JPS63203697A - 新規ｄｎａ - Google Patents
新規ｄｎａInfo
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- JPS63203697A JPS63203697A JP3627687A JP3627687A JPS63203697A JP S63203697 A JPS63203697 A JP S63203697A JP 3627687 A JP3627687 A JP 3627687A JP 3627687 A JP3627687 A JP 3627687A JP S63203697 A JPS63203697 A JP S63203697A
- Authority
- JP
- Japan
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- cells
- ind
- dna
- rna
- bone marrow
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- Pending
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-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/46—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates
- C07K14/47—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals
- C07K14/4701—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals not used
- C07K14/4702—Regulators; Modulating activity
- C07K14/4705—Regulators; Modulating activity stimulating, promoting or activating activity
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- Organic Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
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- Molecular Biology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
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- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
■
本発明は新規ＤＮＡに間する。更に詳細には、悪性化骨
髄細胞が生体外分化誘導物質の刺激により単球細胞に分
化する過程で産生されるｍＲＮＡに相補性あるＤＮＡ
（以下、ｒｃＤＮＡＪと略記ずろ）と、その一部に該当
するサイモシンβ４ＤＮＡとに間する。前者のＤＮＡの
発現により産生されるポリペプチドは、ＩＩ瘍細胞等の
悪性化骨髄細胞を単球細胞に分化誘導する作用を有する
と考えられるので、腫瘍治療剤として１２立つ可能性が
ある、一方、サイモシンβ４は、免疫能を回層させると
報告されている口線ホルモンであるサイモシンの一種で
ある（「現代化学Ｊ１９８５年１２月号３４〜３日頁）
。
髄細胞が生体外分化誘導物質の刺激により単球細胞に分
化する過程で産生されるｍＲＮＡに相補性あるＤＮＡ
（以下、ｒｃＤＮＡＪと略記ずろ）と、その一部に該当
するサイモシンβ４ＤＮＡとに間する。前者のＤＮＡの
発現により産生されるポリペプチドは、ＩＩ瘍細胞等の
悪性化骨髄細胞を単球細胞に分化誘導する作用を有する
と考えられるので、腫瘍治療剤として１２立つ可能性が
ある、一方、サイモシンβ４は、免疫能を回層させると
報告されている口線ホルモンであるサイモシンの一種で
ある（「現代化学Ｊ１９８５年１２月号３４〜３日頁）
。
ＩＬ立止盃
悪性化骨髄細胞の細胞分化を誘導する因子としては、従
来より、活性型ビタミンＤ３、ジメチルスルホキサイド
、１２−０−テトラデカノイルフォルボール−１３−ア
セテート（以下、ｒＴＰＡＪと略記する）等の非蛋白性
低分子物質が知られている。しかし、悪性化骨髄細胞を
生体外誘導物質の刺激により単球！ｌ１１２！に分化す
る過程で同細胞により産生される物質の詳細は未だ、正
確には判明していない。
来より、活性型ビタミンＤ３、ジメチルスルホキサイド
、１２−０−テトラデカノイルフォルボール−１３−ア
セテート（以下、ｒＴＰＡＪと略記する）等の非蛋白性
低分子物質が知られている。しかし、悪性化骨髄細胞を
生体外誘導物質の刺激により単球！ｌ１１２！に分化す
る過程で同細胞により産生される物質の詳細は未だ、正
確には判明していない。
また、サイモシンをコードするＤＮＡについても未だ何
の報告もなされていない。
の報告もなされていない。
Ｈイ −一
本発明により、次の塩基配列をコードする新規なりＮＡ
が提供される。
が提供される。
ＴＣＧ ＧＴＧ ＧＴＧ ＧＣＣＡＣＴＧＣＧ
ＣＡＧ ＡＣＣＡＧＡ ＣＴＴＣＧＣＴＣＧ
ＴＡＣＴＣＧ ＴＧＣＧＣＣＴＣＧ ＣＴＴ Ｃ
ＧＣＴＴＴＴＣＣＴＣＣＧＣＴ ＡＣＣＡＴＧ ＴＣＴ ＧＡＣＡＡＡ ＣＣＣＧＡＴＡＴＧ Ｇ
ＣＴ ＧＡＧ ＡＴＣＧＡＧＡＡＡ ＴＴＣＧＡ
Ｔ ＡＡＧ ＴＣＧＡＡＡ ＣＴＧ ＡＡＧ
ＡＡＧ ＡＣＡＧＡＧ ＡＣＣＣＡＡ ＧＡＧ
ＡＡＡＡＡＴ ＣＣＡ ＣＴＧ ＣＣＴ
ＴＣＣＡ 、へ Ａ ＧＡＡ ＡＣＧ Ａ
ＴＴ ＧＡＡＣＡＧ ＧＡＧ ＡＡＧ ＣＡ
Ａ ＧＣＡＧＧＣＧＡＡ ＴＣＧ。
ＣＡＧ ＡＣＣＡＧＡ ＣＴＴＣＧＣＴＣＧ
ＴＡＣＴＣＧ ＴＧＣＧＣＣＴＣＧ ＣＴＴ Ｃ
ＧＣＴＴＴＴＣＣＴＣＣＧＣＴ ＡＣＣＡＴＧ ＴＣＴ ＧＡＣＡＡＡ ＣＣＣＧＡＴＡＴＧ Ｇ
ＣＴ ＧＡＧ ＡＴＣＧＡＧＡＡＡ ＴＴＣＧＡ
Ｔ ＡＡＧ ＴＣＧＡＡＡ ＣＴＧ ＡＡＧ
ＡＡＧ ＡＣＡＧＡＧ ＡＣＣＣＡＡ ＧＡＧ
ＡＡＡＡＡＴ ＣＣＡ ＣＴＧ ＣＣＴ
ＴＣＣＡ 、へ Ａ ＧＡＡ ＡＣＧ Ａ
ＴＴ ＧＡＡＣＡＧ ＧＡＧ ＡＡＧ ＣＡ
Ａ ＧＣＡＧＧＣＧＡＡ ＴＣＧ。
この塩基配列は次のアミノ酸配列に対応する。
Ｓ ｅ ｒ−Ｖａ １−Ｖａ ｌ−Ａ ｌ ａ−Ｔｈ
ｒ−Ａｌａ−Ｇｌｎ−Ｔｈｒ−Ａｒｇ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ
−５ｅｒ−Ｔｙｒ−５ｅｒ−Ｃｙｓ−Ａｌａ−Ｓｅｒ−
Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ｐｈｅ−５ｅ ｒ−５ｅ ｒ−Ａ Ｉ
ａ−Ｔ ｈ ｒ−Ｍｅ ｔ−３ｅｒ−Ａｓｐ−Ｌｙｓ
−Ｐｒｏ−Ａｓｐ−Ｍｅ ｔ−Ａ ｌ ａ−Ｇ
Ｉ ｕ−Ｉ ｌ ｅ−Ｇ ｌ ｕ−Ｌｙｓ
−Ｐｈｅ−Ａｓｐ−Ｌｙｓ−Ｓｅｒ−Ｌ、 ｙ ｓ−
Ｌ ｅ ｕ−Ｌ ｙ ｓ−Ｌ ｙ ｓ−Ｔ
ｈ ｒ−Ｇｌｕ−Ｔｈｒ−Ｇｌｎ−Ｇｌｕ−Ｌｙｓ
−Ａ ｓ ｎ−Ｐ ｒ ｏ−Ｌ ｅ ＩＩ
−Ｐ ｒ ｏ−５ｅ ｔ−Ｌｙｓ−Ｇ Ｉ
ｕ−Ｔｈ ｒ−１１ｅ−Ｇ ｌ ｕ−Ｇ Ｉ
ｎ−Ｇ Ｉ ｕ−Ｌ ｙ ｓ−Ｇ ｌ ｎ
−Ａ Ｉ ａ−Ｇ Ｉ ｙ−Ｇ ｌ ｕ−
３ｅ ｒｅまた、上記の塩基配列のうちで、翻訳開始
コドンとしてのＡＴＧ（Ｍｅｔ）に続く次の塩基配列は
、既に知られているサイモシンβ４のアミノ酸配列に対
応する。
ｒ−Ａｌａ−Ｇｌｎ−Ｔｈｒ−Ａｒｇ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ
−５ｅｒ−Ｔｙｒ−５ｅｒ−Ｃｙｓ−Ａｌａ−Ｓｅｒ−
Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ｐｈｅ−５ｅ ｒ−５ｅ ｒ−Ａ Ｉ
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−Ｐｒｏ−Ａｓｐ−Ｍｅ ｔ−Ａ ｌ ａ−Ｇ
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−Ｐｈｅ−Ａｓｐ−Ｌｙｓ−Ｓｅｒ−Ｌ、 ｙ ｓ−
Ｌ ｅ ｕ−Ｌ ｙ ｓ−Ｌ ｙ ｓ−Ｔ
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−Ｐ ｒ ｏ−５ｅ ｔ−Ｌｙｓ−Ｇ Ｉ
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ｎ−Ｇ Ｉ ｕ−Ｌ ｙ ｓ−Ｇ ｌ ｎ
−Ａ Ｉ ａ−Ｇ Ｉ ｙ−Ｇ ｌ ｕ−
３ｅ ｒｅまた、上記の塩基配列のうちで、翻訳開始
コドンとしてのＡＴＧ（Ｍｅｔ）に続く次の塩基配列は
、既に知られているサイモシンβ４のアミノ酸配列に対
応する。
ＡＴＧ ＴＣＴ ＧＡＣＡＡＡ ＣＣＣＧＡＴ
ＡＴＧ ＧＣＴ ＧＡＧ ＡＴＣＧＡＧ ＡＡ
Ａ ＴＴＣＧＡＴ ＡＡＧＴＣＧ ＡＡＡ Ｃ
ＴＧ ＡＡＧ ＡＡＧＡＣＡ ＧＡＧ ＡＣＣ
ＣＡＡ ＧＡＧＡＡＡ ＡＡＴ ＣＣＡ ＣＴＧ
ＣＣＴＴＣＣＡＡＡ ＧＡＡ ＡＣＧ ＡＴ
ＴＧＡＡ ＣＡＧ ＧＡＧ ＡＡＧ ＣＡＡＧ
ＣＡ ＧＧＣＧＡＡ ＴＣＧ 」Ｌ肌」Ｌ檀」ｉ 本発明の新規なりＮＡは、悪性化骨髄細胞を生体外分化
誘導物質で刺激して単球細胞に分化する過程て産生され
るｍＲＮＡと相補的である。
ＡＴＧ ＧＣＴ ＧＡＧ ＡＴＣＧＡＧ ＡＡ
Ａ ＴＴＣＧＡＴ ＡＡＧＴＣＧ ＡＡＡ Ｃ
ＴＧ ＡＡＧ ＡＡＧＡＣＡ ＧＡＧ ＡＣＣ
ＣＡＡ ＧＡＧＡＡＡ ＡＡＴ ＣＣＡ ＣＴＧ
ＣＣＴＴＣＣＡＡＡ ＧＡＡ ＡＣＧ ＡＴ
ＴＧＡＡ ＣＡＧ ＧＡＧ ＡＡＧ ＣＡＡＧ
ＣＡ ＧＧＣＧＡＡ ＴＣＧ 」Ｌ肌」Ｌ檀」ｉ 本発明の新規なりＮＡは、悪性化骨髄細胞を生体外分化
誘導物質で刺激して単球細胞に分化する過程て産生され
るｍＲＮＡと相補的である。
悪性化骨髄細胞としては、白血病細胞、及び、成熟した
又は未成熟の骨髄細胞を人為的に悪性化したもの等が該
当する。白血病細胞は、白血病にかかっている動物の血
液等から通常の方法で得ることができる０例えば、ヒト
前骨髄性白血病＋ａ抱［ＨＬ−６０（ＡＴＣＣＣＣＬ２
４０）：ネイチａｐ （Ｎａｔｕｒｅ） 、ユニ立、３
４７頁、１９７７年）］、ヒト慢性骨髄性白血病纏細胞
Ｋ６６２ニブラッド（Ｂｌｏｏｄ） 、土工、３２１頁
、１９７５年；Ｕ−９３７（ＡＴＣＣＣＲＬ１５９３）
：インド、 ジエイ、 キャンサー（Ｉｎｔ。
又は未成熟の骨髄細胞を人為的に悪性化したもの等が該
当する。白血病細胞は、白血病にかかっている動物の血
液等から通常の方法で得ることができる０例えば、ヒト
前骨髄性白血病＋ａ抱［ＨＬ−６０（ＡＴＣＣＣＣＬ２
４０）：ネイチａｐ （Ｎａｔｕｒｅ） 、ユニ立、３
４７頁、１９７７年）］、ヒト慢性骨髄性白血病纏細胞
Ｋ６６２ニブラッド（Ｂｌｏｏｄ） 、土工、３２１頁
、１９７５年；Ｕ−９３７（ＡＴＣＣＣＲＬ１５９３）
：インド、 ジエイ、 キャンサー（Ｉｎｔ。
Ｊ、 Ｃａｎｃｅｒ） 、上１，５６５頁、１９７６年
］、ヒト急性骨髄性白血病細胞［ＫＧｌ：サイエンス（
Ｓｃｉｅｎｃｅ） 、ユ立立、１１５３頁、１９７８年
；ＭＬ−１，キャンサー レス 、 （（ａｎｃｅｒ
Ｒｅｓ、） ＊土ユ、５１５２頁、１９８３年： Ｃ
ＣＲＦ−ＣＥＭ（ＡＴＣＣＣＣＬ１１９）：キャンサー
（Ｃａｎｃｅｒ） −−Ｌ」−１５５２〜５２９頁、１
９６５年： ＨＰＢ−ＭＬＴ ：イントウ、 ジエイ、
キャンサー（Ｉｎｔ、 Ｊ、 Ｃａｎｃｅｒ） 、
１上、 １６６頁・１９７８年： ＨＰＢ−ＡＬＬ ：
インド、 ジエイ６キャンサー（Ｉｎｔ、 Ｊ、 Ｃａ
ｎｃｅｒ） 、−エ」−１１６６頁、１９７７年： Ｔ
ＡＬＬ ：ネイチャ（Ｎａｔｕｒｅ） ＋ｍ、 ８４３
頁、１９７７年； ＲＰＭ ｒ −８４０２ニジエイ、
ナツル、キャンサー インス） 、 （Ｊ、
Ｎａｔｌ、 Ｃａｎｃｅｒ Ｉｎ５ｔ、）
、 −「Ｌ−」５−１ １１ 頁 、１９７５
年］等がある。
］、ヒト急性骨髄性白血病細胞［ＫＧｌ：サイエンス（
Ｓｃｉｅｎｃｅ） 、ユ立立、１１５３頁、１９７８年
；ＭＬ−１，キャンサー レス 、 （（ａｎｃｅｒ
Ｒｅｓ、） ＊土ユ、５１５２頁、１９８３年： Ｃ
ＣＲＦ−ＣＥＭ（ＡＴＣＣＣＣＬ１１９）：キャンサー
（Ｃａｎｃｅｒ） −−Ｌ」−１５５２〜５２９頁、１
９６５年： ＨＰＢ−ＭＬＴ ：イントウ、 ジエイ、
キャンサー（Ｉｎｔ、 Ｊ、 Ｃａｎｃｅｒ） 、
１上、 １６６頁・１９７８年： ＨＰＢ−ＡＬＬ ：
インド、 ジエイ６キャンサー（Ｉｎｔ、 Ｊ、 Ｃａ
ｎｃｅｒ） 、−エ」−１１６６頁、１９７７年： Ｔ
ＡＬＬ ：ネイチャ（Ｎａｔｕｒｅ） ＋ｍ、 ８４３
頁、１９７７年； ＲＰＭ ｒ −８４０２ニジエイ、
ナツル、キャンサー インス） 、 （Ｊ、
Ｎａｔｌ、 Ｃａｎｃｅｒ Ｉｎ５ｔ、）
、 −「Ｌ−」５−１ １１ 頁 、１９７５
年］等がある。
成熟した又は未成熟の骨髄細胞を人為的に急性化させる
方法も通常の方法でよい［オーストジェイ、イクスビ、
パイオル、メドウ、サイ。
方法も通常の方法でよい［オーストジェイ、イクスビ、
パイオル、メドウ、サイ。
（Ａｕｓｔ、 Ｊ、ＥＸｌｌ、 Ｒｉｏｔ、 Ｍｅｄ、
Ｓｃｉ、） 、エエ、２８７頁、１９６６年）０例え
ば、骨髄細胞をＮ−メチル−Ｎ′−ニトロ−Ｎ−ニトロ
ソグアニジン等の変異原物質に曝す、Ｘ線、紫外線、γ
線等を照射する、或いは、レトロウィルス等で形質転換
する等の方法がある。
Ｓｃｉ、） 、エエ、２８７頁、１９６６年）０例え
ば、骨髄細胞をＮ−メチル−Ｎ′−ニトロ−Ｎ−ニトロ
ソグアニジン等の変異原物質に曝す、Ｘ線、紫外線、γ
線等を照射する、或いは、レトロウィルス等で形質転換
する等の方法がある。
生体外分化誘導物質も既に知られており、悪性化骨髄細
胞と接触するとそれをマクロファージ、顆粒球の単球細
胞に分化誘導する作用を持つ非蛋白性物質である。ヘミ
ン、アクチノマイシンＤ、ヘキサメチレンアクラシノマ
イシンＡ、テレオシジン、マイトマイシンＣ１ブレオマ
イシン、プロピオン酸、酢酸ナトリウム、カダベリン、
ツニカマイシン等が該当する。
胞と接触するとそれをマクロファージ、顆粒球の単球細
胞に分化誘導する作用を持つ非蛋白性物質である。ヘミ
ン、アクチノマイシンＤ、ヘキサメチレンアクラシノマ
イシンＡ、テレオシジン、マイトマイシンＣ１ブレオマ
イシン、プロピオン酸、酢酸ナトリウム、カダベリン、
ツニカマイシン等が該当する。
分化誘導された細胞からｍＲＮＡを得る方法も既に知ら
れている通常の方法でよい［ジエイ。
れている通常の方法でよい［ジエイ。
バイオケム、 （Ｊ、 Ｂｉｏｃｈｅｍ、 ） 、立
上、１９０１頁、１９７７年）、すなわち、生体外分化
誘導物質で分化誘導した悪性化骨髄細胞と、同物質で刺
激していない悪性化骨髄細胞とを得、それぞれからｍＲ
ＮＡ［刺激膿胞から得たｍ ＲＮ ＡをＩｎｄ（＋）Ｒ
ＮＡ、未刺激ｗｓ＠から得たｍ ＲＮ Ａを１ｎｄ （
−）ＲＮＡとする］を得る。それぞれのｍＲＮＡから、
逆転写酵素等を使って単鎖ｃＤＮＡ ［Ｉｎｄ （＋）
ＲＮＡから得たｃ Ｄ Ｎ、ＡをＩｎｄ （＋）ＤＮＡ
％Ｉｎｄ （−）ＲＮＡから得たｃＤＮＡをＩｎｄ （
−）ＤＮＡとする］、所望により二本鎖ｃＤＮＡを得た
後、 Ｉｎｄ （＋）ＲＮＡとＩｎｄ （−）ＤＮＡとを、又
、Ｉｎｄ （＋）ＲＮＡとｒｎｄ （＋）ＤＮＡとをそ
れぞれ接触させて、Ｉｎｄ （−）ＲＮＡとはハイブリ
ダイズせず、Ｔｎｄ （＋）ＲＮＡのみとハイブリダイ
ズするｃＤＮＡ画分をＩｎｄ（＋）ＤＮＡから分別する
。このｃＤＮＡ画分を、必要により二本鎖ｃＤＮＡとす
る。得られたｃＤＮＡ画分には、前記したアミノ酸配列
をコードするｃＤＮＡが含まれている。或いは、Ｉｎｄ
（＋）ＤＮＡ及び、所望により更にＩｎｄ（−）ＤＮＡ
をそれぞれ、例えば、大腸菌内で増殖し得るベクターに
常法で挿入後、大腸菌ｍｍ内でそれぞれのＤＮＡを増殖
させる。
上、１９０１頁、１９７７年）、すなわち、生体外分化
誘導物質で分化誘導した悪性化骨髄細胞と、同物質で刺
激していない悪性化骨髄細胞とを得、それぞれからｍＲ
ＮＡ［刺激膿胞から得たｍ ＲＮ ＡをＩｎｄ（＋）Ｒ
ＮＡ、未刺激ｗｓ＠から得たｍ ＲＮ Ａを１ｎｄ （
−）ＲＮＡとする］を得る。それぞれのｍＲＮＡから、
逆転写酵素等を使って単鎖ｃＤＮＡ ［Ｉｎｄ （＋）
ＲＮＡから得たｃ Ｄ Ｎ、ＡをＩｎｄ （＋）ＤＮＡ
％Ｉｎｄ （−）ＲＮＡから得たｃＤＮＡをＩｎｄ （
−）ＤＮＡとする］、所望により二本鎖ｃＤＮＡを得た
後、 Ｉｎｄ （＋）ＲＮＡとＩｎｄ （−）ＤＮＡとを、又
、Ｉｎｄ （＋）ＲＮＡとｒｎｄ （＋）ＤＮＡとをそ
れぞれ接触させて、Ｉｎｄ （−）ＲＮＡとはハイブリ
ダイズせず、Ｔｎｄ （＋）ＲＮＡのみとハイブリダイ
ズするｃＤＮＡ画分をＩｎｄ（＋）ＤＮＡから分別する
。このｃＤＮＡ画分を、必要により二本鎖ｃＤＮＡとす
る。得られたｃＤＮＡ画分には、前記したアミノ酸配列
をコードするｃＤＮＡが含まれている。或いは、Ｉｎｄ
（＋）ＤＮＡ及び、所望により更にＩｎｄ（−）ＤＮＡ
をそれぞれ、例えば、大腸菌内で増殖し得るベクターに
常法で挿入後、大腸菌ｍｍ内でそれぞれのＤＮＡを増殖
させる。
Ｉｎｄ （＋）ＤＮＡを有する大腸菌のうちで、Ｉｎｄ
（−）ＤＮＡとはハイブリダイズせず、Ｉ ｎ ｄ
（＋） ＤＮＡとのみハイブリダイズする株を選別する
。得られた株は前記アミノ酸配列をコードするｃＤＮＡ
を有する。或いは、Ｉｎｄ（＋）ＲＮＡを適宜分画し、
蛋白に翻訳させ、各分画について、ＲＮＡの産物の活性
の有無を調べろことによりｍＲＮＡを一旦濃縮し、１縮
されたｍＲＮＡを用いてｃＤＮＡを調製しても、前記ア
ミノ酸配列をコードするｃＤＮＡを得ろことができる。
（−）ＤＮＡとはハイブリダイズせず、Ｉ ｎ ｄ
（＋） ＤＮＡとのみハイブリダイズする株を選別する
。得られた株は前記アミノ酸配列をコードするｃＤＮＡ
を有する。或いは、Ｉｎｄ（＋）ＲＮＡを適宜分画し、
蛋白に翻訳させ、各分画について、ＲＮＡの産物の活性
の有無を調べろことによりｍＲＮＡを一旦濃縮し、１縮
されたｍＲＮＡを用いてｃＤＮＡを調製しても、前記ア
ミノ酸配列をコードするｃＤＮＡを得ろことができる。
このｃＤＮＡＩｔｔ！！！つてプラスミドｐＨＨＬＴ−
３を調製し、Ｐｓｔｌで処理する。得られた約５３０ｂ
ｐのＤＮＡ断片を回収し、ついて、制限＠ＭＨｉ ｎ
ｆ Ｉ ’ｔ’ｇ＆理して、約２２０ｂｐのＰｓｔｌ／
Ｈｉｎｆｌ断片と約３ｔｏｂｐのＨｉｎｆＩ／Ｐｓｔｌ
断片とを回収する。前者のＰｓｔｌ／Ｈｉｎｆｌ断片を
制限酵素Ｍｎｆｆ１ｌ（米国ニューイングランドバイラ
ボス社製）で切断して約１３０ｂｐのＭｎｆｆ１ｌ／Ｈ
ｉｎｆＩ断片を導、これをさきほどのＨｉｎｆｌ／Ｐｓ
ｔｌ断片と連結すると、サイモシンβ４の塩基配列を・
コードするＭｎｔｌ／Ｐｓｔｌ断片が得られろ。
３を調製し、Ｐｓｔｌで処理する。得られた約５３０ｂ
ｐのＤＮＡ断片を回収し、ついて、制限＠ＭＨｉ ｎ
ｆ Ｉ ’ｔ’ｇ＆理して、約２２０ｂｐのＰｓｔｌ／
Ｈｉｎｆｌ断片と約３ｔｏｂｐのＨｉｎｆＩ／Ｐｓｔｌ
断片とを回収する。前者のＰｓｔｌ／Ｈｉｎｆｌ断片を
制限酵素Ｍｎｆｆ１ｌ（米国ニューイングランドバイラ
ボス社製）で切断して約１３０ｂｐのＭｎｆｆ１ｌ／Ｈ
ｉｎｆＩ断片を導、これをさきほどのＨｉｎｆｌ／Ｐｓ
ｔｌ断片と連結すると、サイモシンβ４の塩基配列を・
コードするＭｎｔｌ／Ｐｓｔｌ断片が得られろ。
悪性化骨髄細胞を培養して、目的のｍＲＮＡを産生せし
めるには通常の培地を用い、通常の方法で培養すればよ
い、用いられる培地としては、ローズウェル・パーク・
メモリアルφインスティテユー ト ｌ ６４０ 培地
（Ｒｏｓｅｗｅｌｌ Ｐａｒｋ Ｍｅｍｏｒｉａ
ｌＩｎｓｔｉｔｕｔｅ １６４０ ： 以下ｒＲＰ
ＭＩ−１６４０Ｊと略記する）が好適であるが、他にダ
ルベツコ改良イーグル培地（Ｄｕｌｂｅｃｃｏｓ Ｍｏ
ｄｉｆｉｅｄ Ｅａｇｌｅ Ｍｅｄｉｕｗ） 、イーグ
ル基礎培地（Ｅａｇｌｅ’ｓ Ｍｉｎｉｍｕｎ＋Ｅｓ５
ｅｎｔｉａｌ Ｍｅｄｕｉｓ＋） 、クリック培地（Ｃ
ｌｉｃｋ Ｍｅｄ−ｉｕｍ ）など既知の細胞増殖培地
でもよい、これらの培地には、胎児ウシ血清（以下ｒＦ
Ｂｓ」と略記する。）や新生児ウシ血清、ウマ血清を添
加して用いるのが望ましい。
めるには通常の培地を用い、通常の方法で培養すればよ
い、用いられる培地としては、ローズウェル・パーク・
メモリアルφインスティテユー ト ｌ ６４０ 培地
（Ｒｏｓｅｗｅｌｌ Ｐａｒｋ Ｍｅｍｏｒｉａ
ｌＩｎｓｔｉｔｕｔｅ １６４０ ： 以下ｒＲＰ
ＭＩ−１６４０Ｊと略記する）が好適であるが、他にダ
ルベツコ改良イーグル培地（Ｄｕｌｂｅｃｃｏｓ Ｍｏ
ｄｉｆｉｅｄ Ｅａｇｌｅ Ｍｅｄｉｕｗ） 、イーグ
ル基礎培地（Ｅａｇｌｅ’ｓ Ｍｉｎｉｍｕｎ＋Ｅｓ５
ｅｎｔｉａｌ Ｍｅｄｕｉｓ＋） 、クリック培地（Ｃ
ｌｉｃｋ Ｍｅｄ−ｉｕｍ ）など既知の細胞増殖培地
でもよい、これらの培地には、胎児ウシ血清（以下ｒＦ
Ｂｓ」と略記する。）や新生児ウシ血清、ウマ血清を添
加して用いるのが望ましい。
悪性化骨髄細胞の培養は通常、１〜５Ｘ１０６個／ ｍ
ｅの細胞密度で３５〜３８℃にて４〜６％炭酸ガス気
流中で行なう、悪性化骨髄細胞を上記培地で増殖させ全
細胞数を、望ましくは、１×１０’個にした後、ＴＰＡ
等の生体外分化誘導物質と３０分、１時間、４時間、１
２２時間及び２４時間接触させて、分化誘導を開始させ
る。このような！Ｉ胞をｍ ＲＮ Ａ抽出用細胞とする
。
ｅの細胞密度で３５〜３８℃にて４〜６％炭酸ガス気
流中で行なう、悪性化骨髄細胞を上記培地で増殖させ全
細胞数を、望ましくは、１×１０’個にした後、ＴＰＡ
等の生体外分化誘導物質と３０分、１時間、４時間、１
２２時間及び２４時間接触させて、分化誘導を開始させ
る。このような！Ｉ胞をｍ ＲＮ Ａ抽出用細胞とする
。
得られたＤＮＡを用いて所望のポリペプチドを得るには
、このＤＮＡ＠適当なベクターＤＮＡに発現されろよう
組み込み、得られた組換えＤ’ＮＡを用いて、動物細胞
、酵母、枯草菌、大Ｉｌｌ菌等の微生物等の宿主を形質
転換し、発現を誘導する。
、このＤＮＡ＠適当なベクターＤＮＡに発現されろよう
組み込み、得られた組換えＤ’ＮＡを用いて、動物細胞
、酵母、枯草菌、大Ｉｌｌ菌等の微生物等の宿主を形質
転換し、発現を誘導する。
本発明のＤＮＡを、ベクターＤＮＡに発現可能なように
絹み込むには、よく知られているように、プロモーター
配列（通常オペレータ配列の下流に存在している）とそ
の下流にシャイン・ダルガルノ配列（以下、ｒＳＤ配列
」と略記する）を有するベクターＤＮＡのＳＤ配列の下
流に本発明のＤＮＡを組み込むか、ベクターＤＮＡに本
発明のＤＮＡを組み込んだ後に、その上流にブロモーダ
配列（通常オペレータ配列も）及びＳＤ配列を挿入すれ
ばよい、紐換えＤＮＡ技術により外来遺伝子の遺伝情報
を微生物細胞内で発現せしめろ方法は、「遺伝子組換え
実用化技術（４）Ｊ （１９８３年）（サイエンスフォ
ーラムン土）、「モレキュラー クローニング（Ｍｏｌ
ｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ）Ｊ （１９８２年）［
ゴールド スプリング ハーバ−ラボラトリ−（Ｃｏｌ
ｄＳｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂ）Ｊ、「絹換え
遺伝子の細胞への導入と発現Ｊ （１９８３年）（共立
出版株式会社）、等に一般的に記載されている。
絹み込むには、よく知られているように、プロモーター
配列（通常オペレータ配列の下流に存在している）とそ
の下流にシャイン・ダルガルノ配列（以下、ｒＳＤ配列
」と略記する）を有するベクターＤＮＡのＳＤ配列の下
流に本発明のＤＮＡを組み込むか、ベクターＤＮＡに本
発明のＤＮＡを組み込んだ後に、その上流にブロモーダ
配列（通常オペレータ配列も）及びＳＤ配列を挿入すれ
ばよい、紐換えＤＮＡ技術により外来遺伝子の遺伝情報
を微生物細胞内で発現せしめろ方法は、「遺伝子組換え
実用化技術（４）Ｊ （１９８３年）（サイエンスフォ
ーラムン土）、「モレキュラー クローニング（Ｍｏｌ
ｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ）Ｊ （１９８２年）［
ゴールド スプリング ハーバ−ラボラトリ−（Ｃｏｌ
ｄＳｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂ）Ｊ、「絹換え
遺伝子の細胞への導入と発現Ｊ （１９８３年）（共立
出版株式会社）、等に一般的に記載されている。
大腸菌を宿主として用いた場合の例を実施例に示す。
又、酵母を宿主として用いろ時は、以下のようにするこ
とができる。
とができる。
アルコール脱水素酵素（ＡＤＨＩ）のプロモーターを挿
入したプラスミドベクターｐＭＡ５６［ネイチャー（Ｎ
ａｔｕｒｅＬＬＬＪＬ、３４７〜３５０頁（１９８２年
）］は、プロモーター下流にＥｃｏＲ１部位を有してい
るため、本発明のＤＮＡを、ｐＭＡ５６のＡＤＨＩプロ
モーター下流のＥｃｏＲ１部位にＥｃｏＲＩ／ＢａｍＨ
Ｉリンカ−１Ｐｓｔｌ／ＥｃｏＲＩリンカ−を用いて挿
入すればＡＤＨＩプロモーターの支配になり、酵母で発
現可能となる。
入したプラスミドベクターｐＭＡ５６［ネイチャー（Ｎ
ａｔｕｒｅＬＬＬＪＬ、３４７〜３５０頁（１９８２年
）］は、プロモーター下流にＥｃｏＲ１部位を有してい
るため、本発明のＤＮＡを、ｐＭＡ５６のＡＤＨＩプロ
モーター下流のＥｃｏＲ１部位にＥｃｏＲＩ／ＢａｍＨ
Ｉリンカ−１Ｐｓｔｌ／ＥｃｏＲＩリンカ−を用いて挿
入すればＡＤＨＩプロモーターの支配になり、酵母で発
現可能となる。
又、抑制酸性フォスファターゼ（ＰＨ０５）ブモーター
を有するｐＡＭ８２［ブロシーデイングオン ナショナ
ル アカデミ−サイエンスオン ニーニスニー（Ｐｒｏ
ｃｉ Ｎａｔｌ、 Ａｃａｄ、 Ｓｃｉ。
を有するｐＡＭ８２［ブロシーデイングオン ナショナ
ル アカデミ−サイエンスオン ニーニスニー（Ｐｒｏ
ｃｉ Ｎａｔｌ、 Ａｃａｄ、 Ｓｃｉ。
Ｕ 、 Ｓ 、 Ａ 、 ）ｕ 、 １〜５頁（１９
８３年）］は、ＰＨ０５プロモーター下流にＸｈｏ ｆ
部位を有するため、本発明のＤＮＡをｐＡＭ８２のｐＨ
０５プロモーター下流のＸｈｏ １部位にＢ ａ ｍ
ＨＩ ／ Ｘ ｈ ｏ １リンカ−１Ｐｓ ｔ Ｔ／Ｘ
ｈｏ Ｉリンカ−を用いて挿入すればＰＨ０５プロモー
ターの支配になり酵母で発現可能となる。
８３年）］は、ＰＨ０５プロモーター下流にＸｈｏ ｆ
部位を有するため、本発明のＤＮＡをｐＡＭ８２のｐＨ
０５プロモーター下流のＸｈｏ １部位にＢ ａ ｍ
ＨＩ ／ Ｘ ｈ ｏ １リンカ−１Ｐｓ ｔ Ｔ／Ｘ
ｈｏ Ｉリンカ−を用いて挿入すればＰＨ０５プロモー
ターの支配になり酵母で発現可能となる。
又、枯草菌を宿主として用いても、以下のようにして本
発明のＤＮＡの遺伝情報を発現させることかでざる。
発明のＤＮＡの遺伝情報を発現させることかでざる。
バルチス サブチリス マーバース（［１Ｂ（ｉｌｌｕ
ｓｓｕｂｔｉｌｉｓ Ｍａｒｂｕｒｓ）株の有するα−
アミラーゼププローター有するｐＴＵＢ２ａ５ Ｃジー
ン（Ｇｅｎｅ）、１土、１４Ｂ頁（１９８５年）は、プ
ロモーター及びシグナルペプチドの下流にＨｉｎｃ［１
部位を有しているため、例えば、本発明のＤＮＡをｐＴ
Ｕ８２８５のＨ４ｎｃ１１部にシグナルペプチドのアミ
ノ酸フレームと合うようなＨ４ｎｃＴＩ／ＢａｍＨＩリ
ンカ−１Ｈｊｎｃ Ｔ Ｉ／Ｐｓ ｔ Ｉリンカ−を用
いて挿入してやればα−アミラーゼプロモーター支配を
うけ枯草菌でも発現可能となる。
ｓｓｕｂｔｉｌｉｓ Ｍａｒｂｕｒｓ）株の有するα−
アミラーゼププローター有するｐＴＵＢ２ａ５ Ｃジー
ン（Ｇｅｎｅ）、１土、１４Ｂ頁（１９８５年）は、プ
ロモーター及びシグナルペプチドの下流にＨｉｎｃ［１
部位を有しているため、例えば、本発明のＤＮＡをｐＴ
Ｕ８２８５のＨ４ｎｃ１１部にシグナルペプチドのアミ
ノ酸フレームと合うようなＨ４ｎｃＴＩ／ＢａｍＨＩリ
ンカ−１Ｈｊｎｃ Ｔ Ｉ／Ｐｓ ｔ Ｉリンカ−を用
いて挿入してやればα−アミラーゼプロモーター支配を
うけ枯草菌でも発現可能となる。
形質転損された宿主細胞が生産したポリペプチドは、以
下のようにして分離、精製できる。
下のようにして分離、精製できる。
宿主ｍ胞を遠心分離などによって集め、超音波あるいは
リゾチームなどの処理方法を用いて細胞を破砕する。こ
のとき低張液を用いるが、ＳＤＳなどの界面活性剤や塩
酸グアニジンなどの蛋白変性剤を共存させたほうがよい
結果が得られる場合もある。細胞破砕液は遠心分離にけ
し上清液をえる。
リゾチームなどの処理方法を用いて細胞を破砕する。こ
のとき低張液を用いるが、ＳＤＳなどの界面活性剤や塩
酸グアニジンなどの蛋白変性剤を共存させたほうがよい
結果が得られる場合もある。細胞破砕液は遠心分離にけ
し上清液をえる。
このようにして得られる目的のポリペプチドを含む破砕
上清液を通常の蛋白質の精製法に準じて精製する。即ち
、塩基性陰イオン交換体によるイオン交換クロマトグラ
フィー、塩析法、透析法、ゲル濾過法、疎水クロマトグ
ラフィー、高速分子篩りａマドグラフィー、電気泳動法
等を順次又は適宜絹み合わせることによって精製される
。
上清液を通常の蛋白質の精製法に準じて精製する。即ち
、塩基性陰イオン交換体によるイオン交換クロマトグラ
フィー、塩析法、透析法、ゲル濾過法、疎水クロマトグ
ラフィー、高速分子篩りａマドグラフィー、電気泳動法
等を順次又は適宜絹み合わせることによって精製される
。
陰イオン交換クロマトグラフィーを行なう前に、前処理
として限外濾過膜て低分子物Ｎを除去することが望まし
く精製効果を上げることが出来る。
として限外濾過膜て低分子物Ｎを除去することが望まし
く精製効果を上げることが出来る。
陰イオン交換クロマトグラフィーで得られた溶液は透析
後、濃縮してゲル濾過に付す、ゲル濾適用坦体としては
セファデックスＧ−７５、Ｇ−１００（ファルマシア社
製）、セファクリル（Ｓｅｐｈａｃｒｙｌ） Ｓ −２
００（ファルマシア社製）、バイオゲル（ＢｉｏＨｅｌ
） Ｐ −１００（バイオラッド辻１１）及びトーヨー
パールＨＷ−５０、ＨＷ −５５（東洋曹達工業社製）
等が使用される。ゲル濾過に使用する緩Ｆ＃Ｉ液はｐＨ
６，０〜９．０のトリス−ＨＣｔまたはリン酸緩衝液で
あり、吸着を防ぐ目的で０．２〜０．５ＭのＮａＣｆｆ
１等の塩類を添加して使用することが望ましい。
後、濃縮してゲル濾過に付す、ゲル濾適用坦体としては
セファデックスＧ−７５、Ｇ−１００（ファルマシア社
製）、セファクリル（Ｓｅｐｈａｃｒｙｌ） Ｓ −２
００（ファルマシア社製）、バイオゲル（ＢｉｏＨｅｌ
） Ｐ −１００（バイオラッド辻１１）及びトーヨー
パールＨＷ−５０、ＨＷ −５５（東洋曹達工業社製）
等が使用される。ゲル濾過に使用する緩Ｆ＃Ｉ液はｐＨ
６，０〜９．０のトリス−ＨＣｔまたはリン酸緩衝液で
あり、吸着を防ぐ目的で０．２〜０．５ＭのＮａＣｆｆ
１等の塩類を添加して使用することが望ましい。
又、陰イオン交換クロマトグラフィーで得られたポリペ
プチド活性溶液は疎水クロマトグラフィーで精製するこ
ともてきる。この場合にはブチルート−ヨーパール６５
０（東洋曹達工業社製）等を坦体とし、硫安、ＮａＣ１
等の塩類を用いて目的のポリペプチドを溶出せしめる。
プチド活性溶液は疎水クロマトグラフィーで精製するこ
ともてきる。この場合にはブチルート−ヨーパール６５
０（東洋曹達工業社製）等を坦体とし、硫安、ＮａＣ１
等の塩類を用いて目的のポリペプチドを溶出せしめる。
ゲル濾過あるいは疎水クロマトグラフィーで精製したポ
リペプチド含有液は、次いでモノ（Ｍｏｎｏ）Ｑ Ｈ
Ｒ５１５カラム（ファルマシア社１１）、高性能陰イオ
ン交換体カラム）を使用するファルマシアＦ Ｐ Ｌ
Ｃ（Ｆａｓｔ Ｐｒｏｔｅｉｎ、 Ｐｅｐｔｉｄｅ。
リペプチド含有液は、次いでモノ（Ｍｏｎｏ）Ｑ Ｈ
Ｒ５１５カラム（ファルマシア社１１）、高性能陰イオ
ン交換体カラム）を使用するファルマシアＦ Ｐ Ｌ
Ｃ（Ｆａｓｔ Ｐｒｏｔｅｉｎ、 Ｐｅｐｔｉｄｅ。
Ｐｏ１ｙｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ、 Ｌｉｑｕｉｄ Ｃｈ
ｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ）システムによる高性能陰イ
オン交換体クロマトグラフィーに付し、精！！標品な得
る。
ｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ）システムによる高性能陰イ
オン交換体クロマトグラフィーに付し、精！！標品な得
る。
この高性能陰イオン交換体クロマトグラフィーの条件は
陰イオン交換クロマトグラフィーの場合と同じである。
陰イオン交換クロマトグラフィーの場合と同じである。
以下、本発明を実施例により更に詳細に説明する。
実施例
（り悪性化骨髄細胞であるヒト前骨髄性白血病細胞（Ｈ
Ｌ−８０）をＩ Ｘ １０’個／ ｍ ｔの！Ｉ＠濃度
で１０％牛脂児血清を有するＲＰＭ Ｉ −１６４０培
地２０００ｍｆｆ１ （複数）に懸濁し、ファルコン社
製回転培養瓶に入れ、細胞数がＩ Ｘ １０９個以上に
なるまで３７℃で培養をつづけた。ついで、遠心操作に
より細胞［１ｎｄ（−）Ｓ胞と称する］を集めた。別途
、ＨＬ−６０を上記と同様な方法により細胞数がＩ Ｘ
１０Ｑ個以上になるまで培養し、ついで培地にＴＰＡ
を最終濃度！５μｇ ／ ｍ ｔになるように添加して
、更に４Ｂ！間培養を行なった。得られた細胞をＩｎｄ
（＋）細胞と称する。
Ｌ−８０）をＩ Ｘ １０’個／ ｍ ｔの！Ｉ＠濃度
で１０％牛脂児血清を有するＲＰＭ Ｉ −１６４０培
地２０００ｍｆｆ１ （複数）に懸濁し、ファルコン社
製回転培養瓶に入れ、細胞数がＩ Ｘ １０９個以上に
なるまで３７℃で培養をつづけた。ついで、遠心操作に
より細胞［１ｎｄ（−）Ｓ胞と称する］を集めた。別途
、ＨＬ−６０を上記と同様な方法により細胞数がＩ Ｘ
１０Ｑ個以上になるまで培養し、ついで培地にＴＰＡ
を最終濃度！５μｇ ／ ｍ ｔになるように添加して
、更に４Ｂ！間培養を行なった。得られた細胞をＩｎｄ
（＋）細胞と称する。
（２）このようにして得られたＩｎｄ（＋）細胞及びＩ
ｎｄ（−）細胞（各々約Ｉ Ｘ １０９ｍ胞）をそれぞ
れＰＢＳ溶液２００ｍｆｆ１に懸濁し、細胞を遠心によ
って２度洗浄してから、ヌクレアーゼ阻害剤であるＳＤ
Ｓ （０，２５％）、ジエチルビロカーボネー） （０
，５％）、ポリビニル硫酸（２０ｕ ｇ ／ ｍ ｔ
）を含むＲＮＡ抽出用Ｊ ＩＩ ｉｈ ｊａ［５０ｍＭ
のトリス−ＨＣｆｆｌ （ｐＨ８，３）、１０ｍＭのＭ
ｇ Ｓ Ｏａ、１００ ｍＭのＮａＣ１゜２０ｍＭの
ＥＤＴＡ、３５ｕｇ／ｍｌのスペルミジン１５０ｍ！に
懸濁した。ついで懸ｉ１ｉ夜にＮＰ−４０を０．５％に
なるように添加し、テブロンホモジナイザーを用い、１
０ストロークにて細胞を破壊した。その後、１０，００
０Ｘｇて１分間の遠心を行ない、上清を得た。上清に３
０ｍＮのトリス−ＨＣｌ （ｐＨ８，５） 、２０ｍＭ
のＥＤＴＡ及び０．２５％のＳＤＳで飽和したフェノー
ル／クロロホルム（１： １）を上清と等ｆｌ添加し、
１０分間激しく攪拌した後、３，０００Ｘｇで１０分間
の遠心分離を行ない上清を得た。この操作を３回行ない
、最後に、上清にクロロホルム、イソアミルアルコール
７毘合液（２４：１）を加えて遠心を１デない上清を得
た。
ｎｄ（−）細胞（各々約Ｉ Ｘ １０９ｍ胞）をそれぞ
れＰＢＳ溶液２００ｍｆｆ１に懸濁し、細胞を遠心によ
って２度洗浄してから、ヌクレアーゼ阻害剤であるＳＤ
Ｓ （０，２５％）、ジエチルビロカーボネー） （０
，５％）、ポリビニル硫酸（２０ｕ ｇ ／ ｍ ｔ
）を含むＲＮＡ抽出用Ｊ ＩＩ ｉｈ ｊａ［５０ｍＭ
のトリス−ＨＣｆｆｌ （ｐＨ８，３）、１０ｍＭのＭ
ｇ Ｓ Ｏａ、１００ ｍＭのＮａＣ１゜２０ｍＭの
ＥＤＴＡ、３５ｕｇ／ｍｌのスペルミジン１５０ｍ！に
懸濁した。ついで懸ｉ１ｉ夜にＮＰ−４０を０．５％に
なるように添加し、テブロンホモジナイザーを用い、１
０ストロークにて細胞を破壊した。その後、１０，００
０Ｘｇて１分間の遠心を行ない、上清を得た。上清に３
０ｍＮのトリス−ＨＣｌ （ｐＨ８，５） 、２０ｍＭ
のＥＤＴＡ及び０．２５％のＳＤＳで飽和したフェノー
ル／クロロホルム（１： １）を上清と等ｆｌ添加し、
１０分間激しく攪拌した後、３，０００Ｘｇで１０分間
の遠心分離を行ない上清を得た。この操作を３回行ない
、最後に、上清にクロロホルム、イソアミルアルコール
７毘合液（２４：１）を加えて遠心を１デない上清を得
た。
この上清に２５倍容のエタノールを加えてＲＮＡを沈澱
させた。沈澱物を分離し、滅菌水１５ｍＬを添加して、
ＲＮＡｌ３液を得た。ＲＮＡ溶液によりｍ ＲＮ Ａ画
分を分離するために、ポリ（Ｕ）セファロースを用いて
、カラムクロマトグラフィーを行った。吸着は５０ｍＭ
）リス−ＨＣ１（ｐＨ７，５）（０，１ＭのＮａＣ１，
０，１ｍＭのＥＤＴＡ、及び０．５％のＳＤＳを含む）
溶ｉαにＲＮＡを溶解して行ない、溶出はホルムアミド
で行なった。溶出されたｍ ＲＮ Ａ画分は、それぞれ
１ ｏｏａｇ位であった。Ｉｎｄ（＋）＠胞により得ら
れたｍＲＮＡをＩｎｄ （＋）ＲＮＡ。
させた。沈澱物を分離し、滅菌水１５ｍＬを添加して、
ＲＮＡｌ３液を得た。ＲＮＡ溶液によりｍ ＲＮ Ａ画
分を分離するために、ポリ（Ｕ）セファロースを用いて
、カラムクロマトグラフィーを行った。吸着は５０ｍＭ
）リス−ＨＣ１（ｐＨ７，５）（０，１ＭのＮａＣ１，
０，１ｍＭのＥＤＴＡ、及び０．５％のＳＤＳを含む）
溶ｉαにＲＮＡを溶解して行ない、溶出はホルムアミド
で行なった。溶出されたｍ ＲＮ Ａ画分は、それぞれ
１ ｏｏａｇ位であった。Ｉｎｄ（＋）＠胞により得ら
れたｍＲＮＡをＩｎｄ （＋）ＲＮＡ。
Ｉｎｄ（−）細胞より得られたｍ ＲＮ ＡをＩｎｄ（
−）ＲＮＡと称する。
−）ＲＮＡと称する。
（３）各Ｓ’μｇのＩｎｄ （＋）ＲＮＡ、Ｉｎｄ（−
）ＲＮＡより、それぞれ以下のようにしてｃＤＮＡｔｔ
ｌｌ製した。
）ＲＮＡより、それぞれ以下のようにしてｃＤＮＡｔｔ
ｌｌ製した。
５０ｍＭ）リスーＨＣＬ緩衝液（ｐＨ７，５）、３０ｍ
ＭのＮａＣｌ！＋６ｍＭのＭｇＣｌ２゜５ｍＭのジチオ
スレイトール（ＤＴＴ）、各０．５ｍＭのｄＡＴＰ、ｄ
ＧＴＰ、ｄＣＴＰ、ｄＴＴＰ （ｄＣＴＰは３ａｐラベ
ルしたものを含む）、０．７５μｇのオリゴ（ｄＴ）＋
。、２μｇのｍＲＮＡ及び１５単位のＡＮＶ逆転写酵素
［ジエイ、ダブリュ、ビアド（Ｊ、 Ｗ、Ｂｅａｒｄ）
社ｍｌ］を混ぜ、４２℃に９０分間保った０反応液から
ｍ ＲＮＡを除くために、反応液にＮａＯＨ溶液を加え
て、０．３Ｎ ＮａＯＨとし、室温に１５時間置き、
次いで溶液を中和して、セファデックスＧ−５０カラム
に通した、これにより約ＩＪｊｇの単鎖ｃＤＮＡを得た
。得られた単鎖ｃ ＤＮＡのうちＩｎｄ（−）ＲＮＡよ
り得たものをＩｎｄ（−）ＤＮＡとする。 Ｅ ｎ
ｄ （＋） ＲＮＡより得たものは、ＤＮＡポリメラー
ゼ１等を用いて二本鎖ｃＤＮＡとし、これをＩｎｄ （
＋）ＤＮＡとした。
ＭのＮａＣｌ！＋６ｍＭのＭｇＣｌ２゜５ｍＭのジチオ
スレイトール（ＤＴＴ）、各０．５ｍＭのｄＡＴＰ、ｄ
ＧＴＰ、ｄＣＴＰ、ｄＴＴＰ （ｄＣＴＰは３ａｐラベ
ルしたものを含む）、０．７５μｇのオリゴ（ｄＴ）＋
。、２μｇのｍＲＮＡ及び１５単位のＡＮＶ逆転写酵素
［ジエイ、ダブリュ、ビアド（Ｊ、 Ｗ、Ｂｅａｒｄ）
社ｍｌ］を混ぜ、４２℃に９０分間保った０反応液から
ｍ ＲＮＡを除くために、反応液にＮａＯＨ溶液を加え
て、０．３Ｎ ＮａＯＨとし、室温に１５時間置き、
次いで溶液を中和して、セファデックスＧ−５０カラム
に通した、これにより約ＩＪｊｇの単鎖ｃＤＮＡを得た
。得られた単鎖ｃ ＤＮＡのうちＩｎｄ（−）ＲＮＡよ
り得たものをＩｎｄ（−）ＤＮＡとする。 Ｅ ｎ
ｄ （＋） ＲＮＡより得たものは、ＤＮＡポリメラー
ゼ１等を用いて二本鎖ｃＤＮＡとし、これをＩｎｄ （
＋）ＤＮＡとした。
そして、末端転移酵素で約２０個のｄＣ鎖を付加したＩ
ｎ ｄ （＋） ＤＮＡと、ＰｓｔＩ処理した後、約
２０１１１のｄＧ鎖を付加したｐＢＲ３２２とをアニー
リングさせた後、通常の方法で大ＩＩ菌へ導入した。得
られた形質転換株５．０００個をニトロセルロース上で
生育させた後、Ｉｎｄ（＋）ＤＮＡ、［ｎｄ （−）Ｄ
ＮＡをプローブとしてコロニーハイブリダイゼーション
を行なった。
ｎ ｄ （＋） ＤＮＡと、ＰｓｔＩ処理した後、約
２０１１１のｄＧ鎖を付加したｐＢＲ３２２とをアニー
リングさせた後、通常の方法で大ＩＩ菌へ導入した。得
られた形質転換株５．０００個をニトロセルロース上で
生育させた後、Ｉｎｄ（＋）ＤＮＡ、［ｎｄ （−）Ｄ
ＮＡをプローブとしてコロニーハイブリダイゼーション
を行なった。
Ｉｎｄ （）ＤＮＡにはハイブリダイズせず゛、Ｉｎｄ
（＋）ＤＮＡにのみハイブリダイズするコロニーを分
離し、１７７個のコロニーを得た。更に、これら１７７
個のコロニーからプラスミドＤＮ、へをアルカリ−５Ｄ
Ｓ法で分離した後、Ｉｎｄ（＋）ＤＮＡ、Ｉｎｄ （−
）ＤＮＡを用いてサザンハイプリダイゼーションを行い
、Ｉｎｄ（＋）ＤＮＡのみにハイブリダイズするプラス
ミドを選択した。このプラスミド（ｐ）ＩＨＬＴ−１と
称する）は前記アミノ酸配列をコードするｃＤＮＡを有
する。このプラスミドを有する大ＩＩＩ菌ＬＥ３９２は
、微生物工業技術研究所にＦＥＲＭ−Ｐ７６３４として
寄託されている− ｐＨＨＬＴ−１が前記アミノ酸をコ
ードするｃＤＮＡを有することは、次のようにして再確
認した。
（＋）ＤＮＡにのみハイブリダイズするコロニーを分
離し、１７７個のコロニーを得た。更に、これら１７７
個のコロニーからプラスミドＤＮ、へをアルカリ−５Ｄ
Ｓ法で分離した後、Ｉｎｄ（＋）ＤＮＡ、Ｉｎｄ （−
）ＤＮＡを用いてサザンハイプリダイゼーションを行い
、Ｉｎｄ（＋）ＤＮＡのみにハイブリダイズするプラス
ミドを選択した。このプラスミド（ｐ）ＩＨＬＴ−１と
称する）は前記アミノ酸配列をコードするｃＤＮＡを有
する。このプラスミドを有する大ＩＩＩ菌ＬＥ３９２は
、微生物工業技術研究所にＦＥＲＭ−Ｐ７６３４として
寄託されている− ｐＨＨＬＴ−１が前記アミノ酸をコ
ードするｃＤＮＡを有することは、次のようにして再確
認した。
ＨＬ−６０を（１）に示す方法で培養した。細胞数がＩ
Ｘ １０’になったとき、ＴＰＡを１５１１ｇ／ ｍ
Ｌになるように添加し、培養を更につづけ、ＴＰＡ添
加後、１時間［１−１ｎｄ（＋）細胞］、１２時間［１
２−１ｎｄ （＋）細胞］、２４時間［２４−１ｎ ｄ
（＋）細胞］にそれぞれ細胞を集めた。１−１ｎｄ
（＋）ＩＩ胞、１２−１ｎｄ （＋）細胞、２４−１ｎ
ｄ （＋）細胞より（２）に示す方法によりｍＲＮＡを
分離した６分離されたｍＲＮＡ ［１−１ｎ、ｄ （＋
）ＲＮＡ、１２−１ｎｄ （＋）ＲＮＡ、２４−１ ｎ
ｄ （＋）ＲＮＡＩとｐＨＨＬＴ−ＩＤＮＡとをハイブ
リダイズさせた。 ｐｔｉＨＬＴ−ＩＤＮＡと１−１ｎ
ｄ （＋）ＲＮＡとは全然ハイブリダイズせず、１２−
１ ｎｄ （＋） ＲＮＡ、２４−１ｎｄ （＋）ＲＮ
Ａとは同程度にハイブリダイズした。
Ｘ １０’になったとき、ＴＰＡを１５１１ｇ／ ｍ
Ｌになるように添加し、培養を更につづけ、ＴＰＡ添
加後、１時間［１−１ｎｄ（＋）細胞］、１２時間［１
２−１ｎｄ （＋）細胞］、２４時間［２４−１ｎ ｄ
（＋）細胞］にそれぞれ細胞を集めた。１−１ｎｄ
（＋）ＩＩ胞、１２−１ｎｄ （＋）細胞、２４−１ｎ
ｄ （＋）細胞より（２）に示す方法によりｍＲＮＡを
分離した６分離されたｍＲＮＡ ［１−１ｎ、ｄ （＋
）ＲＮＡ、１２−１ｎｄ （＋）ＲＮＡ、２４−１ ｎ
ｄ （＋）ＲＮＡＩとｐＨＨＬＴ−ＩＤＮＡとをハイブ
リダイズさせた。 ｐｔｉＨＬＴ−ＩＤＮＡと１−１ｎ
ｄ （＋）ＲＮＡとは全然ハイブリダイズせず、１２−
１ ｎｄ （＋） ＲＮＡ、２４−１ｎｄ （＋）ＲＮ
Ａとは同程度にハイブリダイズした。
（４）ｐＨＨＬＴ−１をＰｓｔｌを用いて切断し、５％
アクリルアミドゲル電気泳動により約１８０ｂｐの大き
さに相当するＤＮＡ断片を得た。このＤＮＡ切断を３２
ｐにてラベルした後、（１）、 （２）及び（３）の記
載の方法で得たＩｎｄ （＋）ＤＮＡライブラリーとハ
イブリダイズさせ、約５５０ｂｐのＤＮＡ断片（ｐＨＨ
Ｔ−２）を得た。
アクリルアミドゲル電気泳動により約１８０ｂｐの大き
さに相当するＤＮＡ断片を得た。このＤＮＡ切断を３２
ｐにてラベルした後、（１）、 （２）及び（３）の記
載の方法で得たＩｎｄ （＋）ＤＮＡライブラリーとハ
イブリダイズさせ、約５５０ｂｐのＤＮＡ断片（ｐＨＨ
Ｔ−２）を得た。
このＤＮＡ切断は、（１）及び（２）の方法で得た４−
Ｉ ｎ ｄ （＋）ｍＲＮＡ中の、４．３ｋｂ及び７０
０ｂｐのｍＲＮＡのみにハイブリダイズした。
Ｉ ｎ ｄ （＋）ｍＲＮＡ中の、４．３ｋｂ及び７０
０ｂｐのｍＲＮＡのみにハイブリダイズした。
ｐＨＨＬＴ−１をＰｓｔｒを用いて切断し、上記と同様
にしてｐＨＨＬＴ−３を得た。このプラスミドはＦＥＲ
Ｍ−Ｐ４Ｏ１０として微生物工業技術研究所に寄託され
ている。
にしてｐＨＨＬＴ−３を得た。このプラスミドはＦＥＲ
Ｍ−Ｐ４Ｏ１０として微生物工業技術研究所に寄託され
ている。
Ｍａｙａｍ−Ｇｉ Ｉｂｅｒ を法で決定した、ｐＨＨ
ＬＴ−３のＰｓｔ１部位へ挿入されたＤＮＡの塩基配列
のうち、ｐｏｌｙｄＧ及びｄＣの配列を除いた部分の配
列を、添付図面に示す、この部分配列のうちの更に一部
である、次の塩基配列をコードするＤＮＡの発現により
産生されるポリペプチドは、ｌ！瘍！Ｉ胞等の悪性化骨
髄細胞を単球細胞に分化誘導する作用を有すると考えら
れる。
ＬＴ−３のＰｓｔ１部位へ挿入されたＤＮＡの塩基配列
のうち、ｐｏｌｙｄＧ及びｄＣの配列を除いた部分の配
列を、添付図面に示す、この部分配列のうちの更に一部
である、次の塩基配列をコードするＤＮＡの発現により
産生されるポリペプチドは、ｌ！瘍！Ｉ胞等の悪性化骨
髄細胞を単球細胞に分化誘導する作用を有すると考えら
れる。
ＴＣＧ ＧＴＧ ＧＴＧ ＧＣＣＡＣＴＧＣＧ
ＣＡＧ ＡＣＣＡＧＡ ＣＴＴＣＧＣＴＣＧ
ＴＡＣＴＣＧ ＴＧＣＧＣＣＴＣＧ ＣＴＴ Ｃ
ＧＣＴＴＴＴＣＣＴＣＣＧＣＴ ＡＣＣＡＴＧ ＴＣＴ ＧＡＣＡＡＡ ＣＣＣＧＡＴＡＴＧ Ｇ
ＣＴ 、ＧＡＧ ＡＴＣＧＡＧＡＡＡ ＴＴＣＧＡ
Ｔ ＡＡＧ ＴＣＧＡＡＡ ＣＴＧ ＡＡＧ
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ＡＣＡＧ ＧＡＧ ＡＡＧ ＣＡＡ ＧＣＡＧ
ＧＣＧＡＡ ＴＣＧ。
（５）ついで、このｐＨＨＬＴ−３をＰｓｔｌで処理し
、約５３０ｂｐのＤＮＡ断片を回収した。ついで、制限
酵！ｆｅＨｉｎｆｌで処理して、約２２０ｂｐのＰｓｔ
ｌ／Ｈｉｎｆｌ断片と約３１０ｂｐのＨｉｎｆｌ／Ｐｓ
ｔｌ断片とを回収した。前者のＰｓ ｔ Ｉ／Ｈｉｎｆ
Ｉ断片を制限酵素Ｍｎｆｆ１ｌで切断して約１３０ｂ
ｐのＭｎｌ！Ｉ／ＨｉｎｆＩ断片を得、これをさきほと
のＨｉｎｆｌ／Ｐｓｔ■断片と連結して、サイモシンβ
４の塩基配列をコードするＭｎｆｆ１ｌ／Ｐｓｔｌ断片
をえた。
、約５３０ｂｐのＤＮＡ断片を回収した。ついで、制限
酵！ｆｅＨｉｎｆｌで処理して、約２２０ｂｐのＰｓｔ
ｌ／Ｈｉｎｆｌ断片と約３１０ｂｐのＨｉｎｆｌ／Ｐｓ
ｔｌ断片とを回収した。前者のＰｓ ｔ Ｉ／Ｈｉｎｆ
Ｉ断片を制限酵素Ｍｎｆｆ１ｌで切断して約１３０ｂ
ｐのＭｎｌ！Ｉ／ＨｉｎｆＩ断片を得、これをさきほと
のＨｉｎｆｌ／Ｐｓｔ■断片と連結して、サイモシンβ
４の塩基配列をコードするＭｎｆｆ１ｌ／Ｐｓｔｌ断片
をえた。
ＢａｍＨＩリンカ−で処理し、ついで制限酵素ＢａｍＨ
Ｉで切断して、４４０ｂｐのＢａｍＨＩ／Ｐｓｔｌ断片
を得た。
Ｉで切断して、４４０ｂｐのＢａｍＨＩ／Ｐｓｔｌ断片
を得た。
この断片を、プラスミドベクターｐＵｃ５４０（）７ツ
マシフ社より市販されているプラスミドベクターｐＵｃ
ｅのＥｃｏＲＩ／ＢａｍＨ１部位に、同じく同社より市
販されているｔａｃプロモーターを有するプラスミドｐ
ＤＲ５４０のＥｃｏｌ／ＢａｍＨＴ断片をクローニング
したものである）のＢａｍＨＩ／Ｐｓｔｌ断片（３，１
ｋｂ）に挿入してｐＵｃ５４０ＴＨβ、（３，５ｋｂ）
を得た。プラスミドｐＵｃ５４０ＴＨβ４はＳＤ配列の
下に制限酵素Ｂ ａ ｍ ＨＩ部位を有している。従っ
て、このＢａｍＨ１部位に外来遺伝子を挿入すると、イ
ソプロピルβ−ローチオガラクトピラノシド（以下ＩＰ
ＴＧと記す）の添加によってのみ、その外来遺伝子の発
現が可能となる。
マシフ社より市販されているプラスミドベクターｐＵｃ
ｅのＥｃｏＲＩ／ＢａｍＨ１部位に、同じく同社より市
販されているｔａｃプロモーターを有するプラスミドｐ
ＤＲ５４０のＥｃｏｌ／ＢａｍＨＴ断片をクローニング
したものである）のＢａｍＨＩ／Ｐｓｔｌ断片（３，１
ｋｂ）に挿入してｐＵｃ５４０ＴＨβ、（３，５ｋｂ）
を得た。プラスミドｐＵｃ５４０ＴＨβ４はＳＤ配列の
下に制限酵素Ｂ ａ ｍ ＨＩ部位を有している。従っ
て、このＢａｍＨ１部位に外来遺伝子を挿入すると、イ
ソプロピルβ−ローチオガラクトピラノシド（以下ＩＰ
ＴＧと記す）の添加によってのみ、その外来遺伝子の発
現が可能となる。
そこで上述のプラスミドを有する大腸菌Ｊ Ｍ２Ｏ３を
アンピリジン５０μｇ／ｍｌを含む１×ＹＴ培地くバク
トドリブトン ０．８％、バクトイ−ストエクストラク
ト ０．５％、 ＮａＣｆｆ１０．５％）で３７℃で前
培養した後、アンピリジン５０ ｕ ｇ／ｍ Ｌを含む
Ｉ ＸＹＴ培地１００ ｍ ｌを含む５００ｍ！坂ロフ
ラスコに１％植菌し、同様に３７℃で培養し、０Ｄ６６
゜＝０．３に達した時にＩＰＴＧをＩｋ終濃度２ｍＭに
なるように添加し、更に培養を続けた。このようにして
得られた大腸菌を遠心分離機によって集め、Ｉ ＸＰＢ
Ｓ（ＮａＣ２０，８％、ＫＣｉ Ｏ，０２”。
アンピリジン５０μｇ／ｍｌを含む１×ＹＴ培地くバク
トドリブトン ０．８％、バクトイ−ストエクストラク
ト ０．５％、 ＮａＣｆｆ１０．５％）で３７℃で前
培養した後、アンピリジン５０ ｕ ｇ／ｍ Ｌを含む
Ｉ ＸＹＴ培地１００ ｍ ｌを含む５００ｍ！坂ロフ
ラスコに１％植菌し、同様に３７℃で培養し、０Ｄ６６
゜＝０．３に達した時にＩＰＴＧをＩｋ終濃度２ｍＭに
なるように添加し、更に培養を続けた。このようにして
得られた大腸菌を遠心分離機によって集め、Ｉ ＸＰＢ
Ｓ（ＮａＣ２０，８％、ＫＣｉ Ｏ，０２”。
ＫＨａ Ｐｏ−０，０２％、Ｎａ２ ＨＰＯ４０゜１１
５％）でｆｃ淳後、再び１０ｍＬの１×ＰＢＳに懸濁し
、超音波で大ＩＩ菌を破砕した。その一部を用いて、サ
イモシンβ、の分子量約５０００ （ＳＤＳ−ポリアク
リルアミドゲル電気泳動による）に該当する分子量をも
つ蛋白質の存在を確認した。
５％）でｆｃ淳後、再び１０ｍＬの１×ＰＢＳに懸濁し
、超音波で大ＩＩ菌を破砕した。その一部を用いて、サ
イモシンβ、の分子量約５０００ （ＳＤＳ−ポリアク
リルアミドゲル電気泳動による）に該当する分子量をも
つ蛋白質の存在を確認した。
１１立豆１
本発明により、悪性化骨髄細胞が生体外分化誘導物質の
刺激により単球！Ｉ＠に分化する過程で産生されるｍＲ
ＮＡに相補性ある新規なり Ｎ Ａと、その一部に該当
する新規なサイモシンβ、ＤＮＡとが提供される。前者
のＤＮＡの発現により産生きれるポリペプチドは、腫瘍
細胞等の悪性化骨髄細胞を単球細胞に分化誘導する作用
を有すると考えられるので、腫瘍治療剤として役立つ可
能性がある。一方、後者のＤＮＡは、免疫能を目張させ
ると報告されている胸腺ホルモンであるサイモシンの一
種であるサイモシンβ４を発現するＤＮＡである。
刺激により単球！Ｉ＠に分化する過程で産生されるｍＲ
ＮＡに相補性ある新規なり Ｎ Ａと、その一部に該当
する新規なサイモシンβ、ＤＮＡとが提供される。前者
のＤＮＡの発現により産生きれるポリペプチドは、腫瘍
細胞等の悪性化骨髄細胞を単球細胞に分化誘導する作用
を有すると考えられるので、腫瘍治療剤として役立つ可
能性がある。一方、後者のＤＮＡは、免疫能を目張させ
ると報告されている胸腺ホルモンであるサイモシンの一
種であるサイモシンβ４を発現するＤＮＡである。
図面は、ｐＨＨＬＴ−３のＰｓｔ１部位へ挿入されたＤ
ＮＡの塩基配列のうち、ｐｏｌｙｄＧ及びｄＣの配列を
除いた部分の配列を示す。 ＴＣＧ ＧＴＧ ＧＴＧ ＧＣＣＡＣＴＣ
ＧＣＴＣＧ ＴＡＣＴＣＧ ＴＧＣＴＣＣＴＣ
ＣＧＣＴ ＡＣＣＡＴＧＡＴＧ ＧＣＴ
ＧＡＧ ＡＴＣＧＡＧＡＡＡ ＣＴＧ Ａ
ＡＧ ＡＡＧ ＡＣＡＡＡＴ ＣＣＡ
ＣＴＧ ＣＣＴ ＴＣＣＣＡＧ ＧＡＧ
ＡＡＧ ＣＡＡ ＧＣＡＧＧＣＧＴＧ
ＣＧＣＣＧＣＣＡＡＣＣＡ ＣＡＡ ＧＣ
Ａ ＴＴＧ ＣＣＴＴＴＴ ＴＡＧ
ＣＴＧ ＴＴＴ ＡＡＣＧＡＧ ＧＴＴ
ＧＧＡ ＴＣＡ ＡＧＴＧＣＣＣＣＴ
ＴＴＣＡＣＡ ＴＣＡＣＧＡ ＡＧＧ
ＣＣＧ ＣＧＣＣＴＧＴＡＴ’ＣＴＡ ＴＣＴ
ＧＧＣＴＧＧＣＴＴ ＧＣＡ ＴＧＴ
ＴＧＧ ＴＧＡＧＧＡ ＡＧＡ ＡＧ
Ｔ ＧＧＧ ＧＴＧＣＴＡ ＧＡＧ
ＴＡＡ ＡＡＣＣＡＡＣＣＴ ＧＣＡ Ｇ
ＧＣＴＧＴ ＡＡＴＴＧＣＣＡＴ ＴＴＴ
ＴＴＴ ＴＴＴＡＡＴ ＴＡＴ ＴＧＧ
ＡＡＴ ＧＣＡＧＣＡ ＡＡＴ Ａ
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ＡＣＣＡＧＡ ＣＴＴＧＣＣＴＣＧ ＣＴＴ
ＣＧＣＴＴＴＴＣＴ ＧＡＣＡＡＡ Ｃ
ＣＣＧＡＴＡＡＡ ＴＴＣＧＡＴ ＡＡＧ
ＴＣＧＧＡＧ ＡＣＣＣＡＡ ＧＡＧ
ＡＡＡＡＡＡ ＧＡＡ ＡＣＧ ＡＴＴ
ＧＡＡＧＧＣＧＡＡ ＴＣＧ ＴＡＡ
ＴＧＡＴＡＴ ＧＣＡ ＣＴＧ ＴＡＣ
ＡＴＴＴＴＣＴＴＡ ＴＴＴ ＴＡＣＴＴＣＴ
ＴＴ ＧＴＡ ＡＧＡ ＴＧＣＡＡＡＴＴ
Ａ ＡＡＴ ＧＡＣＴＧＴ ＧＣＴＡＡＧ
ＡＡＣＴＡＣＴＧＡ ＣＡＡＣＣＴ Ｔ
ＴＣＣＣＡ ＴＣＴ ＧＴＣＣＡＧ ＧＧ
Ａ ＡＧＧ ＡＡＡ ＧＡＡＡＧＧ
ＡＡＧ ＡＡＧ ＴＧＧ ＧＧＴＧＧＡ
ＣＧＡ ＣＡＧ ＴＧＡ ＡＡＴＧ
ＣＴ ＧＧＣＣＣＡ ＡＧＧ ＴＧＴＧＣ
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ＴＧＴ ＴＣＡ ＡＡＴ ＧＡＴ Ｔ
ＴＴＣＡＡ ＴＴＴ ＴＴＴ ＴＡＡ
ＴＡＴＡＡＡＡ、ＡＣ
ＮＡの塩基配列のうち、ｐｏｌｙｄＧ及びｄＣの配列を
除いた部分の配列を示す。 ＴＣＧ ＧＴＧ ＧＴＧ ＧＣＣＡＣＴＣ
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ＡＡＴ ＧＣＡＧＣＡ ＡＡＴ Ａ
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ＴＧＴ ＴＣＡ ＡＡＴ ＧＡＴ Ｔ
ＴＴＣＡＡ ＴＴＴ ＴＴＴ ＴＡＡ
ＴＡＴＡＡＡＡ、ＡＣ
Claims (2)
- （１）次の塩基配列をコードするＤＮＡ。 【遺伝子配列があります】
- （２）次のアミノ酸配列をコードするＤＮＡ。 【遺伝子配列があります】
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP3627687A JPS63203697A (ja) | 1987-02-19 | 1987-02-19 | 新規ｄｎａ |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP3627687A JPS63203697A (ja) | 1987-02-19 | 1987-02-19 | 新規ｄｎａ |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS63203697A true JPS63203697A (ja) | 1988-08-23 |
Family
ID=12465253
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP3627687A Pending JPS63203697A (ja) | 1987-02-19 | 1987-02-19 | 新規ｄｎａ |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS63203697A (ja) |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS6045599A (ja) * | 1983-04-07 | 1985-03-12 | ザ ジヨ−ジ ワシントン ユニバ−シテイ | サイモシンβ４の免疫定量法 |
-
1987
- 1987-02-19 JP JP3627687A patent/JPS63203697A/ja active Pending
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS6045599A (ja) * | 1983-04-07 | 1985-03-12 | ザ ジヨ−ジ ワシントン ユニバ−シテイ | サイモシンβ４の免疫定量法 |
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