JPS6250659A - 液体クロマトグラフへの試料導入方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 （産業上の利用分野） 本発明は試料導入装置を用いて液体クロマトグラフへ試
料を導入する方法に関するものである。

（従来の技術） 第１図に液体クロマトグラフの試料導入装置の例を示す
。

１０は切換えバルブとしての六ポートバルブである。六
ポートバルブｌＯのポート１には三ウェイバルブ１２を
介して流路１４又は１６が接続されている。流路１４は
計量用シリンジ１８に接続　　゛されているとともに、
電磁弁２０を介して洗浄ポンプ２２に接続されている。

２４は洗浄液である。

三ウェイバルブ１２につながる他の流路１６は逆止弁２
６を経てドレインに導かれている。

六ポートバルブ１０のポート２には試料吸入流路２８が
接続され、その試料吸入流路２８の先端には試料吸入針
３０が設けられている。六ボートバルブ１０のポート３
とポート６の間にはサンプルループ３２が接続されてい
る。また、六ポートバルブ１０のポート４にはカラム３
４が接続され、そのカラム３４の出口には検出器３６が
設けられている。六ポートバルブｌＯのポート５には移
動相リザーバ３８中の移動相を供給する送液ポンプ４０
が接続されている。ポート４とポート５の間には六ボー
トバルブ切換え時の圧力変化を緩和する抵抗管４２が設
けられている。４４は試料瓶、４６は洗浄ポートである
。

この試料導入装置を用いてカラム３４に試料を導入する
には、まず六ボートバルブ１０と三ウェイバルブ１２が
図の状態に設定されて試料吸入針３０が洗浄ポート４６
に挿入され、電磁弁２０が開いて洗浄ポンプ２２が動作
し流路が洗浄される。

次に、電磁弁２０が閉じた後、試料吸入針３０が試料瓶
４４に挿入され、計量用シリンジ１８により試料が吸引
される。このとき、吸引された試料の先端の広がりをも
たない部分が六ポートバルブ１０のポート１のところま
でくる。

六ポートバルブ１０が反時計方向に回転させられてポー
ト２と３、ポート４と５、ポート６と１が導通した後、
計量用シリンジ１８によってカラムに導入すべき試料量
だけサンプルループ３２に試料が吸引される。サンプル
ループ３２への試料の吸引が終ると、六ポートバルブ１
０が時計方向に回転させられて図のようにポートｌと２
、ポート３と４、ポート５と６が導通するように切り換
わり、サンプルループ３２内の試料は送液ポンプ４０か
らの移動相により押し流され、カラム３４に導入される
。

流路１６は例えば設定された試料吸引量が計量用シリン
ジ１８の１ストロークの吸引量より多い場合などに使用
される。その場合、三ウェイバルブ１２は一旦ポート８
と９が導通する位置に切り換えられた後、計量用シリン
ジ１８内の液がドレインに排出され、再び三ウェイバル
ブ１２はポート７と８が導通する位置に切り換えられ計
量用シリンジ１８による試料の吸引が行なわれる。

（発明が解決しようとする問題点） 第１図の試料導入装置を上記のように動作させるとき、
試料吸入針３０の先端から六ボートバルブ１０のポート
１に至る試料吸入流路に吸入された試料は、次回の試料
導入までに洗浄ポート４６からドレインへ排出され、試
料ロスとなる。

ところで、最近の液体クロマトグラフの分野では１例え
ば生体試料などのように貴重で、かつ、少量しかない試
料を、検出感度が十分でないためにその試料の全量をカ
ラムに導入したいという要求が強くなっている。しかし
、従来の試料導入方法では上に述べたように試料注入時
のロスが多く、このような要求を満たすことができない
。

また、試料をカラムに導入する際、気泡（空気）が試料
とともにカラムに入らないようにしなくてはならない、
液体クロマトグラフの検出器として紫外分光光度計を用
い、検出波長を短波長（例えば２１０ｎｍ）に設定した
ような場合、クロマトグラム上に空気のピークが現れる
。第２図に示されるクロマトグラムでは、ピークＰ＋は
ベンゼン。

ｐ＝はナフタリン、Ｐ３はジフェニル、Ｐ４は溶媒、Ｐ
ａは空気である。図中の数値は保持時間である。このよ
うにカラムに気泡が入ると、クロマトグラムの保持時間
が空気と接近している試料成分の同定や定量ができなく
なる。

本発明は、液体クロマトグラフへの注入時のロスをなる
べく少なくして試料をカラムに導入する試料導入方法を
提供することを目的とするものである。

（問題点を解決するための手段） 本発明は、第１図には示さ゛れるような試料吸入流路（
２８）と計量用シリンジ（１８）との接続、試料吸入流
路（２８）、サンプルループ（３２）及び計量用シリン
ジ（１８）の接続、並びに移動相流路（３７）、サンプ
ルループ（３２）及びカラム（３４）の接続が切換えバ
ルブ（１０）により切り換えられてカラム（３４）へ試
料が導入される試料導入装置を用いる試料導入方法であ
って、試料吸入流路（２８）へ試料（５０）を吸引する
際、所定量の試料（５０）の前後を気泡（５２゜５４）
で挟み、サンプルループ（３２）へは試料（５０）のみ
を充填した後、カラム（３４）に試料（５０）を導入す
るようにした方法である。

（実施例） 第１図の試料導入装置を用いて、一実施例を工程順に説
明する。

試料が吸入される前に流路が洗浄される。そのため、六
ポートバルブｌＯと三ウェイバルブ１２は図に示される
状態になっており、試料吸入針３０の先端から洗浄ポン
プ２２へつながる流路は洗浄液で満たされている。

（１）試料吸入針３０が試料瓶４４に挿入される前に、
計量用シリンジ１８により空気５２（容積２〜３μＱ）
が吸引される。

（２）試料瓶４４に試料吸入針３０が挿入され、カラム
に導入される試料量ＶｏμＱより少し多めの量（Ｖｏ＋
２α）μＱの試料が吸引される。

（３）試料吸入針３０が試料瓶４４から抜かれ、計量用
シリンジ１８により空気５４が吸引され、試料５０の先
端が六ポートバルブ１０のポート１の計量用シリンジ１
８鍔のＸ点の位置にくるまで吸引される。六ポートバル
ブ１０のポート１の出口Ｙ点からＸ点までの流路の内容
積がαμＱである。

（４）この状態で、六ポートバルブ１０が反時計方向に
回転させられ、ポート２と３．ポート４と５、ポート６
と１が導通させられ、計量用シリンジ１８によりサンプ
ルループ３２中にカラムに導入すべき量ｖＯμΩの試料
が吸引される。

（５）六ポートバルブ１０が時計方向に回転させられて
ポートｌと２、ポート３と４、ポート５と６が導通させ
られると、サンプルループ３２中の試料は送液ポンプ４
０からの移動相により押し出されてカラム３４に導入さ
九る。

（６）試料吸入針３０が洗浄ボート４６に挿入され、試
料先端部と後端部にあった試料２αμＱの試料と空気は
、電磁弁２０が開くことにより洗浄ポンプ２０により供
給される洗浄液により洗い流される。

以上の動作は、試料吸入針３０の先端から六ボートバル
ブ１０のポート１の出口Ｙ点までの容積を予め測定して
おくことにより、コントローラからの制御により自動的
に行なうことができる。

以上の実施例では、切換えバルブとして六ポートバルブ
を使用しているが、それに限られるものではない。

（発明の効果） 従来の試料導入方法によれば、試料吸入針の先端から切
換えバルブまでの流路容積が試料ロスとなっていた。し
かし、本発明の試料導入方法によれば、試料吸入針の先
端から切換えバルブまでの流路容積の大小に関係なく、
試料注入時の試料ロス（２α）を１〜２μＱにまで減少
させることができる。そのため、液体クロマトグラフの
分野で多く用いられる貴重な生体試料などのカラムへの
導入に非常に有効である。

【図面の簡単な説明】

第１図は本発明方法が実施される液体クロマトグラフの
試料導入装置の一例を示す概略図、第２図は空気も注入
された液体クロマトグラムを示す図である。 １０・・・・・・切換えバルブとしての六ポートバルブ
、１８・・・・・・計量用シリンジ、 ２８・・・・・・試料吸入流路、 ・３２・・・・・・サンプルループ、 ３４・・・・・・カラム、 ３７・・・・・・移動相流路、 ５０・・・・・・試料。 ５２．５４・・・・・・気泡。

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. （１）試料吸入流路と計量用シリンジとの接続、試料吸
   入流路、サンプルループ及び計量用シリンジの接続、並
   びに移動相流路、サンプルループ及びカラムの接続が切
   換えバルブにより切り換えられてカラムへ試料が導入さ
   れる試料導入装置を用い、 前記試料吸入流路へ試料を吸引する際、所定量の試料の
   前後を気泡で挟み、 前記サンプルループへは試料のみを充填した後、前記カ
   ラムに試料を導入することを特徴とする液体クロマトグ
   ラフへの試料導入方法。