JPS60110294A - β−ラクタマ−ゼ阻害活性を有する抗生物質ＰＳ−５ - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は新規な抗生物質及びその誘導体に関し、さらに
詳しくは、強い抗菌力及びβ−ラクタマーゼ阻害活性を
有し且つβ−ラクタマーゼ生産菌に対しペニシリン系、
セファロスポリン系等の抗菌性物質の抗菌力を相乗的に
増進し得る能力をもつ抗生物質ｐｓ−ｓ及びその誘導体
、並ｆｊ　ｉ７これら物質の製造方法及び抗菌剤Ｖζ関
する。

従来、β−ラクタマーゼ阻害活性を有する抗生物質また
はβ−ラクタマーゼ阻害剤はいくつか知られている。例
えば、ストレゾトミセス凧に属するＭＣ６９６−５Ｙ２
物質生産菌の培養液から採取されたＭＣ６９６−５Ｙ２
−Ａ及びｈ（特公昭５１−２４５９７号公報）、ストレ
グトミセス属のＭＭ４５５０又１ｌ−ｉ：Ｊｆ、Ｖ１３
９０２生産菌の培養物から採取されだＭ’Ｍ　４５５０
又はＪｆＭ１３９０２物質（特開昭５０−１３５２９４
号及び特開昭５０−１４０６９２号公報）、ストレゾト
ミセスクラパリケ゛ルスの培養物から採取されたクラバ
ラ／酸（特公昭５２−１９９６号公報）などが報告され
ている。また、ペニシリン類似骨格を有する抗生物質チ
ェナマイシｙ　（ｔｈｉｅｎａｍｙｃｉｎ　＞　も報告
されている（特開昭５１−７３１９１号公開公報）。

今回、本発明者らは、上記公知のβ−ラクタマーゼ阻害
活性を有する抗生物質またはβ−ラクタマーゼ阻害剤と
は異なる理化学的性質を有し、更に強い抗菌力及びβ−
ラクタマーゼ阻害活性を有する新規な抗生物質を見い出
し、これを抗生物質ｐｓ−ｓと命名した。

かくして、本発明の第一の目的は、強い抗菌力及びβ−
ラクタマーゼ阻害活性を有する新規な抗生物質ｐｓ−５
を提供することである。

本発明の第二の目的は、強い抗菌力及びβ−ラクタマー
ゼ阻害活性を有する上記抗生物質ＰＳ−５の誘導体、殊
にトリチル誘導体を提供することである。

本発明の更に他の目的は、強い抗菌力及びβ−ラクタマ
ーゼ阻害活性を有し、更にβ−ラクタマ−ゼ生産性の劇
性菌に対しペニシリン系、七ファロスポリン系等の抗菌
性物質の抗菌力を相乗的に増進し得る能力を有する新規
抗生物質ＰＳ−５及びそのトリチル誘導体を提供するこ
とにある。

本発明の他の目的は上記抗生物質ＰＳ−５の発酵法によ
る製造方法を提供することである。

本発明の更に他の目的は上記抗生物質ＰＳ−５のトリチ
ル誘導体の製造方法を提供することである。

本発明の更に他の目的は上記抗生物質ＰＳ−５又はその
誘導体のダラム陽性及びグラム陰性細菌感染症の予防、
治療及び／又は処置剤に関する。

本発明のその他の目的及び利点は以下の説明により明ら
かとなるであろう。

本発明によれば、広範囲で強い抗菌活性及びβ−ラクタ
マーゼ阻害活性を有する新規な抗生物質ＰＳ−５が提供
される。この抗生物質ＰＳ−５は以下に示す理化学的性
質及び生物学的性質にょシ特徴づけられる。

（１）溶解性 抗生物質ＰＳ−５はｐＨ６〜９の水に可溶である。すな
わち、本抗生物質はｐ、Ｈ７の水のみならず、例えば塩
酸などによりｐｆｌｆ３及びそれより高いｐＨの微酸性
に調整された水性媒体、及び例えば炭酸水素ナトリウム
、水酸化ナトリウム等により　ｐ　、ｌｆ　９以下の弱
アルカリ性に調整された水性媒体に易溶である。

また、本抗生物質は酢酸エチル及びベンゼンには実質的
に溶解しない。

（２）　薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）下記のＴＬ
Ｃグレート及び溶媒を用いて、抗生物質ＰＳ−５（ナト
リウム塩）をＴＬＣにかけた場合、以下に示すＲｆ値を
示す。なお、本明細書において使用する混合溶媒の混合
比は特にことわらない限シ容積比である。

（ａ）ゾレコードしたガラスプレート〔吸着剤：結晶性
セルロース（平均粒径：６〜１０μ）、厚み：０．２〜
０．２５ｍ、本グレートとして、本明細書ではフナコシ
薬品（株）製アビセル■ＳＦセルロース薄層プレートを
使用〕 Ｃｂ’）　ｆレコードしたガラスプレート〔吸着剤ニジ
リカグル、厚み：　０．２５　ｍ、本プレートとして、
本明細書ではニー・メルク社製ＤＣ−フェルティツヒプ
ラツテン・キーゼルヶ９ル（ＤＣ−Ｆｅｒｔｉｇ−ｐｌ
ａｔｔｅｎ　Ｋｉｅｓｅｌｇｅｔ　）　６０　Ｆ　２．
を使用〕エタノール／水（？／３）　Ｒｆ＝０．８２ｎ
−ゾＯ／ｅ／−に／水（’Ｉ／３）　Ｒｆ−０，７−ｒ
（３）　ペーパクロマトグラフィー 抗生物質ｐＳ−ｓ（ナトリウム塩）はｐ紙〔重量：１４
０ｆ／ゴ、厚み：０．２５３１１．灰分０．１％、本ｐ
紙として、本明細書では東洋ｐ紙Ｎα５０（東洋Ｆ紙（
株）製を使用〕を用い、下降法により下記の溶媒で展開
した時下記のＲｆ値を示す。

口・にノール／水（Ｔ／’Ｉ／６） アセトニトリル／水（８／２）　Ｒｆ＝０．３６エタノ
ール／水（７／３）　Ｒｆ＝０．６３〔註１ニアセトニ
トリル１２０ｍ１、ｐ）１７．５のＭｏＪｆ）リス（ヒ
ドロキシメチル）アミノメタン−塩酸緩衝液３〇−及び
ｐ　１１７．５の１４Ｍエチレンソアミン四酢酸ナトリ
ウム塩水溶液１　ｍｅから成る混合溶媒〕（４）高圧Ｐ
紙電気泳動 高圧ｐ紙電気泳動装置（サバント・インスツルメント社
製、高圧電源１１Ｖ３００ＯＡ、泳動槽Ｆ’　Ｐ　１８
０　Ａ　）を用い、渥紙〔重量：　１４０　Ｆ／７ｎ”
、厚み：　０．２　’５　ｚｍ、、灰分０．１％、木戸
紙として、不明ｎ１ｉｌ書では東洋濾紙Ｎｏ、５０（東
洋濾紙（株）製を使用〕上で、抗生物質ｐｓ−５（ナト
リウム塩）を電気泳動Ｋかけた際、下記のｐ　ＩＩの緩
衝液中で下記の挙動を示す。

水３０００ｙｎｌ、バルビタール３，３１及びパルビタ
ールナトリウム２５５７から成るｐｈ８６の緩衝液中で
、４２Ｖ／ａｍにて３０分間通電すると陽極側へ少くと
も５節、通常１０〜４０〃Ｌの範囲で移動する。

（５）　β−ラクタマーゼに対する挙動ゾロテラス・ブ
ルガリス、シトロバクタ−・フロインディー及びバチル
ス・セレウスの、θ−ラクタマーゼによシネ活性化され
る。

これらの理化学的性質から、本発明の抗生物質ＰＳ−５
が、β−ラクタム環又はその類似環構造を有する酸性の
物質であると推定される。

また、該抗生物質ＰＳ　−５は例えば室温で単画する場
合不安定な傾向を示すが、例えば０℃以下、殊に一１０
℃以下の低温ではかなり安定であり、更にほぼ中性乃至
弱アルカリ性の水溶液中ではかなり安定であシ、はぼ中
性乃至ｐ１ｊ９以下の弱アルカリ性の水溶液中で６０℃
に加熱した時、少なくとも１５分以内では、該抗生物質
ＰＳの抗菌活性は少なくとも５０％、通常７５％以上保
持される。

＋１＋　抗菌スペクトル 本発明の抗生物質ｐｓ−５は広範囲の抗菌活性を有し、
各種微生物、例えばスタフィロコッカス属、ナイフ０ロ
コソカス属、ストレゾトコツカス属、サルシナ属、バチ
ルス属等に属するダラム陽性菌に対し非常に強い抗菌力
を示し、更に例えばアルカリ土類金属、コマモナス属等
に属するグラム陰性閃（、で対しても非常に強いわ°ε
ε方力示す。

また、不発明の抗生物質１）　Ｓ−５は、例えはエシェ
リヒア属、クレブシェラ属、プロテウス属、等に属する
グラム陰性菌１・で対してもかなシ強い抗菌力を示す。

特に、本発明の抗生物質ＰＳ−５は、β−ラクタム環を
有する抗生物質に対して耐性を有する、１り１］えはシ
トロバクタ−属、プロテウス属、エンテロバクタ−属、
クレブシェラ属、セラチア属、寺に属するダラム隘性細
菌に対して強い抗菌力を示す点で特徴的である。

（２）　β−ラクタマーゼ生産菌に対する他の抗生物質
の抗菌力の増進 不発明の抗生物質ＰＳ−５は、／トロバクター・フロイ
ンディー、ン０ロチウス・ブルガリス、エンテロバクタ
−・アエロケゞネス、セラチア・マルセセンスなどのβ
−ラクタマーゼ生産菌に対し、他の抗生物質、特にペニ
シリン系やセファロス、−１？リン系などのβ−ラクタ
ム系抗生物質の抗菌力を増進させる能力を有し、しかも
多くの場合その能力は相乗的である。

（３）生体内での活性 病原性ダラム陽性菌を感染させたマウスに投与した時著
るしい治療効果が認められた。

（４）毒性 病原性ダラム陽性菌の感染を治療する梅効投与量の約２
００倍量をマウスに投与したが著るしい毒性は認められ
なかった。

本発明によれば、以上に述べた如き特性を有する抗生物
質Ｊ）　Ｓ　−５は、抗生物質ＰＳ−５生産菌を栄養培
地で培養し、その培養物からβ−ラクタマーゼ阻害活性
を有する抗生物質ＰＳ−５を採取することから成る方法
により製造することができる。

本発明で使用する抗生物質ＰＳ−５生産菌は、前述した
理化学的性質及び生物学的性質を有する抗生物質ｐＳ−
５を生産する能力を有するものである限り、どのような
属に属する菌でも使用でき、広範囲の微生物から選ぶこ
とができる。

しかして、本発明の目的に適する菌株の検索は次のよう
にして行なうことができ、これによシ当業者であれば、
本発明で用いる抗生物質ｐｓ−ｓ生産菌を容易に取得す
ることができる。

すなわち、β−ラクタム感受性菌を検定菌とするビオア
ッセイ寒天平板と、これにβ−ラクタマーゼを添加した
ビオアッセイ寒天平板とを用いて、土壌分離菌の培養ｐ
液を検定し、前者の寒天平板に阻止円を与え、更に後者
の寒天平板における阻止円か前者のそれよシ小さい培ｔ
Ｐｔｉ、を与える土壌分ｐ１；菌を検索する。次にその
土壌分離菌の培養液中の活性成分を活性炭に吸着させ、
その溶出濃縮液をペー・ぞ−クロマトグラフィーまたは
薄層クロマトグラフィーで展開し、β−ラクタム感受性
菌を検定菌とするビオオートグラフィーによシ抗生物質
ｐｓ−ｓが検出されれば、その菌は本発明の方法で用い
得る抗生物質ｐｓ−５生産菌であるということができる
。

この検索方法を具体例によりさらに説明すれば次の通り
である。

β−ラクタム感受性菌のビオアッセイ寒天５１′板とし
て、後述するコマモナス検定板を用い、これにノロテラ
ス・ブルガリスＰ−５の生産するβ−ラクタマーゼを添
加したコマモナスＣＶ検定板と、ントロバクター・アロ
イ／ディＬ′−９の生産するβ−ラクタマーゼを添加し
たコマモナス０Ｍ検定板とを調製する。一方、土壌分離
菌の培養Ｆ液を８ｍ直径の・ぐルプディスクにしませて
、それぞれの検定板に乗せ、３５°Ｃで２０時間培養し
たのち、コマモナス検定板で阻止円を与え、且つコマモ
ナスＣＶ検定板またはコマモナス０Ｍ検定板での阻止円
かコマモナス検定板での阻止円より小さい、培養戸液を
与えた土壌分離菌を選出する。

次にその土壌分離菌の培養Ｆ液に該ｒ液の２％（Ｊ７７
　／　Ｉｔ　）　量に相当する特製白鷺活性炭Ｃ武田薬
品工業（株）製）を加え、１５分間攪拌した後、遠心分
離により沈殿を集め、この沈殿を用いた培養Ｐ液と同容
量の蒸留水で洗浄し、再び遠心分離して沈殿を集める。

この沈殿に前記で用いた培養ろ液の半容量に相当−する
量の５０％（Ｖ／Ｖ）アセトン水を加え、室温で３０分
間攪拌後、遠心分離して上澄をえた。この上澄液をロー
タリーエバポレーターを用いて３０〜３５℃で濃縮して
、上記で用いた培養Ｐ液に対して２０倍の濃縮液をえた
。この濃縮液を東洋濾紙Ｎα５０（東洋濾紙（株）製）
で８０％アセトニトリル／トリス／　Ｅ　Ｄ　ＴＡ〔ア
セトニトリル１２０ｄ、ｐＨ７，５のＶＭＪ＋４４トリ
ス（ヒドロキシメチル）アミノメタン−塩２２　Ｍ　ｆ
Ｈ液３０ｄｌＸ　ｐＥ７．５の殖Ｍ１エチレンソアミン
四酢酸ナトリウム塩水溶液１７からなる〕溶媒を用い下
降法ぺ−・ξ−クロマトグラフィーを１６時間展開した
後、コマモナス、テリク゛すＢ−９９６を検定菌として
ビオオートグラフィーを行なう。そして、抗生物質ｐｓ
−ｓと同じ移動圧１ｉｉｉｉ（Ｒｆ値のところ）に阻止
帯を示した土壌分離菌を抗生物質ｐｓ−ｓ生産菌候補と
して選出する。

このよう（（シて選出された候補菌については、サラに
ペーパークロマトグラフィーや薄層クロマｌ・グラフィ
ーを行ない、抗生物質ＰＳ−５の生産性を確認する。

これにより、当業者は本発明の目的に適合した抗生物質
Ｐ　Ｓ−５生産菌を容易に検索することができる。

上記の如くして検索された抗生物質／’　Ｓ　−５生産
菌の代表的なものには、ストレゾトミセス属に属する抗
生物／７４　Ｊ）　５−５生産菌が包含され、その好適
な一例としては、福井県吉田郡の永平寺の近くで抹取し
た中堀から分’ｊ’ｌシた放線菌て、本発明者らがＡ２
７１菌株の番号を付した菌株が挙げられる。

とのＡ２７１菌株の菌学的性質は次の通りである。

１）　形態的特徴 胞子形成菌糸の分枝状態：単純分枝 胞子形成菌糸の形状：気菌糸先端はかぎ状（）Ｌｏｏｋ
ｓ　）やループ状（１ｏｏｐｓ　）　あるいは不完全な
螺旋状で、セクションＲＡ　（５ｅｃｔｉｏｎＲｅｔｉ
ｎａｃｕｌｉａｐｅｒｔｉ　）に属するものと考えられ
る。將にこの形態はオートミール寒天及びグリセリン・
アス・ξラギン寒天培地に培養した時に観察される。し
かしイースト・麦芽寒天培地上てはとかく直状または曲
状（ｆｌｅｘｕｏｕｓ　）の形態を見る事が多い。

胞子の形状および連鎖の数：楕円状ないし円筒状で１０
ケ以上連鎖する（通常１０〜５０ケ）。

胞子の大きさおよび表面の構造二０．８〜１０×１．０
〜１．８ミクロン、表面平滑。

鞭毛胞子、胞子のうは認められない。

胞子柄の着生位置は気酌糸上である。

２）　培養上の特徴： Ａ２７１菌株の培養上の特徴を下記表−１Ｖ′Ｃまとめ
て示す。下記表−１においては、特（くことわらない限
り、２８℃で２週間培養後の観察結果を示す。

また、色調表現は主として１１．Ｄ、トレスナー及びＥ
、Ｊ、バッカス（／／、　Ｄ、　Ｔｒｅｓｎｅｒ　＆　
Ｅ。

Ｊ、　Ｂａｃｌｃｕｓ　）　’４”ｇシステム・オブ・
カラー・ホイールズ・フォア・ストレゾトマイセーテ・
タフソノミーＪ　（Ｓｙｓｔｅｍ　ｏｆ　Ｃｏ１ｏｒ　
！Ｖｈｅｅｌｓ　ｆｏｒＳｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｔａ　
Ｔａｘｏｎｏｍｙ　）の方法及び財団法人日本色彩研究
所出版のパ色の標準パの色調コードに従った。

３）　生理的特徴 （１）生育温度範囲：１０〜４０℃、最適２０〜３０°
Ｃ０ （２）　ゼラチンの液化（グルコース・ペプトン・ゼラ
チン培地上）：液化する（２０℃培養）（３）スターチ
の加水分Ｍ（スターチ寒天培地上）二分解する （４）脱脂住乳の凝固、ペプトン化：凝固は認められな
いが、ペプトン化スる。

（５）　メラニン様色素の生成：チロシン寒天、ペプト
ン・イースト鉄寒天培地上及びトリプトン・イーストエ
キス・ブロス中でメラミン様色素を生成しない。

（６）下記の各炭素源の同化性（プリド・・ム・ゴトリ
ーブ寒天培地上）： Ｌ−アラビノース　＋ Ｄ−キシロース　＋ Ｄ−グルコース　＋ Ｄ−フラクトース　− シュクロース　± イノシトール　− Ｌ−ラムノース　、　＋ ラフィノース　− Ｄ−マンニット　− （＋：よく同化する、±：僅かに同化する、−二同化し
難い） 上記Ａ２７１菌株は前記の特徴より明らかな如く、スト
レプトミセス属に属する菌株であって、胞子形成菌糸は
セクションＲＡの形状で、菌叢表面の色は黄色或いは赤
色系統であって、胞子表面平滑でメラニン色素をはじめ
水溶性色素は生成しない菌群に属する菌株である。

上記菌株の菌学的特徴をもつ菌種をＳ、Ａ、ワックスマ
ン（Ｗａｋｓｍａｎ　）著１ノ・アクチノマイセーテ７
（７″ｈｅ　Ａｃｔｉｎｏｍｙｃｅｔｅｓ　）　”第２
巻（１９６１年）、Ｅ、Ｂ、　シャーリンク（Ｓｈｉｒ
−１ｉｎｇ）およびり、コゝソトリーブ（Ｇｏｔｌｉｅ
ｂ　）共著の論文（インクーナ／ヨナル・ツヤ−ナル・
オプ・ゾスデマテイソク・バクテリオロソー：Ｉｎｔｅ
ｒｎａｔｉｏｎａｌ　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｓｙｓｔ
ｅｍａｔｉｃＢａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ　）第１８巻Ｍ
６９〜１ｇ９頁（１９６８年）、同巻第２７９〜３９２
頁（１９６８年風同第１９巻第３９１〜５１２頁（１９
６９年）および同第２２巻第２６５〜３９４頁（１９７
２年）、並びにパージ−τマニュアル・オブ・デターミ
ネイテブ・バクテリオロソー（Ｂｅｒｇｅ？／’ｓＭａ
、ｎｕａｌ　ｏｆ　Ｊ）ｅｔｅｒｍｉ＊ａｔｉυａ　１
３ａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ　）第８版（１９７４年）中
に探したところ、セクションＲＡに属する近似菌種とし
て、アクチノミセス−り“レフウス（Ａｃｔｉｎｏｍｙ
ｃｅｓ　ｃｒｅｍｅｕｓ　）　、アクチノミセス・フラ
ビドビレンス（Ａｃｔｉｎｏｍｙｃｅｓｆｌａｖｉｄｏ
ｖｉｒｅｎｓ　）、アクチノミセス・アルボヘルバクス
（Δｃｔｉｎｏｙｎｙｃｅｓ　ａｌｂｏｌＬｃｌｖａｔ
ｕｓ　）、アクチノミセス・フラベスセンス（Δｃｔｉ
ｎｏｒｎ、ｙｃｅｓｊ’１ａｖｅｓｃｅｎｓ　）、スト
レプトミセス・ルトケ゛ルセンンス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍ
ｙｃｅｓ　ｒｕｔｇｅｒｓｅｎｓｉｓ　）、ストレフ０
トミセス・クリセウス（ＳｔｒＣｐｔｏｍｙｃｅｓｃｈ
ｒｙｓｅｕｓ　）、ストレフ［・ミセス　ヘルパテイカ
ス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ　ｈｅｌｖａｔｉｃｕｓ
　）等があけられた。また、形態的性質ではセクション
Ｒ，１７に槁する菌種ではあるが、培養的生理的特徴の
みに注目スレハ、ストレフ０トミセス・フ０ルリコロレ
スセン、２．　（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ　ｐｌｕｒ
？、ｃｏｌｏｒｅｓｃｅｎｓ　）も近似菌種の１つとし
てあげられる。これら８菌種の内層後のストレプトミセ
ス・ゾルリコロレスセンスを除く削種は、培養条件によ
っである時は気菌糸が直状に、またある時はループ状を
示すとされている。そこで、これら８菌種の標準菌株と
本発明に従うΔ２７１菌株を同じ栄件下で培養し比較し
た。

その結果、これら５１種とは各種寒天培地上における生
育、気菌糸の色および基生菌糸の色において異り、址だ
炭素源の利用における差異も著るしく、上記Ａ２７１菌
株とは明らかに相違する。

そこで、７２７１ｂ４株に最も近似すると思われる２菌
種、アクチノミセス・クレメウスＩ　Ｓ　Ｊ）５１４７
及びアクチノミセス・ツー２ビドビレンスＩ　Ｓ　ｐ　
ｓ　ｔ　ｓ　ｏと、Ａ２７１菌株との比較試験結果を示
せば下記奴−２、表−３及び表−４に示す通りである。

以上前に示す結果から明らか々如く、気菌糸の色を比較
するに、アクチノミセス・フラビドビレンスは全般に白
色を呈し、黄色を呈する場合でもその黄色は緑色を４１
ヤびた黄色で、本発明のＡ２７１菌株とは明らかに異り
、寸だアクチノミセス・り１／ノウスは全般に、Ａ　２
７１菌株よりその呈する淡橙黄色の赤味が弱く、Ａ２７
１菌株との間に明瞭な差異が認められる。寸だ基土菌糸
の色では、Ａ２７１菌抹が全般に明るい黄色を呈するｉ
ｔ（対して、アクチノミセス・フラビドビレンスハ、淡
黄色を呈し、−アクテノミセス・クレメウスは、明るい
（登黄色を呈するものが多く、その差異は明らかである
。更に、各培地における試、験結果を詳細に比較すれば
その相違は一層明確となる。また表−４に示した如く、
Ａ２７１菌株はアクチノミセス・りＩ／メウスとはＤ−
フラクトースとＬ−ラムノースの同化性において、まだ
アクチノミセス・フラビドビレンスとはＤ−フラクトー
スとイノシトールの同化性ンておいて異る。かくのこと
く最も近似する上記公知２菌種と本発明の、４２７１菌
株とは明らかに相違する。

結局、既知の放線菌種の中には、Ａ２７１菌株と同じ性
質を示す菌種は見蟲らない。従って、上記Ａ２７１菌株
は新菌種と認められ、本発明者らはこれをストレプトミ
セス・エスピーΔ２７１（Ｓｔｒｅｐｔｍｙｃｅｓ　ｓ
ｐ、　Ａ　２７１　）と命名した。この菌株は工業技術
院微生物工業技術研究所に、微生物受託番号　微工研菌
寄第３９８４号として寄託さｎている。

本発明において（は、この７２７１菌株それ自体のみな
らず、その自然変異株又は化学的もしくは物理的処理に
よる変異株もまた使用することができる。

本発明の抗生物質ＰＳ−５は、抗生物質ｐｓ−５生産菌
、例えば、上記ストレゾトマイセスＳｐ。

Ａ２７１の胞子または菌糸を栄養源含有培地に接種して
、好気的＆（”壇殖させることによって生産される。

その栄養源としては、放線菌の栄養源として通常使用さ
れるもの、例えば炭水化物、窒素源、無機塩などの同化
できる源を使用できる。例えば、ぶどう糖、グリセリン
、麦芽糖、蔗糖、糖蜜、デキストリン、澱粉などの炭水
化物や、大豆油、落花生油、ラードなどの油脂、脂肪類
の如き炭素源；ペゾトン、肉エキス、大豆粉、綿実粉、
転触酵母、コーンスチープリカー、酵母エキス、脱脂乳
、カゼイン、硝酸ナトリウム、硝酸アンモニウム、硫酸
アンモニウムなどの窒素源；燐酸二カリウム、食塩、炭
酸カルシウム、硫酸マグネシウムなどの無機塩が使用で
き、必要により微量金属例えばコバケト、マンガンなど
を添加することができる。

栄養源としては、その他、抗生物質ＰＳ−５生産菌が利
用して抗生物質ＰＳ−５を生産するものであれば、いず
れの栄養源でも使用でき、公知の放線菌の培養材料はい
ずれも使用できる。また、加熱殺菌時及び培養中におけ
る発泡を抑えるため、シリコン、植物油などの消泡剤を
添加することもできる。

上記の如き栄養源の配合割合は特に制約されるものでは
なく、広範囲に亘って変えることができ、使用する抗生
物質ｐｓ−５生産酎にとって最適の栄養源の組成及び配
合割合は、当業者であれば簡単な小規模芙験により容易
に決定することができる。

また栄養培地は培養に先立ち殺菌することができ、この
殺菌の前又は後で、培地のｐＥを４〜９の範囲、特にｐ
Ｈ６〜８の範囲に調節するのが有利である。

かかる栄養培地での抗生物質ＰＳ−５生産菌の培養は原
則的には、一般の放線菌による抗生物質の製造において
通常使用されている方法に準じて行なうことができる。

通常好気的条件下に培養するのが好適であシ、通常攪拌
しながら及び／又は通気しながら行なうことができる。

壕だ、培養方法としては静置培養、振盪培養、通気攪拌
をともなう液内培養のいずれも使用可能であるが、液内
培養が有利である。

使用しうる培養温匿は抗生物質ＰＳ−５（ナトリウム塩
）の発育が実質的に阻害されず抗生物質Ｐ　Ｓ　−５を
生産し得る範囲であれば特１・で制限されるものではな
く、使用する生産苗株に応じて変えることができるが、
一般に２０〜４０℃、好ましくは２５〜３５℃の範囲内
の温度が好適である。

また、培養を好適に行なうため、必要に応じて、培養中
に培養物のｐｈｉを４〜９、特に６〜８の範囲に調節す
ることができる。

大規模外大量培養の場合、適宜種母培養を行ない、これ
を栄養培地に接種し、液体培養するのが有利である。

培養は通常抗生物質ＰＳ−５が充分に蓄積するまで継続
することができる。その培養時間は、培地の組成や培養
温度、使用生産株等により異なるが、通常３０〜９０時
間の範囲である。

なお、使用する培養条件は、使用する生産菌株の特性に
応じて、当業者であれば簡単な実験にょシ、最適条件を
容易に決定することができる。

培養中の抗生物質ＰＳ−ｓの蓄積量は後述するビオアッ
セイ法及びビオオートグラフィーにより定量することが
でき、それにょシ最適蓄積量を容易に知ることができる
。

かくして、培養物中に蓄積された抗生物質Ｐｓ−５は水
溶性であシ、主として菌体外に存在するので、有利には
、培養後、ｐ過、遠心分ｉ％ｊ　、抽出などのそれ自体
公知の分離法によって菌体を除去し、その涙液、上澄液
、抽出液などより回収される。

回収はそれ自体公知の種々の方法で行なうことができ、
特にカルボン酸型抗生物質の回収のために屡々利用され
る方法が有利に適用される。例えば、低ＰＨにおける酢
酸エチル、ｎ−ブタノール等での溶媒抽出及びその溶媒
層から高ｐｊＪ水層への転溶；塩化ベンザルコニウム、
硫酸水素テトラブチルアンモニウム等の脂溶性４級アン
モニウム塩”またはニッンー・クラウン・エーテル・ジ
シクロヘキシル−１８−クラウン−６、同一１５−クラ
ウン−５（日本曹達（株）製）等のクラウン化合物の存
在下、中性ｐＨにおける塩化メチレン、クロロホルム等
での溶媒抽出及びその溶媒層からの沃化ナトリウム、沃
化カリ等を含有する中性水層への転溶；活性炭、アンバ
ーライトＸＡＤ　（ローム・アンド・ハース社Ａ）　、
ダイヤ・イオンＪＩＰ−２０（三菱化成社製）等による
吸着と、メタノール水、アセトン水等による浴出；ダウ
エックスｌＸ２（ダウ・ケミカル社製）、ＱＡＩ’：−
セファデックスＡ−２ｓ（ファルマシャ社製）等のイオ
ン交換樹脂による吸着及び溶出；セファデックスＧ−１
０（ファルマンヤ社製）、バイオ・ケゝルＰ−２（バイ
オ・ランド社ｍ）、バイオ・ビーズ５−Ｘ３（バイオ・
ラッド社製）等によるケ゛ル濾過；セルローズ、アビセ
ルＳＦ（アメリカン・ビスコース社ｍ）、ＤＥＡＥ−セ
ルローズワットマンＤＢ−３２（ワットマン社製）、Ｄ
ＥＡＥ−セファデックスＡ−２５（ファルマンヤ社製）
、ノリカケ゛ノペアルミナ等にょるカラム法または尚０
層法のクロマトグラフィー；ヘキサン、石油エーテル（
沸点範囲３０〜６０℃）等℃溶剤添加にょる強制沈殿法
；凍結乾燥法、等をそれぞれ単独で或いは適宜組合せて
、さらに場合によっては反復使用して使用される。

回収精製工程中の抗生物質ＰＳ−５の挙動は後記するビ
オアッセイ法およびビオオートグラフィーにより定量測
定することができる。

かくして、前記した特性を有する抗生物質１）　Ｓ−５
が得られる。

この抗生物質／）　Ｓ　−５は既述のとおり若干不安定
であるので、上記回収精製工程での処理′には充分な注
意を要する。

本抗生吻質ＰＳ−５は、一般に遊ｔ）′・形のものより
も塩の形の方がより安定であるから、後述する医薬用途
に使用したり、さらに誘導体に転換する場合の中間体と
して使用したシ、或いは前記した精製工程に付する場合
等においては、塩の形で処理することが好適である。

かかる塩の例としては、例えばナトリウム川、カリウム
塩、マグネシウム塩、アルミニウム塩、などの金属塩；
アンモニウム塩；トリメチルアンモニウム塩ナトの置換
アンモニウム塩；ベンザチン塩、フロカイン塩々どの有
機塩基による塩などが含捷れ、特に好捷しい塩はナトリ
ウム塩およびカリウム塩である。

捷だ、本発明の抗生物質ＰＳ−５は前述した通り、酸性
の抗生物質であると推定されるから、公知の酸性の抗生
物質例えばクラパラン酸などと同様に、各種アルコール
類及びノルカフリン類又はこれらのエステル形成性誘導
体により、エステルの形に変えることができると推定さ
れる。従って、本発明の範囲には、これらエステルもま
た包含されるものである。

さらに、本発明によれば、前記抗生物質ＰＳ−５は、ト
リチル（トリフェニルメチル）化することにより分子構
造中にトリチル基を導入すると、該抗生物質Ｐ　ｓ　−
ｓの安定性が著るしく高１、容易に単殖精製することが
できるようになること、しかもそのトリチル誘導体は強
い抗ｈ−力及びβ−ラクタマーゼ阻害活性を有すること
が見い出された。これによっても、本発明の抗生物質Ｐ
Ｓ−５を同定、確認することができる。

かくシ′て、本発明によれば、前記抗生物質ＰＳ−５を
トリフェニルメタンの反応性誘導体と反応せしめること
から成る、β−ラクタマーゼ阻害活性を有する抗生物質
ＰＳ　−５）　ＩＪチル誘導体の製造方法が提供される
。

上記方法において使用し得るトリフェニルメタンの反応
性誘導体としては、カルホキフル基の如き庖能基と反応
し得る反応性基をもつトリフェニルメタンの如何なる官
能性誘導体をも使用することができ、例えば式 式中、）′は１〈１１脱Ｑ　（ｃｌｃｃｔｖｉｎｇ−ｏ
ｆ’ｊ’　）原子又（は基を表わす、 で示される化合物が好適である。

上記式（１）における離脱性原子又は基０’）としては
、例えは塩素、臭素、ヨウ素の如き・・ロケ゛ン原子；
水酸基、チオール基などが挙けられ、殊にハロケ゛ン原
子が適当である。

しかして、上記式（０の化合物の代表例としては次のも
のを挙けることができる。

トリチルアルコール、 トリチルメルカプタン、 トリチルクロライド、 トリチルブロマイド、など。

抗生物質ｐｓ−ｓと上記トリフェニルメタンの反応性誘
導体との反応は、カルボキシル基、アミン基、水酸基等
の官能基を有する有機化合物にトリチル基を導入する際
に厘々使用されるそれ自体公知の方法に従って行うこと
ができる。

抗生’ｔＮｔ　Ｐｓ　−ｓとトリフェニルメタンの反応
性誘導体との反応は媒体の不在下に行なうことができる
が、一般に不活性液体媒体中で行なうのが好ましく、使
用し得る不活性液体媒体としては、ｆｌＪ　エｔ４　、
ベンゼン、トルエン、？Ｌ−ヘキサン、シクロヘキサン
などの炭化水素類；クロロホルム、塩化メチレンなどの
ハロケ゛ン化炭化水素類；ヅメチルホルムアミド、ヘキ
サメチルホスホトリアミドなどのアミド類；ツメチルス
ルホキシド；ソエチルエーテル、ジイソプロピルエーテ
ル、ソｎ−ブチルエーテル、テトラヒドロフラン、ソオ
キサンなどのエーテル類；酢酸エチル、酢酸ｎ−ブチル
、などのエステル類；アセトン、メチルエチルケトンな
どのケトン類などが挙げられ、これら液体媒体はそれぞ
れ単独で使用してもよく、或いは必要に応じて２種以上
混合して用いることもてきる。

反応温度は臨界的ではなく、使用する該反応性誘導体の
種類、液体媒体の種類等に応じて広＋Ｉｒｊ４　（’こ
変えることができ、抗生物質ＰＳ−５が著るし７く分解
しない温度範囲内で任意に選ぶことができるが、一般に
６０℃以下の温度、好捷しくは０〜４０℃の範囲、さら
に好ましくは５６Ｃ〜室温の範囲が有利である。

また、上記反応に際しては、必要に応じて、トリメチル
アミン、トリエチルアミン、ピリジン、ソシクロヘキシ
ルカルボジイミドなどの反応促進剤を添加してもよい。

かかる条件下に反応は大体１〜２４時間以内、通常３〜
１２時間で終らぜることかできる。

なお、上記ｌ・リフェニルメタンの反応性誘導体と反応
せしめられる抗生Ｑｌｌ）％−，／’　Ｓ　−５は必す
しも半白（されたものを使用する必要は々く、前記抗生
物質Ｐ　Ｓ−５生産菌の培養物又ｊｄその培養物からｍ
体を分１ζ１（シた後の培養液を使用することができ、
或いは前述した単紐精製法に従って少なくとも部分的に
精製した粗製の抗生物質ｐＳ−５を使用することもでき
る。かかる部分精製物としては、例えば該培養液の活性
炭吸着溶出ａ細物；培養液のダイヤイオンＪＩＰ−２０
（７Ｈ菱化成工業（株）製）吸着溶出濃縮物：該屓縮物
をＱＡムーセファデソクス（ファルマシャ社製）に吸着
させグラソエント食塩濃度の９；４酸稜側液で、浴出し
、活性炭て脱塩した濃縮物：塩化ベンザルコニウムの存
在下塩化メチレンでの抽出濃縮物；クラウン化合物の存
在下クロロホルムでの抽出濃縮物を低温でのｐＨ３，５
におけるブタノール抽出濃縮・物などが挙げられる。

かくして得られる抗生物質ｐｓ−５トリチル訪導体は、
抗生物質の分野におけるそれ自体公知の種々の方法によ
り、反応混合物から分離することかでき、或いは精製す
ることができる。例えば、反応終了彼、先ず副生物など
の水溶性不純分を除去するため、反応液を水性媒体中に
あける。その際ｐｌＪをほぼ中性に保つため該水性媒体
としては中性緩衝液を使用するのが望ましい。次いて、
この混合液を例えば、酢酸エチル、ベンゼン、クロロホ
ルムなどの水と実質的に混和しない非極性不接溶媒で処
理して抗生物質ｐ　ｓ　−ｓ　）　ＩＪチル誘導体を該
有様溶媒層に抽出する。この抽出に際し、例えは食塩、
硫酸アンモニウムなどの如き塩類を加え、塩析効果によ
シ抽出効率を高めるようにすることかできる。

該溶媒層は、脱水芒硝なとで乾燥した後、それ自体公知
の方法に従い、１例えばバイオ・ピーズ５−Ｘ３　（バ
イオランド社製）、セファデックスＬ１ノー　２０　（
ファルマンヤ社製）々どにょるケ゛ル濾過；シリカケ゛
ル、アルミナ、フロリジル（アメリカ・フロリソン社製
）などを担体とする吸着クロマトグラフィーなどを適宜
組合せ且つ必をに応じて反復使用して、該トリチル誘導
体を単離することができる。

かくして、精製されたトリチル誘導体はさらに、例ｔ　
ばベンゼン、トルエン、キンレン、酢酸エチル、ソエチ
ルエーテノへ塩化メチレン、クロロポルム、ヘキサン、
石油エーテル（沸点範囲：３゜〜６０°（２）などの如
き溶媒単独または混合溶婬から再結晶させることができ
、これによってさらに高純度に精製することができる。

以上の如くして製造される抗生物質ＰＳ−５トリチル誘
導体は、分子構造中にトリチル基（トリフェニルメチル
基）を含む文献未載の新規碌装置であり、強い抗菌力及
びβ−ラクタマーゼ阻害活性を准する点で極めて特徴的
である。

該トリチル誘導体の理化学的性質及び生物学的性質を示
せば次の通りでるる。

Ａ）融点 上記トリチル誘導体は通常、８３〜８８°０の範囲内の
融点を示す。々お、不明細部：における融点の表示（ｄ
、コフラー法により１分間１℃の温度上昇速度て測定（
測定装置：矢沢和学器械工業（株）製、ＢＹ−１型微量
溶融点測定装置）した値による。

Ｂ）　紫外線吸収スペクトル λ　”　、　＝　３　１　５．５　ｎｍ。

ηＣａＷ Ｃ）　赤外線吸収スペクトル クロロホルム中における赤外線吸収スペクトルは下記の
特性極大吸収波数を示す、 ３４３０．３１００〜３０００．２９９０　。

２９５０．１７７０．１６９５’、１６６．５，１４４
５．１３４０．１２７５及び１１３０儂−１゜Ｄ）　溶
解性 水、ヘキサン及び石油エーテル（沸点範囲３０〜６０℃
）に実質的に冷浴；ベンセ゛ン、酢酸エチル、クロロホ
ルム、アセトン及びヅメチルスルホキシド Ｅ）　呈色反応 エールリッヒ試薬反応　陽性 塩化！・リフェニルテトラゾリウム　陰性反応 増化第二鉄反応　陰性 ヨード−塩化白金酸反応　陽性 塩素ートリヅン試架反応　陽性 二／ヒドリン反応　陰性 Ｆ）　物質の色 無色 Ｇ）　薄層クロマトグラフィー（７’ＬＣ）下記のＴＬ
Ｃプレート及び溶媒を用い、上記トリチル誘導体をＴＬ
Ｃにかけた時、下記のｊ＜　ｊ値を示す。

（ａ）プレコートしだ可撓性プレートし吸着剤：セルロ
ース、厚み＝１６０μ、蛍光指示柴：鉛ーマンガン活性
化ケイ酸カルシウム、不明細招−ではイーストマン・コ
ダック社−ｔｘｒクロマグラムンー）Ｎｏ，６　０　６
　５　Ｊを使用〕 ｉーグロパノール／水（８／７）　Ｒｆ＝ｏ．ａｘｎ−
ブタノール　Ｒ　ｆ　−１　１．　。

（ｂ）　プレコートしたガラスプレート〔吸着剤：シリ
カブール、厚み：０．２５ｉ＋ｍ、本グレートとして、
本明細書ではニー・メルク社製〃Ｃーフエルテイツヒゾ
ラツテン・キーゼルグル６０Ｆ２，４を使用〕 ベンゼン／アセトン（２／Ｎ　Ｒｆ＝ｏ．２９Ｂ）　β
ーラクタマーゼに対する挙動 プロテウス・２ブルガリス、シトロバクタ−・フロイン
ディ及びバチルス・セレウスのβーラクタマーゼにより
不活性化される。

上記トリチル誘導体は、後述する実施例９に示すように
、重クロロホルム中における１０　０　Ｍ１１ｚゾロト
ン核磁気共鳴スペクトルにおいて、テトラメチル７ラン
を内部標準とした場合、トリチル基に由来すると考えら
れる下記のケミカルシフトが認められ、これにより該誘
導体はトリチル基を含むことが確認された。

また、上記トリチル誘導体は上記の理化学的性質に加え
て、下記の元素分析結果の概算値から明らかな通り、分
子構造中に、炭素、水素、窒素及び硫黄原子を含むもの
である。

Ｉ）　元素分析 炭素　約６２％ 水素　約６％ 窒素　約４％ 硫黄　約５％ また、上記トリチル誘導体は、前記抗生物質ＰＳ−５そ
れ自体に比べてはるかに安定で１、はぼ中性乃至ｐｉ１
９以下の弱アルカリ性水溶液中６０℃に加熱した時、少
なくとも２０分以内では、該トリチル体の抗菌活性は少
なくとも７５％、・通常９０％以上保持される。この安
定性は公知の抗生物質チェナマイシン（特開昭５１−７
３１９１号公報）に比べて（ｒｉるかに優れている。

（１）抗菌スペクトル 本発明の抗生物質Ｊ）　５−５　トリチル誘導体は広範
囲の抗菌活性を有し、各種微生物、例えばスタフィロコ
ッカス）１９４　ｚ　ディプロコツカス風、ストレゾト
コツカス属、サル７す属、・ぐチルレス机等に属するダ
ラム陽性附に対し非常に強い抗菌力を示し、更に例えは
アルカリ土類金属、コマモナス属等に属するグラム陰性
菌に対しても非常に強い抗菌力を示す。

また、本発明の抗生物質ｐｓ−ｓトリチル銹導体は、例
えばエシェリヒア属、クレブシェラ属、ブロテワス属、
等に属するグラム陰性菌に対してもかなり強い抗菌力を
示す。

特に、本発明の抗生物質／’　５−５　トリチル誘導体
は、β−ラクタム環を有する抗生物質に対してｍｌ性を
有する、例えばントロパクター属、ゾロテラス属、エン
テロバクタ−属、クレブシェラ属、セラチア属、等（（
属するグラム陰性細菌に対して強い抗菌力を示す点で特
徴的である。

（２）　β−ラクタマーゼ生産珈に対する他の抗生物質
の抗菌力の増進 本発明の抗生物質ｐ　ｓ　−ｓ　）　ｌ、Ｊチル誘導体
は、シトロバクタ−・フロインディー、ノ０ロデウス・
ブルガリス、エンテロバクタ−・アエロケゝネス、セラ
チア・マルセセンスなどのβ−ラクタマーゼ生産菌に対
し、他の抗生物質、特にペニシリン系やセファロスポリ
ン系などのβ−ラククム系抗生物質の抗菌力を増進させ
る能力を有し、しかもその能力は多くの場合相乗的であ
る。

（３）生体内での活性 病原性ダラム陽性菌を感染させたマウスに投与した時、
著るしい治療効果が認められた。

（４）毒性 後記実施例９に示す通り、病原性ダラム陽性菌の感染を
治療するＣＤ５６量の約４倍量をマウスに投与したが著
るしい毒性は認められなかった。

かく（７て、本発明によれは、抗生物質ｐ　Ｓ　−５ト
リチル誘導体が上記理化学的性質及び生物学的性質を有
することを確認することにより、該トリチル誘導体の製
造に用いた抗生物質が目的とする抗生物質ＰＳ−５であ
ることが確認できる。

以上述べた抗生物質ＰＳ−５及びそのトリチル誘導体は
、前述した通シ、強い抗菌力を有し、グジム陽性及びグ
ラム陰性細菌による感染症の予防、′治療及び／又は処
置のだめの抗菌剤の活性成分として、人間のみならず、
人間以外の動物例えば咄乳動物、家禽類、魚類等に刻す
る細菌感染症の予防、治療、処置等のために有効に使用
することができる。

本発明の抗生物質ＰＳ−５又はそのｌ−１）チル計導体
は、経口的、局所的又は非経口的（静脈内、筋肉内、腹
腔内、など）に投与することができ、これら投与方法に
応じて、通常行なわれている如く種々の薬剤形態に製剤
して使用することができる。例えば、本発明の抗生物質
ＰＳ　−５又はそのトリチル誘導体は製薬学的に許容し
得る担体相別１、希釈剤などと共に、固体形態（例えば
錠剤、カプセル剤、粉剤、顆粒剤、糖衣錠、トローチ、
粉末スプレー剤、坐剤など）、半固体形態（例えは軟骨
、クリーム、半固体状カプセル剤など）、或いは液体形
態（例えば、液剤、乳剤、懸濁剤、ローション、シロッ
プ剤、注射剤、液体スプレーなど）に製剤することがで
きる。

本発明の抗生物質ｐＳ−５又はそのトリチル誘導体を含
有する単位投与剤型は、液体、半固体、固体の如何を問
わず、一般に０１〜９９重量％、好ましくは１０＝６０
重量％の活性成分を含有することができる。

これら製剤に使用［７得る担体材料、賦形薬、希釈剤等
の助剤の代表的なもの、並びに製剤方法についてさらに
説明すれば次の通りである。

経口投与のだめの錠剤およびカプセルは単位投与剤形を
とることができ、その除に使用し得る結合剤としては、
例えば、シロップ、アラビアゴム、ゼラチン、ソルビト
ール、トラガカンｒまたはポリビニルピロリドンなど；
賦形剤としては例えば、乳糖、白糖、でんぷん、りん酸
カルシウム、ソルビトールまたはダリシンなど；滑沢剤
としては例えば、ステアリン酸マグネシウム、滑石、ポ
リエチレングリコール、シリカなど；崩壊剤として例え
ば、じやが必もでんぷんなど；まだ湿潤剤としては例え
ばラウリル硫酸ナトリウムなどが挙げられる。錠剤の場
合通常の方法に従って剤皮で被うことができる。

経口用液剤は、油または水−懸濁剤、液剤、乳剤、シロ
ップ剤などの剤型にすることができ、１だ使用に際して
、水まだは他の適当な担体と混合製剤するだめの乾燥品
として提供することができる。これらの液剤は通常次の
ような添加剤を含有することができる：懸濁化剤例えば
ソルビトール、シロップ、メチルセルローズ、糖シロッ
プ、ゼラチン、ヒドロキシエチルセルローズ、カルボキ
シメチルセルローズ、ステアリン酸アルミニウムヶ゛ル
、水素添加した食用油脂など；乳化剤、例えば、レシチ
ン、ソルビタンモノオレエート、マタハアラビアゴムな
ど；非水担体例えばアーモンド油、分画したココナツツ
油、油状エステル、プロピレングリコール、またはエチ
ルアルコールなど；保存剤例えばｐ−ヒドロキシ安息香
酸メチル、ｐ−ヒドロキシ安息香酸ゾロピル、ソルビン
酸など。

坐剤は通常の坐剤基剤例えばココアバターまたは他のグ
リセリドなどを含むことができる。

注射剤はアンプル入りまだは保存剤含有の多投与用容器
入シの単位投与剤型で提供することができる。これは通
常油性または、水性担体による懸濁剤、液剤、乳剤の如
き剤型をとることができ、懸濁化剤安定剤および／−１
：たは溶解補助剤のような剤型を含有し得る。別法とし
て、前記活性成分を、使用時にノクイローソエンを含ま
ない無ｉ水てとかして製剤できるような粉末剤型とする
ことができる。

抗生物質ｐｓ−５又はそのトリチル誘導体はまた、鼻お
よびのどの粘膜、気管支組織を通して吸収されるに適し
だ剤型に製剤することができ、更に、粉末スプレー、液
体スプレー、吸入剤、トローチ、咽喉塗布剤など適宜の
剤型にすることができる。目および耳へ投薬するための
製剤は、液体または半固体状のカプセルとして提供する
ことができ、また点滴剤とすることもできる　局所に適
する製剤には軟骨剤、クリーム、ローション剤、塗布剤
、粉剤などが含まれ、これらは疎水性また（は親水性基
剤を用いて製剤することができる。

また上記製剤には、安定剤、結合剤、抗酸化剤、保存剤
、滑沢剤、懸濁化剤、活部１剤、矯臭剤、緩衝剤などの
取分を含ませることができる。

さらに本発明の抗生物質ＰＳ−５又はそのトリチルａへ
・ｋ体をニワトリ−ウシ−ヒツジ−ブタなどのための動
１力薬として・１史用する場合は５例えば、長時間作用
のなたは短１封１間崩、狐件の基剤を用いて乳腺内用？
ｌ（ソ剤として製剤することもでき、豆だ公知の方法に
仇って−ｕＡ’　Ｊ享飼料添卵イリとして調製すること
もできる。

本発明により提供さｎる上記薬剤は抗生物質ＰＳ−５又
はそのトリチルＢ５４ｉ導体のみを活性成分として含む
ことができ、或いは他の治療上廟用な活性成分を含甘ぜ
るようにしてもよい。

特に本光、明のわ１−生物質？Ｓ−５又はそのトリチル
ｒ’２　’ｊｆ一体は、前述した通り−β−ラクタマー
ゼ生産性、；、山開に対し、β−ラクタム系抗生物質の
抗菌力を相乗的に指進さぜる能力を有しているから、公
知のβ−ラクタム系抗生’ｌ：ＩＩＪ貝と併用するよう
にしてもよい。かかるβ−ラクタム系セ［生物質の例と
しては、ペンソルペニンジン、フエノオキシメチルペニ
シリンー力ルベニノリン、アンピンリンーアモ斤シシリ
ンなどのペニシリン系抗生物”Ｊ　ｉセファロリジン−
セファロチン−セファゾリン、セファレキシンーセホギ
シチンーセファセトリル、セファマンドール、セファビ
リン、セフラソンーセファログリシンなどのセファロス
ポ゛リン系抗生物質を挙げることかでさる。

本発明の抗生物質ＰＳ−５又ｉｄぞのトリチルＢｉ導体
を上記の如きβ−ラクタム系抗生物質と併用する場合−
両者の割合は臨界的ではなく、広（＋：」囲にわたって
変ることができるが、一般に抗生物Ｔ」ＰＳ−５又はそ
のトリチル８〕５導１／（（対該β−ラクタム系抗生物
〕贋の、娘量比で表わして、２０１乃至１　：１５０−
好捷しくは１０：１乃至１：１００の＆Ｌ！囲とするこ
とができる。

本発明の抗生物質ＰＳ−５又はそのトリチル誘導体の投
与量は、治療するべき対象及びその症状、伯主の体重−
感染型、投与方法および投与回数によって太幅ｒ（変え
ることができるが、通常１日当り０．０５〜５００・）
ｌグ／１；ｇ体重−特に好ましくは０、５〜２００　ｍ
！／／　ｋｌ？休１体を−１回で又は数回に分けて投与
するのが有利である。しかし専門医の判’Ｊｊ−ｔ、個
体差、症状の軽重等に応じて、上記投与針１ｉ１１ｊ　
Ｉｌ’ｌより少ない１１１：又は多い凧を投与すること
も可能である。

本発明の抗生物ＩＪＰＳ−５又はそのトリチル誘導体は
上記した如き薬剤の形で使用し得るのみならず、動物飼
料中に直接食まぜることもでき、又は動物飼料用添加物
尤の形にしてもはく□、或いは食品保存用の殺ｍ剤乃至
防屑剤の活性成分としても１史用することができる。

次に実施例により本発明をさらに説明する。

なお−以下の実施例において用いる抗菌活性物質の定性
及び定量は下記の方法で行なった。

（１）　ビ万アッセイ法 一夜一二ュートリエント・アガー上で培養したコマモナ
ス−テリケ８すＣＣａｍ、ａｍｏｎ、ａ、ｓ　ｔｔ＋ｒ
ｒｉｇｇｎ、ａ）Ｂ−９９６の菌体を、ニュートリエン
ド・ブロス中に）旨汲させ、その菌体に由来する５　１
　Ｑ　７？、ｍ吸光度が、００４を示す種母液をつくる
。極東粉末ブイヨン（）岐東製県工業ｃ株）製）０８％
及びバクト・アガー（ディフコ社製）１％よりなるとけ
た外大培地に種母液１％を接種し、これを７　ｍｌｊず
つ９ｃｍ径のベトリ皿に分注し固化させて、コマモナス
検定板とする。

一夜、ニュートリエン〒、プロス中で振盪培養したスタ
フィロコッカス・アウレウス（Ｓｔａｐｌｒ、？／−１
ｏｃｏｃｃｕｓ　ａｕｒａｕｓ）　ＦＤＡ　２０９　Ｐ
の培養液をニュートリエンド・プロスで５０倍に４’Ｍ
ｉ釈して種母液とする。種母液１％を接種した。極東粉
末プイヨン（極東製梨工業（株）製）１％及びパクト・
アガー（ディフコ社製）１係よりなるとけた寒天培地７
　ｍｌずつを９Ｃｒｎ径のベトリ皿に分注し、固化させ
てスタフィロコッカス伏定板とする。

−夜ニュートリエント・アガー上で培養したアカリケゞ
ネス・フエカーリス（Ａｌｌｃａｌｉｇｔ＋ｎｇｓｊ’
ａｅｃａｌｉｓ）　Ｂ　−３２６の函体を一二ュートリ
エント・ブロス中に懸７蜀させ、その菌体に由来する６
１０７Ｌ？ル吸光度が００２を示す種母液をつくる。

倹東粉末ブイヨン（％ｇ東製薬工ｇＨ＞　ｃ株）製）０
５係及びパクト・アガー（ディフコ社製）１％よりなる
とけた寒天培地に栓母液１％をＪ殻種し−これを７　ｍ
ｅずつ９α径のベトリ皿に分圧し固化させてアルカリケ
゛ネス灰定板とする。

被検ｌｉ；Ｅは通常８ｍｍ径のノξルプ・ディスクにし
捷せ、Ｐ紙上に置いて余分の液を除去した後、検定板上
に置き−３５℃で２０時間培養する。阻止帯直径をセフ
ァロリジン標準液のそれと比較して、ｌ　ｍｌ当りのセ
ファロリジン即位をめる。

本明細書においては、セファロリジン１００μｊｊ　／
　ｍｌのそれと同じ阻止帯直径をしめず抗菌力価を１０
０セフアロリノン単位／　ｍｌ！とする。捷た一固体試
料１〃！グを１　ｍｌに溶解した溶液が、１セフアロＩ
Ｊ　シン単位／　ｍｌの抗菌力価をしめした時、その固
体試料の比活性を１セファロリヅン−Φ泣／ノ〃７とす
る。ただし−被販液によっては、検定菌により次定され
るセファロリジン単位が異るので、使用する検定菌の種
類に応じてそれぞれコマモナス・セファロリジン単位（
ＣＣＵと略す）、スタフィロコッカス・セファロリジン
単位（ＳＣＵと略す）、アルカリケ゛ネス・セファロリ
ジン単位（）↓ＣＵ）と１略す）と表示する。

なお、抗生物質ＰＳ−５トリチル誘導体１μＩｕｌＯ，
８コマモナス・セファロリジン単位を示ス。

（２）　ビオオートグラフィー 上記ビオアッセイ法において、９ぼ径ペトリ皿を用いる
代りにクチ３２ぼ×ヨコ２４鍜の皿を用い、被、験菌を
接：１’ｌｊ　した寒天培地ｌ　Ｑ　Ｑ　ｍｅを分注し
固化させて太ペジ漁＞ｊ−、板をつくる。

彼、固液の展開１つえのペーパークロマトＦ紙を上記で
作った大型検５せ板の寒天表面に張り、１５分後取り除
き一犬型検定板を３５℃−２０時間培養し一阻止帯の位
置より被−ノξ−りロマトグラムのＲｊ値を算出しく疋
性）、且つ阻止帯の大きさから半定量すること〃・でき
る。ヵ１層りロマト板を用いる場合は、？７ｒ４代を介
して、成分面がふれるように×４天表面に張り、１５分
１文取り除き、上記と同様操作により足性及び半定量を
行なう。

実施例１ ５００　ｍ１３ｇ　エルシンマイヤーフラスコＫ　Ｉ　
ＯＯｍｇの下記組成の種母培地（ＳＥ−４）を入２れ一
常法により−１２０°Ｃ−１５分間滅拍した。一方、試
験管内寒天斜面上でストレプトミセス・エスピーＡ　２
７１　（Ｓｔｔａｐｔｏｍｙｃｅｓ　ｓｐ、Ａ　２７１
　’Ｊ菌抹の胞子を充分漸生させ、この試験管に００２
％のツイン８０（アトラス社製、界面活性剤−Ｔｗｅａ
ｎ”’８０）水溶液をＬＯｍｌ入れ、軽く鳳拌して胞子
１ｙ満液を調製した。この胞子性濁液１１ｎｔ、を先の
梗旬、Ｌａ地に接種し−２８℃で４８時間ロータリーシ
ェーカー（２０Ｏｒｐｍ−振幅７　Ｃｒｎ’）で振盪培
なした。

この２ｔＭ母堵養’ｇ１２ｍｌ！を１００　ｍｌの下記
組成の生産培地を含む５００　ｍｌ容エルレンマイヤー
フラスコに接種し、２８°Ｃで４８〜９６時間ロータリ
ー７エーカーで振盪培養した。

種母ｊ′呂地（ＳＥ−４）の組成 ビーフェキストラクト（ディ　０．３％（Ｗ／Ｖ）フコ
） バクトートリプトン（ディ７　０５　〃コ） グルコース　０１％（ＷＩＶ　） 可溶性でんぷん　２４　〃 酵母エキス　ｏ、５〃 炭酸カルシウム　ｏ、４〃 脱脂大豆粉　０．５　ｐ ７Ｊｌｉ７５ｃ殺菌ｉ１」） 生産培地の組成 （１）　ＡＧ−１培地 グルコース　１５％（しＶ／Ｖ　） コーンスターチ　２５　〃 コースティープリカー　２．Ｏｒｒ 乾燥酵母　１．Ｏｔｒ ＤＬ−メチオニン　ｏ６１　〃 ｐｌｉ７．２ｃ殺菌前） （２）　ＡＧＡ−２培地 グルコース　１．５％（ＷＩＶ　） ポテトスターチ　２５係（ＷＩＶ　） コースティープリカー　２０　〃 乾燥酵母　１０　〃 塩化コバルト（ＣＯＣｌ２・　０．０００１３　Ｎ６１
１□Ｏ） ｐＨ６，５（殺菌前） （３）　ＡＧＢ−１ｉ台地 マルトース　３．０％（１７＋／／／ｆ　）コースティ
ープリカー　１．０〃 乾繰酵母　１・０　” 塩化：Ｉ　ハ／ｌ／　ト（ＣｏＣ１２−０，０００１ｒ
ｔ６Ｈ２０） ｐＨ６，５（殺菌前） Ｃ４）　ＡＧＢ−４１培地 マルトース　５０％（ＷＩＶ　） 可溶性でんぷん　１．ｏ〃 グリセリン　ｏ、３ｔｒ 乾燥酵母　２５　〃 食塩　０５係（ＷＩＶ） リン酸二カリウム　００５　ｌｌ 炭酸カルシウム　０．３　ｒｒ 塩化コバルト（’ＣｏＣｌ２・　０．０００１３　／ｒ
６Ｈ２０） ｐｌｉ７．Ｏｃ殺菌前） （５）　ノ１ダＬ　−１９培地 グリセリン　４０％（ＷＩＶ） ペプトン　０５　、。

グルコース　０２　ＩＩ ポテトスターチ　０．２　ｎ 脱脂大豆粉　０．５　ｔｔ 乾燥酵母　０５　〃 食塩　０．５〃 炭酸カルシウム　０．２　ｔｒ ｐｌｉ６．４ｃ殺菌前） （６）　ＡＧＯ−１培地 大豆油　３０％（Ｗ／　Ｖ’） 乾燥酵母　２．　Ｏｎ 食塩　０５　〃 リン酸二カリウム　００５　〃 ・証酸マグネシウムｒＪｉｇｓ０４・　００５　〃７Ｈ
２０） 炭酸カルシウム　０３ 填化コバルト（ＣｏＣ１２・　０．０００１３　〃６Ｂ
、、０） ｐＨ７，Ｏｃ殺菌前） 各培養フラスコより経時的にサンプリングし、遠心分能
してえた上澄液について、ディスクによるビオアッセイ
法により前述した方法で抗菌力価を測定した。コマモナ
ス・テリグナＢ−９９６−スタフィロコッカス・アウレ
ウスＦＤＡ２０９Ｆおよびアルカリゲネス・フエカーリ
スＢ−３２６を検定囚とした各培地での７２時間の抗菌
力価け次のとおりであった。

衣−５ ＡＧ−ｔ　７．８　１，０５　１．１　４２０．４．Ｇ
Ａ−２７，８７２１，１４２０ＡＧＢ−１７，９１０５
０，９３４Ｏ Ａ、（Ｊｄｉ−４１７，９１８５８，９４４０１げＬ−
１９７，０６０１，４１２２ ＡＧＯ−１７，２８７０，９３４０ 実施例２ 実ＭＬｈ例１と同じ方法で培養した種母培養液１００ｍ
１を−１５ｄのＭＬ−１９培地を入れた３０６答ツヤ−
ファージンターに接種し、２８℃、２０　ｏ　ｒｐｍ：
）％；拌−７５６／分通気で−９６時間まで通気攪拌培
養ヲ行った。消泡剤として信越シリコンＫＭ　−７５（
信越化学（株）製）ケ０．０５％１史用した。ＩＩＥ時
的に培養液をザンプリノグし、遠心分巨した上直畝につ
いて抗国力価を供１ｊ定した。

谷時ｒＨｉの抗菌プ月１ｌｉｌは次のとおりであった。

衣−６ 実施例３ ストレプトミセス・エスピーＡ　２７１　（Ｓｔｒｐ、
ｐ−ｔｏｍｙｃｇｓ　ｓｐ、Ａ　２７１　）　”＃実施
例１と同じ方法で培養して、フラスコ釉母培養教をつく
シ、これの１００ｍ１Ｑ１５１の５Ｅ−４Ｌ＠地を入れ
た３０ｅ答ヅヤーフアーメンクーに接種した。２８℃で
−２００ｒｐｍ　４ｉ拌−７，５１分通気で−２４時間
培養し−この堵父牧１１ヶ１００１の４４Ｌ−１９培地
を入れた２００１合、ステンレスタンク発酵槽に接４４
　Ｌ、２８℃ｆ−］、　００　ｒｐｍ撹拌−５０ｅ／分
で７２　＋＋、；同通玄（１，６拌培ゾ、した。培養液
の以心分１．４１ｉｊ上澄の抗ｌ力１曲は６０　ＣＣＵ
　／　ｍｌテ９　ツだ。

培狭敵に５％（”ｖＶ　／　’Ｖ　）！１１のドブコノ
ミーライト（東回バーライｌ−（抹）装）茄３４を添加
しフィルタープレスで〆過して、８０ｅの（ｐ７改をえ
た。

実施例４ 活性炭吸唐請、ｉ伯物の調製 実施例１０方法で描なした一Ａ４Ｌ−１９培地７２時−
１培養のフラスコ１０本の椙養液を集め、トプコ・ξ−
ライト（東與パーライト（抹）製）Ａ；３４を２％（’
Ｗ／Ｖ）添ノノロしてブフナー痛斗で吸引瀘過して、ノ
音養戸、゛杖８００　ｒ＋＋ｌｉをえた。ｐＨ７〜８で
あることを確認の１友、翁製白う冷活・１生炭（武Ｉｉ
Ｉ薬品工業（株）装）１６１を刃口え−１５分間４Ｔｒ
拌の後、遠心分し４１により沈誠を集めた。８００　ｒ
＋α、の洞留水で洸浄し症心分離・鏡、４００　ｍｌの
５０係（Ｖ／Ｖ　）アセトン水を刀０えて−３０分間色
温で、切手し、これを遠心分離して上漬τえた。ロータ
リーエバポレーターを用い、これ葡３０〜３５°Ｃで濃
縮して５Ｑｍｌの屑縮販をえた。かくして、５２　ＣＣ
Ｕ　／　ｍ／Ｘの力価の培養液から８００　ＣＣＵ／　
ｍｅの力ｉ１．ｉ［ｉの講釉散かえられた。

比較例１ β−ラクタマーゼ阻害活性を翁する抗生物質として特公
昭５０−１３５２９４及び特開昭５０−１４０６９２号
公報に提呆されているＡ７Ａ４４５５０（複合物）が一
本発明の抗生物質ＰＳ−５と別異の物質であることを立
証するため一以下の実験を行なった。

Ｍ＃４５５０（複合物）生産菌として特開昭５０−１３
５２９４および特開昭５０−１４０６９２号公報に記載
されているストレプトミセス・オリバセウスノｌ’ｌ”
ＣＣ３１１２６（二ＡＴＣＣ２Ｌ３７９　／　Ａｉ　３
　’）−同ＡＴＣＣ２Ｌ３８０および同Ａｉ”ＣＣ２１
３８２を、大豆粉（味の素社製ミート特等”）　１．０
％−グルコース２０％、炭酸カルシウム０２％−および
塩化コバルト（Ｃｏｃ　１２・６Ｈ２０）０００１％、
（殺菌前ｐｌｆ７．ｏ’）の組成の培地１００　ｍｌを
入れて収繭した５００ｍ１芥エルレンマイヤーフラスコ
にそれぞれ接種し、２８°Ｃで７２１１ｇ１１ＷＪ、ロ
ータリー悪盪培養を行い、培養Ｐ液中の活性成分を特’
４Ｊ白鷺活性炭に吸着させ、その５０係アセトン溶出液
を（農Ｍｉ１４後−東洋Ｐ紙Ａ３０（東洋Ｐ　Ｍｈ　（
＋未）製）で８０％アセトニトリル／トリス／Ｌ″ＤＴ
Ａ（アセトニトリル１２０ｍ１−士Ｍトリス（ヒドロキ
シメチル）アミンメタン−塩酸（ｐＨ７，５）：に２衝
液３０　ｍｌニー　青Ａｌｘｆｖンジアミン四酢酸ナト
リウム垣水溶液（ｐＨ７，５）１ｍｌからなる）溶媒で
下降法ペーノξ−クロマトグラフィーを行った後、コマ
モナス・テリブナＢ−９９６を俣定ｊ４としてビオオー
トグラフィーをｂっだ。

捷た、本発明の前記Ａ２７１菌株を−グリセリン４０係
、ヘフトン０５％−グルコース０．２　％、ポテトスタ
ーチ０．２％−脱脂大豆粉０５％−乾燥１ヒｆ母０５％
、ｊゾａｃ１０．５％および炭酸カルシウム０２％、（
殺菌前ｐ＃６．４）の組成の培地で上記と同イ釆に培養
した培養′Ｐ液を同様処理してビオオートグラフィーを
行った。その結果は一６Ｓ付図面第１図に示す通りであ
る。第１図中Ａはストレプトミセス・オリバセウスＡＴ
ＣＣ３１Ｌ２６Ｃ＝ＡＴＣＣ２１３７９／Ｉｖｉ３）の
、Ｂは同Ａ　ｉ’　ＣＣ２１３８０の−Ｃは同ＡＴＣＣ
２１３８２の、およびＤは本発明のストレプトミセス・
エスピーＡ２７１凶株の溶出ｇλ、Ｉｄ　故のビオオー
トグラムである。本図から明らかな通り一〇の生産物で
ある成分Ｉ、すなわち本発明の抗生物質ＰＳ−５は、Ａ
、Ｂ、およびＣの生産物中には認められず、また、Ａお
よびＣの生１ＺＱｌである成分■および、Ａ−Ｂ、およ
びＣの生産物である成分■は明らかに成分Ｉとは異なっ
たＲ、ｆ佃：をしめす別異の、＋ｌＡ寅であることが半
］Ｊる。すなわち、ストレプトミセス・エスピーＡ２７
１田抹の生産物である抗生物質ＰＳ−５は一特開昭５０
−１３５２９４及び５０−１４０６９２号公様に記載さ
れたＭｌυ４ｓｓｏｃす合物）生産困の生産物とは明ら
かに区別される新規な抗生ｑｙ／Ｊ質である。

実施例５ ダイヤイオンＢ　Ｐ−２０吸漸溶出濃縮物の調製実施例
１０方法で４６したＭＬ−１９培地７２時間培養のフラ
スコ１５０本の培養液を集め、エテシンノアミン四酢酸
二ナトリウムをｌ　Ｑ　Ｑ　Ｉｈグ添加し、ドブコノぐ
−ジイト届３４を２ｔｌ）（Ｗ／Ｖ）添加し一犬型ブフ
ナー副斗で吸引Ｐ　ｉｆｆして培養ｐｗｉ−１４，１、
ｅ　（ｐＨ７，９）をえた。これを１Ｍ径７ａｔ−尚さ
５０ｃＴｎのダイヤイオンｌ１Ｐ−２０Ｃ三菱化成（休
）Ｉ！Ｊ　）カラムに吸着させ、Ｍ留水７ｅで洗ａｊ′
１久、５０％（Ｖ／Ｖ　）メタノール水で溶出した。

名奴戸液および各溶出画分の力価は次の通りであった。

才（−７ 培養ｐ液　１４，１．００　４０ 溶出画分１　１１．（１０００ ２５０００ ３５０００ ４５０１９ ５５０３７ ６　５０　７２ ７　５０　１５０ ８　５０　２７０ ９　５０　８５０ １０　５０　８７０ １　１　５０　３００ １２　５０　２７０ １３　５０　２３０ １４　５０　２００ １５　５０　１７０ １６　５０　１２５ １７　５０　１０５ １８　５０　８７ １９　５０　７．５ ２　０　５　０’　６　０ ２１　５０　４８ ２２　５０　３８ ２　３　５　０　’２７ ２４　５ｏ　１ｇ ２５　５０　１４ ２６　５０　１０ ２７　５０　Ｑ ２８　５０　０ ２９　５０　Ｑ 画分８から画分１４までの溶出液を集め、ロータリー・
エバポレーターを用い−３０℃以下で約１００ｍ１まで
製編し、そのまマｆｈ液を凍結乾燥して比活性５４　Ｃ
ＣＵ　７ｍｇの黄褐色粉末２．６．９えた。

この粉末はペーパークロマトグラフィーおよび薄層クロ
マトグラフィー分析によって、その中に含有される抗菌
活性成分は１棟のみであることが確認された。従って一
以下の該抗菌活性成分−すなわち抗生ｍ％Ｐｓ−ｓの確
認においては、コマモナス・テリブナＢ−９９６に対す
る抗菌活性を指標として、該抗生物質を追跡し、その抗
生物質が１次の如き性質を有するものであることを確認
した。

１）　安定性： 抗生物質ＰＳ−５を含む上記黄褐色粉末を５００ＣＣＵ
　／　ｍｅになるように蒸留水に溶解した。別にＭ／１
５りん酸二カリウム水溶液をつくり、これに５Ｎりん１
−トまたは５Ｎ水酸化ナトリウムを加えてｐｌｉを調北
し、ｐＨ３〜９の各ｐｌ−１の（容赦を調製し、ｌ＋＋
＋ｉつつシミ、験管に入れた。この各ｐＨの溶液中に、
はじめに調製した抗生物質ＰＳ−５含有溶液を１ｍｇづ
つ加え一少濱の５Ｎりん酸または５Ｎ　７’ＪＣｅ化ナ
トリウムにて、１プ［要のｐＨに調整した後、６０℃に
保った湯浴中に３０分間浸し、充水冷却後、少量の５Ｎ
りん酸または５Ｎ水酸化ナトリウムにてｐＨを７．０に
調整した。対照は、ｐＨ７，０の溶液を氷水中につけて
おいたものを用い、コマモナス・テリブナＢ−９９６を
被・塗置とするビオアッセイにより、残存活性を測定し
、対照の活性を１００％として表わした。結果は次の通
りであった。

この結果から抗生物質ＰＳ−５はｐ　Ｉｉ　６．０〜９
．０の眺囲内の水、＠液中６０°Ｃで３０分間加熱して
もかなり安定であることがわかる。また抗生物質ＰＳ−
５は低温下においては、低ｐＨ卸囲でもある程度安定で
−例えば−一１７℃でｐＨ３，ｏに５分間放置した後に
少くとも３０％の残存活性をしめした。

２　）　イ＝　解性 抗生物質ＰＳ−ｓはｐＨ６〜９の水に可溶である。すな
わち１本抗生１４ノ質はｐＨ７の水のみならす、塩酸に
よシｐｌｉ６及びそれより商いｐｌＪの微酸性に調整さ
れた水性媒体−及び水数化ナトリウムにより７ｙＨ９以
下の弱アルカリ性に詞禁された水性媒体に易溶である。

甘だ、抗生物質ＰＳ−５の黄褐色粉末２５　ｍｌ／をつ
ぎの各々の溶ｆｌＪ　Ｏ，５ｍｌと共に２０℃で１分間
１１’ｎ拌した後不洛物を分配除去し／ヒ各溶媒中の抗
１．Ｉ５ｉ活性は：べ神前の苗量色粉末２５　ｍｇに含
寸扛る抗菌活性にズ・１してつきに示す割合であった。

この結果から、抗生物質ＰＳ−５は２０℃において、メ
タノールに潴解し、エタノールに微温であシ、酢酸エチ
ル及びベンゼンには実實的に溶解しないと祐一定される
。

３）　）専Ｊ曽クロマトグラフィー（ＴＬＣ）下記のＴ
ＬＣプレート及び溶媒を用いて前詔黄・１局芭粉末−ｑ
Ｔｒ、ｃにかけ前記ビオアッセイ法により灰量したとこ
ろ、抗生１．ｉｙｌ＠　Ｐ　Ｓ　−５は以下に：　示す
Ｒｊ１＊、’を示した。

（ａ）アビセル■ＳＦセノｙｏ−ス博ｊＭフツ−ト〔フ
ナコン薬品（抹）製〕１史用 下に同じ〕 ｔ−プロパツール／水（７／３　）　Ｒｊ二０９６（ｂ
）／リカケ゛ル薄層プレート（ニー・メルク社製；ＤＣ
−フエルテイソヒプラッテンキーゼルケゝル６０　Ｆ２
５．　）　１更用 工ｐ　／　−ル／水（’ｌ／３　）　Ｒｆ’　＝０，８
２ｎ−プロノｅ／−ル／水（７／３’）　Ｒｊ’＝０．
７７東洋ｐ紙扁５０〔東洋沖紙（株）製〕を用い−下記
の溶媒を用い、ｉｌ」記黄掲色粉末をペーパークロマト
グラフィーにかけたところ、抗生物質ＰＳ−５は下記の
Ｒｆ値を示した。

ｎ−プロｉｅ　／　−ル／水（７／３）　Ｒｊ’＝０．
６８？Ｌ−プロパンール／ｉ−プロノξ　ｌビｊ’＝０
．７０ノール／水（７／７／６　） アセトニトリル／水（８／２）　Ｉン、／’＝０．３６
エタノール／水（７／３　）　Ｒ１’＝ｏ６３（註１　
）　：　７セ）＝）　’）ルｌ　２０ｍｅ−ｐｈｌ　７
．５（７）壱Ｍトリス（ヒドロキシメチル）アミ ノメタン−塩咳緩１ｉＩｉＪ数３０罰及びｐＨ７５の−
Ｔ址ｈｌエチレシンアミン四ｂりｌｌナトリウム親水溶
散１鮮から成る混せ溶 媒。

尚圧Ｐ紙゛ぼ気泳動装置（サパント・インスソルメント
社製、高圧電＃ＩｉＶ　３０００　Ａ、泳動槽ＦＰ１８
ｏＡ）を用い、東洋Ｐ紙ノア６、　ｓ　ＯＣ東洋Ｐ紙（
抹）製］上で一前記黄褐色粉末を電気泳動にかけた所、
下記のｐＨの緩衝液中で下記の挙動を示すことがわかっ
た。

（１）　水３０００　ｍｌ、バルビタール３．３　ｇ及
びパルビタールナトリウム２５５ｇから成るｐＨ８６の
緩衝液中、４℃で−４２Ｖ／のにて３０分間通電すると
１場・甑側へ２８　＋ａｍ移動した。

（２）１　水２７００　ｍｔ−酢酸２４０Ｍ及びギ酸６
０〃１ｆから成る７Ｊ　Ｉｉ　１．９の緩衝液中、４℃
で７５Ｖ／ｃｘにて２０分間通電したが移動は確認され
なかった。

６〕　抗菌活性 （１）　抗１ヌベクトル プレイン　ハート　インフユーソヨン培地′栄研′　（
栄研化学（抹）製）を用いた液体布釈倹定法で抗生物質
ＰＳ−ｓの各植被験菌に対する最小発１］阻止単立を測
定した。

抗生物質ＰＳ−５の黄褐色粉末を２７０ＣＣＵ／　’　
〜５４　ＣＣＵ　／　ｍｌ　ノａ　度ｈＱ　囲Ｋ　入ル
ヨウＫ、ｐ　Ｉｉ　７．０　（７）　プレイン　ハート
インフユーノヨン培地ゝ栄研′　（栄研化学（抹）製）
に溶解し、これを同じ培地で倍数稀釈して、抗生物質Ｐ
ｓ−５のる釈系列を調製した。この席次系列に一上記と
同シブレイン　ハート　インフュージョン培地に２８℃
で１８時間振盪培養して得た下記表−８に示す各種被検
菌の種母液を、接種後の菌数が大略Ｉ　Ｘ　Ｉ　Ｏ’　
／ｍｌになるように接種し、３５℃で２０１荀間靜置培
養し、しかる後生育の有無を観察し、生育の認められな
い最低一度単位を−その菌に刻する抗生物％ＰＳ−５の
最小発育阻止単位とした。

結果は下記表−８の辿りである。

（２）＋刷性菌に対するペニシリン系およびセファロス
、１５１Ｊン系抗生物質の抗菌活性の増進（Ａ　）直ｉ
　９　ｃｍのベトリ皿に、ペニシリンＧまたはセフアロ
リジン５０μ ７、０ニユ一トリエンドアガー１５ｍτを入れて固まら
せ，これを下＋＋・、・とじ、その上に、βーラクタマ
ーゼ生産性のβーラククム劇性菌を接種した同培進１０
ｍｆｆを匝して固まらせーこれを上層とした。

この表面に種々の感度の抗生物質ＰＳ−５を含む水浴液
をそれぞれ２５μｌ注加した直径８ｍｔｎのパルプディ
スクを置き，３５℃で１８時間培養後、ディスク周辺の
阻止円の大きさを観衆した。対照トシテベニ７リンＧ及
びセファロリヅンのいずれも無隙刀日の同じ培地で同様
の実験を行った。その結果を下記表−９に示す。

上記結果によれば、単独では抗菌力を示さない制度のペ
ニシリンＧまたはセファロリジンに単独では抗菌力を示
さない濃度の抗生物質ＰＳ−５を添加して明らかな抗菌
力の増進が認められた。

（Ｂ）この抗菌力の増進は相乗的であることは次の実、
験で確かめることができた。栄養冶地中にβ−ラクタマ
ーゼ生産性のβ−ラクタム耐性園、プロテウス・ブルガ
リス・Ｐ−５をＪｋ４４して固らせたニュートリエンド
アガー辰面に、ペニシリンＧ才たはセファロリジンをし
捷せた短冊形１紙片と、抗生物質ＰＳ−５をしませた短
冊形ｒ紙片とを、同じ抗生物質の短冊同士または異る抗
生物質の二本の短冊が互に父わるように置き、３５℃で
１８時間培養した所、適当な一度腑囲では抗生物質ＰＳ
−５の短冊をペニシリンＧまたはセファロリジンり短冊
との交点部分にのみ阻止帯が観察され−同じ抗生物質の
短冊の交点部分には阻止帯が認められなかった。この細
長から、単独では勿論のこと２倍濃度でも阻止器を与え
ない上記２神の抗生物質を１倍濃度すつ重合することに
より１両堝゛は相乗的に抗菌力を増進して阻止帯を与え
たとＭ　ＪＱ４することができる。

（３）生体内での活性 スタフィロコッカス・アウレウス・スミス株ヲマウス当
５５ＸＩＯ’、ｊｉｌｌ］胞ずつ腹腔内に感染させたマ
ウスを用いて、抗生ｖＪ質ＰＳ−５の生体内での感余始
療活性を８４：１足した。感架源接種後直ちに負塩水に
溶解した該物置を含む試料を皮−ト投与し、７２助、ｌ
Ｖ１生死を邑察した。雄のｄｄｙマウス（静岡）を用い
た場合のＣＤ、。は８．１００　ＣＣＵ／に９であった
。

７〕　毎　註 抗生物質ＰＳ−ｓを含む注射液を雄のｄｄｙマウス（＃
岡）に１６２．００　、ＯＣＣＵ／ｋｇを皮下投与して
７２時間叔祭を続けたが死亡例は見られなかった。

抗生物質ＰＳ−５を含捷せたコマモナス瑛定板で直径３
８凍の阻止円を与える溶液は、プロテウス・ブルガリス
・Ｐ−ｓのβ−ラクタマーゼを添加したコマモナス検短
板では直径２１．５闘の阻止円を与え、またシトロバク
タ−・フロインディ・Ｅ−９のβ−ラクタマーゼを添加
したコマモナス・険定板では直径２１．５１１１＋Ａの
阻止円を与えた。この結果より、抗生物１１１ＰＳ−ｓ
は、プロテウス・ブルガリス・Ｐ−ｓおよびシトロバク
タ−・フロインディ・Ｅ−９の生産する／メーラクタマ
ーゼで不活性化されることが判る。

更に＋　ＭｉＩ記大喝色粉末中の抗菌活性成分（抗生物
質ＰＳ−５）にＡ」するβ−ラクタマーゼの作用を調べ
た。

使用したβ−ラクタマーゼは、構成的ペニシリナーゼ生
産菌バチルス・リケニホルミス（Ｂａｃｉ−１ｈｂｓ　
ｌｉｃ　）Ｌｇｎｉｊ’ｏｒｍｉｓ）　７　４　９　／
　Ｃ（Ａ　７’　Ｃｑ２５９７２）および訝導的ペニシ
リナーゼ生産菌バチルス・セレウスＣＢａｃｉｌｌｕｓ
　ｃｅｒｔｔｕｓ）　５６９（ＡＴＣＣ２７３４８）の
培養Ｐ孜から、吸洒カラムクロマトグラフィーで部分的
にｆｉ７Ｎしたものである。

これら連索調製物のペニシリンＧに対する鉢糸力１１１
ｊは、バチルス・リケニホルミスｐ　ｇ　１６．６００
単位／　”−バチルス・セレウスＩＶ素２６．９００単
位／ｉ＋ｔ（３０℃、　ｐＨ６，８−Ｍ／　ｌ　Ｏりん
酸緩制液、ヨードメトリー法）であった。なお、この場
合の「１革位」とは３０°Ｃ１ｐＨ６，８で６０分間に
１μモルのペニシリンＧｆ：分解する酵素カイ曲をいう
。

バチルス・リケニホルミス酵素０．２　ｍｌまたはパチ
ルス・セレウス酵素０．１．２５　ｍｌ　（それぞれ約
３．３００単位のベニシリナーゼを含む）を−前記のコ
マモナス・テリケ゛す動を接種した寒天培地１００　ｍ
ｅ　ＶＣ’）ＪＩｉえてペニンリナーゼ含有のコマモナ
ス検定板を１乍製した。

対照検定板としての酢累不含コマモナス検定板を含め合
計三棹の灰だ仮における抗酉力価を常法により８Ｆｕｎ
ペーパーデイスクでＴＥｊ　＞Ｒした。抗生物＠ＰＳ−
５及び対照としてのペニシリンＧ、セファロリジン、が
しめず阻止帯の大きさは下記表−１０、表−１１及び表
−１２に示す通りであった。

表中、検定板１は１′、を素を含有せず、検定板■はバ
チルス・リケニホルミス６累を、そして検定板■はバチ
ルス・セレウス酵素をそれぞれ含有するものである。

以上の結果から明らかな通り、本発明の抗生物質ｐ　ｓ
　−ｓ　ｒｔ”ｒ−バーｙ−ルス・セレウス５６９（７
）ペニシリナーゼ（β−ラクタマーゼの１　ｆ、Ｍ　）
によって比較的容易に不心・ｈユ化され−またーバチル
ス・リケニホルミス７４９／Ｃのベニシリナーゼによっ
てもある程度不活性化される。この拳実は抗生物質ＰＳ
−５の分子中にβ−ラクタム環又はその類似猿４（必り
が存在することを示唆している。

９〕　メーラクタマーゼ阻害ン占性 ＥＲ Ｃｔｌ＊Ｉ定法〕定法−ラクタマーゼ阻吾領−Ｊ５ｏ　
はβ−ラククマーゼによるセファロリノンの加水分解を
１０分間（基質冷別段１分から１１分の曲）に５０％１
）１１止するに必要な！ｒ／１ノ質の桁を衣わす。セフ
ァロリソンか加水分Ｆ＋４される割合は、２５５ｎγ・
己における吸光度の減少と測足することによって知るこ
とができる。β−ラクタマーゼとしては、アフィニティ
ー・クロマトグラフィー手技により精製したントロバク
ター・フロインディ（Ｃｉｔｒｏ−ｂａｃｔａｒ　ｊ’
ｒｐｕｎｒｌｉｉ）　Ｅ　−９またはプロテウス・プル
ｉｆリス（Ｐｒｏｔｇｕｓ　ｖｕ１ｇａｒｉｓ’）　Ｐ
　−５のβ−ラクタマーゼを・ｉ史用する。

出１ｊ定操作は次の通りである。

Ｎ買浴液：　ｏ、　ｏ　５μｍｏ　ｌ　ｅ　／　ｍτの
セファロリノンを含有するｐ　Ｈ６，８−０，１Ｍ燐酸
緩街液（２５５ｎｍにおける吸光度はほぼ０．７５をし
めず）。

ｄｊ素液、阻菩剤なしの状態で、１０分間で２５５ｎｍ
における吸光層をおよそｏｌｏ　＜ｉｉ２少させる縦置
を１史用。

装置：日立分光光電光度計ＵＶ−ＶＩＳ　１３９型を用
い、光１６１　ｃｍ−３ｍｌ容キュベツトの中で反応さ
ぜながうｍ１１」定、ｍ１１１定中キユベツトの温度が
常に３０°ｃ７ｉ：るように保温する。

阻害剤右釈敵：阻害剤試料ｆニアｒ　Ｈ６，８，０，１
Ｍ燐酸緩衝液またはヅメチルスルホキシドＣＤＭＳＯ）
で適宜稀釈する。対照区としては阻害剤を添加しない席
次液を１史用する。

前培養ならびに反応： 括質除加に先立ち一次の組戟液を３０℃で１５分間前培
養する。

ｐ＃６．８−０．１Ｍ燐ば教価液　１００μｌ醇系液　
０５〜２μｇ 直害剤イげ駅液　０５〜４０μβ 前培養終了後 基質、＠液　３．０　ｍｌ を研加して反厄を開始する。反応ば２５５　ｎｍにおけ
る吸光度の変化をｊｉｌｌ　５’ｉしながら３０°Ｃで
１０分ｕｔＪ以上行い−１０分間（基質添ｍ陵１分から
１１　分）間）にセファロリノンのノル水分解を５０Ｅ
Ｒ ％阻止するに必要な阻害剤の抗（Ｉ５ｏ　μｆｉ　／　
ｍｅ　）を測定する。

〔結果〕　上記測定法によると、前記粉末はプロプウス
・ブルガリスＰ−ｓの生産するβ−ラクタた。この数値
は前記粉末中の活性成分が１３８ＣＣＵ　／　ｔｌの讃
度でプロテウス・ブルガリス・Ｐ−５のβ−ラクタマー
ゼの活性を５０％１材害すること全意味するものである
。

実施例６ 但温でのｎ−ブタノール抽出 大型直島管に蒸留水２０ｍ１−ｎ−ブタノール１２ｍ１
、および食塩７ｇを入れ、これを凍結寸前の一１７℃ま
で冷却した。実施例５で得られた黄市已粉末２００　ｍ
ｆｌを蒸留水ｌ　ｍｌ中にとかし、予冷した浴液を、こ
れに刃口え一１０℃以下の温度を保ちながら、萌りぼン
を刃口えて−速かにｐ７ノを２７５−３０および３２５
に画歪しよく鷹拌した。それぞれのｎ−ブタノール抽出
をと９ｐＨ６８−Ｑ、５Ｍ燐は緩衝液５ｍ１ｋ加え、活
性成分を水層に転溶し、水層中の活性成分の景を定量し
た。１更用した黄褐巴りｙ末からの抽出率は次の通りで
あった。

ρｌｉ　抽出率（係） ２、７　５　３　５．０ ３、０　０　３　２．０ ３、２　５　１　６．０ 実施例７ ＱＡＥ−セファデックス処理粉末の調製培養液１００６
よシ実施例５と同様の操作によって倚られた抗生劫質Ｐ
Ｓ−５含有の黄褐色凍結Ｎ’ｉｍ粉末２７．ｒｉ　Ｃ比
Ｕ％１３２ｃｃＵβ〜）ヲｐｌｉ　６．８−２５．ｍＭ
、燐酸１諷衝液３０　Ｊｎｅに溶かし。

該稜１１ＩＩｊ畝で平衡化したＱＡＥ−セファデックス
Ａ−２５（ファルマシア社製）のカラム（３，３Ｘ２５
、　Ｏｃｍ　）に吸着させ、上記の緩衝液で洗浄後。

父塩濃度を０から０．５Ｍまで順次直線的に変化させな
がらその食塩含有緩衝液で溶出し活性フラクションを果
めた。活性フラクション３００　ｍｅは０℃に律動した
のち活性炭６！ｑに成層させ、水洗脱垣ｋ、５０％（Ｖ
／Ｖ　）アセトン水で溶出し、活性画分を凍結乾熱して
７２７〜の帯温黄色粉末の抗生物質ＰＳ−ｓナトリウム
塩を得た。

この粉末の比活性は２６４　ＣＣＵ　／　ｔｎｇであっ
た。

実施例８ ＤＥＡＥ−セルロース処理粉末の調製 実施例６で侍られた抗生物質ＰＳ−５含有の帯渇黄色凍
結乾線粉末７２７　ＩＱをｌ　ｍｅのｐｌｉ６．８−２
５ｍ７Ｍ燐酸緩衝液に溶解し、該緩衝液で平衝化したバ
イオケゞルＰ−２（バイオランド社製）カラム（１，５
Ｘ２７．０（１７Ａ）に通し、再び該緩衝液で展開し、
活性画分１５ｍ１を採取した。

この活性画分を同様に平衡化させたソエチルアミノエチ
ルセルロースーセルロース（Ｄ＆３２）（ワットマン社
製）カラム（２，５Ｘ　２８．０α）に通し１食塩譲度
を０からｏ、　ｓ　Ｍまで順次直線的に変化させながら
、その食垣含有緩衝液で溶出し一七の活性画分２４　Ｏ
ｎｒｌを０℃に冷却後活性炭４５ｇに吸着させ、水洗１
１ｊｉｊ　４後５０％（Ｖ／Ｖ　）アセトン水で溶出し
、凍結乾燥して１２０〜の帯温色白色粉末の抗生物質Ｐ
Ｓ−５ナトＩＪウム塩を得た。

この粉末の比活性１ｄ　６００　ＣＣＵ　／　ｔｖｐで
あった。

実施例９ 抗生物質ＰＳ−５トｌ）チルｂ導体の製法（＋）実施例
３と同様にして得られた１６０ｇ培養ｐ液を、火力ｍ個
５と同様の操作で処理して得た抗生物質ＰＳ−５含有黄
褐色凍結乾燥粉末３０．０．９（比活性２ｑＣＣＵ／ｍ
７）をジメチルホルムアミ１’　１０　Ｑ　ｍｅに溶解
させ、トリエチルア゛ミン３．Ｃ１を加えて氷冷し５次
いでトリチルクロライド９．ＯＩを溶液が５℃以上にな
′らないように調節しながら添加した。５°Ｃで攪拌を
つづけると原料は１２時間で消失した。ｐ　Ｈ６，８の
０５１１１−燐酸ηし７１！Ｉ’ｆへ１０００＋＋＋ｌ
中にあけた腺−６℃Ｍニーｙ−ル１ｏ　ｏ　ｏ　ｍｔず
つで３回抽出し、抽出？ｉｋ　ｋ合して脱水芒硝で乾燥
後減圧下溶媒を留去し、ベンゼン２０　ｍｅ　Ｋ　ｆ５
　Ｊｌｌ・１させた。このベンゼン浴ｆ夜を予じめベン
ゼンで膨ＮＩＪさせたパイオヒ゛−ズ５−Ｘ３（バイオ
ラッド１に朶ひ）カラム（４，５Ｘ　６０．０　ｃｍ　
）に通し、ベンゼンで展開して得られるコマモナス・テ
リク゛すに活性をもつ画分を集めて誰７；狛し−（練圧
下）払固訟せた。

−＜　７　セフ　１　＃ＩτＫｉ谷Ｉ１１乍キせンリ力
ケ゛ル（ギーセ゛ルグゞル６０，７０〜２３０メツシュ
、ニー・メルク社製）カラム（２５１−１５Ｘ　２４．
０ｃｎＬ）にチャージし、ベンゼン−１，ｌ「酸エチル
（１０：ｌ）で展ＩＪ）」して試楽を溶出除去したのち
、混合比を（１：２）に加えて展翻し、活性画分を集め
板圧下乾固した。

コレをベンゼン０．５ｍｌＫ６ｍし、中性アルミナ（ベ
ールム社′＃Ａ）カラム（２０ｆ！、０．９　Ｘ　２２
．０ｃｍ）に通し、ベンゼン−酢酸エチル（１０：１）
から順次混合比を下げて（１：１’）の割合才で展開ｊ
容出し、活四自分を集め、減圧下罎縮乾固した。

これをベンゼン０．３　ｍｌに溶Ｊ野しシリカケ９ルカ
ラム（１０ｇ−０，９Ｘ　２２．０ａａ−Ｇｉ述と同イ
１Ｌのシリカケ゛ル）にチャージし、ベンゼン−酢酸エ
チル（１０：１）で’＄−浄１妥−ベンゼンー昨敵エチ
ル（１：２）で展開浴出された活Ｉ生画分を合し一倣圧
下磯羅、乾固した。これをベンゼン０．５　ｍｌ　Ｋ　
溶解し、バイオビーズ５−Ｘ３カラム（１，２Ｘ９６．
０訓）に通し、ベンゼンで展開して得られる活性画分を
合し一誠圧下諦’ｊ　Ａ１１ｉ」早乙固した。こ汎をア
セトン０．５　ｒｎｌに浴ｉ・」！＋シー　−］・しめ
アセトンでｉｒｈ　＋１５”」させたセファデックスＬ
１１−２０（ファルマシア社りカラム（１２Ｘ９６．０
儂）に通し、アセトンで展開して侍られる活性画分を合
し、戚圧下濃凶白乾固して２３ｎ７の白色粉末を・１４
ｆだ。こ汎をベンゼン−ｎ′−ヘギサンから−ＰＪ結晶
して１２ｉｙの胛ミ色結晶１＋５ω末を得た。

以上で侍られた無色結晶性粉床、すなわち抗生、勿責Ｐ
Ｓ−５ト＋）チルめ嚢体は仄の如き理化学的性質をしめ
した。

１　〕！ｉノア１　凸く４の已　； 無色 ２）溶屏疎： 抗生物質Ｐ　Ｓ　−５ｔ−ＩＪチル♂ッ導体５　ｌａｙ
に溶必０、１　ｍｌを加え２０°Ｃで充分に振盪した＋
ｂ合の溶％γ性１は次の通りであった：水、ｎ−へキサ
ン及び石油エーテル（那点純囲３０〜６０℃）に実質的
に不溶；ベンゼン−目゛目帳エチル、クロロホルム−メ
タノール、エタノール、アセトン、ツメチルホルムアミ
ド（ＤＡ４　Ｆ　）−及びツメチルスルホギザイドＣＤ
Ｍ　Ｓ　Ｏ）に易溶。

３）安定７ａ： 抗生物質ＰＳ−５トリチル誘４体を１容のメタソールに
俗解・友直ちに９答の然留水を加え、１２５　ＣＣＵ　
／　＋ａｉになるようにｇＡ装した。別にＭ　／　１５
りん厳二カリウム水浴販τつくり、これに５Ｎりん敞、
または５Ｎ水酸化ナトリウムを加えてρＢを調ゼし−ｐ
Ｈ３〜９の各ｐｈの浴液を虐製し、ｌ　ｍｅずつ試験イ
１゛に入れた。この各ｐＨの浴液中に、はじめに調製し
た抗生＊質ＰＳ−５トリチルＢｉｉ　４体の浴Ｃ夜ｉ　
１　ｍｔ：ずつ刀■え、少量の５Ｎりん戚またけ５Ｎ水
酸化ナトリウムにて朗安のｐＨに１例報した玖、６０°
ＣＩＣ抹った湯浴中に−３０分間浸し、流水冷却後、少
量の５Ｎシん鹸または５Ｎ水敵化ナトリウムにてｐＨを
７．０に＝ｙした。対照に対しては−　ｐ　Ｉｉ　７．
０の溶液を氷水中につけておい７ｔものを用い一コマモ
ナス・テリケ゛ナーＢ−９９６を被恢−とするビオアッ
セイにより、残存活性を側圧し、対照のン古性を１００
％として表した。

栢果は次表の通りであった。

表−１３ この結果から、該トリチル体ｌ”ｔ：　ｐ　ＩＩ　６．
０〜９゜の水溶液中、６０℃で３０分間加熱叫ても安定
であることが分る。

またｐ　ＩＩ　７．５の上記溶液中で６０℃、９０分間
加熱しても活性は実質上低下しなかった。

４）一点： 矢沢科学器械工業■製ＢＹ−を型微量融点測定装随を用
いたコフラー（ＫｏｆｌｅｒＪ　法により１分間１℃の
温度上昇速度で測定した揚台の融点：８３、５−８５．
５°Ｃｏ１４０℃以上で徐々に褐変する。

５）紫外線吸収スペクトル： 日立自記分光光度計ＥＰＳ−３Ｔ型を用いて、メタノー
ル３−中核トリチル誘導体１２８μｇを含有する溶液に
ついてＩＮ定した紫外線吸収スペクトルを曜付第２図に
しめす。

６）赤外線吸収スＲクトル： 日立赤外林分光光度計２１５型を用いて、クロロホルム
０．６　ｍｅ中中核リチル誘纒体４．５Ｍｇ’を含有す
る溶液について測定した赤外吸収スペクトルを添付第３
図にしめす。

１だ、その特徴的極大吸収波数は次の通りである。

３４３０．３１００〜３０００　（フェニル基のＣ−，
１１）’、２９９０．２９５０　、ＩＴＴＯ（Ｃ＝０）
、１６９５，１６６５，１４４５，１３４０゜１２７５
および１１３０ｍ−’。

７・）プロトノ核磁気共鳴スペクトル：日本電子ＪＮ、
Ａｆ　ＰＳ−１ｏｏ型を用い、屯クロロホルム０３−中
に該トリチル誘嚢体４．ｓ＋＋ｙｙ含有する溶液につい
て測定した１　００　Ｍｌｌｚ　プロトン核磁気共鳴ス
ペクトルを添付第４図にしめす。

その最も特徴的シグナルは、ｔ、８５ｐｐｍ付近のシン
グレットおよび７．２〜７．６ｐｐｍのトリチル基ベン
ゼン環プロトンに由来するマルチプレットである。

８）元素分析： 核トリチル誘４体３．５■を真空ＩＸＩＯ−２ｍｍＨＯ
Ｆ、室温で４時間乾燥した標品についての元素分析結果
は次の通りである。

Ｃ６０，８９％、Ｈ５，７８％、Ｎ４．４８％。

Ｓ４．６２％ ９）呈色反応： エールリッヒ試薬反応　陽性 塩化トリフェニルテトラシリ　陰性 ウム反応 塩化第二鉄反応　陰性 塩化第二鉄−法度反応　陰性 ヨード−塩化白金酸反応　陽性 ヒドロキシ了ミンー囁化第二鉄反応　陽性塩素−トリジ
ン試薬反応　陽性 二／ヒドリン反応　雌性 抗生物質ｐ　Ｓ　−５トリチル誘導体は薄層クロマトグ
ラム上において下記溶媒により、次の々１コきＲｆ値を
値える。なお、移動位置の演出は前記コマモ犬ス・テリ
ケ９す１３−９９６のビオオートグラフィーによった。

（ａ）　シリカケ・ルＴＬＣｉレート〔メルク社製ＤＣ
−フエルテツヒプラツテンキーゼルグル６０Ｆ２ｓ４”
を用いた場合のＲ１値は次の辿である。

ベンゼン／アセト／（２／１１　ｊイｆ二０．２９（ｂ
）セルローズＴＬＣプレート〔イーストマン・コダック
社製「クロマトグラムシー）　Ｎｎ　６０６５」賞月い
た場合のＲ１値はｉ天σ）ｎｕすて３りる。

溶　媒　系　Ｉイｆ　１ｉｆｉ （４／１１５）の上層 ｎ−ブタノール　１．０ ｉｓｏ　−７０ロノぐ　ノール／水　０．９１・（ｓ／
７　） ｉｓｏ　−フ０ロ　ノぐ　ノ　−ル／水　［，０（１／
４　） １食、前記で得た抗生物質ｐＳ−５ト１）チル誘導体は
次の如き生物学的性質をしめずことを４ｉ’、Ｍ認した
。

１）抗菌スペクトル プレイン　ノ・−ト　インフュージョン培地’　栄研１
（栄研化学■製）を用いた液体希看マ検定法で抗生物質
１）　Ｓ−５トリチル誘導１本む各棟病原性破験閃に対
する最小発育駆出（纜度を測定した。

該トリチル誘導体を小側ニのメタノールに溶解しこれｆ
　ｐ　１１７．０のブレイノ　）・−ト　イノフュージ
ョン培地１栄研１　（宋ＩＱト化字■−裂）で希釈して
、該トリチル誘導１本の譲１Ｋが４０μ、￥　／　ｍ１
３〜２０μ＆／ｍｌの呻４囲内に入るよりに、−ｆだメ
タノールの濃）雄が１０％以下になるようＶこ１．た。

こノＬ’（５同し培地で倍数希釈して、該トリチル誘導
１本環プロ列を副系列た。この希釈系列に、−１記と同
じプレイン　ハート　インフュージョン培地ｖこ２８℃
で１８時間振盪培養して得た下記表−１４にボす各種板
１験菌の神母液を、接種後の菌数が大略１×１０５／ｒ
ｎ７！になるよつに接種し、３５℃で２０時間静置培養
し、［７かる咬生育の有無ケ観察し、生育の認められな
い最低の濃度ケ、その凶に対する抗生物質ＰＳ−５ト’
ｌ）チル誘導体の最小光背ｌ５１１市濃度とした。対照
として公知の抗生Ｊ’ａア／ヒ９ンリ／およびセファＣ
Ｉ　ＩＪジノ火ヤれぞれ１００μＪ／　＋ｎｅの濃度に
ｐ　１４７．０のプレイン　／・−１・　インフュージ
ョン培地に溶解し、同培地で倍数希釈し。

て希釈系列をつくり同法処理して、破験菌にゾ・４する
最小発肯阻屯祷度を測定した。結果を下記表−１４にし
め丁。〃お、公知の抗生物質アンビノリノおよびセファ
ロリジンの結果も比申父のため同々甲に併記した。

」二記結果から、抗生物＠ＰＳ−５ト＋）チル誘導体ば
、広範な抗菌スペクトルを肩し、特にβ−ラククンーゼ
生産叶のβ−ラクタム耐性閑に強い抗菌力をしめすとい
う狩８を・１イしていることが分る。

（，４）：ｉ’径９αのにトリ皿に、ペニシリンＧまた
はセファロリジン５０μｇ　／　ｍｌを添加したｐＨ７
０ニュートリエンドアガー らせ、これｋ　Ｆ層とし、その上に、βーラクタマーゼ
生唾性のβーラクタム耐性捌を接種した同じ培地１０ｍ
ｅケｒＡｔ　して同寸らービ、これを上層とした。

この表面に１３表に記載した濃度の抗生物質ＰＳー５ト
リチル誇尋体浴液をぞ汎ぞれ２５μｌ江加した直径８酊
のノ８ルフ”ディスクを直さ、３５℃で１８時間培養後
、ディスク周辺の阻市円の大ささを観察した。対照とし
てペニシリンＧ及びセファ（＋　ＩＪレジンいずれも無
添加の同・廉の培地で同様の実験を繰返し行った。その
結果はド記衣−１５に示す通りであった。

上記結果によれば、単独では抗菌力を示さない濃度のペ
ニシリンＧまたはセファロリジンに、単独では抗菌力を
示あない濃度の該トリチル誘導体を添加すると、抗菌力
が生ずることが示されており、これによれば、抗生物質
ＰＳ−５ト＋Ｊチル誘導体ハペニシリンＧ及びセファロ
リジンの抗菌力を明らかに増進することが認められる。

（Ｂ）　次に前記と同様の液体希釈検定法の手技を用い
ることにより、該トリチル誘導体とセファロリジンが相
乗的に抗菌力を増進することを確認することができた。

先ず、ｐＨ７，０のプレイン　ハート　インフュージョ
ン培地を溶媒として、下記表−１６に示す５段階の譲度
比の抗生物質ＰＳ−５ト＋）チル銹導体とセファロリジ
ンを含有する溶液を調製した：＆−１６ １　１００）ｔＥ／ｍｌ　０ｔｔｆｌ／ｍｅ２　７５　
５００ ３　’５０　１　０　（１０ ４２５１５００ ５０２０００ 各混合溶液をｐ　Ｈ７，０のプレイン　ハート　インフ
ュージョン培地で、１０の５，１０分の４゜および１０
分の３に希釈し、それぞれの希釈液を更にｐ　Ｈ７，０
のプレイン　ハート　インフュージョン培地で倍数希釈
して１５列の希釈系列を調製した。この希釈系列にプロ
テウス・プルがリスＰ−５の種母液を、接種後の菌数が
大略ｌＸ５０５／ｍｌになるように接種し、３５℃で２
０時間培養した後、生育の有無を観察して、それぞれの
最小発育阻止濃度を測定した。その結果はド記表−１７
に示す逼りであった。

この結果から、副成分がプロテウス・ブルガリス・ｌ）
　５に対する抗菌力を相互に相乗的に増進していると判
断することができるが、その判断をより一層容易にする
ために、・上記表中の最小発育阻１」二濃度を、各々の
成分ごとに、その単独添加の場合の最小発育両市濃度を
１００として指数で表示すると次の表−１８の辿りとな
る。

この結果は、単独添加の場合の１２５％量の該トリチル
誘導体と、単独添加の場合の７５％量のセファロリジン
とを混合することによって、それぞれ単独投与の場合と
同じ抗菌力かえられることを示（７ているから、該トリ
チル誘導体とセファロリジンの１ｌＡＪ　ＶＣとのβ−
ラククマーゼ生産性のβ−ラクタム耐性菌であるプロプ
ウス・ブルガリス・１）　−５に対して相互に抗昧１力
を増進する強い相乗作用のあることは明らかである。

３）　生体内での活性 スタフィロコッカス・アウレウス・スミス株（５ｔａｐ
ｈｙｔｏｃｏｃｃｕｓ　ａｕｒｅｕｓ　Ｓｍ１ｔん）を
マウス当り５Ｘ１０５縄胞ずつ腹腔内に感染させたマウ
スを用い、１１［記で得た抗生′＋／ＩＩＪ質トリチル
誘導体の生体内活性を測定した。感染源接種後直ちに、
該トリチル誘導体を含む注射液を皮下投与した。雄のｄ
ｄｙマウス（静岡）を用いた場合のつた。

４）　β−ラクタマーゼ］≦１１害活性前記抗生物質Ｐ
、Ｓ−５）ＩＪチル誘褥体は実施例５の９）に記載の阻
害活性測定法によると、プロテウス・ブルガリス・１）
　−５の生産するβ−ラクＥＲ タマーゼに対して０．０６０μ、９／ｒｎｌのＩ＊ｏ　
’ｆしめし、シトロバクタ−・フロインティ・Ｅ−９の
生産するβ−ラクタマーゼに対して０８０μｇＣＥパ ／　ｍｅのＩ５ｏ　をしめした。この数値は抗生物質Ｐ
Ｓ−５トリチル誘導体が００６μｊｊ　’　／　ｍｌの
濃度でプロテウス・フルがリス・Ｐ−５−のβ−ラクタ
マーゼの活性を５０％阻害し、０．８０μｇ／ｍｌの濃
度でシトロバクタ−・フロインティ・Ｅ−９のβ−ラク
タマーゼの活性を５０％阻害することを意味するもので
ある。

ＩＡＩ　抗生物質ＰＳ−５ト＋）チル誘導体の５０μｇ
／ｒｎｌ溶液を８關径のパルプディスクにしませて、β
−ラクタマーゼを添加したコマモナス慣定板にのせて一
夜培養した際の阻止円の直径は次の通りであった。

表−１９ 添加した酵素　阻止円直径（ｍｒｔ。

無添加　３４０ プロテウス・ブルガリス・Ｐ−５１２，０の生産するβ
−ラクタマーゼ Ｅ−９の生産するβ−ラクダマー ゼ また、下記反応液組成で、試験管内で、１０テウス・ブ
ルガリス−Ｐ−５またはシトロバクタ−・フロインディ
・Ｅ−９の生産するβ−ラクタマーゼと３０℃、１時間
反応させた後、反応液を８ｍｍ径の）ｅルプディスクで
コマモナス検定板でビオアッセイした。

ｐＨ６８，０，１Ｍ燐酸緩衝ｇ　Ｌｌ、１５０ｍ５燐酸
緩衝液 トリチルＰＳ−５物質　５７μｇ （＊）　プロテウス・ブルガリス・Ｐ−５の生産するβ
−ラクタマーゼの場合４８６単位／ｍｌ。

シトロバクタ−・フロインディ・Ｅ−９の生産するβ−
ラクタマーゼの揚重１８０単位／ｙｎｌ　ｆ　Ｊｉいた
。なお、１単位はｐＨ６，８，３００Ｃで６０分間にセ
ファロリジン１μｍｏｌｅを分解する酵素活性をいう。

１５ＨＩＪ：円直径は次の通りであった。

表　−２０ 酵　素　阻止円直径（ｕ） 無添加　３２・０ プロテウス・ブルガリス・ｐ　−１９，０５−β−ラク
タマーゼ ノトロバクター・フロインディ　０ のβ−ラクタマーゼ この結果より、抗生物質Ｐ　Ｓ−５）　ＩＪチル誘導体
はプロテウス・ブルガリス・ｐ−５およびシ）ａ／（フ
タ−・フロイアディ・Ｅ−９の生産するβ−ラクタマー
ゼによって明らかに不活性化されたことが判る。

（Ｂ　）　更に、抗生膜質ＰＳ−５トＩＪチル訪導体の
β−ラクタマーゼに対する挙ｄを、実施例５において抗
生物質１）Ｓ−５について行った場合と、象く同じ柔性
、同じ方法で調べた。すなわら、そ九ぞれ３．３００単
位のバチルス・リケニホルミス７４９　／Ｃ，およびバ
チルス・セレウス５６９のペニシリナーズを含有するコ
マモナス検定板それぞれ検定板■および検定板ｍと、酵
素を含有しない対照の、検定板（検定板目におりる抗菌
力価を次に示す。なお、ペニシリンＧ及びセファロリジ
ンＶこついての測定結果は、それぞれ前記表−１１およ
び衣−１２に示した迫りでめる。

以上の結果から明らかな通り、抗生物質ＰＳ−５トリチ
ル誘導体も抗生物質ｐＳ−５と同様にバチルス・セレウ
ス５６９の啄ニシリｒ−ゼでは容易に不活性化され、バ
チルス・リケニホルミス’１４９／Ｃのベニシリナーゼ
によってもある程度不活性化される。

この事実１ｆｄ抗生＊質ＰＳ−５ト１）チル誘導体の分
子中にβ−ラクタム環又はその類似環構造が存在するこ
とを示唆している。

実施？１１０ 抗生物質ｐＳ−５のトリチル誘導体の製法（［１１実施
例７に記載と同様な方法で得た抗生物質ＰＳ−５の帯褐
黄色凍結乾燥粉末７１５７ｆｆｒ（比活性２３５Ｃ，Ｃ
Ｕ／ｒｎｙ）ｆヘギサメチルホスホトリアミド（１１Ｊ
ｆ　Ｐ　Ａ　）　３．５−に溶解させてから氷冷し、ト
リエチルアミン’ｌｏｍｌを加え溶液が１０°Ｃ以上に
ならないように調節しながらトリチルブーマイト２５０
　ｒｎｇを添加した。１０°Ｃで７時間攪拌すると原料
が消失した。氷水５〇−中にあけ、氷が融解してから、
ベンゼン１５ゴずつで、３・回抽出し、以下実施例９の
方法とほぼ同様に処理して、抗生物質Ｊ）　Ｓ　−５の
トリチル誘４体の無色結晶性粉末９４ｍ７を（４た。そ
の理化学的性質ｆｄ実施グリ９に記載のものとほぼ１司
じであった。

実施例　１１ クララ／化合物存在下に於ける抗生物質ＰＳ−５Ｉ・リ
チル銹碑体の製法（Ｊ 実施１タリ５の記載と同様な方法で得た抗生物質１）　
Ｓ−５の笛褐白色凍結乾燥粗粉末１０１Ｊをメチレンク
ロライド２ｏｏｍｅに（昨濁キせ、１５−クラウン−５
〔日本留達■製〕１ｍ１（］ｌ：加え攪拌して溶解させ
た。この溶ｍｋ氷冷しながら５℃以上にならないように
トリチルクロライド８．５　ｉ　（５添加した。添加後
室温で３時間攪拌し、不溶吻勿炉去した。Ｐ液を減圧下
で濃縮した後、直ちにベンゼン１０ｙｄを加え、不溶物
を除き、実施例９と同様に精製処理を肚て抗生物質ｐＳ
−ｓのトリチル誘導体の無色結晶性粉末を７３ｍ７得た
。その理化学的性質は前記実施例９で得たものとほぼ同
じであった。

実施列　１２ 四級アンモニウム塩存在下における抗生物質ＰＳ−５ト
リチル誘導体の製法（ＩＶＪ培養ｐ液４８１（力価ＩＬ
、’１ＣＣＵ／ｍｌ）から０．０５％セチルンメテルベ
ンジルアンモニウムクロライドのジクロルメタン溶液１
５−ずつで２回抽出を行った（ジクロルメタン層２４．
０ＣＣＵ／−１水層５．７ＣＣＵ、／ｍｌ）。抽出液は
無水芒硝４００ｇで脱水後減圧下５００−まで濃縮した
。

該濃縮によって得られた溶ｇ（４５０ＣＣＵ／Ｉ艷）を
無水で硝ｉｏｙで再度脱水し、芒硝をＰ別後更にモレキ
ュラーシーブ４Ａ（ユニオンカーバイド社ｄ）５ｇで完
全に脱水した。

この溶液を氷冷し、５°Ｃにならないように調節しなが
らトリチルクロライド４．５ｙを添加した。

５時間反応後減圧下室温でジクロルメタンを留去後、直
ちにベンゼン１５１ｄを加え以Ｆ実施例１０と同様に精
製処理して、抗生物質ＰＳ−５のトリチル誘導体の無水
結晶性粉末ｇ　ｍ１ｉＩを得た。その理化学的性質は前
記実施例９で得たものの性質とほぼ同じであった。

本発明の抗生物質ＰＳ−５又はそのトリチル誘導体を含
有する薬剤は前述した辿り種々の単位投与剤型で、例え
ば固体またば”液体で７．イロ的に１無下できる剤型で
投与することができる。該単位投与剤型は液体、半固体
、固体のいかんを問わす、前記したように０．１〜９９
％、好捷しくに１０〜６０％の活性物質を含有すること
ができる。その薬剤中の活性成分の含有量は該薬剤の剤
型やその全量によって変るが、通常約１０ｍｇがら約１
ｏｏ。

ｍ７、好捷しくは約１００ｍｇから約１０００　ｍｇの
範囲とすることができる。

非経口投与における単位投与の剤型は１１通常純度１０
０％に近い本発明の抗生物質ＰＳ−５（ナトリウム垣）
又はそのトリチル誘導体を滅菌水に俗かしたものか、筐
たは容易に溶成にすることのできる溶解性粉末にしたも
のとすることができる。

次に、本発明の抗生物質ＰＳ−５（ナトリウム項）又は
そのトリチル誘導体を含む代表的な薬剤調製物の製法を
例示する。

実施例　Ａ：　カプセル剤 抗生物’Ｂｐｓ−ｓ（す）　ｌ）ラム塩）　１００■乳
　糖　（日本薬局法）　適当量 ステアリン酸マグネシウム　１７ｙｇ 上記抗生物質及び賦形剤を乳鉢で研磨し、均一に混合す
る。１カプセルに約２００＋＋ｙ当て腸溶剤皮をしｉ３
号硬ゼラチンカプセルにつめる。

実施例　Ｂ：　錠剤 Ｊ戎　分　１錠当り 抗生物質１）Ｓ−５（ナトリウム塩）２００ｍｇ乳　糖
　（日本薬局方）　１２０ｍグ とうもろこしでんぷん　１’ｒｓｍｇ ステアリン酸マグネシウム　５１８り ５００７ｙｇ −記の混合比で抗生物質を乳糖ととうもろこしでんぷん
の半量とよく混合する。混合物を１０％でんぷん糊液と
まぜて粒状化し、篩にかける。これにとうもろこしでん
ぷんの残りとステアリン酸マグネシウムを加えてよく混
和し直径１儂、重量５００＋ｎｇの錠剤に成型する。こ
れに糖衣を施した後更に腸溶剤皮でコーチングする。

実施例　Ｃ：　注射剤 抗生物質ＰＳ〜５（す）　ＩＪウム塩）　２５　〃ｌｙ
生理生理液塩液本薬局方）　２ｍｌ 上記の抗生物質を注射用滅菌水にとが［、濾過、除菌す
る。溶液旬滅菌したアンプルに分注し、水分を凍結乾燥
によって無菌的に除去し、アンブルの口を溶閉する。

用時、閉封し、滅菌生理食塩水２ｍ１ｆアンプルの内容
物に加えて溶解する。

実施例　Ｄ二　錠剤 抗生物質ｐｓ、−５（ナトリウム塩）　２０ｍｇセファ
ロリジ７　１８０ｍｇ 乳　糖　（日本薬局方）　１２（ｌＬｉとうもろこしで
んぷん　１７５７Ｍｌ７ステアリン酸マグネシウム　５
　ｍｇ ５００７ｎｇ 抗生物質ｐｓ−５（ナトリ・クム塩）とセファロリ／ン
を混ａ’ｌｌ　Ｌ、以下実施−Ｂの製剤方法と同様に処
方し、成型し、糖衣に次いで腸溶剤皮でコーチングする
。

実施例　Ｅ：　制剤 抗生物質ｐＳ−５（ナトリウム塩）　１ｏｍｇアミノベ
ンジルにニジリン　１９０　ｍｇ乳　糖　（目薬局方）
　１２０ｍ７ とうもろこしでんぷん　１７５　ｍｇ ステアリン酸マグネシウム　５ｍｇ ５．０（ｌｙ 抗生＠貝Ｐ　Ｓ　−ｓ　（ナトリウム囁）とアミノベン
ジルペニシリンを混和し実施例Ｂの方法と同様に製剤化
する。

実施シリ　Ｆ：　カプセル剤 成　分　１カプセル当り 抗生物質ＰＳ−５トリチル誘導体　１００　ｍ７乳　糖
　適当量 ステアリン酸マグネシウム　１　ｍｇ 上記抗生物質誘導体及び賦形剤を研磨し、均一に混合す
る。１カプセルに約２００　ｍｇ当て腸溶剤皮を施した
３号硬ゼラチンカプセルにつめる。

実施上ン１］Ｇ：　錠ｆ１１ 成　分　−制光り 抗生物・員ＰＳ−５トリチル誘導体　２００　ｍｇ乳　
糖　（日本薬局方）　１２０アｎｇとうもろこしでんぷ
ん　１７５即 ステアリノ酸マグーネ・／ラム　５１ｎ７５００■ 」二記の混合比で抗生物質誘導体を乳糖とと９もろこし
でんぷんの半量とよく混合する。混合＠を１０％でんぷ
ん糊液と−まぜて粒状化し、篩にかける。これにとりも
うこしでんぷんの残りとスうゝアリン酸マグネシウムを
加えてよく混オＩＪＬ、直径１α、重量−制光す５００
７＋７の錠剤に成型する。これに糖衣を施した後置に腸
溶剤皮でコーチングする。

実施例　Ｈ：　注射剤 成　分　１バイアル肖り 抗生物質ＰＳ−５）リチル訪導体　２５’＋１ＩＦＮ−
（β−ヒドロキシエチル）　２蔵 うクタミド７０％水溶液 上記の抗生物質誘導体を注射用滅菌水にとかし、濾過、
除菌する。溶液を滅菌したアンプルに分圧し、水分を無
菌的に凍結乾燥によって除去し、アンプルの口を溶閉す
る。用時、開封し滅菌Ｎ−（β−ヒドロキシエチル）ラ
クタミド７０％水溶液２−をアンプ７にの内容物に加え
、隘解後、１吏用する。

実施ρ１」Ｊ：　錠剤 抗生物質７）Ｓ−５−）リチル誘導体　５ｏｍｆセファ
ロリジン　１５０ｍｇ 乳　糖　（日本薬局方１　１２０　ｒｎｙとうもろこし
でんぷん　１７５　ｉｎｇステアリン酸マグネシウム　
５７′ｌ７ｓ００＋＋＋ｙ 此抗生物質誘導体とセファ１リジンを混朴し、以下実施
例Ｇの製剤方法と同様に処方、成型し、糖衣を施した後
腸溶剤皮で史にコーテングする。

実施例　Ｊ：　錠剤 抗生物質ｐｓ−５トリチル誘導体　２ｏｍｇアミノベン
ジルペニシリン　１８０ｉｙ乳　糖　（日本薬局方）　
１２０７１１ｇとうもろこしでんぷん　１７５　ｍｇ ステアリン淑マグネシウム　５　ｍ９ ｓ　ｏ　ｏ　ｍｇ 此抗生’ｌｌＤ質Ｐｓ　−５トＩＪチル誘導体とアミノ
ベンジルペニシリンを混れし、〔錠剤Ｉ〕の方法と同様
に製剤化する。

【図面の簡単な説明】

４１図は比叙例１で作成した公知の一４ｆ４４ｆ４５５
０（複合物）物質及び本発明の抗生物質ＰＳ−５のビオ
オートグラムであり、第２図は実施例９で製造した本発
明の抗生物質ＰＳ−５ト＋Ｊチル誘導体の紫外線吸収ス
ペクトル図であり、第３図は同赤外線吸収スペクトル図
であり、第４図は同核磁気共鳴スペクトル図である。 手続補正書（方式） 昭和５９年１２月２６日 特許庁Ｊ（酒　志　ｈ　字　殿 ｌ、事件の表示 １、ｌｐ／１．ｌ’　５　９　”Ｐｍ１１ｉ＝４１ｉｙ
　１　４　９　７　６　７　％３補正をする渚 事例との関係　特許出願人 名　称　（１９１１玉ニオーンーヤンセ“イ、代金ｊト
（氏　名） ４代　理　人〒１０７ 第１３　３　ｇ−ｘ　、　り上、１３！Ｊシｊ１、　畠
１．ｔＪ、ｐ〜”？Ｔ　１”ｉｊ唄−；、８艷＝］；］
！１、］；；１１；（］、、、、、１゜７、　机正の内
容 別砥のとお如 明イ」ワの浄１．（内容に変更々し） 以上の如くして製造される抗生物質、７’５−５）リチ
ル誘導体は、分子構造中にトリチル基（トリフェニルメ
チル基）を含む文献未載の新規な物質であシ、強い抗菌
力及びβ−ラクタマーゼ阻害活性を有する点で極めて特
徴的である。 該トリチル誘導体の理化学的性質及び生物学的性質を示
せば次の通りである。 、４）融点 上記トリチル誘導体は通常、８３〜８８℃の範囲内の融
点を示す。なお、不明細雪における融点の表示は、コフ
ラー法により１分間１℃の温度上昇速度で測定（測定装
置：矢沢科学器株工業（株）製、ＢＹ−１型微量溶融点
測定装置）した値による。 Ｂ）−紫外線吸収スペクトル ２０Ｈ”Ｈ＝　３１５．５　ｎｔｎ、 ηｔαＸ ６０℃に加熱した時、少なくとも２０分以内では、該ト
リチル体の抗菌活性は少なくとも７５％、通常９０％以
上保持される。この安定性は公知の抗生物質チェナマイ
シン（特開昭５１Ｌ７３１９１号公報）に比べてはるか
に優れている。 （１）抗菌スにクトル 本発明の抗生物質Ｐ　Ｓ　−５トリチル誘導体は広範囲
の抗菌活性を有し、各種微生物、例えばスタフィロコッ
カス属、ディプロコツカス属、ストレプトコツカス属、
サルシナ属、バチルス４等に属するダラム陽性菌に対し
非常に強い抗菌力を示し、更に例えばアルカリ土類金属
、コマモナス属等に属するグラム陰性菌に対しても非常
に強い抗菌力を示す。 まだ、不発明の抗生物質ＰＳ−５ト＋）チル誘導体は、
例えばエシェリヒア属、クレブシェラ属、法によ５．１
２０℃、１５分間滅菌した。一方、試験管内悪天斜面上
でストレプトミセス・エスピー　Ａ　２７１　（Ｓｔｒ
ｅｐｔｏｍｙｃｅｓθｐ、Ａ２７１）菌株の胞子を充分
７ａ生させ、この試験管に０．０２％のツインＳＯ（ア
トラス社製、界面活性剤、ＴｗｅｅＰ８０）水心液を１
０＋ｒ、Ｊ入れ、軽く攪拌して胞子懸濁液を調製した。 この胞子懸濁液１　ｍｌを先の種母培地に接種し、２８
℃で４８時間ロータリーシェーカー（２００ｒｐへ　振
幅７α）で振盪培養した。 この種母培養液２ノ、ｄを１００ｍＡ’の下記組成の生
産培地を含む５００　ｔｎｅ容エルレンシンヤーフラス
コに接種し、２８℃で４８〜９６時間ロータリーシェー
カーで振盪培養した。 フコ）　０３％（Ｖ／／Ｖ） バタトートリプトン（ディ７ コ）　Ｑ、　５　ｔｔ 表−５ ＡＧ−１７，８１０５１，１４２０ ４Ｇ／ｉ−２７，８７２１，１４２０ ＡＧＢ−１７，９１０５０，９３４０ ＡＧＢ−４１７，９１８５８，９４４０ＭＬ−１９７，
０６０１，４１２２ ＡＧＯ−１’　７．２　８７　０．９　３４０実施例２ 実施例１と同じ方法で培養した種母培養液１００ｍ１を
、１５１のＭＬ−１９培地を入れた３０Ｉ！容ジャーフ
ァーメンタ−に接穂し、２８℃、２０　Ｏｒｐｍ攪拌、
７．５１１７分通気で、９６時間まで通気攪拌培養を行
った。消泡剤として信越シリコンＫＭ−７５（信越化学
（株）製）を０．０５％使用した。経時的に培養液をサ
ンプリングし、遠心分離した土識液について抗菌力価を
測定した。 各時間の抗菌力価は次のとおシであった。 表−６ 実施例３ ストレプトミセス・エスピー、４２７１　（Ｓｔｒｅｐ
−６ｏｍｙｃｅｓ　ｓｐ、　Ａ　２７１　）を実施例１
と同じ方法で培養して、フラスコ種母培養液をつくり、
これの１００ｍ１を１５Ｊの５Ｅ−４培地を入れだ２３
０チレンジアミン四酢敵二ナトリウムを１００７η添加
し、ドブコパーライトＮα３４を２％（ＩＶ／Ｖ）添加
し、大型ブフナー漏斗で吸引濾過して培ｊ２Ｆ液１４．
１１　（ｐＨ７，９）をえた。これを直径’Ｉｃａ。 高さ５０（ＪＬのダイヤイオンＨｐ−２０（三菱化成（
株）製）カラムに吸着させ、蒸留水７１で洗浄後、５０
９σ（Ｖ／Ｖ）メタノール水で溶出した。 培養戸液および各溶出画分の力価は次の通シであった。 表−７ 培養ｐ液　１４．１００　４０ 路°出画分１　１．０００　０ ２　５００　０ ３　５００　０ ４　５０　１９ ５　５０、　３７ １旨し１、として、該抗生物質と追跡し、その抗生物質
ンシ；、次の如き性質をン１了するものであることを確
ｉ沼した。 １）　安定性： 抗生物質ｐ　Ｓ　−５−５：含む上記黄褐色粉末を５０
０ＣＣＵ　／　ｔｙｒｅになるように蒸留水に俗解した
。別に、’Ａ、ｆ　／　ｌ　５りん酸二カリウム水溶ｆ
筺をつくり、これに５Ｎシん画才たは５Ｎ水は化す）　
ＩＪウムを加えてｊノＨを調整し、ｐ、１１３〜９の各
ｐＨの溶液を調製し、１１ｄづつ試験？占に入れた。こ
の各ｐＨの、谷１夜中に、はじめに調製した抗生物質ｐ
Ｓ−５含Ｍｔ、ｊ液を１　ｍｅづつ加え、少量の５Ｎり
ん酸または５Ｎ水酸化すトリウムにて、所四のｐＨにＸ
＝した後、６０℃に保っだ湯１．’ｉ３中に３０分間浸
し、流水帝却後、少量の５Ｎりん酸まだは５Ｎ水酸化ナ
トリウムにてｐＨを７．０に調りした。対照は、ｐＨ７
，０の痰液全氷水中につけておいだものを用い、コマモ
ナス・テリダナＢ−９９６を被検菌とするビオアッセイ
によシ、残存活性を測定し、対照の活性を１００％とし
て衆わしだ。結果は次の通シであった。 この結果から抗生物質ＰＳ−５はｐ　Ｈ６，０〜９０の
範囲内の水溶液中６０’Ｃで３０分間加熱してもかな９
安定であることがわかる。また抗生物質ＰＳ−５は低温
下に２いては、低ｐＨ範囲でもある程度安定で、例えば
、−１７℃でｐ　Ｈ３，０に５分間放置した後に少くと
も３ｏ９イの残存活性をしめした。 ２）　溶解性 抗生物質ｐｓ−５はｐ　Ｈ６〜９の水に可溶である。す
なわち、本抗生物質はｐＨ７の水のみならず、ｊＡ酸に
よりｐＨ６及びそれよシ高いｐＨの微酸性に”Ｊ％　’
ｒ％された水性媒体、及び水酸化す）　ＩＪウムによｐ
ｐＨ９以下の弱アルカリ性に調整された水性媒体に易％
である。まだ、抗生物質ｐｓ−５の黄褐色粉末２５１ｉ
ｉ７をつぎの各々のｊ：’−４媒０．５　ｍｅと共に２
０℃で１分間攪拌した後不俗物を分離除去した各俗媒中
の抗菌活性は攪拌前の黄褐色粉末２５ｍ２に含まれる抗
菌活ｉ生に対してつぎに示す割合であった。 この結果から、抗生物質ｐ　Ｓ−ｓは２０℃において、
ツタノールに、′〉解し、エタノールに微ワであり、酢
酸エチル及びベンゼンには実質的に俗解しないと」ＩＩ
、定される。 ３）　薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）下記のＴＬＣ
ｆレート及び溶媒を用いて前記黄褐色粉末をＴＬＣにか
け前記ビオアッセイ法により検出したところ、抗生物質
ＰＳ−５は以下に示すＲｆ値を示した。 （ａ）アビーヒル■ＳＦセルロース薄層フ０レート〔フ
ナコシ楽品（株）製〕使用 下に同じ） ｉ−プロパツール／水（７／３）　、Ｒｆ＝０．９６（
ｂ）シリカゲル薄層プレート（ニー・メルク社製；ＤＣ
−７エルテイツヒゾラツテンキーゼルケ゛ル６０Ｆ２，
４）使用 エタノール／水（７／３）　Ｒｆ＝０．８２ｎ−プロｉ
Ｚ　／　−ル／水（７／３１　Ｒｆ＝０．７７東洋−紙
Ｎｏ、５０〔東洋Ｆ紙（株）製〕を用い、下記の臼媒を
用い、前記黄褐色籾末をイー・ぐ−クロマトグラフイー
にかけたところ、抗生物質ＰＳ−５は下記のＲｆ値を示
しだ。 ？ｉ−プロノぐノール／水（７／３）　Ｒｆ−０６８ｎ
−プロパツール／ミープロパ　Ｒｆ＝Ｏ，’ｌＯノール
／水（７／７／６） アセトニトリル／水Ｃ８／　２　）　Ｒｆ＝ａ、３６ア
セトニトリル／トリス１シジ衝−ｔＬ　Ｒｆ＝０．３４
／ＥＤＴＡ　（註１） エタノール／水（７／　３　）　Ｒｆ＝ｏ、６　ａ（註
１）ニアセトニトリル１２０１！ｔ、ｐＨ７，５の青、
Ｉ’ｌｌス（ヒドロキシメチル）アミノメタン−塩（ａ
５１Ａ’（Ｗ−３０ｍｌ及びｐＨ７，５（Ｄ　ｉ　Ｍエ
チレンジアミン四酢酸ナトリウム塩水溶液１　！ｎｌか
ら成る混合溶媒。 高圧濾紙電気泳動装置（サバント・インスツル表−１６ １１００μり／＋ｎｌ　Ｏμｆ　Ａ１ ２　７５　５００ ３　５０　１０００ ４　２５　１５００ ５　０　２０００ テ゛「ン昆合召゛１夜とｐ　１１７．０のプレイン　ハ
ート　インフュージョン培地で、１０の５，１０分の４
゜および１０分の３に希〃〈シ、それぞれの希釈金を更
にｐ　ｉｌ　７．０のプレイ／　ハート　インフュージ
ョン培地で・１汁孜布釈して１５４１ｊの希゛沢系列會
調製した。この２′へ釈系列にプロテウス・ブルガリス
Ｐ−５の１４１ユ液ケ、接４！ｌｊ後の菌数が大略ｌＸ
５０５／１．フｌになるように接；：ｉｉ　Ｌ、３５℃
で２０時間培〕ｒ（イ）　抗生物質ＰＳ−５ト＋）チル
誘導体の５０μ？／７屁ｒ：Ｊ液を８關径のパルプディ
スクにし丑せて、β−ラクタマーゼを添加したコマモナ
ス検定板にのせて一夜培養した際のｌｊｕ止円の直径は
次の通りであった。 表−１９ 添加した酵素　ｉ′１」正円直径（１ｎｍ）無添加　３
４．０ また、下記反応液組成で、試験管内で、プロテウス・ブ
ルガリス・Ｐ−５またはシトロバクタ−・フロインディ
・Ｅ−９の生産するβ−ラクタマー表−２０ 酵　素　阻止円直径（闘） 無添加　３２．０ プロテウス・ブルガリス・Ｐ　−１９，０５−β−ラク
タマーゼ シトロバクタ−・フロインディ　０ のβ−ラクタマーゼ この結果より、抗生物質Ｐ　Ｓ　−５１−＋７チル誘導
体はプロテウス・ブルガリス・ｐ−５およびシトロバク
タ−・フロインディ・Ｅ−９の生産するβ−ラクタマー
ゼによって明らかに不活性化されたこ・） とが判る。 （Ｂ）　更に、抗生物質ＰＳ−５ト１）チル誘導体のβ
−ラクタマーゼに対する挙グツを、実施例５において抗
生物質Ｐ　、５−　ｓについて行った場合と、全く同じ
条件、同じ方法で調べた。すなわち、そステアリン１袋
マグネシウム　ｌ　ｍｆ上記抗生物質及び賦形剤を乳鉢
で研磨し、均一に混合する。１カプセルに約２００ｇ当
て腸溶剤皮をした３号イｌ′とゼラチンカプセルにつめ
る。 実施例　Ｉ′３二　錠剤 成　分　１錠当り 抗生物質Ｐ、５−ｓ（ナトリウム塩）　２００　＋Ｗ乳
　糖　（日本薬局方）　１２Ｑ＋＋ｙとうもろこしでん
ぷん　１７５■ ステアリン酸マグネシウム　５■ ５００　Ｆｌ −記の混合比で抗生物質を乳糖ととうもろこしでんぷん
の半量とよく混合する。混合物を１０％でんぷん糊液と
まぜて粒状化し、篩にかける。これにとうもろこしでん
ぷんの残シとステアリン酸マグネシウムを加えてよく混
和し直径Ｉ　Ｃｍ、重量５００叩の錠剤に成型する。こ
れに糖衣を施した後頁に腸溶剤皮でコーチングする。 実施例　Ｃ：　注射剤 成　分　ｌバイアル当シ 抗生物質ｐＳ−５（ナトリウム塩）　２５７１生理食塩
液Ｃ日不薬局方）　２− 上記の抗生物質を注射用誠菌水にとかし涙過、除菌する
。溶液を滅菌したアンプルに分注し、水分を凍結乾燥に
よって無菌的に除去し、アンプルの口を・１Ｎ閉する。 用時、閉封し、滅菌生理食塩水２ゴをアンプルの内容物
に加えて浴解する。 実施例　Ｄ：　錠剤 成　分　１錠当り 抗生物質ｐｓ−５（ナトリウム塩）　２０〜セフアロリ
ジン　１８０＋＋ｙ 乳　糖　（日本楽局方）　１２０　ｍｐとうもろこしで
んぷん　１７５巧 ステアリン咳マグネシウム　５７！１ ５００１１グ 抗生物質ｐｓ−ｓ＜ナトリウム塩）とセファロリジンを
混和し、以下実施例Ｂの製剤方法と同様に処方し、成型
し、糖衣に次いで％？ｆｊ剤皮でコーチングする。 実施例　Ｅ：　錠剤 成　分　１錠当り 抗生物質ｐＳ−５（ナトリウム塩）　１０■アミノベン
ジルペニンｌＪ７　１９０＋；ｙ乳　楯　（日系局方）
　１２０　ｒｒｑとうもろこしでんぷん　１７５πダ ステアリン酸マグネシウム　５　ｍｑ ５００７７ｐ 抗生物質ｐｓ−５（ナトリウム塩）とアミノベンジルペ
ニシリン全混和し実施例Ｂの方法と同様に製剤化する。 実施例　Ｆ：　カプセル剤 成　分　１カプセル当シ 抗生物質Ｐ　Ｓ　−５）　ＩＪチル誘導体　１０（１７
乳　１■　適当量 ステアリン酸マグネシウム　１η 上記抗生物・質誘導体及び賦形剤を研磨し、均一に混合
する。１カプセルに約２００π９尚て腸召剤反を施しだ
３号便ゼラチンカプセルにつめる。 実施例　Ｇ二　錠剤 成　分　−錠当り 抗生物質Ｐ　Ｓ　−５）リチル誘導体　２００ｍ？乳　
糖　（日不梁局刀）　１２０■ とうもろこしでんぷん　１７５　Ｔ４ ステアリン酸マグネシウム　５π２ ５００７１ｒ、ｉ 上記の混合比で抗生物質誘導体を孔軸ととうもろこしで
んぷんの半量とよく混合する。混合物を１０％でんぷん
糊液とませて粒状化し、篩にかける。これにとうもろこ
しでんぷんの残りとステアリン酸マグネシウムを加えて
よく混和し１、直径１Ｇ、重煽−錠当りｓ　ｏ　０７７
７の錠剤に成型する。これに糖衣を施した後頁に腸浴剤
反でコーチングする。 実施例　〃：　注射剤 成　分　１バ・イアル当り 抗生物質ＰＳ−５Ｆリチル誘導体　２５ｍＦｊＮ−（β
−ヒドロ午フジエチル　２　＋ｔｆラクタミド７０％水
浴液 上記の抗生物質誘導体を注射用滅菌水にとかし、濾過、
除菌する。溶液を滅菌したアンプルに分注し、水分を無
菌的に凍結乾燥によって除去し、アンプルの口を溶閉す
る。用時、間引し滅菌Ｎ−（β−ヒドロキシエチル）ラ
クタミド７０％水溶液２　ｎｒｌをアンプルの内容物に
カリえ、）：ｉ、、解後、使用する。 実施例　Ｉ：　錠剤 成　分　−錠■ 抗生物質Ｐ　Ｓ　−５−）リチル誘導体　５０７’ｌｉ
？セフアロリジン　１５０　Ｔ４ 乳　糖　（白ンド薬届方）　１２０　ｍ？とうもろこし
でんぷん　１７５７４ ステアリン酸マグネシウム　５即 ５００πｇ 此抗生物質誘導体とセファロリジンを混和し、以下実施
例Ｇ（７）製剤方法と同様に処方、成型し、糖衣を施し
た後腸俗剤反で巣にコーチングする。 実施例　Ｊ：　錠剤 成　分　１錠当り 抗生物質ｐ　ｓ　−５）　ＩＪチル誘導体　２０　ｙｙ
アミノベンジルペニシリン　１８０　ｍｇ乳　糖　（日
本薬局方）１２０Ｔ、ｉ＋とうもろこしでんぷん　１７
５　＃９ ステアリン酸マグネシウム　５ｍ￥ ５００　ａｆ 此抗生物ｇｐＳ−５ト＋）チル誘導体とアミノベンジル
ペニシリンを混和し、〔錠剤Ｉ〕の方法と同様に製剤化
する。 ４、図面の簡単な説明 第１図は比較例１で作成した公知のｌ、ｉ　Ａｔ　４５
５０（゛複合Ｉｒ！ａ）物質及び本発明の抗生物質ＰＳ
−５のビオオートグラムであり、第２図は実施例９で製
造した本発明の抗生物質ＰＳ−５トリチル誘導体の紫外
線吸収スペクトル図であり、第３図は同赤外線吸収スペ
クトル図であシ、第４図は同核磁気共鳴スペクトル図で
ある。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、下記の理化学的性質 Ａ）溶解性 ｐ７７６〜９の水に可溶、 Ｂ）薄層クロマトグラフィー 下記のプレート及び溶媒で、下記のＲｆ値を示す、 （ａｉ　プレコートしたガラスプレート〔吸着剤：結晶
   性セルロース（平均粒径６〜１０μ〕、厚み：０．２〜
   ０．２５罷〕 Ｂ−７’　ｐ　／　−ル／　エタノールＩ？　ｆ　＝　
   ０．９４／水１７／７／６　） ｉ−グロパノール／水　Ｒｆ＝０．９６１７７３） （ｂ）７６レコードしたガラスプレート〔吸着剤ニジリ
   カグル、厚み：０．２５ｍＦ〕 エタノール／水〜１７／３）　Ｒｆ＝０．８２ｎ−プｏ
   　ｚＲ７−Ａ／　／水＋　７／３　）　Ｒｆ＝０．１７
   Ｃ）ペーノぐクロマトグラフィー Ｆ紙〔重量：１４ｏ；’、／ｙ、厚み：０．２５ｍ５＋
   。 灰分：　０．１　％　］を用い、下記の溶媒で下記のＲ
   ｆ値を示す、 ｎ−プロｉｅ　／　−ル／水　Ｒｆ＝０．６８＋７／３
   ） ｎ−プＯａＪ？　／　−／ｌ／　／　ｉ−プｏ　Ｒｆ＝
   ０．７０パノール／水Ｉ　’７／Ｔ／６　） アセトニトリル／水（８／２）　Ｒｆ＝０．３６アセト
   ニトリル／トリス／’　Ｒｆ＝０．３４ＥＤＴＡ　（註
   １） エタノール／水（？／３）　Ｒｆ＝０．６３註１ニアセ
   トニトリル１２０−１ｐ　ｉｉ　７．５の殉Ｍトリス（
   ヒドロキシメチル）アミノメクンー塩酸緩衝液３０ゴ及
   びｐＨ７，５の％Ｍエチレンジアミン四酢酸ナトリウム
   塩水溶液１ゴから成る混合溶媒 Ｄ）高圧濾紙電気泳動 高圧濾紙電気泳動装置（高圧電源／ｌ’３０００Ａ１泳
   動槽ＦＰ１ＢＯＡ）を用い、濾紙〔重量：１４０ｆ／、
   ７、厚み：０．２５＋ｕ＋、灰分０．１係〕上で電気泳
   動を行なった際、下記ｐＨの緩衝液中で下記の挙動を示
   す、 水３０００　ｍ／！、バルビタール３．３２及びパルビ
   タールナトリウム２５．５９から成るｐＨ８，６の緩衝
   液中で、４２Ｖ／’ｃｍにて３０分間通電すると陽極側
   へ少くとも５訂移動する、Ｅ）β−ラクタマーゼに対す
   る挙動 ゾロテラス・ブルガリス、シトロバクタ−°フロインデ
   ィー及びバチルス°セレウスのβ−ラクタマーゼにより
   不活性化さレル、 を有することを特徴とするβ−ラクタマーゼ阻害活性を
   有する抗生物質ＰＳ−５゜