JPS60145085A - ラクトース分解酵素の無菌溶液の製造方法 - Google Patents

ラクトース分解酵素の無菌溶液の製造方法

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JPS60145085A JP59253904A JP25390484A JPS60145085A JP S60145085 A JPS60145085 A JP S60145085A JP 59253904 A JP59253904 A JP 59253904A JP 25390484 A JP25390484 A JP 25390484A JP S60145085 A JPS60145085 A JP S60145085A
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Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 産業上の利用分野 本発明はラクトース分解酵素の無菌溶液の製造方法に関
する。又本発明はラクトース低含有率の牛乳及び乳製品
の製造における用途にも関連を有する。
従来の技術 ラクトース（乳糖）は酪農製品中に、及び更に詳細には
牛乳、脱脂乳、クリーム及びその他の乳製品中に存在す
る二糖類の一種である。これらの諸製品は約り〜左％の
量のラクトースを含有している。非吸収性のラクトース
は通常は体内で分解されて吸収性の単糖類であるグルコ
ースとガラクトースとになる。人体の（及び他の哺乳動
物の）腸壁内に存在するβ−ガラクトシダーゼ又はラク
ターゼと称される天然酵素によって上記の分解が行われ
ることが一般である。
ラクトース含有製品中のラクトースを分解するだめのラ
クターゼの消化系を全面的に、又は部分的に欠如するこ
とによって起るいわゆるラク）　−ス不耐症に悩むヒト
及び動物は世界の広域に及んでいる。この場合にラクト
ースはグルコース及び、ｆ−ｙクトース（これらは吸収
可能である）Ｋ分解しないか又は不充分にしか分解さ、
れないので非吸収性のラクトースは腸障害を起す。
ラクトース不耐症の現象は多年にわたシ認められている
。牛乳タンパク質はそのアミノ酸材成の点から大きな食
品価値をもつ。２クト一ス不耐症患者及び罹患動物のた
めのラクトース低含有又はラクトース不含有の乳及び乳
製品の製造が企画されてきている。ラクターゼ添加製品
が甘味を増すことはラクターゼ添加における番外の利点
である。
乳及び乳製品を加熱殺菌（ρａｓｔｅｕｒ　Ｉｚａｔ　
１ｏｎ）又は滅菌（ｓｔｅｒ　ｌ　Ｉ　１ｚａｔ　Ｉｏ
ｎ）によって保蔵する以前に酵素（ラクターゼ）を添加
すること及び反応させることは可能である。けれども保
存中に周知のマイヤール反応（Ｍａｌ　Ｉ　１ａｒｄ−
ｒｅａｃｔ　１ｏｎ）が起って乳及び乳製品の風味を損
なう。
英国特許第１４１７７０ｇ７号明＃Ｉ誓にラク）　−ス
分解酵素を用いる乳及び乳製品の処理方法が記載されて
いるがそこでは予め加熱殺菌又は滅菌された乳に対し包
装直前に酵素を添加し、その後に包装物を密封する。こ
れに続いて乳中のラクトースと酵素との所望の反応が密
閉包装曲内で行われる。力り熱殺菌又は滅菌後に酵素を
添加するのでマイヤール反応はこの状況下では起らない
。滅菌器へ酵素を添加する前に酵素を無菌化せねばなら
ないこと、更に乳及び（又は）乳製品への酵素添加を無
菌条件下に滅菌器具の使用によって行わねばならないこ
とは明かであろう。
スエーデン特許出願公開第７ｇＯθ／３７号明細書には
照射による、又は化学処理例えば酸化エチレン処理によ
るラクターゼの滅菌が記載されている。この記載による
と密閉無菌包装曲内で、溶液状又は固体状で酵素を滅菌
処理する。後者の場合には予め滅菌された溶媒中に該滅
菌されたラクターゼを溶かす。滅菌されたラクターゼ溶
液を有する容器を供給手段へ接続し、この供給手段を介
して滅菌酵素溶液を滅菌器へ添加し、次にこれを包装す
る。けれども上記の両滅菌方法は共にラクターゼ酵素の
活性を著しく損失させると共に滅菌所要時間を長引かせ
るものである。
英国特許第１ｌＩｑりθｇ７号明細嚇の方法が学術雑誌
［：Ｖｏｅｄｌｎｇｓ　ｍ１ｄｄｅｌｅｎ　ｔｅｃｈｎ
ｏｌｏｇｌｅ　／　３（７９ｇＯ）、２３〕に更に引用
されているがそれによると酪農加工業者に供給される滅
菌ラクターゼ（ｇｅｒｍ＋：ｔｐＱ’Ｏｒ　Ｉ　ａｃｔ
ａｓｅ）　は通常の場合に水溶液であってこれに対し一
種又は複数種の安定化剤例えばグリセロールを添加し、
使用前にｐ遇する。
かようにｐ過された酵素溶液を、除菌沖過器（ｓｔｓｒ
ｌｌｅ　ｆｌｌｔｅｒ）　経由でポンプ送給し、予め滅
・菌された乳の生産ラインの中へ供給手段を介して注入
してから乳と混合する。最後にこの混合物を分は無菌条
件下に包装して均一包装品とする。
発明が解決しようとする問題点 しかるに上述の系の実施において除菌濾過器は屡々目詰
まシ（閉塞）するのである。閉塞は主としてタンパク質
と多糖類（ガムＴｈ）との劣化によるもので該タン・ン
ク質と多糖類とは精製されても尚酵素溶液中に残留する
のである。劣化現象は酊素使用前に酵素を長く置く程一
般に増加し促進されるがこれは酵素製造業者による酵素
製造と酪農品加工業者によるその使用との間にかなシの
期間が経過するからである。ラクターゼ製品中に存在す
るプロテアーゼも又劣化過程で役割を果す。
除菌−過器の取替又は清掃のくり返しは濾過工程の効率
の著しい妨げとなることは明かである。
除菌濾過器の取外しのために濾過工程を停止せねばなら
ないばかシでなく全濾過系の再使用前に全澱過系を新規
に滅菌せねばならない。
菌体濾過の問題の解決のための幾つかの方策が多年にわ
たシ企図されたがそれらの努力は望ましい成果に至らな
かったか又は工業上の規模の点で方法の採算化のだめに
は余シに高費であった。段階的濾過法即ち順次減少の孔
径をもつ複数の膜沖過器の系の助けによる濾過法が試み
られたけれどもこれらの濾過器も又比較的短時間の後に
詰ってしまうことが判った。除菌許過器を通過させる前
に酵素溶液を遠心分離処理するととが提案されたけれど
もこの方法も同じく最適結果を与えずしかもかなシ高ψ
用を要した。その他の娩つかの回収方法、例えば酵素溶
液を更に清澄化させる方法も又濾過器閉塞問題の解決に
至らなかった。
問題点を解決するだめの手段 上記の濾過の問題は、酵素産生菌の発酵及び常法による
酵素の回収及び純化並びに任意に該酵素を溶液中で滅菌
保存した直後であって該酵素を乳へ添加する以前に該酵
素を無菌化することにより克服し得ることが今や本発明
によって見出された。
即ち本発明は発酵法によシ産生されたラクトース分解酵
素の溶液の回収及び純化後に、但し除菌濾過器を閉塞さ
せるに充分な劣化生成物の形成前に、該ラクトース分解
酵素溶液を除鉋沖過によって無菌化することを特徴とす
るラクトース分解酵素の無菌溶液の製造方法を提供する
。
本発明の方法は酵素製造業者自身によって酵素溶液の除
菌処理を行い得るという付加的利点を有する。現在に至
るまで夫々異る酪農加工業者は供給された酵素溶液を除
菌濾過又は可能な限シの除菌のために他の方策を講する
ことを常としたのであった。
酵素溶液の無菌化は既知のいかなる方法によってでも遂
行され得るものであってこれは本発明の範囲内にある。
好ましくは、酵素溶液の常法による回収、純化、自己消
化及び濾過の後に、但し除菌濾過に付する以前に、酵素
溶液を菌数減少化（滅菌化）に付する。該溶液の滅菌化
のために第減少ｐ過器（ｇｅｒｍ　ｒｅｄｕｃｔｌｏｎ
　ｆｉｌｔｅｒ）例えばプイツ　スプラＥにｓＰ床（Ｓ
　Ｅ　Ｉ　Ｔ　Ｚ　５ｕｐｒａ　ＥＫＳｆｌｌｔｅｒ　
ｐａｄｓ）　の使用が好適である。上記の諸工程の直後
に酵素溶液を滅菌化（ｇｅｒｍ　ｐｏｏｒ）することが
好適である。好ましくは除菌濾過（ｓｔｅｒｉｌｅｆｌ
ｌｔｒａｔｌｏｎ）以前に酵素溶液を限外濾過にも付し
て酵素を濃厚化する。
除菌濾過〔菌体濾過（ｇｅｒｍ　ｆｉｌｔｒａｔｉｏｎ
））　を／箇又は抄数箇の濾過器を用いて行うことが好
ましい。適切な濾過器は例えば孔径θ１．２２μｍの膜
濾過器である。
酵素溶液の菌体−過の時機は臨界的でないけれども濾過
器の閉塞を起すに至るかなりの量の劣化生成物が末だ形
成されない時機であるように選択されるべきである。従
って菌体Ｐ遇を酵素溶液回収及び純化の直後に行うこと
が推奨される。該回収及び純化拶に好ましくは／夕日以
内に、（に好ましくは５日以内に菌体濾過を行う。
上記の除菌濾過による酵素溶液の除菌前に、又は除菌後
に７種又は複数種の溶剤′又は他の添加物を、例えば酵
素活性を所望のレベルに保つため及び酵素を更に安定化
するために、添加してもよい。
適切な溶剤は例えばソルビトール及びグリセロールであ
る。酵素安定化用の適切な添加物は例えは加水分解され
たラクトース、グルコース、マニトール及び地緩衝剤で
ある。又酢加物は乳及び乳ｉ−ｖ品を更に甘くするため
に添加される。かような添加物は例えばインベルターゼ
であるがこれは添加されてよいし或は既にこれは酵素溶
液中に存在しているものである。該添加を好ましくは除
菌後に行う。添加用化合物は予め滅菌されていることは
勿論である。酵素の安定化に同時に資する好適溶剤はグ
リセロールである。最終的なグリセロール：水の比は臨
界的でないけれども好ましくは／：９〜り：／（容積比
）及び特に好ましくは／：３〜／：／である。
本発明の例示となる好適態様において、ラクターゼ含有
水性発酵産物を自己消化に付してから好ましくは濾過器
の助けによって濾過する。必要ならばＰ液を活性炭で処
理し、菌減少ｐ過器〔いわゆるポリシュ　フィルタ（ｐ
ｏｌｌｓｈ　ｆｉｌｔｅｒ）］　を通過させてこの溶液
を滅菌化する。次に限外濾過して酵素を濃厚化し、その
後にグリセロールを添加する（約３０重量％）。かよう
にして得られた溶液を魯び菌減少濾過器（ザイツ　スゾ
ラＥＫＳＰ床）へ通過させ、更に直列において除菌濾過
器（孔径０．．２２μｍを有する膜濾過器）へ通過させ
る。最仮にこの溶液を滅菌容器中へ送給して直ちに密封
する。
他の適切な態様においては前記同様にして自己消化、濾
過、ポリシュ（菌減少）濾過及び限外濾過を行った後に
約２０重量−％のグリセロールをＰ蔽へ加える。得られ
た溶液を次に菌減少ｐ過器へ通し、その後に除ｍ濾過器
へ通す。次いで滅菌されたグリセロールを用いて所要の
濃度（約／：／）に調整し、滅菌条件下に包装する。
好適態様において上記の予備濾過工程及び除菌ｐ週工程
の後に５０重骨％のグリセロールを加えた。上記方法に
関して後者の方法の利点は除菌濾過前の溶液の粘稠件が
少く、従って濾過がより速かであることにある。
本発明は更に本発明方法によシ製造されたラクトース分
解酵素の無菌溶液の添加によるラクトース低含有の乳及
び乳製品（これはより甘い製品を意味する）の製造方法
に関連を有する。
除菌された酵素溶液は酪農加工業に使用される前に滅菌
容器中に貯蔵され得る。液体貯蔵用の滅菌容器は文献に
屡々記載されている。例えば前掲論文（ｔｈｅ　ｊｏｕ
ｒｎａｌ　Ｖｏｅｄｌｎｇｓ−ｍｌｄｄｅｌｅｎｔｅｃ
ｈｎｏｌｏ−ｇｌｅ）　中の記載のように乳生産ライン
への送給ポンプに容易に連結され得る容器の使用が好適
である。供給ポンプと容器との連結を無菌環境下に行わ
ねばならないことは勿論である。従前技術の方法に記載
されているような除菌酵素溶液と生産ラインとの中間に
存在する除菌ＰＡ器は本発明方法により得られた無菌酵
素溶液使用の場合にこれを省略することができる。劣化
工程で生成する沈殿は供給ポンプを閉塞させず全く無害
性である。更に乳中酵素濃度は低下しているので最終製
品中の沈殿物っけ有意でない。
下記の語例は本発明の例示である。
例　／ ラクターゼ含有溶液の除菌濾過 ラクターゼ含有のギストーブロカデス（Ｇ＋５ｔ−Ｂｒ
ｏｃａｄｅｓ）社の市販水性発酵製品である登録商標名
マキシラク）　（ＭａｘｉｌａｃｔＲ）　をザイッにｋ
（ＳＥＩＴＺ　Ｋ５）、ディンＥ　Ｋ　（ＳＥＩＴＺ　
Ｅに）及びミリボアＲＡ　Ｗ　Ｐ　（ＭＩＬＬＩＰＯＲ
Ｅ　ＲＡＷＰ）（孔径／０．２μｍ）のｐ床によシ予備
ｆ−過しだ。最終濾過のためにこの溶液をミリポアＧＳ
ＷＰ膜濾過器（孔径０．２．２μｍ）へ通過させてから
滅菌壜の中へ集めた。次にこの溶液に滅菌されたグリセ
ロールを加えて所要濃度に調整した。グリセロールＱ度
（及び活性）の異るり本の場の除菌度を下表に示す０ （注）米原（出発）製品の活性に対する百分率凝結試験
及び風味に関する官能試験の結果本例の溶液は原（出発
）製品から何ら偏移していなかった。
例　コ 酪農製品製造プラントにおける除菌済みのマキシラクト
の使用 酪農製品製造プラントにおける一試験の際にＳθ重愈％
のグリセロールを有するラクターゼ含有溶液を使用した
。この溶液を予め滅菌された牛乳の生産ラインにおいて
送給手段を介して注入して混合器内で牛乳と混合した。
最後にこの混合物を分けて無菌条件下で／ｌの包装物と
なるように包装した。
湯度３０℃で７日間貯蔵しノζ後の牛判の除菌率は７０
０％であった。ラクトースのｇＳ％以上が加水分解され
た。

Claims (8)

    【特許請求の範囲】
  1. （１）　ラクトース分解酵素の無菌溶液の製造に当シ、
    発酵法によシ産生されたラクトース分解酵素溶液の回収
    及び純化後に、但し除菌濾過器を閉塞させるに充分な劣
    化生成物の形成前に、該ラクトース分解酵素溶液を除菌
    濾過によって無菌化することを特徴とする方法。
  2. （２）回収及び純化の直後に、そして除菌濾過前に、酵
    素溶液を滅菌化（ｇｅｒｍ−ｐｏｏｒ　）する特許請求
    の範囲第１項記載の方法。
  3. （３）回収及び純化から／１日以内に除菌濾過を行う特
    許請求の範囲第１又は２項記載の方法。
  4. （４）酵素溶液に対し７種又は複数種の溶剤及び（又は
    ）添加物を添加する特許請求の範囲第１、コ又は３項記
    載の方法。
  5. （５）　グリセロールを添加する特許請求の範囲第り項
    記載の方法。
  6. （６）除菌濾過後に約３０重量％のグリセロールを添加
    する特許請求の範囲第グ項記載の方法。
  7. （７）％許請求の範囲第１〜乙項のいずれか７項記載の
    方法によって製造されたラクトース分解酵素の無菌溶液
    を含有することを特徴とする滅菌された容器。
  8. （８）特許請求の範囲第１〜７項のいずれが７項記載の
    方法によって製造されたラクトース分解酵素の無菌溶液
    が添加されることを特徴とする低含有率のラクトースを
    有する乳及び乳製品の製造方法。
JP59253904A 1983-12-02 1984-11-30 ラクトース分解酵素の無菌溶液の製造方法 Expired - Lifetime JPH0673454B2 (ja)

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DE (1) DE3466559D1 (ja)
DK (1) DK166734B1 (ja)
ES (1) ES8601302A1 (ja)
FI (1) FI83433C (ja)
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