JPS6024191A - 発酵法によるクエン酸の製法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は発酵法による各種ノ４−ム油よｐクエン酸を製
造する方法に関するものである。

従来、％種パーム“油を発酵し、培地中にクエン酸を高
濃度で蓄積させ、これを採取する方法は見当ら゛ない。

パーム油類は東南アジア地域に多量に産出しておシ（４
５０万トン／年、１９８０年現在）、これら資源の高付
加価値化を図ることは資源の有効利用上重要であると考
える。この見地から、本発明者らは、パーム油類を容易
に資化する酵母を見出し、発酵培地中にクエン酸を高濃
度で生成、蓄積し、これを採取する方法を完成した。

すなわち、炭素源として各種ｔ４−ム油を含む培地中に
キャンデイダ属およびデバリオミセス属のうち特定の酵
母を好気的に培養し、該培地中にクエン酸を蓄積させ、
これを採取することを特徴とするクエン酸の製法に関す
るものである。

本発明に用いる微生物は各１ｉ　／４−ム油を資化して
クエン酸を培地中に蓄積する能力を有するキャンデイダ
・トロピカリス（Ｃａｎｄｉｄａｔｒｏｐｉｃａｌｉｇ
）、キャンディダ・インターメディア（Ｃａｎｄｉｄａ
　Ｉｎｔｅｒｍｅｄｉｍ　）、キャンデイダ・プルムプ
テイ（Ｃａｎｄｉｄａ　ｂｒｕｍｐｔｉｉ　）、キャン
デイダ・ギヤマンディー（Ｃａｎｄｉｄａｇｕｔ］ｌｉ
ｅｒｍｏｎｄｉｉ）およびデバリオミセス・ハンゼニー
（Ｄｅｂａｒｙｏｍｙｃｅｓ　ｈａｎｓｅｎｉｉ）に属
する酵母である。

更に、これらの酵素の栄養要求変異株および変種を含む
ものである。

本発明で使用する培地に、使用する酵母類の性質に応じ
て選択されるが、炭素源は粗・ぐ−ム油、ｆｆｆｉｆｆ
ミノ油、ハームオレ＼インシよびＡ’−ムステアリンの
単独または混合物で一適宜使用することは培地への分散
性を良好ならしめるために必要である。

原料の各種パーム油の培地への添加量は工ないし２０重
量％で、好ましくは５ないし１５重量％である。窒素源
として無機アンモニウム塩、硝酸塩、酢酸アンモニウム
のような有機アンモニウム塩、アミノ酸類、尿素および
アンモニアが使用できる。

ては、第１リン散塩、第２リン酸塩、硫酸塩、塩酸塩、
カリウム塩、ナトリウム塩、マグネシウム塩、鉄塩、マ
ンガン塩、銅塩、亜鉛塩など通常の無機塩類が使用でき
る。

更に、ｐＨｔ−調整するため炭酸カルシウム、アンモニ
ア、カセイソーダなどが用いられる。

有機微量栄養素としては、ビオチン・チアミン等のビタ
ミン類を含む酵母エキス・コンステープリカーなどの天
然物を使用してもよい。

発酵条件は好気的条件がよい。培養温度は２５℃ないし
４０℃の範囲で、好ましくは３５℃が追白である。培養
中のｐＢは３ないし１０の範囲でよいが、好ましくは４
ないし７である。培養中のｐＨ調整は炭醗カルシウム、
カセイソーダｔｆｃはアンモニアなどを用いて行なうこ
とができる。

培養は通常５０ないし１５０時間、好ましくは８０ない
し１００時間行なわれる。

培地中に蓄積されたクエン酸は、通常微生物の培養によ
って得られる有機酸類をその培養物から分離するのに用
いられる手段、たとえは濾過、遠心分離等の方法７で固
体を分離した後、カラムクロマト処理、イオン交換樹脂
処理あるいは濃縮処理などによυクエン酸またはその塩
として分離採取することができる。

以下に、実施例を掲げて本発明を説明するが、これに限
定されるものではない。

実施例１゜ 培地組成 精製パーム油　６．　Ｏｗｔ％ Ｎｌ（、α　３．０＜９／１） ＫＨＩ　ＰＯ４０，５（９／　ｌ　） ＭｇＳ０４・７Ｈ，００，５（１） Ｆｓ８０４ｓ７Ｈ１０５，０（”Ｆ／　ｌ　）ＴｈＳＯ
４”７ＨｔＯＯ，１（岬／ＩＩム８０４・ｎＨｌｏ　’
　０．１　（’　）ＣｕＳＯ４・５Ｈ１０５（μｇ／　
ｌ　）ビオチン　１００　ｔ４／ｌ　） チアミン・塩酸塩　１００（μ９／ｌ）酵母抽出物　１
．０（ｇ／１） ｐｎ　５．０ 種培養として、内容５００−の坂ロフラスコに上記組成
の培養液３０ｍ／を分注したのち、１１５℃で１０分間
殺菌し、約３５℃に放冷した後、キャンデイダ・トロピ
カＩＪ　ス（Ｃａｎｄｉｄａ　ｔｒｏｐｌｃａｌｉｇ）
　（Ｉ　ＦＯ−０５８９）　、キャンデイダ・インター
メディア（Ｃａｎｄｉｄａｉｎｔｅｒｍａｄｌａ）　（
Ｉ′Ｆ’Ｏ−，０７６１）、キャンデイダ・プルムプテ
イー（Ｃａｎｄｉｄａ　ｂｒｕｍｐｔｉｉＨＩ　ＦＯ−
０７４４）　、キャンデイダ・ギヤマンディ（Ｃａｎｄ
ｉｄａ　ｇｕｌｌｌｌｓｒｍｏｎｄｌｌ）（ＩＦＯ−０
８３８）オヨヒデハリオミセス・ハンゼニー （Ｄａｂａｒｙｏｍｙａｓｓ　ｈａｎｓ＠ｎ１ｉ）　（
ＩＦＯ−００１９）をそれぞれ３白金耳づつ移植した。

培養条件は温度３５℃、振盪数１２０往復／分、振巾７
ｃＩｎ″″Ｃあった。培養時間は３日間であるが、培養
開始約２０時間後に酵母の成育を確認した後ｐＨ調整の
ため別に殺菌したＣａＣ０１５ｗｔ／ｖａｔ％　を添加
し、これを種培養液とし穴。

生産培養は種培地と同じ組成の培地３０ａｄを５００−
の坂ロフラスコに入れ、１１５℃で１０分間加熱滅菌し
、３５℃まで放冷後、上記の種培養液１．５　ｐｓｉ　
（５ｖｏ１％）を接種した。これを１２０往復／分、振
巾７ｍ、３５℃の条件下で７日間培養した。なお、培養
開始後１５時間目にｐＨ１ｌｉ整のため別に殺菌したＣ
ａＣＯ３５ｗｔ％を添加した。

培養終了後、この培養物を塩酸でｐｎ　２．５とした後
ケイソウ土を濾過助剤として吸引濾過し、酵母を主とす
る固型物はこれを少量の水で洗滌し友。次にテ液と洗滌
とを合せ、合併液を苛性ソーダで中和したのち加熱して
沈澱を析出させ、これを冷却後吸引濾過し１クエン酸カ
ルシウムを得九。

このクエン酸カルシウムを約１０倍量の水に懸濁し、こ
れに、そのＦミ松が塩化バリウム溶液によって硫酸根の
存在をわずかに示すに至るまで、攪拌下５０％硫酸水溶
液を滴下したのち沸騰水中で約３０分間加熱する。これ
を必要によっては脱色操作を施した後熱時濾過してν液
を５０〜６０℃の下で減圧濃縮し、途中石膏の沈澱が析
出した場会はこれを戸別し、更に濃縮を続け、ややうす
いシララグ状にまで至らしめる。

このシラツブ状濃縮物を氷点下に放置するとクエン酸の
結晶が析出する。それぞれ発酵液当りのクエン酸の生成
１ｋ（９／ｌ）は次のようである。

キャンデイダ・トロピカリス　５２．１（Ｃａｎｄｉｄ
ａ　ｔｒｏｐｉｃａｌｉｍ）実施例２ 実施例１と同様な方法を用いたが、炭素源は各種・母−
ム油で、使用し九菌種はキャンプづダ・トロピカリ：ｘ
、　（Ｃａｎｄｉｄａ　ｔｒｏｐｉｅａｌｌ＠）（ＩＦ
Ｏ−０５８９）でおった。その結果は第１表に示した。

第１表、キャンデイダ・トロピカリスによる各種パーム
油より得られたクエン酸量。

実施例３ 内容３　ｔのジャー・ファーメンタ−を用いて実験を行
なった。炭素源は精製ノ４？−ム油で、培地への添加量
はｌｏｗｔ　％であった。培地組成は実施例１と同様で
あった。使用し九酵母はキャンデイダ・トロピカリス（
Ｃａｎｄｉｄａｔｒｏｐｉｅａｌｉａ）　（ＩＦＯ−０
５８９）であり、あらかじめ種培養しておいたものを該
培地に５ｖｏｔ％加えた。

発酵条件は、培地仕込量１．５Ｌ、温度３５℃、攪拌数
１００Ｏｒ、ｐ、ｍ、、空気供給速度Ｉ　Ｖ／Ｖ、ｍ１
ｎ０、発酵時間９６　Ｈｒｓ、であった。

発酵中１）ｌＩｔ’ｊｌＯＮ水酸化す）　ＩＪウム水溶
液を自動的に供給することにより５．０に維持した。

得られたクエン酸生成濃度は７８．７１１／ｌであった
。なお、種培養は実施例１と同様に行ない、その培養時
間は６０時間であった。

代理人　三　宅　正　夫　他２名

Claims (3)

【特許請求の範囲】
1. （１）炭素源として各種パーム油を含む培地に、各種／
   ４′−ム油を資化する酵母を好気的に培養し、該培地中
   にクエン酸を高濃度で蓄積させ、これを採取することを
   特徴とする発酵法によるクエン酸の製法。
2. （２）使用する発酵培地の炭素源として、粗ノ４−ム油
   、精ｉｌＩ／ｆ−五油、パームオレイン、ノソーム＼ス
   テアリンの単独または混合物が使用されることを特徴と
   する特許請求の範囲第１項記載の製法。
3. （３）　使用する微生物はキャンデイダ・トロピカリｙ
   、　（Ｃａｎｄｉｄａ　ｔｒｏｐｉｃａｌｉｇ　）、キ
   ャンデイダ・インターメディア（Ｃａｎｄｉｄａ　ｉｎ
   ｔｅｒｍｅｄｉｍ）　％キャンデイダ・プルムプテイ（
   Ｃａｎｄｉｄａｂｒｕｍｐｔｉｉ）　、キャンデイダ・
   ギヤマンディー（Ｃａｎｄｉｄａ　ｇｕｉｌｌｉｅｒｍ
   ｏｎｄｉｉ）　およびデバリオミセス・ハンゼニ−（Ｄ
   ｅｂａｒｙｏｍｙｃｅｓ　ｈａｎｓｅｎｉｉ）である前
   記第１項記載の製法。