JPS60161999A - ペプチド - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 この発明は新規なペプチドに関するものであり、詳細に
はＢ型肝炎ウィルス抗原の解析に有用であり、またＢ型
肝炎ワクチン用抗原組成物等としても有用な新規ペプチ
ドおよび医薬として許容されるその塩に関するものであ
る。

この発明の新規ペプチドは、次のような式［Ｉ］〜［■
］により示される。

［Ｉ］ ［＋１］ ［ｍｌ ［■コ ［Ｖ］ Ｈ−Ａ　ｌ　ａ　−Ｐ　ｒ　ｏ−Ｔ　ｈ　ｒ−Ｃｙｓ−
Ｐ　ｒ　ｏ　−Ｇ　Ｉｙ−Ｇ　Ｉｎ−Ａｓｎ−９ｅ　ｒ
　−Ｇ　Ｉｎ−９ｅ　ｒ−Ｐｒｏ−Ｔｈ　ｒ−Ｓｅ　ｒ
−Ａｓｎ−Ｈｉ　５−Ｓｅ　ｒ−ＯＨＨ−Ａｌａ−Ｐｒ
ｏ−丁ｈｒ−Ｃｙｓ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ−Ｇｉｎ−Ａｓｎ
−Ｓｅｒ−ＧＩｎ−９ｅｒ−Ｐｒｏ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−
Ａｓｎ−Ｈｉｓ−Ｓｅｒ−ＯＨ［■コ ［■］ （但し上記式においてＲ４は水素またはメルカプト保護
基を意味する）この明細書においてはアミノ酸、保護基
、活性基、溶媒等について、ＩＵＰＡＣ−ＩＵＢ　ｃｏ
ｍｍｉｓｓｉｏｎｏｎ　Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ　Ｎｏｍ
ｅｎｃｌａｔｕｒｅに基づく略号および当該分野におけ
る慣用略号で表示する場合があり、それらを例示すると
次の通りである。Ｍｅｔ　：メチオニン、Ｇｙｓニジス
ティン、）Ｉｉｓ：ヒスチジン、Ｐｒｏ・プロリン、Ｉ
ｌｅ：イソロイシン、Ａｓｐ：アスパラキン酸、Ａｓｎ
：アスパラギン、Ｔｈｒ　：スレオニン、Ａｌａ：アラ
ニン、Ｇｌｎ：グルタミン、Ｇｌｕ：グルタミン酪、　
Ｇｌｙニゲリシン、Ｌｙｓ　：リジン、Ｈｉｓ：ヒスチ
ジン、Ｓｅｒ：セリン、Ｂｏａｓｔ−ブトキシカルボニ
ル、ｃｌ−ｚ：２−クロロヘンシルオキシカルボニル、
Ｂｚｌ：ペンシル、Ａｃｍ：アセトアミドメチル、Ｔｏ
ｓ−Ｐ−１ルエンスルホニル、０−ｃＨｅｘ：　シクロ
ヘキシルエステル。

この発明の化合物［Ｉ］〜［■］ならびに医薬として許
容されるそれらの塩は種々の方法により製造することが
でき、以下にそれらの方法を説明する。

（１）方法−１（固相法によるペプチド合成）：１）方
法１−１ Ｒ’−９ｅｒ（Ｒ３）−樹脂［Ｉａｌ”２）方法１−２ Ｒ’−Ｃ：ｙｓ（Ｒａ’）−樹脂［１１ａ］　−［１１
ｂコ ３）方法１−３ Ｒ’−５ｅｔ（Ｒ３）−樹脂［Ｉａｌ−樹脂（ｍ′ｂ］ （２）方法２（保護基の脱離法）： ｌ）方法２−１ ２）方法２−２ ［Ｈｂ］　→ ３）方法？−３ ［Ｉｌｌ　ｂｌ　→ （３）方法３（メルカプト保Ｍ基の脱離および環化反応
）。

ｌ）方法３−１ ［ＩＶ］ ２）方法３−２ ［Ｖｌ］ および（または） ［■　］ ３）方法３−３ ［Ｖ］ （以下余白） 上記式中、Ｒ１はアミノ保護基、Ｒ２はカルボキシ保ｉ
ｉｘ、Ｒ３はヒドルキシ保護基、Ｒａ４はメルカプト保
護基をそれぞれ意味する。これらの定義について説明す
れば下記の通りである。

（１）Ｒにおけるアミ／保護基について二アミノ保護基
には、アミノ酸やペプチド化学の分野において汎用され
る通常のアミノ保護基が含まれ、そのようなアミノ保護
基の好ましい例としては、アルコキシカルボニルまたは
シクロアルコキシカルボニル（例えばｔ−ブトキシカル
ボニル、ｔ−ペントキシカルボニル、シクロヘキシルカ
ルボニル等）、置換または非置換のフェニル低級アルコ
キシカルボニル（例えばベンジルオキシカルボニル、２
−クロロベンジルオキシカルボニル等）のようなアラル
コキシカルボニル、置換または非置換のアレンスルホニ
ル（例えばベンゼンスルホニル、ｐ−）ルエンスルホニ
ル等）等が挙げられる。

（２）　Ｒ２におけるカルボキシ保護基について：カル
ボキシ保護基にはアミノ酸やペプチド化学の分野におい
て汎用される通常のカルボキシ保護基が含まれ、そのよ
うな保護基の好ましい例としては、例えば低級アルキル
（例えばメチル、エチル等）等のアルキル、シクロアル
キル（例えばシクロペンチル、シクロヘキシル等）、モ
ノ−又はジ−フェニル低級アルキル（例えばベンジル、
ジフェニルメチル等）等のアラルキル、アロイルアルキ
ル（例えばフェナシル、トルオイルエチル等）等が挙げ
られる。

（３）　Ｒ８におけるヒドロキシ保護基について：ヒド
ロキシ保護基にはアミノ酸やペプチド化学の分野におい
て汎用される通常のヒドロキシ保護基が含まれ、そのよ
うなヒドロキシ保護基の好適な例としては、例えばアル
カノイル（例えばアセチル等）等のアシル、置換または
非置換のアラルキル（例えばベンジル、２．６−ジクロ
ロベンジル等）等が挙げられる。

（４）　Ｒ４およびＲａ’におけるメルカプト保護基に
ついて： メルカプト保護基の好ましい例としては、カルボキシ保
護基、アミン保護基およびヒドロキシ保護基の脱離条件
下では脱離しない保護基が挙げられ、そのような保護基
の好ましい例としては、アシルアミノアルキル（例えば
アセトアミドメチル、ベンズアミドメチル等）、アリー
ルメルカプタン（例えば３−ニトロピリジン−２−チオ
ール等が挙げられる。また、置換または非置換の低級ア
ルキル（例えばｔ−ブチル等）、置換または非置換アラ
ルキル（例えばベンジル、Ｐ−メトキシベンジル、Ｐ−
メチルベンジル、３，４−ジメチルベンジル、ジフェニ
ルベンジル、トリチル等）、置換または非置換の低級ア
ルキルメルカプト（例えばエチルメルカプト、ｔ−ブナ
ルメルカブト等）等も各保護基の脱離条件を適当に選択
することにより使用することができる。（５）医薬とし
て許容される塩について：化合物［Ｉ］〜［■］におけ
る医薬として許容される塩には例えばアルカリ金属塩（
例えばナトリウム塩、カリウム塩等、）アルカリ土類金
属塩（例えばカルシウム塩等）アンモニウム塩、有機ア
ミン塩（例えばエタノールアミン塩、トリエチルアミン
塩、ジシクロヘキシルアミン塩等）等の無機塩基若しく
は有機塩基との塩及びトリフルオロ酢酸、メタンスルホ
ン酸、塩酸、硫酸、硝酸、燐酸等の有機酸又は無機酸の
付加塩が含まれる。上記各種方法について以下に説明す
る。（１）方法１について：この方法は、化合物［Ｉａ
］および［ＩＩａ］に、固相法によるペプチド合成の常
法に従って、各保護された構成アミノ酸を順次カップリ
ングさせて、化合物［Ｉｂ］、［ＩＩｂ］および［ｍｂ
］を得る方法である。

ここで出発物質として使用する化合物［Ｉａ］および［
ＩＩａ］にはそれぞれ公知物質（例えば、バイオポリマ
ー第１２巻、第２５１３頁、　１８７３年）および新規
物質が含まれ、該新規物質は該文献記載の方法と同様に
製造することができる。また使用する樹脂としては固相
法によるペプチド合成において使用する樹脂であれば、
いずれでも使用することができ、そのような樹脂の例と
しては、例えばクロロメチル化されたスチレン−ジビニ
ルベンゼン共重合体、ヒドロキシメチル化されたスチレ
ン−ジビニルベンゼン共重合体、アミノメチル化された
スチレン−ジビニルベンゼン共重合体のようなポリスチ
レン型樹脂、ポリジメチルアクリルアミド樹脂のような
ポリアミド型樹脂等が挙げられる。

この方法は一般には各保護された構成アミノ酸の各々に
つき、次のような１〜１１の工程を１サイクルとして行
われる。

１）工程１： この工程は出発物質である保護されたアミノ酪−樹脂を
、洗浄し、また樹脂を膨潤させるために行う工程であり
、そのために使用する溶媒の好適な例としては、塩化メ
チレン、クロロホルム、ジメチルホルムアミドまたはそ
れらの混合溶媒が挙げられる。

２）工程２： この工程は保護されたアミノ酸−樹脂におけるアミン保
護基を脱離する工程であり、この工程の反応は、酸を用
いる法、塩基を用いる法等の様な常法のより行われる。

上記脱離方法の中では、酸を用いる方法が最も繁用され
るので以下酸法について説明する。

この反応は塩化メチレン、クロロホルム、酢酸、水等の
溶媒中において、トリフルオロ酢酸、＠酸、ｐ−）ルエ
ンスルホン酸、塩酸、臭酸等の無機酸又は有機酸の存在
下に、好ましくはエタンジチオニルやアニソールを添加
して行われる。

上記例示の酸のうち、トリフルオロ酢酸及びｖｉ酸は溶
媒としても使用される。

この反応は通常、冷却（例えば−７８°Ｃ）乃至室温下
に行なわれる。

３）工程３： この工程は不純物の除去および樹脂の膨潤のために行う
工程であり、前記工程１と実質的に同様な方法により行
われる。

４）工程４： この工程は樹脂を収縮させて洗浄効果をあげるために行
われる工程であり、アミノ酸−樹脂をアルコール（メタ
ノール、エタノール、プロパツール、２−プロパツール
、ブタノール等）、ジオキサン等で処理するのが好まし
い。

５）工程５： この工程は不純物の除去および樹脂の膨潤のために行う
工程であり、前記工程ｌと実質的に同様な方法により行
う。

６）工程６： この工程は前記の工程１〜５の処理により得られるアミ
ノ酸−樹脂に−おけるアミノがα−アミノ基における酸
付加塩として存在する場合に、脱塩のために行われる工
程であり、例えばトリエチルアミンのような塩基で処理
することにより行われる。

７）工程７： この工程は不純物の除去および樹脂の膨潤のために行う
工程であり、前記工程ｌと実質的に同様な方法により行
う。

８）工程８： この工程は各保護された構成アミノ酸をカップリングさ
せる工程であり、ジシクロへキシルカルボジイミドのよ
うな常用の縮合剤の存在下塩化メチレン、クロロホルム
、ジメチルホルムアミドのような溶媒中で行うこともで
き、また各保護された構成アミノ酸のカルボキシ基を、
常法により酸無水物、活性エステル等に活性化して、上
記溶媒中で反応を行うこともできる。

８）工程９： この工程は不純物の除去および樹脂の膨潤のために行う
工程であり、前記工程１と実質的に同様な方法により行
う。

１０）工程１０： この工程は樹脂を収縮させて洗浄効果をあげるために行
われる工程であり、前記工程４）と実質的に同様な方法
により行う。

１１）工程ｌｌ： この工程は樹脂の洗浄および膨潤のために行う工程であ
り、前記工程１と実質的に同様な方法により行う。

と記名工程は一般的には室温程度で行われ。

各工程（ただし工程８を除く）は２〜３回程度くり返し
行うのが好ましい。

（２）方法２について： この方法は化合物［Ｉ　ｂ］　、［ＩＩ　ｂ］および［
ｍｂ］　をそれぞれアミン保護基、カルボキシ保護基お
よびヒドロキシ保護基の脱離反応に付して、それぞれ化
合物［Ｉｃ］　、［ｌＩｃ１および［ｍｃ］　を得る方
法である。

アミン保護基を脱離する方法は、前記方法（Ｉ）の工程
２と実質的に同様の方法および接触還元法、液体アンモ
ニア−アルカリ金属法、酸亜鉛法、ヒドラジン法等によ
り行なわれ、またカルボキシ保護基およびヒドロキシ保
護基の脱離は加水分解、還元等の常法によって行なわれ
る。

１）加水分解： 加水分解は酸又は塩基の存在下に行なうのが好ましい。

好適な酸としては、無機酸（例えば塩酸、臭化水素酸、
硫酸等）有機酸（例えば蟻酸、酢酸、トリフルオロ酢酸
、プロピオン酸、ペンゼンスルホン酸、Ｐ−）ルエンス
ルホン酸等）、酸性イオン交換樹脂等が挙げられる。

又好適な塩基としては、アルカリ若しくはアルカリ土類
金属の水酸化物、炭酸塩若しくは重炭酸塩（例えば水酸
化ナトリウム、水酸化カリウム、炭酸ナトリウム、炭酸
カリウム、炭酸リチウム、炭酸水素ナトリウム、水酸化
カルシウム、水酸化マグネシウム等）、水酸化アンモニ
ウム等の無機塩基等が挙げられる。

加水分解は冷却若しくは加温の様な比較的穏やかな条件
で且つ反応に悪影響を及ぼさない溶媒［例えば水、アル
コール（例えばメタノール、エタノール、プロパツール
等）の様な、！！水性溶奴、アセトン、Ｎ、Ｎ−ジメチ
ルホルムアミド、テトラヒドロフラン、ジオキサン、ジ
メチルスルホキシド等またはこれらの混合溶媒］中にお
いて行われる。

２）還元： 化学還元及び接触還元法を含む還元方法は常法により行
なわれる。

化学還元に使用される好ましい還元剤としては、例えば
金属（例えば錫、亜鉛、鉄等）又は金属化合物（例えば
塩化クロム、酢酸クロム等）と有機若しくは無機酸（例
えば蟻酸、酢酸、プロピオン酸、トリフルオロ酢酸、ｐ
−トルエンスルホン酸、塩酸、臭化水素酸等）との組合
わせ等が挙げられる。

又接触還元に使用される好ましい触媒としては、白金触
媒（例えば白金板、白金スポンジ、白金黒、白金コロイ
ド、酸化白金、白金線等）、パラジウム触媒（パラジウ
ムスポンジ、パラジウム黒、酸化パラジウム、パラジウ
ム炭素、パラジウムコロイド、パラジウム−硫酸バリウ
ム、パラジウム−炭酸バリウム等）、ニッケル触媒（還
元ニッケル、酸化ニッケル、ラネーニッケル等）、コバ
ルト触媒（例えば還元コバルト、ラネーコバルト等）、
鉄触媒（例えば還元鉄、ラネー鉄等）、銅触媒（例えば
還元銅、ラネー銅、ウルマン銅等）等が例示される。還
元は通常溶媒中で行なわれる。好ましい溶媒としては、
例えば水、アルコール（例えばメタノール、エタノル、
プロパツール等）、酢酸及び他の一般的有機溶媒若しく
はその混合物が用いられる。又、化学的還元において使
われた前述の液状酸も又溶媒として兼用できる。更に接
触還元に用いられる好ましい溶媒としては、上述のもの
以外に、ジエチルエーテル、ジオキサン、テトラヒドロ
フラン等若しくはその混合物も使用される。

反応は冷却若しくは加温等の比較的穏やかな条件下に速
やかに行われる。

アミン保護基、カルボキシ保護基およびヒドロキシ保護
基の種類によっては、上記脱離反応によって同時に脱離
する場合もあるが、これらを積極的に同時に脱離させる
方法としては、例えばぶつ化水素、メタンスルホン酸、
トリフルオロメタンスルホン酸等の酸で処理する方法が
挙げられ、この反応はこれらの酸に影響をおよぼさない
通常の溶媒の存在下または非存在下に行うことができる
。

この方法はメチオニン、アニソール等の存在下反応を行
うと好結果が得られる場合が多い。

また上記酸は溶媒としても兼用される。この反応は通常
冷却〜０℃付近で行うのが好ましい。

（３）方法３について： この方法は、化合物［Ｉｃ］　、［ＩＩｃ］および［ｍ
ｃ］をメルカプト保護基の脱離反応に付して対応するメ
ルカプト保護基の脱離した化合物ならびに分子内のＳ−
５結合および（または）分子間のＳ−５結合を形成した
化合物（すなわち、化合物［Ｉ　ｄ］　、［ＩＩｄｌ　
。

［ｍｄｌ　、［ＩＶ］　、［Ｖ］　、［ＶＩ］および［
■］）を得る方法である。

これら分子内および（または）分子間Ｓ−５結合を形成
した化合物を得る方法としては遊離メルカプト基を有す
る化合物（すなわち、化合物［Ｉ’ｄ］　、［ＩＩｄｌ
　、ｌ’ｌヨび［ｍｄｌ）を経由する方法とそれを経由
しない方法とがある。以下これらについて説明する。

■）遊離メルカプトｘを有する化合物を経由する方法： １）−１（化合物［Ｉ　ｃ］→化合物［Ｉｄコ　、化合
物［１１ｃｌ→化合物［１１ｄ１．化合物［ｍｃ］→化
合物［ｍｄ］）： この方法は、化合物［Ｉｃｌ　、［１１ｃコまたは［ｍ
ｃ］を酢酸水銀、トリフルオロ酢酸水銀、酢酸銀等の金
属塩、トリフェニルホスフィン、トリブチルホスフィン
等の有機りん化合物、メルカプトエタノール、メルカプ
ト酢醜、エタンジチオール、チオフェノール。

ジチオスライトール、ジチオエリスリトール等のアルキ
ルまたはアリールチオール等の試薬で処理することによ
って、それぞれ対応する化合物［Ｉｄｌ、化合物［１１
ｄ］または化合物［ｍｄ］を得る方法である。

この反応は通常溶媒中で行われ、好ましい溶媒としては
例えば水、アルコール（例えばメタノール、エタノール
、プロパツール等）、ジオキサン、ジメチルホルムアミ
ド並びにこれらの混合溶媒等が挙げられる。

この反応は冷却〜加温程度の比較的穏やかな条件下で速
やかに行われる。

１）−２（化合物［Ｉ　ｄｌ→化合物［ＶＩ］および（
または）［■］　、化合物［１１ｄ］→化合物［■コ　
、化合物［ｍｄｌ→化合物［ＶＩ）： この方法は化合物［Ｉｄｌ、化合物 ［ＩＩｄ］または化合物［１１１ｄ］を比較的穏やかな
酸化的条件下で処理することによって、化合物［Ｉｄｌ
に対応して化合物［ＶＩ］および（または）化合物［■
］を、化合物 ［１１ｄ］に対応して化合物［ＩＶ］を、化合物［ｍｄ
］に対応して化合物［ＶＩをそれぞれ得る方法である。

ここで使用される酸化剤の好ましい例としては例えば空
気中の酸素、フェリシアン化カリウム等が挙げられる。

２）遊離メルカプト基を有する化合物を経由しない方法
： （化合物［Ｉｃｌ→化合物［ＶＩ］および（または）　
［ＶＩ［］　、化合物［ＩＩｃ］→化合物［■］　、化
合物［ｍｃ］→化合物［ＶＩ）：この方法は化合物［Ｉ
ｃｌ、化合物 ［ＩＩＣ］または化合物［ｍｃ］をよう素、ジチオサイ
アノーゲン等の電子試薬で処理することによって化合物
［Ｉｃｌに対応して化合物［ＶＩ］および（または）化
合物［■］を、化合物［ＩＩｃ］に対応して化合物［Ｉ
Ｖ］を、化合物［ｍｃ］に対応して化合物［ＶＩをそれ
ぞれ直接得る方法である。

この反応は通常溶媒中で行われ、好ましい溶媒の例とし
ては、水、アルコール（例えば、メタノール、エタノー
ル、プロパツール等）、ジオキサン、ジメチルホルムア
ミド等が挙げられる。

またこの反応は冷却〜加温程度の比較的穏やかな条件下
で行われる。

この発明の化合物［Ｉ］〜［■］には分子内不斉炭素原
子による１または２以上の異性体が含まれ、そのような
異性体は全てこの発明の範囲に含まれる。

この発明のペプチド、すなわち化合物［Ｉ］　〜［■］
および医薬として許容されるそれらの塩は前記のように
Ｂ型肝炎ウィルス抗原の解析に有用であり、またＢ型肝
炎ワクチン用抗原組成物等としても有用であり、さらに
またこれらの化合物は感染防御活性をも有し、抗菌剤と
して有用である。

以下この発明のペプチド［Ｉ］〜［■］について、感染
防御作用を示す試験例を示す。

試験例（殺菌感染症に対する防御効果）（イ）方法： ・試験動物：ＩＣＲ系マウス、雄、４退会、１０／群 ・薬剤の投与方法：感染する４日前にそれぞれ、所定濃
度のこの発明のペプ チド（水溶液）を腹腔内投与し た。

・感染菌および感染方法＝３７℃で２０時間培養したエ
セリヒア・コリＮｏ。

２２（濃度：　２．ＯＸ　１０８ｃｆｕ／ｍｌ）を減菌
生理食塩水にけん濁し、 これを０．２　ｍｌ腹腔内感染させ た。感染＠４日間マウスの生死 を観察し、その生存率（％）を めた。

（ロ）結果： この発明の医薬組成物は、たとえば固体、半固体または
液体形態の製剤の剤形で使用でき、これらの剤形はこの
発明の有効成分を、外用、経口または非経口投与に適し
た有機または無機担体または賦形剤と混和した状態で含
有している。有効成分は、たとえば錠剤、ペレット剤、
カプセル剤、半割、溶液剤、乳化剤、懸濁液その他の使
用に適した任意の剤形用の慣用の無毒な医薬に許容され
る担体と配合することができる。使用しうる担体は水、
グルコース、乳糖、アラビアゴム、ゼラチン、マンニッ
ト、スターチペースト、マグネシウムトリシリケート、
タルク、コーンスターチ、ケラチン、微粉（コロイド状
）シリカ、バレイショデンプン、尿素およびその他の固
体、半固体または液体形態の製剤を製造するのに適した
担体である。担体のほかに、補助薬、安定化剤、増粘剤
および着色剤、或いは香料などを使用してもよい。

医薬組成物はまたは有効成分の活性を保持する目的で防
御剤または制菌剤を含有してもよい。有効成分の化合物
は、治療法または病状に所期の治療効果を生ずるように
十分な量で医薬組成物中に存在させる。

この組成物を人に投与する場合、静脈内、筋肉内または
経口投与により投与するのが好ましい。

この発明の有効化合物の投与量または治療有効量は化合
物の種類ならびに治療を受ける各患者の年令および状態
によって異なるが、一般に大または動物の体重１ｋｇ当
り１日に約０．１〜１０００ｍｇの有効成分を治療目的
に投与する。また１回の平均投与量としては約５０ｍｇ
、１００ｍｇ、２５０＋ｎｇおよび５００ｍｇが用いら
れる。

次にこの発明の実施例を示すが、各実施例における各ア
ミノ酸はＬ体をさすものとする。

実施例１−１ Ｎ−ｔ−ブトキシカルボニル−〇−ベンジルセリン樹脂
（２，１５ｇ）　［セリン含有量：　０．８２ｍモル／
ｇ、スチレンー１％ジビニルベンゼン、１合体］を出発
原料とし、下記表に示す固相法スケジュールに従いペプ
チド結合形成反応に付した０反応に供したアミノ酸の反
応順序はＳｅｔ、Ｐｒｏ、ＩＩｓ。

Ｐｒｏ　、　Ｉ　ｌｅ　、ｌ：ｙｓ　、Ｔｈｒ　、Ｃｙ
ｓ　、Ａｓｎ　、Ｇ　ｌｙ　、Ａｓｐ　、Ｓｅｔ　、Ｐ
ｒｏ　、Ｌｙｓ　。

Ｔｈｒであり、表のスケジュールを１５サイクルくり返
すことにより１６個のアミノ酸残基を有するペプチドを
合成した。なお、これらのアミノ酸のα−アミノ基はｔ
−ブトキシカルボニル基で、その他の側鎖官能基につい
ては、Ｓｅｔ、Ｔｈｒはベンジル基で、Ｃｙｓはアセト
アミドメチルス（で、Ａｓｐはシクロヘキシルエステル
で、　Ｌｙｓは２−クロロベンジルオキシカルボニル基
でそれぞれ保護しておいた。

即ち表の第１〜１１工程に示す手順に従って出発原料（
又は出発原料のＮ−末端アミン基にアミノ酸をカップリ
ングさせることによってペプチド鎖を延長させていって
得られる中間物質）に、同表の溶媒及び試薬を順次作用
させることによってペプチド鎖を延長していった。尚同
手順のうち第８工程に当るカップリング反応）は一般的
には塩化メチレン溶液中で行なったが、Ｓ−アセトアミ
ドメチル基で保護されたＣｙｓを反応させるときだけは
、塩化メチレンとジメチルホルムアミドの（２：　１）
混合液を用いた。また、Ａｓｎのカップリング反応に当
ってはＮ−ｔ−ブトキシカルボニルアスパラギンをＮ−
ヒドロキシベンゾトリアゾール（１：１当量）とジシク
ロへキシルカルボジイミド（１当量）のジメチルホルム
アミド−塩化メチレン（１：　１）混合液に加え、０℃
で１０分間攪拌することによって活性化した上で第８工
程に使用した。第７番目以降のアミノ酸を導入する（　
Ｃｙｓを用いる第１番目の反応の終了後）に当っては、
表に示した第２工程は、塩化メチレン−トリフルオロ酢
酸混合液中に５容量％のエタンジチオールを添加した行
なった。又更１こＡｓｐをカップリング反応させた後第
１２番目以降のアミノ酎を導入するに当っては第６エ程
の中和は、トリエチルアミンの水冷溶液を用いて行ない
、且つ処理時間も１．５分に短縮した。

各カップリング反応が完遂されたか否かの検査は、カイ
ザーのニンヒドリンテストによった。そしてカップリン
グが不十分であることが検知されたときは、表における
第８．９，１０．１１及びｌの各工程を、この記載順に
従って繰り返した。

実験では、Ｃｙｓ　（第６番目）　、　Ｇｌｎ、Ａｓｐ
、Ｓｅｔのカップリング反応について夫々前述の繰り返
し処理を行なった。一番最後のＴｈｒをカップリングし
終えた段階で、得られた樹脂状物をメタノールで洗浄し
更に減圧下に乾燥を行なったところ、次式で示されるペ
プチド樹脂（１−１）　（５，４３８ｇ）を得ることが
できた。

Ｂｏｃ−Ｔｈｒ（Ｂｚｌ）−Ｌｙｓ（ＣＩ−ｚ）−Ｐｒ
ｏ−９ｅｔ（Ｂｚｌ）−Ａｓ　ｐ　（０）１ｅり−Ｇ　
Ｉｙ−Ａｓｎ−Ｃｙｓ（Ａｃｍ）−Ｔｈｒ（Ｂｚ　Ｉ　
）−Ｃｙｓ　（Ａｃｍ）−Ｉ　１ｅ−Ｐｒｏ−１１ｅ−
Ｐｒｏ−Ｓｅｔ（Ｂｚｌ）−５ｅｔ（Ｂｚｌ）−樹脂実
施例１−２ 上記で得たペプチド樹脂（１−１）　（２，６７ｇ）を
ア二ンール（４，０ｍ１）の存在下ぶつ化水素（５０ｍ
ｌ）中、−６〜−５°Ｃで１時間撹拌した。その後同温
度で２時間、および室温で１時間要してふっ化水素を減
圧留去した。残留物にＩＭ酢酪（１００ｍｌ）とエーテ
ル（５０＋ｎｌ）を加え、水冷下に１時間撹拌した。樹
脂状物を濾去して１Ｍ酢酸で洗浄した。濾液、洗液を合
し、エーテル層を分離後水層をダウエックス１×２（酢
酸型、２０’０ｍ１）のカラムに通し、凍結乾燥すると
粗製のＨ−Ｔｈｒ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−３ｅｔ−Ａｓｐ−
Ｇｌｙ−Ａｓｎ−Ｃｙｓ（Ａｃｍ）−Ｔｈｒ−Ｃｙｓ（
Ａｃｍ）−１１ｅ−Ｐｒｏ−１１ｅ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−
５ｅｒ−ＯＨ（１，２４２ｇ）が得られた［出発物質Ｃ
Ｉ）からみた収率８１．５％］。

この粗製品（１，１４ｇ）をカルボキシメチルセルロー
ス【ワ−／　ｌ・７７ｅＭ　−５２、２，８Ｘ５Ｂｃｍ
、　０．１Ｍピリジン−酢酩緩衝液（ｐ）１５．４）で
平均化したものコのカラムに通し、０．１Ｍ〜０．４Ｍ
の間を直線勾配的に濃度変換させた同一緩衝液（各１０
０１００Ｏで溶出し、２４０〜２６４ｎ＋ｌの分画を集
めて凍結乾燥すると、精製品（４４７＋ｉｇ）が得られ
た。次の分画（２６５〜３１２ｍ１）からは、やや精製
度は落ちるが、精製品と見なし得るもの（４９５ｍｇ）
が得られた。

上記の精製品（４３ｍｇ）をセファデックスＧ−１５（
３，２Ｘ　８０ｃｍ　：　１％酢酸で平衡化したもの）
のカラムに通し、脱塩を行った。１％酢酪で溶出し、１
４４〜２０８ｍ１の分画を集めて凍結乾燥すると、脱塩
された目的物質（１−２：３８ｍｇ）が得られた。

（１）酸による加水分解物（６Ｎ塩酸で１１０’Ｃ、２
４時間の処理物）のアミノ酸分析：Ｔｈｒ：０．８２Ｘ
　２　Ｌｙｓ：１．００Ｐｒｏ＋１．０？Ｘ　３　Ａｓ
ｐ：１．０３Ｘ　２Ｇｌｙ：１．＋３　１１ｅ：１．Ｏ
ＩＸ　２Ｓｅｒ：１．０２Ｘ　３ （２）薄層クロマトグラフィ　Ｒｆ　＝　０．４０［セ
ルロースやメルクＮｏ、　５５５２、ｎ−ブタノール−
酢酸−水一ピリジン（１５：３＋１２：１０）ニンヒド
リンにより検出］（３）高速液体クロマトグラフィ 保持時間＝５．８分 カラム：ヌクレオジル５ＣＩＢ（１５０Ｘ　４ｍｍ）溶
出液：　ｐＨ４，８の０．１Ｍ燐酸−燐酸第二カリウム
緩衝液とアセトニトリルの ８４：１６況合液 流速：　１．Ｏｍｌ　７分 検出：ＵＶ２１０ｎｍ 実施例２−１ Ｎ−ｔ−ブトキシカルボニル−５−アセトアミドメチル
システィン樹脂（４，０２ｇ　ニジスティン含有量：　
０．４８ｍモル／ｇ）を出発原料とし、実施例１−１に
準じてペプチド結合形成反応を行なった。

但しアミノ酸の反応順序は、Ｓｅｔ　、Ｐｒｏ　、Ｐｈ
ｅ　、Ｍｅｔ　。

Ｓｓ　ｒ　、Ｔｈｒ　、Ｇｌｙ　、Ｇｉｎ、Ａｌａ　、
Ｐｒｏ　ｊ　Ｉｅ、Ｔｈｒ　、Ｃｙｓ　、Ｔｈｒ　、Ｌ
ｙｓであった。表の第２工程に用いた混合液については
、５重量％のエタンジオールを含有するものを用いた。

又第８工程のカップリング反応においてＳ−アセトアミ
ドＣｙｓの反応にあっては、３０容量％のジメチルホル
ムアミドを含有する塩化メチレン溶液中で遂行した。グ
ルタミンのカップリングは実施例１−１のアスパラギン
カップリングに準じた。尚カップリングが不十分なため
第８．９，１０．１１及びｌ工程の繰り返しを必要とし
たのは、第１番目のＳｅｔ及び第１０番目のＰｒｏをカ
ップリング反応させたときであった。一番最後の　Ｌｙ
ｓをカップリングし終えた段階で、得られた樹脂状物を
実施例１−１と同様に処理したところ、次式で示される
ペプチド樹脂（２−１）　（８，３２ｇ）が得られた。

Ｂｏｃ−Ｌｙｓ（ＣＩ−ｚ）−Ｔｈｒ（Ｂｚｌ）−Ｃｙ
ｓ（Ａｃａ＋）−Ｔｈｒ（Ｂｚｌ）−１１ｅ−Ｐｒｏ−
Ａｌａ−Ｇｌｎ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ（Ｂｚｌ）−３ｅｒ（
Ｂｚｌ）−Ｍｅｔ−Ｐｈｅ−Ｐｒｏ−９ｅｔ（Ｂｚｌ）
−Ｃｙｓ（Ａｃｍ）−樹脂実施例２−２ 上記で得たペプチド樹脂（３，０ｇ）を、固相反応容器
中において、５％エタンジチオール含有の５０％トリプ
ルオロ酢酸で３０分間処理し、塩化メチレン（３分Ｘ３
）、２−プロパツール（３分Ｘ２）、塩化メチレン（３
分Ｘ３）、５％トリエチルアミンの塩化メチレン溶液（
３分Ｘ２）及び塩化メチレン（３分Ｘ３）で順次洗浄し
た。この樹脂をメタノールで洗浄した後、減圧下５塩化
燐で乾燥した。上記処理により保護基が部分的に脱離し
たものを、アニソール（４，５ｍ１）と共に、実施例１
−２と同様にぶつ化水素（４５ｍｌ）中、０°Ｃで１時
間撹拌した。同温度で１時間４０分要してぶつ化水素を
減圧留去し、残留物に１Ｍ酢酸（１００ｍｌ）とエーテ
ル（４０ｍｌ）を加えた。以下実施例１−２と同様にし
て凍結乾燥すると、粗製のＨ−Ｌｙｓ−Ｔｈｒ−Ｃｙｓ
（Ａｃｍ）−Ｔｈｒ−１１ｅ−Ｐｒｏ−Ａｌａ−Ｇｌｎ
−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−９ｅｒ−Ｍｅｔ−Ｐｈｅ−Ｐｒｏ−
９ｅｒ−Ｃｙｓ（Ａｃｍ）−０Ｈ（１，０２ｆ（ｇ）が
得られた。

この粗製品（１００ｍｇ）をカルボキシメチルセルロー
ス［ワットマンＣＭ　−５２、２，４Ｘ３２ｃｍ、　０
．１　ピリジン−酢酸緩衝液（ｐＨ５，４）で平衡化し
たもの］のカラムに通し、０．１Ｍ〜０．４Ｍの直線勾
配的に濃度変換させた同一緩衝液（各３００ｍ１　）で
溶出し、２３６〜２６８１の分画を集めて凍結乾燥する
と、精製品（３１ｍｇ）が得られた。次いでこのものを
セファデックスＬ　Ｈ−２０（３，２Ｘ８０ｃｍ　：　
１％酢酸で平衡化したもの）のカラムに通し、同一溶媒
で溶出した。１４４〜１６８ｍ１の分画を集めて凍結乾
燥すると、精製された目的物質（２−２：　２４．９ｍ
ｇ　）が得られた。

（１）酸による加水分解物（６Ｎ塩酸で１１０’Ｃ１２
４時間の処理物）のアミノ酸分析： Ｔｈｒ：　０．８２Ｘ３　Ｌｙｓ：　１．００Ｐｒｏ：
　１．１２Ｘ２　Ａｌａ：　１．１９Ｇｌｙ：　１．０
２　１１ｅ：　０．９８Ｇｌｕ：　１．１６　Ｍｅｔ：
　１．０４Ｓｅｒ：　０．９２Ｘ２　Ｐｈｅ：　１．０
０（２）薄層り四マドグラフィ　Ｒｆ＝０．５９［セル
ロース・メルクＮｎ５５５２、ｎ−ブタノール−酢醍−
水−ピリジン（１５：３：１２：１０）ニンヒドリンに
ょム検出コ （３）高速液体クロマドグ２フイ 保持時間：４．８分 カラム：ヌークレオジ＃　１０　ＣＩｓ　（２５０ｘ４
ｍｍ）溶出液：ｐＨ４，８の０．１Ｍ燐酸−燐酸第二カ
リウム緩衝液とアセトニトリルの８１ ：１９混合液 流速：　１．５　ｍｌ／Ｇ 検出：ＵＶ２１０ｎｍ （４）元素分析：　Ｃ２ｅＨｕｓＮ２ｏ０２ｓＳｓ　・
９ＨｔＯＣＨ，Ｃ００Ｈ 計算値　Ｃ４６，１６Ｈ６，６０Ｎ　１３．８５実験値
　Ｃ４６，２１Ｈ６，８１Ｎ　１３．８２実施例３−１ Ｎ−ｔ−ブトキシカルボニル−Ｏ−ベンジルセリン樹脂
（ｚ、５ｇ：セリン含有量：０．８２ｍモル／ｇ）を出
発原料とし、実施例１−１及び実施例２−１に準じてペ
プチド結合形成反応を付し、該反応を１６サイクル繰）
返すことによって１７個のアミノ酸からなるペプチドを
製造した。尚アミノ酸の反応順序は、Ｈｉｓ＋Ａｓｎｔ
Ｓｅｒ＋Ｔｈｒ＋Ｐｒｏ、Ｓｅｒ＋Ｇｉｎ、Ｓｅｒ　、
ＡｓｎｔＧ１ｎ＋Ｇｌｙ＋Ｐｒｏ　＋Ｃｙｓ　＋Ｔｈｒ
　＋Ｐｒｏ　＋Ａ１ａであシ、α−アミン基及び側鎖官
能基の保護は実施例１−１に準じた。但しＨｉｓはｐ−
）ルエンスルホニル基で保護した。

カップリング反応が完結したか否かはカイゼルらのニン
ヒドリンテストで調べ、第１番目のＨｉｓ＋第４番目の
Ｔｈｒｙ第１１番目のＧＩｙを導入するカップリング反
応については、第７．８．９１１０．１１及び工の各工
程操作を繰シ返し行なった。最後のＡｌａをカップリン
グ反応させた後で、生成物をメタノール（５０ｍｌＸ３
）で洗浄し乾燥すると、次式で示されるペプチド樹脂（
３−１）　（ａａｓｇ）を得ることができた。

Ｂｏｃ−Ａｌ　ａ−Ｐｒｏ−Ｔｈｒ　（Ｂｚ　１　）−
Ｃｙｓ　（Ａｃｍ）−Ｐｒｏ　−Ｇｌｙ−Ｇｉｎ−Ａｓ
ｎ−５ｅｒ（Ｂｚｌ）−Ｇｉｎ−５ｅｒ（Ｂｚｌ）−Ｐ
ｒｏ−Ｔｈｒ（Ｂｚｌ）−５ｅｒ（Ｂｚｌ　）−Ａｓｎ
−Ｈｉｓ（Ｔｏｓ）−５ｅｒ（Ｂｚｌ）−樹脂 実施例３−２ 上記で得たペプチド樹脂（３，０ｇ）をアニソール（３
ｍｌ）の存在下で０℃、１時間に亘ってぶつ化水素（４
０ｍｌ）と処理した。反応終了後、保護基（Ｓ−アセト
アミドメチル基を除く）の脱離されたペプチドをＩＮ酢
酸（５０ｍｌ）で抽出した。抽出液を酢酸エチル（２０
ｍｌ）を洗浄した後、ダウエックス１×２（酢酸型、３
００ｍ１）のカラムに通し、ＩＮ酢酸で溶出した。ニン
ヒドリンテスト（陽性）の分画（３００ｍｌ）を集め、
約５０ｍ１に濃縮した後凍結乾燥すると、下式の粗製ペ
プチド１．４３ｇ（Ｎ−ｔ−ブトキシカルボニル−〇−
ベンジルセリン樹脂から計算した収率８３．５％）が得
られた。

Ｈ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｔｈｒ−Ｃｙｓ（Ａｃｍ）−Ｐｒ
ｏ−Ｇｌｙ−Ｇｉｎ−Ａｓｎ−Ｓｅｒ−Ｇｉｎ−５ｅｒ
−Ｐｒｏ−Ｔｈｒ−８ｅｒ−Ａｓｎ−Ｈｉ　ｓ　−８ｅ
　ｒ　−ＯＨ 水晶（ａｏｏｍｇ）を、カルボキシメチルセルロース［
ワットマンＣＨ−５２、２、３ｘ３２ｃｍ＋　０．０５
Ｍ酢酸−ピリジン緩衝液（ｐＨ４，８）で平衡化したも
のコのカラムに通し、同一の緩衝液で溶出した。

各６．５ｇの分画を集め、フォーリン・ｑ−ｖ−（Ｆｏ
ｌｉｎ−Ｌｏｗｒｙ）法によ、９７５０ｎｍで監視した
。

ピークを示した分画（陽２２〜３６）を集めて凍結乾燥
した。残渣を１％酢酸（３ｍｌ）に溶解し、セファデッ
クスＧ−１５（３Ｘ６３ｃｍ：　１　％酢酸で平衡化し
たもの）に通して各６．５ｇずつの分画を集めた。２３
０ｎｍにおけるＵＶ吸収がピークを示した分画（Ｎ１２
５〜３４）を集めて凍結乾燥すると、精製品（ｚｓ２ｍ
ｇ）が得られた。

（１）６Ｎ塩酸による加水分解物のアミノ酸分析：Ａ　
１　ａ　：　１．０　Ｇ　１　ｙ　：　１．０２（１）
Ｈｉ　ｓ　：　０．８６（１）　Ａｓ　ｐ　：　１．９
５（２）Ｇ　１　ｕ　：　１．８７（２）　Ｔｈ　ｒ　
：　１．２８（２）Ｐ　ｒ　ｏ　：　２．８０（３）　
Ｓ　ｅ　ｒ　：　３．３９（４）（２）ＡＰ−Ｍ消化物
のアミノ酸分析：Ｇ　１　ｙ　：　１．ＯＨｉ　ｓ　：
　１．２２（１）Ａ　１　ａ　：　０．７４（１１Ａｓ
　ｐ　：　１．８３（２）Ｇ　１　ｕ　：　１．７５（
２）　Ｔｈ　ｒ　：　１．６０（２）Ｐｒｏ：２．７８
（３）　Ｓｅｒ：３．２　（４）（３）薄層クロマトグ
ラフィ　Ｒｆ＝０．３４［セルｐ−ス、ｎ−ブタノール
（２）：酢酸（２）：水（２）：ビリジン（１）コ （４）高速液体クロマトグラフィ 保持時間二３．９分 カラム：ＲＰ−１８（４Ｘ２５０ｍｍ）溶出液：０．１
Ｍ燐酸−燐酸第二カリウム（１）Ｈ２，７）　（１０：
１、容量比）流速：　１ｍｌ／分 検出：ＵＶ２１０ｎｍ 実施例４ 実施例３−２で得たＨ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｔｈｒ−Ｃｙ
ｓ（Ａｃｍ）−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ−Ｇｉｎ−Ａｓｎ−５ｅ
ｒ−Ｇｉｎ−８ｅｒ−Ｐｒｏ−Ｔｈｒ　−８ｅｒ−Ａｓ
ｎ−Ｈｉ　ｓ−８５−８ｅｒ−ＯＨ（５２の８０％酢酸
（３ｍｌ）溶液によう素（７４，９ｍｇ）の酢酸（８，
５ｍ１）溶液を加えた。反応液を室温で１時間攪拌した
後、０．５Ｍチオ硫酸ナトリウムを加えて過剰よう素を
分解する。この溶液を蒸発乾燥させ、残留物を１％酢酸
（３ｍｌ）に溶解してから、セファデックスＬＨ−２０
（３Ｘ６０ｃｍ：　１弾酢酸で平衡化したもの）に通し
、４ｍｌずつの分画を集め、ＵＶ吸収（２３０ｎｍ）で
測定した。ピークを示した分画（Ｎｎ３４〜３９）を集
めて凍結乾燥すると、（４０ｍｇ　）が得られた。

（１）６Ｎ塩酸による加水分解物のアミノ酸分析：Ｇｌ
ｙ：１．ＯＨｉｓ：１．２２ Ａｌａ：０．７４（１）　Ａｓｐ：１．８３（２）Ｇｌ
ｕ：１．７５ｆ２）　Ｔｈｒ：１．６０（２）Ｐ　ｒ　
ｏ　：　２．７８　（３）　Ｓ　ｅ　ｒ　：　３．２０
　（４）（２）高速液体クロマトグラフィ 保持時間：５．２分 カラム：ＲＰ−１８（４Ｘ２５０薗〕 溶出液：０．１Ｍ燐酸−燐酸第二カリウム（１）Ｈ２，
７）ニアセトニトリル （９：１、容量比） 速度：　０．５　ｍ　ｌ／Ｇ 検出：ＵＶ２１０ｎｍ 実施例５ 実施例２−２で得たＨ−Ｌｙｓ−Ｔｈｒ−Ｃｙｓ（Ａｃ
ｍ）−Ｔｈｒ−Ｉｌｅ−Ｐｒｏ−Ａｔ　ａ−Ｇｉｎ−Ｇ
ｌ　ｙ−Ｔｈｒ−９ｅｒ−Ｍｅｔ　−Ｐｈｅ−Ｐｒｏ−
８ｅｒ−Ｃｙｓ（Ａｃｍ）−０Ｈ（１６０ｍｇ）を８０
チ　酢酸（ｘｃ＋２ｍ１）に溶解し、この溶液に、よう
素（２２７ｍｇ）の８５％酢酸（３２ｍｌ）溶液を室温
下に加えた。

反応混合物を同温度で１時間攪拌し、チオ硫酸ナトリウ
ムの希薄水溶液を、茶色が消失する迄加えた。反応混合
物を濃縮し、残渣をセファデックスＧ−１５のカラム（
３，２Ｘ６５ｃｍ）に吸着させ、１％酢酸で溶出した。

溶出液を凍結乾燥すると、次式で示されるペプチド（ｉ
４２ｍｇ）の粗製品が得られた。

この粗製品（１４０ｍｇ）をセファデックスＧ−２５（
ファイン：２．６Ｘ４４ｃｍ）のカラムに吸着させ、ｎ
−ブタノ−々−０，１％酢酸の０．６　Ｍ酢酸アンモニ
ウム溶液−ピリジン（５：１に３）からなる混合溶媒シ
ステムを用いた分画クロマトグラフ法によって精製した
。各７ｇの分画をフォーリーンローリ−法（波長７５０
ｎｍ）で調査した。主分画（分画陽１９〜２４）を集め
てセファデックスＧ−１５（２，８ｘ５５ｃｍ）のカラ
ムに吸着させ１％酢酸で溶出すると、精製ペプチド（７
０，３ｍｇ）が得られた。

（１）酸による加水分解物（６Ｎ塩酸で１１０℃。

２４時間の処理物）のアミノ酸分析： Ｌｙｓ：０．８７　Ｔｈｒ：１．０ＯＸ３Ｐｒｏ：１．
０ＯＸ２　Ａｌａ：１．００Ｇｌｙ：０．９６　Ｓｅｒ
：０．８３Ｘ２Ｐｈｅ：１．１０　Ｃｙｓ　二０．３５
Ｉ　１　ｅ　：　１．０３　Ｇ　１　ｕ　：　１．２３
Ｍｅ　ｔ　：　１．０４ （２）酵素分解物（基質１．７５ｍｇ　ｔ−０，１Ｍの
炭酸水素アンモニウム水溶液３００ｍ１に溶解し、アミ
ノペプチダーゼ１．２単位を加え３７℃で２４時間処理
した物）のアミノ酸分析： Ｌｙｓ：０．７７　Ｔｈｒ　＋　Ｇｉｎ：０．９２Ｘ４
１１ｅ：１．０５　Ｐｒｏ：０．７８Ｘ２Ｇｌｙ：Ｑ、
９８　Ｓｅｒ：０．９５Ｘ２Ｐｈｅ：　１．０６　Ｃｙ
ｓ：０．８４ＡＪａ：１．００　Ｍｅｔ：１．２５ （３）［α］　Ｄ＝　−９４，６７°（Ｃ＝０．４７７
　、　Ｈ２Ｏ）（４）薄層クロマトグラフィ　Ｒｆ＝０
．６４［セルロース・メルクｔｍ５５５２．ｎ−ブタノ
ール−酢酸−水−ピリジン（１５：３：１２：１０）ニ
ンヒドリンによシ検出コ （５）高速液体クロマトグラフィ 保持時間二６．２分 カラム：ヌークレオジル１０Ｃ＋ａ（２５０Ｘ４ｍｍ）
溶出液：０．１Ｍ燐酸−燐酸第二カリウム緩衝液ニアセ
トニトリル（８０：２０）。

ｐＨ４，８ 流速：　１．Ｏｍｌ　／分 検出：ＵＶ２１０ｎｍ （４）元素分析：　ｃ？ＯＨ＋ｔｚＮ＋ａＯｚｓＳ１　
・１０Ｈ２０・ＣＨ，Ｃ０ＯＨ 計算値　Ｃ４５，２７Ｈ７，１８Ｎ　１３．２０実験値
　Ｃ４４，７１Ｈ６，２７Ｎ　１３．１３実施例６ 実施例５で用いたのと同じ粗製原料ペプチド（７，３４
ｍｇ　：　４．５ｆｉモル）を水（６ｍｌ）に溶解し、
１チ酢酸を加えてｐＨ４に調整した。酢酸銀（２８４ｍ
ｇ）の水（２，８ｍ　ｌ　）溶液を添加し、室温で１時
間４５分攪拌した。次いでこの溶液に硫化水素ガスを吹
込み（１５分間）、更に１０分間窒素ガスを吹込んで硫
化水素をパージした。セルロース粉末パッドを通して反
応液の濾過を行ない、炉液（１３，０ｍ１）の一部（ｏ
、２ｏｍｌ）をとシ、０．１Ｍ燐酸緩衝液（ｐＨ８，０
）を加えて５ｍｌに希釈し、更に５，５′−ジチオビス
（２−ニトロ安息香酸）：エルマンズ試薬の０．１　Ｍ
燐酸緩衝液（ｐＨ７，０）溶液を２滴加え、１時間放置
した。４１２ｎｍにおける吸光度は０．３９であシ、こ
れはシスティンのＳＨ保護基が脱離した中間体ペプチド
が反応混合液中に３，４２μモル（理論収率：８４．４
％）存在していることを示す。

前記溶液に希アンモニウム水を加えてｐＨ８にした後、
室温で２４時間攪拌した。反応混合物を濃縮し、セファ
デックスＧ−１５（１４Ｘ３５ｃｍ）の力２ムに吸着さ
せた後、０．１％酢酸で溶出し、凍結乾燥すると粗製ペ
プチドが得られた。本命の高速液体クロマトグラフィー
によシ実施例５で得られた化合物と同一であることが確
認された。

実施例７ 実施例１−２で得１Ｈ−Ｔｈｒ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−３ｅ
ｒ　−Ａｓｐ−Ｇｌ　ｙ−Ａｓｎ−Ｃｙｓ　（Ａｃｍ）
−Ｔｈｒ−Ｃｙｓ　（Ａｃｍ）−Ｉ　１　ｅ−Ｐｒ　ｏ
−１１ｅ−Ｐｒｏ−８ｅｒ−５ｅｒ−ＯＨ（２００ｍｇ
＋　ｅ）、、１１４モル）を水（１００ｍｌ）に溶解し
、０．１チの酢酸（２０ｍｌ）を加えてｐＨ４に調整し
た。酢酸銀（８０ｍｇ）の水（６０ｍｌ）溶液を加え、
反応混合物を室温で２時間攪拌した。次いで硫化水素ガ
スを１５分間吹込み、次いで窒素ガスを３０分間吹込ん
で過剰の硫化水素をパージした。反応混合物をセルロー
ス粉末のパッドによって濾過し、ろ液と洗液を合して４
５０ｍ１まで希釈した。これに希アンそニア水を加えて
ｐＨ８に調整した。

その一部（ｏ、２ｏｍｌ）をとジ、０．１Ｍ燐酸緩衝液
（ｐＨ８，０）　５ｍ　ｌで希釈し、更に５，５′−ジ
チオビ、’、［：２−＝）口安息香Ｍ（エルマンズＥｉ
Ｏ，ｏｘＭ）コの０．１　Ｍ燐酸緩衝液（ｐＨ７，０）
溶液を２滴加え、１時間放置した。４１２ｎｍにおける
吸光度は０．２２６であシ、これは反応混合物中に次式
で示すペプチド（Ｃｙｓが遊離になっているもの）が反
応混合物中に０．０９３７　ｍモル存在するととを示す
。

Ｈ−Ｔｈｒ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−５ｅｒ−Ａｓｐ−Ｇｌｙ
−Ａｓｎ−Ｃｙｓ−Ｔｈｒ−Ｃｙｓ−ＩＩｅ−Ｐｒｏ−
８ｅｒ−８ｅｒ−ＯＨ次いで反応混合物を室温で３日間
放置し、さらに濃縮した。これをセファデックスＧ−１
５のカラム（３，２Ｘ６５ｃｍ）に吸着させ、１％酢酸
で溶出した後凍結乾燥すると、粗製ペプチドが得られた
。

水晶は次式で示す異性体の混合物である。

および （１）薄層クロマトグラフィ Ｒｆ＝０．３０と０．１２ ［セルロース板・メルクＮ１５５５２、ｎ−ブタノール
−酢酸−水一ビリジン（３：１：２：１）ニンヒドリン
により検出］ （２）高速液体クロマトグラフィ 保持時間：５．２分と６．８分 カラム：ヌークレオジル１０Ｃ＋ａ　（２５０Ｘ４ｍｍ
）溶出液：０．１％トリフルオロ酢酸−アセトニトリル
（７５：２５） 流速：ｔｏｍｔ／分 検出：ＵＶ２１０ｎｍ 出願人　財団法人化学及血清療法研究所間　藤沢薬品工
業株式会社

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 Ｈ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−丁ｈｒ−Ｃｙｓ−Ｐｒｏ−ＧＩｙ
   −Ｇｌｎ−Ａｓｎ−９ｅｒ−Ｇｊｎ−Ｓｅｔ−Ｐｒｏ−
   Ｔｈｒ−９ｅｒ−Ａｓｎ−Ｈｉｓ−Ｓｅｒ−０）１Ｈ−
   Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｔｈｒ−Ｃｙｓ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ−Ｇ
   Ｉｎ−Ａｓｎ−９ｅｒ−ＧＩｎ−９ｅｒ−Ｐｒｏ−Ｔｈ
   ｒ−９ｅｒ−ＡＳｎ−Ｈｉｓ−Ｓｓｒ−ＯＨおよび （但し上記各式においてＲ’１士水素またはメルカプト
   保護基を意味する）から選ばれるペプチド又は医薬とし
   て許容されるそれらの塩。