JPS6029470B2 - ９α−ヒドロキシアンドロステンジオンを生産する微生物 - Google Patents
９α−ヒドロキシアンドロステンジオンを生産する微生物Info
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- JPS6029470B2 JPS6029470B2 JP55000369A JP36980A JPS6029470B2 JP S6029470 B2 JPS6029470 B2 JP S6029470B2 JP 55000369 A JP55000369 A JP 55000369A JP 36980 A JP36980 A JP 36980A JP S6029470 B2 JPS6029470 B2 JP S6029470B2
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- C07J1/0003—Androstane derivatives
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- C07J1/0011—Androstane derivatives substituted in position 17 by a keto group
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- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
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Description
【発明の詳細な説明】
本発明は２乃至１の因の炭素原子を有する１７−アルキ
ル側鎖を有するステロイドの選択的減成分解をおこさせ
る微生物に関する。
ル側鎖を有するステロイドの選択的減成分解をおこさせ
る微生物に関する。
微生物によるステロイド類の転化は広く研究され、記録
されている。
されている。
明らかに最初の研究は１９３７年のマモリ（Ｍａｍｏｌ
ｉ）とヴェルセローネ（Ｖｅｒｃｅｌｌｏｎｅ）、Ｂｅ
ｒ．７岱蓋４７０頁及び控ｒ．７０巻２０７９頁による
ものである。彼らは、酵母発酵による１７ーケトステロ
イド類から１７８一ヒドロキシステロィド類への還元を
明らかにした。もっと近年ではピーターソン（Ｐｅｔｅ
ｒｓｏｎ）及びマレー（Ｍｍｒａｙ）が、かびのりゾプ
ス・ニダリカンス（Ｒｈｉｚｏｐ肌ｎｌｇｎｃａｎｓ）
によるプロゲステロンの１１Ｑ−ヒドロキシル化を明ら
かにした。合衆国特許第２６０２７６ｙ号（１９５２壬
）を参照。また最近では合衆国特許第３６８４６５７号
（１９７２王）でクレーキー（Ｋｒａｙｃｈｙ）らは、
１７−アルキル側鎖中に少なくとも８個の炭素を含有す
るステロイドをミコバクテリウム（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅ
てｉｕｍ）スベシーズ・ＮＲＲＬＢ−３斑３で発酵させ
ることによるステロイドの１７−アルキル類の選択的微
生物的低下分解で、アンドロストー４ーエンー３，１７
−ジオン、アンドロストー１，４ージエン−３，１７ー
ジオン及び２０Ｑ−ヒドロキシメチルプレグナー１，４
ージェンー３−オンの製造を明らかにした。更に最近で
はマーシェク（ＭａＲｈｅｃｋ）等は合衆国特許第３７
５９７９１号（１９７３年）で、１７−アルキル側鎖中
に少なくとも８個の炭素を含有するコレスタン又はスチ
グマスタン系のステロイドをミコバクテリゥム・スベシ
ーズＮＲＲＬＢ−３８０５によって発酵させることによ
るアンドロストー４ーエン−３，１７ージオンの選択的
微生物学的製造を明らかにした。本発明の突然変異株は
、２〜１の固の炭素原子の１７−アルキル側鎖をもつス
テロイド類を選択的に減成分解し、発酵液中に以下に９
Ｑ−ＯＨＡＤと称する９Ｑーヒドロキシアンドロステン
ジオンを蓄積する能力により特徴づけられる。
ｉ）とヴェルセローネ（Ｖｅｒｃｅｌｌｏｎｅ）、Ｂｅ
ｒ．７岱蓋４７０頁及び控ｒ．７０巻２０７９頁による
ものである。彼らは、酵母発酵による１７ーケトステロ
イド類から１７８一ヒドロキシステロィド類への還元を
明らかにした。もっと近年ではピーターソン（Ｐｅｔｅ
ｒｓｏｎ）及びマレー（Ｍｍｒａｙ）が、かびのりゾプ
ス・ニダリカンス（Ｒｈｉｚｏｐ肌ｎｌｇｎｃａｎｓ）
によるプロゲステロンの１１Ｑ−ヒドロキシル化を明ら
かにした。合衆国特許第２６０２７６ｙ号（１９５２壬
）を参照。また最近では合衆国特許第３６８４６５７号
（１９７２王）でクレーキー（Ｋｒａｙｃｈｙ）らは、
１７−アルキル側鎖中に少なくとも８個の炭素を含有す
るステロイドをミコバクテリウム（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅ
てｉｕｍ）スベシーズ・ＮＲＲＬＢ−３斑３で発酵させ
ることによるステロイドの１７−アルキル類の選択的微
生物的低下分解で、アンドロストー４ーエンー３，１７
−ジオン、アンドロストー１，４ージエン−３，１７ー
ジオン及び２０Ｑ−ヒドロキシメチルプレグナー１，４
ージェンー３−オンの製造を明らかにした。更に最近で
はマーシェク（ＭａＲｈｅｃｋ）等は合衆国特許第３７
５９７９１号（１９７３年）で、１７−アルキル側鎖中
に少なくとも８個の炭素を含有するコレスタン又はスチ
グマスタン系のステロイドをミコバクテリゥム・スベシ
ーズＮＲＲＬＢ−３８０５によって発酵させることによ
るアンドロストー４ーエン−３，１７ージオンの選択的
微生物学的製造を明らかにした。本発明の突然変異株は
、２〜１の固の炭素原子の１７−アルキル側鎖をもつス
テロイド類を選択的に減成分解し、発酵液中に以下に９
Ｑ−ＯＨＡＤと称する９Ｑーヒドロキシアンドロステン
ジオンを蓄積する能力により特徴づけられる。
これらの及び本発明に含まれない突然変異株は本明細書
に記載の又はその他の突然変異手順を使用して、次の属
すなわちアースロバクタ−（Ａれｈｒｏｂａｃにｒ）、
バチルス（鞄ｃｉｌｌｕｓ）、ブレビバクテリウム（Ｂ
ｒｅｖｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ）、コリネバクテリウ ム
（Ｃｏりｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ）、ミクロバクテリウ
ム（Ｍｉｃｒｏ舷ｃｔｅｒｉ血）、ミ コ バクテリ
ウ ム（Ｍｙｃｏ戊ｃｔｅｒｉ山ｍ）、ノカルデイア（
Ｎｏｃａｒｄｉａ）、プロトアミノバクター（Ｐｒｏｔ
ａｍｉ皿ｂａｃにｒ）、セラテイア（Ｓｅｍａｔｉａ）
及びストレプトミセス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ）の
微生物から得られる。好ましい属はミコバクテリゥムで
ある。この属の例示的な種はェム・フレイ（Ｍｐｈｌｅ
ｉ）、ェム・スメグマチス（Ｍ．ｓｍｅｇｍａｔｉｓ）
、エム・ロードクラス（Ｍ．ｒｈｏｄ。ｃｈｒ。ｕｓ入
エ ム・ミユ コ ス ム（Ｍ．ｍｕｃｏｓ血）、エ
ム・フオ−ツイツム（Ｍ，ｂｒｔｕｉｔ山ｍ）、及びェ
ム・ブテイリクム（Ｍ．ｂｕツｒｊｃｕｍ）である。本
明細書中に特定的に例示されているのは、新規な突然変
異株の微生物ミコバクテリウム・フオーツイツム（Ｍｙ
ｃｏ戊ｃｔｅｒｉ山ｍｂｒｔｕｉｔｍｍ）ＮＲＲＬＢ−
８１１９であって、２〜１の固の炭素原子の１７−アル
キル鎖をもつステロイド類を９Ｑ−ヒドロキシアンドロ
ステンジオン（以下に９Ｑ−ＯＨＡＤと称する）へ選択
的に減成分解するのに用いられる。適当なステロイド基
質の例はシトステロール、コレステロール、スチグマス
テロール、カンベステロール及び２〜１の固の炭素原子
の１７−アルキル側鎖をもつ同様なステロイド類である
。これらのステロイド基質は純粋な型又は粗製型であり
うる。微生物 ２〜１の固の炭素原子の１７ーアルキル側鎖をもったス
テロイド類を選択的に減成分解して発酵液中に９Ｑ−Ｏ
ＨＡＤを蓄積させる能力によって特徴づけられる突然変
異株は、次の属すなわちアーストロバクター、パチルス
、プレピバクテリウム、コリネバクテリウム、ミクロバ
クテリウム、ミコバクテリウム、ノカルデイア、プロト
アミノバクター、セラティア及びストレプトミセスの微
生物を突然変異させることによって得られる。
に記載の又はその他の突然変異手順を使用して、次の属
すなわちアースロバクタ−（Ａれｈｒｏｂａｃにｒ）、
バチルス（鞄ｃｉｌｌｕｓ）、ブレビバクテリウム（Ｂ
ｒｅｖｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ）、コリネバクテリウ ム
（Ｃｏりｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ）、ミクロバクテリウ
ム（Ｍｉｃｒｏ舷ｃｔｅｒｉ血）、ミ コ バクテリ
ウ ム（Ｍｙｃｏ戊ｃｔｅｒｉ山ｍ）、ノカルデイア（
Ｎｏｃａｒｄｉａ）、プロトアミノバクター（Ｐｒｏｔ
ａｍｉ皿ｂａｃにｒ）、セラテイア（Ｓｅｍａｔｉａ）
及びストレプトミセス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ）の
微生物から得られる。好ましい属はミコバクテリゥムで
ある。この属の例示的な種はェム・フレイ（Ｍｐｈｌｅ
ｉ）、ェム・スメグマチス（Ｍ．ｓｍｅｇｍａｔｉｓ）
、エム・ロードクラス（Ｍ．ｒｈｏｄ。ｃｈｒ。ｕｓ入
エ ム・ミユ コ ス ム（Ｍ．ｍｕｃｏｓ血）、エ
ム・フオ−ツイツム（Ｍ，ｂｒｔｕｉｔ山ｍ）、及びェ
ム・ブテイリクム（Ｍ．ｂｕツｒｊｃｕｍ）である。本
明細書中に特定的に例示されているのは、新規な突然変
異株の微生物ミコバクテリウム・フオーツイツム（Ｍｙ
ｃｏ戊ｃｔｅｒｉ山ｍｂｒｔｕｉｔｍｍ）ＮＲＲＬＢ−
８１１９であって、２〜１の固の炭素原子の１７−アル
キル鎖をもつステロイド類を９Ｑ−ヒドロキシアンドロ
ステンジオン（以下に９Ｑ−ＯＨＡＤと称する）へ選択
的に減成分解するのに用いられる。適当なステロイド基
質の例はシトステロール、コレステロール、スチグマス
テロール、カンベステロール及び２〜１の固の炭素原子
の１７−アルキル側鎖をもつ同様なステロイド類である
。これらのステロイド基質は純粋な型又は粗製型であり
うる。微生物 ２〜１の固の炭素原子の１７ーアルキル側鎖をもったス
テロイド類を選択的に減成分解して発酵液中に９Ｑ−Ｏ
ＨＡＤを蓄積させる能力によって特徴づけられる突然変
異株は、次の属すなわちアーストロバクター、パチルス
、プレピバクテリウム、コリネバクテリウム、ミクロバ
クテリウム、ミコバクテリウム、ノカルデイア、プロト
アミノバクター、セラティア及びストレプトミセスの微
生物を突然変異させることによって得られる。
本明細書で明らかにされているとおりにミコバクテリウ
ム・フ オ ‐ッイッム（Ｍｙｃｏ蛇Ｃｔｅｒｉ肌的ｎ
ｕｉｔｍｍ）ＡＴＣＣ６８４２を突然変異させると、新
規な実験室的突然変異株の微生物を生ずる。１９７４年
度ＡＴＣＣカタログはＡＴＣＣ６８４２の記記載と並べ
て次のことを明らかにしている。
ム・フ オ ‐ッイッム（Ｍｙｃｏ蛇Ｃｔｅｒｉ肌的ｎ
ｕｉｔｍｍ）ＡＴＣＣ６８４２を突然変異させると、新
規な実験室的突然変異株の微生物を生ずる。１９７４年
度ＡＴＣＣカタログはＡＴＣＣ６８４２の記記載と並べ
て次のことを明らかにしている。
（ジェー・シー・クルス（Ｊ．Ｃ．Ｃｍｚ）２．Ｃｏｌ
ｄａｂｓｃｅｓｓ．ＡｃｔａＭｅｄ Ｒｉｏ ｄｅ Ｊ
ａｎｅｉｒｏ ｌ：１（１９３６年）．Ｍｅｄｉ山ｍ９
０３７Ｃ）。Ｍ．フオーツイツムＡＴＣＣ６８４２はス
テロール類を非選択的に小分子量化合物類、例えばＣ０
２十日２０へ分解する。このためこの微生物は選択的ス
テロイド分解剤として不適である。ニトロソグアニジン
を使用してのＭ．フオーツィッムＡＴＣＣ６８４２の突
然変異は、２〜１の固の炭素原子の１７−アルキル側鎖
をもったステ。ィド類を選択的に城成分解して９Ｑ−Ｏ
ＨＡＤをつくるような新規突然変異株の製造をもたらし
た。Ｍ．フオーツィッムのこの突然変異株微生物は、永
久保存株中に寄託された合衆国イリノイ州べオリアの合
衆国農務省北部地域研究所により受け入れ番号ＮＲＲＬ
Ｂ−８１１９を与えられた。本微生物の二次培養基はこ
の寄託所へ請求すれば自由に入手できる。培養基の入手
は、政府決定による題目の証書と共に授与された特許権
を侵害してまで本発明を実施してよいという許諾を構成
するものでないことに理解すべきである。日本国におい
ては、本菌は昭和５１年１０月２１印こ工業技術院微生
物工業技術研究所に保管委託申請し、受理された。
ｄａｂｓｃｅｓｓ．ＡｃｔａＭｅｄ Ｒｉｏ ｄｅ Ｊ
ａｎｅｉｒｏ ｌ：１（１９３６年）．Ｍｅｄｉ山ｍ９
０３７Ｃ）。Ｍ．フオーツイツムＡＴＣＣ６８４２はス
テロール類を非選択的に小分子量化合物類、例えばＣ０
２十日２０へ分解する。このためこの微生物は選択的ス
テロイド分解剤として不適である。ニトロソグアニジン
を使用してのＭ．フオーツィッムＡＴＣＣ６８４２の突
然変異は、２〜１の固の炭素原子の１７−アルキル側鎖
をもったステ。ィド類を選択的に城成分解して９Ｑ−Ｏ
ＨＡＤをつくるような新規突然変異株の製造をもたらし
た。Ｍ．フオーツィッムのこの突然変異株微生物は、永
久保存株中に寄託された合衆国イリノイ州べオリアの合
衆国農務省北部地域研究所により受け入れ番号ＮＲＲＬ
Ｂ−８１１９を与えられた。本微生物の二次培養基はこ
の寄託所へ請求すれば自由に入手できる。培養基の入手
は、政府決定による題目の証書と共に授与された特許権
を侵害してまで本発明を実施してよいという許諾を構成
するものでないことに理解すべきである。日本国におい
ては、本菌は昭和５１年１０月２１印こ工業技術院微生
物工業技術研究所に保管委託申請し、受理された。
その微生物受託番号は第３７７５号である。Ｍ．フオー
ッィッムＮＲＲＬＢ−８１１９の形態及び薬剤感受性は
親菌株のＭ．フオーッィツムＡＴＣＣ総４２と区別でき
ない。
ッィッムＮＲＲＬＢ−８１１９の形態及び薬剤感受性は
親菌株のＭ．フオーッィツムＡＴＣＣ総４２と区別でき
ない。
両方のＭ．フオーッィツム培養基は、アクチクミセタレ
ス（Ａｃｔｉｎｏｍｙｃｅねｌｅｓ）目のミコバクテリ
アセアエ（Ｍｙｃｏｂａｃにｒｉａｃｅａｅ）族に属す
る耐酸性で非自動性の胞子を形成しない杵菌である。
ス（Ａｃｔｉｎｏｍｙｃｅねｌｅｓ）目のミコバクテリ
アセアエ（Ｍｙｃｏｂａｃにｒｉａｃｅａｅ）族に属す
る耐酸性で非自動性の胞子を形成しない杵菌である。
ラニョン（Ｒ肌ｙｏｎｓ）の分類（ラニョン・イー・エ
イチ（Ｒ肌ｙｏｎ，Ｅ．日．）１９５９年、Ｍｅｄ．Ｃ
ｌｉｎ．ＮｏｎｈＡｍｅｒｉｃａ４３巻２７３頁）によ
ると、これは特定色素を生産しない第Ｗ群のミコバクテ
リウムである。すなわち低温で急速に増殖し、比較的簡
単な渚地上で色素のない集落をつくる。Ｍ．フオーッイ
ッムＡＴＣＣ６８４２とＭ．フオーッイツムＮＲＲＬＢ
−８１１９とは、ステロイド分子への作用においてはっ
きりと区別できる。
イチ（Ｒ肌ｙｏｎ，Ｅ．日．）１９５９年、Ｍｅｄ．Ｃ
ｌｉｎ．ＮｏｎｈＡｍｅｒｉｃａ４３巻２７３頁）によ
ると、これは特定色素を生産しない第Ｗ群のミコバクテ
リウムである。すなわち低温で急速に増殖し、比較的簡
単な渚地上で色素のない集落をつくる。Ｍ．フオーッイ
ッムＡＴＣＣ６８４２とＭ．フオーッイツムＮＲＲＬＢ
−８１１９とは、ステロイド分子への作用においてはっ
きりと区別できる。
上に明らかにされたように、Ｍ．フオーツイツムＡＴＣ
Ｃ皮払２はステロイド類の非選択的減成分解剤であるの
に反し、Ｍ．フオーッィッムＮＲＲＬＢ−８１１９は、
選択的な減成分解剤である。Ｍ．フオーツィッムＮＲＲ
ＬＢ−８１１９のこの性質のため、本明細書に明らかに
されたようにこれは非常に有用なものとなっている。Ｍ
．フオーツイツムＮＲＲＬＢ一８１１９をつくるための
Ｍ．フオーッィッムＡＴＣＣ斑４２突然変異は、ニトロ
ソグアニジンを使って達成される。
Ｃ皮払２はステロイド類の非選択的減成分解剤であるの
に反し、Ｍ．フオーッィッムＮＲＲＬＢ−８１１９は、
選択的な減成分解剤である。Ｍ．フオーツィッムＮＲＲ
ＬＢ−８１１９のこの性質のため、本明細書に明らかに
されたようにこれは非常に有用なものとなっている。Ｍ
．フオーツイツムＮＲＲＬＢ一８１１９をつくるための
Ｍ．フオーッィッムＡＴＣＣ斑４２突然変異は、ニトロ
ソグアニジンを使って達成される。
手順の詳細は以下に記載されている。突然変異手順は概
してこの技術に知られているが、本突然変異手順の使用
により得られる突然変異株があれば、その種類を教示す
るか、あるいは示唆でもするような技術は知られていな
い。また、本明細書に明らかにされている突然変異及び
転化手順はミコバクテリゥムに対して詳細に記載されて
いるが、本明細書に明らかにされているように、その他
の属の微生物に対しても同様な又は同等な手順を使用で
きることを理解すべきである。転化方法 本発明の選択的な転化は、Ｍ．フオーッィッムＮＲＲＬ
Ｂ−８１１９の生育中の培養基において、選ばれたステ
ロイド基質を培養期間中に培養基へ加えるか、又は接種
前に栄養培地中へこれを混入することによって実施でき
る。
してこの技術に知られているが、本突然変異手順の使用
により得られる突然変異株があれば、その種類を教示す
るか、あるいは示唆でもするような技術は知られていな
い。また、本明細書に明らかにされている突然変異及び
転化手順はミコバクテリゥムに対して詳細に記載されて
いるが、本明細書に明らかにされているように、その他
の属の微生物に対しても同様な又は同等な手順を使用で
きることを理解すべきである。転化方法 本発明の選択的な転化は、Ｍ．フオーッィッムＮＲＲＬ
Ｂ−８１１９の生育中の培養基において、選ばれたステ
ロイド基質を培養期間中に培養基へ加えるか、又は接種
前に栄養培地中へこれを混入することによって実施でき
る。
ステロイドは単独でも、他のステロイドと組合わせても
加えることができる。培養基中におけるステロイドの好
ましいけれども限定的でない濃度範囲は、リットル当り
約０．１ないし約１００夕である。培養基は、炭素源、
例えば同化できる炭水化物及び窒素源、例えば同化でき
る窒素化合物又は蛋白質材料を含有する栄養培地中で生
育する。好ましい炭素源はブドウ糖、黒砂糖、庶糖、グ
リセロール、殿粉、コーンスターチ、乳糖、デキストリ
ン、糖みつ等を包含する。好ましい窒素源はコーンスチ
ープリカー、酵母、固型乳を伴った自己消化ビール酵母
、大豆粉、棉実粉、コーンミール、固型乳、カゼインの
すＬ・液消化物、魚粉、ディスチラーズソリツド、勤物
べブトン液、肉と骨の破片、アンモニウム塩等を包含す
る。これらの炭素源と窒素源の組合せを使用するのが有
利である。痕跡量の金属、例えば亜鉛、マグネシウム、
マンガン、コバルト、鉄等は発酵培地に加える必要がな
い。といいうのは、培地の滅菌前に培地成分として水道
水及び未精製成分を使用するからである。転化過程は、
約７幼時間から１５日間の範囲でありうる。
加えることができる。培養基中におけるステロイドの好
ましいけれども限定的でない濃度範囲は、リットル当り
約０．１ないし約１００夕である。培養基は、炭素源、
例えば同化できる炭水化物及び窒素源、例えば同化でき
る窒素化合物又は蛋白質材料を含有する栄養培地中で生
育する。好ましい炭素源はブドウ糖、黒砂糖、庶糖、グ
リセロール、殿粉、コーンスターチ、乳糖、デキストリ
ン、糖みつ等を包含する。好ましい窒素源はコーンスチ
ープリカー、酵母、固型乳を伴った自己消化ビール酵母
、大豆粉、棉実粉、コーンミール、固型乳、カゼインの
すＬ・液消化物、魚粉、ディスチラーズソリツド、勤物
べブトン液、肉と骨の破片、アンモニウム塩等を包含す
る。これらの炭素源と窒素源の組合せを使用するのが有
利である。痕跡量の金属、例えば亜鉛、マグネシウム、
マンガン、コバルト、鉄等は発酵培地に加える必要がな
い。といいうのは、培地の滅菌前に培地成分として水道
水及び未精製成分を使用するからである。転化過程は、
約７幼時間から１５日間の範囲でありうる。
転化期間中の培養温度は、約２ぢＣないし約３７０の範
囲であり得るが、３０ｑ○が好ましい。微生物の生育を
容易にし、転化過程の有効性を強めるため、転化容器の
内容物に滅菌された空気を通じてかきまぜる。シリカゲ
ル板（Ｅ．メルク・ダルムシュタット）及び２：３（容
量比）の酢酸エチルーシクロヘキサンからなる溶媒系を
使用する薄層クロマトグラフィによって立証されるとお
りに転化過程が終了したら、この技術によく知られた手
段によって望む転化ステロイドを回収する。
囲であり得るが、３０ｑ○が好ましい。微生物の生育を
容易にし、転化過程の有効性を強めるため、転化容器の
内容物に滅菌された空気を通じてかきまぜる。シリカゲ
ル板（Ｅ．メルク・ダルムシュタット）及び２：３（容
量比）の酢酸エチルーシクロヘキサンからなる溶媒系を
使用する薄層クロマトグラフィによって立証されるとお
りに転化過程が終了したら、この技術によく知られた手
段によって望む転化ステロイドを回収する。
例えば、発酵液と細胞とを含めた発酵（転化）反応混合
物をステロイド用の水と混ざらない有機溶媒で抽出でき
る。適当な溶媒は、塩化メチレン（好ましい）、クロロ
ホルム、四塩化炭素、塩化エチレン、トリクロロェチレ
ン、エーテル、酢酸アミル、ベンゼン等である。その代
わりに、発酵液と菌体をまず慣用方法、例えばろ過又は
遠心分離によって分離し、次いで適当な溶媒によって別
個に抽出できる。
物をステロイド用の水と混ざらない有機溶媒で抽出でき
る。適当な溶媒は、塩化メチレン（好ましい）、クロロ
ホルム、四塩化炭素、塩化エチレン、トリクロロェチレ
ン、エーテル、酢酸アミル、ベンゼン等である。その代
わりに、発酵液と菌体をまず慣用方法、例えばろ過又は
遠心分離によって分離し、次いで適当な溶媒によって別
個に抽出できる。
菌体を水と混ざる溶媒又は水と混ざらない溶媒で抽出で
きる。菌体を含まない発酵液を水と混ざらない溶媒で抽
出できる。抽出液を珪薮士に通してろ過し、ろ液を乾団
するまで減圧蒸留する。
きる。菌体を含まない発酵液を水と混ざらない溶媒で抽
出できる。抽出液を珪薮士に通してろ過し、ろ液を乾団
するまで減圧蒸留する。
望んでいる転化したステロイドを含有する残留物をメタ
ノール中の１０％クロロホルム中に熔解し、これを結晶
が生ずるまで蒸気裕上で窒素下に濃縮する。溶液を室温
まで冷却し、沈殿したステロイドを除くためにろ過する
。望んでいる転化ステロィド‘ま、残りの上燈液からも
、上澄液中の溶媒を蒸発させると得られる。本発明の転
化方法による望んでいる生成物は既知ステロイド中間体
９Ｑ−ＯＨＡＤである。アンドロスタン系統の９Ｑ−ヒ
ドロキシ化合物類は、抗アンドロゲン剤、抗ェストロゲ
ン剤及び抗受精剤として有用である。これらの９Ｑ−ヒ
ドロキシステ。ィド類はまた、その他の治療上有用なス
テロイド類の製造にも有用である。例えば、９Ｑ−ヒド
ロキシー１１一非置換ステロイド類は、この技術に知ら
れた方法に従って、例えばピリジンの存在下に塩化チオ
ニルにより、価値ある９（１１）−デヒドロステｏィド
へ容易に脱水される。こうして得られる９（１１）−デ
ヒドロ化合物類は、高活性化合物類の製造に知られた中
間体である。例えば、９（１１）−デヒドロステロィド
類は、この技術に知られた手順、例えば９Ｑ−ハローヒ
ドロコルチゾンの製造に対する合衆国特許第２８５２５
１１号に従って、対応する９Ｑ−ハロー１１８ーヒドロ
キシ化合物類へ容易に転化できる。以下の実施例は、本
発明の方法及び生成物の例示であるが限定的に考えられ
てはならない。
ノール中の１０％クロロホルム中に熔解し、これを結晶
が生ずるまで蒸気裕上で窒素下に濃縮する。溶液を室温
まで冷却し、沈殿したステロイドを除くためにろ過する
。望んでいる転化ステロィド‘ま、残りの上燈液からも
、上澄液中の溶媒を蒸発させると得られる。本発明の転
化方法による望んでいる生成物は既知ステロイド中間体
９Ｑ−ＯＨＡＤである。アンドロスタン系統の９Ｑ−ヒ
ドロキシ化合物類は、抗アンドロゲン剤、抗ェストロゲ
ン剤及び抗受精剤として有用である。これらの９Ｑ−ヒ
ドロキシステ。ィド類はまた、その他の治療上有用なス
テロイド類の製造にも有用である。例えば、９Ｑ−ヒド
ロキシー１１一非置換ステロイド類は、この技術に知ら
れた方法に従って、例えばピリジンの存在下に塩化チオ
ニルにより、価値ある９（１１）−デヒドロステｏィド
へ容易に脱水される。こうして得られる９（１１）−デ
ヒドロ化合物類は、高活性化合物類の製造に知られた中
間体である。例えば、９（１１）−デヒドロステロィド
類は、この技術に知られた手順、例えば９Ｑ−ハローヒ
ドロコルチゾンの製造に対する合衆国特許第２８５２５
１１号に従って、対応する９Ｑ−ハロー１１８ーヒドロ
キシ化合物類へ容易に転化できる。以下の実施例は、本
発明の方法及び生成物の例示であるが限定的に考えられ
てはならない。
他に注意がなければ百分率はすべて重量によるものであ
り、溶媒混合物の割合はすべて容量による。実施例 １
Ｍ．フオーッィッムＡＴＣＣ職４２から突然変異株Ｍ．
フオーッィッムＮＲＲＬＢ−８１１９の製造｛ａ｝ ニ
トロソグアニジンによるミユタゲネシスＭ．フオーッィ
ッムＡＴＣＣ６８４２の繭体を２８℃で次の無菌的種菌
培地中に生育させる。
り、溶媒混合物の割合はすべて容量による。実施例 １
Ｍ．フオーッィッムＡＴＣＣ職４２から突然変異株Ｍ．
フオーッィッムＮＲＲＬＢ−８１１９の製造｛ａ｝ ニ
トロソグアニジンによるミユタゲネシスＭ．フオーッィ
ッムＡＴＣＣ６８４２の繭体を２８℃で次の無菌的種菌
培地中に生育させる。
栄養培養液（ディフコ） ８夕／そ
酵母エキス １夕／そ
プロピオン酸ナトリウム ０．５タノク蒸留水
１夕とするに十分な量ＩＮＮａＯＨでｐＨを７．
０に調整してから、１２１℃２び分間滅菌する。
１夕とするに十分な量ＩＮＮａＯＨでｐＨを７．
０に調整してから、１２１℃２び分間滅菌する。
菌体を机上当り約５×１ぴの密度まで生育させる。
遠心分離によってべレット化し、無菌的な０．１Ｍ〈え
ん酸ナトリウム（ｐＨ５．６）の同容で洗う。洗った菌
体を同容量の〈えん酸緩衝液中に再懸濁し、試料を滴定
（菌数計算）のため除去し、ニトロソグアニジンを５０
仏夕／地の最終濃度まで加える。菌体懸濁液を３７０の
水浴中で３０分培養し、そのあとで試料を再び滴定のた
め除去する。残りを遠心分離し、同客の無菌的０．１Ｍ
燐酸カリウム（ｐＨ７．０）で洗う。
ん酸ナトリウム（ｐＨ５．６）の同容で洗う。洗った菌
体を同容量の〈えん酸緩衝液中に再懸濁し、試料を滴定
（菌数計算）のため除去し、ニトロソグアニジンを５０
仏夕／地の最終濃度まで加える。菌体懸濁液を３７０の
水浴中で３０分培養し、そのあとで試料を再び滴定のた
め除去する。残りを遠心分離し、同客の無菌的０．１Ｍ
燐酸カリウム（ｐＨ７．０）で洗う。
終りに次のものからなる炭素源源を含まない無菌的最少
塩培地中に菌体を再懸濁させる。Ｎ比Ｎ０３
１．０夕／そＫ２ＨＰ〇４ ０
．２５夕／クＭｇＳ〇４・７日２〇 ○‐
２５夕／そＮａＣＩ ○．００５多
／そＦｅＳ〇４・７日２〇 ０．００１夕／
そ蒸留水 １そとするに十分な量ＩＮＨＣＩで
ｐＨを７．０に調整してから、１２１ｑｏで２０分間滅
菌する。
塩培地中に菌体を再懸濁させる。Ｎ比Ｎ０３
１．０夕／そＫ２ＨＰ〇４ ０
．２５夕／クＭｇＳ〇４・７日２〇 ○‐
２５夕／そＮａＣＩ ○．００５多
／そＦｅＳ〇４・７日２〇 ０．００１夕／
そ蒸留水 １そとするに十分な量ＩＮＨＣＩで
ｐＨを７．０に調整してから、１２１ｑｏで２０分間滅
菌する。
次に突然変異株を選別するため菌体をプレート上に広げ
る。‘ｂ’突然変異株Ｍ．フオーッィッムＮＲＲＬＢ−
８１１９の選別と単離上記のように、突然変異化された
菌体を希釈し、次のものからなる培地〔フレーザー（Ｆ
ｒａｓｅｒ）及びジェレル（Ｊｅｎｅｌ）、１９６３年
、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２０５筈２９１一２９５頁
から変更〕を含有するプレート上に広げる。
る。‘ｂ’突然変異株Ｍ．フオーッィッムＮＲＲＬＢ−
８１１９の選別と単離上記のように、突然変異化された
菌体を希釈し、次のものからなる培地〔フレーザー（Ｆ
ｒａｓｅｒ）及びジェレル（Ｊｅｎｅｌ）、１９６３年
、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２０５筈２９１一２９５頁
から変更〕を含有するプレート上に広げる。
グリセロール １０．０夕／そＮａ２ＨＰ
〇４ ８‐４タノ〆ＫＨ２Ｐ〇４
４‐５夕／そＮＡＣ１
２．０夕／そＭｇＳ〇４・７日２〇
０．３夕／そＦｅＣ１３・母Ｌ〇 ０
．０５夕／そ蒸留水 １そとするに十分な量寒
天（そ当り１５夕）を加え、培地を１２１００で３び分
オートクレープ処理し、無菌のべトリ皿へ注ぐ。
〇４ ８‐４タノ〆ＫＨ２Ｐ〇４
４‐５夕／そＮＡＣ１
２．０夕／そＭｇＳ〇４・７日２〇
０．３夕／そＦｅＣ１３・母Ｌ〇 ０
．０５夕／そ蒸留水 １そとするに十分な量寒
天（そ当り１５夕）を加え、培地を１２１００で３び分
オートクレープ処理し、無菌のべトリ皿へ注ぐ。
この培地上での生育は、突然変異株生成手順によってつ
くられるほとんどの栄養になる生長刺激物質を排除して
いる。
くられるほとんどの栄養になる生長刺激物質を排除して
いる。
例えば化学的に定義された培地上での生育には、ビタミ
ン類、生長因子等を必要とする培養基は排除される。２
８００で約７日間の培養後、生ずる集落は突然変異株の
選別に適した試験プレートへ写し取られ、次にグリセロ
ールを基盤とする培地を含む対照プレート上へ戻される
。
ン類、生長因子等を必要とする培養基は排除される。２
８００で約７日間の培養後、生ずる集落は突然変異株の
選別に適した試験プレートへ写し取られ、次にグリセロ
ールを基盤とする培地を含む対照プレート上へ戻される
。
試験プレートは、ピーターソン・ジー・イー（Ｐｅｔｅ
ｒｓｏｎ，Ｇ．Ｅ．）、エイチ・ェル・ルイス（日．Ｌ
．ＬｅＭｓ）及びジェー・アール・デービス（Ｊ．Ｒ．
Ｄａｖｉｓ）、１９６２王、「寒天培地中におけるコレ
ステロール及びその他の水と混ざらない炭素源の均一分
散液の調製」、Ｊ・ＬｉｐｉｄＲｅｓｅａｒｃｈ ３巻
２７５〜２７６頁、に記載のとおり尊こつくられる。こ
れらのプレート中の最少塩培地は、実施例１の‘ａー節
に上記したとおりである。寒天（１５夕／〆）及びシト
ステロール又はアンドロステンジオン（ＡＤ）のような
麹当な炭素源（１．０夕／夕）を加え、生ずる懸濁液を
１２ｒｏで３０分間オートクレープ処理する。次に無菌
の熱い混合物を無菌のプレンダ−容器に注ぎ、数分間配
合し、次に無菌のべトリ皿へ注ぐ。この手順では発泡が
問題になりがちであるが、混合物が熱いうちに配合し、
また溶融寒天プレートの表面に炎を当てることによつて
減少させることができる。このやり方で、非常に均質で
あるが不透明な寒天塔地の調製を容易にするような、水
に溶解しない炭素源の均一分散物が得られる。対照プレ
ート上に生育するが唯一の炭素源としてＡＤを含有する
試験プレート上では生育しない集落は、栄養寒天プレー
ト上の画線接種によって純化される。
ｒｓｏｎ，Ｇ．Ｅ．）、エイチ・ェル・ルイス（日．Ｌ
．ＬｅＭｓ）及びジェー・アール・デービス（Ｊ．Ｒ．
Ｄａｖｉｓ）、１９６２王、「寒天培地中におけるコレ
ステロール及びその他の水と混ざらない炭素源の均一分
散液の調製」、Ｊ・ＬｉｐｉｄＲｅｓｅａｒｃｈ ３巻
２７５〜２７６頁、に記載のとおり尊こつくられる。こ
れらのプレート中の最少塩培地は、実施例１の‘ａー節
に上記したとおりである。寒天（１５夕／〆）及びシト
ステロール又はアンドロステンジオン（ＡＤ）のような
麹当な炭素源（１．０夕／夕）を加え、生ずる懸濁液を
１２ｒｏで３０分間オートクレープ処理する。次に無菌
の熱い混合物を無菌のプレンダ−容器に注ぎ、数分間配
合し、次に無菌のべトリ皿へ注ぐ。この手順では発泡が
問題になりがちであるが、混合物が熱いうちに配合し、
また溶融寒天プレートの表面に炎を当てることによつて
減少させることができる。このやり方で、非常に均質で
あるが不透明な寒天塔地の調製を容易にするような、水
に溶解しない炭素源の均一分散物が得られる。対照プレ
ート上に生育するが唯一の炭素源としてＡＤを含有する
試験プレート上では生育しない集落は、栄養寒天プレー
ト上の画線接種によって純化される。
２８ＣＯで生育後、無菌的なつまようじで個々の集落を
栄養寒天プレートから採集し、炭素源としてＡＤを含有
するグリデッドプレートに接種することによって再試験
する。
栄養寒天プレートから採集し、炭素源としてＡＤを含有
するグリデッドプレートに接種することによって再試験
する。
親培養基とは異なる表現型をまだ表わす精製された単離
菌は、振とうフラスコ内で検査される。‘ｃ）振とうフ
ラスコ検査 振とうフラスコ（５００のこ）は次の成分からなる生物
転化培地１００叫を含有する。
菌は、振とうフラスコ内で検査される。‘ｃ）振とうフ
ラスコ検査 振とうフラスコ（５００のこ）は次の成分からなる生物
転化培地１００叫を含有する。
グリセロール １０．０夕／クＮａ２ＨＰ
〇４ ８‐４夕／そＫＨ２Ｐ０４
４．５夕／そＮ比ＣＩ
２．０夕／そＭｇＳ〇４・７日２〇
○‐３夕／そＦｅＣ１３・細２０ ０．
０５夕／そ蒸留水 １夕とするに十分な量
大豆粉（１夕／夕）を培地へ配合し、次にシトステロー
ル（１０夕／そ）をも培地へ配合する。
〇４ ８‐４夕／そＫＨ２Ｐ０４
４．５夕／そＮ比ＣＩ
２．０夕／そＭｇＳ〇４・７日２〇
○‐３夕／そＦｅＣ１３・細２０ ０．
０５夕／そ蒸留水 １夕とするに十分な量
大豆粉（１夕／夕）を培地へ配合し、次にシトステロー
ル（１０夕／そ）をも培地へ配合する。
フラスコを１２ｒ０で２０分オートクレープ処理してか
ら、これらを２８００に冷却し、次いで以下のようにつ
くられる種菌成育物ｌｏｗ上により接種する。‘ｂ｝
節からの精製単離物を寒天額斜培地上で２８００で生育
させる。
ら、これらを２８００に冷却し、次いで以下のようにつ
くられる種菌成育物ｌｏｗ上により接種する。‘ｂ｝
節からの精製単離物を寒天額斜培地上で２８００で生育
させる。
傾斜塔地から一すくいの菌体を取り、次の成分からなる
無菌の種菌培地１００泌を含有する５００机上フラスコ
の接種に用いる。栄養培養液（ディフコ） ８夕／
そ酵母エキス １夕／そ グリセロール ５夕／そ 蒸留水 １夕とするに十分な量 ｐＨをＩＮＮａＯＨで７．０に調整してからフラスコを
１２ｒＣで２０分オートクレープ処理する。
無菌の種菌培地１００泌を含有する５００机上フラスコ
の接種に用いる。栄養培養液（ディフコ） ８夕／
そ酵母エキス １夕／そ グリセロール ５夕／そ 蒸留水 １夕とするに十分な量 ｐＨをＩＮＮａＯＨで７．０に調整してからフラスコを
１２ｒＣで２０分オートクレープ処理する。
種菌フラスコを２８００で７独特間培養する。上に明ら
かにされたように、無菌の転化塔地１００の‘を含有す
る各５００叫フラスコの接種に種菌成育物１０のとを使
用する。
かにされたように、無菌の転化塔地１００の‘を含有す
る各５００叫フラスコの接種に種菌成育物１０のとを使
用する。
フラスコを回転振とう機にのせて２８〜３ぴ０で培養し
、種々の間隔で試料を採取する。１０泌試料を除去し、
塩化メチレン３倍容量と共に振振とうすることによって
抽出する。
、種々の間隔で試料を採取する。１０泌試料を除去し、
塩化メチレン３倍容量と共に振振とうすることによって
抽出する。
シリカゲル及び上記溶媒系すなわち２：３（容量比）の
酢酸エチルーシクロヘキサンを使用する薄層クロマトグ
ラフィ、及び気液クロマトグラフィによって、抽出液を
少量ずつ分析にかける。９Ｑ−ＯＨＡＤが存在する証拠
は、親Ｍ．フオーッィッムＡＴＣＣ６８４２からつくら
れる新規な突然変異株による選択的な減成分解を確実に
示している。
酢酸エチルーシクロヘキサンを使用する薄層クロマトグ
ラフィ、及び気液クロマトグラフィによって、抽出液を
少量ずつ分析にかける。９Ｑ−ＯＨＡＤが存在する証拠
は、親Ｍ．フオーッィッムＡＴＣＣ６８４２からつくら
れる新規な突然変異株による選択的な減成分解を確実に
示している。
実施例 ２シトステロールから９Ｑ−ＯＨＡＤへの転化
使用の培地は実施例ｌｃのものと同じである。この堵地
を１２１℃で３■テカロ熱して滅菌する。次いでこれを
３０午０に冷却し、実施例ｌｃに述べたとおりにつくら
れる突然変異株ミコバクテリウムＭ．フオーッィッムＮ
ＲＲＬＢ−８１１９の種菌培養基１碇郡を接種する。液
面下の生育を促進するために接種された混合物をかきま
ぜながら、３０ｏ○で３３６時間培養する。培養後、混
合物を塩化メチレンで抽出する。抽出液を珪藻±に通し
てろ過し、ろ液を乾固するまで減圧蒸留する。残留物を
〆．タノール１０％クロロホルム中に取上げ、結晶が生
ずるまで蒸気裕上で窒素下に濃縮する。溶液を室温まで
冷却し、沈殿するシトステロールを除くためにろ過する
。上澄液からは、溶媒除去後、粗製９Ｑ−ヒドロキシ−
４−アンドロステンー３，１７ージオンの良好な収量が
得られる。薄層クロマトグラフィにより、痕跡量の９Ｑ
ーヒドロキシー４ーアンドロステン−３ーオン−１７ー
オールが存在することが示される。実施例 ３ 実施例２のシトステロールの代わりもこコレステロール
を使用して、９Ｑ−ＯＨＡＤが得られる。
使用の培地は実施例ｌｃのものと同じである。この堵地
を１２１℃で３■テカロ熱して滅菌する。次いでこれを
３０午０に冷却し、実施例ｌｃに述べたとおりにつくら
れる突然変異株ミコバクテリウムＭ．フオーッィッムＮ
ＲＲＬＢ−８１１９の種菌培養基１碇郡を接種する。液
面下の生育を促進するために接種された混合物をかきま
ぜながら、３０ｏ○で３３６時間培養する。培養後、混
合物を塩化メチレンで抽出する。抽出液を珪藻±に通し
てろ過し、ろ液を乾固するまで減圧蒸留する。残留物を
〆．タノール１０％クロロホルム中に取上げ、結晶が生
ずるまで蒸気裕上で窒素下に濃縮する。溶液を室温まで
冷却し、沈殿するシトステロールを除くためにろ過する
。上澄液からは、溶媒除去後、粗製９Ｑ−ヒドロキシ−
４−アンドロステンー３，１７ージオンの良好な収量が
得られる。薄層クロマトグラフィにより、痕跡量の９Ｑ
ーヒドロキシー４ーアンドロステン−３ーオン−１７ー
オールが存在することが示される。実施例 ３ 実施例２のシトステロールの代わりもこコレステロール
を使用して、９Ｑ−ＯＨＡＤが得られる。
実施例 ４実施例２のシトステロールの代わりにスチグ
マステロールを使用して、９Ｑ−ＯＨＡＤが得られる。
マステロールを使用して、９Ｑ−ＯＨＡＤが得られる。
実施例 ５
実施例２のシトステロールの代わりにカンベスナロール
を使用して、９Ｑ−ＯＨＡＤが得られる。
を使用して、９Ｑ−ＯＨＡＤが得られる。
実施例 ６
シトステロールに加えて、又は実施例２のシトステロー
ルの代わり！こ、実施例２〜５のステロイド類の任意の
ものの組合せを加えて、９Ｑ−ＯＨＡＤが得られる。
ルの代わり！こ、実施例２〜５のステロイド類の任意の
ものの組合せを加えて、９Ｑ−ＯＨＡＤが得られる。
実施例 ７
実施例２〜６で得られる粗製９Ｑ−ＯＨＡＤは次の手順
によって精製される。
によって精製される。
実施例２〜６に述べたとおりにつくられる発酵液から、
ろ過又は遠心分離によって不漆物を除去する。分離され
たケーキを適当量の水で洗い、洗浄液を固体の含まない
ろ液と一緒にする。ケーキフラクションをアセトン水溶
液（１：４）で浸出させ、アセトンを除去し、生ずる水
流を固体の含まないろ液及び洗浄液と一緒にする。残留
ステロール類は、塩化メチレンでの抽出、溶媒除去、及
びその後の結晶化によって、浸出ケーキフラクションか
ら回収できる。ろ過した発酵液フラクションをｐＨ４．
０で１／ａ量の酢酸ブチルで２回抽出し、使用済みの液
を捨てる。
ろ過又は遠心分離によって不漆物を除去する。分離され
たケーキを適当量の水で洗い、洗浄液を固体の含まない
ろ液と一緒にする。ケーキフラクションをアセトン水溶
液（１：４）で浸出させ、アセトンを除去し、生ずる水
流を固体の含まないろ液及び洗浄液と一緒にする。残留
ステロール類は、塩化メチレンでの抽出、溶媒除去、及
びその後の結晶化によって、浸出ケーキフラクションか
ら回収できる。ろ過した発酵液フラクションをｐＨ４．
０で１／ａ量の酢酸ブチルで２回抽出し、使用済みの液
を捨てる。
発酵中につくられる酸性成分を除くため、発酵液の一緒
にした抽出液を１／略奪の５％重炭酸ナトリウムで洗う
。一緒にした中性抽出液を発酵液容量の約２％まで濃縮
し、冷却し、精製された生成物の９Ｑ−ＯＨＡＤを結晶
化する。
にした抽出液を１／略奪の５％重炭酸ナトリウムで洗う
。一緒にした中性抽出液を発酵液容量の約２％まで濃縮
し、冷却し、精製された生成物の９Ｑ−ＯＨＡＤを結晶
化する。
通常のろ過及び乾燥の方法によって生成物が得られる。
この生成物は液体クロマトグラフィ検定によって９５％
より大きい純度の検定値を示す。追加の９Ｑ−ＯＨＡＤ
は、なおも濃縮と、溶解度を減少させるためのシクロヘ
キサン添加によって、母液から得られらる。収率は各実
施例ともおよそ１０％である。（対重量）参考例 ８実
施例１のミコバクテリウム・Ｍ．フオーツイッムＡＴＣ
Ｃ 総４２の代わりにアースロバクター、バチルス、ブ
レビバクテリウム、コリネバクテリウム、ミクロバクテ
リウム、ノカルデイア、プロトアミノバクター、セラテ
イア、及びストレプトミセス属からの微生物を使用して
、２〜１の固の炭素原子の１７ーアルキル側鎖をもった
ステロイド類を選択的に低下分解し、発酵液中に９Ｑ−
ＯＨＡＤを蓄積させる能力によって特徴づけられる突然
変異株の微生物が得られらる。
この生成物は液体クロマトグラフィ検定によって９５％
より大きい純度の検定値を示す。追加の９Ｑ−ＯＨＡＤ
は、なおも濃縮と、溶解度を減少させるためのシクロヘ
キサン添加によって、母液から得られらる。収率は各実
施例ともおよそ１０％である。（対重量）参考例 ８実
施例１のミコバクテリウム・Ｍ．フオーツイッムＡＴＣ
Ｃ 総４２の代わりにアースロバクター、バチルス、ブ
レビバクテリウム、コリネバクテリウム、ミクロバクテ
リウム、ノカルデイア、プロトアミノバクター、セラテ
イア、及びストレプトミセス属からの微生物を使用して
、２〜１の固の炭素原子の１７ーアルキル側鎖をもった
ステロイド類を選択的に低下分解し、発酵液中に９Ｑ−
ＯＨＡＤを蓄積させる能力によって特徴づけられる突然
変異株の微生物が得られらる。
参考例 ９
実施例２〜７のＭ．フオーツィツムＮＲＲＬＢ−８１１
９の代わりに実施例８で得られる突然変異株を使用して
、９Ｑ−ＯＨＡＤがが得られる。
９の代わりに実施例８で得られる突然変異株を使用して
、９Ｑ−ＯＨＡＤがが得られる。
参考例 １０
実施例１のＭ．フオーッィッムＡＴＣＣ６８４２の代わ
りに、ミコバクテリウム・プレイ（Ｍｙｃｏ蛇ｃｔｅで
ｉｍｍｐｈｌｅｉ）、Ｍ．スメグマチス（Ｍ．ｓｍｅｇ
ｍａｔｉｓ ）、Ｍ．ロ ー ドク ラ ス （ Ｍ．
ｒｈｏｄ比ｈｒｏｕｓ）、Ｍ．ミュコスム（Ｍ．ｍｕｃ
ｏｓｕｍ）及びＭブチリクム（Ｍ．則ｔｙｒｊｃｕｍ）
からなる群から選ばれる微生物を使用して、２〜１の固
の炭素原子の１７−アルキル側鎖をもつたステロイド類
を選択的に低下分解し、発酵液中に９Ｑ−ＯＨＡＤを蓄
積させる能力によって特徴づけられる突然変異株の微生
物が得られる。
りに、ミコバクテリウム・プレイ（Ｍｙｃｏ蛇ｃｔｅで
ｉｍｍｐｈｌｅｉ）、Ｍ．スメグマチス（Ｍ．ｓｍｅｇ
ｍａｔｉｓ ）、Ｍ．ロ ー ドク ラ ス （ Ｍ．
ｒｈｏｄ比ｈｒｏｕｓ）、Ｍ．ミュコスム（Ｍ．ｍｕｃ
ｏｓｕｍ）及びＭブチリクム（Ｍ．則ｔｙｒｊｃｕｍ）
からなる群から選ばれる微生物を使用して、２〜１の固
の炭素原子の１７−アルキル側鎖をもつたステロイド類
を選択的に低下分解し、発酵液中に９Ｑ−ＯＨＡＤを蓄
積させる能力によって特徴づけられる突然変異株の微生
物が得られる。
参考例 １１
実施例２〜７のＭ．フオーツィッムＮＲＲＤＢ−８１１
９の代わりに実施例１０で得られる突然変異株を使用し
て、９Ｑ−ＯＨＡＤが得られる。
９の代わりに実施例１０で得られる突然変異株を使用し
て、９Ｑ−ＯＨＡＤが得られる。
Claims (1)
- １ ２〜１０個の炭素原子の１７−アルキル側鎖をもつ
たステロイドを選択的に減成分解し、醗酵液中に９α−
ヒドロキシアンドロステンジオンを蓄積する能力により
特徴づけられる実験室突然変異株ミコバクテリウムフオ
ーツイツム（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｆｏｒｔｕ
ｉｔｕｍ）ＮＲＲＬ Ｂ−８１１９。
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1980
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