JPS6010174A - オ−トラジオグラフイ−による遺伝子のスクリ−ニング方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は、オートラジオグラフィーによる遺伝子のスク
リーニング方法に関するものである。

近年、急激に発展して来た分子生物学においては、生物
体の機能や複製のメカニズムを解明するために、生物体
のもつ遺伝情報を明らかにすることが必須のこととなっ
ている。このためには、生物体の全遺伝子群（ゲノム）
の中から、目的とする遺伝情報を担っている遺伝子（ジ
ーン）を選別し、大量に得ること、すなわち遺伝子のク
ローニングが不可欠な手段となっている。

また、遺伝子のクローニングは、産業上においてはイン
ターフェロン等の医薬品、蛋白質等の食料品、耐候性農
産物、化学工業用品などの有用産物の生産効率を高める
ことを可能にするものであり、近年において非常に注目
を集めている。

これらの分野において、遺伝子のクローニングを実施す
る時には、目的の遺伝子が全遺伝子群の中に占める割合
が非常に小さいため、その選別が非常に困難なものとな
っている。換言すれば、遺伝子のクローニングの成否は
、遺伝子のスクリーニングが効率良く行なわれるか否か
にかかっている。また、上記スクリーニングは、遺伝病
等の遺伝子による診断においても該当する遺伝子の同定
を行なう際の重要な手段となっている。

遺伝子を選別する方法として、これまで種々の方法が試
みられて来たが、その主なものとしては、目的遺伝子の
分子量、化学的特性等を利用してカラムクロマトグラフ
ィーまたは電気泳動法などの分析化学的手法により分離
、精製する方法、目的遺伝子の薬剤耐性、酵素活性など
に対して発現する形質を利用して選択する生物学的方法
、および目的遺伝子の二本鎖ＤＮＡまたはＤＮＡとＲＮ
Ａとの相補性を利用するハイブリダイゼーション法など
により選択するプローブ法が挙げられる。

上記の選別方法のうちで、分析化学的手法は、遺伝子が
微量であり、かつ目的遺伝子が全遺伝子群に占める割合
が小さいために目的とする遺伝子のみを選択的に分離す
ることが非常に難しく、実用性に欠けるものである。ま
た、生物学的方法は、目的遺伝子に関連した機能が発現
することが必須条件であるという欠点がある。これら二
方法に対して、プローブ法は、遺伝子が本質的に有して
いる相補性を利用するものであり、また操作が簡単であ
るという大きな利点もある。

たとえば、コロニー・ハイブリダイゼーション法を利用
した遺伝子のスクリーニング方法は、以下のような操作
により実施される。

まず、目的とする遺伝子（ジーン）を有するＤＮＡ断片
を含む組み換えＤＮＡを調製する。すなわち、大腸菌な
どから得たプラスミドをベクターとして、これを特定の
制限酵素で切断しておく。

−書目的の遺伝子を含むＤＮＡもしくはＤＮＡ断片も同
一の制限酵素で切断し、プラスミドベクターと検知対象
のＤＮＡとが共に同じ封着末端を有するようにする。次
いで両者をＤＮＡリガーゼで、その対応末端を連結させ
ることにより組換えプラスミドを得ることができる。

１」的遺伝子を壱するＤＮＡ断片は、このほかにもたと
えば、ショットガン法により無作為に目的遺伝子−を含
むＤＮＡを切断したのち、得られた各ＤＮＡ断片の末端
をＤＮＡポリメラーゼで好適に修復することによっても
得られる。

上記のようにして得られた組換えプラスミドを大腸菌に
感染させたのち、培地である寒天平板上に分散状態に植
菌し、コロニー（大腸菌の増殖による同じ遺伝子をもつ
クローン）を形成させる。

このコロニーの形成された寒天平板をマスタープレート
と呼ぶ。

次いで、マスタープレート上のコロニーの〜・部をレプ
リカブレーティングなどの手法を用いて、新しいフィル
ター上に転写させる。得られたフィルターをレプリカフ
ィルターと呼ぶ。このレプリカフィルターを新しい寒天
平板上におき、適当な大きさのコロニーになるまで培養
して成長させたのち、フィルターを培地から引き剥して
ハイブリダイゼーション処理を行なう。

ハイブリダイゼーションは、まず、フィルター上の大腸
菌を溶菌して露出させたプラスミドＤＮＡを変性（ｄｅ
ｎａｔｕｒａｔｉｏｎ）　して−末鎖のＤＮＡとしたの
ち、これを固定する。　ｆｆ１１に、目的とする遺伝子
のＤＮＡに対して相補的な関係を有するＤＮＡもしくは
ＲＮＡを放射性標識することによりプローブを作成する
。次に、この放射性標識が＋１４された特定のＤＮＡも
しくはＲＮＡとフィルター上の変性ＤＮＡとをハイブリ
ダイズさせる。従って、フィルター上では目的遺伝子を
有するＤＮＡのみが、放射性標識が付与されたＤＮＡも
しくはＲＮＡとハイブリッドを形成し、放射性標識が付
与される。

すなわち目的遺伝子を有する変性ＤＮＡは、加温処理に
よりこれと相補的な放射性標識されたＤＮＡもしくはＲ
ＮＡとハイブリダイズして、フィルター上では二本鎖の
ＤＮＡの形成（ｒｅｎａ　ｔｕ　ｒａ　ｔ　１ｏｎ）も
しくはＤＮＡ−ＲＮＡ結合体の形成が行なわれる。

次いで、ハイブリダイゼーションの行なわれたフィルタ
ーについてオートラジオグラフィー操作を行なうことに
より、目的遺伝子を有するコロニーを同定し、低温で保
存しておいたマスタープレートから採取する。

以りの方法により、組換え遺伝子を利用したハイブリダ
イゼーション法による遺伝子のスクリーニングでは、ク
ローニングされた目的遺伝子を選別することができる。

上記のほかにも、ハイブリダイゼーション法を利用する
遺伝子のスクリーニングとしては、プラーク・ハイブリ
ダイゼーション法を利用するスクリーニングが挙げられ
る。

プラークφハイブリダイゼーション法においては、ベク
ターとしてファージ（細菌に感染し、その菌体を溶かし
て増殖するウィルス）を用い、宿主となる大腸菌が含ま
れているマスタープレート」二に形成されたプラークの
レプリカをフィルター上に形成し、次いで、このフィル
ター上で上記と同様にして放射性標識プローブとのハイ
ブリッド１を形成させる操作が行なわれる。

なお、上記に要約したコロニー争ハイブリダイゼーショ
ン法を利用する遺伝子のスクリーニング方法、およびプ
ラーク・ハイブリダイゼーション法を利用する遺伝子の
スクリーニング方法については次の文献に詳細に記載さ
れている。

ＭＥＴＨＯＤＳ　ＩＮ　ＥＮＺＹＮＯＬＯＧＹ、ＶＯＬ
、　８８．　Ｐ、３７９〜Ｐ。

３１１５　（ｅｄｉｔｅｄ　ｂｙ　Ｒａｙ　Ｗｕ、　Ａ
ＣＡＤＥＭＩＣＰＲＥＳＳ、　ＮＥＷＹＯＲＫ、　１８
７！Ｉｆ） ｒ蛋白質　抜機　酵素ｊ　ＶＯＬ、　２Ｂ、　Ｎｏ、　
４．　Ｐ。

５７５〜Ｐ、５８３　（１９８１） 従来において、上記の遺伝子のスクリーニングに利用さ
れるオートラジオグラフィーは、捕獲された放射性標識
プローブを保持するフィルターと高感度Ｘ線フィルムな
どの放射線フィルムとを一定時間重ね合わせて、該フィ
ルムを感光（あるいは、露光）させることによって行な
われている。

また、オートラジオグラフィーの検出感度を高めるため
に増感紙を用いることも行なわれている。

このようなオートラジオグラフィーについては、たとえ
ば１次に示す文献に記載されている。

生化学実験講座６　トレーサー実験法（上）。

２７１〜２８９頁、「８．　オートラジオグラフィー」
末吉徹、重松昭世（１９７７年、■東京化学同人刊） 上述のように、オートラジオグラフィーは遺伝子のスク
リーニングにおいて、目的遺伝子を同定し、その目的遺
伝子の二次元的な位置情報を得るための重要な手段とな
っている。そして、得られた位置情報を基にして目的遺
伝子の分離、精製が可能となるため、非常に有用な手段
であるということができる。しかしながら、このように
有用なオードラジオグラフィーを上記のハイブリダイゼ
ーション法を利用する遺伝子のスクリーニングに適用す
るにあたっ゛ては、いくつかの問題がある。

その第一は、放射性標識物質を含むフィルター上の放射
性物質を可視化するために、そのフィルターと高感度Ｘ
線フィルムなどの放射線フィルムとを一定時間重ね合わ
せて、該フィルムを感光（露光）させることが行なわれ
ているが、この露光操作が長時間を必要とする点である
。すなわち、従来のスクリーニングにおけるオートラジ
オグツイーの露光操作は通常、数日間かけて実施されて
いる。また露光操作を、増感紙を使用して行なった場合
でも数十時間を要している。これは、フィルター上に固
定されたＤＮＡの量が少ないこと、および放射性標識物
質（放射性標識プローブ）が一般に３２Ｆで部分的に標
識されたＤＮＡもしくはＲＮＡであるため、高い放射性
が付与されていないことによる。

第二には、この露光操作は通常、低温（たとえば、０℃
〜−７０℃）で行なわなければならない点である。その
理由は、室温などの比較的高い温度では、放射線または
蛍光による感光によって形成されたフィルム上゛の銀塩
中の潜像が退行して現像できない像となってしまいやす
く、また、上記のハイブリダイズ処理されたフィルター
から、銀塩に対して有害な成分が移動するなどして化学
カブリを形成しやすいからである。さらに、蛍光増感紙
を用いて増感露光を行う場合には、増感紙からの発光の
輝度が低いため、室温のような比較的高い温度では、潜
像を形成しにくいという銀塩の特性にも依っている。

第三には、化学カブリなどによる画質の低下を防ぐため
に、試料であるフィルターを乾燥した状態で放射線フィ
ルムと重ね合わせて露光させなければならない点である
。通常は、フィルターの乾燥もしくは合成樹脂フィルム
等によるフィルターの包装が行なわれている。

オートラジオグラフィーによって得た画像にこのような
カブリが発生すると、ハイブリダイズしたＤＮＡとの区
別がつけられず、スクリーニングの効果を著しく低下さ
せることになる。

以北の理由により、オートラジオグツイーの操作が煩雑
なものとなっており、このことにより遺伝子のスクリー
ニング操作全体が煩雑になっている。

また、放射線フィルムの感光成分である銀塩は物理的な
刺激にも影響されやすく、露光操作時における操作担当
者の手あるいは機器との接触などに起因する物理的圧力
などによって放射線フィルムは物理的カブリ現象を起す
傾向がある。この点も遺伝子のスクリーニングの精度を
低下させる原因となり、そのような放射線フィルムの物
理的ガブリの発生を回避するためには、その取扱い作業
において高度の熟練と注意とを必要とし、スクリーニン
グ操作をさらに複雑にする結果となる。

また、従来のオートラジオグラフィーでは」二記のよう
に長時間の露光操作が行なわれるため、放射性標識物質
以外にフィルターに混入した不純物による放射能または
自然放射能もまた放射線フィルムの露光に関与し、得ら
れる放射性標識物質の位置情報の精度を低下させるとの
問題がある。そのような妨害を排除して適切な露光条件
を設定するためには、たとえば、対照試料を用いた並行
実験の実施、露光時間の適正化などが図られているが、
並行実験の実施による実験回数の増大、好適な露光時間
の決定を行なうための予備実験の必要性などにより、そ
の操作全体が煩雑になるとの欠点がある。

さらに、目的遺伝子の分取操作は、レプリカフイルター
のオートラジオグラフが可視化されている放射線フィル
ムと、マスタープレートとを重ね合わせて、放射性標識
物質によって感光された部分に対応するクローン（コロ
ニーもしくはプラーク）を操ｆ＋；　ｉＨ当者の１１測
によって同定し、すくい取ることにより行なわれている
。従って、培地上のクローンの形成が充分でなかったり
、ハイブリダイゼーションが不充分であったり、あるい
はレプリカフィルターの作成、フィルターの露光操作等
における諸条件が適切でなかった場合には、遺伝ｆ−の
スクリーニングの精度が低ドし、さらにはスクリーニン
グが不可能となり、スクリーニングの操作回数が増大す
る結果となる。

本発明者は、従来のオートラジオグラフィーによる遺伝
ｒ・のスクリーニング方法において附随する１、記のよ
うな問題点の解決を目的として鋭意研究を行なった結果
８感光材料として放射線フィルムの代りに、岬Ｌ＜性蛍
光体を含有してなる蛍光体層を有する蓄積性蛍光体シー
トを用いることにより、前記の問題点の解決あるいは欠
点の低減が実現することを見出し、本発明に到達した。

すなわち、本発明は、ハイブリダイゼーション法を利用
する遺伝子のスクリーニング方法において、 １）培地」−に形成された遺伝子のクローンの一部をフ
ィルター上に移して固定する工程；２）フィルター上に
固定された該遺伝子と放射性標識が刊年されたプローブ
とをハイブリダイズさせる工程； ３）ハイブリダイズ処理が施された該フィルターと輝尽
性蛍光体を含有する蓄積性蛍光体シートとを一定時間重
ね合わせることにより、該フィルターにの放射性Ｗａ物
質から放出される放射線エネルギーの少なくとも一部を
該蓄積性蛍光体シートに吸収させたのち、該シートを電
磁波により励起して該シートに蓄積されている放射線エ
ネルギーを輝尽光として放出させ、そしてその輝Ｊ＆光
を検出することにより、該フィルター−１−の放射性標
識物質の二次元的な位置情報を得るｉ二程；４）得られ
た位置情報に基づいて、培地−にのクローンを採取する
工程； からなるオートラジオグラフィーによる遺伝子のスクリ
ーニング方法を提供するものである。

なお、本発明においてフィルター上の放射性標識物質の
二次元的な「位置情報」とは、フィルター上における放
射性標識物質もしくはその集合体の位置を中心とする各
種の情報、たとえば、フィルター上に存在する放射性物
質の集合体の存在位置と形状、その位置における放射性
物質の濃度。

分布などからなる情報の一つもしくは任意の組合わせと
して得られる各種の情報を意味する。

本発明において使用する蓄積性蛍光体シートは放射線像
変換パネルとも呼ばれものであり、その例は、たとえば
特開昭５５−１２１４５号公報などに記載されており、
一般的な構成としては既に公知である。

すなわち、蓄積性蛍光体シートは輝尽性蛍光体からなる
ものであり、被写体を透過した放射線エネルギー、ある
いは被検体から発せられた放射線エネルギーを該シート
の輝尽性蛍光体に吸収させ、そののちに該シートを可視
光線および赤外線などの電磁波（励起光）を用いて励起
することにより、該シートの輝尽性蛍光体中に蓄積され
ている放射線エネルギーを蛍光として放出させることが
できるものである。この蛍光を光電的に読み取って電気
信号に変換し、得られた電気信号を写真フィルムなどの
記録材料、ＣＲＴなどの表示装置上に可視画像として再
生するか、あるいは数値化もしくは記号化した位置情報
などとして表わすことができる。

本発明の方法によれば、フィルターに捕獲された放射性
標識物質の二次元的な位置情報を得るためのオートラジ
オグラフィーにおいて、従来のオートラジオグラフィー
で用いられている放射線フィルム、あるいはそれと増感
紙との組合わせの代りに、輝尽性蛍光体を含有してなる
蓄積性蛍光体シートを用いることにより、露光時間の大
幅な短縮化が実現されるのみでなく、露光が環境温度あ
るいはその付近の温度という温度条件で行なわれても、
得られる放射性標識物質の位置情報の精度は低下するこ
とがない。従って、従来においては冷却下で長時間かけ
て実施されていた露光操作が著しく簡便なものどなり、
放射性標識物質の二次元的な位置情報を得るためのオー
トラジオグラフィー操作が簡略化されるものである。

また、オートラジオグラフィーにおける露光時間の大幅
な短縮化が実現することにより、−回のスクリーニング
に要する時間が短縮される。

一般に、目的の遺伝子をスクリーニングする操作は複数
回行なわれている。たとえば、ヒ）ＤＮＡであれば、全
体の遺伝情報は、約１０９ベース（１ベースは、塩基１
個を含むＤＮＡの基本単位）の長さからなっている々（
、一つの遺伝情報（−ジーン）は約ｌＯ３ベースの長さ
であるから、ある特定の遺伝子を選び出すためには少な
くとも１０６個のＤＮＡ断片のスクリーニングを行う必
要がある。プラーク・ハイブリダイゼーション法を用い
た場−合には、−回の操作でフィルター一枚（直径：約
１５ｃｍ）当たり１０’個のスクリーニングが行われる
から、少なくとも１００枚のフスクリーニング操作が短
時間に効率よ〈実施できることは実用上非常に有利なこ
ととなる。

コロニーあるいはプラークが採取されるマスタープレー
トの保存が長時間にわたることは、それが微生物である
ため望ましいことではない。この点からも操作が短時間
のうちに行ないうることは、大きな意味を持つものであ
る。

また、感光材料として蓄積性蛍光体シートを使用した場
合には、蓄積性蛍光体シートに転写記録された放射性標
識物質の二次元的な位置情報を得るために特に画像化す
る必要はなく、その蓄積性蛍光体シートをレーザーなど
の電磁波で走査することにより上記の位置情報を読み出
し、その位置情報を画像、記号および／または数値、あ
るいはそれらの組合わせなどの任意な形態に変えて取り
出すことが可能となる。さらに、上記の位置情報を電気
的手段などを利用して更に処理することにより、所望の
各種の形態で必要な情報を入手することも可能である。

このことは、得られた放射性物質の位置情報に基づいて
目的遺伝子を有するクローンを採取する際−の操作を著
しく容易にし、従ってスクリーニングの精度を高めてそ
の効率を向上させることが可能であることを意味する。

さらに、オートラジオグラフィーの感光材料として上記
の蓄積性蛍光体シートを利用することにより、従来、放
射線フィルムの使用において大きな問題となっていた化
学カブリおよび物理カブリが実質的に発生しなくなる点
も、スクリーニングの精度の向上および作業性において
非常に有利に作用する。また、フィルター中に含まれて
いた不純物の放射能または自然放射能などに起因する精
度の低下は、蓄積性蛍光体シートに蓄積されている位置
情報を電気的に処理することにより容易に低減あるいは
解消することが可能となる。

以下に、本発明のオートラジオグラフィーによる遺伝子
のスクリーニング方法について、コロニー−ハイブリダ
イゼーション法を利用する遺伝子のスクリーニング方法
を例にとり、添付図面の第１図に示した模式図を用いて
具体的に説明する。

第１図は、本発明に従うハイブリダイゼーション法を利
用する遺伝子のスクリーニング方法を模式的に示す図で
あ・る。

まず、目的とする遺伝子からなるＤＮＡ断片を含む複数
のＤＮＡ断片がそれぞれ、プラスミドベクターに連結さ
れた多数の組換えプラスミドを用意する。この組換えプ
ラスミドは、生化学の分野における常法に従って得るこ
とができる。

上記の組換えプラスミドを常法により大腸菌などの菌に
感染させたのち、プラスミドを含む菌のみが成長できる
選択用寒天平板上にニトロセルロースのフィルターをし
き、その上に上記の菌をまいてコロニーを形成させる［
第１図（ａ）；ｌａ：　コロ＝　−、２ａ　：　寒天平
板］。これをマスタープレートと呼ぶ。大腸菌の数は直
径９ｃｍの寒天平板の場合１０２〜１０３個が好ましく
、コロニーは１〜２ｍｍの大きさになるまで増殖させる
。

コロニーの形成された寒天平板から、滅菌ベルベット布
を用いそのコロニーの一部を別の新しいフィルター上に
プリントして移す。得られたフィルター４二のコロニー
の相対位置は、マスタープレート上のコロニーの相対位
置と完全に一致する。

あるいは、寒天平板上に新しいフィルターを静かに置い
て短時間接触させることにより、寒天平板上のコロニー
の一部をフィルター」二に転写してもよい。ただしこの
場合には、得られたフィルター」二のコロニーの相対位
ｉは、マスタープレート」二のコロニーの相対位置と鏡
像関係にある。

この操作をレプリカもしくはレプリカブレーティングと
いい、寒天平板上に点在するコロニーの相対的な位置関
係を変えることなく、各コロニーの一部はフィルターに
吸い取られて、フィルター上に移される［第１図（ｂ）
；ｉｂ：コロニー、２ｂ＝フイルター］。レプリカブレ
ーティングに用いられるフィルターの例としては、ニト
ロセルロースからなるメンブレンフィルター、濾紙など
を挙げることができる。

このレプリカフィルターを作成する際に、あるいはそれ
以前にマスタープレートおよびフィルタ〜の双方に印を
付けて、双方の対応する位置がわかるようにしておく［
第１図、３ａ、３ｂ：製図用インクで付けた目印］。

次に、常法によりフィルター上の菌を溶菌したのち、露
出したプラスミドＤＮＡをアルカリ処理により変性（ｄ
ｅｎａｔｕｒａｔｉｏｎ）　Ｌ、、チー末鎖のＤＮＡと
し、さらに加温処理を施して固定する。

一方、目的とする遺伝子のＤＮＡと同種のＤＮＡもしく
は相補的なＲＮＡを放射性標識することによりプローブ
を調製する。上記プローブは、目的とするＤＮＡと同一
の塩基配列を有するＤＮＡもしくは相補的なＲＮＡの末
端を、３２Ｐ等の放射性同位元素で標識することにより
得られる。あるいは、プローブは目的とするＤＮＡと同
一の塩基配列を有する未標識ＤＮＡの片方の鎖に、エン
ドヌクレアーゼによりニック（切れ目）を入れたのち、
ＤＮＡポリメラ〜ゼＩにより、その片方の鎖のニックさ
れた位置から順に各ヌクレオチドを除去し、同時に放射
性標識されたヌクレオチドを導入することからなるニッ
ク・トランスレーション法によっても得られる。この方
法によれば、比活性（比放射能）の高いプローブを得る
ことができる。

次に、上記の放射性標識プローブとフィルター上の変性
ＤＮＡとを加温処理によりハイブリダイズさせる。すな
わち、放射性標識プローブとフィルターとを含む容器を
加温することよりＤＮＡを一本鎖に変性したのち、冷却
して二本鎖ＤＮＡの形成（ｒｅｎａｔｕｒａｔｉｏｎ）
もしくはＤＮＡ−ＲＮＡ結合体の形成を行なう。この時
、フィルター上の組換えＤＮＡは固定されているから、
プローブＤＮＡと同種の塩基配列を有する組換えＤＮＡ
もしくはプローブＲＮＡと相補的な組換えＤＮＡのみが
、ハイブリダイズして放射性標識プローブを捕獲する。

従って、フィルター上では目的遺伝子を有する組換えＤ
ＮＡのみが、放射性標識が付与されたＤＮＡもしくはＲ
ＮＡとハイブリッドを形成し、放射性標識が付与される
。

またこの際に、放射性物質を含有するインクなどを用い
てフィルターに印を付けることにより、フィルターと得
られるオートラジオグラフとの対応する位置がわかるよ
うにしておくのが望ましい［第１図（ｃ）；ｌｃ：ハイ
ブリダイズしたコロニー、２Ｃ：フィルター、３Ｃ：製
図用インクの目印上に放射線インクで付けた目印１゜た
だし、これらは視覚的には区別できない。

なお、ハイブリダイゼーションによりＤＮＡ・ＤＮＡ結
合体（ハイブリッド）を形成させる場合には、プローブ
の一本鎖ＤＮＡがフィルター上に非特異的に吸着するこ
とにより、オートラジオグラフィーにおいてノイズが発
生することを防止するために、ハイブリダイゼーション
の前処理として種々のポリマー溶液を用いてフィルター
をマスキングするのが望ましい。

次いで、ハイブリッド形成により放射性標識物質が捕獲
されているフィルターのオルトラジオグラフ測定を行な
うことにより、目的遺伝子を有するコロニーを同定する
。

本発明の特徴的な要件である二次元的に分布した目的遺
伝ｆ−の位置情報を得るためのオートラジオグラフィー
は、まず、上記フィルターと蓄積性蛍光体シートとを一
定時間重ね合わせて露光操作を行なうことにより、フィ
ルター上の放射性標識物質から放出される放射線の少な
くとも一部を該シートに吸収させる。

露光操作において、上記のフィルターと蓄積性蛍光体シ
ートとを重ね合わせた状態は、通常は蓄積性蛍光体シー
トと密着させることにより実現するが、必ずしもフィル
ターと蓄積性蛍光体シートとを密着させる必要はなく、
それらが近接した状態で配置されていてもよい。また、
フィルターは必ずしも乾燥状態とする必要はなく、湿っ
ていてもよいし、あるいは所望によりプローブからの放
射線を妨げない程度の厚みのポリエチレンシート等で包
まれていてもよい。

また、いわゆる露光時間は、フィルターに含まれる放射
性標識物質の放射線強度１、該物質の量、蓄積性蛍光体
シートの感度、およびフィルターと蓄積性蛍光体シート
との位置関係などにより変動するが、露光操作は一定時
間、たとえば数秒程度以上は必要とする。ただし、本発
明に従って感光材料として蓄積性・蛍光体シートを用い
た場合には、従来の放射線フィルムを使用する場合に必
要な露光時間に比較して、その露光時間は大幅に短縮さ
れる。また、露光によりフィルターから蓄積性蛍光体シ
ートに転写記録されたフィルター中の放射性標識物質の
位置情報を読み出す操作において、該シートに蓄積され
ているエネルギーの強さ、分布、所望とする情報などに
応じて各種の電気的処理を施すことにより、たとえば得
られる電気信号の増幅率を任意の値に設定できるなど、
得られる位置情報を好適に処理することが可能であるた
め、露光操作時における露光時間の厳密な制御は特に必
要とはしない。

また、露光操作を実施する温度は特に制限はないが、本
発明における蓄積性蛍光体シートを利用したオートラジ
オグラフィーは、特に１０〜３５°Ｃなどの環境温度に
て実施することが可能である。ただし、従来のオートラ
ジオグラフィーにおいて利用されている低温（たとえば
、５℃付近、あるいはそれ以下の温度）において露光操
作を行なってもよい。

上記オートラジオグラフィーにおいて好適に使用される
蓄積性蛍光体シートは、一般に基本構造として、支持体
と、この支持体上に設けられた輝尽性蛍光体を分散状態
で含有支持する結合剤からなる蛍光体層とから構成され
る。ただし、蛍光体層が自己支持性である場合には、必
ずしも支持体を設ける必要はない。

上記の構成を有する蓄積性蛍光体シートは、たとえば、
次に述べるような方法により製造することができる。

まず、輝尽性蛍光体粒子と結合剤とを適当な溶剤（たと
えば、低級アルコール、塩素原子含有炭化水素、ケトン
、エステル、エーテル）に加え、これを充分に混合して
、結合剤溶液中に輝尽性蛍光体が均一に分散した塗布液
を調製する。

結合剤の例としては、ゼラチン等の蛋白質、ポリ酢酸ビ
ニル、ニトロセルロース、ポリウレタン、ポリビニルア
ルコール、線状ポリエステルなどような合成高分子物質
などにより代表される結合剤を挙げることができる。

塗布液における結合剤と輝尽性蛍光体との混合比は、通
常ｌ：８乃至１：４０（重量比）の範囲から選ばれる。

次に、この塗布液を支持体の表面に均一に塗布すること
により塗布液の塗膜を形成する。この塗膜を徐々に加熱
することにより乾燥して、支°持体上への蛍光体層の形
成を完了する。蛍光体層の層厚は、一般に５０乃至５．
００１Ｌｍである。

支持体としては、従来の放射線写真法における増感紙（
または増感スクリーン）の支持体として用いられている
各種の材料から任意に選ぶことができる。そのような材
料の例としては、セルロースアセテート、ポリエチレン
テレフタレートなどのプラスチック物質のフィルム、ア
ルミニウム箔などの金属シート、通常の紙、バライタ紙
、レジンコート紙などを挙げることができる。

なお、支持体の蛍光体層が設けられる側の表面には、接
着性付与層、光反射層、光吸収層などが設けられていて
もよい。

さらに、蛍光体層の支持体に接する側とは反対側の表面
に、蛍光体層を物理的および化学的に保護するための透
明な保護膜が設けられていて、もよい。透明保護膜に用
いられる材料の例としては、酢酸セルロース、ポリメチ
ルメタクリレート、ポリエチレンテレフタレート、ポリ
エチレンを挙げることができる。透明保護膜の膜厚は、
通常約３乃至２０ｐ、ｍである。

また、蓄積性蛍光体シートの表面は必要に応じて、親水
化処理などの表面処理が施されていてもよい。

本発明において利用される蓄積性蛍光体シートに用いら
れる輝尽性蛍光体は、先に述べたように放射線を照射し
た後、励起光を照謝すると輝尽発光を示す蛍光体である
が、実用的な面からは４００〜８５０ｎｍの波長範囲の
励起光によって３００〜５００ｎｍの波長範囲の輝尽発
光を示す蛍光体であることが望ましい。そのような輝尽
性蛍光体の例としては、 米国特許第３．８５９．５２７号明細書に記載されてい
るＳｒＳ：Ｃｅ、Ｓｍ、ＳｒＳ：Ｅｕ。

Ｓｍ、Ｔｈ０２：Ｅｒ、およびＬａ２Ｏ２Ｓ：Ｅｕ、Ｓ
ｍなどの組成式で表わされる蛍光体、特開昭５５−１２
１４２号公報に記載されているＺｎＳ：Ｃｕ、Ｐｂ、Ｂ
ａ０ｅｘＡ１２０３：Ｅｕ［ただし、０．８≦Ｘ≦ｌＯ
］、および、Ｍ２′）Ｏｓ　ｘＳ　ｉ０２　：　Ａ　［
ただし、Ｍ２＋はＭｇ、Ｃａ、Ｓｒ、Ｚｎ、Ｃｄ、また
はＢａであり、ＡはＣｅ、Ｔｂ、Ｅｕ、Ｔｍ、Ｐｂ、Ｔ
ｌ、Ｂｉ、またはＭｎであり、Ｘは、０．５≦Ｘ≦２．
５である］などの組成式で表わされる蛍光体、特開昭５
５−１２１４３号公報に記載されている　（Ｂ　ａｓ−
ｘ−ｙ　、Ｍｇｘ　ｒ　Ｃａｙ）　ＦＸ　：ａＨ；ｕ２
＋［ただし、ＸはＣ１およびＢｒのうちの少なくとも一
つであり、Ｘおよびｙは、０くＸ＋ｙ≦０．６、かつｘ
ｙ＃０であり、ａは、１０４≦ａ≦５Ｘ　１０４である
］の組成式で表わされる蛍光体１ 、特開昭５５−１２１４４号公報に記載されているＬｎ
ＯＸ：ｘＡ［ただし、ＬｎはＬａ、Ｙ、Ｇｄ、およびＬ
ｕのう゛ちの少なくとも一つ、Ｘは（１１およびＢｒの
うちの少なくとも一つ、ＡはＣｅおよびＴｂのうちの少
なくとも一つ、そして、Ｘは、Ｏ＜ｘ＜０．１である］
の組成式で表わされる蛍光体、 特開昭５５−１２１４５号公報に記載されている（Ｂａ
ｌ−Ｘ　、　Ｍ　”　Ｘ）　ＦＸ　：　３Ｆ　Ａ　［た
だし、Ｍ璽はＭｇ、Ｃａ、Ｓ　ｒ、Ｚｎ、およびＣｄ（
７）うちの少なくとも一つ、ＸはＣ１，Ｂｒ、およびＩ
のうちの少なくとも一つ、ＡはＥｕ、Ｔｂ、Ｃｅ、Ｔｍ
、Ｄｙ、Ｐｒ、Ｈｏ、Ｎｄ、Ｙｂ、およびＥｒのうちの
少なく′とも一つ、そしてＸは、０≦Ｘ≦０．６、ｙは
、０≦ｙ≦０．２である］の組成式で表わされる蛍光体
、 特開昭５５−１６００７８号公報に記載されているＭ”
ＦＸ＠ｘＡ：ｙＬｎ　［ただし、ＭｌはＢａ、Ｃａ、Ｓ
　ｒ、Ｍｇ、Ｚｎ、およびＣｄ（７）うちの少なくとも
一種、ＡはＢｅ０１Ｍｇ０．ＣａＯ１ＳｒＯ，Ｂａｄ、
ＺｎＯ，Ａ見、０３、Ｙ２Ｏ３、Ｌａ２Ｏ３、Ｉｎ２Ｏ
３，５ｉ０２、ＴｕＯ□、ＺｒＯ□、Ｇｅｍ。、Ｓ　ｎ
ｏｚ、Ｎｂ２Ｏ５、Ｔａ２０５、およびＴｈ０２（７）
うちの少なくとも一種、ＬｎはＥｕ、Ｔｂ、Ｃｅ、Ｔｍ
。

Ｄｙ、　Ｐｒ、　Ｈｏ、　Ｎｄ、　Ｙｂ、　Ｅｒ、　Ｓ
ｍ、およびＧｄのうちの少なくとも一種、ＸはＣ１、Ｂ
ｒ、およびＩのうちの少なくとも一種であり、Ｘおよび
ｙはそれぞれ５Ｘ１０４≦Ｘ≦０．５、およびＯくｙ≦
０．２である］の組成式で表わされる蛍光体、 特開昭５６−１１６７７７号公報に記載されている（Ｂ
ａｔ−ｘ　、Ｍ”Ｘ）Ｆ２　＊　ａＢａＸ２：ｙＥｕ、
ｚＡ［ただし、Ｍ！はベリリウム、マグネシウム、カル
シウム、ストロンチウム、亜鉛、およびカドミウムのう
ちの少なくとも一種、Ｘは塩素、臭素、および沃素のう
ちの少なくとも一種、Ａはジルコニウムおよびスカンジ
ウムのうちの少なくとも一種であり、ａ、ｘ、ｙ、およ
び２はそれぞれ０．５≦ａ≦１．２５．０≦Ｘ≦１゜１
０−ｇ≦ｙ≦２ＸＩＯ−”、およびＯ＜ｚ≦ｌθ′４で
ある］の組成式で表わされる蛍光体、特開昭５７−２３
６７３号公報に記載されている　（Ｂａｔ−ｘ　、Ｍ”
Ｘ）　Ｆ２　＊　ａＢａＸ２　：ｙＥｕ、ｚＢ［ただし
、ＭＭはベリリウム、マグネシウム、カルシウム、スト
ロンチウム、亜鉛、およびカドミウムのうちの少なくと
も一種、又は塩素、臭素、および沃素のうちの少なくと
も一種であり、ａ、ｘ、ｙ、および２はそれぞれ０．５
≦ａ≦１．２５．０≦Ｘ≦１．１Ｏ−１ｌ≦ｙ≦２×ｉ
ｏ−’、および０＜ｚ≦２Ｘ１０”である］の組成式で
表わされる蛍光体、 特開昭５７−２３６７５号公報に記載されている　（Ｂ
　ａｌ−Ｘ　、Ｍ”　Ｘ）　Ｆ　２　”　ａＢ　ａＸ２
　：ｙＥｕ、ｚＡ［ただし、Ｍｌｌはベリリウム、マグ
ネシウム、カルシウム、ストロンチウム、亜鉛、および
カドミウムのうちの少なくとも一種、Ｘは塩素、臭素、
および沃素のうちの少なくとも一種、Ａは砒素および硅
素のうちの少なくとも一種であり、ａ、ｘ、ｙ、および
２はそれぞれ０．５≦ａ≦１．２５．０≦Ｘ≦１、ｔｏ
−”≦ｙ≦２×ｉｏ−’、およびＯ＜ｚ≦５　Ｘ　Ｉ　
Ｏ−’である］の組成式で表わされる蛍光体、 本出願人による特願昭５６−１６７４９８号明細書に記
載されているＭ菫ＯＸ：ｘＣｅ［ただし、Ｍ冨はＰｒ、
Ｎｄ、Ｐｍ、Ｓｍ、Ｅｕ、Ｔｂ、Ｄｙ、Ｈｏ、Ｅｒ、Ｔ
ｍ、ｙｂ、およびＢｉからなる群より選ばれる少なくと
も一種の三価金属であり、ＸはＣ１およびＢｒのうちの
いずれか一方あるいはその両方であり、Ｘは０＜ｘ＜０
．１である］の組成式で表わさ”れる蛍光体、本出願人
による特願昭５７−８９８７５号明細書に記載されてい
るＢＦＬトｘＭｘｙｚＬｘ／２ＦＸ　：ｙＥｕ２＋［た
だし、Ｍは、Ｌｉ、Ｎａ、に、Ｒｈ、およびＣｓからな
る群より選ばれる少なくとも一種のアルカリ金属を表わ
し；Ｌは、Ｓｃ、Ｙ。

Ｌａ、Ｃｅ、Ｐｒ、Ｎｄ、Ｐｍ、Ｓｍ、Ｇｄ、Ｔｂ、Ｄ
ｙ、Ｈｏ、Ｅｒ、Ｔｍ、Ｙｂ、Ｌｕ、ＡＭ、Ｇａ、Ｉｎ
、およびＴｌからなる群より選ばれる少なくとも一種の
三価金属を表わし；Ｘは、ＣＭ、Ｂｒ、およびＩからな
る群より選ばれる少なくとも一種のハロゲンを表わし：
そして、Ｘはｔｏ”≦Ｘ≦０．５、ｙはｏ＜ｙ≦０．１
である］の組成式で表わされる蛍光体、 本出願人による特願昭５７−１３７３７４号明細書に記
載されているＢａＦＸ＠ｘＡ：　ｙＥｕ２＋［ただし、
Ｘは、Ｃ１、Ｂｒ、およびＩからなる群より選ばれる少
なくとも一種のハロゲンであり；Ａは、テトラフルオロ
ホウ酸化合物の焼成物であり一そして、ＸはＩＯ”≦Ｘ
≦０．１．７は０くｙ≦０゛、ｌである］の組成式で表
わされる蛍光体、 本出願人による特願昭５７−１５８０４８号明細書に記
載されているＢａＦＸｅｘＡ：　ｙＥｕ２＋［ただし、
Ｘは、Ｃ１、Ｂｒ、および■からなる群より選ばれる少
なくとも一種のハロゲンであり；Ａは、ヘキサフルオロ
ケイ酸、ヘキサフルオロチタン酸およびヘキサフルオロ
ジルコニウム酸の一価もしくは二価金属の塩からなるヘ
キサフルオロ化合物群より選ばれる少なくとも一種の化
合物の焼成物であり；そして、Ｘは１０”４≦Ｘ≦０゜
１、ｙはｏ＜ｙ≦０．１である］の組成式で表わされる
蛍光体、 本出願人による特願昭５７−１６６３２０号明細書に記
載されているＢａＦＸ＠ｘＮａＸ’：ａＥｕ２＋［ただ
し、ＸおよびＸｏは、それぞれＣ，１、Ｂｒ、およびＩ
のうちの沙なくとも一種であり、Ｘおよびａはそれぞれ
０＜ｘ≦２、およびＯｖａ≦０．２である］の組成式で
表わされる蛍光体、 本出願人による特願昭５７−１６６６９６号明細書に記
載されているＭ　”　Ｆ　Ｘ　番ｘ　Ｎ　ａ　ｘ’　：
ｙ　Ｅｕ　２＋　：　Ｚ　Ａ　［ただし、ＭＨは、Ｂａ
、Ｓｒ、およびＣａからなる群より選ばれる少なくとも
一種のアルカリ土類金属であり；ＸおよびＸｏは、それ
ぞれＣ見、Ｂｒ、および■からなる群より選ばれる少な
くとも一種のハロゲンであり；Ａは、Ｖ、Ｃｒ、Ｍｎ、
Ｆｅ、Ｃｏ、およびＮｉより選ばれる少なくとも一種の
遷移金属であり；そして、ＸはＯ＜ｘ≦２、ｙはｏ＜ｙ
≦０．２、およびＺはＯ＜ｚ≦ｌＯ′（である］の組組
成式で表わされる蛍光体、 本出願人による特願昭５７−１８４４５５号明細占に記
載されているＭ”　ＦＸ＠ａＭ”Ｘ’拳ｂＭ　’　”Ｘ
”　２＊　ｃＭ”Ｘ”３ｅ　ｘＡ　：　ｙＥ　ｕ２＋［
ただし、Ｍ”はＢａ、Ｓｒ、およびＣａからなる群より
選ばれる少なくとも一種のアルカリ土類金属であり；Ｍ
ｘはＬｉ、Ｎａ、に、Ｒｂ、およびＣ５からなる群より
選ばれる少なくとも一種のアルカリ金属であり；Ｍ′１
はＢｅおよびＭｇからなる群より選ばれる少なくとも一
種の二価金属であり；Ｍ”はＡＭ、Ｇａ、Ｉｎ、および
Ｔｕからなる群より選ばれる少なくとも一種の三価金属
であり；Ａは金属酸化物であり；ＸはＣ１、Ｂｒ、およ
びＩからなる群より選ばれる少なくとも一種のハロゲン
であり；Ｘｏ、Ｘ”、およびＸ”は、Ｆ、Ｃ１，Ｂｒ、
および■からなる群より選ばれる少なくとも一種のハロ
ゲンであり；そして、ａはＯ≦ａ≦２、ｂはＯ≦ｂ≦１
０−４．０はＯ≦Ｃ≦ＩＯ−”、かつａ＋ｂ＋ｃ≧１０
’であり；ＸはＯ＜ｘ≦０．５、ｙはｏ＜ｙ≦０．２で
ある］の組成式で表わされる蛍光体、 などを挙げることができる。

ただし、本発明の方法に用いられる蓄積性蛍光体シート
に含まれる輝尽性蛍光体は上述の蛍光体に限られるもの
ではなく、放射線の照射を受けたのち励起光の照射を受
けた場合に輝尽発光を示す蛍光体であればいかなるもの
であってもよい。

本発明のオートラジオグラフィーに利用される蓄積性蛍
光体シートの詳細については、たとえば本出願人による
特願昭５７−１９３４１８号明細書に記載されている。

次に、蓄積性蛍光体シートに転写蓄積されたフィルター
上の放射性標識物質の位置情報の読み出しが行なわれる
。この読み出し方法について、添付図面の第２図に示し
た続出装置（あるいは読取装置）の例を参照しながら略
述する。

第２図は、蓄積性蛍光体シート１に蓄積記録されている
放射性標識物質の二次元的な位置情報を仮に読み出すた
めの先読み用読出部２と、放射性標識物質の位置情報を
出力するためにシートｌに蓄積記録されている放射線画
像を読み出す機能を有する本読み用読出部３から構成さ
れる装置の例の概略図を示している。

先読み用読出部２においては次のような先読み操作が行
なわれる。

レーザー光源４から発生したレーザー光５はフィルター
６を通過することにより，このレーザー光５による励起
に応じて蓄積性蛍光体シートｌから発生する輝尽発光の
波長領域に該当する波長領域の部゜分がカットされる。

次いでレーザー光は、ガルバノミラ−等の光偏向器７に
より偏向処理され、平面反射鏡８により反射されたのち
シートｌ」二に一次元的に偏向して入射する。ここで用
いるレーザー光源４は、そのレーザー光５の波長領域が
、シートｌから発する輝尽発光の主要波長領域と重複し
ないように選択される。

蓄積性蛍光体シート１は、上記の偏向レーザー光の照射
下において、矢印９の方向に移送される。従って、シー
１・１の全面にわたって偏向レーザー光が照射されるよ
うになる。なお、レーザー光源４の出力、レーザー光５
のビーム径、レーザー光５の走査速度、シート１の移送
速度については、先読み操作のレーザー光５のエネルギ
ーが木読み操作に用いられるエネルギーよりも小さくな
るように調整される。

蓄積性蛍光体シートｌは、上記のようなレーザー光の照
射を受けると、蓄積記録されている放射線エネルギーに
比例する光量の輝尽発光を示し、この光は先読み用導光
性シートｌＯに入射する。

この導光性シー１−　１　０はその入射面が直線状で、
蓄積性蛍光体シート１上の走査線に対向するように近接
して配置されており，その射出面は円環を形成し、フォ
トマルなどの光検出器１１の受光面に連絡している。こ
の導光性シート１０は、たとえばアクリル系合成樹脂な
どの透明な熱可塑性樹脂シートを加工してつくられたも
ので、入射面より入射した光がその内部において全反射
しながら射出面へ一伝達されるように構成されている。

蓄積性蛍光体シートｌからの輝尽発光はこの導光性シー
ト１０内を導かれて射出面に到達し、その射出面から射
出されて光検出器ｌｌに受光される。

光検出器１１の受光面には、輝尽発光の波長領域の光の
みを透過し、励起光（レーザー光）の波長領域の光をカ
ットするフィルターが貼着され、輝尽発光のみを検出し
うるようにされている。光検出器１１により検出された
輝尽発光は電気信号に変換され、さらに増幅器１２によ
り増幅され出力される。増幅器１２から出力された蓄積
記録情報は、本読み用読出部３の制御回路１３に入力さ
れる。制御回路１３は、得られた蓄積記録情報に応じて
、濃度およびコントラストが最も均一でかつ観察読影性
能の優れた画像が得られるように、増幅率設定値ａ、収
録スケールファクターｂ、および、再生画像処理条件設
定値Ｃを出力する。

以」−のようにして先読み操作が終了した蓄積性蛍光体
シー）１は、本読み用続出部３へ移送される。本読み用
続出部３においては次のような本読み操作が行なわれる
。

本読み用レーザー光源１４から発せられたレーザー光１
５は、前述のフィルター６と同様な機能を有するフィル
ター１６を通過したのちビーム・エクスパングー１７に
よりビーム径の大きさが厳密に調整される。次いでレー
ザー光は、ガルバノミラ−等の光偏向器１８により偏向
処理され、平面反射鏡１９により反射されたのち蓄積性
蛍光体シート１上に一次元的に偏向して入射する。なお
、光偏向器１８と平面反射鏡１９との間にはｆθレンズ
２０等が配置され、シートｌの上を偏向レーザー光が走
査した場合に、常に均一なビーム速度を維持するように
されている。

蓄積性蛍光体シートｌは、上記の偏向レーザー光の照射
下において、矢印２１の方向に移送される。従って、先
読み操作におけると同様にシートｌの全面にわたって偏
向レーザニ光が照射されるようになる。

蓄積性蛍光体シートｌは、上記のようにしてレーザー光
の照射を受けると、先読み操作におけると同様に、蓄積
記録されている放射線エネルギーに比例する光量の輝尽
発光を発し、この光は本読み用導光性シート２２に入射
する。この本読み用導光性シート２２は先読み用導光性
シー）１０と同様の材質、構造を有しており、本読み用
導光性シート２２の内部を全反射を繰返しつつ導かれた
輝尽発光はその射出面から射出されて、光検出器２３に
受光される。なお、光検出器２３の受光面には輝尽発光
の波長領域のみを選択的に透過するフィルターが貼着さ
れ、光検出器２３が輝尽発光のみを検出するようにされ
ている。

光検出器２３により検出された輝尽発光は電気信号に変
換され、前記の増幅率設定値ａに従って感度設定された
増幅器２４において適正レベルの電気信号に増幅された
のち、Ａ／Ｄ変換器２５に入力される。Ａ／Ｄ変換器２
５は、収録スケールファクター設定値すに従い信号変動
幅に適したスケールファクターでデジタル信号に変換さ
れ、信号処理回路２６に入力される。信号処理回路２６
では、再生画像処理条件設定値Ｃに基づいて、濃度およ
びコントラストが適正で観察読影適正の優れた可視画像
が得られるように信号処理が行なわれ、次いで必要によ
り磁気テープなどの保存手段を介して、記録装置（図示
なし）へ電送される。

記録装置としては、たとえば、感光材料上をレーザー光
等で走査して光学的に記録するもの、ＣＲＴ等に電子的
に表示するもの、ＣＲＴ等に表示されたＸ線画像をビデ
オ・プリンター等に記録するもの、熱線を用いて感熱記
録材料上に記録するものなど種々の原理に基づいた記録
装置を用いることができる。

ただし、記録装置は上記のように可視画像化するものに
限られるものではなく、前述したように放射性標識物質
の二次元的な位置情報を、たとえば数値化もしくは記号
化するなどして記録することもできる。

なお、本発明における蓄積性蛍光体シートに転写記録さ
れたフィルター上の放射性標識物質の位置情報を読み出
すための方法について、上記においては先読み操作と本
読み操作とからなる読出し操作を説明したが、本発明に
おいて利用することができる読出し操作は、上記の例に
限られるものではない。たとえば、フィルター上の放射
性物質の放射線強度および、そのフィルターについての
蓄積性蛍光体シートの露光時間が予めわかっていれば、
上記の例において先読み操作を省略することもできる。

また、本発明における蓄積性蛍光体シートに転写記録さ
れた放射性標識物質の位置情報を読み出すための方法は
、上記に例示した方法に限られるものではない。

このようにして得られた放射性標識物質の二次元的な位
置情報から、フィルター上の目的遺伝子を同定すること
ができる。

たとえば、フィルターのオートラジオグラフを放射線フ
ィルムなどを用いて可視画像として得た場合には、目的
遺伝子を有するコロニーに相当する位置のみが感光され
て、その位置が黒点として示される。従って、この放射
線フィルムとフィルターとを予め付けておいた印を合わ
せて重ねることにより、フィルター上の目的遺伝子を同
定することができる［第１図（ｄ）；ｌｄ：黒点、２ｄ
：放射線フィルム、３ｄ：放射線インクにより黒化した
目印］。

そして、可視化されたオートラジオグラフを有する放射
線フィルムの上にマスタープレートを印を合わせて置く
ことにより、放射線フィルム上の黒点と一致するマスタ
ープレート上のコロニーを目視により同定し、これによ
り目的遺伝子を有するコロニーを検出し、採取する。た
だし、放射線フィルム上に可視化されたオートラジオグ
ラフがニトロセルロースフィルターと同一の大キサであ
る場合には、ハイブリダイゼーション処理によりフィル
ターが収縮しているために、得られたオートラジオグラ
フは、マスタープレートの大きさよりも若干小さくなっ
ていることに注意しなければならない。

本発明において、オートラジオグラフィーを利用してフ
ィルター上に存在する目的遺伝子の二次元的な位置情報
を得ることにより、そのコロニーを同定する方法は、上
記のような放射線フィルム等に可視画像化されたオート
ラジオグラフとフィルターおよび／またはマスタープレ
ートとを重ね合わせて視覚的に同定する方法に限られる
ものではなく、たとえば、その位置情報を数値化もしく
は記号化することにより、得られた数値・記号等のデジ
タル値に相当する位置に存在するコロニーを同定するこ
とも可能である。

遺伝子のスクリーニングは、たとえばゲノムＤＮＡから
一ジーンに相当するＤＮＡ断片を選択する場合などには
、通常、スクリーニング操作を複数回繰り返し行なうこ
とによって達成されているが、本発明のスクリーニング
方法においても、上記のスクリーニング操作を繰り返し
行なうことができる。

、に記においては、コロニー・ハイブリダイゼーション
法を利用する遺伝子のスクリーニング方法について説明
したが、遺伝子のスクリーニング方法に利用されるハイ
ブリダイゼーション法はコロニーＯハイブリダイゼーシ
ョン法に限られるものではなく、たとえば、プラークΦ
ハイブリダイゼーション法を利用することもできる。

この方法は、目的とする遺伝子のＤＮＡ断片を含む複数
のＤＮＡ断片のＤＮＡ組換えを行なう際に、ベクターと
してファージ（細菌に感染し菌体を溶かして増殖するウ
ィルス）を用いるものであり、このファージが有するＤ
ＮＡの一部に上記ＤＮＡ断片を組み込んで組換えファー
ジを形成し、得られた組換えファージを宿主となる大腸
菌を含む寒天平板、たとえば寒天培地の上部に大腸菌の
層（ｌａｗｎ）を有するプレート上に植菌することによ
り、組換えファージは宿主大腸菌に感染して増殖して寒
天平板上にはプラークが形成される。

本発明の遺伝子のスクリーニング方法は、プラークの形
成された寒天平板をマスタープレートとし、ニトロセル
ロースフィルター等のフィルターにこのプレートをレプ
リカし、上述と同様の方法により目的ＤＮＡと放射性標
識プローブとハイブリダイズさせたのち、そのオートラ
ジオグラフィー測定を行ない、得られた目的遺伝子の二
次元的な位置情報に基づいてフィルター上の目的遺伝子
を同定し、そしてマスタープレートから目的遺伝ｒを有
するプラークを検出し、採取することによって行なわれ
る。

プラーク・ハイブリダイゼーション法は、−回りスクリ
ーニング操作（直径が約１５ｃｍのプレートを使用）で
約１０’個の組換えファージをスクリーニングすること
ができ、コロニー・ハイブリダイゼーション法よりも効
率が良い。従って、簡単にかつ迅速に遺伝子のスクリー
ニングを行なうことができるものである。また、組換え
遺伝子を形成する際に１ｎ　ｖｉｔｒｏパッケージング
法を用いることにより高能率で組換えファージを得るこ
とができる、ファージの安定性などの点から多数のクロ
ーンの取り扱いに適しているなど、数多くの利点を有す
るものである。

凍に本発明の実施態様を記述する。なお、以下の実施例
において使用した蓄積性蛍光体シートは下記の方法によ
り製造されたものである。

輝尽性の二価のユーロピウム賦活弗化臭化バリウム蛍光
体（ＢａＦＢｒ：Ｅｕ”）の粒子と線状ポリエステル樹
脂との混合物にメチルエチルケトンを添加し、さらに硝
化度１１．５％のニトロセルロースを添加して蛍光体粒
子を分散状態で含有する分散液を調製する。次に、この
分散液に燐酸トリクレジル、ｎ−ブタノール、そしてメ
チルエチルケトンを添加したのち、プロペラミキサーを
用いて充分に攪拌混合して、蛍光体粒子が均一に分散し
、結合剤と蛍光体との混合比が１：２５（重量比）かつ
粘度が２５〜３５ＰＳ　（２５℃）の塗布液を調製する
。

次に、ガラス板上に水平に置いたカーボンブラック練り
込みポリエチレンテレフタレートシート（支持体、厚み
：２５０ＩＬｍ）の上に塗布液をドクターブレードを用
いて均一に塗布する。そして塗４１後に、塗膜が形成さ
れた支持体を乾燥器内に入れ、この乾燥器内部の温度を
２５℃からｌｏ。

℃に徐々に上昇させて、塗膜の乾燥を行なった。

このようにして、支持体上に層厚が３００ＪＬｍの蛍光
体層を形成する。

そして、この蛍光体層の上に、透明なポリエチレンテレ
フタレートフィルム（ｆｆミニ　ｌ　２　ＪＬｍ）の片
面にポリエステル系接着剤を付与したのち、接着剤層側
を下に向けて置いて接着することにより、保護膜を形成
し、支持体、蛍光体層および保１１舊膜から構成された
蓄積性蛍光体シートを製造する。

［実施例１］ （１）コロニーの形成およびレプリカフィルターの作成 二枚のニトロセルロースフィルター（直径：’９ｃ　ｍ
　；　ＩＩＡＷＩ”１０、ミリポア社１ｇ）を重ね、製
図用インクの付いた注射針で突き刺して三箇所に目印を
伺けた。このうちの一枚をシャーレ中のＬ−寒天培地（
１％Ｂａｃｔｏ−ｔｒｙｐｔｏｎｅ、　０　、５％ｙｅ
ａｓＬｅｘｔｒａｃｔおよび０．５％Ｎ　ａ（、Ｑ、ｐ
Ｈ７，０〜７゜１）の」二に敷き、その上にＰＢＲ３２
２保持菌と非保持菌とを１：１００の割合で混ぜた大腸
菌ＨＢｌｏｔ株を、約５×１０３（ｌｌ／プレートの割
合でまいたのち、３７℃の温度で約１０時間保温して培
養し、直径が約１ｍｍ程度のコロニーを形成させた（こ
れをマスタープレー１・と呼ぶ）。

マスタープレート上のコロニーの一部を、滅菌ベルベッ
ト布を用、いてもう一枚のニトロセルロースフィルター
の上に、製図用インクの目印が対応するようにして移し
た（得られたフィルターをレプリカフィルターと呼ぶ）
。このレプリカフィルターを新しいし一寒天培地の上に
おいて、３７℃の温度で約５時間保温して培養し、直径
が約１ｍｍ程度にまでコロニーを成長させた。一方、上
記マスタープレートは４℃の温度で保存した。

（２）ハイブリダイゼーション処理 レプリカフィルターを培地から静かにひきはがした後、
０．５Ｎの水酸化ナトリウム水溶液で処理することによ
りコロニーを溶菌し、露出した組換えＤＮＡを一本鎖Ｄ
ＮＡに変性したのち、０゜５Ｍのトリス・塩酸緩衝液、
ｐＨ８で中和した。

０．３Ｍの塩化ナトリウム水溶液で洗浄したのち、真空
中８０℃の温度で２時間処理して、大腸菌中の組換えＤ
ＮＡをフィルター上に固定した。このフィルターを６８
°Ｃの温度に保った５倍ｇ１度のＤｅｎｈａｒｄｔ溶液
（ｌ　Ｘ　Ｄｅｎｈａｒｄｔ溶液：０．０２％ウシ血清
アルブミン、０．０２％ポリビニルピロリドンおよび０
．０２％フィコールを含む液）中に３時間浸漬した。

次に、ニック・トランスレーション法によって放射性標
識されたｐＢＲ３２２プローブ（比活性：　ＩＸ　Ｉ　
Ｏ６ｃ　ｐｍ／μｇ）を、Ｄｅｎｈａｒｄｔ溶液と、０
．７５Ｍの塩化ナトリウム、０．１５Ｍのトリス・塩酸
緩衝液、ｐＨ８，５ｍＭのＥＤＴＡおよび０１１％のＳ
ＤＳとを含む溶液に溶解して、ハイブリグイゼーション
液を調製した。この溶液中に上記フィルターを移して、
６８℃の温度で１６時間保温することにより、放射性標
識プローブをハイブリダイズさせた。プローブの濃度は
放射線強度で約Ｉ　Ｘ　１０５ｃ　ｐｍ／フィルターと
なるように調整した。

次いで、このフィルターを６８℃の温度に保った０、３
Ｍの塩化ナトリウム、６０ｍＭのトリス・塩酸緩衝液、
ｐＨ８，２ｍＭのＥＤＴＡおよび０．５％のＳＤＳを含
む溶液中に３時間浸漬する操作を三回繰り返して、洗浄
した。さらに、３ｍＭのトリス溶液に室温で四時間浸漬
して洗浄したのち、濾紙上に移し、室温で乾燥させた。

得られたレプリカフィルターをワットマン濾紙上に貼り
付け、少量の３２Ｐ−γＡＴＰを含むブロムフェノール
ブルー（ＢＰＢ）の色素溶液（以下、これを放射線イン
クと呼ぶ）を、先に製図用インクを用いて付けた目印上
に一滴滴下した。

（３）オートラジオグラフ測定による遺伝子の同定およ
び採取 レプリカフィルターを貼り付けた濾紙と蓄積性蛍光体シ
ートとを重ねて明室にてカセツテ内に収納し、室温で３
時間露光したのち、蓄積性蛍光体シートを第２図に示す
ような読出装置に導入し、蓄積性蛍光体シートに転写蓄
積されたフィルターのオートラジオグラフを読み出すこ
とにより、放射性標識プローブの二次元的な位置情報を
デジタル値として得た。

得られたデジタル情報に基づいて、レーザースキャニン
グ装置を用いて写真フィルムを露光し、現像処理するこ
とにより、上記オートラジオグラフを可視画像化した。

この可視画像は、従来の放射線写真法を用いたオートラ
ジオグラフィーによって得られる画像と同程度の画質を
有しており。

従って、得られた写真フィルムの放射線インク像とマス
タープレートの製図用インクによる目印とを合わせして
重ねたのち、写真フィルムの黒点にに相当する部分のコ
ロニーを同定することができた。

また、このデジタル情報を、ＣＲＴ上に投影し、上記オ
ートラジオグラフに対応する画像を得た。このＣＲＴ上
にマスタープレートを位置合わせして置くことにより、
ＣＲＴ上に表示された放射性標識プローブの位置を示す
輝点に相当するコロニーをマスタープレートから選択採
取した。この目的のＤＮＡを有するコロニーの選択採取
操作は容易なものであった。

なお、確認のため、目的のＤＮＡを有するコロニーが取
り除かれたマスタープレートから、新しいニトロセルロ
ースフィルターを用いてレプリカフィルターを作成し、
このレプリカフィルターに上記と同様の操作によりハイ
ブリダイゼーション処理を施して乾燥したのち、蓄積性
蛍光体シートを用いてフィルターのオートラジオグラフ
測定を行なったところ、放射性標識プローブとハイブリ
ダイズしうるコロニーが残存していないことが確認され
た。

すなわち、上記の蓄積性蛍光体シートを利用するオート
ラジオグラフィーによれば、室温で短時間の露光操作を
行なうことにより、放射性標識プローブの二次元的な位
置情報を精度高く得ることができることが判明した。ま
た、上記のスクリーニング方法によれば、目的とするＤ
ＮＡが組み込まれた組換えプラスミドを含む大腸菌が完
全に、かつ短時間のうちに効率良く選択されることが判
明した。

［比較例１］ 実施例１において、（３）のオートラジオグラフ測定に
よる遺伝子の同定および採取操作を、蓄積性蛍光体シー
トを用いる代りに、医療用Ｘ線フィルム（ＲＸ　：富士
写真フィルム■製）と蛍光増感紙（ハイスタンダート３
Ｄ：富士写真フィルム■製）とを組合わせて使用し、レ
プリカフィルターを貼り伺けた癌紙、Ｘ線フィルムおよ
び増感紙を順に重ねて暗室にて直接撮影用の医療用Ｘ線
カセツテ内に収納し、−８０℃の温度で７０時間露光し
た。このＸｌｉフィルムを現像、定着、水洗したのち乾
燥させ、ハイブリダイズした放射性標識プローブのオー
トラジオグラフを得た。

得られた画像は、実施例１にて写真フィルム上に可視画
像として得られたオートラジオグラフと同程度の画質を
有していた。

実施例１および比較例１の結果から、本発明に従う遺伝
子のスクリーニング方法（実施例１）によれば、従来の
スクリーニング方法（比較例１）と比較して、簡易な操
作を行なうことにより短時間に目的とする遺伝子を選択
採取することができることが判明した。また本発明の方
法によれば、容易に、効率良くかつ高純度で目的遺伝子
をスクリーニングすることが充分可能であることが判明
した。

［実施例２］ （１）プラークの形成およびレプリカフィルターの作成 ヒトアデノウィルス１２型（Ａｄ−１２）ＤＮＡのＥｃ
ｏＣ断片でトランスフオームさせたラットの培養細胞の
ＤＮＡを、ＥｃｏＲＩで部分分解してクローニングベク
ターシャロン４Ａに組み込んだ遺伝子ライブラリーを得
た。常法によりこれを大腸菌に感染させ、寒天液に混合
し、Ｌ−寒天培地を敷いたプレート（直径：９ｃｍ）上
に約ｌＯ４個／プレートの割合でまいた後、３７℃の温
度で約１５時間保温して培養し、プラークを形成させた
。

常法により、二トルセルロースフィルター（）ＩＡＷＰ
９０、ミリボア社製）をプラークの形成されている培地
上に静かに置いて、その一部をフィルター上に移した（
得られたフィルターをレプリカフィルターと呼ぶ）。こ
の時、製図用のインクの付いた注射針でフィルターとプ
レートとを突き刺して、フィルターの表裏が判別できる
ような位置に目印を伺けた。」−記プレートはマスター
プレートとして、４℃で保存した。

（２）ハイブリタイゼーション処理 、実施例１において、放射性標識プローブとして、ニッ
ク・トランスレーション法によって放射性標識されたＡ
ｄ−１２Ｈｉｎｄ−璽Ｇ７ラグメント（比活性：　ＩＸ
ＩＯ７ｃｐｍ／＃Ｌｇ）を用い、プローブの濃度が放射
線強度で約２Ｘ１０５ｃ　ｐ　ｍ　／フィルターとなる
ように調整すること以外は、実施例１の方法と同様にし
てフィルターにハイブリダイーゼーシゴン処理を施した
。

（３）オートラジオグラフ測定による遺伝子の同定およ
び採取 実施例１において、露光時間を４時間とすること以外は
、蓄積性蛍光体シートを用いて実施例１の方法と同様の
処理を行なうことにより、放射性標識プローブの二次元
的な位置情報を有するオートラジオグラフをデジタル値
として得た。

得られたデジタル情報に基づいて、レーザースキャニン
グ装置を用いて実施例１の方法と同様の処理を行なうこ
とにより、写真フィルム上に上記オートラジオグラフを
可視画像化した。この可視画像は、従来の放射線写真法
を用いたオートラジオグラフィーによって得られる画像
と同程度の画質を有しており、従って、得られた写真フ
ィルムとマスタープレートとを位置合わせして重ねるこ
とにより、マスタープレートから目的のＤＮＡを有する
プラーク・を同定することができた。

また、このデジタル情報をＣＲＴ上に投影し、上記オー
トラジオグラフに対応する画像を得た。

このＣＲＴ上にマスタープレートを位置合わせてして置
くことにより、ＣＲＴ上に表示された放射性標識プロー
ブの位置を示す輝点に相当するコロニーをマスタープレ
ートから選択採取した。この目的のＤＮＡを有するプラ
ークの選択採取操作は容易なものであった。

なお、確認のため、目的のＤＮＡを有するプラークが採
取されたマスタープレートから、新しいニトロセルロー
スフィルターを用いてレフリカフィルターを作成し、こ
のレプリカフィルターに上記と同様の操作によりハイブ
リダイゼーション処理を施して乾燥したのち、蓄積性蛍
光体シートを用いてフィルターのオートラジオグラフ測
定を行なったところ、放射性標識プローブとハイブリダ
イズしうるプラークが残存していないことが確認された
。

すなわち、上記の蓄積性蛍光体シートを利用するオート
ラジオグラフィーによれば、室温で短時間の露光操作を
行なうことにより、放射性標識プローブの二次元的な位
置情報を精度高く得ることができることが判明した。ま
た、上記のスクリーニング方法によれば、目的とするＤ
ＮＡが組み込まれた組換えファージが完全に、かつ類１
時間のうちに効率良く選択されることが判明した。

［比較例２］ 実施例２において、（３）のオートラジオグラフ測定に
よる遺伝子の同定および採取操作を、蓄積性蛍光体シー
トを用いる代りに、医療用Ｘ線フィルム（ＲＸ　：富士
写真フィルム■製）と蛍光増感紙（ハイスタンダート３
Ｄ＝富士写真フィルム■製）とを組合わせて使用し、レ
プリカフィルターを貼り付けた濾紙、Ｘ線フィルムおよ
び増感紙を順に重ねて暗室にて直接撮影用の医療用Ｘ線
カセツテ内に収納し、−８０℃の温度で８０時間露光し
た。このＸ線フィルムを現像、定着、水洗したのち乾燥
させ、ハイブリダイズした放射性標識プローブのオート
ラジオグラフを得た。

得られた画像は、実施例２にて写真フィルム上に可視画
像として得られたオートラジオグラフと同程度の画質を
有していた。

実施例２および比較例２の結果から、本発明に従う遺伝
子のスクリーニング方法（実施例２）によれば、従来の
スクリーニング方法（比較例２）と比較して、簡易な操
作を行なうことにより短時間に目的とする遺伝子を選択
採取することができることが判明した。また本発明の方
法によれば。

容易に、効率良くかつ高純度で目的遺伝子をスクリーニ
ングすることが充分可能であることが判明した。

【図面の簡単な説明】

第１図は、本発明の遺伝子のスクリーニング方法を概略
的に説明する模式図である。 （ａ）コロニーが形成されているマスターズレート ｌａ：コロニー ２ａ：培地 ３ａ：製図用インクで付は延目印 （ｂ）レプリカフィルター ｌｂ：コロニー ２ｂ＝フイルター ３ｂ＝製図用インクで付けた目印 （Ｃ）ハイブリッドが形成されているフィルターｌＣ：
ハイブリダイズしたコロニー ２Ｃ：フィルター ３Ｃ：製図用インクの目印に放射線インクをのせた目印 （ｄ）可視化されたオートラジオグラフ１ｄ：黒点、 ２ｄ：放射線フィルム ３ｄ：放射線インクにより黒化した目印第２図は、本発
明において蓄積性蛍光体シートに転写記録されたフィル
ター上の放射性標識物質の位置情報を読み出すための読
出装置（あるいは読取装置）の例を示すものである。 ｌ：蓄積性蛍光体シート、２：先読み用読出部、３：本
読み用読出部、４：レーザー光源、５：レーザー光、６
：フィルター、７：光偏向器、８：平面反射鏡、９：移
送方向、ｌＯ：先読み用導光性シート、ｌｌ：光検出器
、１２：増幅器、１３：制御回路、１４：レーザー光源
、１５：レーザー光、１６：フィルター、１７：ビーム
拳エクスパングー、１８：光偏向器、１９：平面反射鏡
、２０：ｆθレンズ、２１：移送方向、２２二本読み用
導光性シート、２３：光検出器、２４：増幅器、２５　
：　Ａ／Ｄ変換器、２６：信号処理回路 特許庁長官　若杉和夫殿 １　＠件の表示 昭和５８＋１　特許　願第１１９４１０号４１件との関
係　特許出願人 ４、代理人 ６　補正により増加する発明の数　な　し７、補正の対
象 明細書の「発明の詳細な説明」の欄を下記の如く補正致
します。 記 一一捕止前一−−一補止止一一 （１）２４頁８行目　ＤＮＡと同種の　→　ＤＮＡと相
補的な（２）同頁８行目　相補的な　→　削除（３）同
頁１１行目　ＤＮＡと同一の　→　ＤＮＡと相補的な（
４）同頁１２行目　相補的な　→　削除（５）同頁１５
行目　未標識ＤＮＡ　→　未標識二本鎖ＤＮＡ（８）２
５頁１２行目　Ａと同種の塩基配列　→　Ａ、もしくを
有する組換えＤＮ Ａもしく （７）２６頁５行目　付けた目印］。　→　伺けた目印
、４Ｃ。 ハイブリダイズしな かったコロニー、 （８）２６頁６行目　これらは視覚的には　→　ｌｃと
４０は視覚的］。 （９）４６頁７行［］　Ｘ線　→　放射線（１０）５７
頁３行目　従来の　→　比較例１の（１１）同頁６什目
　従って、　−削除（＋２）６２頁５行目　従来の　→
　比較例２の（１３）同頁７行目　従って、　→　削除
具　上 特許［１′長官　志賀　学　殿 １．２１９件の表示 昭和５８年　特許願　第１１９４１０号２、発明の名称 オートラジオグラフィーによる遺伝子のスクリーニング
方法 ３、補正をする者 ２１１件との関係　特許出願人 名　称　（５２０）富士写真フィルム株式会社４、代理
人 住　所　東京都新宿区四谷２−１４ミツヤ四谷ビル８階
８、補正の内容　別紙の通り 明細書の「発明の詳細な説明」の欄を下記の如く補正致
します。 記 （１）１８頁の１０行と同頁の１１行の間に、次の文を
挿入する。 「本発明において用いる蓄積性蛍光体シートは」；記の
位置情報の読出し操作が完了したのち、該シートに熱、
光などを照射することにより残留放射線エネルギーを消
去すれば繰り返し使用することが可能であり、この点に
おいても本発明の方法は有利である。」（２）２４頁の
１３行「・・・得られる。」の後に次の文を挿入する。 「本発明において、放射性標識に用いられる放射性元素
は、前記３２ｐに限られるものではなく、放射線（α線
、β線、γ線、中性子線、Ｘ線など）を放射するもので
あればどのような核種であってもよく、ソノ具体例トＬ
−ｒ３２Ｆ’以外ニ１４Ｃ，”Ｓ、３Ｈ，′２ｓ工など
が挙げられる。ｊ （３）３１頁の１０行の「通常約３」を「通常約０．ｌ
Ｊと補正する。 以　上

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、ハイブリダイゼーション法を利用する遺伝子のスク
   リーニング方法において、 １）培地上に形成された遺伝子のクローンの一部をフィ
   ルター上に移して固定する工程；２）フィルター」ニに
   固定された該遺伝子と放射性標識が刊年されたプローブ
   とをハイブリダイズさせる工程； ３）ハイブリダイズ処理が施された該フィルターと輝尽
   性蛍光体を含有する蓄積性蛍光体シートとを一定時間重
   ね合わせることにより、該フィルター上の放射性標識物
   質から放出される放射線エネルギーの少なくとも一部を
   該蓄積性蛍光体シートに吸収させたのち、該シートを電
   磁波により励起して該シートに蓄積されている放射線エ
   ネルギーを輝尽光として放出させ、そしてその輝尽光を
   検出することにより、該フィルター上の放射性標識物質
   の二次元的な位置情報を得る工程；４）得られた位置情
   報に基づいて、培地上のクローンを採取する工程； からなるオートラジオグラフィーによる遺伝子のスクリ
   ーニング方法。 ２゜上記遺伝子のスクリーニング方法が、コロニー−ハ
   イブリダイゼーション法を利用することを特徴とする特
   許請求の範囲第１項記載のオートラジオグラフィーによ
   る遺伝子のスクリーニング方法。 ３゜上記遺伝子のスクリーニング方法が、プラーク・ハ
   イブリダイゼーション法を利用することを特徴とする特
   許請求の範囲第１項記載のオートラジオグラフィーによ
   る遺伝子のスクリーニング方法。 ４゜上記３）の工程において、蓄積性蛍光体シートの電
   磁波による励起が、該シートに電磁波を時系列的に走査
   することにより行なわれることを特徴とする特許請求の
   範囲第１項乃至第３項のいずれかの項記載のオートラジ
   オグラフィーによる遺伝子のスクリーニング方法。 ５゜上記３）の工程において、放射性標識物質の二次元
   的な位置情報を画像として得ることを特徴とする特許請
   求の範囲第１項乃至第３項のいずれかの項記載のオート
   ラジオグラフィーによる遺伝子のスクリーニング方法。 ６゜上記３）の工程において、放射性標識物質の二次元
   的な位置情報を記号および／または数値で表示すること
   を特徴とする特許請求の範囲第１項乃至第３項のいずれ
   かの項記載のオートラジオグラフィーによる遺伝子のス
   クリーニング方法。 ７゜上記蓄積性蛍光体シートが、支持体、輝尽性蛍光体
   を結合剤中に分散してなる蛍光体層および保護膜を含む
   ものであることを特徴とする特許請求の範囲第１項乃至
   第３項のいずれかの項記載のオートラジオグラフィーに
   よる遺伝子のスクリーニング方法。 ８゜上記遺伝子のスクリーニング方法が、上記ｌ）〜４
   ）の工程を繰り返し行なうものであることを特徴とする
   特許請求の範囲第１項記載のオートラジオグラフィーに
   よる遺伝子のスクリーニング方法。