JPS60260558A - 試験試料中の加水分解分析対象物の存在を検出するための新規なエステル - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 （序論） 本発明は、成る種の分析対象物成分の存在について試験
試料を分析するのに有用な新規な化合物に関する。これ
らの分析対象物には、白血球、エステラーゼ及びプロテ
アーゼが含まれる。尿中の白怖球の検出は医学上の診断
において特に重要である。

患者の尿中に異常なレベルの白血球が存在することは、
腎臓又は尿生殖器路の感染又は他の機能不全（ｄｙｓｆ
ｕｎｃｔｉｏｎ）のような病理学的状態を表わしている
ことがあり得る。そのため尿中白血球の正確な情報は一
師にとってこれらの病気を診断し治療するための有用な
道具となりうる。

従来の医療業者は、尿中の沈澱物又は遠心分離されてい
ない尿中の白血球の個数を数える目視による測定方法に
依存して来ているが、それは遠心分離器及び顕微鏡のよ
うな高価な機器並びに臨床医師の側の過度の時間の消費
を必要とする方法である。また従来の方法には、完全な
細胞（ｉｎｔａｃｔｃｅｌｌｓ　）　Ｌか測定されない
という難点がある。銀系に存在する白血球は、床机な細
胞溶解に有利となり得る条件の下におかれる。例えば−
値の異常に高い尿の場合には、白血球の半減期は非常に
短かく、６０分程度になり得ることが知られている。

分解された細胞は目視検査技術による検出を逃れるため
、誤った低い測定値又は間違った陰性（ｎｅｇａｔｉｖ
ｅｓ）を得ることがある。

白血球の２つの顕微鏡分析技術−尿沈澱及び非遠心分離
均質化法−のうち、明らかに前者の方法が最も望ましい
。後者の方法によれば、信頼できる結果は得られるが、
非常に多くの場合に、沈澱尿の観察が用いられている。

尿試料は遠心分離し、沈澱物を単離し、顕微鏡検査に付
さなければならない。検査者は、視野内に現われた白血
球の個数を数える。しかしこの作業は、上皮細胞及び塩
粒子のような沈澱物中の他の尿成分の存在によって更に
複雑になる。沈澱成分の量が可変なことと、その他の複
雑化要因例えば試料の不均質及び顕微鏡装置間の光学的
出力の差異などが組み合わされて、最終的な測定値に大
きな誤差を生ずることがある。

多くの時間を要する技術並びに経費のかかる装！　置を
無用とし、エステラーゼ、プロテアーゼ及ヒ白血球のａ
胞（細胞が完全であろうと溶解していようとにかかわら
ず）に正確に応答する、簡単ですみやか力白血球測定方
法は、実際大きな技術上の進歩をもたらすであろう。本
発明はそのような飛躍的進歩をもたらすものである。更
に、本発明は、白血球を”見る”能力にではなく、白血
球が示す酵素活性（ｅｎｍｙｍａｔｉｃ　ａｃｔｉｖｉ
ｔｙ　）に基づくため、前述したような不正確さから実
質的に免れている。

（発明の背景） 酵素活性（ｅｎｓｙｍａｔｉｃ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　）
によって開裂された時に色その他の検出可能な物質を形
成する成る種のエステルの使用は、従来から、多数の文
献に記載されている。かくして、英国特許第１．１２８
，３７１号には、体液中の加水分解酵素の検出にとって
有用なりロモｒン（色原体）として、インドキシルエス
テル及びチオインドキシルエステルを用いることが開示
されている。酵素はエステルを開裂して遊離インドキシ
ルを生成させ、このものは次に酸化し、容易に観察可能
な青色の染料である二量体生成物のインゾゴを生成する
。この活性は、他の酵素の中でも特にコリンエステラー
ゼによると言われている。前記英国特許は、エステル基
質のインドキシル部分のほかに酸基が被検出酵素との特
別の関連において選択されることも教示している。例え
ば、エステラーゼ又はリフ９−ゼの検出のために酸基が
それぞれ酢酸塩又はラウリン酸塩もしくはステアリン酸
塩でありうることが記載されている。ホスファターゼＸ
ｔｄスルファターゼのような酵素を検出するためには、
アシル基は、無機であってもよい。従って前記英国特許
は、エステル分解酵素を測定するための基質として、色
原体エステルの使用を教示していると見ることができ、
これらのエステルは、エステルのアルコール部分として
、インドキシル又ハチオインドキシルを含み、アシル部
分は、測定するべき特定の酵素に役立つように適合させ
られる。

アシル基がＮ−保護されたアミノ酸又はペプチドから成
るエステルに対するエステラーゼ特異性を実証している
下記の２つの文献はど、アシル基の注意深い選択の効果
がより明瞭に例示されている文献はない。即ち、ヤノフ
（Ｊａｎｏｆｆ）ほかのｒＰｒｏｃ。

Ｓｏｃ、Ｅｘｐｅｒ、Ｂｉｏｌ、Ｍｅｄ、Ｊ　１３６　
：　１０４５〜１０４９（１９７１）は、アラニンエス
テルが人の白血球から得られたエステラーゼの特異的基
質であることを教示している。この文献は特に人の白血
球顆粒の抽出物がＮ−アセチル−Ｌ−アラニル−Ｌ−ア
ラニル−Ｌ−アラニンメチルエステルを加水分解しうろ
ことを教示している。更に、該抽出物は、Ｌ−７ラニン
ーｐ−ニトロフェノールエステルを同様に加水分解し、
黄色のｐ−ニトロフェノール発色体を生成させる。

また、スィートマン（ｓｗｅｅｔｍａｎ）　ほかの、［
Ｊｏｕｒ。

−Ｌ−７ラニルーＬ−アラニンと同様Ｋ、１−１フチル
ーＮ−アセチル−ＤＬ−アラニン及び１−す７チルプチ
レートを用いることを開示している。

米国特許第４，２７８，７６３号は、デーリングルマン
ハイム社（１３ｏｅｈｒｉｎｇｅｒ　Ｍａｎｈｅｉｍ　
ＧｍｂＨ）に譲渡されているが、これらの教示を組合せ
て白血球のエステラーゼ活性の伝統的な色原体基質の更
に別の例として、アミノ酸又はペプチドのインドキシル
又ハチオインドキシルエステルに到達している。

更に、米国特許第４　、２７８　、７６３号は、エステ
ル分解傾向（ｅｓｔｅｒｏｌｙｔｉｃ　ｐｅｎｃｈａｎ
ｔｓ）におけるプロテアーゼ及びエステラーゼの同等性
を教示している。

周知のように、エステル加水分解反応は、多くのアルコ
ール類を含む多くの核剤の存在によって活性化させるこ
とができる。即ち、エステラーゼによるｐ−ニトロフェ
ニルアセテート及び酢酸フェニルの加水分解速度は、メ
タノール及びブタノールを添加すると、２．５〜５．５
倍に増大する（グリーンザイド（Ｇｒｅｅｎｚａｉｄ）
及びイエンクス（Ｊｅｎｅｋｓ）「生化学Ｊ１０（７１
，１２１０−１２２７（１９７１）参照）。

更にその効果は、ｎ−アルキル基の長さと共に増大する
（ウィン（ｗｙｎ　ｎｅ　）及びシャラテイン（Ｓｈａ
ｌａｔｉｎ）、「ユーロピアン・ツヤ−ナル・オプ・バ
イオケミストリー（Ｅｕｒ、Ｊ、Ｂｉｏｃｈｅｍ、月、
３１．５５４−５６０（１９７２）参照）。

特に、アルコールのこの活性化効果は、アミノ酸エステ
ルについて観察されている。ｐ−ニトロフェニルＮ−ア
セチル−し−アラニネートの加水分解は、メタノールの
存在によって活性化（加速）される。ファストレツ（Ｆ
ａｓｔｒｅｚ）　及びフェルシト（Ｆｅｒｓｈｔ）、「
生化学Ｊ１２（１１）、２０２５〜２０３４（１９７３
）参照。高分子量アルコールは、ｐ−二トロフェニル・
ｔ　−ＢＯＣ−Ｌ−チロシネートの、エステラーゼによ
って誘発される加水分解の速度を増大させる（アッシュ
（Ａｓｈｅ）　及びチンマー（７，ｔｍｍｅ　ｒ　）、
ｒ１３ｉｏｃｈｅｍ、ａｎｄ　１３ｉｏｐｈｙｇＪ−Ｌ
ｅｇ−Ｃｏｍｍ、　Ｊ　７５（１）、１９４〜１９５（
１９７７）　参照）。米国特許第４．２９９，９１７号
には、他の既知のエステル加水分解活性化剤、例えば成
る種の金属錯体、ピリジン誘導体及びイミダゾールが開
示されている。

成る種のジアゾニウム塩を用いてフェノール及び擬似フ
ェノールと結合させアゾ染料を生成させることも知られ
ている（マーチネット（Ｍａｒｔｉｎｅｔ）及びト／ｌ
／　二、ｘ、　（１）ｏｒｎｉｅｒ）、ｒＣｏｍｐｔ、
Ｒｅｎｄ、Ｊ、１７０　。

５９２（１９２０）ｐｊ照）。この技術をエステラーゼ
分析に使用して、酢酸インドキシルをエステ５−ゼによ
り加水分解してインドキシルを生成させ、このものを次
にジアゾニウム塩と結合させて対応するアゾ染料を生成
させる（ホル）　（ＨＯｌｔ）　及びヒツクスＱ（ｉｃ
ｋｓ）、ｒＪ、ｃｅｌｌ　Ｂｉｏｌ、Ｊ　２９　、３６
１〜３６６（１９６６）：ゴツスラウ（Ｑｏｓｓｒａｕ
）　ｒ組織化学」５７．３２３〜３４２（１９７８）：
西独国特許公開公報第３１　１７　７２１号（出願臼、
１９８０年５月９日）参照）。

医療診断分析とは明らかに類似していないが長い間多く
の実験有機化学の方法の宝庫であった技術である染料化
学は、成る種のアミノ酸及びその環化反応について、い
くらかの指針を与える。即チ、β−フェニルグリシド酸
の塩にグリシンを添加し、次に高温の無水酢酸で処理す
ることによってピロールを形成することは、公知である
。（マーデルング（Ｍａｄｅｌｕｎｇ）　及びオーペル
マン（Ｏｂｅ　ｒｍａｎｎ）、「ペリヒテ（Ｂｅｒ、）
Ｊ　６３．２８７０（１９３０）参照）。

（発明の概要） 本発明は、試験試料中の白血球、エステラーゼ及び／又
はプロテアーゼの存在を測定するうえで有用な新規な化
合物を提供するものである。本発明は、又、該化合物の
製造方法に関する。この化合物は、式 （式中、ＡＵ酸残基であり、Ｒは低級アルキル、アリー
ル、カルメキシル、カル？キシルエステル、アミド又は
シアノであシ、Ｒ”はＨ又は低級アルキルであり、そし
てＸは０、Ｓ又はＮＲ’（この時Ｒ１はＨ１低級アルキ
ル又はアリールである）である）によって表わされる化
合物である。

本発明による製造方法は、構造が、式 （式中、ＢはＮ−ブロックされたアミノ酸残基又はＮ−
ブロックされたペプチド残基であり、Ｒハ低級アルキル
、アリール、カルボキシル、カルボキシルエステル、ア
ミド又はシアノであり、そして、Ｒ“はＨ又は低級アル
キルである）によって表わされるエステル（１）の製造
に関する。

この方法は、 （ａ）構造式 を有する３−ヒドロキシピロールを生成させ、Ｃｂ）　
Ｎ−ブロックされたペプチド又はＮ−ブロックされたア
ミノ酸の酸ノーロダン化物を有機酸の存在下３−ヒドロ
キシピロールに添加して、生成物の混合物を生成させ、
そして、 （ｅ）　該生成物の混合物からエステル（Ｉｎを単離す
る 順次の工程から成ることを特徴とする。

前記工程（ａ）は、 ゛　。、ヶ、７、ア２ヵ９□。−ｒ−／　３ｍ　ｍ−Ａ
　−造式 を有する化合物の混合物水溶液を、該混合物水溶液の−
を少くとも７に保つに足りる量のアルカリ金属重炭酸塩
の存在下反応させて、第１反応混合物を生成させ、 （ＩＩ）該第１反芯温合物にＨＯＯＣ−ＣＨ２−ＮＨＲ
’　（この時、Ｒ′は上に定義されている通り）を添加
して、第２反応混合物を生成させ、 ＱＩＤ　該第２反応混合物から水分を除去して、実質的
に乾燥した第２混合物を生成し、 （ｌφ　有機塩基の存在下肢乾燥した第２混合物にカル
がン酸無水物を添加して、第３反応混合物を生成させ、 付）工程１ｖ）によって得た第３反応混合物を加水分解
環境に付して、３−ヒドロキシビロール含有反応混合物
を生成させ、 舗　３−ヒドロキシピロールを単離スる順次の工程から
成る。

（定義） 次の定義は、本発明の範囲を明らかにし、製造その製造
及び使用を可能とするためになされる。

「酸残基」という表現は、特徴的な酸性の一囲基のない
エステル生成酸の誘導体構造を含む。従って、この用語
は、リン酸、スルホン酸、炭酸及び他のエステル生成性
−〇Ｈ基含有酸のアシル部分を含む。

「Ｎ−ブロックされたアミノ酸残基」及び「Ｎ−プロツ
クされたペプチド残基」という用語については、２つの
点から定義する必要がある。「Ｎ−ブロックされた」と
は、窒素原子に結合された水素が、保護基、例えばアセ
チル、ｐ−トルエンスルホニル（トシル（ｔｏｓｙｌ）
　）”及ヒ第３ブチルオキシカルボニル（ｔ−ｎＯｃ）
及び他の当該技術において周知のＮ−保護基により置換
される、アミノ酸又はペプチドのアミノ基の化学に関す
る。

「アミノ酸残基」及び「ペプチド残基」という表現は、
そのカルブキシル基の一〇Ｈのないアミノ酸又はペプチ
ド分子を意味する。

「アリール」という表現は、芳香族性を有する全ての環
系を意味する。この用語には、５員及び６員の環、例え
ばビロール、フェニル、ピリジル並びに縮合環系例えば
ナフチルも含まれる。従って、芳香環系け、ヘテロ環式
でも、ホモ環式でもよく、また白血球細胞、ニーステラ
ーゼ又ハゲｏ７−アーゼを検出する能力において本発明
の組成物又は試験具の作用又は機能を置換基が妨害しな
い限りで、置換基を有していてもよく、また有していな
くてもよいっこれらの置換基の選択は１本明細書の開示
があれば日常の実験室の決定事項となる。

本明細書中で使用されている「低級アルキル」という表
現は、炭素原子数的１〜６のアルキル基である、低級ア
ルキルの意味にはメチル、エチル、ｎ−プロピル、イソ
ゾロビル、ｎ−ブチル、第２ブチル、第３ブチル並びに
ペンチル及びヘキシルの全ての異性体が含まれる。これ
らは置換されていなくとも、また、白血球細胞、エステ
ラーゼ又はプロテアーゼの検出能力において試験具又は
組成物の作用ないしは機能が置換基によって妨害されな
い限シ、置換されていてもよい。これらの置換基は、本
明細書の開示があれば、日常の実験室の決定により選択
することができる。

（発明の詳細な 本明細書の錆求の範囲に示された化合物は、特別の需要
に適合するようにそのアルコール（フェノール）及びア
シル部分を選ぶことのできる広範なエステル金倉む。従
って、アルコール部分は、特定の所望の応答例えば特定
の色又は吸光性を与えるように適合させ、またアシル部
分は検出しようとする特定の分析対象物に従って選択す
ることができる。

アルコール部分 エステルのアルコール部分は、非局在化し、環中の２重
結合と協調して芳香族性を生ずることがあり得る電子対
を有するヘテロ原子を含むという点で、擬似フェノール
である。従ってヘテロ原子Ｘは、酸素、イオウ又は蟹素
であり得る。Ｘが窒素である場合に、原子の置換はなさ
れていなくても（即ちＮｕでも）低級アルキル又はアリ
ール基により置換されていてもよい。化合物はこの芳香
族性の結果として、エステルの加水分解後に容易にヅア
ゾニウム塩と結合してアゾ染料となりうる。

環の５−位の種々の置換基によって色形成及び貯蔵安定
性が向上することが見出された。即ちＲは、白血球細胞
、エステラーゼ又はプロテアーゼを検出する能力につい
て試験具又は組成物の作用又は機能を妨害しな込限り低
級アルキル、アリール、カル〆キシケ、カルボキシルエ
ステル、アミド、シアノ又はその他の置換基としてよい
。白血球、エステラーゼ又はプロテアーゼについて分析
する目的のためには、Ｒがフェニル又はｐ−クロロフェ
ニルであるエステルが好ましい。

アシル部分 アシル部分Ａは、同様に広範な範囲をもち、計画された
特定の分析目的により選定される。尿中白血球の測定の
ように、エステラーゼ又はプロテアーゼの活性について
試験試料を分析することが必要な場合に、Ａは、アミノ
酸又は４デチド残基としてよい。この目的には、Ｎ−）
シルーＬ−アラニン残基が好ましい。

ピロール及びそのエステルの型造 本発明には、Ｎ−ブロックされたアミノ酸及びペプチド
（１１）の成るピロールエステルを合成する新規な方法
も含まれる。この方法の第１工程は、構造式（至）を有
する３−ヒドロキシピロールの生成からなる。これは、
構造式■の化合物を出発物質として始まる多工程の合成
によって実現される。この化合物を、アセトン又は他の
ケトンの存在下反応させ、式 のエポキシド化合物を生成する。エポキシ化は「オキソ
ン（ＯＸＯｎｅ）　Ｊ　（デュポン社製）として市販さ
れているＫＨＳ　ｏＩｌなどのアルカリ金属のモノ過硫
酸塩を用いて行なうことが好ましい。アルカリ金属の重
炭酸塩例えばＮａＨＣＯｓの過剰量の存在下、即ち一７
以上で反応を行なった場合、この工程のｐ）ｌ　制御（
文献（４）　、：　Ｊ、ｏ、工Ｆ　７−ズ（Ｊ、Ｑ、Ｅ
ｄｗａｒｄｓ）ホカ、「光化学及び光生物学（Ｐｈｏｔ
ｏｃｈｅｍ、Ｐｈｏｔｏｂｉｏｌ、）Ｊ３０．６３（１
９７９）及び文献（２）’　：Ｒ，カーチ（Ｒ，（：：
ｕｒｃｉ）ほか、「ツヤ−ナル・オプーオーガニツク・
ケミス　ト　リ　（Ｊ、Ｏｒｇ、Ｃｈｅｍ、、））Ｊ　
４　５　、４　７　５　８　（１９８０）参照）が著し
く容易になることが見出された。反　′芯温合物を約２
０°〜３０℃の温度範囲に保つことが好ましい（しかし
この温度範囲は決定的なものではな（へ）。得られた反
応混合物を酸性化した後、有機溶剤例えば塩化メチレン
を添加することによって、工Ｉキシドを有機相に抽出す
ることができる。

次に有機相を塩基水溶液で洗浄する。この工程によって
、エポキシドは水溶性になり、水相に移される。水相は
分離され、グリシンが添加され、次式の複塩 １ ＨＲ’ を含む反応混合物を生成させる。

この工程は、塩基水溶液の…値が約１０．５〜１２の範
囲にある時に最もよく行なわれることが見出された。（
好ましい一値は約１１．５でちる）。この工程の温度を
好ましくは約１００℃に上昇させ、低沸点液体（アセト
ン及び水）の実質量を除去する。蒸気温度が１００℃に
近くなった時、約１００℃において還流が持続されるよ
うに加熱を維持する。冷却し、有機溶剤例えばＣＨ，Ｃ
ｔ２　で洗浄し、蒸発乾個して残留水を除いた後、溶剤
例えばエタノール中において沸騰させ、結晶を分離する
ことによって、化合物Ｍを残留物から単離する。

次に化合物（至）を、カルボン酸無水物で処理して、式 予　（式中、Ｒ“は低級アルキル又はアリールであり、
Ａｃ　は、無水物が無水酢酸である場合に酢酸塩である
）によって表わされる化合物を生成する。この工程は、
最初は周囲温度で行ない、最終的には約９０°〜約１４
０℃にまで加熱する。この工程の眼目は、ピリシンのよ
うな有機塩基を含めることにある。好ましくは化合物（
９）を塩基中に懸濁させ、次にこれに酸無水物を加える
。

このようにして生成させた、化合物（至）を含有する反
応混合物を蒸発乾個して残留無水物及び溶剤を除去し、
生成物（至）を回収する。

加水分解環境の下に化合物（至）を処理し、式の化合物
を得る。加水分解環境として好ましいのは、アルコール
例えばメタノールと塩基水溶液例えば２ＮのＮａ　ＯＨ
との混合物である。化合物（６）、アルコール及び塩基
水溶液を低温例えば約−１５℃〜約１０℃で混合するこ
とが望ましい。一般に化合物（至）は、この温度で溶液
から析出し、例えば濾過によって単離され、精製される
。

製造方法の第２工程では、化合物（至）をエステル化し
て、式 （式中、ＢはＮ−ブロックされたアミノ酸又は４デチド
残基である）によって表わされる生成物を生成する。化
合物（至）を、有機塩基例えばピリジン、及び有機酸例
えばトリフルオロ酢酸、蓚酸、くえん酸、酢酸又は他の
カルがン酸を含有する無水物溶剤例えばテトラヒドロフ
ランｒ　ＴＨＦ　Ｊ、ソエチルエーテルなどに添加する
。この目的に好ましいのは、ピリジン及びトリフルオロ
酢酸である。

次にペプチド残基又は所望のブロックされたアミノ酸の
ハロゲン化アシルを徐々に添加する。反応が終了したら
、反応混合物を必要によりくえん酸及び酢酸エチルなど
の緩衝液を含有した水で急冷し、生成物（財）を回収す
る。

（実験） 以下の実施例は、本発明の製造及び使用において読者を
さらに助ける走めのものである。従って、好ましい実施
態様を実験の詳細を示して記述し、その効用について分
析がなされる。これらの実施例は、単に説明の為であシ
１、決して、本明細書において説明され請求される本発
明の範囲を制限する意図のものではない。

概括的資料 以下の実施例の記載に使用される略記号の意味は次の通
りである。

１＝ダラム ゆ＝キログラム Ｌ＝リットル ｍＬ＝ミリリットル Ｍ＝モル濃度 附＝ミリモル濃度 Ｎ＝規定度 ｔｑ　＝当量 ｍｏｔ＝ダラム分子（モル） 皿ｏｔ＝（ダラム分子）ｘｉＯ（ミリモル）ａｑ＝＝水
性（水溶液の） ｈｒ＝時間 面＝薄層クラマドグラフィー 赤外線（ＩＲ）スペクトルは、特に他の記載がない限り
、ＣＨＣ４，中溶液として、パーキン−エルマー（ｐｅ
ｒｋｉｎ　−Ｅｌｍｅｒ　）　７１０　Ｂ又は２３７型
赤外線分光光度計によって得た。ポリスチレンフィルム
の１６０２　ｃｍ−’帯を外部較正規準として用いた。

信号はσ−１として記録した。

ＪＥＯＬ、　ＦＸ−９００分光計を用いて８９．５５　
］ＶＩＥ（Ｅで、又はバリアｙ　（Ｖａｒｉａｎ）　Ｔ
　−６０分光計を用いて６０ＭＥ（ｚで、陽子磁気共鳴
（ＩＨＮＭＲ）スペクトルを得た。他の記載がない限り
、ＣＤＣＬｆｉ溶液中においてスペクトルを得た。化学
的シフトは、内部標準テトラメチルシランから低磁場方
向への百万分率（ｐｐｍ）で報告されている。

炭素−１３磁気共鳴（”ＣＮＭＲ）スペクトルは、フー
リエ変換及び全陽子広帯域ノイズデカップリングにより
、ＪＥＯＬ　ＦＸ　９０　Ｑ分光計を用いて、２２．５
　ＭＨ乞において得た。スペクトルは、他の記載がない
限り、ＣＤＣ１Ｂ溶液中において得た。炭素シフトは、
内部標準テトラメチルシランかう低磁場方向への百万分
率で報告されている。

電子イン・ぞクト（ＥＩ）又は高速原子衝撃（ＦＡＢ）
モードにおいて作動するヒユーレット−パラカード（Ｈ
ｅｗ　１ｅｔｔ−ｐａｃｋａｒｄ）　５９８５　Ａ分光
計を用いて、質量スにクトルを得た。ＡＥＩＭＳ−９０
２型分光計によって高分解能質素スペクトルを得た。

有機試薬は、オール−ドリツヒ会ケミカル・カン／臂＝
　−（Ａｌｄｒｉｃｈ　Ｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｃｏｍｐａ
ｎｙ）　から入手し、他の記載がない限り、精製せずに
使用した。無機試薬は、フィッシャー・サイエンティフ
ィック・力ｙ　ノ！　＝　−（Ｆｉｓｈｅｒ　５ｃｉｅ
ｎｔｉｆｉｃ　Ｃｏｍｐａｎｙ）又は他の大手販売業者
からのＡＣ８試薬用であった。反応溶剤は、ＡＣ８試薬
用、テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）は、ヅエイ・ティー
・ペイカー・ケミカル・カンパ＝　−（Ｊ、Ｔ、Ｂａｋ
ｅｒ　Ｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｃｏｍｐａｎｙ）　からのＨ
ＰＬＣ用であった。プライン（ｂｒｉｎｅ）は、塩化ナ
トリウムの飽和水溶液を指す。

薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）　ハ、Ｅ、メルク社
（Ｅ　、　Ｍｅｒｃｋ）からのシリカゲル６０Ｆ−２５
４プレートを用いて行なった。カラムクロマトグラフィ
ーは、Ｅ、メルク社（Ｅ　、　Ｍｅｒｃｌｃ）　のシリ
カゲル６０（７０−２３０メツシユ）を用いて行なった
。ここに報告される融点及び沸点は全て無修正値である
。

化合物の合成 ３−　（Ｎ−）シルーＬ−アラニニルオキリー５−フェ
ニルビロール（４）の合成 （４）の合成を次の反応連鎖によって示す；Ｎ−トシル
−Ｌ−アラニン Ｌ−アラニア　（１００ｔ　：　１．１１ｍｏｔ）を、
ＩＮの水酸化ナトリウム（ａｑ）　２．２５　Ｌに溶解
し、５℃に冷却し、撹拌しながらトルエン４５０　ｍＬ
中のｐ−）ルエンスルホニルクロリド（２１８ｆ：１．
１１　ｍｏＬ）溶液を徐々に添加した。混合物を周囲温
度で２０ｈｒ　（時間）撹拌した。各層を分離し、冷却
した水溶液層を濃塩酸でｐＨ１に酸性化した。

白色一固体の表題化合物を戸数し、水で洗浄し、乾燥さ
せた。収率１７８．５　ｆ　（６６％）、融点１３４〜
１３５℃であった。ＩＲＣＣＨＣｌ、）σ−１１７２６
．１３４０，１１６５，１０９５：’ＨＮＭＲ（ＤＭＳ
Ｏ−Ｄ６）δ１．２０　（ｄ　、　Ｊ＝７，３Ｈ）　、
　２．４０　（ｓ　、　３Ｈ）　。

３．８５（ｐ、Ｊ＝８．１Ｈ）、６．４（ｂｒｇ、ＩＨ
）（ＣＯｚＨ）。

７．４１（ｄ　、　ＪＡＢ＝８　、２Ｈ）、及び７．７
５　（ｄ　、　ＪＡＢ＝８　。

２Ｈ）（パターン中心、７．５８　：ΔＶＡＢ＝２ｎ、
４９Ｈｚ　）。

８．０３（ｂｒ　ｄ、Ｊ＝８．ＬＨ）（ＮＨ）。

ｇ　Ｎ−）シルーＬ−７ラニニルクロリド方法Ａ Ｎ−４フルーＬ−７ラニ７（１２，４ｆ；０．０５ｍｏ
ｔ）と塩化チオニル（２５ｍＬ）との混合物を９０分間
５５℃に加熱し、次に回転式蒸発器によって４０℃で濃
縮した。赤色の固体残留物を沸騰ＣＣｔ。

２００　ｍＬに溶解し、オープン乾燥［フリット（Ｎｏ
ｒｉｔ）　Ｊ　２１１　（アメリカン吻ノリット社（Ａ
ｍｅｒｉｃａｎ　Ｎｏｒｉｔ　Ｃｏ、、Ｉｎｃ、）製）
２０１によって脱色し、濾過し、冷却した。クリーム色
の固形の表題化合物を戸取し、ヘキサンで洗浄し、乾燥
させた。収率８．４８　ｔ　（６５チ）、融点１０１〜
１０１．５℃、　Ｉ　Ｒ（ＣＨＣＡｓ　）　ｃｍ−３３
６０，３２６０，３０２５゜１７７５．１６０５，１３
５０，１１７０，９１０；”ＨＮＭＲ（ＣＤＣｊｓ）δ
ｘ、４ｓ（ｄ、、ｒ＝−７，ａＨ）、２．４３（ｓ、３
Ｈ）。

４．３３（ｐ、Ｊ＝８．ＩＨ）、５．９３（ｂｒｄ、Ｊ
＝８．ＩＨ）（ＮＩ（）　、　７．３１　（ｄ　、　Ｊ
ＡＢ＝８　、２Ｈ）及び７．７６　（ｄ　。

ＪＡＢ＝８．２Ｈ）ＣＡパターン中心７．５３　；Δｖ
ＡＢ＝２６．８３Ｈｚ）。

元素分析値（Ｃ１ｏＨｕＱＩ　ＮＯｓ　Ｓとしテ）：計
算値：　Ｃ，４５，８９：Ｈ，４，６２：Ｎ、５．３５
実測値：Ｃ，４６，６３：Ｈ，４，９０：Ｎ、５．１９
方法Ｂ Ｎ−）シルーＬ−アラニン（３，１ｆ　：　１３　ｒｒ
ｍｏｔ）と塩化チオニル（６ｍＬ）との混合物を、９０
分間５０℃で加熱し、乾燥へキサン５０　ｍＬを用いて
希釈した。混合物を素早く撹拌し、冷却し、固形物を戸
数した。収率３，１５　ｔ　（９３チ）、融点９９〜１
００℃。ＩＲスペクトルは、方法Ａにより製造した再結
晶物のものと同一であった。

２−ヒドロキシ−３（カルボキシメチルアミノ）−ヒド
ロ桂皮酸二カリウム塩工水化物（１）アセトン４．５Ｌ
中のトランス桂皮酸１−Ｏｋｇ（６，７５ｍｏｔ）　の
撹拌スラリーを最初にＮａＨＣＯｓ　（２，４７ｋｐ：
２９．４　ｍｏｌ　：　４．３６　ｅｑ）で、次に水（
４，５Ｌ　＞で注意深く処理した。得られた濃厚な混合
物を０．４ｍＭ水性水性エチレンジアミン酸酢酸ＤＴＡ
）二ナトリウム（１４，５Ｌ　：　ＥＤＴＡ二ナトリウ
ム２水化物２．１７　ｆを蒸留水１４．５　Ｌに溶解さ
せて製造した）中の０ＸＯＮＥ（オキソン）モノ過硫酸
塩化合物（３，７８に！９　；　ＫＨ８Ｏａ　１．８２
５　ｅｑｔ含有する）溶液によッて滴下状に１．５〜２
．０時間かけて処理した。この添加の間、水浴を用いて
、反応温度を２４〜２７℃に保った。反応時の…は約７
．４であった。反応終了後に混合物を更に０．５時間撹
拌した後、約１０℃に冷却した。反応混合物を濃塩酸（
〜１．２　Ｌ　）を用いて…＝２の酸性と２し、この間
温度を約１０℃に保った。次に反応混合物をＣＨ，ＣＨ
２（５，０５Ｌ）で処理し、１０分間激しく撹拌した。

混合物を沈降させた後、水溶液層を傾瀉させて除去し、
不溶性塩を含有する有機層を紙によって吸引濾過した。

戸取した固形物をＣＨＩＣＡ！（１，９Ｌ）を用いて洗
浄し、このＦ液を用いて水溶液層を抽出した。戸数した
固形物をＣＨ，Ｃ２，（３，１５Ｌ　）で再び況浄し、
このｐ液を用いて、水溶液層を抽出した。１つにしたＣ
Ｈ，Ｃ／、層を、水（６，３１Ｌ　）中のＫＯＨ（５９
３，３ｔ　）の溶液を用いて抽出した。

塩基による抽出の間に分離しうる固形物を溶解するため
には、約４０℃までの緩徐な加熱が屡々必要である。次
に水（１，５Ｌ　）中のＫＯＨ（９９ｒ）溶液を用いて
ＣＨ，Ｃｔ、層を抽出し、１つにした塩基抽出液をグリ
シン（４８１，７ｆ　：　６．４１６ｍｏｔ；０．９５
　ｅｑ）によって処理した。有機層は廃棄した。

２５％ＫＯＨ水溶液によって上記水溶液のＰＦｌを１１
．５に調節した後、加熱沸騰させた。低沸点液体（アセ
トン−水）約９００　ｍＬを、蒸気温度が９９℃になる
まで留去させた後、混合物を２時間還流させた。冷却後
に反応混合物をＣＨ２Ｃｌ、（３，１５Ｌ）で抽出し、
ｃ２ｃｔ、相は廃棄し、水相は減圧下に７０℃浴を用い
て蒸発乾個させた。残留物ｆｔ９５＝ｉｘタノール（Ｅ
ｔＯＨ）　（８，８３Ｉ、　）中にオイテ３０分間沸騰
させ、撹拌下に徐冷した後、微細な結晶として生成物を
分離した。これらの結晶ｅ濾過し、新しい９５％エタノ
ール（１，２６Ｌ　）で洗浄し、５０°〜６０℃オープ
ン中で乾燥させ、融点１２０〜１２２℃（無修正）の白
色結晶として表題化合物（１，７７毅：　７４．６％）
を得た。

ＩＲ（ＫＢｒ）ｚ　３４２０（ｂｒ、）、１５９０（ｂ
ｒ、）。

１４１０．１１３０，７１０．ＨＮＭＲ（Ｄ２０−ＴＳ
Ｐ）δ３．１（ｓ　、　２Ｈ）、　３．８９　（ｄ　、
　ＪＡＢ＝４　＋　１）ｆ）及び４．５２　（ｄ　。

ＴＬＣＲｆ＝０．５９　（ＥｔＯＨ：　１Ｍ重炭酸トリ
エチルアンモニウム、７：３）。

元素分析値（Ｃ１１Ｈ１１１ＮＯ７に！として）：計算
値：　Ｃ、３７，５９：Ｈ，４，３０：Ｎ、　３．９９
実測値：　Ｃ，３７，２２：Ｈ，４，２４ＳＮ５．３．
９６Ｎ−アセチル−３−アセトキシ−５−フェニルピロ
ール（２） ピリシン（３，ＯＬ　）中の２−ヒドロキシ−３−（カ
ル〆キシメチルアミノ）−ヒドロ桂皮酸二カリウム塩２
水化物（１１（１，０ｋｇ；　２．８４モル）の懸濁液
を不活性ガス雰囲気下周囲温度で無水酢酸（４，ＯＬ　
）により処理した。次に緩徐な発熱反応を行なわせ、反
応温度は、１．５〜２．５時間の間６０〜７０℃まで指
数関数的に増大した。反応混合物が冷却し始めた時に、
１５分間、１２０〜１２３℃まで加熱し、次に１時間か
けて室温まで冷却させた。この間に酢酸ビリヅニウムが
結晶として分離した。混合物を紙によシ吸引濾過し、無
色となるまで酢酸エチル（ＥｔｏＡｃ）によって塩を洗
浄した。ｐ液は真空下で蒸発乾個させた。

暗赤色の残留物を酢酸エチル（３，ＯＬ　）に溶解し、
水で３回（各回１．ＯＬずつ）洗浄し、ＭｇＳＯ４上で
乾燥さき、［ダｎ、　ｒ　（Ｄａｒｃｏ）　Ｊ−Ｇ　６
０　（アイシーアイアメリカズ社（ＩＣＩ　Ａｍｅｒｉ
ｃａｓ　、Ｉｎｃ、）製）（３００？）で処理した。３
０分間攪拌した後、「セライト（（：：ｅｌｉｔｅ）Ｊ
　（ヅヨンズ・マンピル社（Ｊｏｈｎａ−Ｍａｎｎｖｉ
ｌｌｅ）　ｆｌ！！　）により混合物を濾過し、真空下
に蒸発乾個させ、赤橙色の油状物を得た。

この油状物を温２−プロｔ４ノール（１，２１，）に溶
解させ、−晩かけて周囲温度まで徐冷して、固形物を分
離した。結晶状生成物ｆ：、濾過し、５０チ２−１０パ
ノール水溶液で洗浄し、乾燥させ、融点＝５８〜６０℃
（無修正）の表題化合物を得た。

一部をジエチルエーテル（Ｅ　ｔ２０　）に吸収させ、
「フリット（Ｎｏｒｉｔ）　Ｊ　２１１で処理し、濾過
し、減圧下で濃縮した。０℃に放置し、無色の小さな針
状の結晶が析出した。これらの結晶を濾過し、Ｅｔ、Ｏ
：ヘキサン（１：１）で洗浄し、真空中において乾燥さ
せ、融点６０〜６２．５℃（無修正）の分析試料を得た
。

ＩＲ（ＣｕＯ２）ｍ−’３０２０，１７６０，１７３０
，１５９５゜１３７８．１３２０，１２２（１（ｂｒ、
）、１０３０，９６０゜９０３　、’ＨＮＭＲＣＣＤＣ
ｌ、）δ２．２３　（ｓ　、　３Ｈ）　、　２．２７（
ｓ、３Ｈ）、６．１８（ｄ、Ｊ＝２　、ＩＨ）、７．３
５（ｓ　、５Ｈ）。

７．４２（ｄ、Ｊ＝２．ＩＨ）：ＴＬＣＲｆ＝０．５６
（トルエン：ヅオキサン、４：１）。

元素分析値（Ｃｌ４Ｈ１３Ｎｏ３として）：計算値：　
Ｃ，６９，１２：Ｈ，５，３８；Ｎ、５．７６実測値：
Ｃ，６８，８８：Ｈ，５，２５；Ｎ、５．５３３−ヒド
ロキシ−５−フェニルピロールｆ３＋微細に分割したＮ
−アセチル−３−アセトキシ−５−フェニルビロール１
２）の少量（３６，８ｔ　；０．１５モル）ｔ−１１０
分間アルゴンガス流中において撹拌することにより、脱
酸素し、次に脱酸素メタノール（ＭｅＯＨ）　（３７９
ｍＬ）中に懸濁させ、不活性ガス雰囲気下（−１５℃メ
タノール（ＭｅＯ）ｆ）／乾燥氷浴中で）−６℃に冷却
し、２ＮのＮａＯＨ（３００ｍＬ）の氷冷脱酸素溶液に
よってすみやかに処理した。反応温度は、塩基の添加に
よって直ちに１８℃に上昇し、反応混合物は３分後に均
質になった。反応混合物が冷却するにつれて化合物３が
微細結晶として析出した。１５分後に、脱酸素冷２　Ｍ
　（えん酸（１５０ｍＬ）溶液を添加し、得られた混合
物を１０分間撹拌し、沖過した。生成物の空気曝露全最
小にするように注意しつつ固形物を脱酸素水（２００ｍ
Ｌ）で十分に洗浄し、−晩真空下で乾燥させ、薄いピン
ク色の微細な針状の結晶として表題化合物（２２，３ｆ
　：　９３．６チ）を祠だ。

ＩＲ（ＫＢｒ）ｚ−”３４００，３１１０，２９００，
１６００゜１５８０．１５５５，１４８０，１２６８，
１１８０，７４２゜６４０　：　”ＨＮＭＲ（ＤＭＳＯ
−Ｄ’）δ６．１　（ｍ、　ＩＨ）　、　６．３　（ｍ
。

ＩＨ）、７．０−７．７（ｍ、５Ｈ）、８．０（ｓ、Ｉ
Ｈ）、１０．４（ｂｒｓ　、　ＩＨ）　：ＴＬＣＲｆ＝
０．２０−０．２８　（ＥｔＯＨ：ＣｕＯ２，。

１　：９）　。

元素分析値（Ｃ＋ｏＨｏＮＯとして）：１」算値：　Ｃ
，７５，４５；Ｈ，５，７０；Ｎ、　８．８０実測値：
　Ｃ，７５，３０；Ｈ，５，６９：Ｎ、８．６７ｊ　３
−（Ｎ−）シルーＬ−アラニニルオキシ）−５ふフェニ
ルビロー・ル（４） 不活性ガス雰囲気下Ｏ℃に保った、無水テトラヒドロフ
ラン（ＴＨＦ、　４５０　ｍＬ　）、ビリジｙ（４３，
８ｍＬ　：　０．５４２　ｍｏｔ；　１−．２　ｅｑ　
）及びトリフルオロ酢ｒＲ（８５，ＯｍＬ　：　１．１
０　ｍｏｔ：　２．４　ｅｑ　）の溶ｉｉ、−ｉに、３
−ヒドロキシ−５−フェニルビｏ　−ルｆ３１　（７１
，５ｆ　：　０．４５モル；　１．ｏ　ｅｑ）で処理し
、その直後に、髄しく製造したＮ−）シルーＬ−アラニ
ニルクロリド（１４１，０ｆ　：　０．５４　ｍｏｂ；
　１．２　ｅｑ）の無水ＴＨＦ　（，４５０ｍＬ　）溶
液を、５〜１０分かけて一滴ずつ加えた。得られた混合
物を１５分間Ｏ℃で撹拌した。次に１．０Ｍ水性くえん
酸溶液（３１５ｍＬ）とＥｔＯＡｃ（１，３５Ｌ　）と
を添加して反応混合物を急冷した。簡単に混合させた後
、各相を分離し、有機相は、ＮａＣＬ水溶液（３６０ｍ
Ｌ：水１　ｍＬ当りＮａＣＬＯ，１８ｖ　）で洗浄した
。次に有機相ｔ２回５％Ｎ　ａ　ＨＣＯｓ水溶液（各々
１．３５　Ｌ　）で抽出し、次にＮａＣ６水溶液の別の
少１ｔ（３６０ｍＬ；水１　ｍＬ当りＮａｃｔＯ，１８
１）で洗浄した。赤褐色の有機層をＭｒＳＯ，（１０１
ｆ）及び［ダルコ（Ｄａｒｃｏ）　Ｊ−Ｇ６０　（１４
３ｔ）と共に１５分間周囲温度で撹拌した後、「セライ
）　（Ｃｅｌｉｔｅ）ＪによってＦ　１ｉＡ４し、３７
℃の浴から真空下に蒸発乾個させ、化合物（４）全ピン
ク色がかった白色の固形物として得た。粗生成物を暦砕
して粉末状とし、温（５０°Ｃ）　ＴＨＥ”（２５０ｍ
Ｌ）中に溶解させ、強く撹拌し、ｎ−ヘキサン（２５０
ｍＬ）で希釈した。撹拌は周囲温度で１時間継続し、こ
の間に生成物が晶出した。固形物ｔ−Ｐ遇し、ろ液が無
色となるまでトルエン（約ＩＬ）で洗浄し、−晩乾録さ
せ、融点１５４．５〜１５５℃の白色粉末として表題化
合物（１１２Ｗ　：　６５　％　）を得た。

ＩＲ（ＫＯ２）ｍ−’３３５０，３３２５．１７６０．
１５０８゜１３２０．１１５５，７７０：ＩＨＮＭＲ（
ＤＭＳＯ−ｄｏ）δ１．３３（ｄ、Ｊ＝７．３Ｈ）、２
．３６（ｓ、３Ｈ）、４．１３（ｐ、Ｊ＝８゜ＩＨ）、
６．２５（ＩＴＩ、ＩＨ）、６．７３（ｍ、ＩＨ）、７
．０５−７．５０（ｍ、５Ｈ）、７．５−７．８５（ｍ
、４Ｈ）、８．４２（ｄ。

Ｊ＝８　、　ＩＨ）　、　１１．１８（ｂｒ　ｓ、　Ｉ
ＩＩ）　：１″ＣＮＭＲＣＤＭＳＯ−ｄ”　）δ１８．
．３３５　、２１．００１　、５１．３７０　。

９８．０６１　、１０８．３３６　、１２３，４２３　
、１２６．０２４　。

１２６．６１　ｎ　、　１２８．５６０　、１２８，７
５６　、１２９，６０１　。

１３２．３９７　、１３７．６００　、１３８．３８０
　、１４２．７３７　。

１６９．９１９；〔α〕９＝−７０°（ｃ＝１．１１　
、ＭｅＯＨ）　：ＴＬＣＲｆ　＝０．４５　（ＥｔＯＡ
ｃ　：ヘキサン、１：１）：ＴＬＣＲｆ＝０．４０（）
ルエン：ヘキサン、４　：　１　）。

元素分析値（Ｃ＊ｏＨｖＮ＊０４Ｓとして）：計算値：
　Ｃ、６２，４８：Ｈ，５，２４ＳＮ、　７．２９実測
値：　Ｃ，６２，６２：Ｈ，５，２７；Ｎ、７．３０３
−（Ｎ−）シルーＬ−アラニニルオキシ）−５−フェニ
ルチオフェン（９） 以下の頁に概略を記述する文献に報告された方法（文献
（３）：ピー７リードランダ−（Ｐ、Ｆｒ１ｅｄｌａｎ
ｄｅｒ　）及び工Ｘ　噌キー　Ａ／　ｔＲシンスキー（
Ｓ、Ｋｉｅｌｂａｓｉｎｓｋｉ）、［ヘミツシエ・ペリ
ヒテ（Ｃｈｅｍ、Ｂｅｒ、）　Ｊ、４５゜３３８９．１
９１２）：　及び文献（４）（エイ・アイ・コザツク（
Ａ、１．Ｋｏｓａｋ）　、アール・ジエイ・エフ・パル
チャック（ｒ、Ｊ、Ｆ、Ｐａ１ｃｈａｋ）　、ダブリニ
ー・エイ・スチール（Ｗ、Ａ。

５ｔｅｅｌｅ）及びシー！Ａ−セルウイツツ（Ｃ、Ｍ、
　Ｓｅ１ｗ１ｔｚ）、「ジャーナル・オプ・アメリカン
・ケミカル・ソサイエテイ（Ｊ、Ａｍｅｒ、Ｃｈｅｍ、
Ｓｏｃ、）　Ｊ　７６　、４４５０　、１９５４）をわ
ずかに変更して、３−ヒドロキシ−５−フェニルチオフ
ェンを製造するための、一連の実験を行なった。得られ
たヒドロキシチオフェンを次にＮ−）シルーＬ−アラニ
ニルクロリドでアシル化し、対応するＮ−）シルーＬ−
アラニネートエステルを４６俤の収率で得た。（最適化
されていない方法）。

３−フェニル−１，２−ジチア−３−シクロペンテン−
５−オン（５） 桂皮酸エチル１０　ｆ　（５６，８２ｍｎｏｔ）とイオ
ウ１０ｆとの懸濁液を、５０ｍＬフラスコ（反応中に生
成するエタノールを除去するために蒸留ヘッド及び受け
器を備えたもの）中において４時間２５０℃に加熱した
。反応混合物’１１００’ｃまで冷却させ、還流エタノ
ール５００．ｍＬに添加した。

得られた沈澱物ｔＦ遇し、沸騰アセトン５００ｍＬで１
回、次にエタノール５００　ｍＬの分量ずつで２回次々
にすりつぶした。１つにした上澄みを濃縮して黒色の固
形物とし、この固形物をメタノールがら晶出させ、暗褐
色の針状結晶（５）ヲ得た。［ノリツ）　（Ｎｏｒｉｔ
）　Ｊを用いたメタノールからの２回目の晶出と、「セ
ライト（Ｃｅｌｉｔｅ）Ｊによる濾過とによって、融点
１１３〜１１５℃の淡黄色の針状結晶２．０２３２を得
た。

ＩＲ（ＫＢ’ｒ）３−’１６５０，１５５０，１３９０
，１３５０゜１１３０　、７７０　：”ＨＮＭＲ（６０
□：・Ｍｌ（ｉ　、ＣＤＣ４３）δ６．９２（ｓ　、Ｉ
Ｈ）、７．５８（ｍ、５Ｈ）：ＴＬＣＲｆ＝０．５　（
ジクロロメタン）。

元素分析値（Ｃ（，１（ｓＯ，Ｓとして）：計算値：　
Ｃ、５５，６４：Ｈ，３，１１実測値：　Ｃ，５５，５
３：Ｈ，３，４７シスー４−ケト−６−フェニル−３，
７−ジチア−５−ノネンジオイン酸（６） ９４℃の硫化ナトリウム９水化物（１４８ｍｍｏｔ）３
５．４８　ｆの融解した溶液を、５分間かけて少しずつ
添加した３−フェニル−１，２−ソｆ７−３−シクロペ
ンテンー５−オン（５１６，６５ｔ　（３４，２３ｍｍ
ｏｔ）で処理した。炭酸ナトリウムでＰＨ８，７に調節
したＨ２Ｏ６０ｍＬ中のプＣｌモ酢酸４３．６　？　（
３１４ｍｍｏ／、）氷冷溶液に混合物ｔ−１ｔ５分後に
添加した。得られた溶液を、０℃、ｐ）１８．７に悸５
分間保った後、濾過した。Ｐ液を０℃に保ち、５Ｎの塩
酸溶液でｐＨ３，７の酸性とした。得られた混合物を一
晩５℃で撹拌した。上澄みを次に傾瀉し、得られた油状
物をエーテルを用いてすシつギした。無色フオーム６．
９８　ｆ　（６５％）が得られるまで油状物をトルエン
と共に蒸発せしめた。この物質は更に精製することなく
使用した。

分析試料をエーテル上澄みから得た。この上澄みを濃縮
し、酢酸とトルエンとで次々に蒸発させ、エーテルと共
にすりつぶして融点１４２．５〜１５０℃の淡褐色の結
７４を得た。

ＩＲ（ＫＢｒ）ｃ＋＋＋−’　１７０５　、１６５５　
：’ＨＮＭＲ（６０１ＶＩＥ（ｚ。

ＤＭＳ　Ｏ−Ｄａ）δ２．０６　（ｓ　、　ＣＨ，Ｃｏ
、Ｈ不純物）　３．３０　（ｓ　。

２Ｈ）　、　３．７７　（ｓ　、　２Ｈ）　、　５．６
７　（ｍ、ＯＨ）、、６．３７　（ｓ　。

ＩＨ）　、　７．４３　（ｍ　、　５Ｈ）　；ＴＬＣｋ
ζｆ＝０．８５（クロロホルム：メタノール：酢酸、５
：５：１）。

元素分析値（Ｃ，３Ｈ，□５２０５として）：計算値：
　Ｃ、５ｎ、ＯＯ：Ｈ，３，８８実測値：　Ｃ、５０，
２６：　Ｈ、３，９８３−ヒドロキシ−５−フェニルチ
オフェンアセテ−）　（７） 粗シスー４−ケト−６−フェニル−３，７−ジチア−５
−ノネンノオイン酸＜６）　：Ｃ４ｙ　＜　１０．９皿
ｏｔ）！　酢酸ナトリウム３．４０　？　、（４１，５
ｍｔｎｏＬ）及び無水酢酸３０　ｍＬの、強く撹拌した
懸濁液を、加熱して１時間還流した。混合物を冷却し、
次に濾過し、蒸発させ、黒色の油状物を得た。この残留
物を酢酸エチル７５ｍＬに溶解させ、氷冷１８和重炭酸
ナトリウム溶液５０　ｍＬ　ｆｒ：用いて３回抽出した
。次に有機層ヲ、ブラインで洗浄し、硫酸ナトリウム上
で乾燥させ、濾過、蒸発させ、黒色固形物２．８２６２
を得た。粗生成物（力を、１２０〜１４０℃、０．１−
ｇで蒸発蒸留によシ精襲し、淡橙色の油状物１．２３５
２を得たが、このものは、放置後に固化した（５２％）
。

ＩＲｃｙ−１１７００，１７４５：五ＨＮＭＲ（６０Ｗ
ｆｌｌ＊　、ＣＤＣＬｓ）δ２．２３（Ｓ、３Ｈ）、７
．０３（ｄ、Ｊ＝２Ｈｚ、ＩＨ）、７．１３（ｄ　＝　
Ｊ”２Ｈｚ　、　ＩＨ）　ニア−２３−７−７３（ｍ−
５Ｈ）　＊ＭＳ（ＥＩ、ＤＩＰ）ｍ／ｅ２１８（Ｍ”、
１２．６％）；ＴＬｃｇｆ＝０．４８（ヘキサン：酢酸
エチル、５　：　１　）。

元素分析値（Ｃ１，Ｉ（１，ＳＯ，”ＭＨｔＯとして）
：計算値：　Ｃ，６３，４１：Ｈ，４，８８実測値：　
Ｃ，６３，７８：Ｈ，４，８６３−ヒドロキシ−５−フ
ェニルチオフェン（８１３−ヒドロキシ−５−フェニル
チオフェン酢酸塩（７）　２．１２６　ｆ　（９，７４
ｍｍｏｔ）とメタノール８０ｍＬとの混合物をＩＮのＮ
ａＯＨ１１ｍＬ　テ処理した。２０分後に反応混合物を
、ＩＮの塩酸１１ｍＬの添加によって急冷し、２５℃、
１２酬ＨＦで蒸発させて約５０　ｍＬの容積とし、酢酸
エチル１００ｍＬで処理した。有機層を分離し、ブライ
ンで洗浄し、硫酸す）　ＩＪウム上で乾燥させ、濾過、
蒸発させ、黒色の固形物を得た。この残留物を酢酸エチ
ル７５　ｍＬに溶解させ、ＭｆＳＯ，上で乾燥させた。

濾過及び蒸発によって得た黒色固形物を高温ヘキサンと
共に４回すりつぶし、冷却後に、付点７４〜７５℃の黄
色の固形物（８）合計８３７ｆＣ’４９％）を得た。１
つにした母液を濃縮して固形物０．８７２とし、このも
のに５ｉ０２１００Ｐ上で、クロマトグラフィーを行い
１ヘキサン：酢酸エチル（７：１）溶剤混合物を用いて
、溶出した。再結晶後に、さらに融点７３．５〜７４℃
の生成物３８０ｑを得た。

合計収率は、従って、１．２１７Ｆ（７１％）、融点７
４．５〜７５℃（文献＋３）　、　＋４１７５℃、７８
℃）。

ＩＲｃｔｎ３３８０　、１６３５　：　”ＨＮ？ｖＩＲ
（９０ＭＨｚ　。

ＣＤＣＡｓ）δ３．８１（！１，２Ｈ）、６．５７（８
，ＩＨ）、７．２−７．７　（ｍ、５Ｈ）：ＭＳ（ＥＩ
）ｍ／ｅ１７６．０　（７０，７％）；ＴＬＣＲｆ＝６
．２３（ヘキサン：酢酸エチル、１：５）。

元素分析値（ＣＩ。迅ｏｓとして）： 計算値：　Ｃ、６８，１５；　Ｈ、４，５７実測値：Ｃ
、６８，０５；Ｈ，４，７０３−（Ｎ−）シルーＬ−ア
ラニニルオキシ）−５−フェニルチオフェン（９） シクロロメタン２０ｍＬ及びピリジノ０．６１ｍＬ（７
，５ｎｍｏＬ）中の３−ヒＶロキシー５−フェニルチオ
フェンＣＢ）　４４０　Ｗｑ（２，５ｍｍｏｔ）溶液を
、ジクロ０フ５フ１０ リド１．３　１　４　ｆ　（　５　ｍｍｏＡ）溶液（５
分間かけて滴下する）によ＃）０℃で、アルゴン雰囲気
下に処理した。反応混合物を、０．５時間Ｏ℃で撹拌し
た後、クロロホルムｌ　Ｏ　Ｏ　ｍＬ中に圧加した。混
合物を、５０ｍＬずつのＩＮのくえん酸、水、水冷重炭
酸ナトリウム溶液、水及びグラインを用いて次々に抽出
し蛇。次に混合物を硫酸す）　ＩＪウム上で乾燥させ、
濾過し、蒸発させ褐色の油状物１。７８９を得た。「フ
リット（Ｎｏｒｉｔ）　Ｊ　１．７　８　ｆを用いて処
理した。後、トルエンからの結晶化を試みｆＣが、成功
しなかった。残留物に５ｉｏｔｚｏｏｒカラム上でクロ
マトグラフィーを行い、シクロロメタンを用いて、流速
１０ｍＬ、／分で溶出した。生成物含有分画をプールし
、濃縮して、赤味を帯びた油状物９５１ｑを得た。生成
物をトルエンから結晶化させた。トルエンからの再結晶
化を連続して行い、全量４６３■（４６％）の生成物（
り）を、淡黄色の１形物として得た（融点、８５〜８７
℃）。

ＩＲ（ＫＣｔ）ｍ−１１７３５，１３３０，１１５０６
”Ｈ幅侃（９０ＭＩ（ｚ　ｓ　ＣＤＣＡａ　）δ１．５
３　（ｄ　、　Ｊ＝７Ｈｚ　、　３Ｈ）　。

１．６２（ｓ、３Ｈ）、４．２３（ｍ、ＩＨ）、５．３
２（ｄ、Ｊ＝９Ｈｚ　、　ＩＨ）　、　６．８４　（ｄ
　、　Ｊ＝１．４Ｈｓ　、　ＩＨ）　、　６．８８（ｄ
、Ｊ＝１．．４Ｂｂ、ＩＨ）、７．２３−７．８３（ｍ
、９Ｈ）：ＭＳ（ＦＡＢ）　ｍ／　ｅ　４０２　（Ｍ＋
’１　、１５％）　；　ＴＬＣＲｆ＝０．２０（ヘキサ
ン：酢酸エチル、４：１）。

元素分析値（ＣｔＤＨＩｇＮＯ４Ｓとして）：計算値：
　Ｃ，５９，８３：Ｈ，４，７７：Ｎ、３．５９実測値
：Ｃ，５９，６０：Ｈ，４，７７；Ｎ、３．４３３−（
Ｎ−）シルーＬ−アラニニルオキシ）−１−メチル−５
−フェニルピロール０３の合成式（Ｉ）において、Ａが
Ｎ−）シル−Ｌ−７う＝＝ルであり、Ｒがフェニルであ
り、ＶがＨであシ、Ｘが旧′であり、そしてＲ′がＣＨ
ｓ−ｃある化合物に相当する表題のエステルを製造する
ための、一連の実験を行なった。反応の順序は次の通り
であった。

２−ヒドロキシ−３−（Ｎ−メチルカルボキシメチルア
ミノ）−ヒドロ桂皮酸二カリウム塩員β−フェニルダリ
シド酸のカリウム塩Ｃ３０ｆ：　０．１５　ｍｏｌ−）
、Ｎ−メチルグリシン（１３，２ｆ：　０．１５　ｒｎ
ｏＡ’　）　ｓ蒸留水（１１９ｍＬ　）及びＫＯＨ溶液
（９Ｎ：２２．３ｍＬ）の混合物ｔｌ−２加熱して３時
間還流し、淡黄色の溶液とした。反応混合物を７０℃で
減圧下に蒸発乾個した。次に残留物を９５　＊　ＥｔＯ
Ｈ（１００ｍＬ）から晶゛出させ、白色固形物とし、こ
のものを１１０℃で減圧下に１晩乾燥させた後、白色固
形物Ｑ（＄　３０．８　ｔ　ｆ得た（収率６３％）。

ＩＲ（ＫＣＪ）ｆｆｉ　３３６０（ｂｒ、）、　１５８
０　、１４０５　。

７０５　：　’　ＨＮＭＲ（ＣＤ、ＯＤ）δ２．３０　
（ｓ　、　３Ｈ）　、　２．９８（ｓ、２Ｈ）。

３．７０（ｄ　、　Ｊ＝３）Ｉｚ　、　ＩＨ）　、４．
４８（ｄ　、　Ｊ＝３Ｈｚ　、　ＩＨ）　、　４．９２
（ｓ　、ＩＨ）、７．４０（ｓ、５Ｈ）：　ＴＬＣ’　
Ｒｆ＝０．５１（ＥｔＯＪ（：１Ｍ重炭酸トリエチルア
ンモニウム、７：３）。

（生成物の融点２７０℃以上）。

３−アセトキシ−１−メチル−５−フェニルピロールａ
υ ２−ヒドロキシ−３−（Ｎ−メチルカルボキシメチルア
ミン）−ヒドロ桂皮酸二カリウム塩叫（１５，２ｆ、　
４６　ｍｎｏｔ）、無水酢酸（１７３ｍＬ）及びトリエ
チルアミン（３０８ｍＬ）の混合物を４０℃で１９　ｈ
ｒ　加熱した。濃褐色となった反応混合物を、濾過し、
固形物をエーテルで洗浄した。ろ液を減圧下に蒸発せし
め、濃褐色の残留物を得、このものをエーテル（３００
ｍＬ）及び水（２００ｍＬ）に吸収させた。各層を分離
し、エーテル層は、別の水（２００ｄ）で洗浄した。エ
ーテル溶液を、ＭｆＳＯ，上で乾燥させ、濾過し、減圧
下に餉縮し、褐色の残留物１０．７　ｆを得た。このも
のを、クーｆ　ＪＬ／　ロー　Ｊｌ／蒸留（Ｋｕｇｅｌ
ｒｏｈｒ　ｄｔａｔｉｌｌａｔｉｏｎ　）　Ｌ、エーテ
ルから晶出させて、融点６４〜６５℃の白色結晶（１１
）３．０５’を得た（収率３０％）。

ＩＲ（ＣＨＣｔ、）ｍ−”　２９９０　、１７５０　、
１５７０　、１５１８１４８２．１３７５．１２３０（
ｂｒ、）、１０２４，９１０゜７００　；　”　ＨＮＩ
％！Ｒ（ＣＤＣＡｓ　）δ２．２０　（ｓ　、　３Ｈ）
　、　３．５８、　（８，３Ｈ）、６．１０（ｄ、Ｊ＝
２１（！、ＬＨ）、６．７５（ｄ。

Ｊ＝２Ｈｚ　、　ＩＨ）　、　７．３５　（１５Ｈ）　
、ＴＬＣＲｆ＝０．５８（ヘキサン：　１ｉ３ｔＯＡｃ
、７　：　３　）元素分析値（Ｃ１５ＨｓｓＮ（％とし
て）：計算値：　Ｃ，７２，５４：Ｈ，６，１０：Ｎ、
６．４４実測値：　Ｃ，７２，５７：Ｈ，６，０９：Ｎ
、６．５１３−（Ｎ−トシル−Ｌ−アラニニルオキシ）
−１−メチル−５−フェニルビロール←階 脱酸素メタノール（１５，５ｍＬ）と３−アセトキシ−
１−メチに−５−フェニルピロール（１１）（１，３り
、６．２　ｒｒｒｎｏＬ）との混合物に脱酸素ＮａＯＨ
（２Ｎ。

１２．５　ｍＬ）をアルゴン雰囲気下添加した。反応混
合物を水浴中で１５分間撹拌した。次に脱酸素くえん酸
（２Ｍ、　７　ｍＬ）を添加し、得られた混合物を水浴
中で８分間撹拌した。反応混合物を減圧下に濃縮し、次
に水２０ｍＬを加え、酢酸エチル（ＥｔＯＡｃ）　５０
　ｍＬを用いて２回抽出した。酢酸エチル層を１つにし
、Ｍ　ｆ　Ｓ　Ｏ，上で乾燥させ、濾過し、減圧下に濃
縮し、３−ヒドロキシ−１−メチル−５−フェニルピロ
ール（を渇を橙色の残留物として得た。無水ＴＨＦ　（
１２，４ｍＬ）、ピリゾ７　（０，６ｍＬ　：　７．４
　ｒｒｉｍｏＬ　：　１．２　ｅｑ　）及びトリフルオ
ロ酢酸（１，２ｍＬ　：１５ｍｍｏ４２．４　ｅｑ　）
の冷溶液をアルジン下に橙色の残留物に添加し、その直
後に新しく製造し九Ｎ−）シルーＬ−アラニテルクロリ
ド（１，２ｆ　；　７．４　ｒｒｒｎｏＬ　：　１．２
　ｅｑ　）の無水ＴＨＦ　（１２，４ｍＬ）溶液を添加
した。得られた混合物を１時間θ℃で撹拌した。次にく
えん酸水溶液（Ｉ　Ｍ、　５　ｒｒＬ）及び酢酸エチル
（３０ｍＬ）を添加して反応混合物を急冷した。簡単に
混合した後、各層を分離し、飽和ＮａＣＬ溶液、５％Ｎ
ａＨＣＯ１溶液（２回）及び再び飽和ＮａＣＬ溶液によ
って有機相を順次洗浄した。次に酢酸エチル抽出物をＭ
ｒｓＯａ上で乾燥させ、「フリット（Ｎｏｒｉｔ）　Ｊ
　２１１で処理し、濾過し、減圧下に濃縮し、粗生成物
Ｑ３を橙色の残留物として得た。このものを、ヘキサン
：酢酸エチル（１：１）（５ｍＬ）に溶解させ、Ｓｉ０
，１００ｆカラム上でクロマトグラフィーを行いへキサ
ン：酢酸エチル（７：３）を用いて溶出し、化合物（ｌ
ｌｌＦを濃厚な淡橙色の油状物として得た。この粗生成
物の一部を・、・半調製用ＨＰＬＣ（カラム、ＩＢＭシ
リカ、１ｃｍ　Ｘ　２５　ｃｍ、移動相、ヘキサン：酢
酸エチル８：２；流速４．０ｍＬ／分、圧力０．２　ｐ
ｓｉ　）によって更に精製し、蜂蜜色の濃厚な油状物（
１３１を得た。

ＩＲ（ｆｉｌｍ）ｃＩｎ−’３２６０，２９５０，１７
６０，１５２０゜１３５０、１１７０，７７０：”）Ｉ
ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄＢ）Ｊｌ、２８（ｄ、Ｊ＝７Ｈｚ
、３Ｈ）、２．３６（ｓ、３Ｈ）、３．５８（ｓ。

３Ｈ）、５．８５（ｄ、Ｊ＝２Ｈｚ、ＩＨ）、６．１５
（ｍ、ＩＨ）。

６．７４（ｄ、Ｊ＝２Ｈｚ、ＩＨ）、７．３３０−７８
０（，９）（）。

８．３７　（ｄ　、　Ｊ＝８Ｈｓ　、　Ｉ　Ｈ）　：　
”ＣＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄａ）ｐｐｍＩＢ、２０５，２
０．９３６，３４．９１７．５］、２４０，１００，５
９８゜１１３、Ｌ−４８、１２６，５４４、１２７，０
００、１２８，１０５。

１２８．５６０　、１２９．６０１　、１３０．９０１
　、１３２，２０２　。

１３５．７１４　、１３８．３１５　、１４２．６７２
　、１６９．７２４　；ＴＬＣＲｆ　＝０．５２　（）
ルエン：ノオキサン、４：１）：Ｃｍｌ与Ｎ、Ｏ，Ｓの
高分解能質量スイクトルは、ｍ／６３９８．１３００を
要するが、実測値は３９８゜１２９７であった。

３−（Ｎ−トシル−Ｌ−アラニニルオキシ）−５−（ｐ
−クロロフェニル）ピロール（１１の合成式（１）にお
いて、ＡがＮ−）シルーＬ−アラニニルであり、Ｒがｐ
−クロロフェニルであり、向；Ｈであり、ＸがＮＲ’で
あり、Ｒ′がＨである化合物に相当する標題のエステル
化合物を製造するための一連の実験を行なった。反応連
鎖は次の通りであった。

（１力　四六　員 ＴＩ（Ｆ トランス−β−（ｐ−クロロフェニル）グリシド酸Ｉ アセトン２６０　ｍＬ中のｐ−クロロ桂皮酸（６８，５
ｆ　＊　０−３７５　ｍｏｔ）　の撹拌スラリーに、Ｎ
ａＨＣＯｓ（１３７ｒ：１．６３ｍｏｔ）を添加した後
、水２６０ｍＬを徐々に添加した。この混合物に、［オ
キソ７　（ＯＸＯＮＥ月２１１　ｆ　（０，３４３ｍｏ
Ｌ　）　ＥＤＴＡ二ナトリウム１２０ｇｑ及び水８０５
　ｍＬの混合物を２２〜２７℃で２．５時間かけて添加
した。５時間後に混合物を１２Ｎの冷塩酸７０　ｍＬ　
を用いて酸性とし、−を約２．５に降下させ、次に酢酸
エチル７００　ｍＬを用いて抽出した。抽出液をプライ
ンを用いて洗浄し、ＭｔＳＯａで乾燥させ、濾過し、Ｆ
液を真空下に蒸発乾個させた。白色の固形物を酢酸エチ
ルから結晶化させた。融点１２１〜１２５℃（７２，２
ｖ　；収率９７％）。’ＨＮＭＲ（ＣＤＣ１３／ＤＭＳ
Ｏ−Ｄｏ　）δ７．３　（ｍ、　４Ｈ）　、　４．０５
’（ｄ　。

Ｊ＝２　、ＩＨ）及び３．４　（ｄ　、　Ｊ＝２　、　
ＩＨ）。

元素分析値（ＣｅＨｖＣＬＯｓとし七）：計算値：Ｃ，
５４，４３：Ｈ，３，５５：Ｃ／、、１７．８５実測値
：　Ｃ，５４，５３；Ｈ，３，８０：Ｃｔ、１７．９１
２−ヒドロキシ−３（カルゲキシメチルアミノ）−ｐ−
クロロヒドロ桂皮酸二カリウム塩工水化物Ｑ！９ ＫＯＨ（８５％）　（４６，７ｆ　：　０．７０９　ｍ
ｏｌ　）と水４００　ｍＬとの溶液に、グリシ：’（２
５，９ｆ；０．３４５　ｍｏｔ）　’ｆｒ：添加し、次
にトランス−β−ｐ−クロロフェニルグリシド酸α４１
　（７２，２ｆ　：０．３６３５ｍｏｔ）を添加した。

この混合物を２時間１００℃に加熱し、室温に冷却し、
−を１２に上昇させるのに足る量のＫＯＨｔ−添加した
。混濁溶液を酢酸エチルで３回抽出し、抽出液を次に廃
棄した。７０℃水浴を用いて、透明な水溶液（約５００
ｍＬ）？、真空下に蒸発乾個させた。次に固形物を熱エ
タノール約３５０　ｍＬに溶解させ、沢過し、ｐ液を水
浴中で数時間冷却した。晶出した固形物を戸数し、冷エ
タノールで洗浄した。融点９３〜９５℃、脱カルデキシ
ル化温度１８５℃（５７，２ｔ；４１チ）。

”ＨＮＭＲ（Ｄ、０−ＴＳＰ）δ７．４　（ｓ　ｓ　４
Ｈ）　−４−４（ｄ。

Ｊ＝４　、　ＩＨ）　４．０５　（ｄ　、　Ｊ＝４　、
　ＩＨ）　、及び３．１　（ｆｌ　。

２Ｈ）。

元素分析値（ＣｕＬｏＣＬＮＯｓＫｚ　ａ　２ＨｓＯと
して）：計算値：　Ｃ，３４，２４；Ｈ，３，６６：Ｎ
、　３．６３実測値：Ｃ，３４，４０：Ｈ，４，０３：
Ｎ、３．４２Ｎ−アセチル−３−アセトキシ−５−（ｐ
−クロロフェニル）ピロール（１１ ２−ヒドロキシ−３−（カルボキシメチルアミン）−ｐ
−クロロヒドロ桂皮酸二カリウム塩工水化物（１５（１
０ｆ：０．０２５９１ｍｏｊ）に無水酢酸（４０ｍＬ）
とビリジｙ　（３０ｍＬ）とを添加した。

この混合物を３５℃に徐々に加熱し、この点で溶液は６
７℃まで発熱し、次に温度が下降し始め、この点で加熱
を再開した。混合物を１２１″′〜３２２℃（内部温度
）に１時間加熱し、次に冷却した。

反応混合物に酢酸エチル約３０　ｍＬを添加し、これに
より酢酸ピリゾニウム塩の大部分を沈殿させ！　た。こ
の塩を戸数し、少量の酢酸エチルで洗浄した。次に炉液
を真空下に蒸発せしめて油状物とし、これに氷水を添加
した。生成物をエーテルを用いて抽出し、エーテル抽出
液を順に希釈くえん酸冷水溶液と冷水とで２回、更に希
釈ＮａＨＣＯｓ冷水溶液、冷水及びプラインとで３回そ
れぞれ洗浄し、ＭｆＳ０４上で乾燥させ、濾過した。ｐ
液を「ダルコ（Ｄａｒｃｏ）　Ｊ　１０　ｆで処理し、
２０分間撹拌し、次に濾過した。ｐ液を真空下に蒸発せ
しめ油状物とした。この油状物に２−ゾロ／４ノール２
５　ｍＬを添加した。得られた溶液から、冷却及びスフ
ラッチング（ｓｃｒａｔｃｈｉｎｇ）　によって、融点
６９°〜７１℃の淡黄色の結晶（３，４ｆ：４７％）を
得た。

ＴＬＣＲｆ＝　０．６１　（）ルエン：ゾオキサン、９
５：５）。分析試料を２−プロノ臂ノールから再結晶さ
せたが、融点の変化は見られなかった。

ＩＲ（ＫＣｔ）ｍ−’　１７５５　（Ｃ＝０　、　工ｘ
　チル）及び１７３゜（Ｃ＝Ｏ，アミド）：　”ＨＮＭ
Ｒ（ＣＤＣｌ２）ａ７．４　（ｍ、５Ｈ）。

６．２　（ｄ　＝　Ｊ　＝２−　Ｉ　Ｈ）、２−４　（
ｓ　＋　３　Ｈ）及び２．３　（ｓ　、　３Ｈ）。

元素分析値（Ｃｔ４ＨｔｔＣｚＮＯｓとして）：計算値
：Ｃ，６０，５５：Ｈ，４，３６：Ｎ、５．０４実測値
：　Ｃ、６０，６５：ｉ（、４，５５：Ｎ、　５．０７
３−ヒドロキシ−５−（ｐ−クロロフェニル）ヒロール
面 Ｎ−アセチル−３−アセトキシル−５−ｐ−クロロフェ
ニルピロール（１６）　（２，８ｆ　；　０．０１　ｍ
ｏｔ）の試料ｔ”　Ｎｔ気流により１０分間脱酸素化し
た。次に固形物を脱酸素メタノール（３０ｍＬ）中に溶
解させ、次に一８℃に冷却した。その直後に、烏０２　
ＯｍＬ中のＮａＯＨ（１，６ｆ　；　Ｏ−０４ｍｏｌ　
）　Ｏ脱酸素冷溶液を添加した。次にこの溶液を短時間
１５℃に加熱した後、直ちに一５℃に冷却した。２５分
後に透明な溶液をＨ，０１５ｍＬ　中のくえん酸（４，
２ｔ　；　０．０２　ｍｏｌ　）の脱酸素冷溶液で処理
した。温度は短時間に５℃に上昇した。−５℃で０．５
　ｈｒ　撹拌した後、固形物を戸数し、脱酸素冷ＨｔＯ
で洗浄した。淡緑色の生成物を数日間Ｐ、０．上で室温
で真空下乾燥させた（　１．３　ｆ　：　６８％）。

ＴＬＣＲｆ　＝　０．１９　（ＣＨＣＬ３：　ＥｔＯＨ
１９：１）。ＩＲ（ＫＣＩ）　は、Ｃ＝　０吸収の証拠
を示さなかった。

元素分析値（Ｃ１゜Ｈ８Ｃ１Ｎ０・％Ｈ８として）：計
算値：　Ｃ、６１，０８：ｆ（、４，２７：Ｎ、　７．
１２実測値：　Ｃ，６ｈ３：６；、Ｈ，４，４’４：Ｎ
、６．８５３−（Ｎ−トシル−Ｌ−アラニニルオキシ）
−５−（ｐ−／ロロフェニル）ヒロールα槽Ｎ２で脱酸
素化しｆＣＴＨＦ（１５ｍＬ　）に、ビリノン（０，６
５ｍＬ　：　０．００８　ｍｏｂ）、トリフルオロ酢酸
（１，２７ｍＬ：　０．０１６４　ｍｏｔ）及び３−ヒ
トＯ＊シー５−（ｐ−クロロフェニル）ビロールα７）
　（１，３ｆ　：　０．００６５　ｍｏｔ）を添加した
。溶液１ｏ℃〜−４℃に冷却し、ＴＨＦ　１５　ｍＬ中
のＮ−トシル−Ｉ。

−アラニニルクロリド（２，１ｔ　；　０．００８ｍｏ
Ａ　）のＮ２脱酸素冷却溶液（０℃〜−４℃）を１０分
間かけて添加した。混合物を１時間θ℃に保った後、氷
とＩＮ（えん酸１００　ｍＬの混合物を添加した。

この混合物を酢酸エチルを用いて抽出し、抽出液を、冷
プラインで１回、希釈冷Ｎ　ａ　ＨＣＯｓで２回、そし
て冷プラインで１回それぞれ洗浄した後、Ｍ　ｆ　Ｓ　
ｏ４上で乾燥させ、Ｐ３１４Ｌ、た。Ｆ液を「ダルコ（
Ｄｉｒｃｏ）　４２　ｆで処理し、１０分間撹拌し、濾
過し、ｐ液を真空下に濃縮し、赤褐色の油状物とした。

「ダＡｐコ（Ｄａｒｃｏ）　Ｊ　１．３　ｔで再び処理
し、淡赤色の油状物を得た。油状物をトルエン：シクロ
ヘキサン（４：１）に溶解させ、冷蔵庫に一晩放置し、
淡鮭肉色の結晶を得た（　１．４５　ｒ　；　５３％）
。

融点１１３〜１１５℃、 ＴＬＣＲｆ＝０．４７　（Ｅｔ、０）　：　ＩＲ（ＫＯ
２）ｃＩｎ−’　１７４０（Ｃ＝０．エステＪ’）；”
）ＩＮＭＲ（ＣＤＣ６，）δ３，４（ｂｒｓ。

ＩＨ）、７．８−７．２（ｍ、８Ｈ）、６．７（ｍ、Ｉ
Ｈ）、６．２（ｍ。

ｉＨ）、ｓ、ｓ（ｄ、Ｊ＝９．ｉＨ）、４．２（ｐ、Ｊ
＝ｓ、ＩＨ）。

２．４　（ｓ、　３Ｈ）　、　１．４　（ｄ、３Ｈ）　
：ＭＳ（ＥＩ　、Ｉ）ｒＰ）ｍ／ｅ４′ｉ８　（Ｍ＋、
　２．３チ）及び４２０　ＣＭ＋、　ｏ、ｓ％）。

元素分析値（ＣｖＨ１ｏＣＬＮ２０４　Ｓとして）：計
算値：　Ｃ、５７，３４；Ｈ，４，５７ＳＮ、　６．６
９実測値：　Ｃ、５７，５３：Ｈ，４，５８：Ｎ、　６
．６７本発明の化合物を含有する試験具の製造と使用本
発明による化合物を含有した試験具を製造し、前記のエ
ステル基質を尿中白血球に対する反応性について試験す
るための、一連の実験を行なった。この試験具は、分析
試薬を含有した小さな正方形の濾紙を、ポリスチレンフ
ィルム片の一端に取付けたものであった。Ｆ紙には、緩
衝液、エステル、促進剤及びジアゾニウム塩カップリン
グ剤を含浸させた。各試験具は、尿中白血球について陽
性値の分析結果を示した。

エステルが３−（Ｎ−）シルーＬ−７ラニニルオキシ）
−５−フェニルピロール（４）である試ＭＡ（実、験【
ｌ）） 尿中白血球の存在に対して感受性のある試験具を製造し
た。この試験具は、横長のポリスチレンフィルム片の一
端綽取付けた小さ表止方形の濾紙から成るものとした。

Ｆ紙には、色原体エステル、促進剤及びジアゾニウム塩
を含む種々の成分を含浸させた。イートン−ディックマ
ン（Ｅａｔｏｎ　ａｎｄＤｉｃｋｍａｎ　）す２０５の
５．１ｃｒＩＫ（２インチ）幅濾紙片を、 ０．４Ｍホウ酸塩−ＮａＯＨ緩衝液…８．６．２．０　
％　（Ｗ／Ｖ　）　＆リヒニルビｏ　ｒ）　トｙ　Ｋ　
−３０ｓＯ，２％　（Ｗ／Ｖ　）　ｒビオテルヅユ（Ｂ
ｉｏｔｅｒｇｅ）　ＪＡＳ−４０及び０．２５　Ｍ　Ｎ
ｘＣ１を含有する水溶液に浸漬した。

次に水柱２．５４ｔＭ（１インチ）の空気流圧の下に８
０．４°〜９３．３℃（１７５〜２００’Ｆ’）で、オ
ーバーＩ＋　−エアーフォイル（Ｑｖｅｒｌｙ　Ａｉｒ
　Ｆｏｉｌ）紙乾燥機中で７分間濾紙を乾燥させた。次
に乾燥した濾紙を、 ２．０チ（Ｖ／Ｖ）ｎ−デカノール、 ０．７５ｍＭ２−メトキシ−４−モルホリノベンゼンジ
アゾニウムクロリド、及び ０．５ｍＭ　３−　（Ｎ−）シル−し一アラニニルオキ
シ）−５−フェニルピロール 金含有するアセトン溶液に浸漬した。

この含浸後に１３０°Ｆ’の通風させた「ホラトノダッ
ク（Ｈｏｔｐａｃｋ）　Ｊオープン中で１０分間乾燥さ
せた。白色がかった試験紙を得た。

乾燥させた含浸濾紙片を、１辺の長さが０．５１ｃｒｎ
（０，２インチ）の正方形に切り、１０．２ｃｒｎＸＯ
０５１譚（４インチ×０．２インチ）の１軸延伸ポリス
チレン片の一端に取付けた。濾紙片をポリスチレン片に
取付けるために、「ダブルスティック（１）ｏｕｂｌｅ
　５ｔｉｃｋ）Ｊ両面接着剤（スリーエム（３Ｍ）社製
）を使用した。

エステル７５Ｅ３−（Ｎ−）シルーＬ−アラニニルオヤ
シ）−５−フェニルチオフェン（９）である試験具（実
験（２１） ３−（Ｎ−）シルーＬ−アラニニルオキシ）−５−フェ
ニルチオフェンを指示薬として使用し、尿中白血球の存
在に対して感受性を有する試験具を製造した。ＰＭ片（
イートン・アンド・ディック−＋ｒ　ｙ　（Ｅａｔｏｎ
ａｎｄ　ｌ）ｉｃｋｍａｎ　）φ２０５　）　ｆｔ。

０．４Ｍホウ酸塩−ＮａＯＨ緩衝液（ｐ）］＝８．５）
、０．４　Ｍ　ＮａＣ４，及び １．５％（Ｗ／Ｖ）ポリヒニルピロリ）’／（Ｋ−３０
）を含有する第１水溶液に浸漬した。

このように含浸させた濾紙片を３０分間７０℃で強制通
風オープン中において乾燥させた後、室温に冷却し、次
に、 ０．７５　ｍＭ　３−、（Ｎ−）シルーＬ−アラニニル
オキシ）−５−フェニルチオフェン、 ０．７５　ｍＭ　２−メトキシ−４−モルホリノベンゼ
ンジアゾニウムクロリド−塩化亜鉛複塩、及び０．５チ
（Ｖ／Ｖ）ｎ−デカノール を含有するアセトン溶液からなる第２浸漬溶液を含浸さ
せた。

このように２回含浸させた濾紙片を５分間５０℃で強制
通風オーブン中において乾燥させた。

乾燥させた濾紙を、１辺の長さが０．５１σ（０，２イ
ンチ）の正方形に切り０．５１　ｃｍ　Ｘ　８．３　ｅ
ｙｎ　（０，２Ｘ　３．２５インチ）のポリスチレンフ
ィルム片の一端に取付けた。「ダブルスティック（Ｄｏ
ｕｂｌｅ　５ｔｉｃｋ）Ｊ（スリーエム（３Ｍ）社製両
面接着テープ）を用いて取付けを行なった。試験具は、
乾燥用のシリカクル及びモレキュラーシープ（ｍｏｌｅ
ｃｕｌａｒ　５ｉｅｖｅｓ）と共に１００個ずつ複数の
壜に収納し貯蔵した。

エステルが３−（Ｎ−）シルーＬ−アラニニルオキシ）
　−１−メｆルー５−フェニルピロール（ｔ３　テある
試験具（実験（３）） エステル指示薬として３−　（Ｎ−）シルーＬ−アラニ
ニルオキシ）−１−メチル−５−７ｍニルビロールを、
またカップリング剤として１−ジアゾナフタレン−４−
スルホン酸塩をそれぞれ使用し、実験（１）の実験手順
に従って、試験具を製造した。第１浸漬水溶液は、 ０．４Ｍホウ酸、 ０６２チ（Ｗ／Ｖ）ポリビニルピロリドン（Ｋ−３０）
及び ０．２％（Ｖ／Ｖ）ｒビオテルジａ（Ｂｉｏｔｅｒｇｅ
）Ｊ　ＡＳ　−０ ０，２５Ｍ　ＮａＣｔ を含有していた。

テ紙の含浸前に溶液をＮａＯＨでｐＨ９，０に滴定し是
。

アセトン中の第２浸漬溶液は、 ０．７５　ｍＭ　１−−／アゾー２−ナフトールー４−
スルホン酸塩 １．３ｍＭ　３−　（Ｎ−）シルーＬ−アラニニルオキ
シ）　−１−’ｆシル−−フェニルビロール１．５％（
Ｖ／Ｖ）ドデカノール を含有していた。

第１浸漬溶液である前記水溶液を含浸させた後、約５分
間約８０℃で濾紙を乾燥させ、第：２浸漬溶液であるア
セトン溶液を含浸させた後、約５分間７０℃でこの濾紙
を乾燥させた。

乾燥させた濾紙は、実験（１）の実験手順と同様にして
叡付けた。

エステルが３−（Ｎ−）シルーＬ−７ラニニルオキゾ）
−５−（ｐ−クロロフェニル）ビロールｔＬ８でおる試
験具（実験（４）） アセトン溶液がフェニルビロールの代りに１．３ｍＭ３
−（Ｎ−トシル−Ｌ−アラニニルオキシ）−５−（ｐ−
クロロフェニル）ビロールを含有スすことを除いて、実
験（１）の実験手順と同様にして試験具を３Ｉｉｌ造し
た。

試験具の評価 上記の実験において製造した試験具について尿中の白血
球を検出する能力の評価を行なった。

正常な人の尿のプールから試験試料を製造した。

１つの試料はブランクとして使用し、新しく採血した血
液から単離した白血球を、２つの別の尿試料に添加し、
それぞれ１μＬ当り白血球数０１１０．７５個の濃度と
した。

試験具を試験試料に素早く浸漬させた後、それから取出
した。２分後に分光光度計を用いて試験具を観察し、４
００〜７００　ｎｍの異なった波長で反射・π（イ）を
測定した。

試験データは、試験具の全てが試験試料中の異なった白
血球レベルに対応した明瞭に識別されうる光反射率の差
異を示すことを示している。試験データを次表【で示す
。

０　６１ 目視による観察：１０〜１２細胞／μＬ　にかいて紫色
を呈するニブランクは色の変化を示さなかつ船 第１頁の続き ■Ｉｎｔ、ＣＩ　、４　識別記号　庁内整理番号０発　
明　者　メイタック拳テレサ・　アメリカ合衆Ｉイップ
　リークヘイブン ＠発明者　ポール・エフ・コーレ　アメリカ会衆Ｉイ　
ドルバリー・ヌ １、インヂアナ　４６５１４、エルクハート、り′・ド
ライブ　５１１９４ １、インヂアナ　４６５１６．エルクハート、ミ、トリ
ート　１５２９ 手続補正書 昭和６０年７月２日 特許庁長官　志　賀　学　殿 １、事件の表示 昭和６０年特許願第　７１２６４号 ２、発明の名称 試験試料中の加水分解分析対象物の存詮を検出するため
の新規なエステル及びその製造方法３、補正をする者 電性との関係　特許出願人 名称　マイルス・ラボラトリーズ舎 インコーポレーテッド ４、代理人 （ロ明細書第４２４−ジ第８行の末尾に［の合成］を追
加する。

（２）同第５０ページ第１７行の「グライン」を「プラ
イン」と補正する。

（３）同第６８ページ第１１〜１２行の「イートン−デ
ィックマン（Ｅａｔｏｎ　ａｎｄ　Ｄｉｃｋｍａｎ）Ｊ
を「イートン拳アンド・ダイクマン（Ｅａｔｏｎ　ａｎ
ｄＤｉｋｅｍａｎ月と補正する。

（４）同第７０ページ第６〜７行の「イートン・アンド
・ディックマン（Ｅａｔｏｎ　ａｎｄ　Ｄｉｃｋｍａｎ
）Ｊを「イートン・アンド・ダイクマン（Ｅａｔｏｎ　
ａｎｄＤｉｋｅｍａｎ）Ｊ　と補正する。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １）　構造式 （式中、Ａは酸残基を表わし；Ｒは、低級アルキル、ア
   リール、カルボキシル、カルゲキシルエステル、アミド
   又はシアンを表わし；Ｖ　は水素又は低級アルキルを表
   わし；ＸはＯｌＳ又はＮＲ’を表わすが、このときＲ′
   　は水素、低級アルキル又はアリールを表わす） を有する化合物。 ２）　ＸがＮＲ’である特許請求の範囲第１項記載の化
   合物。 ３）　ＡがＮ−ブロックされたアミ・ノ酸又はＮ−プロ
   ツクされたペプチドでちる特許請求の範囲第２項記載の
   化合物。 ４）　ＡがＮ−ブロックされたＬ−アラニネートである
   特許請求の範囲第２項記載の化合物。 ５）　Ｒがアリールである特許請求の範囲第２〜４項の
   いずれかに記載の化合物。 ６）　ＡがＮ−ブロックされたＬ−アラニネートを表わ
   し；Ｒがフェニルを表わし；ＸがＮＲ’を表わし：Ｒ＋
   及びＲ′は共に水素を表わす特許請求の範囲第１項記載
   の化合物。 ７）構造式 （式中、Ｂは、Ｎ−ブロックされたアミノ酸残基又はＮ
   −ブロックされたペプチド残基を表わし；Ｒは低級アル
   キル、アリール、カルがキシル、カル〆キシルエステル
   、アミド又はシアノを表わし：Ｒは水素又は低級アルキ
   ルを表わす） を有するエステルを製造する方法において、該方法が 偵）（１）　ケトン、アルカリ金属のモノ過硫酸塩及び
   構造式 を有する化合物の水性混合物を、該水性混合物のＰＨを
   少くとも７に保つに足りる竜のアルカリ金属重炭酸塩の
   存在下に反応させて、第１反応混合物を生成させ、 （ｉｌ）　該第１反応混合物にＨＯＯＣ−ＣＨ，−ＮＨ
   Ｒ’を添加して、第２反応混合物を生成させ、 ＧＩＤ　該第２反応混合物から水分を除去して、実質的
   に乾燥した第２混合物を形成し、 （ｌｖＩ　該乾燥した第２混合物にカルがン酸無水物を
   有機塩基の存在下添加して、第３反応混合物を生成させ
   、 （ｖ）　工程蜘によって得た第３反応混合物を加水分ｓ
   ｉ境に付して、３−ヒドロキシ−ビロール含有反応混合
   物を生成させ、 〜Ｉ　３−ヒドロキシビロールを単離スる順次の工程に
   よって、構造式 を有する３−ヒドロキシビロールを生成させ、（ｂ）　
   Ｎ−ブロックされたペプチド又はＮ−ブロックされたア
   ミノ酸の酸ノ為ロｒン化物を有機酸の存在下にこの３−
   ヒドロキシビロールに添加して、生成物の混合物を生成
   させ、そして、 （ｃ）該生成物の混合物からエステルを単離する順次の
   工程から成ることを特徴とするエステルの製造方法。 ８）　ＢがＮ−ブロックされたし一アラニネートを表わ
   す特許請求の範囲第７項記載の製造方法。 ９）　Ｒがアリールである特許請求の範囲第７項記載の
   製造方法。 １０）Ｒがフェニルを表わし、Ｒ１が水素を表わす特許
   請求の範囲第８項記載の製造方法。 １１）　ｆＫ　１の反応混合物のｐ）Ｉを約９．６〜１
   ２に高める特許請求の範囲第７項記載の製造方法。 １２）加水分解環境がメタノール、水及びアルカリ金属
   の水酸化物からなる特許請求の範囲第７項記載の製造方
   法。 １３）加水分解環境が約０．１〜約４Ｎのアルカリ金属
   水酸化物、水及びメタノールからなる特許請求の範囲第
   １２項記載の製造方法。 １４）酸ハロゲン化物が酸塩化物である特許請求の範囲
   第７項記載の製造方法。 １５）有機酸がトリフルオロ酢酸である特許請求の範囲
   第７項記戦の製造方法。