JPS60257357A - ペプチド・タンパク分析用高速液体クロマトグラフ装置 - Google Patents
ペプチド・タンパク分析用高速液体クロマトグラフ装置Info
- Publication number
- JPS60257357A JPS60257357A JP11531284A JP11531284A JPS60257357A JP S60257357 A JPS60257357 A JP S60257357A JP 11531284 A JP11531284 A JP 11531284A JP 11531284 A JP11531284 A JP 11531284A JP S60257357 A JPS60257357 A JP S60257357A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- column
- liquid
- peptide
- insulin
- high performance
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
- G01N30/26—Conditioning of the fluid carrier; Flow patterns
- G01N30/28—Control of physical parameters of the fluid carrier
- G01N30/34—Control of physical parameters of the fluid carrier of fluid composition, e.g. gradient
Landscapes
- Physics & Mathematics (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Immunology (AREA)
- Pathology (AREA)
- Investigating Or Analysing Materials By Optical Means (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
イ、技術の利用分野
本発明は、「“ＩＪ’、速液体りロマトグラフによるペ
プチドやタンパクの分析装置に関−する。
プチドやタンパクの分析装置に関−する。
口 従来技術
例えば、インシュリンは５１個のアミノ酸からなる物質
であるが、ウシインシュリンとブタインシュリンの間で
は極僅くかの相違があり、インシュリン４１．銅剤の検
定においては、これら２種類のインシュリンを１ス別し
て定が分析する必突かある。
であるが、ウシインシュリンとブタインシュリンの間で
は極僅くかの相違があり、インシュリン４１．銅剤の検
定においては、これら２種類のインシュリンを１ス別し
て定が分析する必突かある。
従来、これらの２種類のインシュリンを同時に定性、定
性分析する方法として、アイソクラティック溶出条件を
適用する手法や、逆相充填剤を用いて内部標準液法を適
用した１法等が提案されているが、これらの手法におい
てはカラムコンディショニングに長いＩｔ！ｊ間を要す
るはかりでなく、測方−°結果の再現性、及び目的成分
の回収率かＪ（に低いという問題がある。
性分析する方法として、アイソクラティック溶出条件を
適用する手法や、逆相充填剤を用いて内部標準液法を適
用した１法等が提案されているが、これらの手法におい
てはカラムコンディショニングに長いＩｔ！ｊ間を要す
るはかりでなく、測方−°結果の再現性、及び目的成分
の回収率かＪ（に低いという問題がある。
このため、本発明堵らは、前にグラジエンＩ・溶出条件
によるインシュリンの定セ１、定ＪＮ分析を発表した。
によるインシュリンの定セ１、定ＪＮ分析を発表した。
この−ｒ：法によれば、高い分析精度と高い再現性をも
ってウシ及びブタのインシュＩＪ、ンを同時分析するこ
とができるが、理論段数を高く取ることができる粒径３
ｋｍ程度の超微粒子充填剤を使用する関係」−１濃度グ
ラシュエンドの急激な変化の影響を受けてベースライン
が変動し、同時に波長２］Ｏｎｍにおいて紫外吸光が発
生して分析に誤差が生じ易いはかりてなく、試ネ′ｌ注
入時におけるカラム人１．Ｉの圧力変化により充填剤の
損障を招きカラム寿命を縮めるという不都合があった。
ってウシ及びブタのインシュＩＪ、ンを同時分析するこ
とができるが、理論段数を高く取ることができる粒径３
ｋｍ程度の超微粒子充填剤を使用する関係」−１濃度グ
ラシュエンドの急激な変化の影響を受けてベースライン
が変動し、同時に波長２］Ｏｎｍにおいて紫外吸光が発
生して分析に誤差が生じ易いはかりてなく、試ネ′ｌ注
入時におけるカラム人１．Ｉの圧力変化により充填剤の
損障を招きカラム寿命を縮めるという不都合があった。
ハ、目的
本発明はこのような問題に鑑み、分析精度とカラムの耐
久性を向」−させることができるグラジエン］・溶出に
よるペプチＩ・・タンパクの分析装ＫｑをＪＪ？供する
ことを１」的とする。
久性を向」−させることができるグラジエン］・溶出に
よるペプチＩ・・タンパクの分析装ＫｑをＪＪ？供する
ことを１」的とする。
本発明の他の目的は、短い時間でカラムを再生すること
がてきる分析装置を提供することにある。
がてきる分析装置を提供することにある。
二０発明の構成
すなわち、本発明の特徴とするところは、グラシュエン
ｉ−濃度の☆−１りを「Ｓ」字状にし、四萌に流１速の
グラシュエンＩ・勾配を徐々に上Ｆ／させるようにした
点にある。
ｉ−濃度の☆−１りを「Ｓ」字状にし、四萌に流１速の
グラシュエンＩ・勾配を徐々に上Ｆ／させるようにした
点にある。
ホ、実施例
そこで、以下゛に本発明の訂細を図示した実施例に−Ｓ
づいて説明する。
づいて説明する。
ｆｔ＋ １図は、本発明の実施例を示す装置の構成図で
あって、図中符号ｌは、２台のプランジャーポンプ１ａ
、■ｂを並列接続し、ｊ１冒１にダンパ１ｃを設けてな
る送液機構で、吸入側はそれぞれ電磁（ｊ２ａ、２ｂ、
２ｃを介してキャリア液Ｊ１３ａ、３ｂ、３ｃに連通し
、１１（出口は試料インジェクタ４を介して粒径３７Ｌ
ｍ程度の微粒子充填剤を収容したカラム５を接続すると
ともに、出「−１に紫外吸光度１；４７を接続し、波長
２１０ｎｍにおける紫外吸光度を検出するように構成さ
れている。６は、グラシュエン）・制御装置で、予じめ
設定された濃度グラシュエンドに基づいて電磁弁２ａ２
ｃ の開閉、及び流速グラシュエンＩ・に基づいて送液
機構１を駆動するように構成されている。
あって、図中符号ｌは、２台のプランジャーポンプ１ａ
、■ｂを並列接続し、ｊ１冒１にダンパ１ｃを設けてな
る送液機構で、吸入側はそれぞれ電磁（ｊ２ａ、２ｂ、
２ｃを介してキャリア液Ｊ１３ａ、３ｂ、３ｃに連通し
、１１（出口は試料インジェクタ４を介して粒径３７Ｌ
ｍ程度の微粒子充填剤を収容したカラム５を接続すると
ともに、出「−１に紫外吸光度１；４７を接続し、波長
２１０ｎｍにおける紫外吸光度を検出するように構成さ
れている。６は、グラシュエン）・制御装置で、予じめ
設定された濃度グラシュエンドに基づいて電磁弁２ａ２
ｃ の開閉、及び流速グラシュエンＩ・に基づいて送液
機構１を駆動するように構成されている。
この実施例において、キャリア液槽３ａ及び３ｂのそれ
ぞれに所定のキャリア液Ａ、Ｂを収容し、同時にクラシ
ュエン！・制御装置６に立上り時がＳ字状をなし、その
後一定の比率により」二Ｈする濃度グラジェント曲線と
、一定勾配で」−昇してカラム洗浄、□Ｔ’、 Ｔｒｉ
において最大値を取って平坦となり、その後滑らかに下
陣する速度グラジェント曲線を入力する。
ぞれに所定のキャリア液Ａ、Ｂを収容し、同時にクラシ
ュエン！・制御装置６に立上り時がＳ字状をなし、その
後一定の比率により」二Ｈする濃度グラジェント曲線と
、一定勾配で」−昇してカラム洗浄、□Ｔ’、 Ｔｒｉ
において最大値を取って平坦となり、その後滑らかに下
陣する速度グラジェント曲線を入力する。
このような準備を終えた段階で、インジェクター４に試
料を注入して装置を作動すると、送液機構１は、速用グ
ラシュエンド曲線により定められた流速によりキャリア
液Ａの送液を開始する。この時点てインジェクタバルブ
を切り換え−ｒキャリア掖液により試料をカラム５に注
入する。言うまでもなく、初期の時点ではキャリア液の
流速が低く抑えられているので、カラム５の充填剤に衝
撃をりえることなく試料が９１人される。カラＡ ５に
試Ｈの注入が終ｒした時点で、徐々にＢ液の比率も高め
なからカラム５に高い濃度のキャリア液を供給する。こ
れにより、充填剤は濃度ショックを引き起こすことなく
試料を成分毎に分離し、紫外吸光＋ｙ ＋ｉｉ７により
成分が検出される。カラム５がら目的成分の排出が終γ
した時点で、Ｂ治の供給を中１１；シてＡ液だけをカラ
ム５に流して洗浄を行なう。このようにして所定時間の
洗浄が終了する直前からキャリア液の１１（ｌ速を徐々
に）゛げてキャリア液の送液を停止１−する。このよう
にしてカラトコンディショニングが終了した時点で初期
の状ｍ；に戻り、次の分析に備える。
料を注入して装置を作動すると、送液機構１は、速用グ
ラシュエンド曲線により定められた流速によりキャリア
液Ａの送液を開始する。この時点てインジェクタバルブ
を切り換え−ｒキャリア掖液により試料をカラム５に注
入する。言うまでもなく、初期の時点ではキャリア液の
流速が低く抑えられているので、カラム５の充填剤に衝
撃をりえることなく試料が９１人される。カラＡ ５に
試Ｈの注入が終ｒした時点で、徐々にＢ液の比率も高め
なからカラム５に高い濃度のキャリア液を供給する。こ
れにより、充填剤は濃度ショックを引き起こすことなく
試料を成分毎に分離し、紫外吸光＋ｙ ＋ｉｉ７により
成分が検出される。カラム５がら目的成分の排出が終γ
した時点で、Ｂ治の供給を中１１；シてＡ液だけをカラ
ム５に流して洗浄を行なう。このようにして所定時間の
洗浄が終了する直前からキャリア液の１１（ｌ速を徐々
に）゛げてキャリア液の送液を停止１−する。このよう
にしてカラトコンディショニングが終了した時点で初期
の状ｍ；に戻り、次の分析に備える。
［実施例］
第１のキャリア液として８５％正リン酸によりＰＨ２，
０Ｌ：調製シたＯ 、 ｌ モ）（ｙ）Ｎ ａ Ｈ２Ｐ
Ｏ４水溶液を、第２のキャリア液としてイソプロピル
アルコール、エチレングリコール、及び１．０モルのＮ
ａＨ２ＰＯ４水溶液をそれぞれ５：３＝２の体積比で混
合し、８５％の止リン酸によりＰＨ２，５に調製したも
のを川ｙ、＞ （、，０≦ｔ≦２分のとき に＝ １６ ｍ （ｅ／Ｚ−１）／ （ｅ’−１）２分
≦ｔ≦４分のとき、 Ｋ ＝ ３２−１６ （ｅ’５’−１） ／ （ｅ’−
１）により表わされるＳ字型曲線と、 ４分≦ｔ≦２４分のとき、 Ｋ＝０．００３ｔ により表わされる直線とを合成した曲線を濃度グラシュ
エンドに、また初期流部０．１ｍｕ／分、３０秒後から
０ 、５ ＋ ０．５／３４．５・ｔなる曲線を速度グ
ラジェントに設定する。
０Ｌ：調製シたＯ 、 ｌ モ）（ｙ）Ｎ ａ Ｈ２Ｐ
Ｏ４水溶液を、第２のキャリア液としてイソプロピル
アルコール、エチレングリコール、及び１．０モルのＮ
ａＨ２ＰＯ４水溶液をそれぞれ５：３＝２の体積比で混
合し、８５％の止リン酸によりＰＨ２，５に調製したも
のを川ｙ、＞ （、，０≦ｔ≦２分のとき に＝ １６ ｍ （ｅ／Ｚ−１）／ （ｅ’−１）２分
≦ｔ≦４分のとき、 Ｋ ＝ ３２−１６ （ｅ’５’−１） ／ （ｅ’−
１）により表わされるＳ字型曲線と、 ４分≦ｔ≦２４分のとき、 Ｋ＝０．００３ｔ により表わされる直線とを合成した曲線を濃度グラシュ
エンドに、また初期流部０．１ｍｕ／分、３０秒後から
０ 、５ ＋ ０．５／３４．５・ｔなる曲線を速度グ
ラジェントに設定する。
ウシインシュリンを１．０６ｍｇ／ｍｕで、ブタインシ
ュリンを１．０２ｍｇ／ｍｕの濃度で含む溶液を等量ず
つ４！ル合したものを試才１とし、５＃Ｌ文を１１人し
たところ第３図に示したように、水平なベースラインに
ウシインシュリンＰ、とブタインシュリンＰ２のピーク
を分Ｉ’ｌｌ’ ｌ−て検出することができ、同ｌ１１
１に９７％以上の目的成分を回収することができた。分
析終了後、第１のキャリア！４々を４ｒ＋分１．２ｍｆ
Ｌの流速でカラムに１０分間流１、て洗１！１＋を行な
い、再び同じ試料を用し）て分析を行なったところ、前
回と同一の分析結果を得るこ（よｄ＜ １ ｇ１．＝
ｇ ＋、：よ１１．。。、１４１１゜。カラ４．フアイ
シヨニングによっても高い、再現性をもってインシュリ
ンＪｕｇ １１４剤の分析を行なうことができることが
判明１．た。
ュリンを１．０２ｍｇ／ｍｕの濃度で含む溶液を等量ず
つ４！ル合したものを試才１とし、５＃Ｌ文を１１人し
たところ第３図に示したように、水平なベースラインに
ウシインシュリンＰ、とブタインシュリンＰ２のピーク
を分Ｉ’ｌｌ’ ｌ−て検出することができ、同ｌ１１
１に９７％以上の目的成分を回収することができた。分
析終了後、第１のキャリア！４々を４ｒ＋分１．２ｍｆ
Ｌの流速でカラムに１０分間流１、て洗１！１＋を行な
い、再び同じ試料を用し）て分析を行なったところ、前
回と同一の分析結果を得るこ（よｄ＜ １ ｇ１．＝
ｇ ＋、：よ１１．。。、１４１１゜。カラ４．フアイ
シヨニングによっても高い、再現性をもってインシュリ
ンＪｕｇ １１４剤の分析を行なうことができることが
判明１．た。
次にロ木薬局方インシュリン亜鉛水性懸＃１Ｊ４３：用
液を第１のキャリア液により２０倍に希釈したものを試
料としてそれぞれ５０ｇ９．．１００ ＰＩ、１００ｐ
ｕを１１人して分析したところ、第４図工、ＩＩ、■■
に示したようにウシインシュリン及びブタインシュリン
のピークＰＩ ′、Ｐ２ °を得・ることかでき、それ
ぞれのインシュリンを誤差２〜３％の範囲で定量するこ
とができた。なお、ピークＰ。は、Ｐ−オキシ安息香耐
である。
液を第１のキャリア液により２０倍に希釈したものを試
料としてそれぞれ５０ｇ９．．１００ ＰＩ、１００ｐ
ｕを１１人して分析したところ、第４図工、ＩＩ、■■
に示したようにウシインシュリン及びブタインシュリン
のピークＰＩ ′、Ｐ２ °を得・ることかでき、それ
ぞれのインシュリンを誤差２〜３％の範囲で定量するこ
とができた。なお、ピークＰ。は、Ｐ−オキシ安息香耐
である。
さらに、検出限界は、５０ｎｇ（波長２１Ｑｎｍにおい
てＳ／Ｎ＝２）であって、検（−・線は、０．３〜３．
ＯＩＬｇの範囲で原点を通る直線となった。
てＳ／Ｎ＝２）であって、検（−・線は、０．３〜３．
ＯＩＬｇの範囲で原点を通る直線となった。
へ、効果
Claims (1)
- 複数種類のキャリヤ液を所定の比率により混合するグラ
ジェント機構、該グラジェント機構からのキャリア液を
所定流量により送液する送液機構、試才゛１導入機構を
介して前記送液機構に連通して微小粒径充填剤を収容し
たカラム、該カラムの４７１出側に接続する検出手段、
及び立子り時に「Ｓ」字状に変化するｌａ度曲線と、サ
ンプル注入時に最小（１ｒｉを、カラム洗浄時に最大値
を持ち、以後減少する速瓜曲線を））って前記グラジェ
ント機構と送液機構を制御する手段とからなるペプチド
帝りンバク分析用高速液体りロマトグラフ装置。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP11531284A JPS60257357A (ja) | 1984-06-04 | 1984-06-04 | ペプチド・タンパク分析用高速液体クロマトグラフ装置 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP11531284A JPS60257357A (ja) | 1984-06-04 | 1984-06-04 | ペプチド・タンパク分析用高速液体クロマトグラフ装置 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS60257357A true JPS60257357A (ja) | 1985-12-19 |
Family
ID=14659501
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP11531284A Pending JPS60257357A (ja) | 1984-06-04 | 1984-06-04 | ペプチド・タンパク分析用高速液体クロマトグラフ装置 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS60257357A (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2006023280A (ja) * | 2004-06-09 | 2006-01-26 | Hitachi High-Technologies Corp | 液体クロマトグラフ |
| JP2010112960A (ja) * | 2010-01-18 | 2010-05-20 | Ajinomoto Co Inc | 液体クロマトグラフ装置、および分析用プログラム |
-
1984
- 1984-06-04 JP JP11531284A patent/JPS60257357A/ja active Pending
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2006023280A (ja) * | 2004-06-09 | 2006-01-26 | Hitachi High-Technologies Corp | 液体クロマトグラフ |
| JP2010112960A (ja) * | 2010-01-18 | 2010-05-20 | Ajinomoto Co Inc | 液体クロマトグラフ装置、および分析用プログラム |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Kašička | Recent developments in CE and CEC of peptides | |
| US6485642B2 (en) | Liquid chromatograph | |
| Stroink et al. | On-line multidimensional liquid chromatography and capillary electrophoresis systems for peptides and proteins | |
| CN109073616B (zh) | 糖化血红蛋白的测定方法及糖化血红蛋白测定装置 | |
| Cooper et al. | Automated sequential trace enrichment of dialysates and robotics: a technique for the preparation of biological samples prior to high-performance liquid chromatography | |
| JP2619537B2 (ja) | 液体クロマトグラフの方法，その装置，そのシステム，及びその分離カラム | |
| CN108780064B (zh) | 分析装置 | |
| Shibukawa et al. | High-performance frontal analysis for the study of protein binding of troglitazone (CS-045) in albumin solution and in human plasma | |
| US20060045810A1 (en) | Sample injector for liquid analysis | |
| Vergara-Barberán et al. | On-line aptamer affinity solid-phase extraction capillary electrophoresis-mass spectrometry for the analysis of protein biomarkers in biological fluids and food: A tutorial | |
| US9164115B2 (en) | High-speed, automated chromatographic analyzer for determination of nonglycated and glycated proteinaceous species in blood samples | |
| US5801053A (en) | Chromatographic method for the identification and characterization of hemoglobin variants in blood | |
| CN108398514B (zh) | 一种测定肽分子量的一体式阀切换二维液相色谱及其应用 | |
| JPS60257357A (ja) | ペプチド・タンパク分析用高速液体クロマトグラフ装置 | |
| Agasøster et al. | Automated analysis of oxolinic acid and flumequine in salmon whole blood and plasma using dialysis combined with trace enrichment as on-line sample preparation for high-performance liquid chromatography | |
| JPS6250659A (ja) | 液体クロマトグラフへの試料導入方法 | |
| Lingeman et al. | Guidelines for bioanalysis using column liquid chromatography | |
| US12422413B2 (en) | Automated sample handling system for liquid chromatography-mass spectrometry | |
| JPH07120447A (ja) | グリコヘモグロビン分析計 | |
| Jandik et al. | New technique for increasing retention of arginine on an anion-exchange column | |
| CN118067907A (zh) | 一种血液中利妥昔单抗的检测方法 | |
| CN114112594B (zh) | 一种胰岛素样生长因子-1预处理试剂 | |
| JP7829343B2 (ja) | アミノ酸分析方法及び液体クロマトグラフ装置 | |
| Kuhlenbeck et al. | On-line solid phase extraction using the Prospekt-2 coupled with a liquid chromatography/tandem mass spectrometer for the determination of dextromethorphan, dextrorphan and guaifenesin in human plasma | |
| Cooper et al. | Automatic preparation of human serum samples for analysis of the drug enoximone and its sulphoxide metabolite using high-performance liquid chromatography |