JPS60246317A - 鳥レトロウイルス‐牛生長ホルモンｄｎａで形質転換されたカプセルに包含されたマウス細胞およびインビボにおけるｂｇｈの投与法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は、牛生長ホルモン（ＢＯＩＩ）遺伝子に烏ロン
グターミナルリピート（ｌｏｎｇ　ｔｅｒｍｉｎａｌｒ
ｃｐｃａＬ　（ＬＴ　Ｒ））を結髪させた新規組み換え
Ｉ）ＮＡ　分子−の使用に関し、該組み換えＤＮＡ分Ｊ
“−は、マウス細胞ゲ′ツムへ統合された組み換え遺伝
ｉ’　＋４　Ｅｌを含イ１する安定マウス繊維芽ｆｉｌ
ｌ　を旧、系に−【ト形ａ転換されたものである。

これらのマウス細胞は、空洞（ｈｎｌｌｏｗ　）ファイ
バー中にカプセル化され、動物に、例ぐ−は、皮ｌ・的
、皮肉的、脳または心室内的に移植さＪｌ、循環牛生長
ホルモン（ＲＯｌｌ　）を生成する。

組み換えＩ）ＮＡ核技術用いて、牛生長ホルモン構造遺
伝子部分がラウスサルコーマウィルスゲノムの真核生物
的調節領域と結合され、ここてｐＢＧＨ−３およびｐＢ
ＧＨ−４と呼ばれる材料が生成される。こｔｌらのプラ
スミドは、マウス細胞株へ二重形質転換される。このマ
ウス細胞株を空洞ファイバー中にカプセル化し、動物に
挿入する。

牛生長ホルモンー鳥レトロウィルスＤＮＡハイブリッド
の構造 我々は、ｐＢＲ３２２プラスミド（ｐＢＧＩ（−１）に
おける牛生長ホルモン遺伝子ＤＮＡを所イｊしている。

組み換えＤＮＡ技術を用いて、牛生長ホルモンプロモー
ター要素が、この構造遺伝子から取り除かれた。このプ
ロモーターを欠くサブクローン化プラスミドは、ｐＢＧ
Ｈ−２と呼ばれる。我々は、鳥レトロウィルスプローモ
ーター要素すなわち、ウィルスロングターミナルリピー
トｆＬＴＲ）を、牛生長ホルモン構造遺伝子へ結紮した
。結紮は、２箇所の明確な裂開部位で行なわれ、その部
位は、ｍ−ＲＮＡ０５′−非翻訳部分をコードする各Ｄ
ＮＡの領域の範囲内に見い出される。こねらのｍ−ＲＮ
Ａの５′−非翻訳部分（リーダー配列）は、ｍ−ＲＮＡ
キャップ部位と翻訳開始コドンの間に位置するヌクレオ
チドである。牛生長ホルモンおよび鳥レトロウィルス５
′−非翻訳ヌクレオチド配列は、そｈぞれ、５９塩基対
および３７９塩基対で構成されている。

これらの新規プラスミドクローンは、ｐＢＧＨ３および
ｐＢＧＩ（−４と呼ばれる。

組み換えプラスミド、ｐＢＧＨ−３の構造プラスミドＤ
ＮＡ３　（牛生長ホルモンおよびルイスサルコーマウィ
ルス）は、大腸菌ＲＲＩ細胞へトランスフェクションさ
れた。クローンが午離され、プラスミドＤＮＡは増大（
ａｍｐｌｉテｙ）さｉｔた。得られたＤＮＡの特性を、
オリジナルクローンについて利用出来る制限酵素地図に
基ずく、特徴的エンドデオキシリボヌクレアーゼ認識部
位を利用して決定した。我々はこれらのプラスミドをＩ
）ＢＧＭ−１（プラスミド牛生長ホルモン−１）および
ｐＬ３９７　（ルイスサルコーマウィルス）と吋′んで
いる。

ｐＢＧＨ１（１０ｔｒ？　）をＲａｍＨＩおよび５ａｉ
ｌで完全に消化し、２つの直線ＤＮＡ断片Ｉム５．Ｏｋ
ｂおよびμ３．Ｏｋｂ　を得た。この断片をアガロース
ゲル電気泳動（１％ジ−プラーク（Ｓｅａｐｌａｑｕｅ
）アカロース）により分離１．た。牛生長ホルモン遺伝
子を含む大きい方の断片がゲルから溶離された。純粋性
を保証するためにこのＤＮＡに対し再たび、アガロース
ゲル電気泳動（１チシープラーク）を行ない、溶離した
。約５００ｎｇ　が回収された。

ラウスサルコーマウィルスクローンｐＬ３９７け、Ｂａ
ｍＨＴで酵素的に裂開され、結果５つの直線ＤＮＡ断片
が、アガロースゲル電気泳動（１％ジ−プラーク）によ
り分離された。

μ６．Ｏｋｂの直線断片がゲルから溶離され５ａｌＩで
酵素的に消化され、同様の７ガロースゲル電気泳動にか
けられた。鳥レトロウィルスＬＴＲ（プロモーター）を
コードする約２．０ｋｂの直線ＤＮＡ断片が精製された
。約５００ｎｇ　のＤＮＡが回収された。

このＤＮＡ配列の牛生長ホルモン遺伝子への結紮は、Ｂ
ａｍＨ■部位で行なわれた。ウィルス配列はエンベロー
プ（ｅｎｖ）遺伝子の３′部分、ウィルスＬＴＲ、約５
３０ヌクレオチドのウィルスリーダー配列、およびウイ
ルスギャグ（ｇａｇｌ遺伝子の５′部分を含む。組み換
えプラスミドの牛生長ホルモン切片に含まれるものは、
遺伝子の３′末端で見られるμ５００塩基対だけでなく
５つの牛生長ホルモンエキソン（ボックスにおいて示さ
れる）である。

ト記単離ＤＮＡ断片の等モル量を含む１１００ｎのＤＮ
Ａを２２℃で１時間、結紮した。次いで大腸菌ＲＲＩ細
胞にトランスフェクションし、１００コのコロニーが単
離された。非結紮コントロールＤＮＡ調製物は、コロニ
ーを一つも生じなかった。

このクローン化ＤＮＡの制限酵素消化分析により手記Ｄ
ＮＡの２つの切片が、結合され、それにより新生物学的
分子が作り出されだこＪ−が立証された。この分子をｐ
ＢＧＨ−３と呼ぶ、。

組み換えプラスミドｐＢＧＨ−４の構造ラウスサルコー
マ誘導ＤＮＡの非必須領域を取り除くようにｐＢＧＨ−
３を改造するために、以下の方法がなされた。

ＢＳＴＥＩＩおよびＢａｍ）（Ｉ裂開によりｐＢＧＨ−
３から誘導された、７．０ｋｂ　の大直線ＤＮＡ断片を
、アガロースゲル電気泳動により精製した。次いでゲル
から取り出し、このＤＮＡは、フラッシュ末端を有する
分子を生成する大腸菌ＤＮＡポリメラーゼ（クレノー大
フラグメント）で処理された。これら分子のプラント末
端結紮および大腸菌ＲＲＩ細胞へのトランスフェクショ
ンにより、ｐＢＧＨ−３の細菌クローンと同様なプラス
ミドＤＮＡを含む細菌クローンを得た。しかしながらウ
ィルスＢ５ＴＥ１１部位およびＢａｍＨＩ部位の間の約
４３０塩基対は削除されている。このクローン化ＤＮＡ
の制限酵素消化分析により、このｐＢＧＨ−３の非必須
領域が取り除かれていることが確証された。このプラス
ミドをｐＢＧＨ−４と呼ぶ。

ｐＢＧＨ−４の配列化 ｐＢＧＨ−４のＤＮＡヌクレオチド配列化は、以下の方
法により行なわれた。ｐＢＧＨ−４−ＤＮＡ（２０ｎ？
　）は、ＥｃｏＲＩで裂開され３つの直線ＤＮＡ断片４
．３ｋｂ、　２．１５ｋｂ、および１．５ｋｂが生じた
。２．１５　ｋ　ｂ　ＤＮＡ分子を、アガロースゲル電
気泳動（１％ジ−プラークアガロースにより中離し、た
。次いでアガロースゲルからＤＮＡを溶離し５′突き出
し末端は、大腸菌ＤＮＡポリメラーゼ■クレノーフラグ
メントを使用してα−５’　（３２Ｐ）　ｄＡＴＰ　の
付加によりラベルされた。３２ｐ　ラベル化ＤＮＡ分子
を次いでＳｍａＩで裂開し、２．０ｋｂおよび０．５ｋ
ｂの大きさの２秤のＤＮＡ分子を生じさせた。２．０ｋ
ｂを含むＤＮＡ分子を、アガロースゲル電気泳動（１％
ジ−プラークアガロース）により精製し、マキシマム（
Ｍａｘａｍ　）およびギルバート（Ｇｉ　１ｂｅｒｔ）
。

（ブロク　ナトル　アカド　サイ（Ｐｒｏｃ。

Ｎａｔｌ、Ａｃａｄ、ｓｃｉ、ＵｓＡ、７５　；　５６
０−５６４（１９７７）　）の方法に従がって配列化し
た、１Ｒ３Ｖ−１，ＴＲと牛生長ホルモン遺伝子の間の
結合が、予期された配列であることが確証された。

ＬＴＲＢＧＴＩ ５’　ＣＡＴＴＴＧＧＴＧＡＣＧＡＴＣＣＣＡＧＧＡ　
３’３’ＧＴＡＡＡＣＣＡＣＴＧ　ＣＴＡＧＧＧＴＣＣ
Ｔ　５’プラスミド構造物をスクリーニングするたＢＧ
ｌ−１合成を導びく、種々のプラスミド構造物の能力を
迅速にスクリーニングするために、牛生長ホルモンをコ
ードするプラスミドＤＮＡでトランスフェクションした
培養ラットＧ）１３細胞における牛生長ホルモンの検出
のためのラピドおよび感受性トランジェントアッセイ系
も開発した。ｐＢＧＨ−４が一■−記細胞によるｌ］生
長ホルモンの合成および分泌を導びくことを示し、確証
しだ。

ラットＧＨ３細胞による牛生長ホルモンのトランシエン
トな発現のための最適条件を決定した。

ＤＥＡＥ−デキストランにより媒介でれた培養細胞のＤ
ＮＡ　トランスフェクションが少なくとも２つのパラメ
ーターにより影響を受けることが文献に報告されている
。

それらのパラメーターとは、（１）実験に使用されるＤ
ＮＡの濃度および（２）細胞がＤＥＡＥ−デキストラン
−ＤＮＡ複合体にさらされる時間である。この２つのパ
ラメーターに対応して、ラットＧＨ３における我々のト
ランジェントアッセイ系を最も効果的に活用した。

簡潔に言えば約５．ＯＸ　１．０５　ラットＣｄ（３細
胞が、３５簡組織培養プレート上で１晩培養され細胞は
、２−のカルチャー　フルード　マイナス　セイラム（
ｃｕｌｔｕｒｅ　ｆｌｕｉｄ　ｍ１ｎｕｓ　ｓｅｒｕｍ
）ですすがれた。ＤＥＡＥ−デキストラン（２００μ２
／ゴ）とともに種々の濃度のｐＢＧＨ−４ＤＮＡを含む
Ｉ　ＭＬのカルチャーフルード　マイナス　セイラムが
細胞に加えられた。次いで、３７℃で種々の時間間隔で
培養し、ＤＥＡＥ　−デキストラン−ＤＮＡ溶液が取り
除かれ、細胞はコンプレート（ｃｏｍｐｌｅｔｅ　）メ
ジュームで２回すすがれた。細胞は、毎日培養液を換え
ながら５日間培養された。牛生長ホルモンは、感受性ラ
ジオイムノアッセイを用いて培養液中でアッセイされた
。

このアッセイにより、ｐＢＧＨ−４が、トランスフェク
ション後４８時間および７２時間で牛生長ホルモンを検
出可能なレベルへ導びくことが示された。トランスフェ
クションごとに、使用されるＤＥＡＥ、−ＤＮＡ　複合
体におけるＤＮＡ量を増加させることにより、ＢＧＨ５
＋に、は増加した。７２時間で、５００　ｎｇのＤＮＡ
にさらされた細胞は、２５０ｎｇ　のＤＮＡにさらされ
た時（ＢＧＨ３０ｎｇ／ｄ　）と比較して約１０培以上
のＢＧＨ（２８３，８ｎｇ／＋＋ｄ　）　を生じた。

細胞のＤＥＡＥ−デキストラン−ＤＮＡ混合物にさらさ
れる時間を変えて、他は同様な方法により実験が行なわ
れた。この実験において各トランスフェクションに使用
されたＤＮＡ量は、２５Ｑｎｇ　であった。牛生長ホル
モン発現は、トランスフェクション時間の継続に反比例
して減少した。

これら、および関連した実験から、および１組の実験ご
との結果が異なるとはいえ、ｐＢＧＨ−４ＤＮＡが、Ｄ
ＥＡＥ−デキストラン介在トランスフェクションに従っ
た培養ラットＧＨ３細胞による検出可能レベルの牛生長
ホルモン合成を導びくことが結論ずけられた。

これらのトランスフェクション実験に使用されたＤＮＡ
の適量は、細胞５×１０５当たり２５０ｎｇから５００
ｎｇの範囲であった。

ＧＨ３細胞のＤＥＡＥ−デキストラン−ＤＮＡへさらさ
れる時間間隔は、３０分から４５分の間が、その後の牛
生長ホルモン発現に最適である。

牛生長ホルモンを分泌するマウス細胞系の生成 多量の精製ＢＧＨたんばく質を作るために、培養マウス
繊維芽細胞を生成させた。これは前記トランジェントア
ッセイにより決定されたＢＧＭ発現を誘導するプラスミ
ドベクターおよびヘルペスウィルスＴＫ　ＤＮＡで、マ
ウスＴＫ（−）Ｌ細胞を二重形質転換させることにより
行なわれた。ＴＫ（−１−）表現型を選択した後存在す
るＢＧＨをコードするプラスミドは、牛生長ホルモン発
現誘導活性を持つものであろう。

５Ｘ１０’　マウスＬ細胞（ＬＴＫ　、ＡＰＲ’ｒ”　
）へ、リン酸カルシウム沈降ＤＮＡの複合体が加えられ
た。この複合体に含１れるものは、Ｌ細胞（ＬＴＫ−、
ＡＰＲＴ−）　ＤＮＡ　１０μ２、ｐＢＧＨ−４ＤＮＡ
　１０μ？およびｐＴＫ　５　ＤＮＡ　１．００ｎｇ　
であった。１０コのＴＫポジティブコロニーが選択され
、継代培養された。培養液中に分泌された牛生長ホルモ
ンの量が決定された。培養Ｌ−ＢＧキ４−３は、５Ｘ１
０’細胞で２４時間当たり約３．０μ２　のＢＧＨを分
ａする。

より多くのＢＧＭを分泌するマウス細胞系を生成させる
ために他の方法が行なわれた。この実験は、プラスミド
ｐＢＧＭ−４ＤＮＡ　と共に、ＡＰＲＴ遺伝子、先端を
切り取った（ｔｒｕｎｃａｔｅｄ）ＴＫ遺伝子、ＰｄＬ
ＡＴ−３、（ロバート（Ｒｏｂｅｒｔ）およびアクセル
（Ａｘｅｌ　）　、１９８２　）をコードするプラスミ
ドＤＮＡによるマウスＬ細胞（ＴＫ−。

ＡＰＲＴ−）　の二重形質転換を必要とする。これらの
タイプの二重形質転換実験の結果、二重形質転換におい
て必要とされるプラスミドＤＮＡが、トランスフェクシ
ョンに次いでマウス細胞内において増大されることが示
された。

プラスミドＤＮＡの増大は対応する遺伝子生成物の増大
を意味する。

簡単に言えば、５×１０５の細胞が、上記ｃａｐｏ、法
を用いて、ＰｄＬＡＴ３　（２０ｎｇ　）およびＢＧＩ
（−４（２μ？　）　ＤＮＡにより二重形質転換される
。細胞は、ＡＰＲＴ＋　表現型を選択するために最初１
０％Ｃ８，４μ９／−アザセリン、１５　ｔｔ？　／−
アデニンを含むＤＭＥにおいて選択される。これらのＡ
ＰＲＴ＋　細胞は、次いで、ＴＫ＋　表現型の選択のた
めに１０％Ｃ８，１５μ９／−ヒ方ζキサンチン、１μ
９／−７ミノプテリン、５．１５μ？／−チミジンを含
むＤＭＥにおいて選択された。ＡＰＲＴ＋、ＴＫ＋細胞
は次いでＢＧＨ分泌能力についてスクリーニングされる
。２０の安定なポジティブコロニーが生じ、継代培養さ
れた。培養液中に分泌されたＢＧＨ量が決定された。培
養Ｌ−ＢＧＨ−４〜１３は、５Ｘ１０’細胞で、２４時
間当たり７５２のＢＧＨを分泌する。これらの細胞によ
り生成されたＢＧＨは、従来知られているように精製ネ
れ、例えば動物の生長刺激剤として使用される。（ＥＰ
Ｏ００８５０３６、モンサントおよびＥＰｏ　００６８
６４６、アップジョン参照）ｐＢＧＨ−４ＤＮＡ　で安
定に形質転換され、プラスミドｐＢＧＨ−３およびｐＢ
ＧＭ−４のみならず多量のＢＧＨを発現する２種のマウ
スＬ細胞がＡＴＣＣに寄託されており、それらを開示す
る譲受人（メルクエンドカンパニーインコーホレーテッ
ド）へ特許が付与された時、一般が利用出来る。これら
の寄託は、また対応出願がなされた国における外国特許
法により要求に従がって利用できる。寄託番号は、マウ
ス細胞培養系ＢＧＨ−４−１３およびＢＧＨ−４−３に
ついて、それぞれＡＴＣＣＣＲＬ　８５３６　およびＡ
ＴＣＣＣＲＬ　８５３７　（１９８４年４月６日寄託）
であり、ｐＢＧＨ−３およびｐＢＧＨ−４については、
そねぞれＡＴＣＣ３９６７４およびＡＴＣＣ３９６７５
，１９８４年５月１日寄託）である。

牛生長ホルモンを分泌するマウス細胞系Ｌ−ＢＧＭ−４
−３およびＬ−ＢＧＭ〜４−１３の非常に重要な利用法
としては、多くの商業的に重要な動物種、例えばチキン
、七面鳥、畜生、豚および羊へ植え込むことができる空
洞ファイバー送達システムがある。

空洞ファイバーユニットにカプセル化されたマウス細胞
による、牛生長ホルモンのイ上記マウス細胞Ｌ−ＢＧＭ
−４−３は、空洞ファイバー（ポリビニル−クロライド
−アクリル（ａｃｒｙｌｉｃ　Ｊ共重合体、ＸＭ−５０
（アミコンにより製造販売されている。））へ結め込−
止れた。このファイバーは、内径１１００μｍ　を有し
、長さは約１０＋＋ｍである。ファイバの走査型電子顕
微鏡による観察（ハイマー（市ｍｅｒ）等、神経内分泌
学、３２，３３９−３４９　＋１９８１　）「インビボ
およびインビトロにおける脳ド垂体空洞ファイバーユニ
ット」を参照）は、１つの外面に関して、穴の増大をと
もなうポリマーの多小孔層を示した。夫々のファイバー
ユニットは、７−８μｔのマウス細胞懸濁液（Ｌ−ｐＢ
ＧＨ−４−３）　（１ｔｄ当たり約２５０，０００の細
胞を含む）が詰め込１れた。次いでカプセル化され空洞
ファイバーの末部はシールきれ１．　ＤＭＥＤメジュー
ムが入った３５＋ｍ培養血中で培養された。メジューム
は各時間間隔で集められ、ＢＧＨＲＩＡ　ＫよりＢＧＨ
について分析された。ＢＧＭは、カプセルが培養皿中に
置かれて、４８時間後に、培養液中において検出された
。ファイバー中の細胞は、カプセル化後７５日間ＢＧＭ
を分泌した。ＲＩＡによりαｊ定されたＢＧＨ量は、培
養されたカプセル数と直接相関関係を持つ。

これは新規インビトロシステムであり、ＢＧＭを生成す
る真核細胞は、このシステムにおいて、−Ｆ記空洞ファ
イバーを用いることにより分析されることができる。

ファイバー−マウス細胞系Ｌ−ＢＧＨ−４−３システム
は、適切なメジューム中へ、ファイバーフィルターユニ
ットを通してＧＨを分泌させることにより単にＢＧＨを
生成し、精製するために使用することができる。

ファイバーはまた、動物中に有効的に植え込洩れること
ができる。ＢＧＨは、乳牛のミルク生成を刺激すること
が示されている。（以下を参照、マチリン（Ｍａｃｈｌ
ｉｎ　）　、ジエーデリー　サイ（Ｊ、　Ｄａｉｒｙ　
Ｓｃｉ、　）、　第５６巻、Ｎａ５．５７５ページ；シ
ー　ジエー　ビール（Ｃ，Ｊ、　Ｐｅｅｌ　）等、ジエ
ー　ナトル（Ｊ。

Ｎｕｔｒ、　）　（１９８１）　、１１１（９）　１６
６２１６７１　；１９８３年８月３日に公開されたＥＰ
Ｏ出願８５０３６　）これらのファイバーが、食用飼鳥
類、例えばチキンおよび小咄乳動物、例えばラットに植
え込１れた場合、ＢＧＭは循環系において検出きれる。

ファイバーは捷だ、大動物、例乏−は乳牛へ、皮下、皮
肉、または、層重たは心臓室内などへ植え込まれ、特に
ミルク産生体としての価値を有する。ミルク産生を刺激
するＢＧＨの有効量は、１日につき動物当たり０００５
から２００．０００μ？　であり、この量は、ＢＧＨ生
成マウス細胞系を含む選択されたファイバーユニットに
より生成される。投与の量およびレジマイン（ｒｅｇｉ
ｍｉｎｅ　）について、ここに参考として引用するＥＰ
Ｏ００８５０３６も捷た参照のこと。

植え込みによりＢＧＭを生成するために、カプセル化さ
れ、牛生長ホルモン遺伝子で二重形質転換された一種の
マウス細胞系を用いるこの出願における特別な例に加え
て、生物学的に活性なりＮＡでトランスフェクションさ
れ、対応するたんばく質を分泌する真核細胞が、上記ポ
リビニルクロライド−アクリル共重合体ファイバー中へ
入れられ得ることは、当業者にとって明らかであろう。

特に、ＧＢ　２０７３２４５イエダ（Ｙｅｄａ　）、Ｅ
ＰＯ００８５０３６モンサント、ＥＰＯ００６７０２６
ミシガンステート（３ｔａｔｅ　）、またはＥＰＯ００
６８６４６アツプジヨンにおいて、特許請求の範囲とさ
れたＢＧＨ発現系はここに述べられたマウス細胞系また
は他の適切な細胞系に挿入されファイバーにおいてカプ
セル化され、動物に植え込まれることが出来る。

また、他のホルモンまたはたんばく質を生成する他の細
胞系は、これらのファイバーにカプセル化され、ここに
述べられるように使用され得る。より一般的に、真核細
胞は、生物学的に活性なりＮＡでトランスフェクション
され、その特別な細胞は、対応するたんばく質生成物の
生成、発現および分泌のために選択されクローン化され
、およびこれらの細胞は、ここに述べられるようにカプ
セル化される。本発明の方法論が適用きれる細胞系によ
り発現される他のたんばく質の例として、ヒト血清アル
ブミン、ヒトインターフェロン、ヒト抗体、ヒトインシ
ュリン、凝血因子、ヒト生長因子、脳ペプチド、酵素、
ホルモン、プロラクチン、ウィルス抗原および植物たん
ばく質が挙げられる。

出　願　人　：　メルク　エンド　カムパニーインコー
ボレーテッド 第１頁の続き ■Ｉｎｔ、Ｃ１，’　識別記号　庁内整理番号０発　明
　者　トーマス　ジェー、リ　アメリカ合衆国。

ヴエリ　スト、サミット ＠発　明　者　リチャード　エッチ、アメリカ合衆国。

マラヴアル力　レンジ、フレスト ０７０７１　ニュージャーシイ、リンドハーアヴエニュ
ー　１５９ ０７０７０　ニュージャーシイ、サウス　オサ−クル　
１０

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、　カプセル化細胞系Ｌ−ＢＧＨ−４−３（ＡＴＣＣ
   ＣＲＬ　８５３７）またはＬ−ＢＧＨ−４−１３（ＡＴ
   ＣＣＣＲＬ−８５３６）の有効量を乳牛へインビボにお
   いて植え込むことにより前記乳牛のミルク産生を増加さ
   せることを特徴とする方法。 ２　カプセル化細胞系が皮下的に植え込まれることを特
   徴とする特許請求の範囲第１項記載の方法。 ３　カプセル化細胞系Ｌ−ＢＧＨ−４−３（ＡＴＣＣＣ
   ＲＬ　８５３７）またはＬ−ＢＧＨ−４−１３（ＡＴＣ
   ＣＣＲＬ−８５３６）の有効量を動物へインビボにおい
   て植え込むことにより前記動物の生長を増進させること
   を特徴とする方法。 ４、　カプセル化細胞系が皮下的に植え込寸れることを
   特徴とする特許請求の範囲第３項記載の方法。 ５、　内径約１１００μｍを有し、長さ約１０四である
   ポリビニルクロライド−アクリル共重合体であり、動物
   に植え込まれた時、動物生長またはミルク産生を刺激す
   るのに十分な量の牛生長ホルモンを生成出来る組み換え
   マウス細胞懸濁液を含むことを特徴とする空洞ファイバ
   ー。 ６、　内径約１１００μｍを有し、長さ約１０晒である
   ポリビニルクロライド−アクリル共重合体であり、生物
   学的に活性なりＮＡで前もってトランスフェクションさ
   れている細胞懸濁液を含む空洞ファイバーにおいて、前
   記細胞が、対応するたんばく質生成物の生成および分泌
   について選択され　空洞ファイバーに含まれる細胞懸濁
   液が、動物に植え込まれた時生物学的に活性な量のたん
   ばく質を生成できることを特徴とする特許アイバー。