JPS6110598A - ペプチド化合物 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 この発明は新規なペプチド化合物に関するものであり、
詳細にはＢ型肝炎ウィルス抗原の解析に有用であり、ま
たＢｇ肝炎ワクチン用抗原組成物等としても有用な新規
ペプチドおよび医薬として許容されるその塩に関するも
のである。

この発明の新規ペプチドは１次のような式［Ｉ］〜ＥＩ
Ｉ］により示される。

［Ｉ］ Ｈ−５ｅｔ−Ｃｙｓ（Ｒ４）−Ｃｙｓ（Ｒ４）−Ｃｙ、
ｓ（Ｒ４）−Ｔｈｒ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ
−Ｇｌｙ−Ａｓｎ−Ｃｙｇ（Ｒ４）−Ｔｈｒ−Ｃｙｓ（
Ｒ４）−Ｉｌｅ−Ｐｒｏ−１１８−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−３
ｅｒ−０）！［ＩＩ］ Ｈ−Ｓｅｒ−Ｃｙｓ（Ｒ４）−Ｃｙｓ（Ｒ４）−Ｃｙｓ
（Ｒ４）−Ｔｈｒ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−３ｅｔ−Ａｓｐ−
Ｇｌｙ−Ａｓｎ−Ｃｙｓ（Ｒ４）−Ｔｈｒ−Ｃ：ｙｓ（
Ｒ４）−Ｉｌｅ−Ｐｒｏ−Ｉｌｅ−Ｐｒｏ−９ｅｔ−Ｓ
ｅｒ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｔｙｒ−Ｃｙｓ（Ｒ４
）−ＤＨ （但し上記各式においてＲ４は水素またはメルカプト保
護基を意味する） この明細書においてはアミノ酸、保護基、活性基、溶媒
等について、ＩＵＰＡＣ−ＩＵＢ　　ｃｏｍ腸１ｓｓｉ
ｏｎａｎ　　Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ　　Ｎｏｍｅｎｃｌ
ａｔｕｒｅに基づく略号および当該分野における慣用略
号で表示する場合があり、それらを例示すると次の通り
である。　Ｃｙｓ：システィン、Ｔｙｒ：チロシン、Ｐ
ｒｏニブロリン、Ｉｃｅ：イソロイシン、Ａｓｐ：アス
パラギン酸、Ａｓｎ　：アスパラギン、Ｔｈｒ：スレオ
ニン、Ｌｅｕ：ロイシン、Ｇｌｙニゲリシン、Ｌｙｓ：
リジン、Ｓｅｒ：セリン、Ｂｏｃ：ｔ−ブトキシカルボ
ニル、ＣＩ−Ｚ：　２−クロロベンジルオキシカルボニ
ル、　Ｂｚｌ：ベンジル、ＣＩ２　Ｂ２１ニジクロロベ
ンジル、Ａｃｍ：アセトアミドメチル、０−ｃＨｅｘニ
ジクロヘキシルエステル。　この発明の化合物［ＩＩ　
　、　　［ＴＩ］ならびに医薬として許容されるそれら
の塩は種々の方法により製造することができ、以下にそ
れらの方法を説明する。

（１）方法−１（固相法によるペプチド合成）：１）方
法１−１ Ｒ１−Ｓｅ　ｒ（Ｒ３）−樹脂［工ａ］→Ｒ’−Ｓｅｒ
（Ｒ８）−Ｃｙｓ（Ｒａ４）−Ｃｙｓ（Ｒａ４）−Ｃｙ
ｓ（Ｒａ４）−Ｔｈｒ（Ｒ３）−Ｌｙｓ（Ｒ１）−Ｐｒ
ｏ−Ｓｅｒ（Ｒ”）−Ａｓｐ−（ＯＲ２）−Ｇ１７−Ａ
ｓｎ−Ｃｙｓ（Ｒａ　）−Ｔｈｒ（Ｒ）−Ｇｙｓ（Ｒａ
　）−Ｉｌｅ−Ｐｒｏ−Ｉｌｅ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ（Ｒ８
）−Ｓｅｒ−（Ｒ８）−樹脂［Ｉｂ］ ２）方法１−２ Ｒ１−Ｃｙｓ（Ｒａ４）−樹脂［ＩＩａ］＋Ｒ１−５ｅ
ｔ（Ｒ３）−Ｃｙｓ（Ｒａ４）−Ｃｙｓ（Ｒａ４）−Ｃ
：ｙｓ（Ｒｐ４）−Ｔｈｒ（Ｒ３）−Ｌｙｓ（Ｒ４）−
Ｐｒｏ−Ｓｅｒ（Ｒ”）−Ａｓｐ（ＯＲ”）−Ｇｌｙ−
Ａｓｎ−Ｃｙｓ（Ｒａ４）−Ｔｈｒ（Ｒ３）−Ｃｙｓ（
Ｒａ４）−Ｉ　１ｅ−Ｐｒｏ−Ｉｌｅ−Ｐｒｏ−９ｅｔ
（Ｒ”）−Ｓｅｒ（Ｒ”）−Ｔｙｒ（Ｒ８）−Ｌｅｕ−
Ｌｅｕ−Ｔｙｒ（Ｒ”）−Ｃｙｓ（Ｒａ　）−樹脂［Ｉ
Ｉｂコ（２）方法２（保−基の脱離法）： １）方法２−１ Ｒ’−９ｅｔ（Ｒ”）−Ｃｙｓ（Ｒａ４）−Ｃｙｓ（Ｒ
ａ４）−Ｃｙｓ（Ｒａ’　）−Ｔｈｒ（Ｒ３）−Ｌｙｓ
（Ｒ’　）−Ｐｒｏ−９ｅｔ（Ｒ８）−Ａｓｐ（ＯＲ”
）−Ｇｌｙ−Ａｓｎ−Ｃｙｓ（Ｒａ４）−Ｔｈｒ（Ｒ”
）−Ｃ：ｙｓ（Ｒａ４）−Ｉｌｅ−Ｐｒｏ−Ｉｌｅ−Ｐ
ｒｏ−３ｅｒ（Ｒ３）−３ｅｒ（Ｒ３）−樹脂［Ｉ　ｂ
］Ｈ−３ｅｔ−Ｃｙｓ（Ｒａ　）−Ｃｙｓ（Ｒａ　）−
Ｃ：ｙｓ（Ｒａ　）−Ｔｈｒ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−３ｅｒ
−Ａｓｐ−Ｇｌｙ−Ａｓｎ−Ｃｙｓ（Ｒａ４）−Ｔｈｒ
−Ｃｙｓ（Ｒａ４）−Ｉｌｅ−Ｐｒｏ−Ｉｌｅ−Ｐｒｏ
−３ｅｒ−３ｅｒ−ＯＨ［Ｉｃ］ ２）方法２−２ Ｒ’−５ｅｔ　（Ｒ”）−Ｃｙｓ（Ｒａ’　）−Ｃ：ｙ
ｓ（Ｒａ４）−Ｃｒｙｓ（Ｒａ４）−Ｔｈｒ（Ｒ”）−
Ｌ７ｓ（Ｒ”）−Ｐｒｏ−９ｅｔ（Ｒ３）−Ａｓｐ（Ｏ
Ｒ２）　−Ｇｌｙ−Ａｓｎ−Ｇｙｓ（Ｒａ４）−Ｔｈｒ
（Ｒ８）−Ｃｙｓ（Ｒａ４）−Ｉｌｅ−Ｐｒｏ−Ｉｌｅ
−Ｐｒｏ−３ｅｒ（Ｒ８）−Ｓｅｒ（Ｒ”）−Ｔｙｒ（
Ｒ３）−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｔｙｒ（Ｒ３）−Ｇｙｓ（Ｒ
ａ４）−樹脂［ＩＴｂ］＋Ｈ−３ｅｒ−Ｃｙｓ（Ｒａ４
）−Ｇｙｓ（Ｒａ４）−Ｃ７ｓ（Ｒａ４）−Ｔｈｒ−Ｌ
ｙｓ−Ｐｒｏ−９ｅｔ−Ａｓｐ−Ｇｌｙ−Ａｓｍ−Ｃｙ
ｓ（Ｒａ４）−Ｔｈｒ−Ｃｙｓ（Ｒａ　）−Ｉｌｅ−Ｐ
ｒｏ−Ｉｌｅ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｔｙｒ−Ｌｅ
ｕ−Ｌｅｕ−Ｔｙｒ−Ｃ：ｙｓ（Ｒａ４）−０Ｈ［ＩＩ
　ｃ　］（３）方法３（メルカプト保護基の脱離反応）
：ｌ）方法３−１ Ｈ−３ｅｒ−Ｃｙｓ（Ｒａ４）−Ｃｙｓ（Ｒａ４）−Ｃ
ｙｓ（Ｒａ４）−Ｔｈｒ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ａ
ｓｐ−Ｇｌｙ−Ａｓｎ−Ｃｙｓ（Ｒａ４）−Ｔｈｒ−Ｃ
ｙｓ（Ｒａ　４）−Ｉｌｅ−Ｐｒｏ−Ｉｌｅ−Ｐｒｏ−
Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−ＯＨ［Ｉｃ］ ↓ Ｈ−９ｅ　ｒ−Ｃｙｓ−Ｃｙｓ−Ｃｙｓ−Ｔｈｒ−Ｌｙ
ｓ−Ｐｒｏ−９ｅｔ−Ａｓｐ−Ｇｌｙ−Ａｓｎ−ｆｌｌ
：ｙｓ−Ｔｈｒ−Ｃｙｓ−Ｉｌｅ−Ｐｒｏ−Ｉｌｅ−Ｐ
ｒｏ−９ｅｔ−Ｓｅｒ−ＯＨ［Ｉ　ｄ　］ ２）方法３−２ Ｈ−３ｅｒ（：ｙｓ（Ｒａ　）−Ｃｙｓ（Ｒａ　）−Ｃ
ｙｓ（Ｒａ４）−Ｔｈｒ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ａ
ｓｐ−Ｇｌｙ−Ａｓｎ−Ｃｙｓ（Ｒａ　　）−Ｔｈｒ−
Ｃｙｓ（Ｒａ４）−Ｉｌｅ−Ｐｒｏ−Ｉｌｅ−Ｐｒｏ−
Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｔ７ｒ−Ｃ
ｙｓ（Ｒａ４）−０Ｈ［ＩＩ　ｃｌ　　’↓ Ｈ−３ｅｒ−Ｃｙｓ−Ｃｙｓ−Ｃ７ｓ−Ｔｈｒ−Ｌｙｓ
−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｇｌｙ−Ａｓｎ−Ｃ７ｓ−
Ｔｈｒ−（４ｇ−Ｉｌｅ−Ｐｒｏ−Ｉｌｅ−Ｐｒｏ−９
ｅｔ−Ｓｅｒ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｔｙｒ−Ｃｙ
ｓ−ＯＨ［ＩＩ　ｄ　］上記式中、Ｒ１はアミノ保護基
、Ｒ２はカルボキシ保護基、Ｒ３はヒドルキシ保護基、
Ｒａ’はメルカプト保護基をそれぞれ意味する。これら
の定義について説明すれば下記の通りである。

（１）Ｒにおけるアミノ保護基について：アミン保護基
には、アミノ酸やペプチド化学の分野において汎用され
る通常のアミン保護基が含まれ、そのようなアミン保護
基の好ましい例としては、アルコキシカルボニルまたは
シクロアルコキシカルボニル（例えばｔ−ブトキシカル
ボニル、ｔ−ペントキシカルボニル、シクロヘキシルカ
ルボニル等）、置換または非置換のフェニル低級アルコ
キシカルボニル（例えばベンジルオキシカルボニル、２
−クロロベンジルオキシカルボニルたは非置換のアレン
スルホニル（例えばベンゼンスルホニル、Ｐ−トルエン
スルホニル等）等が挙げられる。

（２）Ｒにおけるカルボキシ保護基について：カルボキ
シ保護基にはアミノ酸やペプチド化学の分野において汎
用される通常のカルボキシ保護基が含まれ、そのような
保護基の好ましい例としては、例えば低級アルキル（例
えばメチル、エチル等）等のアルキル、シクロアルキル
（例えばシクロペンチル、シクロヘキシル等）、七ノー
又はジ−フェニル低級アルキル（例えばベンジル、ジフ
ェニルメチル等）等のアラルキル、アロイルアルキル（
例えばフェナシル、トルオイル丹チル等）等が挙げられ
る。

（３）　Ｒ８におけるヒドロキシ保護基について：ヒド
ロキシ保護基にはアミノ酸やペプチド化学の分野におい
て汎用される通常のヒドロキシ保護基が含まれ、そのよ
うなヒドロキシ保護基の好適な例としては、例えばアル
カノイル（例えばアセチル等）等のアシル、置換または
非置換の７ラルキル（例えばベンジル、２，６−ジクロ
ロベンジル等）等が挙げられる。

（４）　Ｒ４およびＲａ’におけるメルカプト保護基に
ついて： メルカプト保護基の好ましい例としては，カルボキシ保
護基、アミノ保護基およびヒドロキシ保護基の脱離条件
下では脱離しない保護基が挙げられ、そのような保護基
の好ましい例としては、アシルアミノアルキル（例えば
アセトアミドメチル、ベンズアミドメチル等）、アリー
ルメルカプタン（例えば３−ニトロピリジン−２−チオ
ール等が挙げられる。また、置換または非置換の低級ア
ルキル（例えばｔ−ブチル等）、置換または非置換アラ
ルキル（例えばベンジル、ｐ−メトキシベンジル、ｐ−
メチルベンジル、３，４−ジメチルベンジル、ジフェニ
ルベンジル、トリチル等）、置換または非置換の低級ア
ルキルメルカプト（例えばエチルメルカプト、ｔ−ブチ
ルメルカプト等）等も各保護基の脱離条件を適当に選択
することにより使用することができる。

（５）医薬として許容される塩について：化合物［ＩＩ
　　、　　［１１］における医薬として許容される塩に
は例えばアルカリ金属塩（例えばナトリウム塩、カリウ
ム塩等、）アルカリ土類金属塩（例えばカルシウム塩等
）アンモニウム塩、有機アミン塩（例えばエタノールア
ミン塩、トリエチルアミン塩，ジシクロヘキシルアミン
塩等）等の無機塩基若しくは有機塩基との塩及び酢酸、
トリフルオロ酢酸、メタンスルホン酸、塩酸、硫酸、硝
酸、燐酸等の有機酸又は無機酸の付加塩が含まれる。

上記各種方法について以下に説明する。

（１）方法１について： この方法は、化合物［Ｉａ］および［ＩＩ　ａ］に、固
相法によるペプチド合成の常法に従って、各保護された
構成アミノ酸を順次カップリングさせて、化合物［Ｉｂ
ｌおよび［■ｂ］を得る方法である。

ここで出発物質として使用する化合物［Ｉ　ａ］および
［ＩＩａ］にはそれぞれ公知物質（例えば、バイオポリ
マー第１２巻，第２５１３頁，　１９７３年）および新
規物質が含まれ、該新規物質は該文献記載の方法と同様
に製造することができる．また使用する樹脂としては固
相法によるペプチド合成において使用する樹脂であれば
、いずれでも使用することができ、そのような樹脂の例
としては、例えばクロロメチル化されたスチレン−ジビ
ニルベンゼン共重合体，ヒドロキシメチル化されたスチ
レン−ジビニルベンゼン共重合体，アミンメチル化され
たスチレン−ジビニルベンゼン共重合体のようなポリス
チレン型樹脂，ポリジメチルアクリルアミド樹脂のよう
なポリアミド型樹脂等が挙げられる。

この方法は一般には各保護された構成アミノ酸の各々に
つき、次のような１〜１１の工程を１サイクルとして行
われる。

ｌ）工程ｌ： この工程は出発物質である保護されたアミノ酸−樹脂を
、洗浄し、また樹脂を膨潤させるために行う工程であり
、そのために使用する溶媒の好適な例としては、塩化メ
チレン、クロロホルム、ジメチルホルムアミドまたはそ
れらの混合溶媒が挙げられる。

２）工程２： この工程は保護されたアミノ酸−樹脂におけるアミノ保
護基を脱離する工程であり、この工程の反応は、酸を用
いる法、塩基を用いる法等の様な常法のより行われる。

上記脱離方法の中では、酸を用いる方法が最も繁用され
るので以下酸油について説明する。

この反応は塩化メチレン、クロロホルム、酢酸、水等の
溶媒中において、トリフルオロ酢酸、蟻酸、ｐ−トルエ
ンスルホン酸、塩酸、臭酸等の無機酸又は有機酸の存在
下に、好ましくはエタンジチオールやアニソールを添加
して行われる。

上記例示の酸のうち、トリフルオロ酢酸及び蟻酸は溶媒
としても使用される。

この反応は通常、冷却（例えば−７８℃）乃至室温下に
行なわれる。

３）工程３： この工程は不純物の除去および樹脂の膨潤のために行う
工程であり、前記工程ｌと実質的に同様な方法により行
われる。

４）工程４： この工程は樹脂を収縮させて洗浄効果をあげるために行
われる工程であり、アミノ酸−樹脂をアルコール（メタ
ノ−ル、エタノール、プロパツール、２−プロパツール
、ブタノール等）、ジオキサン等で処理するのが好まし
い。

５）工程５： この工程は不純物の除去および樹脂の膨潤のために行う
工程であり、前記工程１と実質的に同様な方法により行
う。

６）工程６： この工程は前記の工程１〜５の処理により得られるアミ
ノ酸−樹脂におけるアミンがα−アミノ基における酸付
加塩として存在する場合に、脱塩のために行われる工程
であり、例えばトリエチルアミンのような塩基で処理す
ることにより行われる。

７）工程７： この工程は不純物の除去および樹脂の膨潤のために行う
工程であり、前記工程１と実質的に同様な方法により行
う。

８）工程８： この工程は各保護された構成アミノ酸をカップリングさ
せる工程であり、ジシクロへキシルカルボジイミドのよ
うな常用の縮合剤の存在下塩化メチレン、クロロホルム
、ジメチルホルムアミドのような溶媒中で行うこともで
き、また各保護された構成アミノ酸のカルボキシ基を、
常法により酸無水物、活性エステル等に活性化して、上
記溶媒中で反応を行うこともできる。

９）工程９： この工程は不純物の除去および樹脂の膨潤のために行う
工程であり、前記工程１と実質的に同様な方法により行
う。

１０）工程１０： この工程は樹脂を収縮させて洗浄効果をあげるために行
われる工程であり、前記工程４）と実質的に同様な方法
により行う。

１１）工程１工： この工程は樹脂の洗浄および膨潤のために行う工程であ
り、前記工程１と実質的に同様な方法により行う。

上記各工程は一般的には室温程度で行われ、各工程（た
だし工程８を除く）は２〜３回程度くり返し行うのが好
ましい。

（２）方法２について： この方法は化合物［Ｉｂ］および［ｌＩｂ１をそれぞれ
アミン保護基、カルボキシ保護基およびヒドロキシ保護
基の脱離反応に（（して、それぞれ化合物［ＩＣ］ｔ−
１よび［ＩＩ　ｃ］を得る方法である。

アミン保護基を脱離する方法は、前記方法（Ｉ）の工程
２と実質的に同様の方法および接触還元法、液体アンモ
ニア−アルカリ金属法、酸亜鉛法、ヒドラジン法等によ
り行なわれ、またカルボキシ保護基およびヒドロキシ保
護基の脱離は加水分解、還元等の常法によって行なわれ
る。

１）加水分解： 加水分解は酸又は塩基の存在下に行なうのが好ましい。

好適な酸としては、無機酸（例えば塩酸、臭化水素酸、
硫酸等）有機酸（例えば蟻酸、酢酸、トリフルオロ酢酸
、プロピオン酸、ベンゼンスルホン酸、Ｐ−トルエンス
ルホン酸等）、酸性イオン交換樹脂等が挙げられる。

又好適な塩基としては、アルカリ若しくはアルカリ土類
金属の水酸化物、炭酸塩若しくは重炭酸塩（例えば水酸
化ナトリウム、水酸化カリウム、炭酸ナトリウム、炭酸
カリウム、炭酸リチウム、炭酸水素ナトリウム、水酸化
カルシウム、水酸化マグネシウム等）、水酸化アンモニ
ウム等の無機塩基等が挙げられる。

加水分解は冷却若しくは加温の様な比較的穏やかな条件
で且つ反応に悪影響を及ぼさない溶媒［例えば水、アル
コール（例えばメタノール、エタノール、プロパツール
等）の様な親木性溶媒、アセトン、Ｎ、Ｎ−ジメチルホ
ルムアミド、テトラヒドロフラン、ジオキサン、ジメチ
ルスルホキシド等またはこれらの混合溶媒］中において
行われる。

２）還元： 化学還元及び接触還元法を含む還元方法は常法により行
なわれる。

化学還元に使用される好ましい還元剤としては、例えば
金属（例えば錫、亜鉛、鉄等）又は金属化合物（例えば
塩化クロム、酢酸クロム等）と有機若しくは無機酸（例
えば蟻酸、酢酸、プロピオン酸、トリフルオロ酢酸、Ｐ
−）ルエンスルホン酸、塩酸、臭化水素酸等）との組合
わせ等が挙げられる。

又接触還元に使用される好ましい触媒としては、白金触
媒（例えば白金板、白金スポンジ、白金黒、白金コロイ
ド、酸化白金、白金線等）、ハラジウム触媒（パラジウ
ムスポンジ、パラジウム黒、酸化パラジウム、パラジウ
ム炭素、パラジウムコロイド、パラジウム−硫酸バリウ
ム、パラジウム−炭酸バリウム等）、ニッケル触媒（還
元ニッケル、酸化ニッケル、ラネーニッケル等）、コバ
ルト触媒（例えば還元コ／＜ルト、ラネーコバルト等）
、鉄触ｆｉ（例えば還元鉄、ラネー鉄等）、銅触媒（例
えば還元銅、ラネー銅、ウルマン銅等）等が例示される
。還元は通常溶媒中で行なわれる。好ましい溶媒として
は、例えば水、アルコール（例えばメタノール、エタノ
ル、プロパツール等）、酢酸及び他の一般的有機溶媒若
しくはその混合物が用いられる。又、化学的還元におい
て使われた前述の液状酸も又溶媒として兼用できる。更
に接触還元に用いられる好ましい溶媒としては、上述の
もの以外に、ジエチルエーテル、ジオキサン、テトラヒ
ドロフラン等若しくはその混合物も使用される。

反応は冷却若しくは加温等の比較的穏やかな条件下に速
やかに行われる。

アミン保護基、カルボキシ保護基およびヒドロキシ保護
基の種類によっては、上記脱離反応によって同時に脱離
する場合もあるが、これらを積極的に同時に脱離させる
方法としては、例えばぶつ化水素、メタンスルホン酸、
トリフルオロメタンスルホン酸等の酩で処理する方法が
挙げられ、この反応はこれらの酸に影響をおよぼさない
通常の溶媒の存在下または非存在下に行うことができる
。

この方法はアニソール等の存在下反応を行うと好結果が
得られる場合が多い。また上記酸は溶媒としても兼用さ
れる。この反応は通常冷却〜０°Ｃ付近で行うのが好ま
い。

（３）方法３について： この方法は、化合物［工Ｃ］、ｔ−１よび［ＩＩｃコを
メルカプト保護基の脱離反応に付して対応するメルカプ
ト保護基の脱離した化合物［Ｉ　ｄ］および［ＩＩｄ］
を得る方法である。

この方法は、化合物［Ｉ　ｃ］または［ＩＩｃ］を酢酸
水銀、トリフルオロ酢酸水銀、酢酸銀等の金属塩、トリ
フェニルホスフィン、トリブチルホスフィン等の有機り
ん化合物、メルカプトエタノール、メルカプト酢酸、エ
タンジチオール、チオフェノール、ジチオスライトール
、ジチオエリスリトール等のアルキルまたはアリールチ
オール等の試薬で処理することによって、それぞれ対応
する化合物［Ｉｄ］または化合物［ＩＩｄ］または化合
物を得る方法である。

この反応は通常溶媒中で行われ、好ましい溶媒としては
例えば水、アルコール（例えばメタノール、エタノール
、プロパツール等）、ジオキサン、ジメチルホルムアミ
ド並びにこれらの混合溶媒等が挙げられる。

この反応は冷却〜加温程度の比較的穏やかな条件下で速
やかに行われる。

この発明の化合物［！］　　、［ｎｌには分子内不斉炭
素原子による１または２以上の異性体が含まれ、そのよ
うな異性体は全てこの発明の範囲に含まれる。

この発明のペプチド、すなわち化合物［■］　。

［ＩＩ］　および医薬として許容されるそれらの塩は前
記のようにＢ型肝炎ウィルス抗原の解析に有用であり、
またＢ型肝炎ワクチン用抗原組成物等としても有用であ
る。

この発明の医薬組成物は、たとえば固体、半固体または
液体形態の製剤の剤層で使用でき、これらの剤層はこの
発明の有効成分を、外用、経口または非経口投与に適し
た有機または無機担体または賦形剤と混和した状態で含
有している。有効成分は、たとえば錠剤、ペレット剤、
カプセル剤、半開、溶液剤、乳化剤、懸濁液その他の使
用に適した任意の剤層用の慣用の無毒な医薬に許容され
る担体と配合することができる。使用しうる担体は水、
グルコース、乳糖、アラビアゴム、ゼラチン、マンニッ
ト、スターチペースト、マクネシウムトリシリケート、
タルク、コーンスターチ、ケラチン、微粉（コロイド状
）シリカ、バレイショデンプン、尿素およびその他の固
体、半固体または液体形態の製剤を製造するのに適した
担体である。担体のほかに、補助薬、安定化剤、増粘剤
および着色剤、或いは香料などを使用してもよい。

医薬組成物はまたは有効成分の活性を保持する目的で防
御剤または制菌剤を含有してもよい、有効成分の化合物
は、治療法または病状に所期の治療効果を生ずるように
十分な量で医薬組成物中に存在させる。

この組成物を人に投与する場合、静脈内、筋肉内または
経口投与により投与するのが好ましい。

この発明の有効化合物の投与量または治療有効量は化合
物の種類ならびに治療を受ける各患者の年令および状態
によって異なるが、一般に大または動物の体重１ｋｇ当
り１日に約０．１〜１０００＋ａｇの有効成分を治療目
的に投与する。また１回の平均投与量としては約５０ｍ
ｇ、１００ｍｇ、２５０ｍｇおよび５００＋＊ｇが用い
られる。

次にこの発明の実施例を示すが、各実施例における各ア
ミノ酸はＬ体をさすものとする。

実施例１−１ Ｎ−ｔ−ブトキシカルボニル−０−ベンジルセリン樹脂
（２，１５ｇ）　　［セリン含有量：　０．８２ｍモル
／ｇ、スチレンー１％ジビニルベンゼン共重合体コを出
発原料とし、第１表に示す固相法スケジュールに従いペ
プチド結合形成反応に付した０反応に供したアミノ酸の
反応順序はＳｅｒ、Ｐｒｏ、Ｉｌｅ。

Ｐｒｏ　、　Ｉ　Ｉｅ　、Ｃｙｓ　、Ｔｈｒ　、Ｃｙｓ
　、Ａｓｎ　、Ｇ　ｌｙ　、Ａｓｐ　、Ｓｅｒ　、Ｐｒ
ｏ　、Ｌｙｓ　。

Ｔｈｒであり、第１表のスケジュールを１５サイクルく
り返すことにより１６個のアミノ酸残基を有するペプチ
ドを合成した。なお、これらのアミノ酸のα−アミノ基
はｔ−ブトキシカルボニル基で、その他の側鎖官能基た
ついては、Ｓｅｒ、Ｔｈｒはベノジル基で、Ｃｙｓはア
セトアミドメチル基で、Ａｓｐはシクロヘキシルエステ
ルで、Ｌｙｓは２−クロロベンジルオキシカルボニル基
でそれぞれ保護しておいた。

第　　　１　　　表 即ち第１表の第１−１１工程に示す手順に従って出発原
料（又は出発原料のＮ−末端アミノ基にアミノ酸をカッ
プリングさせることによってペプチド鎖を延長させてい
って得られる中間物質）に、同表の溶媒及び試薬を順次
作用させることによってペプチド鎖を延長していった。

尚同手順のうち第８工程に当るカップリング反応は一般
的には塩化メチレン溶液中で行なったが、Ｓ−アセトア
ミドメチル基で保護されたＣｙｓを反応させるときだけ
は、塩化メチレンとジメチルホルムアミドの（２：　ｌ
）混合液を用いた。また、Ａｓｎのカップリング反応に
当ってはＮ−ｔ−ブトキシカルボニルアスパラキンをＮ
−ヒドロキシベンゾトリアゾール（ｌ：１当量）とジシ
クロへキシルカルボジイミド（１当量）のジメチルホル
ムアミド−塩化メチレン（１：　１）混合液に加え、Ｏ
’Ｃで１ｅ分間攪拌することによって活性化した上で第
８工程に使用した。第７番目以降のアミノ酸を導入する
（ｃｙｓを用いる第１番目の反応の終了後）に当っては
、表に示した第２工程は、塩化メチレン−トリフルオロ
酢酸混合液中に５容量％のエタンジチオールを添加して
行なった。又更にＡｓｐをカップリング反応させた後第
１２番目以降のアミノ酸を導入するに当っては第６エ程
の中和は、トリエチルアミンの水冷溶液を用いて行ない
、且つ処理時間も１．５分に短縮した。

各カップリング反応が完遂されたか否かの検査は、カイ
ザーのニンヒドリンテストによった。そしてカップリン
グが不十分であることが検知されたときは、第１表にお
ける第８．９，１０．１１及びｌの各工程を、この記載
順に従って繰り返した。実験では、Ｃｙｓ　　（第６番
目）　、Ｇｌｎ、Ａｓｐ、Ｓｅｒのカップリング反応に
ついて夫々前述の繰り返し処理を行なった。一番数後の
Ｔｈｒをカップリングし終えた段階で、得られた樹脂状
物をメタノールで洗浄し更に減圧下に乾燥を行なったと
ころ、次式で示されるペプチド樹脂（１−１）　（５，
４３８ｇ　）を得ることができた。

Ｂｏ　ｃ−Ｔｈ　ｒ　（Ｂｚ　ｌ　）−（ＣＩ−Ｚ）−
Ｐｒｏ−Ｓｅ　ｒ　（Ｂｚ　ｌ　）−Ａｓｐ（ＯｃＨｅ
　ｘ）　−Ｇ　ｌ　ｙ−Ａｓｒ＋−Ｃ：ｙｓ　（Ａｃｍ
）−Ｔｈｒ（Ｂｚ　ｌ）−Ｃ７ｓ（Ａｃｍ）　−Ｉ　１
ｅ−Ｐｒｏ−Ｉｌｅ−Ｐｒｏ−９ｅｔ（Ｂｚｌ）−３ｅ
ｒ（Ｂｚｌ）−樹脂このうち１．３８ｇをとり出して固
相法反応装置に入れ、同様に処理することによりさらに
（４ｓ　、Ｃｙｓ　。

ＣｙｓおよびＳｅｒをカップリングさせて次式で示され
るペプチド樹脂１．６７７ｇを得た。

Ｂｏｃ−３ｅｒ（Ｂｚｌ）−Ｃｙｓ（Ａｃｍ）−ｆ：ｙ
ｓ（Ａｃｍ）−Ｃｙｓ（Ａｃｍ）−Ｔｈ　ｒ　（Ｂｚ　
１）−Ｌ　ｙｓ　（ＣＩ−Ｚ）−Ｐ　ｒｏ−５ｅ　ｔ　
（Ｂｚ　１）−Ａｓｐ　（ＯｃＨｅｘ　）−Ｇｌｙ−Ａ
ｓｎ−Ｃ７ｓ　（Ａｃｍ）−Ｔｈｒ　（Ｂｚ　１）−Ｃ
ｙｓ　（Ａｃ１１）　−Ｉｌｅ−Ｐｒｏ−Ｉｌｅ−Ｐｒ
ｏ−Ｓｅｒ（Ｂｚｌ）−３ｅｒ（Ｂｚｌ）−樹脂実施例
１−２ 上記で得たペプチド樹脂（１−１）　（１，６２ｇ）を
アニソール（３，０ｍ１）の存在下ぶつ化水素（４０ｍ
ｌ）中、−５〜−０℃で１時間攪拌した。その後同温度
で２時間、および室温で１時間要してぶつ化水素を減圧
留去した。残留物に０．７Ｎ酢酸を加え、水冷下に１時
間攪拌した。樹脂状物を濾去しエーテルで濾液を洗浄し
た後、ダウエックス１×２（酢酸型、１５０■ｌ）のカ
ラムに通し、凍結乾燥すると粗製のＨ−Ｓｅｒ−Ｃｙｓ
（Ａｃｍ）−Ｃニアｓ（Ａｃｍ）−Ｃｙｓ（Ａｃｓ＋）
−Ｔｈｒ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｇｌｙ−
Ａｓｎ−Ｃｙｓ（Ａｃｍ）−Ｔｈｒ−Ｃｙｓ（Ａｃｍ）
−Ｉｌｅ−Ｐｒｏ−Ｉｌｅ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−
ＯＨ（７００ｍｇ）が得られた［出発物質ＣＩ）からみ
た収率％］。

この粗製品（１２５＋ａｇ）を、セミ分取、マイクｏホ
ｙタハｙ　’ｙ　ｃ１１３　（７，８ｍｍＸ　３００ｍ
ｍ）　　（ウォーターズ社製）カラムより、０．１％水
性トリフルオロ酢酸−アセトニトリル（７５：２５）を
用い２．５　ｍ１７分の流速で溶出を行い、８回に分け
て分取を行い、保持時間が５〜８分の画分を集めて凍結
乾燥すると、上記ペプチドの精製品（１０９ｍｇ）が得
られた。

高速液体クロマトグラフィー カラム：ヌクレオジル１ＯｃＩＢ　（２５０Ｘ　４　ａ
ｍ）保持時ＩＪ７　：　２１．４分 溶出液：０．１％トリフルオロ酢酢 酸アセトニトリル直線度勾配 置％→５０％（３０分間） 流　速：　１．０　＋ａｌ／分 検　出：　ＵＶ　２１０　ｎ＋＊ 実施例２ 実施例１−２で得たＨ−Ｓｅｒ−Ｃｙｓ（Ａｃｍ）−Ｃ
ｙｓ（Ａｃｍ）−Ｃｙｓ（Ａｃ＋＊）−Ｔｈｒ−Ｌｙｓ
−Ｐｒｏ−３ｅｒ−Ａｓｐ−Ｇｌｙ−Ａｓｎ−Ｃｙｓ（
Ａｃｍ）−Ｔｈｒ−Ｃｙｓ（Ａｃ＋１）−Ｉｌｅ−Ｐｒ
ｏ−Ｉｌｅ−Ｐｒｏ−９ａｒ−Ｓｅｒ−ＯＲ（１００ｍ
ｇ　）を０．１％の酢酸（３０１）に加えた後、窒素雰
囲気下で酢酸第二水銀（１０ｍｇ）の水（５１）溶液を
加え、反応混合物を室温で３時間攪拌した。次いでメル
カプトエタノール（Ｅｌ、５８ｇ）を加え、−夜静かに
攪拌した０反応液を１０ｍ１まで濃縮し、析出物を濾去
した。これをセファデックスＧ２５のカラム（３，２ｃ
ｍＸ　１１５　ｃｍ）に吸着させた後、０．１％酢酸で
溶出した。主画分（３５５ｍｌ−４２０ｍｌ）を集めて
凍結乾燥すると、Ｈ−Ｓｅ　ｒ−Ｃｙ　ｓ−Ｃ：ｙｓ−
ｆｌｌニア５−Ｔｈｒ−Ｌｙｓ−Ｐ　ｒｏ−Ｓｅ　ｒ−
Ａｓｐ−Ｇ　ｌ　１−Ａｓｎ　−Ｇｙｓ−Ｔｈｒ−Ｃｙ
ｓ−Ｉｌｅ−Ｐｒｏ−Ｉｌｅ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ
−ＯＨ（Ｅ１４ｍｇ）が得られた。エルマンズ試薬（５
，５−ジチオビス−２−二トロ安息香酸）により１分子
中に５つのチオール基が存在することを確認した。

（１）酸による加水分解物（６Ｎ塩酸で１１０℃、２４
時間の処理物）のアミノ酸分析：Ａｓｐ：１．８９５　
　　　Ｔｈｒ：１．３ｔｔ？Ｓｅｒ：３．０２７　　　
　　　Ｇｌｙ：１．０００Ｌｙｓ：０．９２５　　　　
　Ｐｒｏ：２．７２８Ｉｌｅ：１．７７５ （２）薄層クロマトグラフィー Ｒｆ　＝０．４４　（テーリング） ［セルロース・メルクＮｏ　、　５５５２、ｎ−ブタノ
ール−酢酸−水−ピリジン（１５：３：１２：１０）ニ
ンヒドリンにより検出］（３）高速液体りけマドグラフ
ィー 保持時間：　１２．０分 カラム：ヌクレオジルｌＯＣ１８ （Ｍａｃｈｅｙ１０Ｃｌ８（：２５０　Ｘ　４＋ａｍ）
溶出液：水とアセトニトリル（８０：　２０）に０．１
％の割合でトリフルオロ酢酸 を加えた混合液 流　速：　１．０　＋ｎｌ／分 検　　出：　ＵＶ　　２１０　　ｎｍ 実施例３−１ １％架橋をもつスチレン−ジビニルベンゼン共重合体に
Ｎ−ｔ−ブトキシカルボニル−５−アセトアミドメチル
システィンをエステル結合で導入したＮ−ｔ−ブトキシ
カルボニル−５−７セトアミドメチルシステイン樹脂（
４，０ｇ）　　（１，９２ｍモル）［システィン含有量
：　Ｑ、４８ｍモル／ｇｌ　を固相法反応装置に入れ、
第２表に示す固相法合成法のスケジュールに従い順次ペ
プチド鎖を延長した。反応に供したアミノ酸の反応順序
はＴｙｓ　、Ｌｅｕ　。

Ｌｅｕ　、　Ｔｙｒ　、Ｓｅｒ、Ｓｅｒ、Ｐｒｏ、　Ｉ
　Ｉｅ、Ｐｒｏ、　Ｉ　ｉｅ、ＣｙＳ、Ｔｈｒ　、Ｃｙ
ｓ　。

Ａｓｎ、Ｇｌｙ、Ａｓｐ、Ｓｅｒ、Ｐｒｏ、Ｌｙｓ、Ｔ
ｈｒ　テあり、第２表のスケジュールを２０サイクルく
り返すことにより２１個のアミノ酸残基を有するペプチ
ドを合成した。なおこれらのアミノ酸のα−アミノ基は
１−ブトキシカルボニル基で、その他の側鎖官能基につ
いては、Ｓｅｒ、Ｔｈｒはベンジル基で、Ｃｙｓはアセ
トアミドメチル基で、Ａｓｐはシクロヘキシルエステル
で、Ｌｙｓは２−クロロベンジルオキシカルボニル基で
、Ｔｙｒはジクロロベンジル基でそれぞれ第２表 保護アミノ酸としては、Ｂｏｃ−Ｔｙｒ（ＣＩ２　Ｂｚ
ｌ）−０Ｈ。

Ｂｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｂｏｃ−３ｅ　ｒ（Ｂｚ　Ｉ　
）−ＯＨ、Ｂｏｃ−Ｃｒｙｓ　（Ａｃｍ）　−ＯＨ。

Ｂｏｃ−Ｔｈｒ（Ｂｚｌ）−０Ｈ，Ｂｏｃ−Ａｓｐ（Ｏ
ｃＨｅｘ）−０Ｈ，Ｂｏｃ−Ｌｙｓ（ＣＩ−Ｚ）−０Ｈ
を用いた。工程８の縮合反応は、これらの保護アミノ酸
およびジシクロへキシルカルボジイミドをそれぞれ３当
量用い、塩化メチレン中で行った。ただし、アスパラギ
ン以降はそれぞれ４当量を用いた。また、Ｂｏｃ−Ｃ：
ｙｓ（Ａｃｍ、）　ＪＨの縮合反応はジメチルホルムア
ミド−塩化メチレン（１：２）の混合溶液を用いた。Ｂ
ｏＣ−Ａｓｎ−ＣＩ）ｌの縮合反応はｌ−ヒドロキシベ
ンゾトリアゾール（等モル）の存在下ジメチルホルムア
ミド−塩化メチレン（１：　１）の混合溶液中で反応を
行った。すべてのアミノ酸の縮合反応終了後得られた樹
脂を、塩化メチレンにて洗浄し次式で示す保護ペプチド
樹脂１１．２０ｇを得た（理論増量の１１７χ）。

Ｂｏｃ−Ｔｈｒ（Ｂｚｌ）−Ｌｙｇ（ＣＩ−Ｚ）−Ｐｒ
ｏ−３ｅｒ（Ｂｚｌ）−Ａｓｐ（ＯｃＨｅｘ）−Ｇ１７
−Ａｓｎ−Ｃｙｓ（Ａｃｍ）−Ｔｈｒ（Ｂｚｌ）−Ｃｙ
ｓ（Ａｃｍ）−Ｉｌｅ−Ｐｒｏ−Ｉ　１ｅ−Ｐｒｏ−Ｓ
ｅｒ（Ｂｚｌ）−５ｅｔ（Ｂｚｌ）−Ｔｙｒ（Ｃ１２Ｂ
ｚｌ）−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｔｙｒ（Ｃ１２Ｂｚｌ）−Ｃ
ｙｓ（Ａｃ＋ｓ）−樹脂 プロピオノ耐−塩酩（１：Ｉ）　　１１０℃２４ｈｒ、
２％フェノール存在下の加水分解物のアミノ酸分析伯［
（）内は理論値］。

Ａｓｐ：１．９９８（２）　　　　Ｔｈｒ：１．０８１
（２）Ｓｅｒ：１．５１０（３）Ｇｌｙ：０．１１１８
５（１）Ｉｌｅ：１．８１８（２）　　　　Ｌｅｕ：１
．５７４（２）Ｔｙｒ：１．５１９（２）　　　　Ｌｙ
ｓ：１．０ＧＰｒｏ：３．０８７（３）　　　　（Ｌｙ
ｓ　０．１５１３ＩＬモル／　ｍｇ）実施例３−２ 実施例３−１で得た保護ペプチド樹脂ＣＩ）５．５２ｇ
を固相反応器に入れ、実施例３−１の反応と同様にして
さらにペプチド鎖を延長した。ただし、各縮合反応時に
おける保護アミノ酸はＢｏｃ−Ｃｙｓ（Ａｃｍ）−０Ｈ
を３度、Ｂｏｃ−Ｓｅｒ（Ｂｚｌ）−０Ｈを１度とし、
夫々４倍モル用いた。　Ｂｏｃ−Ｃｙｓ（Ａｃｔ）−Ｏ
Ｈの縮合時には、塩化メチレン−ジメチルホルムアミド
（’２：ｌ）＋７）混合溶媒を用い、ＢｏＣ−Ｓｅｒ（
Ｂｚｌ）−０）１の縮合時は塩化メチレンのみで反応を
行った。

Ｃｐｓ（Ａｃｍ）６縮合反応後、カイザーの方法による
ニンヒドリンテストを行ったところ結果は陽性であった
ため、縮合反応をくりかえした。最後の縮合反応の完了
後、樹脂を塩化メチレンで洗い減圧下乾燥し８．０９　
ｇのＢｏｃ−３ｅｒ（Ｂｚｌ）−Ｃｙｓ（Ａｃｍ）−Ｃ
ｙｓ（Ａｃｔ）−Ｉｌｌ：ｙｓ（Ａｃｊｉ）−Ｔｈｒ（
ＢｚＩ）−Ｌｙｓ（ＣＩ−Ｚ）−Ｐｒｏ−３ｅｔ（Ｂｚ
　Ｉ　）−Ａｓｐ（ＯｃＨｅｙ）−Ｇｌｙ−Ａｓｎ−Ｃ
ｙｓ　（ＡＣＷ）−Ｔｈｒ　（Ｂｚ　ｌ　）−Ｃｙｓ　
（Ａｃｍ）　−Ｉｌｅ−Ｐｒｏ−Ｉｌｅ−Ｐｒｏ−５ｅ
ｔ　（Ｂｚ　Ｉ　）−５ｅｔ　（Ｂｚ　Ｉ　）−Ｔｙｒ
（Ｃ１２Ｂｚｌ）−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｔｙｒ（Ｃ１２Ｂ
ｚｌ）−Ｃｙｓ（Ａｃｍ）−樹脂を得た。

加水分解物（ｃｏｎｃ、ＨＣＩ　：プロピオン酸＝１：
１．２％フェノール、１１０℃　２４ｈｒ）ノアミノ酸
分析値［（）内は理論値］。

＾ｇｐ：２．０ｆ３Ｂ（２）　　　　Ｔｈｒ：１．１３
０（２）Ｓｅｒ：１．８１Ｂ（４）　　　　Ｇｌｙ：１
．０１５１：１）Ｉｌｅ：１．６４Ｂ（２）　　　　Ｌ
ｅｕ：１．５８８（２）Ｔｙｒ：１．５４０（２）　　
、　　Ｌｒｓ：１．００（Ｊ）Ｐｒｏ：３．４８８（３
） ［Ｌｙｓ　０．１８１ｐＬモル／ｍｇ（理論値の１ｏ３
＄）　］実施例３−３ 実施例３−２で得た保護ペプチド樹脂４．１８ｇにアニ
ソール７．０鳳ｌ及び無水フッ化水素５０履ｌを加え、
水塩の冷却下（０℃以下）１時間処理する。

０℃で減圧下にフッ化水素を除去したのち（約２時間を
要す）、ＩＮ−酢酸１００　ｍｌおよびエーテル１００
　＋＊ｌを加えて水冷下撹拌して抽出する。グラスフィ
ルターにて樹脂を濾去したのち、エマルジョン状態の濾
液に酢酸３０１及びエーテル１００１を加えて分液し、
下層をダウエックスＩ　Ｘ　２　（ｏＡｃ−型）のカラ
ム（３００Ｉ＊１）に通す、溶出液のニンヒドリン陽性
の部分を集めて凍結乾燥する。得られた粗生成物をセフ
ァデックスＬＨ−２０（ＩＮ−酢酸にて溶出）に付しニ
ンヒドリン陽性の主分画より１．０　ｇのペプチドを得
た０本品はＨ−Ｓｅｒ−（ｙｓ（Ａｃｍ）−Ｃｙｓ（Ａ
ｃ鳳）−Ｃｙｓ（Ａｃｍ）−Ｔｈｒ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−
Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｇｌｙ−Ａｓｎ−Ｃｙｓ（Ａｃｍ）−
Ｔｈｒ−Ｃｙｓ（Ａｃｍ）−Ｉｌｅ−Ｐｒｏ−Ｉｌｅ−
Ｐｒ　ｏ−Ｓｅ　ｒ−５ｅ　ｒ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ｌｅ
ｕ−Ｔｙｒ−Ｃ２ｓ　（Ａｃｔ）　−ＯＨである（収率
はＢａａ−（４ｓ（Ａｃｔ）−樹脂より計算して５０．
７％）、セファデックスＬＨ−２０によって精製した上
記ペプチド１．０　ｇを、ワットマンのカルボキシメチ
ルセルロースＣＭ−５２（３，２Ｘ６０ｃｍ、　０．１
　Ｍ　−ｐＨ５，４ピリジン−酢触緩衝液で緩衝化）に
付し、同緩衝液０．１Ｍ〜０．４　Ｍ　（各１００１０
０Ｏの直線濃度勾配によって溶出し、各１０ｇずつ分画
する。３０〜４０番目のフラクションより８ＱＱ　ｍｇ
の精製ペプチドを得た。

加水分解物（ＩＮ−ＨＣＩ　　、　２％フェノール１１
０”ｃ　　２４ｈｒ）のアミノ酸分析［（）内は理論値
］。

Ａｓｐ：１．８５５（２）　　　　Ｔｈｒ：１．３３ｅ
（２）Ｓｅｒ：３．０３２（４）　　　　Ｇｌｙ：１．
００Ｂ（１）Ｉｌｅ：１．８２１３（２）　　　　Ｌｅ
ｕ：１．８９７（２）Ｔｙｒ：１．８Ｅ１１（２）　　
　　Ｌｙｓ：１．０００（１）Ｐｒｏ：２．８０３（３
） ［Ｌｙｓ　Ｏ，３３９ルモル／鵬ｇ（理論値の７８．８
％）］実施例３−４ 実施例３−３で得た精製ペプチド２９０１ｇ７２．８１
の水溶液を１５０〜１８０ＪＬＭずつ分けてウォーター
ズアソシエート社のセミ分取カラム：ミクロンボンダパ
ックｃ１ｇ　（７，８Ｘ２Ｏ３腸層）に付し、Ｌ１％ト
リフルオロ酢酸、Ｈ２Ｏ−アセトニトリル（８３：　３
７）　２．２　ｍｌ／ｓｉｎの条件下で分画し、目的物
を含む溶出液を濃縮乾燥し２２８　ｍｇ　（７８，８％
回収）の精製ペプチドを得た。

加水分解物（ＥＩＮ−ＨＣ：ｌ　　１１０℃　２４ｈｒ
）　（２−８８ｍｇ）のアミノ酸分析値［（）内は理論
値］。

Ａｓｐ：２．２Ｂ（２）　　　　Ｔｈｒ：２−０１（２
）Ｓｅｒ：４．５２（４）　　　　Ｐｒｏ＝３−２７（
３）Ｇｌｙ：１．２０（１）　　　　Ｉｌｅ：２．０３
（２）Ｌｅｕ：２．００（２）　　　　Ｌｙｓ：１．０
９（１）Ｔｙｒ：０．４８（２）　　　　ＮＨ３：　５
．３４（１）［Ｌｙｓ　　１．３８ＪＬモル／鳳ｇ（理
論値の７２．８％）］実施例４ 実施例３−４により精製したペプチド２０．３ｍｇ（８
，６８ｐモル）を０．１％酢酸５１に溶解し、酢酸第２
水銀３８．３■ｇ　（０，１２＃Ｌモル、１８出量）を
２鳳ｌの０．１％酢酸に溶解したものを、室温下、窒素
気流中で加え、３時間反応させる。２−メルカプトエタ
ノール１．４鳳ｌを加えて終夜窒素雰囲気下に放置し、
同溶液を３鳳ｌまで濃縮した。析出物を、綿栓をつめた
バストウールヒヘット（コーニング社）にて濾過する。

濾液をセファデックスＧ−２５（２，２Ｘ４４ｃ膳）に
付し、０．１％酢酸で溶出し、３．５ｇずつ分画する。

２８Ｏｎ腸にて各フラクションをチェックし、２４〜３
４番目のフラクションを集める。一部（０，８■１）を
とりエールマンの方法にてチオール基を定量したが理論
値の８４．４％を得た０次いで凍結乾燥して１４．８ｍ
ｇ　（８４，９％）を得た０本品の化学式はＨ−Ｓｅｒ
−Ｃｙｓ−（ｙｓ−［ｙｓ−Ｔｈ　ｒ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ
−３ｅ　ｔ−Ａｓｐ−Ｇ　ｌ　１−Ａｓｎ−Ｃ１ｓ−Ｔ
ｂ　ｒ−Ｃ１ｓ−Ｉ　ｌｅ　−Ｐｒｏ−Ｉｌｅ−Ｐｒｏ
−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−τｙｒ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｔｙｒ−
Ｃ７ｇ−ＯＨである。

上記実施例によって得た各ペプチドを合わせて次の定量
分析に付した。

１）過ギ酸酸化後の加水分解−アミノ酸分析３．１ｆｇ
をとり、０．５菖ｌの３０％過酸化水素水と１０ｍ１の
ギ酸を混合後２．５時間経た溶液２１を加え、−５℃で
２時間反応する。４８％臭化水素酸５滴を加、えたのち
、エバポレータで濃縮、乾燥し残渣を８Ｎ−ＨＣｌ　２
鳳ｌに溶解し、１１０℃で２４時間加水分解する［（）
内は理論値］。

Ａｓｐ：１．８８（２）　　　　Ｔｈｒ：１．９Ｂ（２
）Ｓｅｒ：３．３８（４）　　　　Ｐｒｏ：２．７２（
３）Ｇｌｙ：１．００（１）　　　　Ｉｌｅ：１．６ｉ
１１（２）Ｌｅｕ：１．６４（’２）　　　　Ｌｙｓ：
０．１３８（１）Ｃｙｓ０３Ｈ：ｅ、０９（８）　　Ｔ
ｙｒ：　Ｏ（２）　（Ｂｒ化の為消失か）［Ｇｌｙ　　
ｔ、ｇ８＃Ｌモル／ｍｇ　（８９，２％回収）］２）通
常の加水分解 １．０４ｏ＋ｇをとり、０Ｎ−ＨＣＩ　１．２＋ｗｌ　
、　２％フェノール中で１１０℃、２４時間の加水分解
を行なった［（）内は理論値］。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 Ｈ−Ｓｅｒ−Ｃｙｓ（Ｒ＾４）−Ｃｙｓ（Ｒ＾４）−Ｃ
   ｙｓ（Ｒ＾４）−Ｔｈｒ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ａ
   ｓｐ−Ｇｌｙ−Ａｓｎ−Ｃｙｓ（Ｒ＾４）−Ｔｈｒ−Ｃ
   ｙｓ（Ｒ＾４）−Ｉｌｅ−Ｐｒｏ−Ｉｌｅ−Ｐｒｏ−Ｓ
   ｅｒ−Ｓｅｒ−ＯＨおよび Ｈ−Ｓｅｒ−Ｃｙｓ（Ｒ＾４）−Ｃｙｓ（Ｒ＾４）−Ｃ
   ｙｓ（Ｒ＾４）−Ｔｈｒ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ａ
   ｓｐ−Ｇｌｙ−Ａｓｎ−Ｃｙｓ（Ｒ＾４）−Ｔｈｒ−Ｃ
   ｙｓ（Ｒ＾４）−Ｉｌｅ−Ｐｒｏ−Ｉｌｅ−Ｐｒｏ−Ｓ
   ｅｒ−Ｓｅｒ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｔｙｒ−Ｃｙ
   ｓ（Ｒ＾４）−ＯＨ （但し上記各式においてＲ＾４は水素またはメルカプト
   保護基を意味する） から選らばれるペプチド化合物又は医薬として許容され
   るそれらの塩。