JPS6030508B2 - 細胞培養用容器 - Google Patents
細胞培養用容器Info
- Publication number
- JPS6030508B2 JPS6030508B2 JP56170664A JP17066481A JPS6030508B2 JP S6030508 B2 JPS6030508 B2 JP S6030508B2 JP 56170664 A JP56170664 A JP 56170664A JP 17066481 A JP17066481 A JP 17066481A JP S6030508 B2 JPS6030508 B2 JP S6030508B2
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- JP
- Japan
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- culture
- serum
- cell culture
- gelatin
- cells
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Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
- C12M23/00—Constructional details, e.g. recesses, hinges
- C12M23/20—Material Coatings
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
- C12M23/00—Constructional details, e.g. recesses, hinges
- C12M23/02—Form or structure of the vessel
- C12M23/08—Flask, bottle or test tube
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- Health & Medical Sciences (AREA)
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- Apparatus Associated With Microorganisms And Enzymes (AREA)
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は合成高分子材料あるいはガラス等を材料とする
細胞培養用容器に関するものである。
細胞培養用容器に関するものである。
従来細胞を生育させるために、ガラス表面あるいは処理
を行なった合成高分子の表面が用いられ、すでにポリス
チレンを材料とする表面処理を行なった種々の容器が細
胞培養用容器として普及している。近年血清の価格高騰
、人手難及び血清ロットのバラッキ、ワクチン、インタ
ーフェロン製造後、血清成分の除去、精製等の問題より
、血清の入っていない（無血清）あるいは血清含有が１
％以下（少血清）の培養が脚光をあびつつあり、数々の
培地処方が考案されている。
を行なった合成高分子の表面が用いられ、すでにポリス
チレンを材料とする表面処理を行なった種々の容器が細
胞培養用容器として普及している。近年血清の価格高騰
、人手難及び血清ロットのバラッキ、ワクチン、インタ
ーフェロン製造後、血清成分の除去、精製等の問題より
、血清の入っていない（無血清）あるいは血清含有が１
％以下（少血清）の培養が脚光をあびつつあり、数々の
培地処方が考案されている。
ところがこれらの無（少）血清渚地では細胞の種類にも
よるが、現在市販されている細胞培養用容器では、通常
の血清を５〜２０％含有した培地に比べ細胞の増殖が悪
く、特に少数細胞を培養した場合ほとんど増殖せず、コ
ロニーの形成は認められない。これは血清中に含まれる
増殖因子の不足に依るものではなく、培養表面上への壁
着因子の不足に起因することが多いといわれている。例
えば血清の主要壁着因子としてフィブロネクチンがあり
、これを培養表面にコーティングあるし、は培地に添加
すると、無（少）血清塔地の培養でも血清を５〜２０％
含有した培地のものとほぼ同等の増殖が得られることが
報告されている。
よるが、現在市販されている細胞培養用容器では、通常
の血清を５〜２０％含有した培地に比べ細胞の増殖が悪
く、特に少数細胞を培養した場合ほとんど増殖せず、コ
ロニーの形成は認められない。これは血清中に含まれる
増殖因子の不足に依るものではなく、培養表面上への壁
着因子の不足に起因することが多いといわれている。例
えば血清の主要壁着因子としてフィブロネクチンがあり
、これを培養表面にコーティングあるし、は培地に添加
すると、無（少）血清塔地の培養でも血清を５〜２０％
含有した培地のものとほぼ同等の増殖が得られることが
報告されている。
このフィブロネクチンは血清より精製されるが、高価格
、滅菌等の取り扱いが困難という欠点がある。そこでフ
イブロネクチンの代わりに種々の天然あるいは合成高分
子、例えばポリアルギニン、ポリリジン、コラーゲン、
ポリエチレンィミン等を培養表面にコーティングし培養
した報告もあるが、あまり良好な結果は得られていない
。そこで本発明者らは、種々のコーティング処理法につ
いて鋭意研究の結果、コラーゲンの加水分解物でありゼ
ラチンがフィブロネクチンと同等以上の壁着因子である
ことも見し、出し、これを含む溶液であらかじめ細胞培
養用容器の培養表面をコーティングし、無（少）血清培
地で細胞の培養を行ない非常に良好な結果を得た。
、滅菌等の取り扱いが困難という欠点がある。そこでフ
イブロネクチンの代わりに種々の天然あるいは合成高分
子、例えばポリアルギニン、ポリリジン、コラーゲン、
ポリエチレンィミン等を培養表面にコーティングし培養
した報告もあるが、あまり良好な結果は得られていない
。そこで本発明者らは、種々のコーティング処理法につ
いて鋭意研究の結果、コラーゲンの加水分解物でありゼ
ラチンがフィブロネクチンと同等以上の壁着因子である
ことも見し、出し、これを含む溶液であらかじめ細胞培
養用容器の培養表面をコーティングし、無（少）血清培
地で細胞の培養を行ない非常に良好な結果を得た。
または通常の無（少）血清培養では少数細胞の増殖は非
常に困難であるが、ゼラチンコートした培養表面を用い
ると容易に増殖しコロニーを形成する。またゼラチンを
使用する際、オートクレーフ（例えば１２ｒｏ、１８分
）で滅菌してもこの効果がほとんどなくならない取扱い
やすい物質であることも確認できた。
常に困難であるが、ゼラチンコートした培養表面を用い
ると容易に増殖しコロニーを形成する。またゼラチンを
使用する際、オートクレーフ（例えば１２ｒｏ、１８分
）で滅菌してもこの効果がほとんどなくならない取扱い
やすい物質であることも確認できた。
このゼラチンを含有する溶液で合成高分子材料あるいは
ガラス等からなる容器をコーティング処理した細胞培養
用容器は無（少）血清の培養に非常に適しているばかり
でなく、通常の培地でもその血清添加量を節減できると
の結論に至った。ここでいう合成高分子材料とは、ポリ
スチレン、ポリエチレン、ポリプロピレン、酢酸セルロ
ース、ポリカーボネート、ポリエステル、ナイロン、ポ
リアクリレート、ポリ塩化ビニール等である。
ガラス等からなる容器をコーティング処理した細胞培養
用容器は無（少）血清の培養に非常に適しているばかり
でなく、通常の培地でもその血清添加量を節減できると
の結論に至った。ここでいう合成高分子材料とは、ポリ
スチレン、ポリエチレン、ポリプロピレン、酢酸セルロ
ース、ポリカーボネート、ポリエステル、ナイロン、ポ
リアクリレート、ポリ塩化ビニール等である。
またここでいう細胞培養用容器とは、シャーレ、各種プ
レート、フラスコ、培養管、培養ビン、大量培養床等で
ある。本発明に用いるゼラチンとは、例えば皮膚、膝、
骨等の硬蛋白質であるコラーゲンを熱り柊こより加水分
解して変性蛋白質であり、分子量は１０〜２０万でグリ
シン、アラニン、バリン、ロィシン等の単体アミノ酸を
含む混金物であることが好ましい。
レート、フラスコ、培養管、培養ビン、大量培養床等で
ある。本発明に用いるゼラチンとは、例えば皮膚、膝、
骨等の硬蛋白質であるコラーゲンを熱り柊こより加水分
解して変性蛋白質であり、分子量は１０〜２０万でグリ
シン、アラニン、バリン、ロィシン等の単体アミノ酸を
含む混金物であることが好ましい。
これらのゼラチンを単独で使用してもよく、又従釆より
知られている各種のコーティング剤と併用して使用して
もよい。なおゼラチンのコーティングは、４℃付近の低
温で１粉ご程度の短時間の処理でも効果はあるが、望ま
しくは３０℃以上の高温あるいは一晩以上の長時間処理
を行なったほうが効果が大きい。
知られている各種のコーティング剤と併用して使用して
もよい。なおゼラチンのコーティングは、４℃付近の低
温で１粉ご程度の短時間の処理でも効果はあるが、望ま
しくは３０℃以上の高温あるいは一晩以上の長時間処理
を行なったほうが効果が大きい。
またゼラチンをコートし濡れたままのものでも、乾燥し
ゼラチン膜が形成したものも同様な効果がある。また０
．０００２％までのゼラチン低濃度溶液でコーナィング
を行なってもその効果は失せない。以下に実施例を示す
。
ゼラチン膜が形成したものも同様な効果がある。また０
．０００２％までのゼラチン低濃度溶液でコーナィング
を行なってもその効果は失せない。以下に実施例を示す
。
実施例 １
１％ゼラチンを含有するリン酸緩衝液を１２１℃，１５
分オートクレープ滅菌し、これを細胞培養用６００プラ
スチックシャーレ（ポリスチレン製）に０．５机入れ、
３７０で１５分放置したものを培養に用いた。
分オートクレープ滅菌し、これを細胞培養用６００プラ
スチックシャーレ（ポリスチレン製）に０．５机入れ、
３７０で１５分放置したものを培養に用いた。
実施例 ２ ′
１％ゼラチンを含有するリン酸緩衝液を１２１℃，１８
分間オートクレープ滅菌し、これを細胞培養用６００プ
ラスチックシャーレ（ポリスチレン製）に１肌入れ、４
℃で一晩放置したものを培養に用いた。
分間オートクレープ滅菌し、これを細胞培養用６００プ
ラスチックシャーレ（ポリスチレン製）に１肌入れ、４
℃で一晩放置したものを培養に用いた。
実施例 ３
１％ゼラチンを含有する精製蒸留水を１２ｒｏ，１８分
間オートクレープ滅菌し、これを細胞培養用６０？プラ
スチックシャーレ（ポリスチレン製）に０．５の‘入れ
、３７℃でゼラチン膜が形成するまで乾燥させたものを
培養に用いた。
間オートクレープ滅菌し、これを細胞培養用６０？プラ
スチックシャーレ（ポリスチレン製）に０．５の‘入れ
、３７℃でゼラチン膜が形成するまで乾燥させたものを
培養に用いた。
実施例 ４
実施例１のシャーレをこの後生理食塩水で洗浄したもの
を培養に用いた。
を培養に用いた。
実施例 ５
０．０００２％ゼラチンを含有するリン酸緩衝液を１２
ｒｏ，１８分間ゼラチン滅菌し、これを細胞培養用６０
０プラスチックシャーレ（ポリスチレン製）に０．５泌
入れ、３７０，１５分間放置したものを培養に用いた。
ｒｏ，１８分間ゼラチン滅菌し、これを細胞培養用６０
０プラスチックシャーレ（ポリスチレン製）に０．５泌
入れ、３７０，１５分間放置したものを培養に用いた。
実施例 ６実施例３のシャーレをｙ線滅菌（２．執心ａ
ｄ）したものを培養に用いた。
ｄ）したものを培養に用いた。
実施例 ７
実施例３のシャーレをＥＯＧ滅菌（３００のｐ／夕，５
０ｑｏ，２時間）したものを培養に用いた。
０ｑｏ，２時間）したものを培養に用いた。
比較例 １表面にコーティング処理しない細胞培養用６
０でプラスチックシャーレ（ポリスチレン製）をそのま
ま培養に用いた。比較例 ２ 細胞培養用６０４プラスチックシャーレ（ポリスチレン
製）に通常の仔牛血清１０％の入ったイーグルＭ旧Ｍ培
地を用いて培養した。
０でプラスチックシャーレ（ポリスチレン製）をそのま
ま培養に用いた。比較例 ２ 細胞培養用６０４プラスチックシャーレ（ポリスチレン
製）に通常の仔牛血清１０％の入ったイーグルＭ旧Ｍ培
地を用いて培養した。
各実施例、比較例の細胞培養用容器を用いて下記の条件
にて培養を行った結果を第１表に示す。
にて培養を行った結果を第１表に示す。
培養条件としては｛１｝ 細 胞 Ｖ７期曲胸
■ 培養液 ＳＦ 塔地※
｛３｝ 培養条件 Ｃ０２インキュベータ−（５％Ｃ０
２に設定）で３７０，７日間培養を行なう。
２に設定）で３７０，７日間培養を行なう。
｛４｝ 培養方法 仔牛血清１０％入ったイーグルＭ旧
Ｍ塔地で継代したＶ７９細胞を６００シャーレ当り１０
０個植え る。
Ｍ塔地で継代したＶ７９細胞を６００シャーレ当り１０
０個植え る。
※ ＳＦ培地とは、イーグルＭＥＭ培地ニ斑Ａ ５夕／
そ、インシュリン２０単 位／夕、ピルビン酸１１０の９／そ、／・ィポキサンチ
ン４の９、チミジン２．４の９／〆及び可欠アミノ酸を
添加したもの。
そ、インシュリン２０単 位／夕、ピルビン酸１１０の９／そ、／・ィポキサンチ
ン４の９、チミジン２．４の９／〆及び可欠アミノ酸を
添加したもの。
第 １表
※※ 日・・・コロニー形成良好
（コロニー形成率５０％以上）
十・・・コロニー形成が認められる
（コロニー形成率０〜５０％）
−…コロニー形成せず
（コロニー形成率０％）
第１表より明らかなように、本発明の細胞培養用容器は
無血清培地でも良好な細胞培養性を示している。
無血清培地でも良好な細胞培養性を示している。
Claims (1)
- １ 合成高分子材料あるいはガラス等からなる容器をゼ
ラチンを含有する溶液でコーテイング処理した細胞培養
用容器。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP56170664A JPS6030508B2 (ja) | 1981-10-27 | 1981-10-27 | 細胞培養用容器 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP56170664A JPS6030508B2 (ja) | 1981-10-27 | 1981-10-27 | 細胞培養用容器 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS5871884A JPS5871884A (ja) | 1983-04-28 |
| JPS6030508B2 true JPS6030508B2 (ja) | 1985-07-17 |
Family
ID=15909079
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP56170664A Expired JPS6030508B2 (ja) | 1981-10-27 | 1981-10-27 | 細胞培養用容器 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS6030508B2 (ja) |
Families Citing this family (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH0732B2 (ja) * | 1985-02-26 | 1995-01-11 | 富士デヴイソン化学株式会社 | 細胞培養担体及び細胞培養方法 |
| DE59610339D1 (de) * | 1995-02-16 | 2003-05-22 | Forschungszentrum Juelich Gmbh | Verfahren zur Kultivierung von Organfunktionszellen |
| JP2020080722A (ja) * | 2018-11-26 | 2020-06-04 | 大日本印刷株式会社 | 細胞の収縮を抑制できる細胞取扱容器、及び細胞構造体の作製方法 |
-
1981
- 1981-10-27 JP JP56170664A patent/JPS6030508B2/ja not_active Expired
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| DEVELOPMENTAL BIOLOGY=1970 * |
| PROC MATL ACAD SCI USA=1978 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS5871884A (ja) | 1983-04-28 |
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