JPS60256395A - 生物学的変換によるブロスからフエニルアラニンを抽出する方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は、フェニルアラニン製造のための、酵素的方法
によシ得られたプロスからフェニルアラニンを抽出する
方法に関する。

本発明の方法によれば、非常に純粋な化合物が高収率で
得られる。

フェニルアラニンーアンモニアリアーセ（ｐＡＬ）を使
用したけい皮酸の酵素的変換によるフェニルアラニンの
製造は文献に開示されている。

酵素工程の終りに、この様にして得られたフ、）　”＝
　＃　７　′＝　７　ｙＱ・’ｃ　ｈ　ｋ　ｉ　＊　ｔ
　６　ｉ°′が６抽出し、そしてこれを精製して要求さ
れる値に相当する純度を有する化合物を生成させている
。

フェニルアラニンの最も重要な用途の一つは既知の消化
性甘味剤のアスパルテームの合成の中間体のものである
から、望ましくない物質の存在を除外するためには非常
に高い純度が要求される。

プロスからのフェニルアラニンの抽出はこれまでは多く
の不利な点を有する複雑な方法により実施されて来た。

本発明の方法は既知の方法に比べた場合顕著な改善であ
る。

本発明の方法によれば、これまでに得られていたものよ
りはるかに良好な、そしてまた水性溶液の色および透明
性に関する限りは事実非常に純粋な生成物を得ることが
可能である。更に、本発明の方法は溶媒を使用しないと
いう犬なる利点を有している。従ってこの方法以外では
望ましくない物質を夾雑させるものであるのに対して、
得られるフェニルアラニンは痕跡の溶媒をも全く含有し
ておらず、そしてアスパルテーム製造に対して特に適当
である。

本発明の方法のその他の利点は出発プロスのタイプとは
独立に一定の品質を有する化合物を得ることにある。

本発明の抽出法は本質的に以下の段階より成る。

綿毛状塊形成および濾過。

濃縮によるアンモニア除去。

酸性化およびけい皮酸の分離。

フェニルアラニン取得のための脱色および濃縮。

本発明の方法の第一の段階は酵素変換によって得られた
ブロスの綿毛状塊形成（ｆｌ○ｃｃｕ１ａｔｌｏｎ）を
実施してその中に含有されている不純物の大部分を除去
することより成る。この目的のためには、フェニルアラ
ニン、炭酸アンモニウムおよび残存けい皮酸含有のブロ
スに綿毛軟塊形成剤例えば場合により燐酸アンモニウム
、水酸化マグネシウムシリカ質添加剤（即ちシはルナト
■（Ｓｉｐｅｒｎａｔ■））または脱色用の白土（即ち
トンシル■（Ｔｏｎｓｌｌ■））、そして好ましくは濾
過助剤例えばシカライト■（ｎ１ｃａ１ｔｔ＠）の存在
下に水酸化カルシウムを添加する。

短時間攪拌の後、混合物を濾過しそして４０〜７０℃の
温度に加熱したろ液を真空下に濃縮させる。好ましい到
達濃度はフェニルアラニンに関して４，０〜８０　ｔ／
Ｌであることが見出された。

それに続く段階において、得られた溶液を−２〜３の酸
性にしてけい皮酸な単離させる。好ましくは無機強酸例
えば３５〜４５％硫酸が６〜１５℃の温度で数時間の攪
拌下に使用される。

その様にして得られたけい皮酸は濾過圧よシ分離させる
。

脱色剤例えば２〜１５％量の脱色用の活性炭（セカ５Ｄ
ＳＬ＋　カーボンアンチクロモス■（Ｃｅｃａ５０ＳＬ
、　Ｃａｒｂｏｎ　ＡｎｔＩＣｒＯｍＯ謹））を使用し
て既知の方法でこの炉液を脱色させる。これは次いで濾
過により除去する。水酸化ナトリウム、カリウムまたは
アンモニウムを使用してこの一値を２．５〜４に調整す
る。

４０〜８０℃の温度でＰ液を真空下に濃縮してフェニル
アラニンに関して１５０〜２２０ｔ／ｌＩ）濃度とする
。水酸化ナトリウム、カリウムまたはアンモニウムの添
加によってこの…値を５〜６．５に調整し、攪拌下に溶
液を６〜１５℃の温度まで冷却し、そしてフェニルアラ
ニンを結晶形で沈殿させそして既知の方法で分離する。

非常に高１純度および高収率で化合物が得ら島）　れる
。

以下の実施例は本発明を説明するものである、実施例　
１ ５８１のフェニルアラニンと８ｔのけい皮酸な含有する
ブロス１ｔに微細粉末の形の水酸化カルシウム４チおよ
びディカライド■１饅を加えた。

この混合物を１時間攪拌下に保持し、次いで濾過しそし
てパネルを１００ｄのＨ２Ｏで洗った。

Ｆ液を真空下に６０℃の温度で７０　ｆ／ｌまで濃縮し
た。４０％硫酸の添加によってその一値を２，５に調整
し、そしてこの混合物を１０℃で２時間攪拌下に保持し
た。

この様にして得られたけい皮酸を濾過により除去し、硫
酸で［）Ｈ２，５の酸性としたｎ２ｏ　５０　ｍでこの
沈殿を洗った。

７、１　？のけい皮酸が得られた。

濾過した溶液に、フェニルアラニンに関して５俤量の脱
色用活性炭を加え、混合物を１時間攪拌下に保持し、そ
してカーボンな濾過により除去した。３０％ＮａＯＨで
声を２．８に調整し、そしてこの溶液を真空下に５０℃
で２００　ｔ／Ｌまで濃縮した。３０％ＮａＯＨの添加
によって州を６とし、そしてこの反応混合物を２時間攪
拌下に保持することによって、５℃に冷却した。

フェニルアラニン結晶な濾過により分離し、そして１１
０ｍ／の水で洗った。母液から第２の収穫分が得られた
。沈殿を合し、そして真空下に４５℃で６時間乾燥させ
た。

フェニルアラニンは８８チの収率で得られた。

２０　。

〔α］　、　−３３，２（ｃ＝２＋水）透過度６６０ｎ
ｍ＞９５％。

プロトン分析力価ン９９％。

実施例　２ ３４ｆのフェニルアラニンおよび９５２のけい皮酸含有
のブロス１ｔに４時間の間攪拌保持しつつ２饅の脱色用
の白土トンンル■を加えた。

濾過により得られた溶液を真空下に、５０℃の温度で８
０　ｔ／Ｌまで濃縮した。

４０％硫酸でｐＨ２，６に調整した後、この混合物を４
時間２℃で攪拌下に保持した。この様にして得られたけ
い皮酸Ｃ８，６ｔ）を濾過により除去した。

フェニルアラニンに関して１０チ量で脱色用の活性炭を
このＦ液に加え、そ゛して一時間攪拌後、濾過によりこ
のカーボンを除去し、３０チＮａＯＨで關を３．２に調
整した。この溶液を真空下に７０℃で１９０　ｆ／ｌま
で濃縮した。

この−値を５．５とし、そしてこの反応混合物を３℃ま
で冷却させた。フェニルアラニンを分離し、洗いそして
４５℃で真空下に乾燥させた。

実施例　３ 実施例１における様に操作してけい皮酸を除去し、そし
てＰＫをカーボンで脱色し、２２０ｔ７ｔ−１で濃縮し
、水酸化ナトリウムで−を６．５にｐ＋整し、反応混合
物を３Ｃに冷却してフェニルアラニンの沈殿を生成させ
、これを濾過により分離した。

％許出願人　ファーミタリア・カル口・エルバ・ソシエ
タ・ベル・アツイオーニ 外２名

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １）ブロスからの綿毛状塊形成および濾過、ろ液をフェ
   ニルアラニンに関する濃度を４０〜８０　ｔ／ｌとする
   濃縮、引き続＜ｐＨ２〜６への酸性化、この様にして得
   られたけい皮酸の濾過による分離、ｐ液の脱色およびフ
   ェニルアラニンに関する濃度を１５０〜２２０　ｆ／ｌ
   とする濃縮、および高純度を有する結晶の形で沈殿した
   フェニルアラニンの分離、より成る酵素的方法で得られ
   たブロスからのフェニルアラニンの抽出方法。 ２）綿毛状塊形成が場合によっては燐酸アンモニウム、
   水酸化マグネシウム、シリカ質添加剤または脱色用の白
   土の存在下に水酸化カルシウムの添加により実施さ゛れ
   、そして混合物を短時間攪拌下に保持させる、前記特許
   請求の範囲第１項記載の方法。 ３）綿毛軟塊の形成後にブロスを濾過し、そして４０〜
   ７０℃に加熱したｐ液を真空下に濃縮り、テフェニルア
   ラニンに関する濃度を４０〜８０　ｆ／ｌとする、前記
   特許請求の範囲第１および２項記載の方法。 ４）濃縮Ｆ液の酸性化を無機強酸を使用して行なってｐ
   Ｈ２〜５とし攪拌下に３〜１５℃の温度で操作しそして
   得られるけい皮酸を濾過により単離する、前記特許請求
   の範囲第１〜３項記載の方法。 ５）脱色剤例えば脱色用の活性炭により脱色させて、得
   られたＰ液を真空下に４０〜８０℃の湿度で濃縮して、
   フェニルアラニンに関する濃度を１５０〜２２０ｔ／ｌ
   とし、聞を５〜６．５に調整し、溶液を攪拌下に３〜１
   ５℃に冷却して高純度を有する結晶形のフェニルアラニ
   ンを生成させる、前記特許請求の範囲第１〜４項記載の
   方法。