｃ
を介して流路切換パルプ５に接続されている。６は前記
ＧＯＴ反応液槽ｌと、流路切換パルプ５との間の流路４
ａの中間に設けられた、ピルビン酸変換部となるオキサ
ル酢酸脱炭酸酵素（ＯＡＣ）固定化カラムである。
前記流路切換パルプ５は流路７を介して、切換パルプ８
に接続し、更にこの切換パルプ８からは三方向の流路９
，１０．１１に接続している。前記流路９は緩衝液槽１
２に接続していると共に流路１０は定量ポンプ１３を介
して廃液槽１４に接続されている。一方、流路１１はフ
ローセル１５および定量ポンプ１６を介して別の廃液槽
１７に接続している。フローセル１５内には１本のピル
ビン酸測定電極１８が設けられ、更にこれは測定表示機
構１９に接続されている。
に接続し、更にこの切換パルプ８からは三方向の流路９
，１０．１１に接続している。前記流路９は緩衝液槽１
２に接続していると共に流路１０は定量ポンプ１３を介
して廃液槽１４に接続されている。一方、流路１１はフ
ローセル１５および定量ポンプ１６を介して別の廃液槽
１７に接続している。フローセル１５内には１本のピル
ビン酸測定電極１８が設けられ、更にこれは測定表示機
構１９に接続されている。
上記装置において、先ずＧＯＴ反応液槽ｌに、ＧＯＴと
その基質を混合した溶液を入れ・ＧＰＴ反応液槽２にＧ
Ｐ Ｔとその基質を混合した溶液を入れ、更にＬｌ）
Ｈ反応液槽３にＬＬＩＨと、その基質を混合した溶液を
入れ更に各槽内にはｐＩ−１値、温度および緩衝液など
反応条件を調整して酵素と基質の反応が速かに進行する
ようにしておく０次に流路切換バルブ５を切換えて、各
反応液槽１，２．３内の反応液を流路７に選択的に送液
する。この場合ＧＯＴ反応液槽ｌがもの反応液はＯＡＣ
固定化カラム６を通してピルビン酸に変換させる。この
ようにしてピルビン酸を生成した反応液は、ポンプ１３
により流￥６７を通り、切換バルブ８を経て流路１０が
ら廃液槽１４に流す。切換バルブ８中にピルビン酸を含
む反応液が満たされた後、切換バルブ８を切換えて、緩
衝液槽１２がら流路９を通って送られてきた緩衝液と共
に、流路１１を通って７０−セル１５内に供給し、ここ
で１本のピルビン酸測定電極１８によりピルビン酸の濃
度を測定する。
その基質を混合した溶液を入れ・ＧＰＴ反応液槽２にＧ
Ｐ Ｔとその基質を混合した溶液を入れ、更にＬｌ）
Ｈ反応液槽３にＬＬＩＨと、その基質を混合した溶液を
入れ更に各槽内にはｐＩ−１値、温度および緩衝液など
反応条件を調整して酵素と基質の反応が速かに進行する
ようにしておく０次に流路切換バルブ５を切換えて、各
反応液槽１，２．３内の反応液を流路７に選択的に送液
する。この場合ＧＯＴ反応液槽ｌがもの反応液はＯＡＣ
固定化カラム６を通してピルビン酸に変換させる。この
ようにしてピルビン酸を生成した反応液は、ポンプ１３
により流￥６７を通り、切換バルブ８を経て流路１０が
ら廃液槽１４に流す。切換バルブ８中にピルビン酸を含
む反応液が満たされた後、切換バルブ８を切換えて、緩
衝液槽１２がら流路９を通って送られてきた緩衝液と共
に、流路１１を通って７０−セル１５内に供給し、ここ
で１本のピルビン酸測定電極１８によりピルビン酸の濃
度を測定する。
次に流路切換バルブ５を順次切換えて、（イ）ＴとＬＤ
Ｈの反応により生成したピルビン酸の濃度を測定する。
Ｈの反応により生成したピルビン酸の濃度を測定する。
以下、同様に、流路切換パルプ５、切換バタプ８を所定
時間経過ごとに切換えテ行キ、一種類の酵素に対して、
ピルビン酸生成量の経時的変化を調べ、その測定値の差
がら夫々ＧＯＴ 、 ＧＰＴ 、 Ｌｌ）Ｈの活性を測
定′１″ることにより、予め試料中に電極感応物置を含
む場合においても、１本の電極を備えた一つの測定系に
より高精度に活性を測定することができる。
時間経過ごとに切換えテ行キ、一種類の酵素に対して、
ピルビン酸生成量の経時的変化を調べ、その測定値の差
がら夫々ＧＯＴ 、 ＧＰＴ 、 Ｌｌ）Ｈの活性を測
定′１″ることにより、予め試料中に電極感応物置を含
む場合においても、１本の電極を備えた一つの測定系に
より高精度に活性を測定することができる。
次に図面に示す装置を用い、以下の条件によりＧＯＴ
、 ＧＰＴ 、 Ｌｌ）Ｈの谷酊素活性を具体的に測定
した。
、 ＧＰＴ 、 Ｌｌ）Ｈの谷酊素活性を具体的に測定
した。
基質溶液
ＧＯＴ用：０．０５Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７，４）の中
にＬ−アスパラギ／酸１００ｍＭ、α−ケトグルタル酸
２０ｍＭ、塩化マグネシウム２ｍＭを含有せしめたもの
を３００μｌ！ＧＯＴ反応液檜ｌに入れた。
にＬ−アスパラギ／酸１００ｍＭ、α−ケトグルタル酸
２０ｍＭ、塩化マグネシウム２ｍＭを含有せしめたもの
を３００μｌ！ＧＯＴ反応液檜ｌに入れた。
ＧＰＴ用：０，０５Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７，４）の中
にＬ−アラ＝ ７２０ ＱｍＭ 、 Ｃ１−ケトグルタ
ル酸１０ｍＭを含有せしめたものをａｏｏｍｚをＧＰＴ
反応液槽２に入れた０ ＬＬ）Ｈ用二０．０５Ｍトリス緩衝液（ｐＨ９，０）の
中にＮＡＤ Ｉ ＱｍＭ 、乳酸リチウム２０９ｍＭを
含有せしめたもの３００μｌをＬＤＨ反応液槽３に入れ
た０ ＯＡＣ１ｉ！ｉ］厘化カラム６：ガシスビーズ（８０〜
１２０メツシユ）の表面に共有結合させたＯＡＣ（酵素
活性１０ ＩＵ／ｒｎｆ／）を内径４朋φ、長さ３αの
カラムに詰め、これをＧＯＴの反応で生成したえキザル
酢酸の流れる流路４ａに設けた。
にＬ−アラ＝ ７２０ ＱｍＭ 、 Ｃ１−ケトグルタ
ル酸１０ｍＭを含有せしめたものをａｏｏｍｚをＧＰＴ
反応液槽２に入れた０ ＬＬ）Ｈ用二０．０５Ｍトリス緩衝液（ｐＨ９，０）の
中にＮＡＤ Ｉ ＱｍＭ 、乳酸リチウム２０９ｍＭを
含有せしめたもの３００μｌをＬＤＨ反応液槽３に入れ
た０ ＯＡＣ１ｉ！ｉ］厘化カラム６：ガシスビーズ（８０〜
１２０メツシユ）の表面に共有結合させたＯＡＣ（酵素
活性１０ ＩＵ／ｒｎｆ／）を内径４朋φ、長さ３αの
カラムに詰め、これをＧＯＴの反応で生成したえキザル
酢酸の流れる流路４ａに設けた。
ピルビン酸測定電極１８：過酸化水素透過性膜で白金陰
極を被覆したポーラログラフ式過酸化水素電極の感応面
を、ピルビン酸オキシダーゼ（ｐｏｐ ）固定化コラー
ゲン膜（厚み３５μｍ、酵素活性約４５ ｒｕ／ｃｍ
） で被憶し、更にその上をセルロースジアセテート
の限外ｒ過膜（厚ミ４８μｍ）の粗密層で被覆して構成
したピルビン酸酵素電極を用い、これを７０−セル１５
内に装着した。
極を被覆したポーラログラフ式過酸化水素電極の感応面
を、ピルビン酸オキシダーゼ（ｐｏｐ ）固定化コラー
ゲン膜（厚み３５μｍ、酵素活性約４５ ｒｕ／ｃｍ
） で被憶し、更にその上をセルロースジアセテート
の限外ｒ過膜（厚ミ４８μｍ）の粗密層で被覆して構成
したピルビン酸酵素電極を用い、これを７０−セル１５
内に装着した。
ピルピ／酸電極用緩衝液：０．０１Ｍ！Ｊン酸緩衝液（
ｐＨ７，４）の中にＱ、ＱｌｍＭ ７ラビンアデニ／ジ
ヌクレオチド（ＦＡＬ） ） ｊＯ，２ｍＭｍブチアミ
ロリン酸％１ＯＩＴ］Ｍ塩化マグネシウムを含鳴せしめ
たものを緩衝液槽１２に入れ、定電ポンプ１６で１ｍｌ
！／ｎ１ｉｎ の流速で送液し、ピルビン敵定箪のた
めのフローシステムを形成した。
ｐＨ７，４）の中にＱ、ＱｌｍＭ ７ラビンアデニ／ジ
ヌクレオチド（ＦＡＬ） ） ｊＯ，２ｍＭｍブチアミ
ロリン酸％１ＯＩＴ］Ｍ塩化マグネシウムを含鳴せしめ
たものを緩衝液槽１２に入れ、定電ポンプ１６で１ｍｌ
！／ｎ１ｉｎ の流速で送液し、ピルビン敵定箪のた
めのフローシステムを形成した。
試料液：測定対象のＧＯＴ 、 ＧＰＴ 、 ＬＤＨを
含有する血清試料を用い、測定の際に各反応液槽１゜２
．３に夫々１００μｌずつ添加して、マグネティックス
ター２−で攪拌した。
含有する血清試料を用い、測定の際に各反応液槽１゜２
．３に夫々１００μｌずつ添加して、マグネティックス
ター２−で攪拌した。
測定は、一定時間ごとに流路切換バルブ５を切換えて、
各反応液槽１，２．３から順次ポンプ１０で切換バルブ
８まで送液し、これを切換えて５０μｌずつ、緩衝液と
共に７０−セル１５に送り、ここでピルビン酸の生成蓋
を測定電極１８で測定し、各時点における測定値の差か
らビルビン酵濃度を測定した。
各反応液槽１，２．３から順次ポンプ１０で切換バルブ
８まで送液し、これを切換えて５０μｌずつ、緩衝液と
共に７０−セル１５に送り、ここでピルビン酸の生成蓋
を測定電極１８で測定し、各時点における測定値の差か
らビルビン酵濃度を測定した。
この結果、ＧＯＴの活性は５０〜１００ＯＩＵ／ｒ。
ＧＰＴの活性は５〜８００１Ｕ／ｌ 、 Ｌｌ）Ｈは５
０〜１０００ＩＵ／７３ の検量線が得られた。これら
の値は、従来の比色法との相関係数は０．９６〜０．９
８と良好な結果を得ることができた。
０〜１０００ＩＵ／７３ の検量線が得られた。これら
の値は、従来の比色法との相関係数は０．９６〜０．９
８と良好な結果を得ることができた。
以上説明した如く、本発明に係わるＧＯＴ。
ＧＰＴ 、 ＬＤ）１の活性測定装置によれば、１本の
電極を用いた１つの′電気化学的測定糸で、３種の酵素
活性を容易に且つ高精度に測定できると共に、装置の簡
略化を図れ、特に臨床検査において顕著な効果を発揮す
ることができる。
電極を用いた１つの′電気化学的測定糸で、３種の酵素
活性を容易に且つ高精度に測定できると共に、装置の簡
略化を図れ、特に臨床検査において顕著な効果を発揮す
ることができる。
図面は本発明装置の概略構成を示１−ブロック図である
。 １・・ＧＯＴ反応液権、２・・Ｇ Ｐ Ｔ反応液槽、５
−−−ＬＤＨ反応赦槽、 ４ａ、４ｂ、４ｃｍ 流路、
５・・・流路切換パルプ、６・・・ＯＡＣ固定化カラム
、７．９，１０，１１・・・流路、８・・・切換バルブ
、１２・・・緩衝液槽、１３．１６・・・定量ポンプ、
１４．１７・・・廃Ｗｉ、４４Ｊ、ｚｓ・・・ンローセ
ル、１８・・・測定電極、ノ９・・・測定表示機構。
。 １・・ＧＯＴ反応液権、２・・Ｇ Ｐ Ｔ反応液槽、５
−−−ＬＤＨ反応赦槽、 ４ａ、４ｂ、４ｃｍ 流路、
５・・・流路切換パルプ、６・・・ＯＡＣ固定化カラム
、７．９，１０，１１・・・流路、８・・・切換バルブ
、１２・・・緩衝液槽、１３．１６・・・定量ポンプ、
１４．１７・・・廃Ｗｉ、４４Ｊ、ｚｓ・・・ンローセ
ル、１８・・・測定電極、ノ９・・・測定表示機構。
Claims (1)
- グルタミン酸オキサル酢酸ドシンスアミナーゼ（ＧＯＴ
）と、グルタミン敵ピルビン醒トランスアミナーゼ（Ｇ
ＰＴ）と２クテートデヒドロナーゼ（Ｌｌ）Ｈ）の各反
応液を選択的に切換えて送液する反応液供給部と、ＧＯ
Ｔにより生成されたオキサル酢酸をピルビン酸に変換す
る変換部と、１本電極で構成されたピルビン酸測定部と
、該測定部に緩衝液を供給する緩衝液供給部と、該緩衝
液供給部に、前記反応液供給部から送液された反応液を
供給する流路切換部とからなることを特徴とするＧＯＴ
、 ＧＰＴ 、 Ｌ、１）Ｈの活性測定装置。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP57209665A JPS5998681A (ja) | 1982-11-30 | 1982-11-30 | Ｇｏｔ，ｇｐｔ，ｌｄｈの活性測定装置 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP57209665A JPS5998681A (ja) | 1982-11-30 | 1982-11-30 | Ｇｏｔ，ｇｐｔ，ｌｄｈの活性測定装置 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS5998681A true JPS5998681A (ja) | 1984-06-07 |
| JPS629312B2 JPS629312B2 (ja) | 1987-02-27 |
Family
ID=16576573
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP57209665A Granted JPS5998681A (ja) | 1982-11-30 | 1982-11-30 | Ｇｏｔ，ｇｐｔ，ｌｄｈの活性測定装置 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS5998681A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2010171177A (ja) * | 2009-01-22 | 2010-08-05 | Nec Infrontia Corp | 支持装置および電子機器 |
-
1982
- 1982-11-30 JP JP57209665A patent/JPS5998681A/ja active Granted
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2010171177A (ja) * | 2009-01-22 | 2010-08-05 | Nec Infrontia Corp | 支持装置および電子機器 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS629312B2 (ja) | 1987-02-27 |
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