JPS604719B2 - β‐ラクタマーゼ阻害活性を有する抗生物質ＰＳ―５の製造方法 - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は新規な抗生物質及びその誘導体に関し、さらに
詳しくは、強い抗菌力及び８ーラクタマーゼ阻害活性を
有し且つ８ーラクタマーゼ生産菌に対しペニシリン系、
セフアロスポリン系等の抗菌性物質の抗菌力を相乗的に
増進し得る能力をもつ抗生物質ＰＳ−５の製造方法に関
する。

従来、Ｂーラクタマーゼ阻害活性を有する抗生物質また
は８ーラクタマーゼ阻害剤はいくつか知られている。例
えば、ストレプトミセス属に属するＭＣ６９６一ＳＹ幻
物質生産菌の培養液から採取されたＭＣ６９６−ＳＹ２
一Ａ及びＢ（特公昭５１−２４５９７号公報）、ストレ
プトミセス属のＭＭ４５５０又はＭＭ１３９０２生産菌
の培養物から採取されたＭＭ４５５０又はＭＭ１３９０
２物質（特開昭５０−１３５２９４号及び特関昭５０−
１４０６９２号公報）、ストレプトミセスクラバリゲル
スの培養物から採取されたクラバラス酸（特公昭５２一
１９９６号公報）などが報告されている。また、ペニシ
リン類似骨格を有する抗生物質チェナマィシン（ｔｈｉ
ｅ岬ｍｙｃｉｎ）も報告されている（特閥昭５１一７３
１９１号公開公報）。今回、本発明者らは、上記公知の
３−ラクタマーゼ阻害活性を有する抗生物質または３ー
ラクタマーゼ阻害剤とは異なる理化学的性質を有し、更
に強い抗菌力及び８ーラクタマーゼ阻害活性を有する新
規な抗生物質を見し、出し、これを抗生物質ＰＳ−５と
命名した。かくして、本発明の第一の目的は、強い抗菌
力及び３−ラクタマーゼ阻害活性を有する新規な抗生物
質ＰＳ−５を提供することである。

本発明の第二の目的は、強い抗菌力及びＢーラクタマー
ゼ阻害活性を有する上記抗生物質ＰＳ−５の誘導体、殊
にトリチル誘導体を提供することである。

本発明の更に他の目的は、強い抗菌力及び３ーラクタマ
ーゼ阻害活性を有し、更に６ーラクタマーゼ生産性の耐
性菌に対しペニシリン系、セフアロスポリン系等の抗菌
性物質の抗菌力を相乗的に増進し得る能力を有する新規
抗生物質ＰＳ−５及びそのトリチル誘導体を提供するこ
とにある。

本発明の他の目的は上記抗生物質ＰＳ−５の発酵法によ
る製造方法を提供することである。本発明の更に他の目
的は上記抗生物質ＰＳ−５のトリチル誘導体の製造方法
を提供することである。本発明の更に他の目的は上記抗
生物質ＰＳ−５又はその誘導体のグラム陽性及びグラム
陰性細菌感染症の予防、治療及び／又は処置剤に関する
。

本発明のその他の目的及び利点は以下の説明により明ら
かとなるであろう。本発明によれば、広範囲で強い抗菌
活性及び８−ラクタマーゼ阻害活性を有する新規な抗生
物質ＰＳ−５が提供される。

この抗生物質ＰＳ−５は以下に示す理化学的性質及び生
物学的性質により特徴づけられる。抗生物質ＰＳ−５の
理化学的性質 ｛１’溶解性 抗生物質ＰＳ−５はｐＨ６〜９の水に可溶である。

すなわち、本抗生物質ｐＨ７の水のみならず、例えば塩
酸などによりｐＨ６及びそれより高いｐＨの微酸性に調
整された水性媒体、及び例え３ば炭酸水素ナトリウム、
水酸化ナトリウム等によりｐＨ９以下の弱アルカリ性に
調整された水性媒体に易港である。また、本抗生物質は
酢酸エチル及びベンゼンには実質的に溶解しない。

４■ 薄層クロマトグラフィー（ＴＬ
Ｃ）下記のＴＬＣプレート及び溶媒を用いて、抗生物質
ＰＳ−５（ナトリウム塩）をＴＬＣにかけた場合、以下
に示すＲｆ値を示す。

なお、本明細書において使用する混合溶媒の混合比は特
にことわらない限り容積比である。｛ａ’プレコートし
たガラスプレート〔吸着剤；結晶性セルロース（平均粒
蓬：６〜１０仏）、厚み：０．２〜０．２５側、本プレ
ートとして、本明細書ではフナコシ薬品■製アビセル■
ＳＦセルロース薄層プレートを使用〕ｎ−ブタノール／
エタノール／水（７／ ７／６） Ｒｆ＝０．９４ｉ−プ
ロパノールノ水（７／３）Ｒｆ＝０．９６‘ｂ｝ プレ
コートしたガラスプレート〔吸着剤：シリカゲル、厚み
：０．２５肋、本プレートとして、本明細書ではェー・
メルク社製ＤＣーフエルテイツヒプラツテン・キーゼ、
ルゲル（ＤＣ−Ｆｅｍｇ−ｐｌａＵｅｎＫｉｅｓｅｌ度
１）６岬肉４を使用〕エタノール／水（７／３）
Ｒｆ＝０．８２ｎープロパノール／水（７／３）Ｒｆ＝
０．７７脚 べ−パクロマトグラフイ−抗生物質ＰＳ−
５（ナトリウム塩）は炉紙〔重量：１４０タノの、厚み
：０．２５側、灰分０．１％、本炉紙として、本明細書
では東洋炉紙Ｎｏ．５０（東洋炉紙■製を使用〕を用い
、下降法により下記の溶媒で展開した時下記のＲｆ値を
示す。

ｎ−プロパノール／水（７／３） Ｒｆ＝０．６８ｎ−
プロパノール／ｉープロパノール／水（７／７／６）
Ｒｆ＝０．７０アセトニトリル／水
（８／２） Ｒｆ＝０．３６アセトニトリル／トリス
ノＥＤＴＡ （言王１）Ｒｆ＝０．３４エタノール／水
（７／３） Ｒｆ＝０．６３〔註１：アセトニト
リル１２０の【、ｐＨ７．５の１／１０Ｍトリス（ヒド
ロキシメチル）アミ／メタン一塩酸緩衝液３０のＺ及び
ｐＨ７．５の１／１０Ｍエチレンジアミン四酢酸ナトリ
ウム塩水溶液１肌から成る浪合溶媒〕｛４１高圧炉紙電
気決勤 高圧炉紙電気決勤装置（サバント・ィンスッルメント社
製、高圧電源ＨＶ３０００Ａ、漆勤糟ＦＰ１８０Ａ）を
用い、炉紙〔重量：１４０夕／で、厚み：０．２５肌、
灰分０．１％、本炉紙として、本明細書では東洋炉紙Ｎ
ｏ．５０（東洋炉紙■製を使用〕上で、抗生物質凶‐５
（ナトリウム塩）を電気泳動にかけた際、下記のｐＨの
緩衝液中で下記の挙動を示す。

水３０００肌、バルビタール３．３夕及びバルビタール
ナトリウム２５．５夕から成るｐＨ８．６の緩衝液中で
、４２Ｖ／ｃのにて３粉ふ間通電すると陽極側へ少くと
も５側、通常１０〜４物岬の範囲で移動する。

｛５〕８−ラクタマーゼに対する挙動 ブロテウス・ブルガリス、シトロバクダー・フロインデ
イー及びバチルス・セレウスの８ーラクタマーゼにより
不活性化される。

これらの理化学的性質から、本発明の抗生物質ＰＳ−５
が、８ーラクタム環又はその類似環構造を有する酸性の
物質であると推定される。

また、該抗生物質ＰＳ−５は例えば室温で単離する場合
不安定な傾向を示すが、例えば０℃以下、殊に一１０ｑ
ｏ以下の低温ではかなり安定であり、更にほぼ中性乃至
弱アルカリ性の水溶液中ではかなり安定であり、ほぼ中
性乃至舟９以下の弱アルカリ性の水溶液中で６０ｑｏに
加熱した時、少なくとも１５分以内では、該抗生物質Ｐ
Ｓの抗菌活性は少なくとも５０％、通常７５％以上保持
される。抗生物質ＰＳ−５の生物学的性質 ‘１’ 抗菌スペクトル 本発明の抗生物質ＰＳ−５は広範囲の抗菌活性を有し、
各種微生物、例えばスタフィロコッカス属、ディプロコ
ッカス属、ストレプトコッカス属、サルシナ属、バチル
ス属等に属するグラム腸性菌に対し非常に強い抗菌力を
示し、更に例えばアルカリゲネス属、コマモナス属等に
属するグラム陰性菌に対しても非常に強い抗菌力を示す
。

また、本発明の抗生物質ＰＳ−５は、例えばェシェリヒ
ア属、クレブシェラ属、ブロテウス属、等に属するグラ
ム陰性菌に対してもかなり強い抗菌力を示す。

特に、本発明の抗生物質ＰＳ−５は、Ｂ−ラクタム環を
有する抗生物質に対して耐性を有する、例えばシトロバ
クタ−属、プロテウス属、ェンテロバクター属、クレブ
シェラ属、セラチア属、等に属するグラム陰性細菌に対
して強い抗菌力を示す点で特徴的である。

‘２｝ ８−ラクタマーゼ生産菌に対する他の抗生物質
の抗菌力の増進本発明の抗生物質Ｍ‐５は、シトロバク
ター・フロインデイー、プロテウス．ブルガリス、エン
テロバクター・アエロゲネス、セラチア・マルセセンス
などの８−ラクタマーゼ生産菌に対し、他の抗生物質、
特にペニシリン系やセフアロスポリン系などの８ーラク
タム系抗生物質の抗菌力を増進させる能力を有し、しか
も多くの場合その能力は相乗的である。

‘３１生体内での活性 病原性グラム陽性菌を感染させたマウスに投与した時箸
るしい治療効果が認められた。

【４’毒性 病原性グラム陽性菌の感染を治療する有効投与量の約２
０び音量をマウスに投与したが箸るしい毒性は認められ
なかった。

本発明によれば、以上に述べた如き特性を有する抗生物
質ＰＳ−５は、抗生物質塔‐５生産菌を栄養塔地で培養
し、その培養物から８−ラクタマーゼ阻害活性を有する
抗生物質ＰＳ一５を採取することから成る方法により製
造することができる。

本発明で使用する抗生物質凶‐５生産菌は、前述した理
化学的性質及び生物学的性質を有する抗生物質ＰＳ−５
を生産する能力を有するものである限り、どのような属
に属する菌でも使用でき、広範囲の微生物から選ぶこと
ができる。

しかして、本発明の目的に適する菌株の検索は次のよう
にして行なうことができ、これにより当業者であれば、
本発明で用いる抗生物質ＰＳ−５生産菌を容易に取得す
ることができる。すなわち、８−ラクタム感受性菌を検
定菌とするビオアッセィ寒天平板と、これに８ーラクタ
マーゼを添加したビオアツセィ寒天平板とを用いて、土
壌分離菌の培養炉液を検定し、前者の寒天平板に阻止円
を与え、更に後者の寒天平板における阻止円が前者のそ
れより小さい培養炉液を与える土壌分離菌を検索する。

次にその士壌分離菌の培養液中の活性成分を活性炭に吸
着させ、その溶出濃縮液をペーパークロマトグラフィー
または薄層クロマトグラフィーで展開し、６ーラクタム
感受性菌を検定菌とするビオオートグラフイ−により抗
生物質ＰＳ−５が検出されれば、その菌は本発明の方法
で用い得る抗生物質ＰＳ−５生産菌であるということが
できる。この検索方法を具体例によりさらに説明すれば
次の通りである。

８−ラクタム感受性菌のビオアツセィ寒天平板として後
述するコマモナス検定板を用い、これにプロテウス・ブ
ルガリスＰ一５の生産する３ーラクタマーゼを添加した
コマモナスＣＶ検定板と、シトロバクタ−・フロインデ
ィＥ−９の生産する８−ラクタマーゼを添加したコマモ
ナスＣＭ検定板とを調製する。

一方、土壌分離菌の培養炉液を８側直径のパルプディス
クにしませて、それぞれの検定板に乗せ、３５００で２
畑時間培養したのち、コマモナス検定板で阻止円を与え
、且つコマモナスＣＶ検定板またはコマモナスＣＭ検定
板での阻止円がコマモナス検定板での阻止円より小さい
、培養炉液を与えた土壌分離菌を選出する。次にその土
壌分離菌の培養炉液に該炉液の２％（Ｗ／Ｖ）量に相当
する特製白鷺活性炭（武田薬品工業■製）を加え、１５
分間蝿拝した後、遠心分離により沈殿を集め、この沈殿
を用いた培養炉液と同容量の蒸留水で洗浄し、再び遠心
分離して沈殿を集める。

この沈殿に前記で用いた培養炉液の半容量に相当する量
の５０％（Ｖ／Ｖ）アセトン水を加え、室温で３粉ご間
欄梓後、遠心分離して上燈をえた。この上燈液をロータ
リーェバーポレーターを用いて３０〜３６０で濃縮して
、上記で用いた培養炉液に対して２功音の濃縮液をえた
。この濃縮液を東洋炉紙Ｎｏ．５０（東洋炉紙欄製）で
８０％アセトニトリル／トリス／ＥＤＴＡ〔アセトニト
リル１２０柵、ｐＨ７．５の１／１０Ｍトリス（ヒドロ
キシメチル）ァミノメタン−塩酸緩衝液３０の‘、ｐＨ
７．５の１′ｌｏＭ、エチレンジアミン四酢酸ナトリウ
ム塩水溶液１の‘からなる〕溶媒を用い下降法べ−パ−
クロマトグラフィーを１斑寺間展開した後、コマモナス
・テリゲナＢ−９９６を検定菌としてビオオートグラフ
ィ−を行なう。そして、抗生物質ＰＳ−５と同じ移動距
離（Ｒｆ値のところ）に阻止帯を示した土壌分離菌を抗
生物質ＰＳ−５生産菌候補として選出する。このように
して選出された候補菌については、さらにペーパークロ
マトグラフィーや薄層クロマトグラフィーを行ない、抗
生物質ＰＳ−５の生産性を確認する。

これにより、当業者は本発明の目的に適合した抗生物質
ＰＳ−５生産菌を容易に検索することができる。

上記の如くして検索された抗生物質ＰＳ−５生産菌の代
表的なものには、ストレプトミセス属に属する抗生物質
ＰＳ−５生産菌が包含され、その好適な一例としては、
福井県吉田郡の永平寺の近くで採取した士穣から分離し
た放線菌で、本発明者らがＡ２７１菌株の番号を付した
菌株が挙げられる。

このＡ２７１菌株の菌学的性質は次の通りである。

１ 形態的特徴 胞子形成菌糸の分枝状態：単純分枝 胞子形成菌糸の形状：気菌糸先端はかぎ状（ｈｏｏｋｓ
）やループ状（ｌｏｏｐｓ）あるいは不完全な螺旋状で
、セクションＲＡ（ＳｅｃｔｉｏｎＲｅｔｉｎａｃ山ｉ
ａｐｅれｉ）に属するものと考えられる。

特にこの形態はオートミル寒天及びグリセリン・アスパ
ラギン寒天培地に培養した時に麹祭される。しかしイー
スト・麦芽寒天培地上ではとかく直状または曲状（ｆｌ
ｅｘ側ｕｓ）の形態を見る事が多い。胞子の形状および
連鎖の数：惰円状ないし円筒状で１０ケ以上連鎖する（
通常１０〜５０ケ）。

胞子の大きさおよび表面の構造：０．８〜１．０×１．
０〜１．８ミクロン、表面平滑。鞭毛胞子、胞子のうは
認められない。

胞子柄の着生位置は気菌糸上である。

２ 培養上の特徴： Ａ２７１菌株の培養上の特徴を下記表−１にまとめて示
す。

下記表−１においては、特にことわらない限り、２８℃
で２週間培養後の競祭結果を示す。また、色調表現は主
として日．Ｄ．トレスナー及びＥＪバツカス（日．Ｄ．
Ｔｒｅｓｎｅｒ＆Ｅ．Ｊ．Ｂａｃｋｕｓ）著「システム
・オプ・カラー・ホイールズ・フオア・ストレプトマイ
セーテ・タクソノミー」（Ｓｙｓにｍ ｏｆ Ｃｏｌｏ
ｒ ＷｈｅｅｌｓｆｏｒＳＶｅｐｔｏｍｙｃｅにＴａｘ
ｏｎｏｍｙ）の方法及び財団法人日本色彩研究所出版の
“色の標準”の色調コ−ドもこ従った。

ク ．− ・ ３ 生理的特徴 【１’生育温度範囲：１０〜４００○、最適２０〜３０
００【２｝ ゼラチンの液化（グルコース・ベプトン・
ゼラチン塔地上）：液化する（２０ｑｏ培養）‘３１
スターチの加水分解（スターチ寒天塔地上）：分解する
｛４）脱脂牛乳の凝固、ベプトン化：凝固は認められな
いが、ベプトン化する。

■ メラニン様色素の生成：チロシン寒天、ベプトン・
イースト鉄寒天塔地上及びトリプトン・イーストエキス
・ブロス中でメラミン様色素を生成しない。

‘６１ 下記の各炭素源の同化性（プリドハム・ゴトリ
ーブ寒天培地上）：Ｌ−アラビノース 十 Ｄ−キシロース 十 Ｄーグルコース ＋ Ｄ一フラクトース シユクロース ± イノシトール Ｌーラムノース 十 ラフイノース Ｄーマンニツト （十：よく同化する、土：僅かに同化する、一同化し難
い）上記Ａ２７１菌株は前記の特徴より明らかな如く、
ストレプトミセス属に属する菌株であって、胞子形成菌
糸はセクションＲＡの形状で、菌叢表面の色は黄色或い
は赤色系統であって、胞子表面平滑でメラニン色素をは
じめ水客性色素は生成しない菌群に属する菌株である。

上記菌株の菌学的特徴をもつ菌種をＳ．Ａワックスマン
（Ｗａｋｓｍａｎ）著“ジ・アクチノマィセーテス（Ｔ
ｈｅＡｃｔｊｎｏｍｙｃｅｔｅｓゾ第２巻（１９６１年
）、Ｅ．Ｂ．シャーリング（Ｓｈｉｒ−ｌｉｎｇ）およ
びＤ．ゴットリーブ（Ｗｔｌｉｅｂ）共著の論文（イン
ターナショナル・ジヤーナル・オブ・システマテイツク
・バクテリオロージ；ｌｅにｒ雌ｔｉｏｎａＩＪｏ町雌
１ｏｆＳｙｓにｍａｔｊｃＢａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ）
第１８巻第６９〜１８９頁（１９６母王）、同巻第２７
９〜３９２頁（１９６８王）、同第１９巻第３９１〜５
１２頁（１９６ｇ手）および同第２２巻第２６５〜３９
４頁（ｉ９７２年）、並びにパージ一のマニュアル・オ
ブ・デターミネイテブ・バクテリオロジ−（控ｒ鉾ｙ’
ｓ Ｎはｎｕａｌ ｏｆ Ｄｅｔｅｎｎｉ岬ｔｉｖ
ｅＢａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ）第８版（１９７仏王）中
に探したところ、セクションＲＡに属する近似菌種とし
て、アクチノミセス・クレメウス（Ａｃｔｉｎｏｍｙｃ
ｅｓｃｒｅｍｅｕｓ）、アクチ／ミセス・フラビドビレ
ンス（Ａｃｔｉｎｏｍｙｃｅｓ ｆｌａｖｉｄｏｖｉｒ
ｅｎｓ）、アクチノミセス・アルボヘルバタ ス（（Ａ
ｃｔｉｎｏｍｙｃｅｓａｌかｈｅｌｖａｔ船）、アクチ
ノミセス／フラベスセンス（（Ａｃｔｉｎｏｍｙｃｅｓ
ｎａｖｅｓｃｅｎｓ）、ストレプトミセス・ルトゲルセ
ンシス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓｒｕｔｇｅｒｓｅｎ
ｓｉｓ）、ストレフ。

トミセス・クリセウス（（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ
ｃｈｒ侭ｅｕｓ）、ストレプトミセス・ヘ ルバ テイ
カ ス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓｈｅｌｖａｔｉｃ
ｕｓ）等があげられた。また、形態的性質ではセクショ
ンＲＦに属する菌種であるが、培養的生理的特徴のみに
註目すれば、ストレプトミセス・プルリコロレスセンス
（（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓｐｌｍｉｃｏｌｏｒｅｓ
ｃｅｎｓ）も近似菌種の１つとしてあげられる。これら
８繭種の内最後のストレプトミセス・プルリコロレスセ
ンスを除く菌種は、培養条件によってある時は気菌糸が
直状に、またある時はループ状を示すとされている。そ
こで、これら８菌種の標準菌株と本発明に従うＡ２７１
菌株を同じ条件下で培養し比較した。その結果、これら
菌種とは各種寒天培地上における生育、気菌糸の色およ
び基生菌糸の色において異り、また炭素源の利用におけ
る差異も薯るしく、上記Ａ２７１菌株とは明らかに相違
する。

そこで、Ａ２７１菌株に最も近似すると思われる２菌種
、アクチノミセス・クレメウスＩＳＰ５１４７及びアク
チノミセス・フラビドビレンスＩＳＰ５１５０と、Ａ２
７１菌株との比較試験結果を示せば下記表−２、表−３
及び表−４に示す通りである。表−２表−３ 表−４ 以上表に示す結果から明らかな如く、気菌糸の色を比較
するに、アクチノミセス・フラピドビレンスは全般に白
色を呈し、黄色を呈する場合でもその黄色は緑色を帯び
た黄色で、本発明のＡ２７１菌株とは明らかに異り、ま
たアクチノミセス・クレメゥスは全般に、Ａ２７１菌株
よりその呈する淡燈黄色の赤味が弱く、Ａ２７１菌株と
の間に明瞭な差異が認められる。

また基生菌糸の色では、Ａ２７１菌株が全般に明るい黄
色を呈するに対して、アクチノミセス・フラビドビレン
スは、淡黄色を呈し、アクチノミセス・、クレメウスは
、明るい燈黄色を呈するものが多く、その差異は明らか
である。更に、各塔地における試験結果を詳細に比較す
ればその相違は一層明確となる。また表一４に示した如
く、Ａ２７１繭株はアクチノミセス・クレメウスとはＤ
ーフラクトースとＬーラムノースの同化性において、ま
たアクチノミセス・フラビドピレンスとはＤ−フラクト
ースとイノシト−ルの同化性において異る。かくのごと
く最も近似する上甑公知２菌種と本発明のＡ２７１菌株
とは明らかに相違する。結局、既知の放線菌種の中には
、Ａ２７１菌株と同じ性質を示す菌種は見当らない。

従って、上記Ａ２７１菌株は新菌種と認められ、本発明
者らはこれをストレプトミセス・ェスピーＡ２７１（Ｓ
ｔｒｅｐｔｍｙｃｅｓｓｐ．Ａ２７１）と命名した。

この菌株は工業技術院微生物工業技術研究所に、微生物
受託番号 徴工研菌寄第３９８４号として寄託されてい
る。本発明においては、このＡ２７１菌株それ自体のみ
ならず、その自然変異株又は化学的もしくは物理的処理
による変異株もまた使用することができる。

本発明の抗生物質ＰＳ−５は、抗生物質ＰＳ−５生産菌
、例えば、上記ストレプトマィセスＳｐ．Ａ２７１の胞
子または菌糸を栄養源含有培地に接種して、好気的に増
殖させることによって生産される。

その栄養源としては、放線菌の栄養源として通常使用さ
れるもの、例えば炭水化物、窒素源、無機塩などの同化
できる源を使用できる。

例えば、ぶどう糖、グリセリン、麦芽糖、庶糠、糠密、
デキストリン、澱粉などの炭水化物や大豆油、落花生油
、ラードなどの油脂、脂肪類の如き炭素源；べプトン、
肉エキス、大豆粉、綿実粉ト乾燥酵母、コーンスチープ
リカー、酵母エキス、脱脂乳、カゼイン、硝酸ナトリウ
ム、硝酸アンモニウム、硫酸アンモニウムなどの窒素源
：燐酸ニカリゥム、食塩、炭酸カルシウム、硫酸マグネ
シウムなどの無機塩が使用でき、必要により徴量金属例
えばコバルト、マンガンなどを添加することができる。
栄養源としては、その他、抗生物質ＰＳ−５生産菌が利
用して抗生物質ＰＳ−５を生産するものであれば、いず
れの栄養源でも使用でき、公知の放線菌の培養材料はい
ずれも使用できる。また、加熱殺菌時及び培養中におけ
る発泡を抑えるため、シリコン、植物油などの消泡剤を
添加することもできる。上記の如き栄養源の配合割合は
特に制約されるものではなく、広範囲に亘つて変えるこ
とができ、使用する抗生物質ＰＳ−５生産菌にとって最
適の栄養源の組成及び配合割合は、当業者であれ夕ば簡
単な小規模実験により容易に決定することができる。

また栄養塔地は培養に先立ち殺菌することができ、この
殺菌の前又は後で、培地のｐＨを４〜９の範囲、特にｐ
Ｈ６〜８の範囲に調節するのが有利で０ある。

かかる栄養塔地での抗生物質ＰＳ−５生産菌の培養は原
則的には、一般の放線菌による抗生物質の製造において
通常使用されている方法に準じて行なうことができる。

通常好気的条件下に培養す夕るのが好適であり、通常渡
洋しながら及び／又は通気しながら行なうとができる。
また、培養方法としては静瞳培養、振濠培養、通気蝿拝
をともなう液内培養のいずれも使用可能であるが、液内
培養が有利である。ひ 使用しうる培養温度は抗生物質
ＰＳ−５（ナトリウム塩）の発育が実質的に阻害されず
抗生物質ＰＳ−５を生産し得る範囲であれば特に制限さ
れるものではなく、使用する生産菌株に応じて変えるこ
とができるが、一般に２０〜４０午○、好ましくは２５
〜３９０の範囲内の温度が好適である。

また、培養を好適に行なうため、必要に応じて、培養中
に培養物の舟を４〜９、特に６〜８の範囲に調節するこ
とができる。大規模な大量培養の場合、適宜種母培養を
行ない、これを栄養塔地に接種し、液体培養するのが有
利である。

培養は通常抗生物質ＰＳ−５が充分に蓄積するまで継続
することができる。

その培養時間は、培地の組成や培養温度、使用生産株等
により異なるが、通常３０〜９独特間の範囲である。な
お、使用する培養条件は、使用する生産菌株の特性に応
じて、当業者であれば簡単な実験により、最適条件を容
易に決定することができる。

培養中の抗生物質ＰＳ−５の蓄積量は後述するビオアッ
セィ法及びビオオートグラフィーにより定量することが
でき、それにより最適蓄積量を容易に知ることができる
。かくして、培養物中に蓄積された抗生物質ＰＳ一５は
水溶性であり、主として菌体外に存在するので、有利に
はｔ培養後、炉週、遠Ｄ分離、抽出などのそれ自体公知
の分離法によって菌体を除去し、その炉液、上燈液、抽
出液などより回収される。

回収はそれ自体公知の種々の方法で行なうことができ、
特にカルポン酸型抗生物質の回収のために屡々利用され
る方法が有利に適用される。

例えば、低ｐＨにおける酢酸エチル、ｎーブタノール等
での溶媒抽出及びその溶媒層から高ｐＨ水層への転溶：
塩化ペンザルコニウム、硫酸水素テトラブチＺルアンモ
ニウム等の脂港性４級アンモニウム塩またはニツソー・
クラウン・エーテル・ジシクロヘキシル−１８ークラウ
ンー６、同一１５ークラウン−５（日本曹達■製）等の
クラウン化合物の存在下、中性ｐＨにおける塩化メチレ
ン、クロロホルム等での溶媒抽出及びその溶媒層からの
沃化ナトリウム、沃化カリ等を含有する中性水層への転
溶：活性炭、アンバーライトＸＡＤ（ローム・アンド・
ハース社製）、ダイヤ・イオンＨＰ−２０（三菱化成社
製）等による吸着と、メタノール水、アセトン水等によ
る溶出；ダウエツクス１×２（ダウ・ケミカル社製）、
ＱＡＥーセフアデックスＡ−２５（フアルマシャ社製）
等のイオン交換樹脂による吸着及び溶出；セフアデツク
スＧ−１０（フアルマシャ社製）、バイオ・ゲルＰ一２
（バイオ・ラッド社製）、バイオ・ビーズＳ一×３（バ
イオ・ラッド社製）、等によるゲル炉過；セルローズ、
アビセルＳＦ（アメリカン・ビスコース社製）、ＤＥＡ
ＥーセルローズワットマンＤＥ一３２（ワットマン社製
）、ＤＥＡＥーセフアデツクスＡ一２５（フアルマシャ
社製）、シリカゲル、アルミナ等によるカラム法または
薄層法のクロマトグラフィー；へキサソ、石油エーテル
（沸点範囲３０〜６０ｑｏ）等の溶剤添加による強制沈
殿法：凍結乾燥法、等をそれぞれ単独で或いは適宜組合
せて、さらに場合によっては反復使用して使用される。
回収精製工程中の抗生物質凶‐５の挙動は後記するビオ
アツセィ法およびビオオートグラフイーにより定量測定
することができる。

かくして、前記した特性を有する抗生物質ＰＳ一５が得
られる。

この抗生物質ＰＳ−５は既述のとおり若干不安定である
ので、上記回収精製工程での処理には充分な注意を要す
る。

本抗生物質ＰＳ一５は、一般に遊離形のものよりも塩の
形の方がより安定であるから、後述する医薬用途に使用
したり、さらに誘導体に転換する場合の中間体として使
用したり、或いは前記した精製工程に付する場合等にお
いては、塩の形で処理することが好適である。

かかる塩の例としては、例えばナトリウム塩、カリウム
塩、マグネシウム塩、アルミニウム塩、などの金属塩：
アンモニウム塩；トリメチルアンモニウム塩などの置換
アンモニウム塩；ペンザチン塩、ブロカィソ塩などの有
機塩基による塩などが含まれ、特に好ましい塩はナトリ
ウム塩およびカリウム塩である。

また、本発明の抗生物質ＰＳ−５は前述した通り、酸性
の抗生物質であると推定されるから、公知の酸性の抗生
物質例えばクラバラン酸などと同様に、各種アルコール
類及びメルカプタン類又はこれらのェステル形成性議導
体により、ェステルの形に変えることができると推定さ
れる。

従って、本発明の範囲には、これらヱステルもまた包含
されるものである。さらに、本発明によれば、前記抗生
物質ＰＳ−５は、トリチル（トリフエニルメチル）化す
ることにより分子構造中にトリチル基を導入すると、該
抗生物質Ｍ−５の安定性が箸るしく高まり、容易に単離
精製することができるようになること、しかもそのトリ
チル誘導体は強い抗菌力及び８ーラクタマーゼ阻害活性
を有することが見し・出された。

これによっても、本発明の抗生物質笛一５を同定、確認
することができる。かくして、本発明によれば、前記抗
生物質鴨‐５をトリフェニルメタンの反応性誘導体と反
応せしめることから成る、Ｂーラクタマーゼ阻害活性を
有する抗生物質ＰＳ‐５トリチル誘導体の製造方法が提
供される。

上記方法において使用し得るトリフェニルメタンの反応
性議導体としては、カルボキシル基の如き官能基と反応
し得る反応性基をもつトリフェニルメタンの如何なる官
能性誘導体をも使用することができ、例えば式式中、Ｙ
は離脱性（ｃｌｅａｖｉｎｇ−ｏｆｆ）原子又は基を表
わす、で示される化合物が好適である。

上記式｛１）における離脱性原子又は基（Ｙ）としては
、例えば塩素、臭素、ヨウ素の如きハロゲン原子；水酸
基、チオール基などが挙げられ、殊にハロゲン原子が適
当である。

しかして、上記式ｍの化合物の代表例としては次のもの
を挙げることができる。

トリチルアルコール、 トリチルメルカプタン、 トリチルクロライド、 トリチルブロマイド、など。

抗生物質ＰＳ−５と上記トリフェニルメタンの反応性議
導体との反応は、カルボキシル基、アミノ基、水酸基等
の官能基を有する有機化合物にトリチル基を導入する際
に屡々使用されるそれ自体公知の方法に従って行うこと
ができる。

抗生物質ＰＳ−５とトリフェニルメタンの反応性議導体
との反応は媒体の不在下に行なうことができるが、一般
に不活性液体媒体中で行なうのが好ましく、使用し得る
不活性液体媒体としては、例えば、ベンゼン、トルェン
、ｎーヘキサン、シクロヘキサンなどの炭化水素類；ク
ロロホルム、塩化メチレンなどのハロゲン化炭化水素類
；ジメチルホルムアミド、ヘキサメチルホスホトリアミ
ドなどのアミド類；ジメチルスルホキシド：ジェチルエ
ーテル、ジイソプロピルエーテル、ジｎーブチルエーテ
ル、テトラヒドロフラン、ジオキサンなどのエーテル類
；酢酸エチル、酢酸ｎ−ブチ４ル、などのェステル類；
アセトン、メチルエチルケトンなどのケトン類などが挙
げられ、これら液体媒体はそれぞれ単独で使用てもよく
、或いは必要に応じて２種以上混合して用いることもで
きる。

反応温度は臨界的ではなく、使用する該反応性誘導体の
種類、液体媒体の種類等に応じて広範に変えることがで
き、抗生物質ＰＳ−５が著るしく分解しない温度範囲内
で任意に選ぶことができるが、一般に６０３０以下の温
度、好ましくは０〜４０こ○の範囲、さらに好ましくは
５℃〜室温の範囲が有利である。

また、上記反応に際しては、必要に応じて、ト○リメチ
ルアミン、トリエチルアミン、ピリジン、ジシクロヘキ
シルカルボジィミドなどの反応促進剤を添加してもよい
。

かかる条件下に反応は大体１〜２４時間以内、通常３〜
１幼時間で終らせることができる。

なお、上記トリフェニルメタンの反応性誘導体と反応せ
しめられる抗生物質ＰＳ−５は必ずしも単離されたもの
を使用する必要はなく、前記抗生物質ＰＳ−５生産菌の
培養物又はその培養物から菌体を分離した後の培養液を
使用することができ、或いは前述した単離精製法に従っ
て少なくとも部分的に精製した粗製の抗生物質ＰＳ−５
を使用することもできる。

かかる部分精製物としては、例えば該培養液の活性炭吸
着溶出濃縮物；培養液のダイヤイオンＨＰ−２０（三菱
化成工業■製）吸着熔出濃縮物；該濃縮物をＱＡＥ−セ
フアデックス（フアルマシャ社製）に吸着させグラジェ
ンド食塩濃度の燐酸緩衝液で、溶出し、活性炭で脱塩し
た濃縮物：塩化ペンザルコニゥムの存在下塩化メチレン
での抽出濃縮物；クラウン化合物の存在下クロロホルム
での抽出濃縮物；低温でのＰＨ３．５におけるブタノー
ル抽出濃縮物などが挙げられる。かくして得られる抗生
物質ＰＳ−５トリチル譲導体は、抗生物質の分野におけ
るそれ自体公知の種々の方法により、反応混合物から分
離することができ、或いは精製することができる。

例えば、反応終了後、先ず副生物などの水溶性不純分を
除去するため、反応液を水性媒体中にあげる。その際ｐ
Ｈをほぼ中性に保つため該水性媒体としては中性緩衝液
を使用するのが望ましい。次いで、この混合液を例えば
、酢酸エチル、ベンゼン、クロロホルムなどの水と実質
的に混和しない非極性有機溶媒で処理して抗生物質ＰＳ
一５トリチル譲導体を該有機溶媒層に抽出する。この抽
出に際し、例えは食塩、硫酸アンモニウムなどの如き塩
類を加え、塩析効果により抽出効率を高めるようにする
ことができる。該溶媒層は、脱水苔硝などで乾燥した後
、それ自体公知の方法に従い、例えばバイオ・ビーズＳ
〜Ｘ３（バイオラッド社製）、セフアデックスＬＨ一２
０（フアルマシャ社製）などによるゲル炉過；シリカゲ
ル、アルミナ、フロリジル（アメリカ・フロリジン社製
）などを担体とする吸着クロマトグラフィーなどを適宜
組合せ且つ必要に応じて反復使用して、該トリチル誘導
体を単離することができる。

かくして、精製されたトリチル誘導体はさらに、例えば
ベンゼン、トルェン、キシレン、酢酸エチル、ジェチル
ェーテル、塩化メチレン、クロロホルム、ヘキサン、石
油エーテル（沸点範囲：３０〜６０ｄｏ）などの如き溶
媒単独または混合溶媒から再結晶させることができ、こ
れによってさらに高純度に精製することができる。

以上の如くして製造される抗生物質ＰＳ−５トリチル議
導体は、分子構造中にトリチル基（トリフェニルメチル
基）を含む文献未載の新規な物質であり、強い杭菌力及
び８ーラクタマーゼ阻害活性を有する点で極めて特徴的
である。

該トリチル誘導体の理化学的性質及び生物学的性質を示
せば次の通りである。

抗生物質ＰＳ−５トリチル譲導体の理化学的性質Ａ 融
点上記トリチル誘導体は通常、８３〜８８℃の範囲内の
融点を示す。

なお、本明細書における融点の表示は、コフラー法によ
り１分間１℃の温度上昇速度で測定（測定装置：矢沢科
学器械工業■製、ＢＹ−１型徴量溶融点測定装置）した
値による。Ｂ 柴外線吸収スペクトル 入ＣＨ３州′ｍａＸ二３１５．５ｎｍ、 Ｃ 赤外線吸収スペクトル クロロホルム中における赤外線吸収スペクトルは下記の
特性極大吸収波数を示す、３４３０，３１００〜３００
０，２９９０，２９５０，１７７０，１６９５，１６６
５，１４４５，１３４０，１２７５及び１１３０伽‐１
。

Ｄ 溶解性水、ヘキサン及び石油エーテル（沸点範囲３
０〜６０００）に実質的に不落；ベンゼン、酢酸ェチル
、クロロホルム、アセトン及びジメチルスルホキシド‘
こ易溶。

Ｅ 呈色反応 エールリッヒ試薬反応 陽・性塩化トリ
フェニルテトラゾリウム反応 陰性塩化第二鉄反応
陰性ヨード−塩化白金酸反応
揚陸ヒドロキシルアミンー塩化第二鉄反応
陽・性塩素−トリジン試薬反応 陽
性ニンヒドリン反応 陰性Ｆ 物
質の色無色 Ｇ 薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ） 下記のＴＬＣプレート及び溶媒を用い、上記トリチル誘
導体をＴＬＣにかけた時、下記のＲｆ値を示す。

【ａー プレコートした可榛・性プレート〔吸着剤：セ
ルロース、厚み：１６０〃、蛍光指示薬：鉛−マンガン
活性化ケイ酸カルシウム、本明細書ではイーストマン・
コダック社製「クロマグラムシートＮｏ．６０６５」を
使用〕ｎ−ブタノール／エタノール／水（４／ １／５）の上層 Ｒｆ＝０．５６ｉー
プロパノール／水（８／７）Ｒｆ＝０．９１ｎ−ブタノ
ール Ｒｆコ１．０ｉ−プロパノール／
水（１／４）Ｒｆ＝１．０脚 プレコートしたガラスプ
レート〔吸着剤：シリカゲール、厚み：０．２５側、本
プレートとして、本明細書ではェー・メルク社製ＤＣ−
フェルテイツヒブラツテン・キーゼルゲル６岬２５４を
使用〕ベンゼン／アセトン（２／１） Ｒｆ＝０．２
９日 ８−ラクタマーゼに対する挙動プロテウス・ブル
ガリス、シトロバクダー・フロィンデイ及びバチルス・
セレウスの６−ラクタマーゼにより不活性化される。

上記トリチル誘導体は、後述する実施例９に示すように
、重クロロホルム中における１００ＭＨＺブロトン核磁
気共鳴スペクトルにおいて、テトラメチルシランを内部
標準とした場合、トリチル基に由来すると考えられる下
記のケミカルシフトＮＭＲ６５８ＣＬ３：７．２〜７．
６（マルチプレット）が認められ、これにより談議導体
はトリチル基を含むことが確認された。

また、上記トリチル議導体は上記の理化学的性質に加え
て、下記の元素分析結果の概算値から明らかな通り、分
子構造中に、炭素、水素、窒素及び硫黄原子を含むもの
である１ 元素分析 炭素 約６２％ 水素 約６％ 窒素 約４％ 硫黄 約５％ また、上記トリチル誘導体は、前記抗生物質ＰＳ−５そ
れ自体に比べてはるかに安定であり、ほぼ中性乃至ｐＨ
９以下の弱アルカリ性水溶液中６０００に加熱した時、
少なくとも２０分以内では、該トリチル体の抗菌活性は
小なくとも７５％、通常９０％以上保持される。

この安定性は公知の抗生物質チェナマィシン（特開昭５
１−７３１９１号公報）に比べてはるかに優れている。
抗生物質ＰＳ−５トリチル誘導体の生物学的性質‘１１
抗菌スペクトル本発明の抗生物質ＰＳ一５トリチル譲
導体は広範囲の抗菌活性を有し、各種微生物、例えばス
タフィロコッカス属、ディプ。

コツカス属、ストレブトコッカス属、サルシナ属、バチ
ルス属等に属するグラム陽・性菌に対し非常に強い抗菌
力を示し、更に例えばアルカリゲネス属、コマモナス属
等に属するグラム陰性菌に対しても非常に強い抗菌力を
示す。また、本発明の抗生物質ＰＳ−５トリチル誘導体
は、例えばェシェリヒア属、クレブシェラ属、プロテウ
ス属、等に属するグラム陰性菌に対してもかなり強い抗
菌力を示す。

特に、本発明の抗生物質ＰＳ−５トリチル誘導体は、６
−ラクタム環を有する抗生物質に対して耐性を有する、
例えばシトロバクター属、プロテウス属、ェンテ。

バクター属、クレブシェラ属、セラチア属、等に関する
グラム陰性細菌に対して強い抗菌力を示す点で特徴的で
ある。‘２） ８ーラクタマーゼ生産菌に対する他の抗
生物質の抗菌力の増進本発明の抗生物質ＰＳ−５トリチ
ル誘導体は、シトロバクター・フロインデイー、プロテ
ウス・ブルガリス、エンテロバクター・アエ０ゲネス、
セラチア・マルセセンスなどの８ーラクタマーゼ生産菌
に対し、他の抗生物質、特にペニシリン系やセフアロス
ポリン系などの８−ラクタム系抗生物質の抗菌力を増進
させる能力を有し、しかもその能力は多くの場合相乗的
である。

‘３｝ 生体内での活性病原性グラム陽性菌を感染させ
たマウスに投与した時、箸るしい治療効果が認められた
。

｛４｝ 毒性後記実施例９に示す通り、病原性グラム陽
性菌の感染を治療するＣＤ５ｏ量の約４倍量をマウスに
投与したが著るしい毒性は認められなかった。

かくして、本発明によれば、抗生物質ＰＳ−５トリチル
誘導体が上記理化学的性質及び生物学的性質を有するこ
とを確認することにより、該トリチル誘導体の製造に用
いた抗生物質や目的とする抗生物質ＰＳ−５であること
が確認できる。

以上述べた抗生物質ＰＳ−５及びそのトリチル誘導体は
、前述した通り、強い抗菌力を有し、グラム腸性及びグ
ラム陰性細菌による感染症の予防、治療及び／又は処置
のための抗菌剤の活性成分として、人間のみならず、人
間以外の動物例えば０甫乳動物、家畜類、魚類等に対す
る細菌感染症の予防、治療、処置等のために有効に使用
することができる。本発明の抗生物質ＰＳ−５又はその
トリチル誘導体は、経口的、局所的又は非経口的（静脈
内、筋肉内、腹腔内、など）に投与することができ、こ
れら投与方法に応じて、通常行なわれている如く種々の
薬剤形態に製剤して使用することができる。

例えば、本発明の抗生物質ＰＳ−５又はそのトリチル護
導体は製薬学的に許容し得る迫体材料、希釈剤などと共
に、固体形態（例えば錠剤、カプセル剤、粉剤、顎粒剤
、礎衣錠、トローチ、粉末スプレー剤、坐剤など）、半
固体形態（例えば軟骨、クリーム、半固体状カプセル剤
など）、或いは液体形態（例えば、液剤、乳剤、懸濁剤
、ローション、シロップ剤、注射剤、液体スプレーなど
）に製剤することができる。本発明の抗生物質ＰＳ−５
又はそのトリチル譲導体を含有する単位投与剤型は、液
体、半固体、固体の如何を問わず、一般に０．１〜９＄
重量％、好まし〈は１０〜６の重量％の活性成分を含有
することができる。

これら製剤に使用し得る坦体材料、賦形薬、希釈剤等の
助剤の代表的なもの、並びに製剤方法についてさらに説
明すれば次の通りである。

経口投与のための錠剤およびカプセルは単位投与剤形を
とることができ、その際に使用し得る結合剤としては、
例えば、シロップ、アラビアゴム、ゼラチン、ソルヒト
ール、トラガカントまたはポリビニルピロリドンなど：
賦形剤としては例Ｚえば、乳糖、白糠、でんぷん、りん
酸カルシウム、ソルビトールまたはグリシンなど：糟沢
剤としては例えば、ステアリン酸マグネシウム、損石、
ポリエチレングリコール、シリカなど：崩壊剤として例
えば、じやがし、もでんぷんなど、また湿潤剤としては
例えばラウリル硫酸ナトリウムなどが挙げられる。

錠剤の場合通常の方法に従って剤皮で被うことができる
。経口用液剤は、油または水一懸濁剤、液剤、乳剤、シ
ロップ剤などの剤型にすることができ、また使用に際し
て、水または他の適当な担体と混合製剤するための乾燥
品として提供することができる。

これらの液剤は通常次のような添加剤を含有することが
できる：懸濁化剤例えばソルビトールシロツプ、メチル
セルローズ、糖シロップ、ゼラチン、ヒドロキシエチル
セルローズ、力ルボキシメチルセルローズ、ステアリン
酸アルミニウムゲル、水素添加した食用油脂など；乳化
剤、例えば、レシチン、ソルビタンモノオレエート、ま
たはアラビアゴムなど：非水坦体例えばアーモンド油、
分画したココナッツ油、油状ェステル、プロピレングリ
コール、またはエチルアルコールなど；保存剤例えばｐ
−ヒドロキシ安息香酸メチル、ｐ−ヒドロキシ安息香酸
プロピル、ソルピン酸など。坐剤は通常の坐剤基剤例え
ばココアバターまたは他のグリセリドなどを含むことが
できる。

注射剤はアンプル入りまたは保存剤含有の多投与用容器
入りの単位投与剤型で提供することができる。これは通
常油性または、水性担体による懸濁剤、液剤、乳剤の如
き剤型をとることができ、懸濁化剤安定剤および／また
は溶解補助剤のような剤型を含有し得る。別法として、
前記活性成分を、使用時にパィロージェンを含まない無
菌水でとかして製剤できるような粉末剤型とすることが
できる。抗生物質ＰＳ−５又はそのトリチル誘導体はま
た、鼻およびのどの粘膜、気管支組織を通して吸収され
るに適した剤型に製剤することができ、更に、粉末スプ
レー、液体スプレー、吸入剤、トローチ、咽喉塗布剤な
ど適宜の剤型にすることができる。

目および耳へ投薬するための製剤は、液体または半固体
状のカプセルとして提供することができ、また点滴剤と
することもできる。局所に適する製剤には軟膏剤、クリ
ーム、ローション剤、塗布剤、粉剤などが含まれ、これ
らは疎水性または親水性基剤を用いて製剤することがで
きる。また上記製剤には、安定剤、結合剤、抗酸化剤、
保存剤、滑沢剤、懸濁化剤、粘糠剤、橋臭剤、緩衝剤な
どの成分を含ませることができる。さらに本発明の抗生
物質ＰＳ一５又はそのトリチル誘導体をニワトリ、ウシ
、ヒツジ、ブタなどのための動物薬として使用する場合
は、例えば、長時間作用のまたは短時間崩壊性の基剤を
用いて乳腺内用製剤として製剤することもでき、また公
知の方法に従って、濃厚飼料添加剤として調製すること
もできる。本発明により提供される上記薬剤は抗生物質
ＰＳ−５又はそのトリチル誘導体のみを活性成分として
含むことができ、或いは他の治療上有用な活性成分を含
ませるようにしてもよい。

特に本発明の抗生物質ＰＳ一５又はそのトリチル誘導体
は、前述した通り、３ーラクタマーゼ生産性細菌に対し
、８−ラクタム系抗生物質の抗菌力を相乗的に増進させ
る能力を有しているから、公知の８ーラクタム系抗生物
質と併用するようにしてもよい。

かかる８ーラクタム系抗生物質の例としては、ベンジル
ベニシリン、フエノオキシメチルベニシリン、力ルベニ
シリン、アンピシリン、アモキシシリンなどのペニシリ
ン系抗生物質；セフアロリジン、セフアロチン、セフア
ゾリン、セフアレキシン、セホキシチン、セフアセトリ
ル、セフアマンドール、セフアピリン、セフラジン、セ
フアログリシンなどのセフアロスポリン系抗生物質を挙
げることができる。本発明の抗生物質ＰＳ−５又はその
トリチル誘導体を上記の如き８−ラクタム系抗生物質と
併用する場合、両者の割合は臨界的ではなく、広範囲に
わたって変ることができるが、一般に抗生物質ＰＳ−５
又はそのトリチル誘導体対該Ｐ−ラクタム系抗生物質の
重量比で表わして、２０：１乃至１：１５０、好ましく
は１０：１乃至１：１００の範囲とすることができる。

本発明の抗生物質ＰＳ−５又はそのトリチル誘導体の投
与量は、治療するべき対象及びその症状、宿主の体重、
感染型、投与方法および投与回数によって大幅に変える
ことができるが、通常１日当り０．０５〜５００の９／
ｋ９体重、特に好ましくは０．５〜２００の９／ｋ９体
重を、１回で又は数回に分けて投与するのが有利である
。

しかし専門医の判断、個体差、症状の軽重等に応じて、
上記投与量範囲より少ない量又は多い量を投与すること
も可能である。本発明の抗生物質ＰＳ−５又はそのトリ
チル譲導体は上記した如き薬剤の形で使用し得るのみな
らず、動物飼料中に直接含ませることもでき、又は動物
飼料用添加物の形にしてもよく、或いは食品保存用の殺
菌剤乃至防腐剤の活性成分としても使用することができ
る。

次に実施例により本発明をさらに説明する。

なお、以下の実施例において用いる抗菌活性物質の定性
及び定量は下記の方法で行なった。‘１｝ビオアッセィ
法 一夜、ニュートリヱント・ァガ−上で培養したコマモナ
ス・テリゲナ（Ｃｏｍａｍｏ船ｓｔｅｍｇｅ脇）Ｂ−９
９６の菌体を、ニュートリェント・フロス中に懸濁させ
、その菌体に由来する６１仇ｍ吸光度が、０．０４を示
す種母液をつくる。

極東粉末ブイヨン（極東製薬工業■製）０．８％及びバ
クト・アガー（ディフコ社製）１％よりなるとげた寒天
塔地に種母液１％を接種し、これを７の【ずつ９ｃｍ径
のべトリ皿に分注し固化させて、コマモナス検定板とす
る。一夜、ニュートリェント・フロス中で振顔培養した
スタフィロコッカス・アウレウス（ＳＰｐｈｙ−ｌｏｃ
ｏｃｃ瓜ａｕｒｅｕｓ）ＦＤＡ２０坪の培養液をニュー
トリェント・ブロスで５の音‘こ希釈して種母液とする
。

種母液１％を接種した、極東粉末ブイヨン（極東製薬工
業■製）１％及びバクト・アガー（ディフコ社製）１％
よりなるとげた寒天培地７の‘ずつを９伽径のべトリ皿
に分注し、固化させてスタフィロコッカス検定板とする
。一夜ニュートリェント・アガー上で培養したアカリゲ
ネス・フエカーリス（Ｎｋａｌｉｇｅｎｅｓｆａｅｃａ
ｌｉｓ）Ｂ−３２６の菌体を、ニュートリェント・フロ
ス中に懸濁させ、その菌体に由来する６１仇ｍ吸光度が
０．０２を示す種母液をつくる。

極東粉末ブイヨン（極東製薬工業■製）０．５％及びバ
クト・アガー（デイフコ社製）１％よりなるとげた寒天
培地に種母液１％を接種し、これを７の（ずつ９肌径の
べトリ皿に分注し固化させてアルカリゲネス検定板とす
る。被検液は通常８肋径のパルプ・ディスクにしませ、
炉紙上に置いて余分の液を除去した後、検定板上に置き
、３５二○で２加時間培養する。

阻止帯直経をセフアロリジン標準液のそれと比較して、
１の（当りのセフアロリジン単位を求める。本明細書に
おいては、セフアロリジン１００ｒ夕／羽のそれと同じ
阻止帯直径をしめす抗菌力価を１００セフアロリジン単
位／肌とする。また、固体試料１の９を１羽に熔解した
溶液が、１セフアロリジン単位／の‘の抗菌力価をしめ
した時、その固体試料比活性を１セフアロリジン単位／
彬９とする。ただし、被験液によっては、検定菌により
決定されるセフアロリジン単位が異るので、使用する検
定菌の種類に応じてそれぞれコマモナス・セフアロリジ
ン単位（ＣＣＵと略す）、スタフィロコッカス・セフア
ロリジン単位（ＳＣＵと略す）、アルカリゲネス・セフ
アロリジン単位（ＡＣＵと略す）と表示する。なお、抗
生物質ＰＳ−５トリチル誘導体１仏のょ１０．８コマモ
ナス・セフアロリジン単位を示す。｛２１ビオオートグ
ラフイー 上記ピオアッセィ法において、９肌蓬べトリ皿を用いる
代りにタテ３２伽×ョコ２４弧の血を用い、被検菌を接
種した寒天塔地１００のＺを分注し固化させて大型検定
板をつくる。

被検液の展開後のペーパークロマト炉紙を上記で作った
大型検定板の寒天表面に張り、１５分後取り除き、大型
検定板を３５ｑｏ、２０時間培養し、阻止帯の位置より
ペーパークロマトグラムのＲｆ値を算出し（定性）、且
つ阻止帯の大きさから半定量することができる。

薄層クロマト板を用いる場合は、薄紙を介して、成分面
がふれるように寒天表面に張り、１扮ご後取り除き、上
記と同様操作により定性及び半定量を行なう。実施例
１５００泌客ェルレンマイヤーフラスコに１００の上の
下記組成の種母培地（ＳＥ−４）を入れ、常法により、
１２０ｑｏ、１５分間滅菌した。

一方、試験管内寒天斜面上でストレブトミセス・エスピ
ーＡ２７１（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓｓｐ．Ａ２７１
）繭株の胞子を充分着生させ、この試験管に０．０２％
のツイン８０（アトラス社製、界面活性剤、Ｔｗｅｅｎ
■８０）水溶液を１０の‘入れ、軽く燈拝して胞子懸濁
液を調製した。この胞子懸濁液１の‘を先の種母培地に
接種し、２８ｏｏで４８時間ロータリーシェーカー（２
０比ｐｍ、振幅７肌）で振濠培養した。この種母培養液
２の‘を１００叫の下記組成の生産培地を含む５００の
【客ェルレンマィャーフラスコに接種し、２８ｏ０で４
８〜９既時間ロータリーシェーカーで振濠培養した。種
母培地（ＳＥ一４）の組成 ビーフエキストラクト（デイフコ） ０．３％（Ｗ／Ｖ） バクトートリプトン（デイフコ） ０．５％（Ｗ／Ｖ） グルコース ０．１％（Ｗ／Ｖ）可溶性
でんぷん ２．４％（Ｗ／Ｖ）酵母エキス
０．５％（Ｗ／Ｖ）炭酸カルシウム
０．４％（Ｗ／Ｖ）脱脂大豆粉
０．５％（Ｗ／Ｖ）ｐＨ７．５（殺菌前）生産
培地の組成 （１｝ ＡＧ−１培地 グルコース １．５％（Ｗ／Ｖ）コンス
ターチ ２．５％（Ｗ／Ｖ）コーステイ
ープリカー ２．０％（Ｗ／Ｖ）乾燥酵母
１．０％（Ｗ／Ｖ）ＤＬーメチオニン
０．１％（Ｗ／Ｖ）塩化コバルト（ＣｏＣ
１２・肌２０）０．０００１３％（Ｗ／Ｖ） ｐＨ７．２（殺菌前） ‘２｝ ＡＧＡ一２培地 グルコース １．５％（Ｗ／Ｖ）ポテト
スターチ ２．５％（Ｗ／Ｖ）コーステイ
ープリカ− ２．０％（Ｗ／Ｖ）乾燥酵母
１．０％（Ｗ／Ｖ）塩化コバルト（ＣｏＣ
１２・細２０）０．０００１３％（Ｗ／ｖ） ｐＨ６．５（殺菌前） 糊 ＡＧＢ−１培地 マルトース ３．０％（Ｗ／Ｖ）コース
テイ−ブリカー １．０％（Ｗ／Ｖ）乾燥酵母
１．０％（Ｗ／Ｖ）塩化コバルト
（ＣｏＣ１２・肌２０）０．０００１％（Ｗ／ｖ） ｐＨ６．５（殺菌前） ‘４）ＡＧＢ−４１培地 マルトース ５．０％（Ｗ／Ｖ）可溶性
でんぷん １．０％（Ｗ／Ｖ）グリセリン
０．３％（Ｗ／Ｖ）乾燥酵母
２．５％（ＷノＶ）食塩
０．５％（Ｗ／Ｖ）リン酸二カリウム
０．０５％（Ｗ／Ｖ）硫酸マグネシウム（ＭｇＳ０４・
７日２０）０．０５％（Ｗ／Ｖ）炭酸カルシウム
０．３％（Ｗ／Ｖ）塩化コバルト（ＣｏＣ１２
・母ＬＯ）０．０００１３％（Ｗ／Ｖ） ｐＨ７．０（殺菌剤） （５）ＭＬ−１母音地 グリセリン ４．０％（Ｗ／Ｖ）べプト
ン ０．５％（Ｗ／Ｖ）グルコース
０．２％（Ｗ／Ｖ）ポテトスターチ
０．２％（Ｗ／Ｖ）脱脂大豆粉
０．５％（Ｗ／Ｖ）乾燥酵母
０．５％（Ｗ／Ｖ）食塩 ０．
５％（Ｗ／Ｖ）炭酸カルシウム ０．２％
（ＷノＶ）ｐＨ６．４（殺菌前）【６１ＡＧＯ−１培地 大豆油 ３．０％（Ｗ／Ｖ）乾燥酵
母 ２．０％（Ｗ／Ｖ）食塩
０．５％（Ｗ／Ｖ）リン酸二カリウム
０．０５％（Ｗ／Ｖ）硫酸マグネシウム（Ｍ
ｇＳ０４・７日２０）０．０５％（Ｗ／Ｖ）炭酸カルシ
ウム ０．３％（Ｗ／Ｖ）塩化コバルト（
ＣｏＣ１２・ＳＬＯ）０．０００１３％（Ｗ／Ｖ） ｐＨ７．０（殺菌前） 各培養フラスコより経済的にサンプリングし、遠心分離
してえた上燈液について、ディスクによるビオアッセィ
法により前述した方法で抗菌力価を測定した。

コマモナス・テリゲナＢ−９９０ スタフイロコツカス
・アウレウスＦＤＡ２０餌およびアルカリゲネス・フェ
カーリスＢ−３２６を検定菌とした各塔地での７幼時間
の抗菌力価は次のとおりであった。表−５ 実施例 ２ 実施例１と同じ方法で培養した種母培養液１００の‘を
、１５そのＭ山一１９宅地を入れた３０そ客ジャーファ
ーメンタ−に接種し、２８℃、２０仇ｐｍ蝿拝、７．５
そ／分通気で、９６時間まで通気擬群培養を行った。

消泡剤として信越シリコンＫＭ−７５（信越化学■製）
を０．０５％使用した。経時的に培養液をサンプリング
し、遠心分離した上燈液について抗菌力価を測定した。
各時間の抗菌力価は次のとおりであった。表‐６ 実施例 ３ ストレプトミセス・エスピーＡ２７１（Ｓｔｒｅｐ−ｔ
ｏｍｙｃｅｓｓｐ．Ａ２７１）を実施例１と同じ方法で
培養して、フラスコ種母培養液をつくり、これの１００
の‘を１５そのＳＥ−４培地を入れた３０〆容ジャーフ
ァーメンターに接種した。

２８ｏ０で、２０仇ｐｍ鷹拝、７．５夕／分通気で、２
独特間培養し、この培養液１そを１００そのＭ山一１９
培地を入れた２００そ客、ステンレスタンク発酵槽に接
種し、２８℃で、１０仇ｐｍ樫伴、５０そ／分で７２時
間通気蝿梓培養した。

培養液の遠心分離上燈の抗菌力価は６にＣＵ／の‘であ
った。

培養液に５％（Ｗ／Ｖ）量のトプコパ−ライト（東興パ
ーラィト■製）Ｎｏ．３４を添加しフィルタープレスで
炉過して、８０その炉液をえた。

実施例 ４ 活性炭吸着濃縮物の調製 実施例１の方法で培養した、ＭＬ−１９者地７幼時間培
養のフラスコ１０本の培養液を集め、トプコパーラィト
（東興パーラィト■製）Ｎｏ．３４を２％（Ｗ／Ｖ）添
加してブフナー漏斗で吸引炉過して、培養炉液８００柵
をえた。

ｐＨ７〜８であることを確認の後、特製白鷺活性炭（武
田薬品工業■製）１６夕を加え、１５分間澱梓の後、遠
心分離により沈澱を集めた。８００の‘の蒸留水で洗浄
し遠心分離後、４００の‘の５０％（Ｖ／Ｖ）アセトン
水を加えて、３０分間室温で鷹拝し、これを遠心分離し
て上燈をえた。

ロータリーェバポレーターを用い、これを３０〜３５ｑ
ｏで濃縮して５０の‘の濃縮液をえて。かくして、５本
ＣＵ／柵の力価の培養液から８０的ＣＵ／舷の力価の濃
縮液がえられた。

比較例 １３ーラクタマーゼ阻害活性を有する抗生物質
として特公階５０一１３５２９４皮び椿開昭５０一１４
０６９２号公報に提案されているＭＭ４５５０（複合物
）が、本発明の抗生物質ＰＳ−５と別異の物質であるこ
とを立証するため、以下の実験を行なった。ＭＭ４５５
０（複合物）生産菌として特開昭５０一１３５２９４お
よび樽関昭５０−１４０６９２号公報に記載されている
ストレブトミセス・オリバセウスＡＴＣＣ３１１２６（
＝ ＡＴＣＣ２１３７９／Ｍ３）、同ＡＴＣＣ２１３
８０および同ＡＴＣＣ２１３８２を、大豆粉（味の素社
製ミート特等）１．０％、グルコース２．０％、炭酸カ
ルシウム０．２％、および塩化コバルト（ＣｏＣ１２・
細２０）ｏ．００１％、（殺菌前ＰＨ７．０）の組成の
培地１００の【を入れて殺菌した５００の‘客ェルレン
マィャーフラスコにそれぞれ接種し、２がｏで７勿時間
、ロータリー振縁培養を行い、培養炉液中の活性成分を
特製白鷺活性炭に吸着させ、その５０％アセトン溶出液
を濃縮後、東洋炉紙Ｎｏ．５０（東洋炉紙■製）で８０
％アセトニトリルノトリスＥＤＴＡ（アセトニトリル・
２ｏの‘、亮Ｍトリス（ヒドロキシメチル）アミノメタ
ンー塩酸（ｐＨ７．５）緩衝液３ｏの‘、市Ｍヱチレン
ジアミン四酢酸ナトリウム塩水溶液（ｐＨ７．５）１の
【からなる）溶媒で下降法ペーパークロマトグラフィー
を行った後、コマモナス・テリゲナＢ−９９６を検定菌
としてビオオートグラフイーを行った。

また、本発明の前記Ａ２７１菌株を、グリセリン４．０
％、ベプトン０．５％、グルコース０．２％、ポテトス
ターチ０．２％、脱脂大豆粉０．５％、乾燥酵母０．５
％、ＮａＣＩＯ．５％および炭酸カルシウム０．２％、
（殺菌前ｐＨ６．４）の組成の培地で上記と同様に培養
した培養炉液を同様処理してビオオートグラフィーを行
った。

その結果は、添付図面第１図に示す通りである。第１図
中Ａはストレプトミセス・オリバセウスＡＴＣＣ３１１
２６（＝ＡＴＣＣ２１３７９ノＭ３）の、Ｂは同ＡＴＣ
Ｃ２１３８０の、Ｃは同ＡＴＣＣ２１３８２の、および
Ｄは本発明のストレプトミセス・ェスピーＡ２７１菌株
の溶出濃縦液のビオオートグラムである。本図から明ら
かな通り、Ｄの生産物である成分１、すなわち本発明の
抗生物質ＰＳ一５は、Ａ，Ｂ，およびＣの生産物中には
認められず、また、ＡおよびＣの生産物である成分０お
よび、Ａ，．Ｂ，およびＣの生産物である成分ｍは明ら
かに成分１とは異なったＲｆ値をしめす別異の物質であ
ることが判る。すなわち、ストレプトミセス・ェスピー
Ａ２７１菌株の生産物である抗生物質ＰＳ−５は、特関
昭５０一１３５２９４及び５０−１４０６９２号公報に
記載されたＭＭ４５５０（複合物）生産菌の生産物とは
明らかに区別される新規な抗生物質である。実施例 ５ ダイヤイオンＨＰ−２の皮着溶出濃縮物の調製実施例１
の方法で培養したＭＬ−１＄宅地７幼時間培養のフラス
コ１５０本の培養液を集め、エチレンジァミン四酢酸二
ナトリウムを１００雌添加し、トブコパーラィトＮｏ．
３４を２％（Ｗ／Ｖ）添加し、大型ブフナー漏斗で吸引
淀過して培養炉液１４．１そ（ｐＨ７．９）をえた。

これを直径７伽、高さ５０弧のダイヤイオンＨＰ−２０
（三菱化成■製）カラムに吸着させ、蒸留水７そで洗浄
後、５０％（Ｖ／Ｖ）〆タノール水で溶出した。培養炉
液および各溶出面分の力価は次の通りであった。表−７ 画分８から画分１４までの港出液を集め、ロータリー・
ェバポレーターを用い、３０００以下で約１００の‘ま
で濃縮し、その濃縮液を凍結乾燥して比活性５４ＣＣＵ
／脚の黄褐色粉末２．６タえた。

この粉末はペーパークロマトグラフィーおよび薄層クロ
マトグラフィー分析によって、その中に含有される抗菌
活性成分は１種のみであることが確認された。従って、
以下の該抗菌活性成分、すなわち抗生物質ＰＳ−５の確
認においては、コマモナス・テリゲナＢ−９９６に対す
る抗菌活性を指標として、該抗生物質を追跡し、その抗
生物質が、次の如き性質を有するものであることを確認
した。１ 安定性： 抗生物質ＰＳ−５を含む上言己黄褐色粉末を５０にＣＵ
／の【になるように蒸留水に溶解した。

別にＭ／１５りん酸カリウム水溶液をつくり、これに掛
りん酸または州水酸化ナトリウムを加えてｐＨを調整し
、ｐＨ３〜９の各ｐＨの溶液を調製し、１私づつ試験管
に入れた。この各ｐＨの溶液中に、はじめに調整した抗
生物質ＰＳ−５含有溶液を１の‘づっ加え、少量の州り
ん酸または利水酸化ナトリウムにて、所要のＰＨに調整
した後、６０００に保った湯浴中に３０分間浸し、流水
冷却後、少量の掛りん酸または利水酸化ナトリウムにて
−を７．０に調整した。対照は、ｐＨ７．０の溶液を氷
水中につけておいたものを用い、コマモナス・テリゲナ
Ｂ−９９６を被検菌とするビオアッセィにより、残存活
性を測定し、対照の活性を１００％として表わした。結
果は次の通りであった。この結果から抗生物質ＰＳ−５
はＰＨ６．０〜９．０の範囲内の水溶液中６０００で３
０分間加熱してもかなり安定であることがわかる。

また抗生物質ＰＳ一５は低温下においては、低ｐＨ範囲
でもある程度安定で、例えば、一１７℃でｐＨ３．０に
５分間放置した後に少くとも３０％の残存活性をしめし
た。２ 溶解性 抗生物質ＰＳ−５はｐＨ６〜９の水に可溶である。

すなわち、本抗生物質はｐＨ７の水のみならず、塩酸に
よりｐＨ６及びそれより高いｐＨの微酸性に調整された
水性媒体、及び水酸化ナトリウムによりＰＨ９以下の弱
アルカリ性に調整された水性媒体に易溶である。また、
抗生物質ＰＳ−５の黄褐色粉末２５の９をつぎの各々の
溶媒０．５の【と共に２０ｏｏで１分間濃伴した後不溶
物を分離除去した各溶媒中の抗菌活性は櫨梓前の黄褐色
粉末２５の９に含まれる抗菌活性に対してつぎに示す割
合であった。この結果から、抗生物質ＰＳ−５は２０ｑ
ｏにおいて、メタノールに溶解し、エタノールに微溶で
あり、酢酸エチル及びベンゼンには実質的に溶解しない
と推定される。

３ 薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ） 下記のＴＬＣプレート及び溶媒を用いて前記黄褐色粉末
をＴＬＣにかけ前記ビオアッセィ法により検出したとこ
ろ、抗生物質ＰＳ−５は以下に示すＲｆ値を示した。

ｔａ）アビゼル■ＳＦセルロース薄層プレート〔フナコ
シ薬品欄製〕使用ｎ−ブタノール／エタノール／水（７
／７／６容量比；以下に同じ） Ｒｆ＝０．９
４ｉープロパノール／水（７／３） Ｒｆ＝０．９６｛
ｂ｝ シリカゲル薄層プレート（ェー・メルク社製；Ｄ
Ｃ−フェルテイツヒプラツテンキーゼルゲル６岬技４）
使用エタノール／水（７／３） Ｒｆ＝０．８２
ｎ−プロパノール／水（７／３） Ｒｆ＝０．７７４
べ一／ぐ−クロマトグラフイー東洋炉紙柚．５０〔東洋
炉紙■製〕を用い、下記の溶媒を用い、前記黄褐色粉末
をペーパークロマトグラフィーにかけたところ、抗生物
質ＰＳ一５は下記のＲｆ値を示した。

ｎ−プロパノール／水（７／３） Ｒｆ＝０．６８ｎー
プロパノール／ｉプロパノール／水（７／７／６）
Ｒｆ＝０．７０アセトニトリル／水
（８／２） Ｒｆ＝０．３６アセトニトリルノトリス
緩衝液／ＥＤＴＡ（言王１）
Ｒｆ＝０．３４エタノール／水（７／３）
Ｒｆ＝０．６３（言主１）：アセトニトリル１２０
の‘、ＰＨ７‐５の市。

Ｍトリス（ヒドロキシメチル）アミノメタンー塩酸緩衝
液３０の上及びＰＨ７．５の市ＭＩチレンジアミン四酢
酸ナト リウム塩水溶液１の‘から成る混合溶媒。

５ 高圧炉紙電気泳敷 高圧炉紙電気泳動装置（サバント・ィンスッルメント社
製、高圧電源ＨＶ３０００Ａ、泳動槽ＦＰ１８０Ａ）を
用い、東洋炉紙Ｎｏ．５０〔東洋炉紙■製〕上で、前記
黄褐色粉末を電気漆動にかけた所、下記のｐＨの緩衝液
中で下記の挙動を示すことがわかつた。

【１１ 水３０００の‘、バルビタール３．３ｇ及びバ
ルビタ‐ルナトリウム２５．５ｇから成る軸８．６の緩
衝液中、４℃で、４２Ｖ／伽にて３０分間通電すると陽
極側へ２８肌移動した。

【２１ 水２７００泌、酢酸２４０の【及びギ酸６０泌
から成るｐＨ１．９の緩衝液中、４℃で７Ｗ／肌にて２
０分間通電したが移動は確認されなかった。

６ 抗菌活性 ｛１１ 抗菌スペクトル プレイン ハート インフユージョン培地‘‘栄研”（
栄研化学■製）を用いた液体希釈検定法で抗生物質ＰＳ
一５の各種被験菌に対する最小発育阻止単位を測定した
。

抗生物質ＰＳ−５の黄褐色粉末を２７にＣＵ／の上〜５
４ＣＣＵ／の上の濃度範囲に入るように、ＰＨ７．０の
プレイン ハート ィンフュージョン塔地“栄研”（栄
研化学欄製）に溶解し、これを同じ塔地で倍数稀釈して
、抗生物質ＰＳ−５の希釈系列を調整した。

この希釈系列に、上記と同じプレイン ハート ィンフ
ュージョン培地に２８℃で１報時間振濠培養して得た下
記表−８に示す各種被検菌の種母液を、接種後の菌数が
大略１×１び／松【になるように接種し、３５ｏｏで２
斑時間静暦培養し、しかる後生育の有無を観察し、生育
の認められない最低濃度単位を、その菌に対する抗生物
質ＰＳ−５の最小発育阻止単位とした。結果は下記表−
８の通りである。

表 ・一 ８ （注）米クーラクタマーゼ生産菌 ２米 ゲンタマィシン、トブラマィシン耐性株３米テト
ラサイクリン、エリスロマイシン、ロイコマイシン、ク
ロラムフエニコｍル耐性株４米 培地中ＫＩＯ努馬血液
添加 〔２｝ 耐性菌に対するペニシリン系およびセフアロス
ポリン系抗生物質の抗菌活性の増進的 直径９伽のべト
リ皿に、ペニシリンＧまたはセフアロンリジン５０ｒｇ
／の‘を添加したｐＨ７．０ニュートリェントアガ−１
５羽を入れて固まらせ、これを下とし、その上に、８ー
ラクタマーゼ生産生の８−ラクタム耐性菌を接種した同
培地１０Ｍを流して固まらせ、それを上層とした。

この表面に種々の濃度の抗生物質ＰＳ−５を含む水溶液
をそれぞれ２５〃そ荘加した直径８伽のパルプディスク
を置き、３５ｑ０で１糊時間培養後、ディスク周辺の阻
止円の大きさを観察した。対照としてペニシリンＧ及び
セファロリジンのいずれも無添加の同じ培地で同様の実
験を行った。その結果を下記表−９に示す。表一９ 上記結果によれば、単独では抗菌力を示さない濃度のペ
ニシリンＧまたはセフアロリジンに単独では抗菌力を示
さない濃度の抗生物質ＰＳ−５を添加して明らかな抗菌
力の増進が認められた。

（Ｂ｝ この抗菌力の増進は相乗的であることは次の実
験で確かめることができた。

栄養培地中に８−ラクタマーゼ生産性の８ーラクタム耐
性菌、プロテゥス・ブルガリス・Ｐ−５を接種して固ら
せたニュートリェントアガー表面に、ペニシリンＧまた
はセフアロリジンをしませた短冊形炉紙片と、抗生物質
ＰＳ一５をしませた短冊形炉紙片とを、同じ抗生物質の
短冊同士または異る抗生物質の二本の短冊が互に交わる
ように置き、３６０で１斑時間培養した所、適当な濃度
範囲では抗生物質ＰＳ−５の短冊をペニシリンＧまたは
セフアロリジンの短冊との交点部分にのみ阻止帯が観察
され、同じ抗生物質の短冊の交点部分には阻止帯が認め
られなかった。

この結果から、単独では勿論のこと２培濃度でも阻止帝
を与えない上記２種の抗生物質を１塔濃度ずつ混合する
ことにより、両者は相乗的に抗菌力を増進して阻止帯を
与えたと理解することができる。

‘３｝ 生体内での活性 スタフイロコツカス・アウレウス・スミス株をマウス当
り５×１『細胞ずつ腹腔内に感染させたマウスを用いて
、抗生物質ＰＳ−５の生体内での感染治療活性を測定し
た。

感染源接種後直ちに食塩水に溶解した該物質を含む試料
を皮下投与し、７２時間生死を観察した。雄のｄｄｙマ
ウス（静岡）を用いた場合のＣＤ５ｏは８１０的ＣＵ／
ｋ９であった。

７ 毒性 抗生物質ＰＳ−５を含む注射液を雄のｄｄｙマウス（静
岡）に１６２００ＷＣＵ／ｋ９を皮下投与して７２時間
観察を続けたが死亡例は見られなかった。

８ ８−ラクタマーゼに対する挙動 抗生物質ＰＳ−５を含ませたコマモナス検定板で直径３
８柳の阻止円を与える溶液は、プロテウス・ブルガリス
・Ｐ一５の８ーラクタマーゼを添加したコマモナス検定
板では直径２１．５肋の阻止円を与え、またシトロバク
ター・フロインディ・Ｅ−９の８ーラクタマーゼを添加
したコマモナス検定板では直径２１．５柳の阻止円を与
えた。

この結果より、抗生物質ＰＳ−５は、プロテウス・ブル
ガリス・Ｐ一５およびシトロバクター・フロィンディ・
Ｅ−９の生産する８−ラクタマーゼで不活性化されるこ
とが判る。更に、前記黄褐色粉末中の抗菌活性成分（抗
生物質ＰＳ−５）に対する８ーラクタマーゼの作用を調
べた。

使用したＢ−ラクタマ−ゼは、構成的べニシリナーゼ生
産菌バチルス・リケニホルミス（Ｂａｃｉ − １１ｕ
ｓ ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ ）７４９／ Ｃ（Ａ
ＴＣＣ２５９７２）および誘導的べニシリナーゼ生産菌
バチルス・セレウス（Ｂａｃｍ順ｃｅｒｅ船）５６９（
ＡＴＣＣ２７３４８）の培養炉液から、吸着カラムクロ
マトグラフイーで部分的に精製したものである。

これらの酸素調整物のペニシリンＧに対する酸素力価は
、バチルス・リケニホルミス酸素１６６０■単位／のと
、バチルス・セレウス酸素２６９００単位／地（３０ｑ
ｏ、ｐＨ６．８、Ｍ／１０りん酸緩衝液、ヨードメトリ
一法）であった。

なお、この場合の「１単位」とは３０ｑｏ、府６．８で
６０分間に１山モルのペニシリンＧを分解する酸素力価
をいう。バチルス・リケニホルミス酸素０．２の【また
はバチルス・セレゥス酵素０１２５の【（それぞれ約３
．３０山単位のべニシリナーゼを含む）を、前記のコマ
モナス・テリゲナ菌を接種した寒天塔地１００の‘に加
えてべニシリナーゼ含有のコマモナス検定板を作製した
。

対照検定板としての酸素不含コマモナス検定板を含め合
計三種の検定板における抗菌力価を常法により８側ペー
パーディスクで検定した、抗生物質ＰＳ−５及び対照と
してのペニシリンＧ、セフアロリジン、かしめす阻止帯
の大きさは下記表−１０、表一１１及び表−１２‘こ示
す通りであった。

表中、検定板１は酵素を含有せず、検定板０‘まバチル
ス・リケニホルミス酵素を、そして検定板肌まバチルス
・セレゥス酵素をそれぞれ含有するものである。表−１
０ 表−１１ 表一１２ 以上の結果から明らかな通り、本発明の抗生物質ＰＳ−
５はバチルス・セレウス５６９のべニシリナーゼ（Ｂー
ラクタマーゼの１種）によって比較的容易に不活性化さ
れ、また、バチルス・リケニホルミス７４９／Ｃのべニ
シリナーゼによってもある程度不活性化される。

この事実は抗生物質ＰＳ−５の分子中に３−ラクタム環
又はその類似環横造が存在することを示唆している。９
８−ラクタマー絶阻害活性 〔測定法〕 ８−ラクタマーゼ阻害値、１銭ＲはＰ−ラ
クタマーゼによるセフアロリジンの加水分解を１０分間
（基質添加後１分から１１分の間）に５０％阻止するに
必要な物質の量を表わす。

セフアロリジンが加水分解される割合は、２５５ｎｍに
おける吸光度の減少を測定することによって知ることが
できる。８−ラクタマーゼとしては、アフィニティー・
クロマトグラフィー手段により精製したシトロバクター
・フロィンディ（ＣｉＵｏ−舷ｃｔｅｒｆｒｅｕｎｄｉ
ｉ）Ｂ−９またはプロテウス・ブルガリス（Ｐｒｏｔｅ
船ｖ山ｇａｒｉｓ）Ｐ‐５の８ーラクタマーゼを使用す
る。

測定操作は次の通りである。

基質溶液：０．０５〆ｍｏｌｅ／机のセフアロリジンを
含有するｐＨ６．＆ ０．１Ｍ燐酸緩衝液（２５５ｎｍ
における吸光度はほぼ０．７５をしめす）。

酵素液：阻害剤なしの状態で、１０分間で２５５ｎｍ‘
こおける吸光度をおよそ０．１肋威少させる濃度を使用
。

装置：日立分光光電光度計ＵＶ−ＶＩＳ１３母型を用い
、光路１狐、３の【客キュベットの中で反応させながら
測定、測定中キュベットの温度が常に３０ｏｏなるよう
に保温する。

阻害剤希釈液：阻害剤試料をＰＨ６．８、０．１Ｍ燐酸
緩衝液またはジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）で適宜
稀釈する。

対照区としては阻害剤を添加しない希釈液を使用する。
前培養ならびに反応： 基質添加に先立ち、次の組成液を３０００で１５分間前
培養する。

ｐＨ６．＆ ０．１Ｍ燐酸緩衝液 １００山〆酵 素
液 ０．５〜２山ぐ阻害剤希釈液
０．５〜４０り〆前培養終了後基質溶液
３．０の‘を添加して反応を開始
する。

反応は２５別ｍにおける吸光度の変化を測定しながら３
０℃で１０分間以上行い、１０分間（基質添加後１分か
ら１１分の間）にセフアロリジンの加水分解を５０％阻
止するに必要な阻害剤の量（１錆ＲＡｇノ舷）を測定す
る。〔結果〕 上記測定法によると、前記粉末はプロテ
ウス・ブルガリスＰ−５の生産する８ーラクタマーゼに
対して１．３的ＣＵ／泌の１鞠Ｒを示した。この数値は
前記粉末中の活性成分が１．３８ＣＣＵ／の‘の濃度で
プロテウス・ブルガリス・Ｐ一５の３ーラクタマーゼの
活性を５０％阻害することを意味するものである。実施
例 ６ 低温でのｎ−ブタノール抽出 大型試験管に蒸留水２０泌、ｎ−ブタノール１２の‘、
および食塩７ｇを入れ、これを凍結寸前の−１７ｑｏま
で冷却した。

実施例５で得られた蓑褐色粉末２００の９を蒸留水１の
【中にとかし、子冷した溶液を、これに加え−１び０以
下の温度を保ちながら、硫酸を加えて、速かに鮒を２．
７ふ３．０および３．２５に調整しよく燈拝した。それ
ぞれのｎ−ブタ／ール層をとりｐＨ６．＆０．９Ｍ燐酸
緩衝液５の【を加え、活性成分を水層に転熔し、水層中
の活性成分の量を定量した。使用した黄褐色粉末からの
抽出率は次の通りであった。ｐＨ 抽出率（％） ２．７５ ３５．０ ３．００ ３２．０ ３．２５ １６．０ 実施例 ７ ＱＡＥ−セフアデックス処理粉末の調製 培養液１００〆より実施例５と同様の操作によって得ら
れた抗生物質ＰＳ−５含有の黄褐色凍結乾燥粉末２７．
７ｇ（比活性１３．次ＣＵＰ奴）をｐＨ６．８、２５ｍ
Ｍ、燐酸緩衝液３帆‘もこ溶かし、該緩衝液で平衡化し
たＱＡＥーセフアデックスＡ‐２５（ファルマシア社製
）のカラム（３．３×２５．０伽）に吸着させ、上記の
緩衝液で洗浄後、食塩濃度を０から○９Ｍまで、順次直
線的に変化させながらその食塩含有緩衝液で溶出し活性
フラクションを集めた。

活性フラクション３０物上は０℃に冷却したのち活性炭
礎に吸着させ、水洗脱塩後、５０％（Ｖ／Ｖ）アセトン
水で溶出し、活性画分を凍結乾燥して７２７の９の帯黄
褐色粉末の抗生物質ＰＳ−５ナトリウム塩を得た。この
粉末の比活‘性は２６４ＣＣＵ／ｍｇであった。

実施例 ８ＤＥＡＥ−セルロース処理粉末の調製 実施例６で得られた抗生物質ＰＳ−５含有の帯黄褐色凍
結乾燥粉末７２７雌を１肌のＰＨ６．＆２５ｈＭ燐酸緩
衝液に溶解し、該緩衝液で平衡化したバイオゲルＰ−２
（バイオラッド社製）カラム（１．５×２７．０狐）に
通し、再び該緩衝液で展開し、活性画分１５の‘を採取
した。

この活性画分を同様に平衡化させたジェチルアミノエチ
ルセルロースーセルロース（ＤＥ３２）（ワットマソ社
製）カラム（２．５×２８．０弧）に通し、食塩濃度を
０から０．８Ｍまで順次直線的に変化させながら、その
食塩含有緩衝液で溶出し、その活性画分２４０秋を０℃
に冷却後活性炭４．鴇に吸着させ、水洗脱塩後５０％（
Ｖ／Ｖ）アセトン水で港出し、凍結乾燥して１２０の９
の帯褐色白色粉末の抗生物質ＰＳ−５ナトリウム塩を得
た。

この粉末の比活性は６０にＣＵ／雌であった。実施例
９ 抗生物質ＰＳ−５トリチル誘導体の製法１実施例３と同
様にして得られた１６０そ培養炉液を、実施例５と同様
の操作で処理して得た抗生物質ＰＳ−５含有黄褐色凍結
乾燥粉末３０．雌（比活性２７ＣＣＵ／のｏ）をジメチ
ルホルムアミド１００机上に溶解させ、トリェチレンア
ミン３．雌を加えて氷冷し、次いでトリチルク。

ラィド９．０ｇを溶液が５℃以上にならないように調節
しながら添加した。５℃で蝿梓をつづけると原料は１幼
時間で消失した。

ｐＨ６．８の０．９Ｍ−燐酸緩衝液１０００の【中にあ
げた後、酢酸エチル１０００肌ずつで３回抽出し、抽出
後を合して脱水苧硝で乾燥後減圧下落嬢を留去し、ベン
ゼン２０泌に溶解させた。このベンゼン溶液を予じめベ
ンゼンで膨潤させたバイオビーズＳ一×３（バイオラッ
ド社製）カラム（４．５×６０．０弧）に通し、ベンゼ
ンで展開して得られるコマモナス・テリゲナに活性をも
つ画分を集めて濃縮し、減圧下乾固させた。ベンゼン１
の‘に溶解させシリカゲル（キ−ゼルゲル６０，７０〜
２３０メッシュ、エー・メルク社製）カラム（２礎、１
．５×２４．０ｃの）にチャージし、ベンゼン一酢酸エ
チル（１０：１）で展開して試薬を溶接除去したのち、
混合比を（１：２）に加えて展開し、活性画分を集め減
圧下乾固した。これをベンゼン０．５の‘に溶解し、中
性アルミナ（ベールム社製）カラム（２雌、０．９×滋
．ルネ）に通し、ベンゼン一酢酸エチル（１０：１）か
別項次混合比を下げて（１：１）の割合まで辰開溶出し
、活性画分を集め、減圧下濃縮乾固した。これをベンゼ
ン０．３の‘に溶解しシリカゲルカラム（１腿、０．９
×２２．０伽、前述と同種のシリカゲル）にチャージし
、ベンゼン一酢酸エチル（１０：１）で洗浄後、ベンゼ
ン−酢酸エチル（１：２）で展開溶出された活性画分を
合し、減圧下濃縮、乾固した。これをベンゼン０．５私
に溶解し、バイオビーズＳ一×３カラム（１．２×９６
．０伽）に通し、ベンゼンで展開して得られる活性画分
を含し、減圧下濃綾乾適した。これをアセトン０．５叫
に溶解し、予じめアセトンで膨潤させたセフアデツクス
ＬＨ−２０（ファルマシア社製）カラム（１．２×９６
．０肌）に通し、アセトンで展開して得られる活性画分
を合し、減圧下濃縮乾団して２３の９の白色粉末を得た
。これをベンゼン一ｎ−へキサンから結晶して１物９の
無色結晶性粉末を得た。以上で得られた無色結晶性粉末
、すなわち抗生物質ＰＳ一５トリチル誘導体は次の如き
理化学的性質をしめした。

１ 物質の色： 無色 ２ 溶解性： 抗生物質ＰＳ−５トリチル誘導体５蛾に溶媒０．１の‘
を加えて２０こ０で充分に振顔した場合の溶解性は次の
通りであった：水、ｎ−へキサン及び石油エーテル（沸
点範囲３０〜６０ｑｏ）に実質的に不落：ベンゼン、酢
酸エチル、クロロホルム、メタノール、エタノール、ア
セトン、ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、及びジメチ
ルスルホキサィド（ＤＭＳＯ）に易溶。

３ 安定性： 抗生物質ＰＳ一５トリチル譲導体を１客のメタノールに
溶解後直ちに９客の蒸留水を加え、１２球ＣＵ／泌にな
るように調製した。

別にＭ／′ １５りん酸二カリウム水溶液をつくり、こ
れに掛りん酸、または州水酸化ナトリウムを加えてｐＨ
を調整し、ｐＨ３〜９の各ｐＨの溶液を調製し、１奴ず
つ試験管に入れた。この各風の溶液中に、はじめに調製
した抗生物質ＰＳ−５トリチル誘導体の溶液を１の‘ず
つ加え、少量の磯りん酸または州水酸化ナトリウムにて
所要の舟に調整した後、６０ｑｏに保った湯浴中に３粉
ご間浸し、流水冷却後、少量の掛りん酸または印水酸化
ナトリウムにて舟を７．０に調整した。対照に対しては
、ｐＨ７．０の溶液を氷水中につけておいたものを用い
、コマモナス・テリゲナＢ−９９６を被検菌とするビオ
アッセィにより、残存活性を測定し、対照の活性を１０
０％として表した。結果は次表の通りであった。表−１
３ この結果から、該トリチル体はｐＨ６．０〜９．０の水
溶液中、６０００で３職１間加熱しても安定であること
が分る。

またｐＨ７．５の上記溶液中で６０００、９０分間加熱
しても活性は実質上低下しなかった。

４ 融点： 矢沢科学器械工業■製ＢＹ−１型徴量融点測定装置を用
いたコフラー（Ｋｏｆｌｅｒ）法により１分間１℃の温
度上昇速度で測定した場合の融点：斑．５〜８５．５０
０。

１４００Ｃ以上で除々に褐変する。

５ 紫外線吸収スペクトル： 日立自記分光光度計ＥＰＳ‐虹型を用いて、メタノール
３必中該トリチル誘導体１２８仏ｇを含有する溶液につ
いて測定した紫外線吸収スペクトルを添付第２図にしめ
す。

岬袋Ｈ＝３１５‐５，Ｅ手孫＝１５６ ６ 赤外線吸収スペクトル： 日立赤外分光光度計２１５型を用いて、クロロホルム０
．６の‘中談トリチル誘導体４．５雌を含有する溶液に
ついて測定した赤外吸収スペクトルを添付第３図にしめ
す。

また、その特徴的極大吸収波数は次の通りである。

３４３０，３１００〜３０００（フェニル基のＣ一日）
、２９９０，２９５０，１７７０（Ｃ＝○）、１６９５
，１６６５，１４４５１私０，１２７５および１１３０
の‐１。

７ プロトン核磁気共鳴スペクトル： 日本電子ＪＮＡＰＳ−１０頂型を用い、重クロロホルム
０．３の‘中に該トリチル誘導体４．５凧２を含有する
溶液について測定した１０仙川ｚプロトン核磁気共鳴ス
ペクトルを添付第４図にしめす。

その最も特徴的シグナルは、１．８＄阿付近のシングレ
ットおよび７．２〜７．６胸のトリチル基ベンゼン環プ
ロトンに由来するマルチプレットである。８ 元素分析 核トリチル誘導体３．５地を真空１×１０‐２側Ｈｇ下
、室温で４時間乾燥した標品について元素分析結果は次
の通りである。

Ｃ６０．８９％，日５．７８％，Ｎ４．４８％，Ｓ４．
６２％９ 呈色反応：エールリッヒ試薬反応
腸性塩化トリフェニルテトラゾリウム反応
陰性塩化第二鉄反応 陰性塩化
第二鉄−沃度反応 陰性ヨード一塩化
白金酸反応 陽性ヒドロキシアミンー塩
化第二鉄反応 腸性塩素−トリジン試薬反応
陽Ｉ性ニンヒドリン反応
陰性１０ 薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）抗生
物質ＰＳ−５トリチル誘導体は薄層クロマトグラム上に
おいて下記溶媒により、次の如きＲｆ値を値える。

なお、移動位置の検出は前記コマモナス・テリゲナ８一
９９６のビオオートグラフイーによつた。‘ａ’ シリ
カゲルＴＬＣプレート〔メルク社製ＤＣーフエルテツヒ
ブラツテンキーゼルゲル６価断〕を用いた場合のＲｆ値
は次の通である。

ベンゼン／アセトン（２／１） Ｒ仁０．２９【ｂ｝
セルローズＴＬＣプレート〔イーストマン・コダック社
製「クロマグラムシートＭ．６０６５」〕を用いた場合
のＲｆ値は次の通りである。

また、前記で得た抗生物質ＰＳ−５トリチル議導体は次
の如き生物学的性質をしめすことを確認した。

１ 抗菌スペクトル プレイン ハート ィンフュージョン培地“栄研”（栄
研化学■製）を用いた液体希釈検定法で抗生物質ＰＳ−
５トリチル誘導体の、耐性菌を含む各種病原性彼験菌に
対する最小発育阻止濃度を測定した。

該トリチル譲導体を少量のメタノールに溶解し、これを
ｐＨ７．０のプレイン ハ−ト インフュージョン塔地
“栄研”（栄研化学欄製）で希釈して、該トリチル誘導
体の濃度が４０仏ｇ／のと〜２０一ｇ／地の範囲内に入
るように、また、メタノールの濃度が１０％以下になる
ようにした。

これを同じ培地で倍数希釈して、該トリチル誘導体の希
釈系列を調製した。この希釈系列に、上記と同じプレイ
ン ハート インフュージョン培地に２８℃で１細寿間
振盤培養して得た下記表一１４に示す各種彼験菌の種母
液を、接種後の菌数が大略１×１『／の‘になるように
接種し、３５℃で２加持間静層培養し、しかる後生育の
有無を観察し、生育の認められない最低の濃度を、その
菌に対する抗生物質ＰＳ−５トリチル誘導体の最小発育
阻止濃度とした。対照として公知の抗生物質ァンーピシ
リンおよびセフアロリジンをそれぞれ１００仏ｇ／の【
の濃度にｐＨ７．０のプレインハート ィンフュージョ
ン培地に溶解し、同培地で倍数希釈して希釈系列をつく
り同様処理して、彼験菌に対する最小発育阻止濃度を測
定した。結果を下記表−１４にしめす。なお、公知の抗
生物質アンピシリンおよびセフアロＩＪジンの結果も比
較のため同表中に併記した。表一１４ （注）米 ク−ラクタマーゼ生産菌 ２米 ヵナマィシン、ゲンタマィシン、トブラマィシン
耐性菌３＊ ゲンタマィシン、トブラマィシン耐性菌４
＊ 培地中ＫＩＯ協馬血液添加上記結果から、抗生物質
ＰＳ−５トリチル誘導体は、広範な抗菌スペクトルを有
し、特に８ーラクタマーゼ生産性のムーラクタム耐性菌
に強い抗菌力をしめすという特徴を有していることが分
る。

２ 耐性菌に対するペニシリン系およびセフアロスポリ
ン系抗生物質の抗菌活性の増進：■ 直径９肌のべトリ
皿に、ペニシリンＧまたはセフアロリジン５０ｒｇ／奴
を添加したｐＨ７．０ニュートリェントアガー１５のと
を入れて固まらせ、これを下層とし、その上に、８−ラ
＊クタマーゼ生産性の８−ラクタム耐性菌を接種した同
じ培地１０の‘を流して固まらせ、これを上層とした。

この表面に下表に記載した濃度の抗生物質笛‐５トリチ
ル誘導体溶液をそれぞれ２５仏そ注加した直径８帆のパ
ルプディスクを置き、３ｙｏで１報時間培養後、ディス
ク周辺の阻止円の大きさを観察した。

対照としてペニシリンＧ及びセフアロリジンのいずれも
無添加の同様の培地で同様の実験を繰返し行った。その
結果は下記表一１５に示す通りであった。表−１５ 上記結果によれば、単独では抗菌力を示さない濃度のペ
ニシリンＧまたはセフアロリジンに、単独では抗菌力を
示あない濃度の該トリチル誘導体を添加すると、抗菌力
が生ずることが示されており、これによれば、抗生物質
ＰＳ−５トリチル誘導体はペニシリンＧ及びセフアロリ
ジンの抗菌力を明らかに増進することが認められる。

（Ｂ’次に前記と同様の液体希釈検定法の手技を用いる
ことにより、該トリチル誘導体とセフアロリジンが相乗
的に抗菌力を増進することを確認することができた。

先ず、ｐＨ７．０のプレイン ハート インフュージョ
ン培地を溶媒として、下記表一１６に示す５段階の濃度
比の抗生物質ＰＳ−５トリチル誘導体とセフアロリジン
を含有する溶液を調製した：表−１６ 各種合溶液をｐＨ７．０のプレイン ハート インフュ
ージョン培地で、１０の５，１０分の４、および１０分
の３に希釈し、それぞれの希釈液を更にｐＨ７．０のプ
レイン ハート インフユージヨン培地で倍数希釈して
１５列の希釈系列を調製した。

この希釈系列にプロテウス・ブルガリスＰ一５の種母液
を、接種後の菌数が大略１×５ぴ／の‘になるように接
種し、３５℃で２０時間培養した後、生育の有無を観察
して、それぞれの最小発育阻止濃度を測定した。

その結果は下記表一１７に示す通りであった。表−１７ この結果から、両成分がプロテウス・ブルガリス・Ｐ−
５に対する抗菌力を相互に相乗的に増進していると判断
することができるが、その判断をより一層容易にするた
めに、上記表中の最小発育阻止濃度を、各々の成分ごと
に、その単独添加の場合の最小発育阻止濃度を１００と
して指数で表示すると次の表−１８の通りとなる。

表一１８この結果は、単独添加の場合の１２．５％量の
該トリチル誘導体と、単独添加の場合の７．５％量のセ
フアロリジンとを混合することによって、それぞれ単独
投与の場合と同じ抗菌力が与えられることを示している
から、該トリチル誘導体とセフアロリジンの間にこの８
ーラクタマーゼ生産性の８−ラクタム耐性菌であるプロ
テゥス・ブルガリス・Ｐ−５に対して相互に抗菌力を増
進する強い相乗作用のあるところは明らかである。

３ 生体内での活性 スタフィロコッカスァウレウス・スミス株（Ｓねｐｈｙ
ｌｏｃｏｃｃｕｓａｍｅｕｓＳｍｉｔｈ）をマウス当り
５×１び細胞ずつ腹腔内に感染させたマウスを用い、前
記で得た抗生物質トリチル誘導体の生体内活性を測定し
た。

感染源接種後直ちに、該トリチル誘導体を含む注射液を
皮下投与した。雄のｄｄｙマウス（静岡）を用いた場合
のＣＤ５０は２．５雌／ｋｇ（２７５４にＣＵ／ｋ９）
であった。４ ８−ラクタマーゼ阻害活性 前記抗生物質ＰＳ−５トリチル誘導体は実施例５の９）
に記載の阻害活性測定法によると、プロテウス・ブルガ
リス・Ｐ−５の生産する８ーラクタマーゼに対して０．
０６０山ｇ／の‘の１旨寮Ｒをしめし、シトロバクター
・フロインデイ・Ｅ−９の生産する８ーラクタマーゼに
対して０・８０仏ｇ／似の１銭Ｒをしめした。

この数値は抗生物質ＰＳ一５トリチル誘導体が０．０６
一ｇ／の‘の濃度でブロテウス・ブルガリス・Ｐ一５の
８ーラクタマーゼの活性を５０％阻害し、０．８０ムｇ
／協の濃度でシトロバクター・フロィンディ・Ｅ−９の
８−ラクタマーゼの活性を５０％阻害することを意味す
るものである。５ ３−ラクタマーゼに対する挙動 ■ 抗生物質ＰＳ−５トリチル誘導体の５０仏ｇ／の【
溶液を８柳蓬のパルプディスクにしませて、８−ラクタ
マーゼを添加したコマモナス検定板にのせて一夜培養し
た際の阻止円の直径は次の通りであった。

表−１９ また、下記反応液組成で、試験管内で、プロテウス・ブ
ルガリス・Ｐ一５またはシトロバクター・フロインデイ
・Ｅ−９の生産する８ーラクタマーゼと３０ｏｏ、１時
間反応させた後、反応液を８柳径のパルプディスクでコ
マモナス検定板でビオアッセィした。

ｐＨ６８，０．１Ｍ燐酸緩衝液 ０．１
５０の上８ーラクタマーゼ（＊）または同燐酸緩衝液５
０ム夕トリチルＰＳ−５物質 ５．７
仏〆（＊）プロテウス・ブルガリス・Ｐ−５の生産する
８−ラクタマーゼの場合４８６単位／机上、シトロバク
ター・フロインデイ・Ｅ−９の生産する８−ラクタマー
ゼの場合１８０単位／叫を用いた、なお、１単位はｐＨ
６．８，３０００で６０分間にセフアロリジンｌｒｍｏ
ｌｅを分解する酵素活性をいう。

阻止円直径は次の通りであった。

＊表−２０ ＊この結果より、抗生物質ＰＳ−５トリチル誘導体はプ
ロテウス・ブルガリス・Ｐ−５およびシトロバクター・
フロインデイ・Ｅ−９の生産する８−ラクタマーゼによ
って明らかに不活性化されたことが判る。

佃 更に、抗生物質ＰＳ−５トリチル誘導体の３ーラク
タマーゼに対する挙動を、実施例５において抗生物質Ｐ
Ｓ−５について行った場合と、全く同じ条件、同じ方法
で調べた。

すなわち、それぞれ３．３００単位のバチルス・リケニ
ホルミス７４９／Ｃおよびバチルス・セレウス５６９の
べニシリナーズを含有するコマモナス検定板それぞれ検
定板ロおよび皿と、酵素を含有しない対照の検定板（検
定板１）における抗菌力価を次に示す。なお、ペニシリ
ンＧ及びセフアロリジンについての測定結果は、それぞ
れ前記表−１１および表−１２に示した通りである。表
−２１ 以上の結果から明らかな通り、抗生物質ＰＳ−５トリチ
ル誘導体も抗生物質ＰＳ−５と同様にバチルス・セレウ
ス５６９のべニシリナーゼでは容易に不活性化され、バ
チルス・リケニホルミス７４９／Ｃのべニシリナーゼに
よってもある程度不活性化される。

この事実は抗生物質ＰＳ−５トリチル誘導体の分子中に
８ーラクタム環又はその類似環構造が存在することを示
唆している。

実施例 １０ 抗生物質ＰＳ‐５のトリチル誘導体の製法（ロ）実施例
７に記載と同機な方法で得た抗生物質ＰＳ−５の帯褐黄
色凍結乾燥粉末７１５の‘（比活性２３＄ＣＵノの９）
をへキサメチルホスホトリアミド（ＨＭＰＡ）３．５の
‘に溶解させてから水冷し、トリェチルァミン７０の‘
を加え溶解が１０こ０以上にならないように調節しなが
らトリチルブ。

マィド２５０爪９を添加した。１０００で７時間櫨拝す
ると原料が消失した。

氷水５０の‘中にあげ、氷が融解してから、ベンゼン１
５の‘ずつで３回抽出し、以下実施例９の方法とほぼ同
様に処理して、抗生物質ＰＳ−５のトリチル誘導体の無
色結晶性粉末９．４の９を得た。その理化学的性質は実
施例９に記載のものとほぼ同じであった。実施例 １１ クラウン化合物存在下に於ける抗生物質ＰＳ−５トリチ
ル議導体の製法（ｍ）実施例５の記載と同様な方法で得
た抗生物質ＰＳ−５の帯褐白色凍結乾燥組粉末１０．１
ｇをメチレンクロラィド２００柵に懸濁させ、１５−ク
ラウン−５〔日本曹達■製〕１叫を加え鷹拝して溶解さ
せた。

この溶液を氷水しながら５℃以上にならないようにトリ
チルクロラィド８．酸を添加した。添加後室溢で３時間
濁拝し、不綾物を炉去した。炉液を減圧下で濃縮した後
、直ちにベンゼン１０の‘を加え、不溶物を除き、実施
例９と同様に精製処理を経て抗生物質ＰＳ−５のトリチ
ル誘導体の無色結晶性粉末を７．３の９得た。その理化
学的性質は前記実施例９で得たものとほぼ同じであった
。実施例 １２ 四級アンモニウム塩存在下における抗生物質ＰＳ−５ト
リチル誘導体の製法（Ｎ）培養炉液４８そ（力価１１．
７ＣＣＵノの‘）から０．０５％セチルジメチルベンジ
ルアンモニウムクロライドのジクロルメタン溶液１５の
‘ずつで２回抽出を行った（ジクロルメタン層２４．に
ＣＵ／の‘、水層５．７ＣＣＵ／の上）。

抽出液は無水苧硝４０雌で脱水後減圧下５００の‘まで
濃縮した。該濃縮によって得られた溶液（４５にＣＵ／
地）を無水Ｅ硝１ｏｇで再度脱水し、若硝を炉別後更に
モレキュラーシーフ４Ａ（ユニオンカーバィド社製）５
ｇで完全に脱水した。この溶液を氷冷し、５℃にならな
いように調節しながらトリチルクロラィド４．斑を添加
した。

５時間反応後減圧下室温でジクロルメタンを蟹去後、直
ちにベンゼン１５私を加え以下実施例１０と同様に精製
処理して、抗生物質ＰＳ−５のトリチル誘導体の無水結
晶性粉末８双９を得た。

その理化学的性質は前記実施例９で得たものの性質とほ
ぼ同じであった。本発明の抗生物質ＰＳ−５はそのトリ
チル誘導体を含有する薬剤は前述した通り種々の単位投
与剤型で、例えば固体または液体で経口的に擬下できる
剤型で投与することができる。

該単位投与剤型は液体、半固体、固体のいかんを問わず
、前記したように０．１〜９９％、好ましくは１０〜６
０％の活性物質を含有することができる。その薬剤中の
活性成分の含有量は該薬剤の剤型やその全量によって変
るが、通常約１０の９から約１０００の９、好ましくは
約１０肋９から１０００の９の範囲とすることができる
。非経口投与における単位投与の剤型は、通常純度１０
０％に近に本発明の抗生物質ＰＳ−５（ナトリウム塩）
又はそのトリチル誘導体を滅菌水に溶かしたものか、ま
たは容易に溶液にすることのできる溶解性粉末にしたも
のとすることができる。次に、本発明の抗生物質ＰＳ−
５（ナトリウム塩）又はそのトリチル誘導体を含む代表
的な薬剤調製物の製法を例示する。上記抗生物質及び賦
形剤を乳鉢で研磨し、均一に混合する。

１カプセルに約２００の９当て腸溶剤皮をした３号硬ゼ
ラチンカプセルにつめる。

実施例 Ｂ：錠 剤 −記の混合比で抗生物質を乳糖ととうもろこしでんぷん
の半量とよく混合する。

混合物を１０％でんぷん糊液とまぜて粒状化し、節にか
ける。これにとうもろこしでんぷんの残りとステアリン
酸マグネシウムを加えてよく混和し直径１弧、重量５０
０雌の錠剤に成型する。これに糟衣を施した後更に陽溶
剤皮でコーチングする。実施例 Ｃ：注射剤 上記の抗生物質を注射用滅菌水にとかし炉過、除菌する
。

溶液を滅菌したアンプルに分注し、水分を凍結乾燥によ
って無菌的に除去し、アンプルの口を熔閉する。用時、
閉封し、滅菌生理食塩水２の‘をアンプルの内容物に加
えて溶解する。

実施例 Ｄ：錠 剤 抗生物質ＰＳ−５（ナトリウム塩）とセフアロリジンを
混和し、以下実施例Ｂの製剤方法と同様に処方し、成型
し、糠衣に次いで腸溶剤皮でコ−チングする。

実施例 Ｅ：錠 剤 抗生物質ＰＳ−５（ナトリウム塩）とアミンノベンジル
ベニシリソを混和し実施例Ｂの方法を同様に製剤化する
。

実施例 Ｆ：カプセル剤 上記抗生物質談導体及び賦形剤を研磨し、均一に混合す
る。

１カプセルに約２００の９当て腸溶剤皮を施した３号硬
ゼラチンカプセルにつめる。

実施例 Ｇ：錠 剤上記の混合比で抗生物質誘導体を乳
糖とうもろこしでんぷんの半量とよく混合する。

混合物を１０％でんぷん糊液とまぜて粒状化し、節にか
ける。これにとうもろこしでんぷんの残りとステアリン
酸マグネシウムを加えてよく混和し、直径１肌、重量一
錠当り５００雌の錠剤に成型する。これに糠衣を施した
後更に腸溶剤皮でコーチングする。実施例 Ｈ：注射剤
上記の抗生物質譲導体を注射用滅菌水にとかし、炉過、
除菌する。

溶液を滅菌したアンプルに分注し、水分を無菌的に凍結
乾燥によって除去し、アンプルの口を熔閉する。用時、
開封し滅菌Ｎ−（８−ヒドロキシルエチル）ラクタミド
７０％水溶液２心をアンプルの内容物に加え、熔解後、
使用する。実施例 １：錠 剤 此抗生物質誘導体とセフアロジソを混和し、以下実施例
Ｇの製剤方法と同機に処方、成型し、糖衣を施した後腸
溶剤皮で更にコーチングする。

実施例 Ｊ：錠 剤此抗生物質ＰＳ一５トリチル譲導体
とアミノベンジルベニシリンを混合し、〔錠剤１〕の方
法と同様に製剤化する。

【図面の簡単な説明】

第１図は比較例１で作成した公知のＭＭ４５５０（複合
物）物質及び本発明の抗生物質ＰＳ−５のビオオートグ
ラムであり、第２図は実施例９で製造した本発明の抗生
物質ＰＳ−５トリチル誘導体の紫外線吸収スペクトル図
であり、第３図は同赤外縁吸収スペクトル図であり、第
４図は同核磁気共鳴スペクトル図である。 多１図 図 Ｎ 濠 図 Ｍ 濠 図 寸 総

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. １ ストレプトミセス属に属する抗生物質ＰＳ−５生産
   菌を栄養培地中で培養し、その培養物からβ−ラクタマ
   ーゼ阻害活性を有する抗生物質ＰＳ−５を採取すること
   を特徴とする抗生物質ＰＳ−５の製造方法。