JPS6041497A - 固定化菌体によるフラクトオリゴ糖の製造方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は甘味を有する食品を製造する分野に使用される
。

更に髪、′、体的にはいわゆる健康食品を製造する分野
に使用される。

木発すＪは、オウレオ／へシブイウム属（Ａｕｒｅｏｂ
ａｃｉｄｉｕｍ　＠ｓｐ、　ＦＥＲＭ−ＰＮｏ、４２５
７　、　ＡＴＣＣＮｏ、　２０５２４菌）に菌体内転移
酵素を生成させ、この菌体内転移酵素であるフラクトシ
ルトランスフェラーセ（ｆｒｕｃｔｏｓｙｌ　ｔｒａｎ
ｓｆｅｒａｓｅ）を利用して推動かも庶Ｉ１１にフラク
ト−スが１〜３個結合したｌ−ケスド−ス（１−Ｋｅｓ
ｔｏｓｅ）、こストース（ｎｙｓｔｏｓｅ）を主成分と
するフラクトオリゴ糖（Ｆｒｕｃｔｏ−ｏ　ｌ　ｉｇｏ
糖）を製造する固定化菌体によるフラグＩ・オリゴ糖の
製造方法に関する。

ｔ＜ｒ［（シュクロース）にフラクトース（Ｆｒｕｃｔ
。

ｓｅ）がβ−１，２結合したイヌリン型のフラクトオリ
ゴ糖、即ちｌ−ケスドース、ニスド−スは、植物、例え
ばタマネギ、ニラ、キク・ｆモ、カラスムギ等に含有さ
れており、料理におけるまろやかな１１味料として使用
されているが、単独の１１味料剤としては使用されてい
ない。微生物の生にする転移酵素を利用してのオリゴ糖
生産に関してはす・イクロデキストリン・グルコ勺イル
台トランスフェラーセによるグルコ・オリゴ糖（商品名
；カンプリングーシュガー）があり、又パラチノース等
についても研究されている。しかし、オウレオバシディ
ウム属のフラグトシルトランスフエラ＝ゼ含有菌体によ
る蔗糖かもフラクトオリｊ糖、即ち１−ケスドース、こ
スＩ・−スの生成については未だ提案されていないがア
スペルギルス争オリーゼ（Ａｓｐ．ｏｒｙｚａｅ）等に
よるニスドースについては研究報告がある。

木）ｉ．す１者は、オウレオバシディウム属（Ａｕｒｅ
ｏｂａｃｉｄｉｕｍ　・ｓｐ，　ＦＥＲＭ−Ｐ＋ｉｏ．
４２５７　、ＡＴＣＣ：Ｎｏ２０５２４１メｉ）を、炭
素源として蔗糖のみを使用した培地で培養すると培養初
期において蔗糖は、グルコースとフラグＩ・−スに分解
されずに蔗糖の６０％以上かＬＬ，“；：糖にフラクト
ースがβ−１．２で結合した１ーケスト−ス、ニスドー
スになり、培養経過時間と共にフラクトオリゴ糖は減少
してグルコース、フラクトースが増加してき、フラクト
ースの増加につれてフラクトースの２星体、３量体、即
ちイヌロビオース、イヌロトリオースが増加し、９６時
見出した。

更に詳しくは、本発明者はオウレオパう・ディラム属に
よる多糖即ちプルラン又はβ−１．３−１．６グルカン
の生合成酵素の研究を目的としており、培養培地中のグ
ルコース、フラクトースの増加は木菌によるＩＩｆ溶性
インベルターゼと判断し、培養初期に検出されるグルコ
ースが蔗糖がらフラクトオリゴ糖が生成するときに副成
するグルコースであることには気（＝Ｊかなかった。

また分析手法として培養培地中の糖をペーパークロマト
、還元糖で調べているために非還元糖であるフラクトオ
リゴ糖は検出できなかった。

本発明の動機は，多糖即ちプルラン又（±βー１．３ー
１．６グルカン培養時に培養培地に生成する糖、詳しく
はマンニトールを培養経時的１こ調べるために、ｊ’，
ｉ，−速液体クロマｌ−（ＨＬＰＣ）で培養培地を分析
した際、三糖、四糖が検出されるピーク位置に未知糖の
ピークを検出したことである。

この糖を液体クロマト、ゲルクロマトで分別しシｊ！Ｈ
，＋シた結果、フラクトオリ：ｌ糖であることが明らか
になった。

第１図に本閑の」８着初期における培養培地を高速液体
クロマトで分析した結果を示す。

更には木菌は炭素源として蔗糖を使用すると、他の培地
組成条件を変動しても培養初期には必ずＪ！’ｉ　養培
地にフラクトオリゴ糖を検出した。

この東実からオウレオバシディウム属菌が蔗糖からフラ
クトオリゴ糖を生成する転移酵素であるフラクトシルト
ランスフェラーゼ を見い出し本発明を成すに奎−〕だ。

更には、このフラクトシルトランスフェラーゼは菌体内
酵素であることが明確になった。

この’Ｊ（は蔗糖な炭素源としてオウレオ／′・シブイ
ウムｊぷ菌を培養し、ｊ＞’ｔ，養ＪＢ地から菌体を物
理的に分間することにより極めて容易に目的とする酵素
が生産できることを示し、更には推動溶ｌ今に分離菌体
を一定力価添加することにより蔗糖からフラクトオリゴ
糖が容易に生産できることである。

更１こは菌体内酵素であるために固定化菌体として連続
的に蔗糖からフラクトオリゴ糖を生産できるものである
。

（発明の構成） 本発明は、オウレオバシディウム屈（　Ａｕｒｅｏｂａ
ｃｉｄＩｕＩＩＩ−ｓｐ）の液体培養で得られるβ−１
．３−１．６グルカンと硫酸アルミニウムまたはアルミ
ニウム化合物でフラクトシルトランスフ−ラーゼ活性菌
体を固定化し，この固定化菌体で蔗糖を連続的に１−ケ
スドース（　１　−　Ｋｅｓｔｏｓｅ）とニスドース　
（ｎｙｓｔｏｓｅ　）を主成分とするイヌリン型のフラ
クトオリゴ糖（Ｆｒｕｃｔｏ−ｏｌｉｇｏ糖）に変える
フラクトオリゴ糖の製造方法である。

本発明で用いるオウレオ／へシブイウム属は、Ｆ［ＲＭ
−ＰＮｏ−４２５７　、ＡＴＣＣＮｏ．　２０５２４菌
とし一ｃＵＪ．に登録されている。

この菌体を液体培養して、培養菌体または菌体を含む培
養液を得る。

培養液の、培養培地Ｍ１成として硝はナトリウ１、（Ｎ
ａＮｏ３）　０．２　〜１．０重量％、粉末酵母０．２
　〜１．０＋　；Ｉ：、’　％　、第１１Ｊ７酪ソーダ
（Ｋ、ＨＰＯ，）０．０５−０．１　重州ｚ、推動５．
０−２０．０重量２を使用し、２４時間以」−通気攪拌
培養するとβ−１，３−１，６グルカンを含有しないフ
ラクトシルトランスフェラーゼ 体を含む培養液が得られる。

このオウレオバシディウム属を蔗糖を炭素源として１７
Ｍ体培養すると、主として菌体内にフラクトシルトラン
スフェラーゼ酵素、更に詳しくは蔗糖を供り一体および
受容体として蔗糖にフラクトースを１分子づつ蔗糖のフ
ラクトースにβ−１．２結合で転移する０ブ素、即ぢ下
記の転移反応式を触媒する酵十で、反応生成物であるフ
ラクトオリ：Ｉ糖も蔗糖の受容体となり、フラクトース
が１分子多く結合したフラクトオリゴ１’＋になる。

この場合、いずれも必ず１モルのグルコースが生成され
る。

２（Ｇ−Ｆ）十醇素→Ｇ−Ｆ−Ｆ＋Ｇ Ｇ−Ｆ＋Ｇ−Ｆ−Ｆ十酵素→Ｇ−Ｆ−Ｆ−Ｆ＋ＧＧ−Ｆ
は蔗糖　Ｇ−Ｆ−Ｆはｌ−ケスドースＧはグルコース　
Ｇ−Ｆ−Ｆ−Ｆはニストオウレオバシディウム属は、蔗
糖を炭素源として鹸体培養すると、培養培地中の蔗糖を
、フラクトオリゴ糖即ち１−ケスＩ・−ス、ニスドース
各″に変化させると同時に７１体内に転移酵素、即ちフ
ラクトシルトランスフェラーゼ酵素を含有した菌体かで
きるため、菌体を粗酵素として利用できる。

しかし、炭素源として、フラグ１−ス、グルコース、５
粉等を使用する場合はフラクトシルトランスフェラーゼ
は菌体内に含有されない。

表１は炭素源を蔗糖のみとし、他の培地組成を変えて培
養した際の培養培地の糖組成と菌体中のプラク１ジルト
ランスフエラーゼ活性を，Ｉ＜シている。

表１ 炭素源　庶れｊ　蔗糖　蔗糖 窒素源　米糠　粉末酢ｆ４　粉末酵母 ビタミンＣ　硝酸ソータ 又は 酢ＩＩ　１１Ｉ鉛 Ｐ．Ｈ　５．５　５．５　６．０〜６．５温度　２５−
３０°Ｃ　２５−３０℃　２５−３０℃フラクトシルト
ランスフェラーセ活性 ＋　＋　→− 」−澄液中の糖組成 β−１．３−４．６　＋　−　− グルカン α−１．４−１　、６　−　士　士 この表に示したように、フラクトシルトランスフェラー
ゼ活性は、炭素源として蔗糖を使用する場合に菌体内に
含イ１され、培養条件を変えてもフラクトシルトランス
フェラーゼ活性は変わらない。

培養して得られたフラクトシルトランスフェラーゼ活性
酵素は、培養液から物理的に分離して菌体として使用す
る。

即も、菌体を固定化し、連続的に酵素反応をマｊなうこ
とができれば菌体をパッチ方式で使用するよりも経済的
であるばかりでなくフラグＩ・オリゴ糖の製造も極めて
簡単になる。

一般に酵素メは菌体の固定化に関してはフルギン酸、カ
ルシウムによる包括法等が研究されているが不発町名等
は、オウレオ／久シディウム属が生産するβ−１．３−
１．６グルカンが、硫酸アルミニウムと特異的に凝集反
応する性質を利用してフラクトシルトランスフェラーゼ
活性酵素を含イ■する菌体を固定化することに成功した
。

即ち、オウレオパシディウ１、屈を液体培養１，２て得
られたβ−１．３−１．８グルカン培養液を遠心分路し
て米糠等の粗粒子を除去し、６０°Ｃ以下で濃度が３χ
前後になるように濃縮Ｉ７、これに、に記した培肴Ｊｆ
ｉ　Ｊｌ！！組成で培養して分離したフラクトシルトラ
ンスフェラーゼ活性を有する乾燥菌体を添加して充分し
こ混合した後、水分が５０％になるように硅藻−１：、
カオリンを添加して混合し、その後この混合物を加圧し
て細大より０．１〜１．Ｏｚ硫醇アルミニウム溶液に押
し出し３０分前後浸漬し、これを取り出して水洗した後
、ＰＨ８，０のリン耐衝しよう液に浸漬してＰＨ：Ａ整
後、これを取出して６０°Ｃ以下で熱風乾燥する。この
固定化菌体を一定量カラムに詰めてアップフローで蔗糖
濃度５０〜８０％の糖液なＳＶＯ。

３〜０．５で、温度５５℃〜６０℃で通液するとオリゴ
糖を５０％以上含イ１した無色透明なオリゴ糖液（１−
ケスト−ス、ニスドースを含む）が製造できる。次に菌
体内酵素の作用特性について説明する。上記方法でｔｌ
ｔられたフラクトシルトランスフェラーセ活性酵素含有
菌体の酵素作用特性は至適ＰＨ５，０〜６．０、至適温
度５５〜６０℃である。その結果を第２図に示す。

第２図の条件下では菌体内に含有されていると１１１、
定される異種酵素、即ちインベルターゼ、・イソメラー
ゼの活性は検出されないことが明らかとなった。

基質である蔗糖の特異性は、蔗糖を供与体および受容体
として２モルの蔗糖から１モルのグルコースと１モルの
１−ケスドースを生成する反応を触媒し、生成したフラ
クトオリゴ糖は蔗糖の受容体となり、更にフラクトース
が１分子多１．％フラグトオリゴ糖が生成される。

基本反応式は次の様に示すことができる。

２（（、−Ｆ）十酊素→（Ｇ−Ｆ−Ｆ）＋ＧＧ−Ｆ−Ｆ
＋Ｇ−Ｆ＋酵素→Ｇ−Ｆ−Ｆ−Ｆ＋Ｇ更に蔗糖を供与体
として受容体がフラクト−スの場合はフラクトースの２
都体、即ちイヌロビ方−スとグルコースを生成する。

この反応は以下の通りである。

Ｇ−Ｆ＋Ｆ十酵素→Ｆ−Ｆ＋Ｇ Ｇ−Ｆは蔗糖　Ｆはフラクト−ス Ｇはグルコース　Ｆ−Ｆはイヌロビオースである。また
フラクトース以外の受容体となりうる糖を調べた結果を
表２に示す。

表２ この事は本酵素の転移特性を利用すると受容体の糖を変
えることにより種々のフラクトーオ！ノゴ糖を製造でき
る可能性を示してｌ／′する。

次に菌体内酵素の力価測定につｌ／Ｘて説！ＪＩＪする
。

酵素製造に於て、生産された酵素のブノを具体的に計測
する物指が必要であり、通常ブノ有１１ｉ、ＬＴＬＩち
（ｕ）で表示するのが一般的である。

フラクトシルトランスフェラーゼζ土、血糖２モルから
１モルの１−ケスドースと１モルのグルコースを生成す
る反応を触媒する。

従ってこの酵素反応が生成する範囲内、Ｉ！μちｒ＜ｔ
　０％のみを基質として本酵素を作用させ、ニスドース
を検出しない初期反応で生成するグルコースを定量する
ことにより、本酵素の転移力価（ｕ）を表示することが
できる。

・　以下に明示した反応条件でグルコース酸を定＋ｉ＋
ｒし−てフラクトシルトランスフェラーゼの力価（Ｕ）
として表示した Ｌｌ、ｌＩ　チ、１マイクロモルφグルコース／　１　
分＝　ｌ　ｕ−とした。

基質として結晶精製蔗糖を使用し、その濃度５０％（Ｗ
　／　Ｖ　）　、Ｐ　Ｈ５，５〜５．７温度５５〜６０
℃、反応時間３０分、攪拌１００　ｒ、ｐ、ｌ１１で反
応させ、生成するグルコースをミクロソモギー法または
高速液体クロマト法で定量した。（高速液体クロマトの
場合はピーク面積より算出した。） 使用した高速液体クロマト装置は島津製作所製ＬＣ−４
Ａ、使用カラムは、５ＣＲ−１０１Ｎと７ｔ４ンタパッ
クφカーポ／＼イドレイトΦアナリシス（Ｂｏｎｄａｐ
ａｋ　Ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ　Ａｎａｌｙｓｉｓ）
である。ミクロソモギ一定量値と高速液体クロマト法分
析値に差がないことが明らかになったので１分Ｕｔ　＋
ユ主として高速液体クロマト法で測定した。

表３に力価′Ａ１１ｌ定条件と反応式を示す。

表３ 酢、（コ基質反応と酵素力価測定法 酢歌　− ２Ｇ、−、Ｆ−ＬＪ、−２Ｆ、−、Ｆ　＋　Ｇ蔗糖　１
−ケスド−ス　グルコース 受容体 酵素力価：　Ｉｕ＝　１マイクロモル・グルコース／分
基質儂度　蔗糖５０％ 温度　５５〜６０°Ｃ ＰＨ５、６〜５．７ 反応時間　３０分 グルコースの定−；−ミクロソモギー法高速液体りロマ
ト法□ この反応によって、蔗糖は５０％以上フラクトオリゴ糖
に変換される。

この転移率が可能になったのは、 第１に閑体内転移酵素即ち、フラクトシル］・ラノスフ
ェラーゼの力価が高く、シかも異種酵素であるインベル
ターゼ、イソメラーゼがないこと及び生産が容易にでき
ること、 第２に菌体を酵素として利用できることと反応温度が６
０℃と高く、反応濃度もＢ　ｒｉｘ　７０でも良いこと
である。

本酵素の反応特性は蔗糖を供与体および受容体として供
与体の蔗糖のフラクトースを受容体の蔗糖のフラクトー
スにβ−１，２結合で転移すると回１１丁に、供与体の
グルコースを遊離することであり、更には反応生成物で
あるフラクトオリゴＷ１が蔗糖の受容体となりうること
である。

この様にして蔗糖にフラクトースが１〜３個＆＋１合し
たフラクトオリゴ糖が生成される。

蔗糖な供与体として、受容体になり得る糖にはフラクト
ースがあり、この場合反応生成糖は、フラクト−スの２
￥：体、即ちイヌロビオース（ｉｎす１１ｏｂｉｏｓｅ
）とグルコースである。

この反応を利用するとフラクトシルトランスフェラーゼ
反応で生成するグルコースを異性化酵素でフラクト−ス
に異性化すると、フラクトースはフラクトシルトランス
フェラーゼによって蔗糖、１−ケスドース等と反応し、
フラクトースの２　ｊｉ１体、３￥体、即ちイヌロビオ
ース（ｉｎｕｌｌｏｂｏｓｅ）、イヌロトリオース（ｉ
ｎｕｌｌｏｔｒｉｏｓｅ　）とグルコースとを生成し、
蔗糖を８０％以にのフラクトオリゴ糖に変えることがで
きる。

この酵素反応は次の通りである。

蔗糖　酵素 ２　（Ｇ−Ｆ）十菌体内酵素→Ｇ−Ｆ−Ｆ＋ＧＧ＋イソ
メラーゼ　Ｆ Ｆ＋Ｇ−Ｆ十菌体内酵素−一一十Ｆ−Ｆ＋ＧＦ＋Ｇ−Ｆ
−Ｆ十菌体内酵素→Ｆ−Ｆ−Ｆ＋ＧＧ−Ｆは蔗糖　菌体
内酵素はフラクトシルトランスフェラーゼ　Ｇ−Ｆ−Ｆ
はｌ−ケスドースＧはグルコース　Ｆはフラクトース Ｆ−Ｆはイヌロビオース Ｆ−Ｆ−Ｆはイヌロトリオースである。

具体的には蔗糖にフラクトシルトランスフェラーゼとイ
ソメラーゼ（異性化酵素）を同時に作用させるか、又は
フラクトシルトランスフェラーゼの作用後にイソメラー
ゼを作用させることにより蔗糖を８０％以」二、フラク
トースを含むフラクトオリゴ糖に変えることが実用的に
可能である。

上記フラクト−ス以外に受容体になりうる＠ｌｉは、■
−ケスド−ス、ニスド−ス、ラフィノース（Ｒａｆｆｉ
ｎｏｓｅ）　、　フラクトース（Ｍｅｌｅｚｉｔｏｓｅ
）　％で、分子内にシュークロース結合、即ちグルコー
ス、フラクト−スがα１−２β結合が感賞条件である。

このように、種々の糖が蔗糖を供与体としてフラクトシ
ルトランスフェラーゼの受容体になる。

これらの反応を表４で表わす。

表４ 種菌−一一一　液体培養（培地組成） 培養時間（２４〜９６時間） 培養源Ｉα　←−−↓ （発明の効果） このように本発明によれば、蔗糖を連続的に１−ケヌト
ース（１−Ｋｅｓｔｏｓｅ）とニスドース　（ｎｙｓｔ
ｏｓｅ　）を主成分とするイヌリン型のフラクトオリゴ
軸（Ｆｒｕｃｔｏ−ｏ１ｉｇｏ糖）に変えることができ
る。

（実施例） 本発明を実施例により更に詳細に説明する。

実施例１ （イ）４０免の水道水に米ヌカ８０ｇ、ビタミンＣ８０
ｇ、庶ａ１２Ｋｇを加え、これらを溶解した後カセイソ
ーダでＰＨを５．５に調整し、１．２Ｋｇ／ｃｍ′、１
１５℃で２０分間加圧殺菌した。

冷却後３リツトル三角フラスコで静置培養した種菌１．
５〜２．０文を接種し、仕込量のｌ／２（ｖ／Ｖ）の通
気量で、温度２５℃で１１００ｒｐで撹拌しながら通気
培養した。

培養経過時間と共にβ−１，３−１，［ｉグルカンの生
産濃度が増加し、０．３〜０．４５％になる。

このｊｆ’＋　１Ｊで得られた４８時間培養液は、β−
１，３−１，６グルカンを含有しく含有量０．３％以上
）フラクトシルトランスフェラーゼ活性を有する菌体を
含む。

（ロ）４０文の水道水に硝酸ナトリウム４００ｇ、粉末
酢け４ＱＱｇ、第１リン酸ソーダ４０ｇ、蔗糖８Ｋｇを
加え、溶解後カセイソーダでＰＨ８，０に調整して１゜
２　Ｋｇ／ｃｒｎ’の圧力を加え１１５°Ｃで２０分間
加圧Ｈｌｙ＋し、冷却後３０°Ｃで３９．三角フラスコ
で静置培養した種菌１．５〜２．０　文を接種して通気
培養した。

培養経過時間毎に菌体を遠心分＃　（３０００ｒｐｍ／
１５分）して菌体を分取し、その力価を測定した。その
結果を表５に示す。

表５ ’？ｒ　１１経ｉｉ　ＰＨ菌体４’ｌ’ｙ　ｕ／ｇｒ　
ｕ／ｍｌ　Ｔ−ｕ／ｍ１時間　生菌体（ｇｒ）／１００
ｍ１ ｏ　ｅ、ｏ　ｏ　−−− ２４６，０２，４１１３０１２，３３３９，４６４８５
，８３，４２１４７ｆ（３５，４０８１，１５７２５，
８４，０４１４３４Ｂ５．４０　１２３．３３１１０　
５．８　７．６０　？８Ｑ　１０４．（ｌ　１Ｅｉ３．
２８木Ｊ８養培地の場合は、菌体のみ増加しβ−１，３
−１，６グルカンは全く生産されていないので、菌体の
みをフラクトシルトランスフェラーゼ酵素として使用す
る方法として適している。

又、１８養培地に細胞外酵素としてフラクトシルトラン
スフェラーゼが検出され細胞外フラクトシルトランスフ
ェラーゼ酵素として利用可能であるがフラクトシルトラ
ンスフェラーゼ以外の他の酵素、即ちインベルターゼ、
イソメラーゼ等が含有されており、蔗糖の分解、グルコ
ースの異性化によるフラクト−スの生成等でフラクトシ
ルＩ・ランスフェラーゼには蔗糖からのフラクト−オリ
ゴ糖生成率が低下する欠点があるために好ましくは菌体
のみを分離してフラクトシルトランスフェラーゼとして
利用することが望ましい。

菌体分離は通常の遠心分離またはｌＩｊ！過により分取
することができ乾燥操作後閑体を使用する。

（・イ）で得られた培養液に（ロ）の培養条件で得られ
た培養液から分離したフラクトシルトランスフェラーゼ
活性を有する菌体を３８θ８添ｔｉｌｌ　１．てミキサ
ーで均一になるまで混合し、更に６００ｇのカオリン、
硅藻土を加えて混合後０．１％硫酸アルミニウム溶液２
文に、穴径０．９〜１．２ｍＩ＋１の細大から加圧押出
しし、３０分間常温で浸水した後これを取り出して水洗
する。

更にこれをＰＩ（６，０のリン耐衝しよう液中でｐＨ調
整し、これを取り出して熱用、（６０°Ｃ以下）で乾燥
（７て固定化菌体とした。

得られた固定化菌体は、長さ５．０ｍｍ　、直１′￥０
．９〜１．２ｍｍに整形後、容噴１　ｆＬのカラムに詰
めて使川した。

この固定化菌体に５０％の蔗糖液を、ＰＨＥｌ、０温度
８゜°Ｃ、アンプフローという条件で通液した結果を第
１０図に示す。

この結果ＳＶ＝　０．３以上でオリゴ糖含有Ｍ５ｏ％以
」二の無色透明なオリゴ糖が製造できた。

また」ユ記固定菌体は直径が小さいほど転移効率が良い
ことがわかった。

【図面の簡単な説明】

第１図はオウレオバシディウム属の培養初期における培
養培地を高速液体クロマトで分析した図、 第２図はフラクトシルトランスフェラーゼ活性酵素含有
菌体の酵素作用特性を示す図、第３図はノ＾質（蔗糖）
に対し、フラクトシルトランスフェラーゼ活性を変動さ
せた時のフラクトオリゴ糖の生成率を示す図、 第４図は、酵素反応糖ｌαの糖組成をペーパークロマト
分析したもので、Ｇ＝ニブルコースＧ＝ニイストース、
ＧＦ＝１−フラクトフラノサ・ｒル・ニスドースである
。 の酵素を添加し、各々４時間、２０時間、反応したこと
を示している。 第５図は、基質（蔗糖）濃度が低い時のフラクトオリゴ
糖液 なお、反応時間は６０分間である。 第６図は、酵素反応糖液の液体クロマト分析を示す。使
用装置は筋注製作所製、ＬＣ−４Ａ型で、使用カラムは
ｌ０ＩＮである。 なお、ピーク■＝グルコース、ピークＬ２）＝シュクロ
ース、ピーク■＝１−ケスドース、ピーク・４）＝ニス
ドースを示し、１−ケスドース、ニスドース含有−砥は
６０％以上である。 第７図はフラクトオリゴ糖液からゲル癌過、即ちバイオ
ゲルＰ２と液体クロマトを併用してＧＦにスト−ス）を
純粋に分離し、分離したニスドースのメチル化、アルジ
トールアセテート分析のカスクロマトグラムである。 Ｈ５８、及び第９図はＧＦにニスドース）、イヌリン、
レバン、シュークロースをメチル化したものの重クロロ
ホルム溶液の１３Ｃ−Ｎ　Ｍ　Ｒを示す。 この結果、フラクトオリゴ糖のフラクトースはイヌリン
型結合、即ちβ、１．２結合をしていることを示してい
る。 第１０図はβ−１，３−１，８グルカンとアルミニウム
でフラグＩ・シルトランスフェラーセ活性を有する菌体
を固定化した固定化菌体をカラムに充填してアップフロ
ーで蔗糖液を通液したときのフラクトオリゴ糖生成率を
示したもので、横軸は基質（Ｉｇ）が１時間に接触した
酵素（ｕ）を、縦軸はフラクトオリゴ糖生成率を示す。 第１１図はβ−１，３−１，Ｂグルカンとアルミニウム
でフラクトシルトランスフェラーゼ活性を有する菌体な
固定化した固定化菌体の状態を示す写真である。 特　許　出　願　人　篠　原　智 第ろ図 ％ 互′Ｆ−埼伺 第４図 畝害五ぢ鳥人（１，Ａ’−１−″−クク・ト第７図 １］０　１００　ＭＵ　ｆｌｌｏ　７０　６０　ｂＯピ
ビＩｌｌ第９図 Ｐｒｒｌ 第１０図 旧宅、ｏＪ４＋：」ろ７う７トオす１費の成牛図面のＬ
’４ｊ、’ｉ、、＋（内佇に変更なし〕第１１図 手続補正書（矛へ′） 昭和５１’＋ｊｕ１２月２６［Ｊ １　事件の表示 昭Ｉ１１　５　”　イＴ　特　〆ｒ　２（（ｇ＋１４８
５８３ｑ２　究明の名（ｊ＋、固定化菌体による一ノジ
クｌ−，＝＋す：］’　１ＪｊｉのφンＪ１ｈ方法 ３　？ｌｉ正をする音 ７３　（４：　、ｌｌ：の関係　特ｆＦ　Ｉｌｌ　、％
（ｉ人１１　代　理　人 ５、　１ｌｉｉｌ命令のＩＩ付 昭和５８年１１月８ト１（発送５８．１１．２９）６補
＋ｌの対■ 第６図 Φ 第１０図

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. （１）　才’ｙ　し才ｉ＜　シブイウム属（Ａｕｒｅｏ
   ｂａｃｉｄｉｕｍ・ｓｐ）の液体培養で得られるβ−１
   ，３−１，Ｂグルカンと硫耐アルミニウムまたはアルミ
   ニウム化合物でフラクトシルトラユ／スフェラーゼ活性
   菌体を固定化し、この固定化菌体で推動を連続的に１−
   ケス）・−ス（１−Ｋｅｓｔｏｓｅ）とニスドース　（
   ｎｙｓｔｏｓｅ　）を主成分とするイヌリン型のフラク
   トオリ′：ｉ糖（Ｆｒｕｃｔｏ−ｏ　１　ｉｇｏ糖）に
   変える固定化菌体によるフラクトオリゴ糖の製造方法。