JPS60209175A - 過酸化水素測定用組成物 - Google Patents
過酸化水素測定用組成物Info
- Publication number
- JPS60209175A JPS60209175A JP6474684A JP6474684A JPS60209175A JP S60209175 A JPS60209175 A JP S60209175A JP 6474684 A JP6474684 A JP 6474684A JP 6474684 A JP6474684 A JP 6474684A JP S60209175 A JPS60209175 A JP S60209175A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- hydrogen peroxide
- composition
- measuring hydrogen
- chromogen
- water
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/26—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving oxidoreductase
- C12Q1/28—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving oxidoreductase involving peroxidase
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Immunology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
（産業上の利用分野）
本発明は液体特に体液中の過酸化水素を測定するための
試薬組成物に関するものである。
試薬組成物に関するものである。
（従来技術）
今日、過酸化水素の測定は医療分野における臨床検査を
はじめとして、化学産業、食品産業、公衆衛生等の各分
野で非常に広い範囲で実施されている。特に臨床検査に
おいては酵素を利用する体液成分の分析法が急速に普及
しており、その中でも、過酸化水素の測定は重要な位置
を占めている。それというのも、成分に酸化酵素を作用
させて過酸化水素を生成させ、この過酸化水素を測定す
るというような比較的簡単な方法で分析可能な体液中の
成分が非常に多いからである。代表的な成分／酸化酵素
の組み合せとしてはグルコース／グルコースオキシダー
ゼ、コレステロール／コレステロールオキシター上、尿
酸／ウリカーゼ、アミノ酸／アミノ酸オキシダーゼ、ピ
ルビン酸／ピルビン酸オキシダーゼ等があげられる。
はじめとして、化学産業、食品産業、公衆衛生等の各分
野で非常に広い範囲で実施されている。特に臨床検査に
おいては酵素を利用する体液成分の分析法が急速に普及
しており、その中でも、過酸化水素の測定は重要な位置
を占めている。それというのも、成分に酸化酵素を作用
させて過酸化水素を生成させ、この過酸化水素を測定す
るというような比較的簡単な方法で分析可能な体液中の
成分が非常に多いからである。代表的な成分／酸化酵素
の組み合せとしてはグルコース／グルコースオキシダー
ゼ、コレステロール／コレステロールオキシター上、尿
酸／ウリカーゼ、アミノ酸／アミノ酸オキシダーゼ、ピ
ルビン酸／ピルビン酸オキシダーゼ等があげられる。
さて、生じた過酸化水素は種々の方法で測定されるが、
パーオキシダーゼの存在下、色原体を酸化させることに
より色素を形成させ比色定量する方法が最も一般的に行
なわれている。このような色原体は一般に分子中にアミ
ノ基、水酸基を有しておシ、安定で色素形成能力の大き
い色原体が選択される。最も多用される色原体はトライ
ンダー（Ｔｒｉｎｄｅｒ ）試薬として知られる４−ア
ミノアンチピリンとフェノールの組み合せであるが、近
年、その変型も多数報告されている。
パーオキシダーゼの存在下、色原体を酸化させることに
より色素を形成させ比色定量する方法が最も一般的に行
なわれている。このような色原体は一般に分子中にアミ
ノ基、水酸基を有しておシ、安定で色素形成能力の大き
い色原体が選択される。最も多用される色原体はトライ
ンダー（Ｔｒｉｎｄｅｒ ）試薬として知られる４−ア
ミノアンチピリンとフェノールの組み合せであるが、近
年、その変型も多数報告されている。
一方、体液中の成分を測定するための試薬組成物を担体
に固着させるいわゆるドライケミストリーの分野では、
色原体としてベンチジン誘導体、殊に０−トリジンが好
んで使用されてきた。というのは、この物質を色原体と
して使用した場合、非常に鋭敏な感度が得られ、可視光
線領域の長波長側に極太成豚ヲ有する色素を生成するた
め、共存する種々の着色成分の影響を受けにくいなどい
くつかの利点が存在するからである。しかしながらｏ−
）リジンは発癌性を有しているとみなされており、この
物質を使用する試験用具の製造に際しては特別の注意を
払わなければならないという問題がある。
に固着させるいわゆるドライケミストリーの分野では、
色原体としてベンチジン誘導体、殊に０−トリジンが好
んで使用されてきた。というのは、この物質を色原体と
して使用した場合、非常に鋭敏な感度が得られ、可視光
線領域の長波長側に極太成豚ヲ有する色素を生成するた
め、共存する種々の着色成分の影響を受けにくいなどい
くつかの利点が存在するからである。しかしながらｏ−
）リジンは発癌性を有しているとみなされており、この
物質を使用する試験用具の製造に際しては特別の注意を
払わなければならないという問題がある。
近年、０−トリジンの特性を生かしつつ、発癌性を有し
ていないとみなされる色原体が開発された。これは、ペ
ンチジンの３．３′、５．５′位がそれぞれメチル基で
置換された化合物であるＣ Ｖ、 Ｒ，ホランド（Ｈｏ
ｌｌａｎｄ）ら、テトラヘドロン（Ｔｅｔｒａｈｅｄｒ
ｏｎ ） 、３０巻、５２９９〜５５Ｑ２頁（１９７４
年）参照〕。又、西独国特許第２．４６０，９０３号に
は、３．６′、５．５′位がメチル以外のアルキル基で
置換されたペンチジンも同様に色原体として使用可能で
あることが記述されている。
ていないとみなされる色原体が開発された。これは、ペ
ンチジンの３．３′、５．５′位がそれぞれメチル基で
置換された化合物であるＣ Ｖ、 Ｒ，ホランド（Ｈｏ
ｌｌａｎｄ）ら、テトラヘドロン（Ｔｅｔｒａｈｅｄｒ
ｏｎ ） 、３０巻、５２９９〜５５Ｑ２頁（１９７４
年）参照〕。又、西独国特許第２．４６０，９０３号に
は、３．６′、５．５′位がメチル以外のアルキル基で
置換されたペンチジンも同様に色原体として使用可能で
あることが記述されている。
しかしながら、これらベンチジン誘導体は、いずれも水
に対する溶解性が極めて悪く、このため、酸性ｐＨ領域
において、限られた濃度範囲で使用可能であるにすぎな
い。これは、酵素を利用する体液中成分の分析がほとん
ど中性付近で実施されることから考えて、重大な欠点と
いってよい。これらベンチジン誘導体が主として試験片
に用いられているのも、上述の欠点を考慮してのことで
ある。但し、これらのベンチジン誘導体全使用した試験
片においても、上述の欠点にもとづく不利益は解消され
ず、過酸化水素の生成量が非常に少ない場合にのみ使用
可能であるにすぎない。
に対する溶解性が極めて悪く、このため、酸性ｐＨ領域
において、限られた濃度範囲で使用可能であるにすぎな
い。これは、酵素を利用する体液中成分の分析がほとん
ど中性付近で実施されることから考えて、重大な欠点と
いってよい。これらベンチジン誘導体が主として試験片
に用いられているのも、上述の欠点を考慮してのことで
ある。但し、これらのベンチジン誘導体全使用した試験
片においても、上述の欠点にもとづく不利益は解消され
ず、過酸化水素の生成量が非常に少ない場合にのみ使用
可能であるにすぎない。
このため、測定可能な過酸化水素の濃度範囲を拡大する
だめの工夫が試られており、他の色原体と混合して用い
る方法が報告されている（特公昭５７−５５２０号公報
）。
だめの工夫が試られており、他の色原体と混合して用い
る方法が報告されている（特公昭５７−５５２０号公報
）。
又、ｓ、 ｓ’、 ５．５’−テトラアルキルベンチジ
ンが水に対して難溶性であることの別の不利益は、試験
片の製造時にももたらされる。例えば、体液中のグルコ
ースを測定するだめの試験片を製造する場合、一般に、
酵素、緩衝物質、色原体からなる含浸水溶液が調製、さ
れるが、５＋ ３Ｃ５，５′−テトラアルキルベンチジ
ンを色原体として選択した時、単一の含浸水溶液を得る
ことは非常に難かしい。このため、酵素、緩衝物質を含
浸する工程と色原体を含浸する工程とにわけたシ（特公
昭５７−２９１６０号公報）、色原体含浸水溶液に媒染
剤を加えた如（アメリカ合衆国特許第４，３６１，６４
８号）するなどの対策が考えられている。
ンが水に対して難溶性であることの別の不利益は、試験
片の製造時にももたらされる。例えば、体液中のグルコ
ースを測定するだめの試験片を製造する場合、一般に、
酵素、緩衝物質、色原体からなる含浸水溶液が調製、さ
れるが、５＋ ３Ｃ５，５′−テトラアルキルベンチジ
ンを色原体として選択した時、単一の含浸水溶液を得る
ことは非常に難かしい。このため、酵素、緩衝物質を含
浸する工程と色原体を含浸する工程とにわけたシ（特公
昭５７−２９１６０号公報）、色原体含浸水溶液に媒染
剤を加えた如（アメリカ合衆国特許第４，３６１，６４
８号）するなどの対策が考えられている。
本発明者は上述の欠点を考慮しつつ、鋭意研究し、本発
明を完成させた。
明を完成させた。
（発明の目的）
本発明は上記従来技術における問題点を解決するための
ものであり、その目的とするところは、５． ３’、５
． ５’−テトラアルキルベンチジンの特性を生かしつ
つ、水に対する溶解性にすぐれ、巾広いｐＨ領域で使用
可能であり且つ試験溶液および試験片の両方に使用可能
な色原体を提供することにある。
ものであり、その目的とするところは、５． ３’、５
． ５’−テトラアルキルベンチジンの特性を生かしつ
つ、水に対する溶解性にすぐれ、巾広いｐＨ領域で使用
可能であり且つ試験溶液および試験片の両方に使用可能
な色原体を提供することにある。
（発明の構成）
すなわち本発明の過酸化水素測定用組成物は、酵素、緩
衝物質および色原体を含んで成る過酸化水素測定用組成
物において、色原体として一般式Ｉ： （式中Ｒ１，Ｒ２，Ｒ３およびＲ４は同−又は異なり、
各々炭素原子数１ないし６の直鎖アルキル基を表わし、 ｎは１ないし６の整数であり、 且つスルホアルキル基はヒドロギシル基の少なくとも１
個により置換されていてもよい。）で表わされる３、３
’、５． ５’−テトラアルキルペンチジンのスルホア
ルキル誘導体又はその水溶性塩を含むことを特徴とする
。
衝物質および色原体を含んで成る過酸化水素測定用組成
物において、色原体として一般式Ｉ： （式中Ｒ１，Ｒ２，Ｒ３およびＲ４は同−又は異なり、
各々炭素原子数１ないし６の直鎖アルキル基を表わし、 ｎは１ないし６の整数であり、 且つスルホアルキル基はヒドロギシル基の少なくとも１
個により置換されていてもよい。）で表わされる３、３
’、５． ５’−テトラアルキルペンチジンのスルホア
ルキル誘導体又はその水溶性塩を含むことを特徴とする
。
本発明者らは、色原体として上記一般式（１）で表わさ
れる化合物又はその水溶性塩を使用すると感度が良く、
且つ高濃度の過酸化水素も定量的に測定し得ることを見
い出した。
れる化合物又はその水溶性塩を使用すると感度が良く、
且つ高濃度の過酸化水素も定量的に測定し得ることを見
い出した。
本発明において好適に使用される化合物を以下に記載す
るが、もちろんこれらに限定されるものではない： Ｎ、 Ｎ’−ビス（２−スルホエチル）−Ｓ、Ｓ′。
るが、もちろんこれらに限定されるものではない： Ｎ、 Ｎ’−ビス（２−スルホエチル）−Ｓ、Ｓ′。
５．５′−テトラメチルペンチジン、
Ｎ、 Ｎ’−ビス（３−スルホプロピル）−３，３’。
５．５′−テトラメチルベンチジン、
Ｎ、 Ｎ’−ビス（４−スルホブチル）−ｓ、ｓ’。
５．５′−テトラメチルベンチジン、
Ｎ、Ｎ’−ビス（３−スルホプロピル）−５，５’。
５．５′−テトラエチルペンチジン、
Ｎ、 Ｎ’−ビス（２−ヒドロキシ−２−スルホエチル
） −５，３’、５． ５’−テトラメチルベンチジン
、 Ｎ、 Ｎ’−ビス（２−ヒドロキシ−３−スルホプロピ
ル） −３，５’、 ５．５’−テトラメチルベンチジ
ン。
） −５，３’、５． ５’−テトラメチルベンチジン
、 Ｎ、 Ｎ’−ビス（２−ヒドロキシ−３−スルホプロピ
ル） −３，５’、 ５．５’−テトラメチルベンチジ
ン。
上記の化合物を色原体として用いる場合には、一種類の
みでもまた数種類を併用してもよく、又、他の色原体と
組み合せて使用することも可能である。
みでもまた数種類を併用してもよく、又、他の色原体と
組み合せて使用することも可能である。
これらの化合物はほとんど文献未記載のものであるが、
公知方法により容易に製造することができる。
公知方法により容易に製造することができる。
例、ｔば、３． ３’、５． ｓ’−テトラアルキルペ
ンチジンに相当するサルトン全反応させる〔小円ら、工
業化学雑誌、５９巻９号、１０２８〜１０３０頁（１９
５６年〕参照〕方法や、３． ｓ′、ｓ、 ｓ′−テト
ラアルキルペンチジンと分子末端にノへロゲンを有する
アルキルスルホン酸又はヒドロキシアルキルスルホン酸
とを反応させる（ Ｎ、 Ｅ、グツド（Ｇｏｏｄ）ら、
アナリテイカル バイオケミストリー（Ａｎａｌｙｔｉ
ｃａｌ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ）、 １０４巻、
６００〜６１０頁（１９８０年）参照〕方法などがあげ
られる。
ンチジンに相当するサルトン全反応させる〔小円ら、工
業化学雑誌、５９巻９号、１０２８〜１０３０頁（１９
５６年〕参照〕方法や、３． ｓ′、ｓ、 ｓ′−テト
ラアルキルペンチジンと分子末端にノへロゲンを有する
アルキルスルホン酸又はヒドロキシアルキルスルホン酸
とを反応させる（ Ｎ、 Ｅ、グツド（Ｇｏｏｄ）ら、
アナリテイカル バイオケミストリー（Ａｎａｌｙｔｉ
ｃａｌ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ）、 １０４巻、
６００〜６１０頁（１９８０年）参照〕方法などがあげ
られる。
本発明の組成物に使用する３、 ５’、５． ５’−テ
トラアルキルペンチジン誘導体は、従来、過酸化水素の
測定に使用されてきたすべての色原体のかわりに使用す
ることができる。とシわけ、分析工程の中間に過酸化水
素を生成させる方法にもとづく体液成分の酵素的測定に
使用するのが、有利である。それというのも、本発明の
化合物は、特に水に対して優れた溶解性を示すため、緩
衝物質、酵素等と混合して安定な単一の試験溶液とする
ことができると同時に、高濃度の過酸化水素まで感度良
く定量可能で、共存する着色成分の影響を受けにくい等
、数々の利点を併せ持つからである。
トラアルキルペンチジン誘導体は、従来、過酸化水素の
測定に使用されてきたすべての色原体のかわりに使用す
ることができる。とシわけ、分析工程の中間に過酸化水
素を生成させる方法にもとづく体液成分の酵素的測定に
使用するのが、有利である。それというのも、本発明の
化合物は、特に水に対して優れた溶解性を示すため、緩
衝物質、酵素等と混合して安定な単一の試験溶液とする
ことができると同時に、高濃度の過酸化水素まで感度良
く定量可能で、共存する着色成分の影響を受けにくい等
、数々の利点を併せ持つからである。
さらに、本発明の組成物に使用する色原体化合物を酵素
、緩衝物質とともに吸収性担体に包含させ、使用の際、
便利なように該担体をプラスチック等の支持体に貼付せ
しめ、試験片とした場合、特に簡便で貯蔵安定性に優れ
た試験用具を得ることができる。最も多用される吸収性
担体はＦ紙であるが、不織布、綿、木片等も使用可能で
ある。又、試験用試薬組成物を所望により適当な接着剤
例えばゼラチン、合成樹脂等とともに上記プラスチック
シート等の支持体に塗布、乾燥することにょシ固着させ
ることも可能であり、更に種々の変形が容易になし得る
ことは明らかである。
、緩衝物質とともに吸収性担体に包含させ、使用の際、
便利なように該担体をプラスチック等の支持体に貼付せ
しめ、試験片とした場合、特に簡便で貯蔵安定性に優れ
た試験用具を得ることができる。最も多用される吸収性
担体はＦ紙であるが、不織布、綿、木片等も使用可能で
ある。又、試験用試薬組成物を所望により適当な接着剤
例えばゼラチン、合成樹脂等とともに上記プラスチック
シート等の支持体に塗布、乾燥することにょシ固着させ
ることも可能であり、更に種々の変形が容易になし得る
ことは明らかである。
以下の実施例において本発明を更に詳細に説明する。な
お、本発明は下記実施例に限定されるものではない。
お、本発明は下記実施例に限定されるものではない。
色原体化合物の製造：
製造例１
Ｎ、 Ｎ’−ビス（３−スルホプロピル）−ｓ、３７５
．５′−テトラメチルベンチジンナトリウム塩の合成 ２４、ＯｊＥのｙ、 、 ｓｒ、 ｓ 、 ｓ／−テト
ラメチルベンチジンを１−プロパツール１００罰に溶解
する。１゜５−プロパンサルトン２４．４５！（ｉ７メ
タノール１００−に溶かして前記溶液に加え、約６時間
加熱還流する。室温まで冷却し、１ＮＮａＯＨ水溶液を
加えて中和した後、溶媒を蒸発乾固する。メタノール／
アセトンで再結晶し、白色結晶２８１を得た。（収率５
３チ） 薄層クロマトグラフィー〔シリカゲルプレート（メルク
社製）、展開溶媒；２−プ ロパツール：酢酸；水＝５０ ： １５ ：２０）ＵＶ
吸収あシ、ニンヒドリン反応ｔ−ＦｌＲ４＝０．２５ 赤外吸収スペクトル νＮ）ｌ ５４００ｆ”。
．５′−テトラメチルベンチジンナトリウム塩の合成 ２４、ＯｊＥのｙ、 、 ｓｒ、 ｓ 、 ｓ／−テト
ラメチルベンチジンを１−プロパツール１００罰に溶解
する。１゜５−プロパンサルトン２４．４５！（ｉ７メ
タノール１００−に溶かして前記溶液に加え、約６時間
加熱還流する。室温まで冷却し、１ＮＮａＯＨ水溶液を
加えて中和した後、溶媒を蒸発乾固する。メタノール／
アセトンで再結晶し、白色結晶２８１を得た。（収率５
３チ） 薄層クロマトグラフィー〔シリカゲルプレート（メルク
社製）、展開溶媒；２−プ ロパツール：酢酸；水＝５０ ： １５ ：２０）ＵＶ
吸収あシ、ニンヒドリン反応ｔ−ＦｌＲ４＝０．２５ 赤外吸収スペクトル νＮ）ｌ ５４００ｆ”。
ｌ１０＝０１６２０ ｃｍ−”、νＯＮ １２６０ （
ｚ−１゜νＢＯ３１２００，１０５１０５Ｏ” 製造例２ Ｎ、 Ｎ’−ビス（２−ヒドロキシ−２−スルホエチル
）−５，５’、５．５’−テトラメチルベンチジンナト
リウム塩の合成 １２．０２ｊｉの３．３′、５，５′−テトラメチルベ
ンチジン’１５００ｍ／の２−プロパツールに溶解する
。
ｚ−１゜νＢＯ３１２００，１０５１０５Ｏ” 製造例２ Ｎ、 Ｎ’−ビス（２−ヒドロキシ−２−スルホエチル
）−５，５’、５．５’−テトラメチルベンチジンナト
リウム塩の合成 １２．０２ｊｉの３．３′、５，５′−テトラメチルベ
ンチジン’１５００ｍ／の２−プロパツールに溶解する
。
５２ｆの２−クロロ−１−ヒドロキシェタンスルホン酸
ナトリウムｑ３ｏａ、ｇの水に溶がして前 ゛記溶液に
加える。次いで４ノのＮａＯＨを加え、約１２時間加熱
還流する。溶媒を除去した後、残渣に水５００ｄを加え
て溶解し、エチルエーテルで未反応の３．３′、５，５
′−テトラメチルベンチジンを抽出する。水層を再び蒸
発乾固後、メタノール／アセトンで再結晶し、白色結晶
１４．８ｙを得た。（収率２６％） 薄層クロマトグラフィー〔シリカゲルプレート（メルク
社製）、展開溶媒、２−プロパツール：酢酸：水＝５０
：１５：２０〕ＵＶ吸収あり、ニンヒドリン反応（（１
）Ｒ４＝Ｑ、２７ 赤外吸収スペクトルνｏＨ３５００ｃｒｎ−１゜１／Ｎ
Ｈ３４００ｃｒｎ−” 、ν（３＝（３１６２０ｎｎ
’。
ナトリウムｑ３ｏａ、ｇの水に溶がして前 ゛記溶液に
加える。次いで４ノのＮａＯＨを加え、約１２時間加熱
還流する。溶媒を除去した後、残渣に水５００ｄを加え
て溶解し、エチルエーテルで未反応の３．３′、５，５
′−テトラメチルベンチジンを抽出する。水層を再び蒸
発乾固後、メタノール／アセトンで再結晶し、白色結晶
１４．８ｙを得た。（収率２６％） 薄層クロマトグラフィー〔シリカゲルプレート（メルク
社製）、展開溶媒、２−プロパツール：酢酸：水＝５０
：１５：２０〕ＵＶ吸収あり、ニンヒドリン反応（（１
）Ｒ４＝Ｑ、２７ 赤外吸収スペクトルνｏＨ３５００ｃｒｎ−１゜１／Ｎ
Ｈ３４００ｃｒｎ−” 、ν（３＝（３１６２０ｎｎ
’。
νＯＮ １２６０ｃｍ−”、 ＬＩＢ０３１２００．１
０５０ｍ”過酸化水素測定用組成物の調製： 実施例１ Ｎ、 Ｎ’−ビス（３−スルホプロピル）−３，３’。
０５０ｍ”過酸化水素測定用組成物の調製： 実施例１ Ｎ、 Ｎ’−ビス（３−スルホプロピル）−３，３’。
５．５′−テトラメチルベンチジンナトリウム塩２００
１ぴ、パーオキシダーゼ（１００１Ｕ／”’５＋）１０
禦１１トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン１．２
１ノ、クエン酸（１水和物）２．１０ｊＥ、水酸化ナト
リウムα８５Ｆを精製水に溶解し、全量１００Ｍとし、
反応液（ｐＨ６，５）とする。
１ぴ、パーオキシダーゼ（１００１Ｕ／”’５＋）１０
禦１１トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン１．２
１ノ、クエン酸（１水和物）２．１０ｊＥ、水酸化ナト
リウムα８５Ｆを精製水に溶解し、全量１００Ｍとし、
反応液（ｐＨ６，５）とする。
実施例２
グルコースオキシダーゼ（１２０口ＩＵ／Ｐ）α９６ノ
、パーオキシダーゼ、（１００１Ｕ／”ｐ） １１５ｙ
１ポリビニルピロリドン（ＭＷ ４００００） ５．０
９ＸＮ、Ｎ’−ビス（３−スルホプロピル）−３，ｓ；
５．５′−テトラメチルベンチジンナトリウム塩αｓｙ
、クエン酸（１水和物）１．９８Ｆ、クエン酸三ナトリ
ウム（２水和物）ＩＱ、４４Ｐ、ＥＤＴＡ・２Ｎａ［Ｌ
ｌｙを精製水に溶解し全量１００ｄとする。
、パーオキシダーゼ、（１００１Ｕ／”ｐ） １１５ｙ
１ポリビニルピロリドン（ＭＷ ４００００） ５．０
９ＸＮ、Ｎ’−ビス（３−スルホプロピル）−３，ｓ；
５．５′−テトラメチルベンチジンナトリウム塩αｓｙ
、クエン酸（１水和物）１．９８Ｆ、クエン酸三ナトリ
ウム（２水和物）ＩＱ、４４Ｐ、ＥＤＴＡ・２Ｎａ［Ｌ
ｌｙを精製水に溶解し全量１００ｄとする。
過酸化水素測定用検量線の作製：
０、 １０．２０．５０，４０ｍＭ／ｌに調製した過酸
化水素水溶深谷々１０μｔに実施例１で調製した本発明
の組成物を含む反応液ａｎ−を加え、６７℃恒温槽に５
分間浸漬し、発色させる。２５℃まで冷却後、波長６６
５ ｎｍで吸光度（又は光学密度： ｏｐｔｉｃａｌ
ｄｅｎｃｉｔｙ、 （ｌ Ｄ）を測定する。ブランクの
吸光度を差し引くことによシ、ΔＯ，Ｄをめ、横軸に過
酸化水素濃度、縦軸にΔ０．Ｄをとり、検量線を作製し
た。第１図に示す如く、検量線は過酸化水素濃度４０
ｍＭ／ｌまで原点を通る直線となった。したがって比色
分析によシ過酸化水素濃度を正確に定量できることが判
る。
化水素水溶深谷々１０μｔに実施例１で調製した本発明
の組成物を含む反応液ａｎ−を加え、６７℃恒温槽に５
分間浸漬し、発色させる。２５℃まで冷却後、波長６６
５ ｎｍで吸光度（又は光学密度： ｏｐｔｉｃａｌ
ｄｅｎｃｉｔｙ、 （ｌ Ｄ）を測定する。ブランクの
吸光度を差し引くことによシ、ΔＯ，Ｄをめ、横軸に過
酸化水素濃度、縦軸にΔ０．Ｄをとり、検量線を作製し
た。第１図に示す如く、検量線は過酸化水素濃度４０
ｍＭ／ｌまで原点を通る直線となった。したがって比色
分析によシ過酸化水素濃度を正確に定量できることが判
る。
尿中グルコース測定用試験片の製造：
実施例２で調製した溶液にシュライヒア・ラント・シェ
ル（５ｃｈｌｅｉｃｈｅｒ ＆ ５ｃｈｕｌｌ ）社製
墓２５１６の沖紙を浸し、６０℃で３０分間乾燥した。
ル（５ｃｈｌｅｉｃｈｅｒ ＆ ５ｃｈｕｌｌ ）社製
墓２５１６の沖紙を浸し、６０℃で３０分間乾燥した。
得られた試験紙を５ ｒｒａｎ Ｘ ５ ａｍに切断し
、接着テープを用いて５ｍｍＸ６０１１１ｍのポリスチ
レンシートに貼シ付けて尿中グルコース測定用試験片を
製造した。
、接着テープを用いて５ｍｍＸ６０１１１ｍのポリスチ
レンシートに貼シ付けて尿中グルコース測定用試験片を
製造した。
第２図に試験片を示す。図中１は試験紙、２はポリスチ
レンシートである。
レンシートである。
比較試験片の製造：
上記本発明組成物の含浸溶液からＮ、 Ｎ’−ビス（３
−スルホプロピル） −３，３′； ５． ５’ −テ
トラメチルベンチジンナトリウム塩を除いた溶液に上記
と同じＦ紙を浸して６０℃、３０分間乾燥した後、０．
５％ ３．若５．５′−テトラメチルベンチジン−アセ
トン溶液に再び浸して真空乾燥する。得られた試験紙を
上記と同様の操作で試験片とした。
−スルホプロピル） −３，３′； ５． ５’ −テ
トラメチルベンチジンナトリウム塩を除いた溶液に上記
と同じＦ紙を浸して６０℃、３０分間乾燥した後、０．
５％ ３．若５．５′−テトラメチルベンチジン−アセ
トン溶液に再び浸して真空乾燥する。得られた試験紙を
上記と同様の操作で試験片とした。
グルコース濃度の測定：
濃度の異なるグルコース標準液に本発明の組成物を使用
して製造した試験片及び比較試験片を各々瞬時浸し、過
剰の液を除去した後、正確に２０秒間反応させた後色差
計（カラーディファレンス コンピューター Ｅ３本１
１１ ＮＤ−５０４ＤＥ）’ｅ用いて、６６０ ｎｍの
波長で反射率を測定した。横軸をグルコース濃度、縦軸
を反射率とすると、第６図に示すような検量線が得られ
る。
して製造した試験片及び比較試験片を各々瞬時浸し、過
剰の液を除去した後、正確に２０秒間反応させた後色差
計（カラーディファレンス コンピューター Ｅ３本１
１１ ＮＤ−５０４ＤＥ）’ｅ用いて、６６０ ｎｍの
波長で反射率を測定した。横軸をグルコース濃度、縦軸
を反射率とすると、第６図に示すような検量線が得られ
る。
図かられかるように、テトラメチルベンチジンを色原体
として用いた試験片は本発明にもと定の反射率を示すこ
とから、この試験片の測定可能なグルコース濃度範囲は
０〜２５０ ”ｐ／ｄｉ である。
として用いた試験片は本発明にもと定の反射率を示すこ
とから、この試験片の測定可能なグルコース濃度範囲は
０〜２５０ ”ｐ／ｄｉ である。
これに対し、本発明にもとづく試験片は比較試験片より
も感度が高く、又２ｏｏｙ／ａｔ のグルコース濃度ま
で明瞭な反射率の変化が認められる。従ってこの試験片
の測定可能なグルコース濃度範囲は０〜２，０００”９
／ｄｉであシ、本発明の過酸化水素測定用組成物を使用
して製造した試験片は従来の過酸化水素測定用組成物を
使用して製造した比較試験片に比べて広いグルコース濃
度範囲に適用可能であることが判る。又、グル。
も感度が高く、又２ｏｏｙ／ａｔ のグルコース濃度ま
で明瞭な反射率の変化が認められる。従ってこの試験片
の測定可能なグルコース濃度範囲は０〜２，０００”９
／ｄｉであシ、本発明の過酸化水素測定用組成物を使用
して製造した試験片は従来の過酸化水素測定用組成物を
使用して製造した比較試験片に比べて広いグルコース濃
度範囲に適用可能であることが判る。又、グル。
コース以外に、適する酵素及び緩衝物質を用いることに
より、本発明の組成物及び該組成物を使用して製造した
試験片は体液中に含まれる種々の成分の定量に用いるこ
とができることは勿論である。
より、本発明の組成物及び該組成物を使用して製造した
試験片は体液中に含まれる種々の成分の定量に用いるこ
とができることは勿論である。
（発明の効果）
上述のように、本発明の過酸化水素測定用組成物は色原
体としてｓ、ｓ７ ｓ、ｓ’−テトラアルキルベンチジ
ンのスルホアルキル誘導体又はその水溶性塩を使用する
ものであるため、従来の３、３’； ５． ５’−テト
ラアルキルベンチジンを色原体として使用する過酸化水
素測定用組成物に比べて水に対する溶解性が著しく向上
すると共に、より幅広いｐＨ領域で使用可能となった。
体としてｓ、ｓ７ ｓ、ｓ’−テトラアルキルベンチジ
ンのスルホアルキル誘導体又はその水溶性塩を使用する
ものであるため、従来の３、３’； ５． ５’−テト
ラアルキルベンチジンを色原体として使用する過酸化水
素測定用組成物に比べて水に対する溶解性が著しく向上
すると共に、より幅広いｐＨ領域で使用可能となった。
又、水に対する溶解性が優、れているため従来の組成物
を使用する場合に比べて水溶液中の成分のより高感度で
より広い濃度範囲にわたる定量分析が可能となった。
を使用する場合に比べて水溶液中の成分のより高感度で
より広い濃度範囲にわたる定量分析が可能となった。
更に体液中の各種成分測定用の試験片の製造時において
も水溶液から過酸化水素測定用組成物を担体に一工程で
担持できるため、試験片の製造工程を簡略化でき且つ従
来の組成物を使用した試験片に比べて工）高感度で、ｃ
ｐ広い濃度範囲にわたって使用可能な試験片を得ること
ができる。
も水溶液から過酸化水素測定用組成物を担体に一工程で
担持できるため、試験片の製造工程を簡略化でき且つ従
来の組成物を使用した試験片に比べて工）高感度で、ｃ
ｐ広い濃度範囲にわたって使用可能な試験片を得ること
ができる。
この工うに本発明の過酸化水素測定用組成物は水溶液の
形態でも試験片の形態でも使用することができ且つ種々
の変形も可能であるため、体液中の各種成分の正確で簡
便迅速な定量分析に優れた効果を奏する。
形態でも試験片の形態でも使用することができ且つ種々
の変形も可能であるため、体液中の各種成分の正確で簡
便迅速な定量分析に優れた効果を奏する。
第１図は本発明の過酸化水素測定用組成物を使用して作
製した検量線を示すグラフ、第２図は本発明の組成物を
使用して製造した尿中グルコース測定用試験片の一実施
例の斜視図、 第３図は本発明の組成物を使用した試験片と比較試験片
を用いて測定した、グルコース濃度と色差計から読み取
った試験紙表面の一定波長での反射率との関係を示すグ
ラフである。 図中、 １・・・試験紙 ２・・・ポリスチレンシート特許出願
人 栄、研化学株式会社 （ほか１名） 第１図 過酸化水素水源Ｍ＜ｍＦＪＡ） 第２図
製した検量線を示すグラフ、第２図は本発明の組成物を
使用して製造した尿中グルコース測定用試験片の一実施
例の斜視図、 第３図は本発明の組成物を使用した試験片と比較試験片
を用いて測定した、グルコース濃度と色差計から読み取
った試験紙表面の一定波長での反射率との関係を示すグ
ラフである。 図中、 １・・・試験紙 ２・・・ポリスチレンシート特許出願
人 栄、研化学株式会社 （ほか１名） 第１図 過酸化水素水源Ｍ＜ｍＦＪＡ） 第２図
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 酵素、緩衝物質および色原体を含んで成る過酸化水素測
定用組成物において、色原体として一般式ｌ： （式中Ｒ１，Ｒ２，Ｒ３およびＲ４は同−又は異なシ、
各々炭素原子数１ないし６の直鎖アルキル基を表わし、 ｎは１ないし６の整数であり、 且つスルホアルキル基はヒドロキシル基の少なくとも１
個により置換されていてもよい。）で表わされる３、５
’、５． ５’−テトラアルキルペンチジンのスルホア
ルキル誘導体又ハソの水溶性塩を含むことを特徴とする
過酸化水素測定用組成物。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP6474684A JPS60209175A (ja) | 1984-03-31 | 1984-03-31 | 過酸化水素測定用組成物 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP6474684A JPS60209175A (ja) | 1984-03-31 | 1984-03-31 | 過酸化水素測定用組成物 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS60209175A true JPS60209175A (ja) | 1985-10-21 |
Family
ID=13267027
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP6474684A Pending JPS60209175A (ja) | 1984-03-31 | 1984-03-31 | 過酸化水素測定用組成物 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS60209175A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP4180243B2 (ja) * | 1997-04-30 | 2008-11-12 | 株式会社同仁化学研究所 | 酸化発色試薬 |
-
1984
- 1984-03-31 JP JP6474684A patent/JPS60209175A/ja active Pending
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP4180243B2 (ja) * | 1997-04-30 | 2008-11-12 | 株式会社同仁化学研究所 | 酸化発色試薬 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN100357449C (zh) | 用于分光光度法测定分析物的染料偶合对 | |
| RU2050546C1 (ru) | Способ определения общего содержания глюкозы в цельной крови и композиция для его осуществления | |
| RU2015513C1 (ru) | Средство для колориметрического определения аналита | |
| ES2235977T3 (es) | Analogos de 8-(anilino)-1-naftalenosulfonato y su uso en ensayos de deteccion de analitos. | |
| JP3118029B2 (ja) | ケトン体の検定のための組成物及び方法 | |
| JPS5948099A (ja) | アスコルビン酸塩耐性広濃度域用グルコ−ス試験組成物、試験具および試験方法 | |
| JPS6134799B2 (ja) | ||
| JPH10130247A (ja) | レドックス活性化合物およびその使用 | |
| JPS5819989B2 (ja) | 過酸化物測定用試験組成物 | |
| JPS6249040B2 (ja) | ||
| US4871678A (en) | Agent and process for the determination of calcium | |
| JPS6310775A (ja) | ２−ヒドラゾノ−４，６−ジニトロベンズチアゾロン | |
| JPS6152300A (ja) | 過酸化水素測定用組成物 | |
| JPS61138163A (ja) | 発色性カップラー及び過酸化水素又は他の被分析物の測定へのその使用 | |
| JPS584918B2 (ja) | グルタメ−ト−オキザロアセテ−ト−トランスアミナ−ゼ及びグルタメ−ト−ピルベ−ト−トランスアミナ−ゼの測定法 | |
| JPS6359466B2 (ja) | ||
| JP3065692B2 (ja) | ナフトトリアゾリウム塩 | |
| JP2516381B2 (ja) | 過酸化水素の定量方法及びその定量用試薬 | |
| JP2547375B2 (ja) | ３，３′，５，５′−テトラアルキルベンチジンのスルホアルキル誘導体 | |
| EP0140256B1 (en) | Composition for examining urobilinogen | |
| JPH07116382B2 (ja) | 水溶性メチレンビスジアルキルアニリン誘導体及びその塩類並びにそれらを用いた過酸化物質定量用組成物 | |
| US4894472A (en) | Dicyanoethylaryl derivatives and process for their preparation | |
| US5792619A (en) | Assay using oxidative chromogenic reagent | |
| AU595993B2 (en) | Dicyanoethylaryl derivatives and process for their preparation | |
| JPH0650997B2 (ja) | コリンエステラ−ゼ活性の新規測定方法 |