JPH0833493A - Ｌ−アスパラギン酸の製造方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【目的】 工業的に有利なＬ−アスパラギン酸の製造方
法の提供。 【構成】 フマル酸とアンモニア及び／又はフマル酸ア
ンモニウムからＬ−アスパラギン酸を生成せしめ、それ
を採取することによるアスパラギン酸の製造方法におい
て、反応前のフマル酸濃度を１５〜２５重量％とし、反
応後、Ｌ−アスパラギン酸に対して０．８５〜１．２倍
モルのフマル酸を添加してＬ−アスパラギン酸を晶析せ
しめ、４０℃以上の温度でＬ−アスパラギン酸の結晶を
採取し、母液を再利用することを特徴とする方法。 【効果】 純度の高いＬ−アスパラギン酸結晶を高回収
率で得ることができ、しかも多量のアンモニウム塩を含
有する廃液を副生しない。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は、フマル酸とアンモニア
又はフマル酸アンモニウムからＬ−アスパラギン酸を生
産する際に、反応済媒体からの母液をリサイクル使用す
ることによって、大量の硫酸アンモニウムなど鉱酸のア
ンモニウム塩を含んだ廃水が排出されないように改良さ
れた方法に関するものである。

【０００２】

【従来の技術】Ｌ−アスパラギン酸はフマル酸とアンモ
ニア又はフマル酸アンモニウムを含有する基質媒体にア
スパルターゼ活性を有する酵素含有物を接触させること
によって生産されている。通常、この反応済み媒体から
Ｌ−アスパラギン酸を回収するためには、硫酸などの鉱
酸を用いて、反応済み媒体のpHをＬ−アスパラギン酸の
等電点であるpH２．７程度に調節後、冷却することによ
ってＬ−アスパラギン酸の結晶を析出させ、これを濾別
する方法がとられている。

【０００３】この方法は安価な鉱酸を用いること、生産
物であるＬ−アスパラギン酸の結晶としての回収率が高
いこと、得られるＬ−アスパラギン酸の純度が高いこと
から工業的に用いられている有用な方法である。しかし
ながら、原料としてのアンモニアのロスが大きいこと、
高濃度の硫酸アンモニウムなど鉱酸のアンモニウム塩を
含有した廃水が大量に排出されるという問題点を有して
いる。水溶液中のアンモニウム塩の除去は廃水処理の面
でも非常に困難であり、湖沼や瀬戸内海などの内湾では
アンモニウム塩を含む窒素濃度が上昇することによる水
質汚染など問題が生じてきている。

【０００４】米国特許４５６０６５３ではＬ−アスパラ
ギン酸の生産の際に反応済媒体にマレイン酸を添加して
酸性にすることによってＬ−アスパラギン酸を晶析さ
せ、濾液中のマレイン酸を異性化することによって反応
液のリサイクルを行う方法が提案されている。しかしな
がらこの方法では晶析に用いたマレイン酸を、臭素イオ
ンを含んだ触媒を用いて、アスパルターゼが作用できる
フマル酸に異性化し、異性化後、触媒を除去する工程が
含まれているため、工程が煩雑になっている。

【０００５】

【発明が解決しようとする課題】従って本発明は、工程
が簡単であり、且つ多量のアンモニウム塩を排出しな
い、Ｌ−アスパラギン酸の製造方法を提供しようとする
ものである。

【０００６】

【課題を解決するための手段】本発明者らはこのような
高濃度のアンモニウム塩を含有した廃水が大量に排出さ
れない、簡易なＬ−アスパラギン酸の製造方法について
鋭意検討を行った結果、意外にもＬ−アスパラギン酸の
原料であるフマル酸を硫酸などの鉱酸のかわりに用いて
Ｌ−アスパラギン酸の晶析を行うと、Ｌ−アスパラギン
酸モノアンモニウム塩とフマル酸との間で塩の交換が起
こり、Ｌ−アスパラギン酸とフマル酸モノアンモニウム
塩になり、酸性下で溶解度の低いＬ−アスパラギン酸が
結晶として分離できること、添加するフマル酸の量はＬ
−アスパラギン酸と大体当量用いると回収率が高くなる
こと、またフマル酸モノアンモニウム塩は低温では溶解
度がそれほど大きくないが、塩の交換、結晶の分離精製
の操作を加温下で行い、フマル酸モノアンモニウム塩の
溶解度が大きい条件下で操作することによって、フマル
酸モノアンモニウム塩のＬ−アスパラギン酸結晶への混
入を少なくすることができることを見いだし本発明を完
成させるに至った。

【０００７】従って本発明はフマル酸とアンモニア及び
／またはフマル酸アンモニウムを含有する基質媒体にア
スパルターゼ活性を有する酵素含有物を作用せしめる反
応をフマル酸濃度１５〜２５重量％で行うことによりＬ
−アスパラギン酸を生成せしめ、次に該反応済み媒体に
含まれるＬ−アスパラギン酸に対して０．８５〜１．２
倍モルのフマル酸を該反応済み媒体に添加することによ
りＬ−アスパラギン酸を析出させ、４０℃以上の温度条
件下で、折出したＬ−アスパラギン酸の結晶を濾過、洗
浄することによってＬ−アスパラギン酸を採取し、次い
で母液と洗液にアンモニアを添加して基質媒体として再
使用することを特徴とするＬ−アスパラギン酸の製造方
法を提供する。

【０００８】

【発明の効果】本発明によれば、Ｌ−アスパラギン酸の
製造に際して、アンモニウム塩を含有する大量の廃水を
排出せず、また反応済み媒体からの母液をリサイクルす
るため、結晶を分離した濾液中に溶解しているＬ−アス
パラギン酸も次のサイクルで回収できるので、原料基質
の有効利用が図られ、環境面でも経済面でも従来法より
有利なＬ−アスパラギン酸の製造方法を提供できる。

【０００９】

【具体的な説明】以下本発明の方法について実施態様を
説明するが、本発明はかかる実施態様のみに限定される
ものではない。本発明に用いるアスパルターゼ活性を有
する酵素含有物は、例えば、高アスパルターゼ活性を有
することが知られている大腸菌やＢｒｅｖｉｂａｃｔｅ
ｒｉｕｍ属の微生物などの菌体、あるいは超音波、摩
砕、凍結融解、酵素処理、界面活性剤処理などを施して
破砕した菌体破砕物、さらに硫酸アンモニウム塩析、ア
セトン沈澱等常法により得られる部分精製したもの、あ
るいはクロマトカラム等常法で得られる精製したもので
あり、そのいずれでも反応に使用できる。

【００１０】これらのアスパルターゼ活性含有微生物菌
体、あるいはその処理物または酵素を担体に固定化して
用いることもできる。固定化の担体としては、セルロー
ス、アルギン酸、カラギーナン、マンナンゲルなどの天
然系高分子、あるいはイオン交換樹脂やポリビニルアル
コール、ポリアクリルアミドなどの適当な合成系高分子
を常法により用いることができる。固定化することによ
り、アスパルターゼ、またはアスパルターゼ含有物と生
産物との分離が容易になり、反応済み媒体からの母液の
循環使用の操作をより容易に行うことが可能である。

【００１１】また、反応に用いるアスパルターゼ活性を
有する酵素含有物中に含まれるフマラーゼ活性など、該
反応の妨げになりうるアスパルターゼ活性以外の酵素活
性を予め失活させた後に反応に用いることも可能であ
る。例えば、酵素含有物を、予め、Ｌ−アスパラギン酸
およびアンモニウムイオン存在下、アルカリ域で４０〜
６０℃に加熱処理を行うことでフマラーゼ活性を予め失
活させておくこともできる。

【００１２】本発明に用いられるフマル酸あるいはフマ
ル酸塩から選ばれるものであって、これらの混合物でも
よい。また本発明に用いられるアンモニアはガス状アン
モニア、アンモニア水溶液等が使用可能であるが、取扱
上アンモニア水溶液が有利である。アンモニア水の濃度
としては特に限定されるものではないが、工業的には１
０〜３５重量％が利用するのに好ましい。

【００１３】使用されるアンモニアの量は反応に供され
るフマル酸に対して１．０倍モル以上３倍モル以下が好
ましい。アンモニアの量が１倍モル未満ではＬ−アスパ
ラギン酸の収率が低下する結果を招いてしまい好ましく
ない。またアンモニア量が３倍モル以上では反応に関与
する酵素又は酵素含有物の安定性が悪くなる可能性が高
く好ましくない。また必要に応じて上記のアンモニア量
の範囲で水酸化ナトリウムあるいは水酸化カリウムなど
のアルカリ金属水酸化物を併用することもできる。な
お、反応液のpHは５〜１０の範囲、好ましくは７．０〜
９．０の範囲、さらに好ましくはアスパルターゼの至適
pHである８．０〜９．０にするのが好ましい。

【００１４】フマル酸とアンモニアを混合する場合、混
合はどのように行ってもよいが、両者の全量を一度に混
合するのではなく、一方の全量に対して他方を徐々に添
加するのが好ましく、特にフマル酸の懸濁液に対してア
ンモニアまたはアンモニア水を徐々に添加するのが好ま
しい。本発明の方法において基質媒体の調製に用いる反
応媒体は、水性のものであれば特に限定されず、最も典
型的なものは水である。さらに緩衝液、例えばリン酸緩
衝液等の常用の緩衝液を用いることもできる。反応の際
のフマル酸濃度は、フマル酸塩の溶解度と生産性の面か
ら特に１５〜２５重量％の範囲の水溶液、好ましくは１
５〜２０重量％の範囲である。

【００１５】また基質媒体にはさらに塩化マンガン、硫
酸マンガンなどのマンガン塩、または塩化マグネシウ
ム、硫酸マグネシウムなどのマグネシウム塩、または亜
鉛塩、カルシウム塩、ニッケル塩、コバルト塩、鉄塩な
どの２価金属塩を０．１〜５０mM、好ましくは１〜１０
mMの濃度で添加することが望ましい。本発明における反
応槽の態様は特に限定されないが、例えばバッチ型反応
装置、カラム型反応装置など従来から知られている反応
槽で反応を行うことができる。反応槽は１つでも複数で
も差し支えない。反応の際の温度は低温では反応速度が
低下するため通常２０℃程度を下限とし、高温下ではア
スパルターゼの失活を招くため５０℃程度を上限とする
のが好ましく、より好ましくは２５〜４０℃の範囲で行
うのがよい。

【００１６】上記のような条件でフマル酸とアンモニア
を反応させた後、得られた反応済み媒体中にフマル酸を
添加することにより、Ｌ−アスパラギン酸を析出させ
る。また、母液の循環使用の妨げにならない範囲でフマ
ル酸塩の添加も可能である。フマル酸塩としては、フマ
ル酸アンモニウム、フマル酸ナトリウム、フマル酸カリ
ウムなどが使用される。前記フマル酸などを用いてＬ−
アスパラギン酸の析出を行うことにより母液の循環使用
が可能になる。析出に鉱酸を用いると鉱酸のアンモニウ
ム塩が蓄積し、母液を循環使用するためには脱塩工程が
必要になり好ましくない。ここでＬ−アスパラギン酸の
析出のために添加されるフマル酸は固体のままでもよ
く、またフマル酸を水でスラリーとして添加することも
可能である。

【００１７】Ｌ−アスパラギン酸の析出のために反応済
み媒体に添加されるフマル酸の量は、反応済み媒体中に
存在しているＬ−アスパラギン酸とほぼ当量用いるのが
よい。例えば反応済み媒体中に含まれているＬ−アスパ
ラギン酸に対して０．８５〜１．２倍モル、好ましくは
０．８５〜１．１倍モル添加してＬ−アスパラギン酸を
析出させることができる。

【００１８】この範囲より少ないと結晶として分離でき
るＬ−アスパラギン酸の量が少なくなり、回収率が低く
なり好ましくない。またこの範囲より多いとＬ−アスパ
ラギン酸の結晶にフマル酸塩が大量に混入してくるため
好ましくない。Ｌ−アスパラギン酸を析出せしめる際に
は反応済み媒体にフマル酸を徐々に添加していくほうが
好ましい。この方法であれば、析出したＬ−アスパラギ
ン酸の結晶は大きく、遠心濾過などによる母液からの分
離が容易になり、また結晶の取り扱いも容易になる。

【００１９】フマル酸を添加した反応済み媒体は０〜１
００℃で１０分間〜４時間、好ましくは、２０〜８０℃
で３０〜１２０分間攪はんして塩の交換、晶析を完了さ
せる。析出したＬ−アスパラギン酸の濾過方法について
は、吸引濾過や遠心濾過など通常の方法で行うことがで
きるが、含液率を低くすることができる遠心濾過などの
方法がより好ましい。濾過温度は４０〜７０℃、好まし
くは、４０〜６０℃である。この範囲より高いとＬ−ア
スパラギン酸の溶解度が大きくなるためＬ−アスパラギ
ン酸の回収率が低くなり、この範囲より低いとフマル酸
モノアンモニウム塩の溶解度が低くなり、Ｌ−アスパラ
ギン酸結晶にフマル酸塩が大量に混入してくるため好ま
しくない。

【００２０】濾過した結晶は水で洗浄を行う。洗浄水の
温度が低いと純度の高いＬ−アスパラギン酸製品を得る
のに大量の洗浄水が必要となり、洗液を再利用するため
には好ましくない。洗浄水の温度を４０〜７０℃、好ま
しくは４０〜６０℃にすることによって、少量の洗浄水
で高純度のＬ−アスパラギン酸結晶を得ることができ
る。使用する洗浄水の量は、Ｌ−アスパラギン酸結晶の
量に対して５〜５００重量％、好ましくは１０〜２００
重量％の範囲で用いるのがよい。

【００２１】このようにして極めて簡単な方法で少量
の、例えば０．１〜３重量％、好ましくは０．１〜１重
量％のフマル酸及び／またはフマル酸塩を含有するＬ−
アスパラギン酸の結晶を得ることができる。こうして得
られるＬ−アスパラギン酸の結晶のサイズは晶析の方法
を変えることにより所望の平均サイズにすることができ
るが、特に取扱やすい結晶の平均サイズとして５０〜５
００μｍの範囲の結晶を得ることも可能である。このＬ
−アスパラギン酸は工業用アスパラギン酸として極めて
有用である。またこのＬ−アスパラギン酸はさらに精製
を繰り返すことにより、食品添加物、医薬品用などに用
いることも可能である。

【００２２】Ｌ−アスパラギン酸の結晶を分離した母液
は前記洗液と混合し、アンモニアを添加して、Ｌ−アス
パラギン酸製造用の基質媒体として再使用する。必要に
応じてフマル酸を添加したり、母液あるいは洗液を濃縮
したりして適宜調整を行う。例えば、Ｌ−アスパラギン
酸を析出させるために加えたフマル酸のモル数に対し
て、結晶として分離されたＬ−アスパラギン酸のモル数
が多いと、その後のフマル酸とアンモニアの反応で得ら
れるＬ−アスパラギン酸の量が少なくなっていくため、
必要に応じてフマル酸を追加することによって、Ｌ−ア
スパラギン酸を析出せしめる前の反応済み媒体中に含ま
れていたＬ−アスパラギン酸の量に対して、それを析出
せしめる際に添加したフマル酸と追加するフマル酸の合
計の量が０．８５倍モルから１．２倍モルになるように
調整する。

【００２３】また必要に応じて母液を濃縮することによ
って容量を初期基質媒体と同じ容積とするなど調整し、
フマル酸に対するアンモニアの比が１〜３倍モルになる
ように調節したのち、フマル酸とアンモニアのアスパル
ターゼ活性を有する酵素含有物との反応、フマル酸の添
加によるＬ−アスパラギン酸の析出、Ｌ−アスパラギン
酸結晶の分離、洗浄、母液の調整を繰り返すことによ
り、母液が基質媒体として循環使用される。本発明によ
れば、母液の循環は１０回以上可能である。

【００２４】母液へのアンモニアの添加は、例えば、次
の点を考慮して行うのが、母液の循環使用を繰り返すた
めに、また微生物菌体あるいはその破砕物のアスパルタ
ーゼ活性を長く保つためには好ましい。すなわち、循環
使用される母液中に含まれるアンモニア量が該母液に含
まれるフマル酸に対して１〜３倍モル、好ましくは１．
５〜２．５倍モルになるように、アンモニアを添加す
る。

【００２５】本発明では、フマル酸とアンモニアあるい
はフマル酸アンモニウム塩を、フマル酸に対してアンモ
ニアの量が１〜３倍モルとなる量で用い、アスパルター
ゼ活性を有する酵素含有物と２０〜５０℃で反応させ
る。この反応によりＬ−アスパラギン酸アンモニウムが
生成するが、得られた反応済み媒体に、フマル酸を添加
してＬ−アスパラギン酸を析出させる。析出したＬ−ア
スパラギン酸を４０℃以上の温度条件下で母液から分離
して、さらに洗浄することによりフマル酸及び／または
その塩を少量含んだＬ−アスパラギン酸を得ることがで
き、このＬ−アスパラギン酸は、工業用アスパラギン酸
として極めて有用である。Ｌ−アスパラギン酸結晶を分
離した母液は、Ｌ−アスパラギン酸結晶を洗浄した液と
ともにＬ−アスパラギン酸の製造用基質媒体として循環
使用を繰り返すことができる。これにより、原料の効率
的利用、及び、廃棄物の減少が図られる。

【００２６】

【実施例】次に実施例をあげて説明するが、本発明はか
かる実施例のみに限定されるものではない。

【００２７】実施例１．５Ｌジャーファーメンターに１
Ｌ当りフマル酸２０ｇ、リン酸１カリウム１ｇ、硫酸マ
グネシウム７水塩０．５ｇ、酵母エキス２０ｇ、コーン
スティープリカー２０ｇを水に溶解し、pHをアンモニア
で６．８に調節した培地３Ｌを仕込み滅菌したのち、別
に５００ml振とうフラスコに同上の培地５０mlを入れて
培養しておいたエッシェリヒア・コリ(Escherichia col
i)（ATCC 11303）を接種し、３７℃で通気攪拌培養し
た。培地中のフマル酸が消失した時点で、菌体培養液に
酢酸を加え、pHを約５にして４５℃、１時間放置後、培
養液を遠心分離にかけ、菌体を分離した。この菌体を３
０等分し、−８０℃で凍結して冷蔵した。

【００２８】フマル酸１００ｇ、硫酸マグネシウム７水
塩０．１２５ｇを水３００mlに加えた後、２５％アンモ
ニア水で中和してpHを８．３に調節後、水を追加して
０．５Ｌの基質媒体とした。この基質媒体に先に３０等
分した凍結菌体の一つをいれ、３７℃で穏やかに振とう
しながら５時間反応させた。反応済み媒体の分析の結
果、初期仕込みフマル酸に対して９９．０モル％のＬ−
アスパラギン酸アンモニウムが生成していた。

【００２９】この反応済み媒体を遠心分離して菌体を除
いた後、フマル酸１１０ｇを添加し、６０℃に加熱して
３０分保った後５０℃まで冷却した。冷却後、吸引濾過
器で濾過し、母液約３７０mlを得た。一方、濾別したＬ
−アスパラギン酸を含む結晶約２００ｇを約５００mlの
５０℃の温水で洗浄し、乾燥した。得られた結晶の重
量、純度を調べたところ、重量１０５ｇ、純度９６．２
重量％（水分除く）（フマル酸３．０重量％）（結晶平
均サイズ２５０μｍ）であった。

【００３０】ついで、先の母液と洗液をあわせて、減圧
下で濃縮し、２５％アンモニア水を加えてpHを８．３に
調節し、水を加えて０．５Ｌの基質媒体とした。この基
質媒体に先と同様に凍結菌体の一つをいれ３７℃で５時
間反応させた。先と同様に遠心分離して菌体を除いた
後、フマル酸１１０ｇを添加して加熱、冷却を行った。
析出したＬ−アスパラギン酸を吸引濾過し、約０．５Ｌ
の５０℃の温水で２回結晶を洗浄し、充分に水分をきっ
た後、乾燥した。得られた結晶の重量は１１４．５ｇ、
純度は９９．０重量％（水分除く）（フマル酸０．７３
重量％）（結晶平均サイズ１５０μｍ）であった。

【００３１】以下、上記の２回目の操作を繰り返し、フ
マル酸とアンモニアの反応を合計１０回行った（母液の
循環使用回数は９回）。１０回の操作により、得られた
Ｌ−アスパラギン酸は、９回目の操作において晶析のた
めに添加されたフマル酸に対して収率９９．１モル％、
純度９９．１重量％（水分除く）（フマル酸０．６１重
量％）（結晶平均サイズ１００μｍ）であった。１０回
目の繰り返し操作により得られた結晶に５０℃の温水３
００mlを加えてよく混合した後、再度吸引濾過し、充分
に水分をきり、乾燥する操作を繰り返し３回行ったとこ
ろ、結晶の純度は９９．５重量％（水分除く）（フマル
酸０．１５重量％）（結晶平均サイズ９０μｍ）になっ
た。

【００３２】実施例２．実施例１と同様にして、０．５
Ｌの基質媒体に凍結菌体の一つをいれ反応を行った。反
応済み媒体を分析したところ、仕込フマル酸に対して９
９．１モル％のＬ−アスパラギン酸が生成していた。こ
の反応済み媒体を遠心分離して菌体を除いた後、フマル
酸８５ｇを添加し、６０℃に加熱して３０分保った後５
０℃まで冷却した。冷却後、吸引濾過器で吸引濾過し、
母液約３７０mlを得た。一方、濾別したＬ−アスパラギ
ン酸を含む結晶を約０．５Ｌの５０℃の温水で洗浄、乾
燥したところ、得られた結晶の重量は１０６ｇ、純度は
９２．７重量％（水分除く）（フマル酸６．１重量％）
（結晶平均サイズ２００μｍ）であった。

【００３３】ついで、先の母液と洗液をあわせて、減圧
下で濃縮し、フマル酸１５ｇと２５％アンモニア水を加
えてpHを８．３に調節し、水を加えて０．５Ｌの基質媒
体とした。この基質媒体に先と同様に、凍結菌体の一つ
を加えて３７℃で５時間反応させた。先と同様に遠心分
離して菌体を除いた後、フマル酸８５ｇを添加して加
熱、冷却を行った。析出したＬ−アスパラギン酸を吸引
濾過し、約０．５Ｌの５０℃の温水で２回結晶を洗浄
し、充分に水分をきった後、乾燥した。得られた結晶の
重量は１１３．５ｇ、純度は９９．０重量％（水分除
く）（フマル酸０．７３重量％）（結晶平均サイズ１５
０μｍ）であった。

【００３４】比較例１．実施例１と同様にして、０．５
Ｌの基質媒体に凍結菌体の一つをいれ反応を行った。反
応済み媒体を分析したところ、仕込フマル酸に対して９
９．０モル％のＬ−アスパラギン酸が生成していた。こ
の反応済み媒体を遠心分離して菌体を除いた後、フマル
酸５０ｇを添加し、６０℃に加熱して３０分保った後５
０℃まで冷却した。冷却後、吸引濾過器で吸引濾過し、
母液約４００mlを得た。一方、濾別したＬ−アスパラギ
ン酸を含む結晶を約０．５Ｌの５０℃の温水で洗浄、乾
燥したところ、得られた結晶の重量は８０．７ｇ、純度
は９８．４重量％（水分除く）（フマル酸１．２重量
％）（結晶平均サイズ２００μｍ）であった。

【００３５】比較例２．実施例１と同様にして、０．５
Ｌの基質媒体に凍結菌体の一つをいれ反応を行った。反
応済み媒体を分析したところ、仕込フマル酸に対して９
９．０モル％のＬ−アスパラギン酸が生成していた。こ
の反応済み媒体を遠心分離して菌体を除いた後、フマル
酸８５ｇを添加し、３０℃で３０分攪拌後、吸引濾過器
で吸引濾過し、母液約３５０mlを得た。一方、濾別した
Ｌ−アスパラギン酸を含む結晶に約０．５Ｌの３０℃の
水を加えてよく混合したのちに吸引濾過を行い、乾燥し
たところ、得られた結晶の重量は１５３．０ｇ、純度は
６０．３重量％（水分除く）（フマル酸３３．２重量
％）（結晶平均サイズ２００μｍ）であった。

【００３６】実施例３．フマル酸７５ｇ及び硫酸マグネ
シウム７水塩０．１２５ｇを水３００mlに加えた後、２
５％アンモニア水で中和してpHを８．３に調節後、水を
追加して０．５Ｌの基質媒体とした。この基質媒体に先
に３０等分した凍結菌体の一つをいれ、３７℃で穏やか
に振とうしながら５時間反応させた。反応済み媒体を分
析したところ、仕込フマル酸に対して９９．１モル％の
Ｌ−アスパラギン酸が生成していた。

【００３７】この反応済み媒体を遠心分離して菌体を除
いた後、フマル酸６７．５ｇを添加し、６０℃に加熱し
て３０分保った後５０℃まで冷却した。冷却後、吸引濾
過器で吸引濾過し、母液約４１０mlを得た。一方、濾別
したＬ−アスパラギン酸を含む結晶を約０．５Ｌの５０
℃の温水で洗浄、乾燥したところ、得られた結晶の重量
は６７．１ｇ、純度は９６．８重量％（水分除く）（フ
マル酸３．１重量％）（結晶平均サイズ２００μｍ）で
あった。

【００３８】ついで、先の母液と洗液をあわせて、減圧
下で濃縮し、フマル酸７．５ｇと２５％アンモニア水を
加えてpHを８．３に調節し、水を加えて０．５Ｌの基質
媒体とした。この基質媒体に先と同様に、凍結菌体の一
つを加えて３７℃で５時間反応させた。先と同様に遠心
分離して菌体を除いた後、フマル酸６７．５ｇを添加し
て加熱、冷却を行った。析出したＬ−アスパラギン酸を
吸引濾過し、約０．５Ｌの５０℃の温水で２回結晶を洗
浄し、充分に水分をきった後、乾燥した。得られた結晶
の重量は７５．９ｇ、純度は９９．０重量％（水分除
く）（フマル酸０．７３重量％）（結晶平均サイズ１５
０μｍ）であった。

【００３９】比較例３．実施例３と同様にして、０．５
Ｌの基質媒体に凍結菌体の一つをいれ反応を行った。反
応済み媒体を分析したところ、仕込フマル酸に対して９
９．０モル％のＬ−アスパラギン酸が生成していた。こ
の反応済み媒体を遠心分離して菌体を除いた後、フマル
酸５２．５ｇを添加し、６０℃に加熱して３０分保った
後５０℃まで冷却した。冷却後、吸引濾過器で吸引濾過
し、母液約４５０mlを得た。一方、濾別したＬ−アスパ
ラギン酸を含む結晶を約０．５Ｌの５０℃の温水で洗
浄、乾燥したところ、得られた結晶の重量は４６．２
ｇ、純度は９８．１重量％（水分除く）（フマル酸１．
６重量％）（結晶平均サイズ２００μｍ）であった。以
上の実施例、比較例の結果を以下の表にまとめた。

【００４０】

【表１】 表に示されるとおり、添加するフマル酸のモル比が小さ
いと、結晶として分離できるＬ−アスパラギン酸の回収
率が低くなったが、モル比が大きいと回収率が高くなっ
た。５０℃で精製操作を行った場合には、いずれの条件
においても純度９０重量％以上の値が得られた。

Claims (2)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 フマル酸とアンモニア及び／またはフマ
   ル酸アンモニウムを含有する基質媒体にアスパルターゼ
   活性を有する酵素含有物を作用せしめることによりＬ−
   アスパラギン酸を生成せしめる反応をフマル酸濃度１５
   〜２５重量％で行い、次に反応済み媒体中に存在してい
   るＬ−アスパラギン酸に対して０．８５〜１．２倍モル
   のフマル酸を該反応済み媒体に添加することによりＬ−
   アスパラギン酸を析出させ、４０℃以上の温度条件下
   で、折出したＬ−アスパラギン酸の結晶を濾過、洗浄す
   ることによってＬ−アスパラギン酸を採取し、次いで母
   液と洗液にアンモニアを添加して基質媒体として再使用
   することを特徴とするＬ−アスパラギン酸の製造方法。
2. 【請求項２】 フマル酸及び／またはその塩が０．１〜
   ３重量％随伴しており、且つ結晶の平均サイズが５０〜
   ５００μｍであるＬ−アスパラギン酸を最終製品として
   採取する、請求項１に記載の方法。