JPS6043063B2 - 血小板抗凝集作用をもつ新規化合物、それの製造法及びそれを含む医薬組成物 - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は、血小板の凝集を抑制し、血中ての血栓性の
不調を抑え及び血液凝固を遅らせる薬理的作用をもつ、
一水和結晶形の新規有機化合物に関する。

また本発明は、該新規結晶状化合物の合成を可能にする
方法に関する。特に、本発明は一水和したＮ−Ｎ″−ビ
スー（３−ピコリル）−４−メトキシーイソフタルアミ
ド、これの製造法及び該化合物を含む医薬用組成物に関
する。

Ｎ＋Ｎ−ビス（３−ピコリル）−４−メトキシーイソフ
タルアミド（以後、ピコタミド（ＰｉｃＯｔａｍｉｄｅ
）という一般に用いられる名称により表わす）が高い線
維素分解及び抗凝固作用を持つ化合物であることは良く
知られており（仏国特許第２１００８（４）号；Ｃｈｉ
ｍｉｅＴｌｌｅｒａＰｅＵｔｉｑＬ］Ｅｌ６巻、２０３
〜７ページ、１９７１年参照）、また良い血小板抗凝集
作用を持つ化合物であることが良く知られている（米国
特許第３９７３０２６号；ＡｇｅａｎｄＡｇｅｉｎｇｌ
７巻、２４６ページ、１９７師参照）。

上述の刊行物及び特許に記載されるようにピコタミドは
無水物の形で知られており、仏国特許第２１００８（支
）号に記載されるようにその融点は、コフラーベンチ（
ＫＯｆｌｅｒｂｅｎｃｈ）法で１２４℃である。この化
合物は、上述の特許に述べられている方法に従い、多数
の不純物を含む粗生成物から、無水のかつ非極性有機溶
媒からの結晶化により精製される。合成反応により得ら
れた粗ピコタミドの、無水、非極性有機溶媒たとえばベ
ンゼンからの結晶化は、顕微鏡でみると繊維状物質たと
えばかさばつてぼんやりした（■０１Ｌ１ｎ１１ｎ０Ｕ
Ｓｄａｗｒ１）のような外観を示す粉末状生成物を与え
る。

該粉末は容易に静電荷を帯び、また比較的不安定である
。これらの特性は、該化合物が医薬用に調製される場．
合に特に欠点となる。電荷を帯びた粒子は互に反撥しあ
い、そして種々の医薬調製物を作るために秤量され装置
に入れられる時に飛散したすく、このことは粒子重量の
変化をもたらし、滴定量安定化の操作をより困難にする
。本発明者は、４−メトキシーイソフタル酸の官能性誘
導体を３−ピコリルアミンと反応させること及び粗生成
物を水溶液から結晶化することによソー水和されたＮ，
Ｎ−ビス（３−ピコリル）−４−メトキシーイソフタル
アミドが得られ、こ１れは従来記載され公知である無水
ピコタミドに比べ、明らかにこれを好ましいものとする
ところの化学一物理的構造及び安定性の特性を持つこと
を見出した。

更に驚くべきことに、そのようにして得られた一水和ピ
コタミドは、薬効の観点及び臨床的薬理学の点の双方で
、無水ピコタミドよりもより活性でありかつ有効である
。

従つて本発明の対象は一水和したＮ，Ｎ″−ビス（３−
ピコリル）−４−メトキシーイソフタルアミドＣ２ｌＨ
２ＯＮ４Ｏ３・Ｈ２Ｏｌ分子量３９４．４である。

通常の化学式は次のように示されうる：本発明に従う一
水和ピコタミドは、白色、無臭の、にが味のある、結晶
状粉末であり、これは空気中で安定であり、かつ水から
容易に結晶化し、コフラーベンチ法で９５〜９ｒｃの融
点をもつ。

簡単のために、以下の記載では、上に定義された化合物
を一般名゜゜一水和ピコタミド゛により表わす。本発明
に従う化合物は、物理化学的観点から、従来よく知られ
ている化合物とは、予期しえないかつ確な安定性の改善
によつて区別される。

この改善は、水和水の分子が本発明に従う化合物の分子
構造にあずかつているという事実による。それは結晶格
子内で、きちんと決定された位置にあり、そこにおいて
水和水の酸素原子は下記に示されるように、ピコタミド
の別の分子に属する特定の原子と、明確に確認できる水
素結合を作り、きちんと決められた特性をもつ化合物の
単結晶を構成する。該特性が、人を含む啼乳動物に投与
された場合、より急速な吸収を伴つて、予期しえない方
法で該新規化合物の薬理的挙動及び啼乳動物の器官にお
けるそれの生体的処理性に影響する。本発明に従う、新
規な結晶形の一水和ピコタミドは、驚ろくべきことに上
述した無水ピコタミドの欠点を避けるばかりでなく、よ
り驚ろくべきことには、動物及び人の器官への投与にお
いて観察される有利な作用の観点において、薬理学的に
より活性かつ有効な化合物を与える。該実験結果の十分
根拠ある理論的説明は現時点ではできないけれど、本発
明に従う結晶状化合物の水溶液は、非晶質（無定形）の
公知の無一水化合物の水溶液とは異なるメカニズムをた
どることが予想されうる。

本発明の別の対象は、該新規水和分子の製造法である。

更に別の本発明の目的は、血液の血栓性の不調の臨床的
処置のための有効な剤として、種々の許容される製薬形
態で新規一水和分子を含有する医薬組成物を与えること
である。先に述べたように、一水和ピコタミドの融点は
９５〜９７よＣである。

これに関連して、無水ピコタミドの融点は１２４゜Ｃで
あることが指摘される。

この二つの化合物の融点のかかる違いは、これ自体すで
に、異る分子構造を示すものであり、これは無水ピコタ
ミドと一水和ピコタミドの本質的な違いを意味する。本
発明を以下において、添付図面を引用しながら、より詳
細に説明する：第１図は、Ｘ線スペクトルから得られる
、一水ロピコタミドの分子の三次元的表現である。

第２図は、一水和ピコタミドの単結晶の三次元勺表現で
ある。第３図は、第２図に示したのと同じ単結晶をよフ
詳細に示す。

第４図は、一水和ピコタミド及び無水ピコタミｊの血小
板抗凝集作用と血中濃度を直接比較する１゛ラフである
。

一水和ピコタミドの結晶構造は、物理的及び化γづ的分
析のほか、その単結晶のＸ線スペクトルにしつても特徴
づけられる。

ことごとく密で、安定なかつ非吸湿性の結晶と５えられ
る該新規分子における原子中心の空間的、ｒ置を確認す
るＸ線回析スペクトルのデータを下己の表１に示す。

表において、分子の色々な原子ま、識別番号をつけられ
た化学記号により示され５。該原子の空間的配置と識別
番号は、表１からひられた原子中心の幾何学的三次元位
置を示す第１図から判る。０２７として示される第１播
原子が水和水を表わし、一方０９として示される第８番
原子がメトキシ基の酸素を表わし、Ｎｌ９として示され
る第１５番原子がアミド基の窒素であり、そしてＮ２２
４として示される第２１番原子がピリジン基の窒素原子
であることが、特に判る。

表１において、シンボルＸ／Ａ，．Ｙ／Ｂ及びＺ／Ｃは
種々の原子の空間座標を表わす。一水和ピコタミドの構
造を示す第１図から判るように、水和水の酸素原子はピ
コタミド分子に対してきちんと定められた位置で結晶格
子内に置かれている。

第乏図において、長方形で示された単結晶内の水和水の
酸素は々のピコタミド分子の決められた原子と水素結合
（点線により表示されている）により結合され、該ピコ
タミド分子は秩序だつた三次元パターンで配置されかつ
、水和水酸素による水素結合により適当に互に結合され
ていることが判る。

該結合は第３図に、より詳細に示される。

第３図では、水和水の酸素０２７が水素結合によりそれ
ぞれ（１）第一のピコタミド分子のメトキシ基の＝ＣＯ
の酸素（０９）と（結合距離：２．８１Ａ）（２）上述
の分子と同じ面内にある第二のピコタミド分子のアミド
基＝ＮＨの窒素（Ｎｌ９）と（結合距離：２．９６Ａ）
（３）二つの結合された分子に対して下方又は上方に至
る面に置かれる第三のピコタミド分子のピリジン環の窒
素（Ｎ２２４）と（結合距離：２．８０Ａ）結合されて
いることが判る。

この三つの結合の存在は、結晶水が結晶を形成するとこ
ろの異つたピコタミド分子の間にある強度をもつてはめ
込まれる強度、及び結晶自体のコンパクトさの双方の説
明を可能にする。

結晶水の分子により与えられるこのコンパクトさが、従
来知られている無水形に対して一水和物の生体的処理性
における改善の理由であると考えられる。該改善は以下
において、薬理学的観点から、二つの薬品の吸収時間、
血中濃度値及び作用を比較することにより確認される。
実際、結晶水を分子に入れることに因るピコタミドの空
間構造のコンパクトさ及び生体的処理の顕著な改善に基
く改善された効果は、無水ピコタミド分子についての従
来の知識に基づいて予期することができないものであつ
た。

元素分析はまた、上述した構造と一致する結果を与えた
。

Ｃ２ｌＨ９Ｎ４Ｏ３・Ｈ２Ｏ（分子量３９４．４）につ
いて、Ｃ６３．８７％〔理論値６３．９４〕 ；Ｈ５．
７２％〔理論値５．６２〕 ；Ｎｌ４．ｌ８％〔理論値
１４．２０〕及び残りは酸素という結果が得られた。新
規な一水和ピコタミドの製造法は、化合物の合成という
限りでは、無水ピコタミドの従来公知の製造法に従う。
しかし、粗ピコタミドが得られたとき、驚ろくべきこと
に、粗生成物を従来公知の方法における無水混合物とは
逆に水性混合物から再結晶することによつて、上記に定
義した一水和結晶状生成物が得られることが見い出され
た。

下記の例は、４−メトキシーイソフタロイルジクロライ
ド又は４−メトキシーイソフタル酸の別の官能性誘導体
から出発して、プロトン受容体の存在下で一水和ピコタ
ミドを合成により得る方法を例示する。

製造例 ３−ピコリルアミン、トリエチルアミン及び無水のテト
ラヒドロフラン１２０ｍ１を、還流冷却器、滴下ロード
及び機械的攪拌装置を備える３′のフラスコに入れる。

４−メトキシーイソフタロイルジクロライドを少しずつ
２００ｍ１の無水テトラヒドロフランに溶解する。この
溶液を、フラスコ内の反応混合物中に滴下ロードから攪
拌下にゆつくりと入れる。

付加反応は１．時間〜２時間行われなければならず、下
記の発熱反応が進む；該ジクロライド付加反応のあと、
反応混合物を約２時間還流し、水てゆつくりと希釈して
２′とし、攪拌下に粗ピコタミドから成る結晶状スラリ
ーが分離するまで保持する。

該スラリーを吸引？過して回収し、そしてアセトンー水
混合物（アセトン６容積十水１１容積）７００〜８００
ｍ１から湿つた状態で結晶化される。

得られた生成物を水から再結晶する。するとコフラーベ
ンチ法で９５〜９７℃の融点をもつ一水和ピコタミドが
得られる。上述したところから、本発明に従う方法は、
合成反応から得られた粗ピコタミドの再結晶を水性、溶
媒により行うという事実により特徴づけられる。

一方逆に、無水及び非極性の有機溶媒たとえばベンゼン
を用いる従来法では無水の生成物が得られる。薬理学的
試験 ノ 一水和ピコタミドは、血小板抗凝集剤及び線維素分
解剤として高い作用をもつことが判つた。

従つて、これは臨床的薬理学及び人の治療に対する適用
において有用性をもつ。該作用は、血小板抗凝集作用に
ついてはボルン（ＢＯｒｎ）の分光光学的測定法で、及
び線維素分解作用については全体としてフアーンリイ（
Ｆｅａｍｌｅｙ）の血栓分解テストにより試験された。

実施例１ ラピッドにおける生体内での血小板凝集作用。

比時間随意に水を断たれたニユージランドラビツトを、
投与量０．６ｍ１／１００ｙでウレタンの２０％エチル
溶液を腹膜捺に投与してマヒさせる。２５−５０一１０
０ｍｇ／Ｋ９の投与量で一水和ピコタミドを腹膜内注射
したあと、直後（対照）及び１．５時間後に血液を頚動
脈から抜き取る。

血液試料を、９ハの体積比のクエン酸ナトリウム３．８
％溶液により凝固出来なくし、次に、血小板に富む血漿
（ＰＲＰ）を得るために１０００ｒｐｍで１紛間遠心分
離する。次に該血漿の一部を８０００［′Ｐｍで１紛間
遠心分離して血小板の少ない血漿（ＰＰＰ）を得る。Ｐ
ＰＰはボルン凝集計のゼロ点を決めるために用いられ、
そしてＰＲＰの１ｍＬを測定装置の血に入れる。

血小板凝集は、血小板の活動性に依存して変化される濃
度のアデノシンニ燐酸二ナトリウム（ＡＤＰ）により進
められる。血小板凝集作用は、処理後の凝集カーブの、
対照のそれに対する５０％の抑制（ＩＤ５Ｏ）として計
算される。

結果は後ほど述べられる。実施例２ 犬における血小板凝集と血中濃度における時間的効果。

１００ｍｇ／Ｋｇの投与量で一水和ピコタミドを、１８
，時間随意に水を与えられずにおかれたビークル犬（雄
）に経口投与する。処理の前（対照）及び２−４−６−
８−１Ｃ＠間後に血液を採り、時間の関数として（上述
の方法により）血小板凝集作用及び薬品の血中濃度を測
；定する。

血中濃度の測定は下記の方法に従いＷ分光光度計により
行われる。

１００ｒ′Ｐｍで１０分間遠心分離して得られた血漿５
ＷＬＩに２ｍ１の濃塩酸を加え、１００℃の水浴で１時
間夕加水分解する。

これを冷却し、２ｍＬの水にとかし、そして■過する。
淵液をＮＨ４ＯＨにより強アルカリ性にし、そして３０
ｍ１（７）ＣＨＣＩ３により抽出する。無水Ｎａ２ｓＯ
４で乾燥されたクロロホルム層を０．１Ｎ（７）Ｈ２Ｓ
Ｏ４により抽出し、そのようにして得られた酸の層に０
．１Ｎ（７）Ｈ２ＳＯ４を加えて１００ｍ１とし、２２
８ｎｎ１で分光光度計で測定する。結果は後ほど述べら
れる。実施例３ モルモツトの生体内における線維素分解作用。

線維素分解作用は、イタリアンモルモツトで測定され、
一水和ピコタミドは連続的に経口的に、１００ｍ９／Ｋ
９の投与量で投与される。ノ 下記のように修正された
フアーンリイ法を、この試験のために用いた：０℃に保
たれた試験管中に、１．７ｍ１の燐酸塩緩衝液（ＰＨ７
．４）及び５０ＮＩＨ／Ｍｔのトロンビン溶液０．１ｍ
１を入れる。

モルモツトの血液０．２ｍ１を全部加えたあと、試験管
をＯ℃に３０分間保つて凝結させ、次に水浴で３ＴＣに
３紛間保つて、溶解現象を起こす。次に凝結物重量を測
定する。線維素分解作用は、対照の凝結物重量に比べて
、処理された動物の凝結物重量の減少のパーセ・ント値
として計算される。

実施例４ 人における血小板凝集及び線維素分解作用。

一水和ピコタミドについての生体内での二つの作用の確
認は、３５〜６５７の健康な男女に１２ｍ９／Ｋ９の単
一投与量で経口的に処置して得られた。血小板凝集の抑
制は、実施例１と同じ方法に従つて、拮抗剤としてＡＤ
Ｐニナトリウムを用いて試験された。線維素分解作用は
、オイグロピンの溶解時間を測定することにより評価さ
れた。

得られた結果は、後程、表に示される。

結果 統計的分析により、ラピッドについての生体内の血小板
凝集作用の試験（実施例１）て得られた結果から、血小
板凝集を５０％抑制できる投与量（ＩＤ５Ｏ）が計算さ
れ、これは５４．１０±１．４３ｍ９／Ｋ９である。

犬（実施例２）における最大効果（５３．８２％）は第
４時間において見られた。

対応する血中濃度は血漿ｍｌ当り２２．６γ／Ｔｎ９で
り、これは第４図のグラフに示されるように最大値にあ
たる。１００ｍｇ／Ｋ９の投与量で経口的に試験された
モルモツト（実施例３）における線維素分解作用は２７
．８３％に等しいと判つた。

経口的に１２ｍ９／Ｋｇの単一投与量の人（実施例４）
においては、最大の血小板凝集効果は処理後４時間で見
られ、そしてこれは８１．４％と測定された；最大の線
維素分解作用は、オイグロピンの溶解時間の減少が５４
．２％と測定された。

比較についての所見 一水和ピコタミドの作用と毒性の結果及び米国特許第３
９７３０２６号に記載される無水ピコタミドのこれらを
比較すると、作用における本質的差違が存在し、かつこ
の差違は一水和形のものに好都合であることが判る。

このことは該新規化合物の特徴である結晶水分子の単純
な導入に基づいて決して予期てきるものではなかつた。
比較のために経口による犬における時間効果と血中濃度
についての試験が、それの投与後の生体的処理をテスト
するために、既に公知の無水ピコタミドについてと同じ
実験条件で行われた。

この試験の結果は第４図のグラフに示され、グラスは１
００ｍｇ／Ｋ９、経口の投与量での犬における血小板凝
集及び血中濃度の時間効果を示す。横軸は時間単位での
時刻を示し、縦軸は血漿Ｔｎｔ当りのγ単位での血中濃
度及びパーセント単位での血小板凝集作用を示す。線１
と１″は、各々一水和ピコタミドと無水ピコタミドの抗
凝集作用を示し、連続線２と２″は、各々一水和ピコタ
ミドと無水ピコタミド血中濃度を表わす。図に示される
結果を考察すると、無水ピコタミドは第８時間において
４９％の最大血小板凝集作用を持ち、一方、最大血中濃
度は１９．７５γ／Ｍｔであり、これは第６時間におい
て生じることが明白に判る。

これに比べて、一水和ピコタミドは第４時間で最大の血
小板凝集効果を示し、そしてさらに作用の最大ピークが
血中濃度の最大ピークと同じ時刻に一致する。

このこ左は、無水ピコタミドに比べて一水和ピコタミド
に好都合なより急速な生体処理を証拠づける。一水和ピ
コタミドについて行われた薬理学的試験の結果を次の表
■にまとめる。

ここには、無水ピコタミドについての同じ試験のデータ
も同様に″示される。表■に示された、二つの分子につ
いての試験値の比較は、一水和ピコタミドが無水ピコタ
ミドに比べて改善された薬理学的効果をもつことを示す
。

この予期されざる改善は、安定な構造の一水和物結晶の
形のこの新規医薬の改善された生体処理性によると考え
られる。治療における使用 一水和ピコタミドはその低毒性、高耐容性及び不都合な
副作用がないことの観点から、種々の血栓性の不調、特
に脳血管の不調、心筋硬塞、動脈及ひ静脈の血栓症、肺
動脈塞栓症、一般的動脈硬化状態、一般的心臓外科の処
置のための人の治療において有用であり得る。

この使用のために、１０〜５００ｍ９の活性な剤を含む
種々の薬品形態が採用され得る。

この例は次に述べるようなものであることができる：（
ａ）経口的に：５０〜３０００ｍ９／日の投与量のため
の、１０〜５００ｍ９の活性な剤を含むカプセル、錠剤
、丸薬；（ｂ）腸管外に；１０〜２００ｍｇ／日の投与
量のための、１０〜５０ｍ９の活性な剤を含む、殺菌し
た静脈注射用小ピン。

それは坐薬の形で直腸に投与されることも出来る。

医薬組成物は明らかに、活性な剤の他に、通常製薬にお
いて許容される、製薬の分野で良く知られているような
ビヒクル及び補薬を含むことができる。

また、一水和ピコタミドの投与形態とそれぞれの投与パ
ターンは、臨床的条件と医師の経験に従つて変えられ得
ることも明白である。

【図面の簡単な説明】

第１図は、一水和ピコタミドの分子の三次元的表現であ
る。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １ 式： ▲数式、化学式、表等があります▼ により示され、コフラーベンチ法で９５〜９７℃の融点
   を持つ結晶形の一水和Ｎ，Ｎ′−ビス−（３−ピコリル
   ）−４−メトキシ−イソフタルアミド。 ２ ４−メトキシ−イソフタル酸の官能性誘導体を無水
   有機溶媒中で３−ピコリルアミンと反応させる一水和Ｎ
   ，Ｎ′−ビス−（３−ピコリル）−４−メトキシ−イソ
   フタルアミドの製造法において、反応生成物を水により
   沈澱させ、粗生成物を水性溶液から及び続いて水から再
   結晶することを特徴とする製造法。 ３ 反応生物を水により沈澱させたあと、該生成物をア
   セトン／水の溶液から結晶化させ、そして水から再結晶
   する特許請求の範囲第２項記載の製造法。 ４ 血中における血小板凝集の増加及びトロンビン作用
   の増加による、哺乳動物の血栓症治療用医薬組成物にお
   いて、これが活性な剤として治療的に有効量の、結晶形
   の一水和Ｎ，Ｎ′−ビス（３−ピコリル）４−メトキシ
   −イソフタルアミド及び製薬において許容されるビヒク
   ルを含むことを特徴とする哺乳動物の血栓症治療用医薬
   組成物。 ５ １０〜５００ｍｇの活性な剤を含む投与単位の形態
   の特許請求の範囲第４項記載の哺乳動物の血栓症治療用
   医薬組成物。 ６ １０〜５００ｍｇの活性な剤を含み、経口投与され
   る、特許請求の範囲第５項記載の哺乳動物の血栓症治療
   用医薬組成物。 ７ １０〜５００ｍｇの活性な剤を含み、腸−管外投与
   される特許請求の範囲第５項記載の哺乳動物の血栓症治
   療用医薬組成物。