JPS6045599A - サイモシンβ４の免疫定量法 - Google Patents
サイモシンβ４の免疫定量法Info
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- JPS6045599A JPS6045599A JP59068950A JP6895084A JPS6045599A JP S6045599 A JPS6045599 A JP S6045599A JP 59068950 A JP59068950 A JP 59068950A JP 6895084 A JP6895084 A JP 6895084A JP S6045599 A JPS6045599 A JP S6045599A
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- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/74—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving hormones or other non-cytokine intercellular protein regulatory factors such as growth factors, including receptors to hormones and growth factors
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
サイモシンβ４は４６個のアミノ酸残基からなる熱安定
性の、酸性ポリペプチドである。胸腺ホルモンはウシ胸
腺のサイモシン分画５から単離され、そのアミノ酸配列
も決定されている。サイモシンβ４はサイモシン分画５
に存在する数種のポリペプチドの１種で、胸腺依存リン
パ球（Ｔ細胞）の調整、分化および機能に関与している
。サイモシンβ４の単離、特性づけおよび利用に関して
は米国特許第４，２９７，２７６号に詳細に記載されて
いる。
性の、酸性ポリペプチドである。胸腺ホルモンはウシ胸
腺のサイモシン分画５から単離され、そのアミノ酸配列
も決定されている。サイモシンβ４はサイモシン分画５
に存在する数種のポリペプチドの１種で、胸腺依存リン
パ球（Ｔ細胞）の調整、分化および機能に関与している
。サイモシンβ４の単離、特性づけおよび利用に関して
は米国特許第４，２９７，２７６号に詳細に記載されて
いる。
サイモポイエチンおよびサイミンと°して知られた胸腺
のポリペプチドホルモンの免疫定量法は米国特許第４，
０５５，６３３号に開示されている。とくにこの特許に
は、精製サイモポイエチンをカンプリング剤としてグル
タルアルデヒドを用いてウシγ−グログリンのような免
疫原キャリヤー材料に共有結合させて得られた免疫原に
よって誘導される抗体を用いるサイモポイエチンの放射
免疫定量法が開示されている。定量に使用される標識抗
原としては１２５Ｉ−サイモポイエチンが好ましい。
のポリペプチドホルモンの免疫定量法は米国特許第４，
０５５，６３３号に開示されている。とくにこの特許に
は、精製サイモポイエチンをカンプリング剤としてグル
タルアルデヒドを用いてウシγ−グログリンのような免
疫原キャリヤー材料に共有結合させて得られた免疫原に
よって誘導される抗体を用いるサイモポイエチンの放射
免疫定量法が開示されている。定量に使用される標識抗
原としては１２５Ｉ−サイモポイエチンが好ましい。
サイモポイエチンは、構造、アミノ酸組成および配列、
生物学的活性の特徴、物理的性質ならびに免疫学的性質
のあらゆる点で、サイモシンβ４とは全く類似性がない
ことを銘記すべきである。
生物学的活性の特徴、物理的性質ならびに免疫学的性質
のあらゆる点で、サイモシンβ４とは全く類似性がない
ことを銘記すべきである。
部分精製サイモシン分画、すなわち多数のポリペプチド
の混合物を含むことが現在は明らかにされているサイモ
シン分画５の放射免疫定量法については、５ｃｈｕｌｏ
ｆら（Ｆｅｄ、 Ｐｒ０Ｃ１＋ ３２ ： ９６２゜１
９７３）に報告されている（ Ｇｏｌｄｓｔｅｉｎら：
Ｆｅｄ、 Ｐｒｏｃ、、 ３３ ： ２０５３ 、１９
７４も参照）。
の混合物を含むことが現在は明らかにされているサイモ
シン分画５の放射免疫定量法については、５ｃｈｕｌｏ
ｆら（Ｆｅｄ、 Ｐｒ０Ｃ１＋ ３２ ： ９６２゜１
９７３）に報告されている（ Ｇｏｌｄｓｔｅｉｎら：
Ｆｅｄ、 Ｐｒｏｃ、、 ３３ ： ２０５３ 、１９
７４も参照）。
米国特許第４，２６４，５７１号にはサイモシンα１の
放射免疫定量法が報告されている。この定量法には、グ
ルタルアルデヒド連結基によってヘモシアニンと共有結
合したサイモシンα１を免疫原として誘導した抗体を使
用する。１２５１−サイモシンα１を標識とし、これは
Ｂｏｌｔｏｎ−Ｈｕｎｔｅｒ試薬による処理で製造した
。定量操作には二重抗体法を用い、免疫複合体を沈殿さ
せた。第二抗体としてはヤギ抗つサギγ−グロズリンを
使用した。
放射免疫定量法が報告されている。この定量法には、グ
ルタルアルデヒド連結基によってヘモシアニンと共有結
合したサイモシンα１を免疫原として誘導した抗体を使
用する。１２５１−サイモシンα１を標識とし、これは
Ｂｏｌｔｏｎ−Ｈｕｎｔｅｒ試薬による処理で製造した
。定量操作には二重抗体法を用い、免疫複合体を沈殿さ
せた。第二抗体としてはヤギ抗つサギγ−グロズリンを
使用した。
米国特許第４．３３９．４２７号には、抗体の誘導に合
成サイモシンα１、標識ペプチドにサイモシンα１の類
縁体、（Ｔｙｒｌ）−サイモシンα１を用いるサイモシ
ンα１の改良免疫定量法が記載されている。
成サイモシンα１、標識ペプチドにサイモシンα１の類
縁体、（Ｔｙｒｌ）−サイモシンα１を用いるサイモシ
ンα１の改良免疫定量法が記載されている。
本発明はサイモシンβ４を測定するだめの放射免疫定量
法に関する。
法に関する。
本定量用の抗体の製造に用いられる免疫原はサイモシン
β４を慣用の免疫キャリアー材料に共有結合させること
によシ各易に得られる。本発明の実施に必要なサイモシ
ンβ４の供給源は狭い範囲に限定されるものではない。
β４を慣用の免疫キャリアー材料に共有結合させること
によシ各易に得られる。本発明の実施に必要なサイモシ
ンβ４の供給源は狭い範囲に限定されるものではない。
適当なす°イモシンβ４としては、各種哺乳類動物供給
源から得られる分画５由来のものを使用できる。たとえ
ば、ヒト、ウシ、ヒツジまたはゲタの分画５プレバレー
ジヨンから得られるサイモシンβ４を使用テキる。
源から得られる分画５由来のものを使用できる。たとえ
ば、ヒト、ウシ、ヒツジまたはゲタの分画５プレバレー
ジヨンから得られるサイモシンβ４を使用テキる。
これは、各種哺乳類動物種に由来するサイモシンβ４の
アミノ酸配列の相同性によるものと考えられる。
アミノ酸配列の相同性によるものと考えられる。
また、公知のペプチド合成法で得られるサイモシンβ４
の使用も好ましい。たとえば、同相法または溶液相で製
造されたサイモシンβ４が適切に使用できる。
の使用も好ましい。たとえば、同相法または溶液相で製
造されたサイモシンβ４が適切に使用できる。
本明細書において用いられる「免疫原キャリアー材料」
の語は宿主動物に免疫原性応答を独立に誘発する性質を
有する物質を意味し、サイモシンβ４の遊離カルボキシ
ル、アミノまだはヒドロキシル基と免疫原キャリアー材
料の相当する基の間にペプチドまたはエステル結合を介
して直接、または慣用される二官能性連結基を介してサ
イモシンβ４と共有結合によシ結合できる物質である。
の語は宿主動物に免疫原性応答を独立に誘発する性質を
有する物質を意味し、サイモシンβ４の遊離カルボキシ
ル、アミノまだはヒドロキシル基と免疫原キャリアー材
料の相当する基の間にペプチドまたはエステル結合を介
して直接、または慣用される二官能性連結基を介してサ
イモシンβ４と共有結合によシ結合できる物質である。
免疫ＪＪ９ヤ＋）アー材料へのサイモシンβ４の共有結
合による連結は、本技術分野において公知の方法によっ
て実施できる。たとえば、共有結合による直接的連結は
、カップリング剤としてカルボジイミド好ましくはジシ
クロへキシルヵルボジイミｈｔたは１−エチル−６−（
３−ジメチルアミノプロピル）カルがジイミドを用いて
行われる。
合による連結は、本技術分野において公知の方法によっ
て実施できる。たとえば、共有結合による直接的連結は
、カップリング剤としてカルボジイミド好ましくはジシ
クロへキシルヵルボジイミｈｔたは１−エチル−６−（
３−ジメチルアミノプロピル）カルがジイミドを用いて
行われる。
この直接的連結工程は、わずかに酸性の反応メジウムた
とえば約６〜６．５のＰＨ範囲、とくに好ましくは咀約
４〜６．５のＰＨ範囲のメジウムを用いて行うのが望ま
しい。
とえば約６〜６．５のＰＨ範囲、とくに好ましくは咀約
４〜６．５のＰＨ範囲のメジウムを用いて行うのが望ま
しい。
連結に効果的な二官能性連結基としては０２〜フシアル
カナールたとえばグルタルアルデヒドが適当である。こ
の別の態様における連結は、ＡＶｒａｍｅａＳの報告（
工ｍｍｕｎｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ＋ ６ ： ４３．１
９６９ ）における条件を用いて行うのが便利である。
カナールたとえばグルタルアルデヒドが適当である。こ
の別の態様における連結は、ＡＶｒａｍｅａＳの報告（
工ｍｍｕｎｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ＋ ６ ： ４３．１
９６９ ）における条件を用いて行うのが便利である。
生成した免疫原はさらに精製することなくそのまま使用
できる。また必ずしも必要ではないが、透析に付して、
未反応サイモシンβ番およびカンプリング試薬を除去し
てもよい。
できる。また必ずしも必要ではないが、透析に付して、
未反応サイモシンβ番およびカンプリング試薬を除去し
てもよい。
本発明の免疫原の製造に使用できる適当な免疫原キャリ
アー材料としてはタンパク質、天然もしくは合成ポリマ
ー化合物たとえばポリリジンもしくはアミノ酸のコポリ
マー、ポリサンカライド等を挙げることができる。
アー材料としてはタンパク質、天然もしくは合成ポリマ
ー化合物たとえばポリリジンもしくはアミノ酸のコポリ
マー、ポリサンカライド等を挙げることができる。
本発明の免疫原の製造に際し免疫原キャリアー材料とし
て使用されるタンパク質の同一性は必須ではない。適当
なタンパク質の例には、哺乳類の血清タンパク質たとえ
ばヒトγ−グロブリン、ヒト血清アルブミン、ウシ血清
アルジミン、メチル化つシ血清アルゾミン、ウサギ血清
アルブミン、ウシγ−グログリンおよびウマγ−グログ
リンまたは非補乳類タンパク質たとえばヘモシアニンと
くにキーホー／Ｌ／ ・リンＲット（Ｋｅｙｈｏｌｅ
ｌｉｍｐｅｔ ）ヘモシアニン（ＫＬＨ）が包含される
。他の適当なタンパク質は本技術分野における熟練者に
は公知のとおシである。
て使用されるタンパク質の同一性は必須ではない。適当
なタンパク質の例には、哺乳類の血清タンパク質たとえ
ばヒトγ−グロブリン、ヒト血清アルブミン、ウシ血清
アルジミン、メチル化つシ血清アルゾミン、ウサギ血清
アルブミン、ウシγ−グログリンおよびウマγ−グログ
リンまたは非補乳類タンパク質たとえばヘモシアニンと
くにキーホー／Ｌ／ ・リンＲット（Ｋｅｙｈｏｌｅ
ｌｉｍｐｅｔ ）ヘモシアニン（ＫＬＨ）が包含される
。他の適当なタンパク質は本技術分野における熟練者に
は公知のとおシである。
本発明の免疫原は宿主動物に好１しくけアジュバントを
用いて注射して、サイモシンβ４に特異的な抗体の生成
誘発に利用できる。長期間反復注射して力価を改善する
こともできる。この目的に適当な宿主動物としては、ウ
サギ、ウマ、ヤギ、モルモット、ラット、ウシ、ヒツジ
等を挙げることができる。得られた抗血清はサイモシン
β４と選択的に複合体を形成できる抗体を含有する。各
種哺乳類動物種に由来するサイ上フンβ４配列には高い
相同性があるので、ある種に対して誘発されたサイモシ
ンβ４の抗体を他の哺乳類動物種のサイモシンβ４の定
量に利用することが可能である。
用いて注射して、サイモシンβ４に特異的な抗体の生成
誘発に利用できる。長期間反復注射して力価を改善する
こともできる。この目的に適当な宿主動物としては、ウ
サギ、ウマ、ヤギ、モルモット、ラット、ウシ、ヒツジ
等を挙げることができる。得られた抗血清はサイモシン
β４と選択的に複合体を形成できる抗体を含有する。各
種哺乳類動物種に由来するサイ上フンβ４配列には高い
相同性があるので、ある種に対して誘発されたサイモシ
ンβ４の抗体を他の哺乳類動物種のサイモシンβ４の定
量に利用することが可能である。
Ｔｙｒ −０１３−サイモシンβ４は放射性ヨード化の
基質として使用される。Ｔｙｒ −０１３−サイモンβ
４の表現はサイモシンβ４のＱ末端から１６番目のアミ
ノ酸にタイロシンがＮ末端で付加したボリペゾチｒを示
すものである。全分子を使用する場合はＢｏｌｔｏｎ−
Ｈｕｎｔｅｒ放射標識試薬を用いるか、あるいは非標識
Ｂｏｌｔｏｎ−Ｈｕｎｔｅｒ試薬で化学的改変を加えた
のちに旧来の放射標識法を用いる必要があるので、上述
の類縁体の利用はサイモシンβ４の定量法を著しく改善
した。この類縁体は高い免疫反応性を維持し、比放射能
の高い標識製品である。ペプチド配列のアミン末端に導
入したタイロシン残基は、内部の多分抗原性決定基の近
くの部位に芳香環構造を付加した場合に比べて抗体との
結合に際しての立体障害が少ないものと思われる。
基質として使用される。Ｔｙｒ −０１３−サイモンβ
４の表現はサイモシンβ４のＱ末端から１６番目のアミ
ノ酸にタイロシンがＮ末端で付加したボリペゾチｒを示
すものである。全分子を使用する場合はＢｏｌｔｏｎ−
Ｈｕｎｔｅｒ放射標識試薬を用いるか、あるいは非標識
Ｂｏｌｔｏｎ−Ｈｕｎｔｅｒ試薬で化学的改変を加えた
のちに旧来の放射標識法を用いる必要があるので、上述
の類縁体の利用はサイモシンβ４の定量法を著しく改善
した。この類縁体は高い免疫反応性を維持し、比放射能
の高い標識製品である。ペプチド配列のアミン末端に導
入したタイロシン残基は、内部の多分抗原性決定基の近
くの部位に芳香環構造を付加した場合に比べて抗体との
結合に際しての立体障害が少ないものと思われる。
しかも、Ｔｙｒ −Ｃ１５−サイモシンβ４は、天然サ
イモシンβ４をＢｏｌｔｏｎ−Ｈｕｎｔｅｒ試薬で標識
する場合よシも、均一かつ再現性高く標識できることが
明らかにされている。化学的に合成したペプチドを定量
に使用することは好ましい。原料組織からの精製工程で
挙動をともにする可能性がある化合物の夾雑がないので
、定量の特異性は著しく高くなる。放射性ヨード化の基
質として使用されるＴｙｒ −０１６−サイモシンβ４
は、サイモシンβ４のカルボキシ末端から１３番目のア
ミノ酸まで合成すればよく、最後に付加するアミノ酸を
タイロシンとするほかはサイモンβ４の場合と同様に、
公知の固相ペプチド合成操作を用いて有利に製造できる
。
イモシンβ４をＢｏｌｔｏｎ−Ｈｕｎｔｅｒ試薬で標識
する場合よシも、均一かつ再現性高く標識できることが
明らかにされている。化学的に合成したペプチドを定量
に使用することは好ましい。原料組織からの精製工程で
挙動をともにする可能性がある化合物の夾雑がないので
、定量の特異性は著しく高くなる。放射性ヨード化の基
質として使用されるＴｙｒ −０１６−サイモシンβ４
は、サイモシンβ４のカルボキシ末端から１３番目のア
ミノ酸まで合成すればよく、最後に付加するアミノ酸を
タイロシンとするほかはサイモンβ４の場合と同様に、
公知の固相ペプチド合成操作を用いて有利に製造できる
。
本発明の放射免疫定量法に使用する試薬としては放射性
ヨード化Ｔｙｒ −０１３−サイモシンβ４が好ましい
が、他の放射標識試薬、たとえばヨード１２５ （１２
５工）または炭素１４ （１４０）で標δｊｌできる（
Ｔｙｒｌ）−サイモシンβ４または（Ｔｙｒｌ） −デ
スアセチルサイモシンβ４も使用できる。本技術分野に
おいて公知のアイソトープ交換法を用いて、この種の試
薬にトリチウムを導入することもできる。１４ａ −（
Ｔｙｒ） −０１３−サイモシンβ４β４または１４０
− （Ｔｙｒｌ）−サイモシンβ４は同相合成操作の適
当な工程に市販の１４０−標識アミノ酸１個または２個
以上を導入することによりｇ易に製造できる。
ヨード化Ｔｙｒ −０１３−サイモシンβ４が好ましい
が、他の放射標識試薬、たとえばヨード１２５ （１２
５工）または炭素１４ （１４０）で標δｊｌできる（
Ｔｙｒｌ）−サイモシンβ４または（Ｔｙｒｌ） −デ
スアセチルサイモシンβ４も使用できる。本技術分野に
おいて公知のアイソトープ交換法を用いて、この種の試
薬にトリチウムを導入することもできる。１４ａ −（
Ｔｙｒ） −０１３−サイモシンβ４β４または１４０
− （Ｔｙｒｌ）−サイモシンβ４は同相合成操作の適
当な工程に市販の１４０−標識アミノ酸１個または２個
以上を導入することによりｇ易に製造できる。
本発明の実施にあたっては、各種定量方法を採用できる
。たとえば一方法としては、定量すべきサンプルの既知
量、サイモシンβ４特異的抗体、および標識サイモシン
β４を混合し、放置する。
。たとえば一方法としては、定量すべきサンプルの既知
量、サイモシンβ４特異的抗体、および標識サイモシン
β４を混合し、放置する。
本技術分野において公知の操作によシ非結合試薬から抗
体−抗原複合体を分離する。すなわち、硫酸アンモニウ
ム、ポリエチレングリコニル、過剰のもしくは不溶性支
持体に結合した第二抗体、デキストラン被覆チャーコー
ル等で処理する。結合または非結合相中の標識サイモシ
ンβ４またはサイモシンβ４断片の濃度を測定し、結合
または非結合相中で、観察された標識成分のレベルをそ
れ自体公知の方法によ）標準曲線と比較するとサンプル
中のサイモシンβ４含量を決定できる。適当な標準曲線
は既知量のサイモシンβ４を固定量の標識サイモシンβ
４およびサイモシンβ４特異的抗体と混合し、各既知量
に対する結合割合を測定することによシ得られる。
体−抗原複合体を分離する。すなわち、硫酸アンモニウ
ム、ポリエチレングリコニル、過剰のもしくは不溶性支
持体に結合した第二抗体、デキストラン被覆チャーコー
ル等で処理する。結合または非結合相中の標識サイモシ
ンβ４またはサイモシンβ４断片の濃度を測定し、結合
または非結合相中で、観察された標識成分のレベルをそ
れ自体公知の方法によ）標準曲線と比較するとサンプル
中のサイモシンβ４含量を決定できる。適当な標準曲線
は既知量のサイモシンβ４を固定量の標識サイモシンβ
４およびサイモシンβ４特異的抗体と混合し、各既知量
に対する結合割合を測定することによシ得られる。
所望によシ、抗体を各種天然材料で処理して特異性を増
大させることもできる。適当な処理剤としては、任意の
哺乳類動物臓器由来の、サイモシンβ４産生細胞を含ま
ないサイモシン分画５がある。追白々臓器は腎臓、肝臓
および脳である。この種の臓器は哺乳類動物、ラクダ、
ヒツジ、ウマ、サル、ゲタ、ヒト等から得られる。
大させることもできる。適当な処理剤としては、任意の
哺乳類動物臓器由来の、サイモシンβ４産生細胞を含ま
ないサイモシン分画５がある。追白々臓器は腎臓、肝臓
および脳である。この種の臓器は哺乳類動物、ラクダ、
ヒツジ、ウマ、サル、ゲタ、ヒト等から得られる。
本発明を以下の実施例によシさらに詳細に例示する。実
施例中、Ｂｏｃはｔ−ブチルオキシカルボニル保護基、
Ｂｚｌはベンジルオキシカルボニル保護基、２− Ｂｚ
は２−クロロベンジルオキシカルボニル保護基を示す。
施例中、Ｂｏｃはｔ−ブチルオキシカルボニル保護基、
Ｂｚｌはベンジルオキシカルボニル保護基、２− Ｂｚ
は２−クロロベンジルオキシカルボニル保護基を示す。
例１
Ｔｙｒ −０１３−サイモシンβ４の製造Ｂｏａ−Ｅｌ
ｅｒ（Ｂｚｌ）−００１２−０６１（４−Ｖジン（２，
５ｉ ；１．０ミリモル）をペゾチド合成各器に取り、
各サイクル毎に以下の工程を実施して固相合成を行った
。
ｅｒ（Ｂｚｌ）−００１２−０６１（４−Ｖジン（２，
５ｉ ；１．０ミリモル）をペゾチド合成各器に取り、
各サイクル毎に以下の工程を実施して固相合成を行った
。
（１）ＣＨ３Ｃｌ２で６回洗浄
（２） ａＨ２ｃＬ２中４０チドリフルオロ酢酸（ＴＦ
Ａ）で前洗浄 （３） ｃＴ（２ＣＪ２中４０係ＴＦＡと２８分間攪拌
（４） ０Ｈ２ＣＬ２で６回洗浄 （５） ０Ｈ２（Ｊ２中１０チドリエテルアミン（Ｂｔ
３Ｎ）で前洗浄 （６） ＣＨ２（Ｊ２中１０％Ｅｔ５Ｎと８分間攪拌（
７）ＣＨ２Ｃｌ２で６回洗浄 （８） Ｂｏｃ−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−０Ｈ（３ミ リ
モ ル、１．０１９）およびジシクロへキシルカルボ
ジイミド（Ｄｏ＠、３＋ミリモル、 ［１，６２、！７
）と１２０分■）攪拌 （９） ０Ｈ２（Ｊ２．０Ｈ２ＯＡ’２中５０チイソプ
ロビルアルコール、ついでＣＨ２Ｃｌ２でそれぞれ６回
洗浄工程（８）には以下のアミノ酸誘導体を順次用いて
上記合成サイクルを反復した。すなわち、Ｅｏｃ−ＧＪ
！ｙ−ｏＨ，Ｂｏａ−Ａｌａ−ＯＲ５ＢｏＱ−Ｇｌｎ−
ＯＨ、Ｂｏａ−Ｌｙｓ（２−Ｃ！１Ｚ）−０Ｈ，ＢｏＣ
−Ｇ／１ｕ（ＯＢＪ）−０Ｈ％Ｂｏｃ−Ｇ７ｎ−ＯＨ。
Ａ）で前洗浄 （３） ｃＴ（２ＣＪ２中４０係ＴＦＡと２８分間攪拌
（４） ０Ｈ２ＣＬ２で６回洗浄 （５） ０Ｈ２（Ｊ２中１０チドリエテルアミン（Ｂｔ
３Ｎ）で前洗浄 （６） ＣＨ２（Ｊ２中１０％Ｅｔ５Ｎと８分間攪拌（
７）ＣＨ２Ｃｌ２で６回洗浄 （８） Ｂｏｃ−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−０Ｈ（３ミ リ
モ ル、１．０１９）およびジシクロへキシルカルボ
ジイミド（Ｄｏ＠、３＋ミリモル、 ［１，６２、！７
）と１２０分■）攪拌 （９） ０Ｈ２（Ｊ２．０Ｈ２ＯＡ’２中５０チイソプ
ロビルアルコール、ついでＣＨ２Ｃｌ２でそれぞれ６回
洗浄工程（８）には以下のアミノ酸誘導体を順次用いて
上記合成サイクルを反復した。すなわち、Ｅｏｃ−ＧＪ
！ｙ−ｏＨ，Ｂｏａ−Ａｌａ−ＯＲ５ＢｏＱ−Ｇｌｎ−
ＯＨ、Ｂｏａ−Ｌｙｓ（２−Ｃ！１Ｚ）−０Ｈ，ＢｏＣ
−Ｇ／１ｕ（ＯＢＪ）−０Ｈ％Ｂｏｃ−Ｇ７ｎ−ＯＨ。
Ｂｏａ−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−０Ｈ、ＢｏＣ−工１ｅ−
ＯＨ、Ｂｏａ−Ｔｈｒ（Ｂｚｌ）−ＯＨ、Ｂｏａ−Ｇ７
ｕ（ＯＢｚ４）−ＯＨ、Ｂｏａ−Ｌｙｓ（２−０６Ｚ）
ＯＲ。
ＯＨ、Ｂｏａ−Ｔｈｒ（Ｂｚｌ）−ＯＨ、Ｂｏａ−Ｇ７
ｕ（ＯＢｚ４）−ＯＨ、Ｂｏａ−Ｌｙｓ（２−０６Ｚ）
ＯＲ。
Ｂｏａ−Ｔｙｒ（ＢＪ）と１−ヒドロキシベンゾトリア
ゾール（ＨＯＢＴ、６ミリモル、０．８１ ｇ）をＢｏ
ｃ−Ｇｌｎ−ＯＨを含む工程（８）の各カンプリング反
応液に加えた。合成完了後、保護基を有するペプチドレ
ジン４．１４ｇが得られた。ついで、これをＯ′Ｇで６
０分間、ＨＦ分解（無水ｌＨＦ１００ｍ７．７＝ソール
１ＯＮ）に付した。過剰のＨＦを除去したのち、レジン
ーペプチド混合物を１チ酢酸で抽出し、凍結乾燥すると
粗生成物１．７ｇがわずかにベージュ色の粉末として得
られた。次にこれをμＢｏｎｄａｐａｋＣ１Ｂカラム（
１０−μｍ、０．３９ ｘ’３０ ｃｍ ）上６５℃で
高圧液体クロマトグラフィーによシさらに精製した。タ
ンクＡの緩衝液は０．０５４ ＴＦＡ（ＰＨ２〜６）、
タンクＢの緩衝液は０．０５チＴＦＡ含有アセトニトリ
ルとした。ペプチドは２１０ｎｍにおける紫外部吸収で
検出した。流速は１．５ｍ１１分にセットし、ペプチド
は５％Ｂで１０分間ついで４５〜３０％Ｂ直線勾配で５
０分間処理してカラムから溶出させた。Ｔｙｒ −０１
３−サイモシンβ４はカラムから２８分に溶出した。ア
ミノ酸分析結果： Ｇｌｕ ６．０９、Ｔｈｒ Ｏ，８
５、ｓｅｒ Ｏ，８６、Ｇａｙ １．０８、Ａｌａ １
．１２、Ｉｌｅ ０．９ ＣＩ、Ｔｙｒ ０．８３、Ｌ
ｙｓ ２．０７ 例２ 合成サイモシンβ４（４３残基の完全分子）をグルタル
アルデヒドによＪＫＬＨに共有結合的に連結させた。合
成サイモシンβ４（２，１５ｍ９）とキーホール・リン
ペット・ヘモシアニン（ＫＬＨ。
ゾール（ＨＯＢＴ、６ミリモル、０．８１ ｇ）をＢｏ
ｃ−Ｇｌｎ−ＯＨを含む工程（８）の各カンプリング反
応液に加えた。合成完了後、保護基を有するペプチドレ
ジン４．１４ｇが得られた。ついで、これをＯ′Ｇで６
０分間、ＨＦ分解（無水ｌＨＦ１００ｍ７．７＝ソール
１ＯＮ）に付した。過剰のＨＦを除去したのち、レジン
ーペプチド混合物を１チ酢酸で抽出し、凍結乾燥すると
粗生成物１．７ｇがわずかにベージュ色の粉末として得
られた。次にこれをμＢｏｎｄａｐａｋＣ１Ｂカラム（
１０−μｍ、０．３９ ｘ’３０ ｃｍ ）上６５℃で
高圧液体クロマトグラフィーによシさらに精製した。タ
ンクＡの緩衝液は０．０５４ ＴＦＡ（ＰＨ２〜６）、
タンクＢの緩衝液は０．０５チＴＦＡ含有アセトニトリ
ルとした。ペプチドは２１０ｎｍにおける紫外部吸収で
検出した。流速は１．５ｍ１１分にセットし、ペプチド
は５％Ｂで１０分間ついで４５〜３０％Ｂ直線勾配で５
０分間処理してカラムから溶出させた。Ｔｙｒ −０１
３−サイモシンβ４はカラムから２８分に溶出した。ア
ミノ酸分析結果： Ｇｌｕ ６．０９、Ｔｈｒ Ｏ，８
５、ｓｅｒ Ｏ，８６、Ｇａｙ １．０８、Ａｌａ １
．１２、Ｉｌｅ ０．９ ＣＩ、Ｔｙｒ ０．８３、Ｌ
ｙｓ ２．０７ 例２ 合成サイモシンβ４（４３残基の完全分子）をグルタル
アルデヒドによＪＫＬＨに共有結合的に連結させた。合
成サイモシンβ４（２，１５ｍ９）とキーホール・リン
ペット・ヘモシアニン（ＫＬＨ。
４．１５１ｎ９）を１２Ｘ７５１１１＋１１栓付プラス
チツク管：に、０．２５ Ｍ リｙｍす）リウム１．５
ｍｌ、 ｐｋｉ ７．４とともに取った。２５チグル
タルアルデヒド水溶液７５μｌを加えて、グルタルアル
デヒドの最終濃度を１．２５ ％ （Ｗ／ｖ）とした。
チツク管：に、０．２５ Ｍ リｙｍす）リウム１．５
ｍｌ、 ｐｋｉ ７．４とともに取った。２５チグル
タルアルデヒド水溶液７５μｌを加えて、グルタルアル
デヒドの最終濃度を１．２５ ％ （Ｗ／ｖ）とした。
反応容器を６時間、室温で穏やかに攪拌したのち、この
溶液を滅菌、生理食塩水（０，１５Ｍ食塩）希釈し、サ
イモシンβ４の濃度を５０μｇ／’ｆｄとした。この反
応混合物をさらに精製することなく免疫処置に用いた。
溶液を滅菌、生理食塩水（０，１５Ｍ食塩）希釈し、サ
イモシンβ４の濃度を５０μｇ／’ｆｄとした。この反
応混合物をさらに精製することなく免疫処置に用いた。
Ｎｅｗ Ｚｅａｌａｎｄ白色ウサギ（若齢成熟ウサギ、
５〜６ボンド）、それぞれの背部皮下２０〜３０個所に
、ＫＬＨに結合させた合成サイモシンβ、５０μｇで、
Ｖａ ｉ ｔｕｋａ ｉ ｔ ｉ ｓら（、Ｔ、 Ｃ１
１ｐ、 Ｅｎｄｏ１３３ ：９８８．１９７１）の方法
に従い免疫処置を行った。各ウサギが２ｍｌの乳化液で
５０μＩの抗原を投与されるように、等量のタンパク質
水溶液とフロイントの完全アジュバントからなる乳化液
を調製した。４力月間にわた９２週ごとに、各動物あた
りサイモシンβ４（ＫＬＨ結合体として）５０μｇ全グ
ースター投与した（すなわち、最初の免疫処置から８回
グースター投与）。第８回目のグースター投与後１４日
目に最初の採血を実施した。さらに１力月間隔でブース
ター投与を行い、１０日後に採血を行うと免疫定量に適
当な抗血清が産生した。
５〜６ボンド）、それぞれの背部皮下２０〜３０個所に
、ＫＬＨに結合させた合成サイモシンβ、５０μｇで、
Ｖａ ｉ ｔｕｋａ ｉ ｔ ｉ ｓら（、Ｔ、 Ｃ１
１ｐ、 Ｅｎｄｏ１３３ ：９８８．１９７１）の方法
に従い免疫処置を行った。各ウサギが２ｍｌの乳化液で
５０μＩの抗原を投与されるように、等量のタンパク質
水溶液とフロイントの完全アジュバントからなる乳化液
を調製した。４力月間にわた９２週ごとに、各動物あた
りサイモシンβ４（ＫＬＨ結合体として）５０μｇ全グ
ースター投与した（すなわち、最初の免疫処置から８回
グースター投与）。第８回目のグースター投与後１４日
目に最初の採血を実施した。さらに１力月間隔でブース
ター投与を行い、１０日後に採血を行うと免疫定量に適
当な抗血清が産生した。
クロラミンＴ法によるヨード化を改良して、（Ｔｙｒ）
−サイ上フンβ４類縁体のヨード化に用いた（ Ｇｒｅ
ｅｎｖｒＯＯｄ ＋ Ｆ −０−＋ Ｈｕｎｔｅｒ ｒ
Ｗ、 Ｍ、＆ Ｇ１０Ｖｅ ｒ ＋Ｊ、Ｓ、 ：Ｂｉ
ｏｃｈｅｍ、Ｊ、＋８９ ： １１４，１９６３）。
−サイ上フンβ４類縁体のヨード化に用いた（ Ｇｒｅ
ｅｎｖｒＯＯｄ ＋ Ｆ −０−＋ Ｈｕｎｔｅｒ ｒ
Ｗ、 Ｍ、＆ Ｇ１０Ｖｅ ｒ ＋Ｊ、Ｓ、 ：Ｂｉ
ｏｃｈｅｍ、Ｊ、＋８９ ： １１４，１９６３）。
β４類縁体を０．５Ｍリン酸塩緩衝液（ＰＨ＝／）、０
）に濃度１６６μｇ／Ｔｎｌになるように溶解した。こ
の類縁体１２μｌにリン酸塩緩衝液２０μｌ中Ｎａ工１
２５５ ｍｏｉを加えた。クロラミンＴはリン酸塩緩衝
液中０．５ｍ９７ｍ１に調製し、その１０μｌを混合し
ながら加えた。９０秒後、メタ重亜硫酸塩（４ｐｍｏｌ
ｅ ／ Ｉ Ｄ Ｏμ１．７．６ｐｇ／ｍｌ”Ｉを加え
て反応を停止させた。遊離１２５工と標識ペプチドの分
離に必要なＧ−１０カラムへの移送を効率的に行うため
、移送前に反応管に正常血清５０μｌを加えた。
）に濃度１６６μｇ／Ｔｎｌになるように溶解した。こ
の類縁体１２μｌにリン酸塩緩衝液２０μｌ中Ｎａ工１
２５５ ｍｏｉを加えた。クロラミンＴはリン酸塩緩衝
液中０．５ｍ９７ｍ１に調製し、その１０μｌを混合し
ながら加えた。９０秒後、メタ重亜硫酸塩（４ｐｍｏｌ
ｅ ／ Ｉ Ｄ Ｏμ１．７．６ｐｇ／ｍｌ”Ｉを加え
て反応を停止させた。遊離１２５工と標識ペプチドの分
離に必要なＧ−１０カラムへの移送を効率的に行うため
、移送前に反応管に正常血清５０μｌを加えた。
５ｅｐｈａａｅｘ Ｇ −１０カラム（０−７Ｘ１０ｃ
ｍ）を０．１係オバルグミン添加１０％酢酸で平衡化し
た。
ｍ）を０．１係オバルグミン添加１０％酢酸で平衡化し
た。
１１ｎｌの分画を集め、標識ペプチドピークをトレーサ
ーとして用いた。トレーサーを分割しく５ｐｇ）、直ち
に凍結した。定量前にトレーサーを希釈して、１０．０
００ ｃｐｍ／ ５０１’ｌとした。４週後にトレーサ
ーの再クロマトグラフィーが可能で、１回の標識の有用
性を６〜８週延長した。
ーとして用いた。トレーサーを分割しく５ｐｇ）、直ち
に凍結した。定量前にトレーサーを希釈して、１０．０
００ ｃｐｍ／ ５０１’ｌとした。４週後にトレーサ
ーの再クロマトグラフィーが可能で、１回の標識の有用
性を６〜８週延長した。
Ｃ）放射免疫定量法プロトコール
合成サイモシンβ４の保存溶液は放射免疫定量用緩衝液
（ＲＩＡＢ ）中、定量操作範囲（０，５〜６７．５■
／１００μＩＩ）に適した濃度に調製し、−２０℃で凍
結した。ＲＩＡＢはリン酸塩緩衝食塩溶液ＣＰＨ＝７．
４．０．０１ Ｍリン酸ナトリウムおよび０．１５ Ｍ
食塩）に０．０５ ％ （Ｖｉ／ｖ） ＮａＮ３．０、
Ｑ １ｍＭＥＤＴＡおよび（ＮＨ４）２ＳＯ４分画化正
常つサギ血清（ＮＲ８）を最終希釈度 ／ に加えた０
０ ものである。ＮＲ８はトレーサーの非特異的結合するタ
ンパク質としてと同時に二重抗体沈殿工程でキャリアー
として働く。保存溶液から０．５〜３７．５ ｎ、！ｉ
’／ １００μｌを含有する９種の標準液を調製し、用
量まで一７０℃に凍結した。未知サンプルは１回の定量
に血清として５〜２０μｌが必要で、食塩水を加えて１
００μｌ／サンプルとした。全試験管にＲＩＡＢを加え
て最終容量を４００μｌとした。保存抗血清（／２００
希釈）５０μノを取シ、各試験管に加えた。この希釈で
トレーサーの２０〜２５％が結合し、最終希釈度は１／
２ｏｏｏとなる。特異曲技サイモシンβ４抗血清を除く
全試薬を含む試験管を処理して、非特異的結合を評価し
た。試験管を攪拌しながら、４℃で２４時間インキュベ
ートした。結合トレーサ１からの遊離トレーサーの分離
は、トレーサーの最大沈殿を与えるように調節したヤギ
抗つサギエｇＧプレバレージョン５０μｌの添加によシ
実施した。
（ＲＩＡＢ ）中、定量操作範囲（０，５〜６７．５■
／１００μＩＩ）に適した濃度に調製し、−２０℃で凍
結した。ＲＩＡＢはリン酸塩緩衝食塩溶液ＣＰＨ＝７．
４．０．０１ Ｍリン酸ナトリウムおよび０．１５ Ｍ
食塩）に０．０５ ％ （Ｖｉ／ｖ） ＮａＮ３．０、
Ｑ １ｍＭＥＤＴＡおよび（ＮＨ４）２ＳＯ４分画化正
常つサギ血清（ＮＲ８）を最終希釈度 ／ に加えた０
０ ものである。ＮＲ８はトレーサーの非特異的結合するタ
ンパク質としてと同時に二重抗体沈殿工程でキャリアー
として働く。保存溶液から０．５〜３７．５ ｎ、！ｉ
’／ １００μｌを含有する９種の標準液を調製し、用
量まで一７０℃に凍結した。未知サンプルは１回の定量
に血清として５〜２０μｌが必要で、食塩水を加えて１
００μｌ／サンプルとした。全試験管にＲＩＡＢを加え
て最終容量を４００μｌとした。保存抗血清（／２００
希釈）５０μノを取シ、各試験管に加えた。この希釈で
トレーサーの２０〜２５％が結合し、最終希釈度は１／
２ｏｏｏとなる。特異曲技サイモシンβ４抗血清を除く
全試薬を含む試験管を処理して、非特異的結合を評価し
た。試験管を攪拌しながら、４℃で２４時間インキュベ
ートした。結合トレーサ１からの遊離トレーサーの分離
は、トレーサーの最大沈殿を与えるように調節したヤギ
抗つサギエｇＧプレバレージョン５０μｌの添加によシ
実施した。
第二抗体の添加、攪拌後、サンプルを一夜４℃でインキ
ュベートした。免疫沈殿を４℃で２５分間、１５００Ｘ
、９で遠心分離してペレット化した。上澄液を吸引して
捨て、免疫沈殿中の放射活性を自動γ−７ペクトロメー
ターで測定した。標準液および未知試料（Ｂ１）の１分
あたシのカウント数を非特異的バンクグラウンド、通常
は総放射能の５係で補正し、競合性抗原が導入されなか
った反応試験（Ｂｏ ）の１分あたシの補正カウント数
で割った。データは用量の対数（Ｘ軸）対得られたカウ
ント数をプロットし、用量−反応曲線がで記述される４
変数計算法でデータを計算するＢｅｃｋｍａｎシステム
ＤＰ−５５００で解析した。式中、ｙは反応、Ｘは濃度
、ＡはＸがＯ（Ｂｏ ）のときの反応、Ｂは勾配、Ｃは
ＡとＤの中間での反応に相当する用量、Ｄは無限濃度で
の反応を示す（Ｒｏｄ ｂａｒｄ＋ Ｄら： Ｒａｄｉ
ｏｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙ ａｎｄＲｅｌａｔｅｄ Ｐ
ｒｏｃｅｄｕｒｅｓ ｉｎ Ｍｅｄ、＋ １ ： ４６
９ ｒ１９７８参照）。
ュベートした。免疫沈殿を４℃で２５分間、１５００Ｘ
、９で遠心分離してペレット化した。上澄液を吸引して
捨て、免疫沈殿中の放射活性を自動γ−７ペクトロメー
ターで測定した。標準液および未知試料（Ｂ１）の１分
あたシのカウント数を非特異的バンクグラウンド、通常
は総放射能の５係で補正し、競合性抗原が導入されなか
った反応試験（Ｂｏ ）の１分あたシの補正カウント数
で割った。データは用量の対数（Ｘ軸）対得られたカウ
ント数をプロットし、用量−反応曲線がで記述される４
変数計算法でデータを計算するＢｅｃｋｍａｎシステム
ＤＰ−５５００で解析した。式中、ｙは反応、Ｘは濃度
、ＡはＸがＯ（Ｂｏ ）のときの反応、Ｂは勾配、Ｃは
ＡとＤの中間での反応に相当する用量、Ｄは無限濃度で
の反応を示す（Ｒｏｄ ｂａｒｄ＋ Ｄら： Ｒａｄｉ
ｏｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙ ａｎｄＲｅｌａｔｅｄ Ｐ
ｒｏｃｅｄｕｒｅｓ ｉｎ Ｍｅｄ、＋ １ ： ４６
９ ｒ１９７８参照）。
ｄ）サイモシンβ４に対してＲＩＡを用いた結果合成サ
イモシンβ４は抗体および”５ニーＴｙｒ−ｃｉ３−サ
イモシンβ４類縁体を用い、試験管あたシ０．４〜６７
・５ ｎｇの範囲で測定できる（第１図）。ヒト、ウシ
、マウス、ハムスターおよびモルモットカラの血清中の
サイモシンβ４レベルは１〜１０μｌを用いて標準曲線
に平行であった。検出可能な最小血清レベルは５ｎｇ／
ｍ７で、最終抗体濃度し、。００を用いてトレーサーの
抗体への結合は２０〜２５係であった。
イモシンβ４は抗体および”５ニーＴｙｒ−ｃｉ３−サ
イモシンβ４類縁体を用い、試験管あたシ０．４〜６７
・５ ｎｇの範囲で測定できる（第１図）。ヒト、ウシ
、マウス、ハムスターおよびモルモットカラの血清中の
サイモシンβ４レベルは１〜１０μｌを用いて標準曲線
に平行であった。検出可能な最小血清レベルは５ｎｇ／
ｍ７で、最終抗体濃度し、。００を用いてトレーサーの
抗体への結合は２０〜２５係であった。
このＲＩＡの特異性は数種の推定胸腺ホルモンおよび各
種血清タンパク質プレバレージョンについて交叉反応性
を測定して調べた（第１表）。各フレバレージョンにつ
いての測定で、ＲＩＡ系への各タンパク質の添加量は、
そのレベルが血中の公知の生理的濃度よシ十分高くなる
まで、または各フレバレージョンの入手可能量による実
際上の限界に達するまで増量した。ゼロ用量レベルと有
意差のある反応を２０チ阻害とし、この反応を生じなか
ったプレバレージョンについては、試験した最大用量を
示す。０．５ｎｇの範囲のレベルでは、合成サイモシン
β４とＴｙｒ −０１３−サイモシンβ４類縁体のみが
トレーサーを置換した。プレアルブミンは１００μ９／
試験管のレベルでも交叉反応を示さなかった。サイモポ
イエチンとサイモシンα７は１０ ｐｇのレベルでトレ
ーサーの２０％を置換した。血清中にｐｇのオーダーで
存在するサイモシンα、は１１００ｎ／試験管のレベル
で交叉反応を示さなかった。
種血清タンパク質プレバレージョンについて交叉反応性
を測定して調べた（第１表）。各フレバレージョンにつ
いての測定で、ＲＩＡ系への各タンパク質の添加量は、
そのレベルが血中の公知の生理的濃度よシ十分高くなる
まで、または各フレバレージョンの入手可能量による実
際上の限界に達するまで増量した。ゼロ用量レベルと有
意差のある反応を２０チ阻害とし、この反応を生じなか
ったプレバレージョンについては、試験した最大用量を
示す。０．５ｎｇの範囲のレベルでは、合成サイモシン
β４とＴｙｒ −０１３−サイモシンβ４類縁体のみが
トレーサーを置換した。プレアルブミンは１００μ９／
試験管のレベルでも交叉反応を示さなかった。サイモポ
イエチンとサイモシンα７は１０ ｐｇのレベルでトレ
ーサーの２０％を置換した。血清中にｐｇのオーダーで
存在するサイモシンα、は１１００ｎ／試験管のレベル
で交叉反応を示さなかった。
第 １ 表
サイモシンβ４に対するＲ工Ａの特異性試験した １２
５ニーＴｙｒ−１３−サイセンβ４タンパク質 少なく
とも２０チの置換にＡ、非胸腺タンパク質およびペプチ
げ ヘモシアニン（ｘ’ｒ、Ｈ） ＞１００μｇアルグミン
（ヒト） ＞ １００ ｐ、！？ヘモグロビン（ヒト）
）１００μｙ ミオグロビン（ウマ） ＞１００μＩ ボリアスパラヤン 〉１００μｍ プロラクチン 〉 １０μＩ プレアルグミン 〉１００μｙ Ｂ、胸腺ペプチド サイモポイエチンＩ［１０μｇ サイモシンα７ １０μＪ サイモシンβ４ ０．ｉ ｎ、？ サイモシンβ４（０１４） ０．１ ｎＪｌｌサイモシ
ンαｌ ＞１μＩ ヒト血清中の循環サイモシンβ４のレベルを第２表に示
す。測定間の精度はこの種の定量に期待される範囲内に
あるが、正常レベルの個人間での変動はか々シ大きい。
５ニーＴｙｒ−１３−サイセンβ４タンパク質 少なく
とも２０チの置換にＡ、非胸腺タンパク質およびペプチ
げ ヘモシアニン（ｘ’ｒ、Ｈ） ＞１００μｇアルグミン
（ヒト） ＞ １００ ｐ、！？ヘモグロビン（ヒト）
）１００μｙ ミオグロビン（ウマ） ＞１００μＩ ボリアスパラヤン 〉１００μｍ プロラクチン 〉 １０μＩ プレアルグミン 〉１００μｙ Ｂ、胸腺ペプチド サイモポイエチンＩ［１０μｇ サイモシンα７ １０μＪ サイモシンβ４ ０．ｉ ｎ、？ サイモシンβ４（０１４） ０．１ ｎＪｌｌサイモシ
ンαｌ ＞１μＩ ヒト血清中の循環サイモシンβ４のレベルを第２表に示
す。測定間の精度はこの種の定量に期待される範囲内に
あるが、正常レベルの個人間での変動はか々シ大きい。
第 ２ 表
男 性 ２５〜５０３３８５０±２４９７女性 ２５〜
５０２３７００±１６８ 屓帯血 新生児 ２０ １８４０±１５４代理人 浅
村 皓 第１頁の続き ■Ｉｎｔ、ＣＩ、’ 識別記号 庁内整理番号／／ Ｃ
０７Ｋ ９９：００ ＠発 明 者 ジョン マツクルアー アメリカ合衆国
テレーン ７４７ ０発 明 者 ボール エッチ・ネイ アメリカ合衆国
メラー レーン １５７０２ キサス州ヒユーストン、ライセスター リ−ランド州ボウイー、ペン マノー
５０２３７００±１６８ 屓帯血 新生児 ２０ １８４０±１５４代理人 浅
村 皓 第１頁の続き ■Ｉｎｔ、ＣＩ、’ 識別記号 庁内整理番号／／ Ｃ
０７Ｋ ９９：００ ＠発 明 者 ジョン マツクルアー アメリカ合衆国
テレーン ７４７ ０発 明 者 ボール エッチ・ネイ アメリカ合衆国
メラー レーン １５７０２ キサス州ヒユーストン、ライセスター リ−ランド州ボウイー、ペン マノー
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 （１） Ｔｙｒ −０１３−サイモシンβ４（２） Ｔ
ｙｒ−０１３−サイモシンβ４、（Ｔｙｒｌ）−デスア
セチルサイモシンβ４および（Ｔｙｒｌ）−サイモシン
β４から選ばれるポリペプチドよシなシ、このポリペプ
チドが放射性アイソトープに結合しているサイモシンβ
４定量用放射性トレーサー（３） １２５ニー（Ｔｙｒ
） −ａ １３−サイモシンβ４である特許請求の範囲
第２項記載の放射性トレーサー（４）免疫キャリアー材
料に共有結合したサイモシンβ４からなる免疫原 （５）免疫キャリアー材料はキーホール・リンペラ）
（Ｋｅｙｈｏｌｅ ｌｉｍｐｅｔ ）のヘモシアニンで
ある特許請求の範囲第４項記載の免疫原 （６） （ａ） サンプルを既知量の放射標識Ｔｙｒ−
ｃ１３−サイモシンβ４およびサイ上２フ２番と選択的
に複合体を形成する抗体とインキュベートし、（１））
生成した抗体−抗原複合体を遊離の放射標識サイモシン
β４から分離し、（Ｃ）その複合体中の放射標識サイモ
シンβ４の結合割合を測定し、（ｄ）その結合割合を標
準曲線と比較してサンプル中に存在するサイ上２フ２番
の量を決定することを特徴とするサンプル中のサイモシ
ンβ４の放射免疫定量法（７）放射標識Ｔｙｒ −Ｃ！
１３−サイモシンβ４は１２５ニー（Ｔｙｒ） −０
１３−サイモシンβ４である特許請求の範囲第６項記載
の放射免疫定量法（８）抗体は免疫キャリアー材料に共
有結合したサイモシンβ４からなる免疫原に応答して哺
乳類動物中に誘導される抗体である特許請求の範囲第７
項記載の放射免疫定量法 （９）免疫キャリアー材料はキーホール・リンペットの
ヘモシアニンである特許請求の範囲第８項記載の放射免
疫定量法 αＱ サイモシンβ４ボリペゾチドを選択的に認識し、
結合する抗体 α力 免疫キャリアー材料に共有結合したサイモシンβ
４からなる免疫原を注射した宿主動物から誘導した特許
請求の範囲第１０項記載の抗体Ｑ２ 免疫キャリアー材
料はキーホール・リンペットのヘモシアニンである特許
請求の範囲第１１項記載の抗体
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US06/482,384 US4543340A (en) | 1983-04-07 | 1983-04-07 | Radioimmunoassay of thymosin β4 |
| US482384 | 1990-02-20 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS6045599A true JPS6045599A (ja) | 1985-03-12 |
Family
ID=23915849
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP59068950A Pending JPS6045599A (ja) | 1983-04-07 | 1984-04-06 | サイモシンβ４の免疫定量法 |
Country Status (3)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4543340A (ja) |
| EP (1) | EP0124779A3 (ja) |
| JP (1) | JPS6045599A (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS63203697A (ja) * | 1987-02-19 | 1988-08-23 | Genichiro Soma | 新規ｄｎａ |
| JPS6447600A (en) * | 1987-08-19 | 1989-02-22 | Naniwa Kineki Kk | Transfer paper for muffle painting |
Families Citing this family (10)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20040170625A1 (en) * | 1998-07-30 | 2004-09-02 | Regenerx Biopharmaceuticals, Inc. | Methods of treating Epidermolysis Bullosa and associated dermatological indications with thymosin beta 4, analogues, isoforms and other derivatives |
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