JPS60180587A - Ｐｖａゲルによる多孔性固定化酵素含有物の製造法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明ハ、ポリビニルアルコール（ＰＶＡ）ダルによる
強固な多孔性固定化酵素または菌体の製造法に関する。

近年、微生物あるいはこれによシ産生される酵素の利用
に関する技術が著しく進歩すると共に、酵素反応を有効
に利用するために酵素−またけ菌体の固定化法が数多く
提案され、多くの発明がなされているが、工業化に成功
した技術は極く僅かである。その理由としては、生産物
の夷造コストの問題の他に、酵素または菌体を同定化す
る際、過激な条件を必要とするとか、多官能性試薬を匣
用することなどにょシ固定化した酵素または菌体の酵素
活性が低下する生物活性発現に問題があること、得られ
た固定化酵素または菌体の強度が低いため工業的忙耐え
られなかったシ、あるいは基−質の液圧にょ勺変形して
目詰シを起したシして、固定化酵素または菌体の物理的
耐久性に問題があること、有害なモノマー、架橋化試薬
などを固定化に用いるため、固定化酵素または菌体ある
いけ生成物の安全性についての問題があるなど、種々の
欠点によるものであった。

従来、ＰｖＡを用いる酵素または菌体の固定化法として
は、種々の方法が知られている。例えば ■　ＰＶＡと酵素とを溶解した水溶液を低温ダル化させ
ることによる酵素の固定化法が提案されている（特開昭
５０−５２２７６号公報）。

この方法によシ得られるダルは弾性を示さず、機械的な
強度は極めて低い。また、同化、融解後に風乾する場合
は、軟弱なものしか得られず、さらにまた、風乾する代
フに減圧脱水を試みても、たとえ長時間を費し脱水して
も殆んど弾性を示さない脆いケ８ルしか得られるに過ぎ
ず、工業的に利用可能な方法とは言えない。

■　酵素または菌体とＰＶＡ水溶液にホウ酸またはホク
砂の水溶液を加えて即座にｒル化させることによる酵素
または菌体を固定化する方法が提案されている（特公昭
５５−５１５５２号公報、特開昭５４−１３５２９３号
公報）が、この方法で得られるダルは軟弱で、成型し難
い。

■　ＰＶＡ、テトラエチルシリケートおよび菌体を含む
懸濁液に酸を加え風乾することによる固定化法も提案さ
れている（特公昭５５−１１３１１号公報）が、やはシ
この膜も軟弱である。この場合、１稜を加えた後、凍結
、乾燥しても、生成する膜の機械的強度はかえって低下
し、殆んど成型不能であった。

■　ＰＶＡ水溶液と生菌体と粘土鉱物の３者を含む懸濁
水溶液を一６〜＋４０℃で乾燥させて所定含水率に達す
るまで脱水することにょシ生成するダル中に生菌体を固
定化する方法が提案されている（特開昭５７−　ｉ　３
８３９０号公報）が、得られた固定化菌体はまだ軟弱で
脆く、工業的に利用可能な強朋にまで達していない。し
かも多量の粘土鉱物を含有するため、体４１当シの菌体
活性が低下し、それだけ酵素反応における反応容器の体
積が著しく増大するという欠点があった。

■　ＰＶＡ水溶液と生菌体と粘土鉱物の３者を含む懸濁
水溶液を凍結、成型後、融痔させることなく真空乾燥、
いわゆる凍結乾燥することによシ生成するグル中に菌体
を固定化する方法が提案されている（特開昭５７−１４
１２９１号、開閉５７−１９８０８８号公報）。

同様に、ＰＶＡ水溶液と生菌体とを含む懸濁水溶液を凍
結、成型後、融解させることなく生成するグル中に菌体
を固定化する方法が提案されている（特開昭５７−１４
１２９２号、同１１ｇ５７−１９８０８８号公報）。こ
れらの固定化菌体は比較的強固であり、高い生物活性発
現を有するが、体積の大きなものしか得られず多量の粘
土鉱物を含有させると、さらに体積が増加するため、単
位体積当シの菌体活性が低下するだけでなく、酵素反応
に利用する場合の体積が著しく増大するという欠点があ
った。また上記の方法では微細孔を有する板状鋳型内で
凍結、成型し、次いで融解させることなく真空乾燥して
板状の成型グルを得ているが、凍結、成型した段階では
、細粒化しようとすれば解凍してしまうために、細粒化
できないという欠点があった。さらに大量の水分を凍結
乾燥によシ脱水するだめに、凍結乾燥にともなう設備費
およびエネルギー費（脱水動力費）の負担が大きくなる
という欠点があった。

本発明者らは、か＼る従来技術の欠点を解消すべく種々
研究した結果、ＰＶＡ水溶液と酵素ｌ夜、菌体または菌
体懸濁〆夜を均一に混合し、その混合物を任意の形状の
容器内で該混合物の脱水率が５０％以上になるまで自然
乾燥まだは通風乾燥することによってＰＶＡを半乾燥グ
ル化させ、このグル化によシ該混合物が成型され、その
成形物を水に浸漬して均一に水分を含有させ、次いで一
６℃以下の温度で凍結し、そして融解することなく真空
乾燥して得られた固定化酵素または菌体は、多孔性で且
つ通水性に優れ、しかも極めて機械的強度が高いにもか
＼わらず、前記■の公知方法で得られる固定化菌体よシ
極めて体積が小さく、単位酵素活性当シの体積即ち比体
積が小さいものが得られることを知った。

また、一般に、ＰＶＡ水溶液と酵素または菌体との混合
物の成型は、ＰｖＡグルリ形成後に行う方法とＰ’ＶＡ
グルの形成前に任意形状の容器または成型用鋳型に注入
して行う凍結成型法とがある。ＰＶＡグルの形成後に行
う方法は、形成したｒルが粘着性を有し、任意の成型体
を得るのが困難の上、工業的に満足すべき強度を有する
固定化酵素または菌体を得ることが不可能であった（前
項の■ないし■）。またＰＶＡグルの形成前に行う方法
は、ＰＶＡ水溶液と生菌体との混合液を任意の形状の容
器または成形用鋳型に注入後、凍結し、凍結乾燥するた
めに一多大な設置＋７Ｌｉ＋ｔとエネルギー費を必要と
なる上、酵素反応ノ；工業的に１吏用されるような１〜
３朋の径を有する粒状の固定化菌体を得ることは困難で
あった。しかしながら、本発明においては、半乾燥グル
化によシ得られた成型物は適度な強度と弾力とを有し、
且つ粘着性がないため、凍結前に自由に、別粒化するこ
とができ、前記■の成型方法よシも成型が容易であるこ
とを知った。

さらにまた、ＰＶＡ水溶液と酵素または菌体との混合物
をグル化成型のために元の水分量を５０チまたはそれ以
下にまで予じめ自然乾燥または通風乾燥によシ脱水され
るため、それ以降の凍結乾燥における設備費およびエネ
ルギー費（脱水動力費）が前記■の公知方法よシ太巾に
軽減されることを知った。

本発明は、上記の知見に基いて完成されたものであシ、
けん化度が９５モルチ以上で、平均重合度が１０００以
上のＰＶＡの水溶液と酵素含有物とを混合し、その混合
物を任意の形状の容器に注入し、脱水率５０％以上まで
脱水してグル化成型し、得られた成型物を水との接触に
よ＃）浸漬物を得、これを−６℃以下の湛度で凍結した
後、得られた凍結物を融解することなく真壁乾燥するこ
とを特徴とする強固な多孔性固定化酵素含有物の製造法
であって、その目的とするところは、工業的な使用に耐
え得る機械的強度の高い固定化酵素または菌体の製造法
を提供することにあシ、また多孔性で通水性に優れ、公
知の凍結、成型、凍結乾燥法の固定化菌体よシ体積が著
しく小さく、酵素反応に用いる反応触媒として有利な固
定化酵素または菌体の製造法を提供することにあシ、さ
らにまたＰＶＡ水溶液を酵素または菌体の混合物を乾燥
グル化によシ成型した段階で、その成型物を自由に細粒
化することのできる固定化酵素または菌体の製造法を提
供することにあシ、その上、凍結乾燥における設備費お
よびエネルギー費（脱水動力費）が公知の凍結、成型、
凍結乾燥法より大巾に低減される固定化酵素または菌体
の製造法を提供することにある。

本発明に用いるＰＶＡは、そのけん化度は９５モルチ以
上、好ましくは９７モルチ以上のものが使用される。こ
れよシ低いけん化度、例えば８５モルチ以下では、軟弱
な固定化酵素含有物が得られるに過ぎない。重合要は粘
度平均で１０００以上、好ましくＶ′１１５００以上の
ものが使用される。ＰＶＡの重合度が低下すると共に、
得られる同定化酵素含有物の機械的強度も低下するため
、通常市販されている重合度１７００〜２６００程度の
高重合度品を用いるのが良い。

本発明では、先ずＰＶＡ水溶液が調製されるのであるが
、濃度としては５〜３０ｗ／ｗ％、好ましくは１０〜２
０　ｗ　／　ｗ　％で用いられるのがよい。＃度が低過
ぎると、得られる固定化酵素含有物の機械的強度が低下
し、逆に濃度を１１１記より高くすると、ＰＶＡ水溶液
の粘性が増すため、その調製が困難となる。ＰＶＡ水ｄ
液の調製は、通常加熱下で浴１［１イされる。

本発明に用いる酵素含有物は酵素剤または酵素生型菌体
を意味する。それらはそれ自体で開用してもよく、また
水性媒体、例えば水、適当な緩衝液などに溶解した溶液
あるいは懸濁した）罫濁〆夜として使用してもよい。

上記酵素剤は部分的に精製されていても、−また充分に
＝１＃　製されていてもよく、いずれの純度の度合の酵
素でもよい。また該酵素は燕磯または有機担体と物理的
に吸着されている形態であるか、あるいは該担体と混会
されている形態であってもよい。

ここに担体とは酵素又は菌体な不活化させない水に不溶
性の無機又は有機物質であって場合によっては、酵素又
は菌体と物理的に吸着する物質である。例えばケイソウ
土、シリカゲル。

アルミナ、活性炭、セファレックス、アガロス。

セルローズなどの公知の有機高分子ポリマーなどがある
。

本発明の酵素含有物には、酵素剤としては（、）酵素；
（ｂ）＃素と無機もしくは有機担体との混合物；（ｅ）
Ｉ？累と無機もしくは有機担体との結合物；前記（ｂ）
または（ｃ）の懸濁液；（ｄ）酵素液；（ｅ）酵素液と
無機もしくは有機担体との混合物；（ｆ）酵素液と無機
もしくは有機担体との結合物；前記（、）または（幻の
懸濁液が含まれる。一方酵素生産菌体としては生菌体、
乾燥菌体、破壊菌体；（ｇ）該菌体類と無機もしくは有
機担体との混合物；（ｈ）該菌体類と無機もしくは有機
担体との結合物；生菌体、乾燥菌体、破壊菌体の懸濁液
；上記（ｇ）または（ｈ）の懸濁液が含まれる。

上記酵素としては、動物、イ直 物、微生物由来の公知の酵素が挙げられるが、微生物由
来の酵素が１吏用される。上記酵素のクリとしては、グ
ルコース・イソメラーゼ、ツマ２−ゼ、アスパルターゼ
、アミラーゼ、グルコアミラーゼ、トリジシン、キモト
リノシン、ペグシン、パパイン、パンクレアチン、アミ
ノアシラーゼ、ペニシリンアシラーゼ、セファロスポリ
ンアシラーゼ、ヌクレアーゼ、リボヌクレアーゼ、フィ
チン、カタラーゼ、ガラクトシダーゼ、ＡＴＰ−デアミ
ナーゼ、Ｌ−グルタミン−浚デヒドロケ９ナーゼ、ホス
ファターゼ、チロシナ−ｅ　、イア　ヘルターゼ、フラ
ｇキナーゼ、ストレットキナーゼ、アビラーゼ、ＡＴＰ
−クレアチンリンｌ＃転移酵素、ペクチーゼ、カルがキ
シペグチターゼ、Ｌ−アスｉｅラギナーゼ、マルターゼ
、ラクターゼ、ウレアーゼ、タンナーゼ、リパーゼ、メ
リビアーゼ、アルドラーゼ、セルラーゼ、アントシアナ
ーゼ、ナリンソナーゼ、ヘスペリソナーゼ、Ｄ−アミノ
酸オキシダーゼ、グルコースオキシダーゼ、Ｌ−フェニ
ルアラニンアンモニアリアーゼ、Ｌ−アスパラギン酸と
Ｌ−フェニルアラニイメチルエステル七からアスパルテ
ームを合成する酵素などが挙げられる。

上記以外に「酵素ハンドズック」、丸尾文治、田宮信雄
監修、１９８２年１２月１日、朝倉書店発行に記載され
ている公知の酵素も勿論挙げることができる。

上記酵素生産菌体は前記酵素を生産する微生物であれば
、細菌、放線菌、糸状菌でもよく、尊母であってもよい
。上記菌体は酵素活性を有していれは、生菌体、乾燥菌
体でもよく、部分的にあるいは完全に破壊した菌体でも
よい。また、これらの菌体は無機または有機の水不溶性
担体と物理的に吸着されている形態であるか、あるいは
該担体と混合されている形態であってもよい。

ＰＶＡ水溶液と酵素含有物との混合は均一な状態になる
まで行われる。混合は通虐室扁下で行われる。得られた
混合物をＰＶＡの半乾燥ダル化によシ成型するのである
が、該混合物は通常液状であるから、任意の形状の容器
に注入して半乾燥ダル化される。容器の形状としては粒
状、棒状または細孔があってもよい板状などが挙けられ
るが、工業的には液状物を粒状８器に注入することは困
難であるから、通常は棒状または板状の形で成型される
ような容器に注入するのが好ましい。

次に、容器に注入された混合物を自然乾燥または通風乾
燥によ勺脱水される。この脱水によシＰＶＡが半乾燥ダ
ル化され、前記混合物が成型される。ここでいう半乾燥
り９ル化とは、得られる成型物の水分が適度に存在する
状態（含水率が２０〜３０％の如き水分の少ない状態で
はない）でＰＶＡが乾燥ダル化されることをいう。

従って、上記の脱水工程は単に前記混合物の水分量を減
少させるだけでなく、水分量を減少させることによｊ７
ＰＶＡを半乾燥ダル化させて該混合物を成型させるため
である。

上記の脱水工程においては、前記混合物の水分量が５０
チまたはそれ以下になるまで自然乾燥または通風乾燥さ
れる。脱水率が５０％よシ低過ぎると、半乾燥ダル化の
度合が低過ぎるために、最終的に得られる固定化酵素含
有物の比体積が大きくなってしまう。脱水率が５０％よ
シ相当高くなってもよいが、あま勺高過ぎると、成型物
を細粒化する場合、粉砕化される恐れがあったシ、ある
いは乾燥グルが進行し過ぎて通水性を失なうことになる
ので好ましくない。精々脱水率を５０〜８０チの範囲で
行うのが好ましい。

自然乾燥または通風乾燥は酵素活性を失活させないよう
な塩度の範囲内で行われるべきであるから、通常は室飄
ないし３０〜４０℃の幅度の条件下で行われる。耐熱性
酵素またはその生産菌体を固定化するような場合には、
上記の温度以上であってもよいことは言うまでもない。

室温で放置するような自然乾燥の場合は、脱水工程を完
了するまで相当時間を要するので、工業的には通風乾燥
によシ水分を除去すると共に、半乾燥ダル化させるのが
好ましい。

このようにして脱水によシ半乾燥ダル化した成型物は、
次に水と接触させて浸漬・物を得るのであるが、この工
程の目的は、前記成型物の表面が内部よシ含水率が低い
ために、水と接触させることによシ表面に水分を保持さ
せることにある。従って、前記混合物に対する脱水率が
５０％に近いような場合には、場合にょシ水と接触させ
ないこともあシ得るが、連層は前記の目的理由によシ水
と接触させる。水と接触させる方法としては、前記成型
物を水に浸漬するか、あるいは前記成型物に噴霧などに
より水を散布すればよい。接触させる条件としては酵素
活性を失活させない温度の範囲内で行われる。水と接触
した成型物は含水率を高めるが、一定の含水率を保つの
で、長い時間水と接触させる必要はなく、得られた浸漬
物はその含水率はイｎ々７０〜８０％程度である。

このようにして得られた浸漬物あるいは水と接触させる
前の前記成型物は、粘着ｉ生を有しないので、細粒化を
必要とする場合には、これらの段階で適宜のサイズに自
由に細粒化ができる。

要は水との接触の前後のいずれの段階においても細粒化
が可能であるが、水との接触させる前に行う場合には、
前記成型物の含水率が極めて少ない状態、例えは２０％
以下とならない範囲で行う方が粉砕化を防止する点で有
利である。

このようにして得られた浸漬物を一６℃以下の温度で凍
結するのであるが、通常は一２０℃またはそれ以下で冷
却するのが好ましい。冷却時間は一２０℃で冷却した場
合、通８５時間以上費やされる。

次に、得られた凍結物を融解することなく真空乾燥され
る。この場合、冷凍室から凍結物を取シ出し、これを真
空乾燥機に移し、直ちに凍結乾燥すれば、水分の除去（
昇華）に併ない、乾燥されるべき凍結物が冷却されるの
で、特に外部冷却を施さなくても凍結物が融解すること
はない。凍結物が融解しない程度に加温しても差支えな
く、これにより凍結乾燥を早めることができる。要は凍
結物を融解しないように凍結乾燥することであって、こ
の工程によシ多孔性を有する固定化酵素含有物が得られ
るのである。

この凍結乾燥によシ含水率２０〜４０％にまで水分を除
去することができる。

このようにして得られた固定化酵素含有・吻は、ＰＶＡ
が自然乾燥または通風乾燥による半乾燥ダル化と凍結に
よる低霊ダル化の両方により強固にダル化が進行すると
共に、凍結乾燥によりダル内の氷が除去されることによ
シ多孔性を有する比質を肩するために、工業的使用に耐
え得る機械的強度の高い固定化物であるだけでなく、そ
の比体積が公知の凍結、成型、凍結乾燥法によシ得られ
る固定化菌体よシ１／３〜１１５程度小さいために、酵
素反応における反応容器がそれだけ小さくて済み、なお
かつ多孔性で通水性にも侵れているため、酵素反応に用
いる固定化酵素または菌体として工業的利用に有利な特
徴を有する。

それ故、種々の酵素反応に本発明の固定化酵素含有物を
利用して、酵素的に産業上有用な生産物を製造すること
ができる。例えば、ペニシリンアシラーゼまたはその産
生菌体の固定化酵素含有物を用いてペニシリンＧから６
−アミノペニシラン酸の製造、グルコース・イソメラー
ゼまたはその産生菌体の固定化＃素含有物を用いて／”
　ｋ　：２−スから異性化糖の製造、アスパルターゼま
たはその産生菌体の固定化酵素含有物を用いて７マール
酸とアンモニアとからＬ−アス／”　ラキン酸の、１１
１、Ｌ−フェニルアラニンアンモニアリアーゼまたはそ
の産生菌体の固定化酵素含有物を用いて桂皮酸とアンモ
ニアとからし一フェニルアラニンの製造、フマラーゼま
たはその産生菌体の固定化酵素含有物を用いてフマル酸
からリンゴ酸の製造、Ｌ−フェニルアラニンメチルエス
テルとＬ−アスパラギン酸とからアスパルテームを合成
する酵素またはその産生菌体の固定化酵素含有物を用い
てＬ−フェニルアラニンメチルエステルとＬ−アスパラ
ギン酸とからアスノぐルテームの製造、セファロスポリ
ンアシラーゼまたはその産生菌体の固定化酵素含有物を
用いて７−（４−カルがキシブタンアミド）セファロス
ポラン酸から７−アミノセファロスポラン酸の製造など
に用いられる。

次に、参考例、実施例を挙げて本発明を具体的に説明す
るが、これにより本発明の固定化法、使用される酵素ま
たはその産生菌体を限定するものではなく、本発明が開
示されれば、実施例に開示されていない酵素またはその
産生菌体についても容易に固定化されることが理解され
るであろう。

尚、固定化菌体の強度および活性発現率は特記しない限
シ、次の方法によシ測定した。

〈強度試験法〉 Ｌ型試験管に被験する固定化菌体３００ｍｇと水ｌＯ−
とを入れ、７０℃の恒温浴中で振とうし、９０分ｋ　６
６０　ｎ　ｍの波長における透過率を測定することによ
って固定化菌体の崩壊状態を調べた。崩壊の少ない固定
化菌体はど透過率が高くなり、透過率５０チ以上のもの
を「十」で表示し、完全に溶解するものを「−」で表示
した。

く活性発現率〉 ヒスコトロン（日本精密工業社ｇ）で３０秒間回転し、
４０目盛で完全に粉砕後の固定化菌体の酵素力価を１０
０チとし、粉砕しないで測定した酵素力価を粉砕した固
定化菌体の酵素力価に対する比活性をチで表示した。

参考例 市販ＰＶＡ　（けん化度９９．４５モルチ、重合度１７
００）１００ｇを水９００ｇに加え、１００℃で加熱し
て完全に溶解した後、室温に冷却してｌ　Ｑ　ｖ　／　
ｗ％ＰＶＡ水溶液を得た。

実施例１ ｉｏｏ−容ビーカーに参考列で得たｌ　Ｏｗ／ｖ％ＰＶ
Ａ水溶液２０．ｌｉ＋とグルコース・イソメラーゼを産
生ずるストレプトマイセス・アルプスＹＴ−Ａ５　（Ｆ
ＥＲＮ−Ｐム４６３ンの湿潤囲体（含水率８５％、特開
昭５２−７４８０号公報に記載の方法で培養して得た）
７．４ｇとを入れ、室温で５分間均一に混合して混合物
を得た。

この混合物のうち１３．３３．９（水分量１２．３２ｇ
１含水率８８．６％）を２×２朋角、２０ｃｍ長さの成
形用溝に注射器で注入した後、４５℃で３．５時間通風
乾燥して成形物７．２６ｇ（水分量５．７４ｇ’、含水
率７９．１１を得た。これを水に浸漬した後、２１℃ｍ
角に細断した後、−２０℃で８時間凍結した。これを１
６時間かけて真壁乾燥して固定化菌体を得た。この体積
、強度および活性発現率は第１表の通シであった。

実施列２ 実施ｆｌｌｌテ得た一１０Ｗ／Ｗ％ＰＶＡ水溶液とグル
コース・イソメ２−ゼ産生湿潤菌体との混合物ｘ３．９
１ｙ（水分量１１．９６ｐ、含水率８８．６％）とを２
　Ｘ　２　ｍｍ角の成形用溝に注射器で注入した後、４
５℃で５時間乾燥して成形物５．７９，９（水分量４．
２　’０９、含水率７２，５％）を得た。これを水に浸
漬し、２龍角に細断した後、−２０℃で８時間凍結した
。これを１６時間かけて真空乾燥して固定化菌体を得た
。この体積、強度および活性発現率は第１表の通υであ
った。

実施例３ 実施例１で得た１０ｗ／ｗ％ＰＶＡ水溶液とグルコース
・イソメラーゼ産生湿潤菌体と−の混合物１４．６１Ｎ
（水分量１２．９４＆％含水率８８．６％＞を２　Ｘ　
２　ｍｙｓ角の成形用溝に注射器で注入した後、４５℃
で１０時間乾燥して成形物２．１２＆（水分量０．４５
ｇ、含水率２１．２％、）を得た。これを水に浸漬した
ｆ、２ｍｍ角に細断して、粒状浸漬物５．６９ｇ（水分
４．０２ｇ、含水率７０．６５チ）を得た。これを−２
０℃で８時間凍結した後、１６時間かけて真空乾燥して
固定化菌体を得た。この体積、強度および活性発現率は
第１表の通りであった。

比較例１ 実施例１で得たｌ　Ｏｗ　／　ｖ％ＰＶＡ水浴液とグル
コース・イソメラーゼ産生湿潤菌体との混合物１３．７
！！（水分量１２．１４＃、含水率８８．６％）を２Ｘ
２關角の成形用溝に注射器で注入した後、−２０℃で８
時間凍結した。これを１６時間かけて真空乾燥して棒状
の固定化菌体を得た。これを２Ｘ２順に細断して粒状の
固定化菌体を得た。この体積、強度および活性発現率は
第１表の通りであった。

比較例２ 実施例１で得たｌ　Ｑ　ｗ　／　ｗ％ＰＶＡ水ｍ液とグ
ルコース・イソメラーゼ産生湿潤菌体との混合物１５．
８５ｇ（水分量１４．０４！１１含水率８８．６％）を
２　Ｘ　２　ｍｍ角の成形用溝に注射器で注入した後、
４５℃で１０時間通風乾燥して棒状の画定化菌体２．ａ
ｏｇ（水分０．４９　ｇ、含水率２１．３％）を得た。

これを２玉角に細断して粒状の固定化菌体を得た。この
体積、強度および活性発現率は第１表の通シであった。

比較例３ 比較例２において、１０時間通風乾燥する代シに２時間
通風乾燥して棒状の固定化菌体１１．４５ｇ（水分量９
．６４１　％含水率８４．２チ）を得た。このものは完
全に乾燥ケ９ル化が進行しておらず、２龍角への細断が
不可能であった。

比較例４ 比較例１において、１６時間かけて真空乾燥する代ｐに
４５℃で１２時間通風乾燥して、粒状の固定化菌体を得
た。

第１表 上記の結果から、比較例１の固定化菌体は本発明の固定
化菌体よシ３〜５倍の体積を有し、酵素反応に利用する
場合の反応容器が著しく増大するという欠点があること
を示している。比較例２の固定化菌体は機械的強度が極
めて低いものであることを示しており、比較例４の固定
化菌体は酵素活性発現率が悪いことを示している。

実施例４ １０〇−容ビーカーにｌＯｗ／ｗ％ＰＶＡ水ｆａ液２０
’９　トＬ−フェニルアラニンアンモニアリアーゼを産
生するロードトルラ・グルチニスＩＦＯＯ５５９の湿ｄ
ｌ　Ｅ１体（Ａｐｐｌ、　ＥｎｖｉｒＯｎ。

Ｍｉｃｒａｂｉｏｌ、、ＶＯｌ、　４２．　Ａ５，７７
３〜７７８（１９８１）に記載の方法で得た）　７．　
Ｏ、ｐとを入れ、室部で５分間均一に混合して混合物を
得た。この混合物のうちｘ３．ｓ！！（水分量ｘｔ４ｓ
１１含水率８５，０％）を２×２間、２０儂長さの成型
用溝に注射器で注入し、３０℃で８時間通風乾燥して成
型物７．８１１（水分量５．７（［９゜含水率７３．０
％）を得た。これを水に浸漬し、２ｍｍ角に細断した後
、−２０℃・で８時間凍結した。これを１６時間かけて
凍結乾燥して強固な多孔性固定化菌体を得た。

実施例５ 特開昭５５−３９７−１２号の方法で得られたバチルス
・メガテリウムＢ−４００（ＦＥＲＭ−ＰＡ７４８）の
産生ずるペニシリンアシ２−ゼ濃縮液（１２０１，Ｕ／
ｄ）ｌＯｌｎｔに上２イト（Ｊａｈｎｓ　Ｍａｎｖｌｌ
ｌｅ　Ｓａｌ＠ｓ社＃Ａ３６０　）　１．５１を加えて
練合した。この練合物に参考例で得た１　０　ｗ　／　
ｗチＰＶＡ水溶液１０−を加えて室温で５分間均一に混
合して混合物ｚ２．２ｇ（水分量１９．００．＠、含水
率８６．５％）を得た。これを２×２朋角、２０口長さ
の成型用溝に注射器で注入し、３０℃で８時間通風乾燥
して成型物１２．８４ｇ（水分量９．３０９、含水率７
２．４％）を得た。これを水に浸漬し、２ｍｍ角に細断
した後、−２０℃で８時間凍結した。この凍結物を１６
時間かけて凍結乾燥して強固な多孔性固定化酵素３．８
４ｇ（含水率３０％、ペニシリンアシラーゼ活性ｚ６９
ｘ、ｕ／ｌを得た。

代理人　三宅正夫他１名

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 （１）けん化度が９５モルチ以上で、平均重合度が１０
   ００以上のポリビニルアルコールの水溶液と酵素含有物
   とを混合し、その混合物を任意の形状の容器に注入し、
   脱水率５０％以上まで脱水してダル化成型し、得られた
   成型物と水との接触によシ浸漬物を得、これを−６℃以
   下の畠度で凍結した後、得られた凍結物を融解すること
   なく真空乾燥することを特徴とするＰＶＡケ゛ルによる
   多孔性固定化酵素含有物の製造法。 （２）　７Ｊｅリビニルアルコールの水溶液が５〜３０
   ｗ　／　ｗ％の範囲の濃度である特許請求の範囲第１項
   記載の製造法。 （３）酵素含有物が酵素剤または酵素生産菌体である特
   許請求の範囲第１項記載の製造法。 （４）酵素剤が（ａ）酵素、（ｂ）酵素と無機もしくは
   有機担体との混合物または（ｃ）酵素と無機もしくは有
   機担体との結合物である特許請求の範囲第３項記載の製
   造法。 （５）酵素剤が前記（ｂ）または（ｃ）の懸濁液である
   特許請求の範囲第３項記載の製造法。 （６）酵素剤が（ｄ）酵素液、（ｅ）酵素液と無機もし
   くは有機担体との混合物または（ｆ）酵素液と無機もし
   くは有機担体との結合物である特許請求の範囲第３項記
   載の製造法。 （７）酵素剤が前記（、）または（ｆ）の懸濁液である
   特許請求の範囲第３項記載の製造法。 （８）酵素生産菌体が生菌体、乾燥菌体、破壊菌体、（
   ｇ）該菌体類と無機もしくは有機担体との混合・吻、（
   ｈ）該菌体類と無機もしくは有機担体との結合物である
   特許請求の範囲第３項記載の製造法。 （９）酵素生産菌体が生菌体、乾燥菌体、破壊菌体の懸
   濁液、上記（ｇ）または（ｈ）の懸濁液である特許請求
   の範囲第３項記載の製造法。 （１０）形状が粒状、棒状または板状である特許請求の
   範囲第１項記載の製造法。 （ｎ）　脱水を自然乾燥または通風乾燥によｐ行なう特
   許請求の範囲第１項記載の夷造法。 （１２）水との接触を水に浸漬するかまたは水を散布す
   ることによシ行う特許請求の範囲第１項記載の製造法。 （１３）水との接触を酵素の失活しない温度範囲の粂件
   下で行う特許請求の範囲第１２項記載の製造法。 （１４）　浸漬物が棒状または板状である場合は、該浸
   漬物を粉粒化してもよい特許請求の範囲第１項記載の製
   造法。 （１５）浸漬物の凍結温度が一２０℃まだはそれ以下の
   温度である特許請求の範囲第１項記載の製造法。