JPS5871884A - 細胞培養用容器 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は合成高分子材料あるいはガラス勢を材料とする
細胞培養用容器に関するものである。

従来細胞を生育させるために、ガラス表面あるいは処Ｉ
Ｉを行なった合成高分子の表面が用いられ、すでにポリ
スチレンを材料とする表向処理を行なった種々の容器が
細胞培１１朗谷器として普及している。

近年血清の価格高騰、入手難及び血清ロットのバラツキ
、ワクチン、インターフェロ、ン製−造後、血清成分の
除去、精製醇の問題より、血清の人っていない（無血清
）・あるいは血清官有がｌチ以下（少血清→の培養が脚
光をあびつづめ９、数々の培地処方が考案されている。

とこφがこれらの無（少）血清培地では細胞の種類にも
よるが、現在市販されている細胞培養用容器では、通常
の血清を５〜２ｏｔＩＩ含有した培地に比べ細胞の増殖
が急く、％に少数細胞を培養した場合はとんど増殖せず
、コロニＪの形成は認められない。こには血清中に含ま
ｉする増殖因子の不足に依るものではなく、培養表面上
への１１着因子の不足に起因することが多いといわれて
いる。

例えば血清の主＊ｍ着因子と１５°Ｃフイプロネクチ／
があり、これを培養表面にコーティングあるいは培地に
添加すると、無（少）血清培地の培養でも血清を５〜２
１Ｊｔｓ含有した培地のものとほぼ同勢の増殖が得られ
ることが報、告されている。このフイ・プロネクチンは
血清より精製されるが、高価格、滅−等の取り扱いが内
輪という欠点がある。そこでフイブロネクチ／の代わり
に５種々の天然・あるいは合成島分子、例えばポリアル
ギニン、ポリリノン、コラ−ダン、ポリエチレンイミン
等を培養表面にコーティングし培養し九報告もあるが、
あまシ良好な結末Ｆｉ得られていない。

そこで本発明者らは、種々のコーティング処理法につい
て鋭意研究の結果、コラーゲンの加水分解物であるゼラ
チンがフィブロネクチンと同等以上の壁層因子であるこ
とを丸い出し、これを含む溶液であらかじめ細胞培養用
容器の培齋表面をコーティングし、無（少）血清培地で
細胞の培養を行ない非常に良好な結果を侍た。

また通常の無（少）血清培養では少数細胞の増殖は非常
に困難であるが、ゼラチンコートした培養表面を用いる
と容易に増殖しコロニーを形成する。

ｔ＋ゼラチーンを使用する際、オートクレーブ（例えば
１２１℃、１５分）で滅菌してもこの幼果がほとんどな
くならない取扱いやすい物、質であることも確認できた
。このゼラチン′ｆｔ含有する層成で合成高分子材料あ
るいはガラス婚からなる容器をコーティング処理した細
胞培養用容器は無（少）血清の培養に非常に適している
ばかりでなく、通常の培地でもその血ｆｆａｉ加１ｋを
節減できるとの結論に至った。

ここでいう合成高分子材料とは、ポリスチレン、ポリエ
チレン、ポリノロピレン、酢酸セルロース、ボリカーデ
ネート、ポリエステル、ナイロン、ポリ子クリレート、
ポリ塩化ビニール等である。。またここでいう細胞培養
用容器とは、シー？−Ｌ／、各檀ｆレート、フラスコ、
培１１Ｖ、培養ビン、大量培養床等である。

本発明に用いるゼラチンとは、例えば皮膚、脚、骨轡の
硬蛋白質であるコラーゲンを熱水によシ加水分解した変
性蛋白質であ多、分子量は１０〜２０万チクリシン、ア
ラニン、パＩＪ　７　、ロイシン勢の単体アミノ酸を含
む混合物であることが好ましい。これらのゼラチンを単
独で使用してもよく、又従来よ〕知られている各種のコ
ーティング剤と併用して使用してもよい。

なおゼラチン、のコーティングは、４℃付近の低温で１
０分程度の短時間の処理でも効果ヰあるが、望ましくは
（資）℃以上の高温あるいは一晩以上の長時間処理を行
なったほうが効果が大きい。

またゼラチンをコートし漉れ九ままのものでも、乾燥し
ゼラチン膜が形成したものも同様な効果がある。また０
、０００２哄までのゼラチン低＠度溶液でコーティング
を行なってもその効果は失せない。

以下に１！施例を示す。

実施例１ １−ゼラチンを含有するりン敵ｉ１伽液を１２１℃、１
５分オートクレーブ滅菌し、これｔ−細胞培養用６０φ
プラスチックシャーレ（／リス、ナレン製）に０．５　
ｍ入れ、３７℃で１５分放置したものを培養に用いた。

実施例２ １−ゼラチンを含有するリン酸緩衝′Ｑｔ−１２１℃、
１５分オートクレーブ滅菌し、これ管細胞培養用ωφプ
ラスチックシャーレ（ポリスチレン＃）Ｋ：１−人れ、
４℃で一晩放置したものを培養に用い良。

実施例３ １−ゼラチンを含有する精製蒸貿水を１２１　ｕ、１５
分オートクレーブ滅菌し、これを細胞培養用６０φグラ
スチツクシヤーレ（ポリスチレン製）Ｋ　Ｏ，５ｄ入れ
、３７℃でゼラチン膜が形成するまで乾燥させ九ものを
培養に用い丸。

実施例４ 実施例１のシャーレをこの後生理食塩水で洗浄し友もの
を培養に用いた。

実施例５ ０．０００２　’１６ゼラチンを含有するリン酸緩衝液
を１２１℃、１５分オートクレーブ滅菌し、これを細胞
培養用６０φプラスチツクシヤーレ（ポリスチレン製）
　Ｋ　Ｏ，５−入れ、３７℃、１５分放置したものを培
養に用いた。

実施例６ 実施例３のシャーレをｒｍ滅曹（２，５Ｍｒａｄ　）−
したものを培養に用いた。

実施例７ 実施例３のシャーＶｔ　ＭＯＧ　ｍＷ　（３００ｗｖ／
ｌ。

ｄ℃、２時間）したものを培養に用いた１、比較例１ 表面にコーティング処理しない細胞培養用印φグラスチ
ックシャーレ（ポリスチレン製）ヲそのまま培養に用い
た。

比較例２ 細胞培養用６０φプラスチツクシヤーレ（ポリスチレン
製）に通常の仔牛血清１（Ｌ９Ｇの入ったイーグルＭＩ
Ｍ　培地を用いて培養した。

各実施例、比較例の細胞培養用容器を用いて下記の条件
にて培養を行つ九結果をｇｌｆｉに示す。

培養条件としては （１）　　細　　胞　Ｖ　７９細胞 （２）培養Ｑ　　Ｂ１Ｆ培地０ （３）培養条件　００！インキユベーター（５９６ＣＯ
１に設定）で３７℃、７日間 培養を行なう。

（４）培養方法　仔牛血清ｌ〇−人つ九イーグルＭＩＣ
Ｍ培地で継代し゛たＶ７９細胞 を６０φシャーレ当り１００個植 える。

※８１Ｆ培地とは、イーグルＭ１１ｉＭ培地にＢ１１５
　ｆ／ｌ　、　’ｌ　ｙ　シ：ｓ−ＩＪ　ｙ２０単ｖ４
ピルビ／酸１１０１１１ｉ／ｌ−１ハイポキサンチン４
Ｗ、チミジン２．４〜／を及び可欠−アミノ＃を添加し
たもの。

第１表 ＊秦廿・・・コロニー形成良好 （コロニー形成率５０％以上） 十・・・コロニー形成が認められる （コロニー形成率０〜５Ｏ−） −・・・コロニー形成せず （コロニー形成率０饅） 第１表よシ明らかなように、本発明の細胞培養用容器は
無血清培地でも良好な１１８１Ｉ胞培養性を示している
。

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. 合成高分子材料あるいはガラス等からなる容器をゼラチ
   ンを含有する溶液でコーティング処理した細胞培養用容
   器。