JPS6054680A - 新規な熱安定性グルコアミラ−ゼおよびその製造法 - Google Patents

新規な熱安定性グルコアミラ−ゼおよびその製造法

Info

Publication number
JPS6054680A
JPS6054680A JP59164348A JP16434884A JPS6054680A JP S6054680 A JPS6054680 A JP S6054680A JP 59164348 A JP59164348 A JP 59164348A JP 16434884 A JP16434884 A JP 16434884A JP S6054680 A JPS6054680 A JP S6054680A
Authority
JP
Japan
Prior art keywords
glucoamylase
enzyme
maltodextrin
atcc
clostridium
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
JP59164348A
Other languages
English (en)
Inventor
デニス・エム・カトコシン
ナンシー・エス・ウアード
シヨーシヨン・エング
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Unilever Bestfoods North America
Original Assignee
Unilever Bestfoods North America
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Unilever Bestfoods North America filed Critical Unilever Bestfoods North America
Publication of JPS6054680A publication Critical patent/JPS6054680A/ja
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/90—Isomerases (5.)
    • C12N9/92—Glucose isomerase (5.3.1.5; 5.3.1.9; 5.3.1.18)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/14—Hydrolases (3)
    • C12N9/24—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2)
    • C12N9/2402—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2) hydrolysing O- and S- glycosyl compounds (3.2.1)
    • C12N9/2405—Glucanases
    • C12N9/2408—Glucanases acting on alpha -1,4-glucosidic bonds
    • C12N9/2411—Amylases
    • C12N9/2428—Glucan 1,4-alpha-glucosidase (3.2.1.3), i.e. glucoamylase
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
    • Y10S435/8215—Microorganisms
    • Y10S435/822—Microorganisms using bacteria or actinomycetales
    • Y10S435/842—Clostridium

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Enzymes And Modification Thereof (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は澱粉の加水分解に対し有用な新規なグルコアミ
ラーゼ、およ−び嫌気性醗酵でのクロストリジウム（Ｃ
ｌｏｓｔｒｔｄｉｕｍ）の種（ｓｐｅｃｉｅｓ）の微生
物による該グルコアミラーゼの製造法に関する。
大量ノグルコース含有シラツブがコーンスターチの酵素
的加水分解により製造されている。
これは一般に２段階で実施される。第１段階では、澱粉
は６と７の間のｐＨでα−アミラーゼ酵素での処理で液
化される。ついで、この液化された澱粉は４と４．５の
間のｐＨで作用するグルコアミラーゼ酵素により糖化さ
れる。現在、澱粉の糖化に対し用いられる市販されて手
に入れることのできるグルコアミラーゼ酵素はリゾプス
（Ｒｈ　ｉ　ｚｏｐｕｓ）属およびアスペルギルス（Ａ
ｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ’）属の微生物から誘導されてい
る。これらのグルコアミラーゼは、特にｐＨ５以Ｅの溶
液中では熱安定性を示さ々い。
現在用いられているグルコアミラーゼは好気性微生物、
す々わち生長に酸素を要求する微生物により生産される
。嫌気性微生物により生産されるグルコアミラーゼにつ
込ての報告は＃丘んの少１．シか々い。Ｈｏｃｋｅｎｈ
ｕｌｌ他［１３ｉｏｃｈｅｍ、　Ｊ、　８９．１０２−
１０６（１９４５）〕は、嫌気性菌であるクロス）　＋
１ジウム・アセトブチＩＩクム（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕ
ｍ　ａｃｅｔｏｂｕｔｙｌｉｃｕｍ）がグルコアミラー
ゼを生産することを見す出した。
この酵素は４．５で最適ＴＩＨを示しだ。後に、Ｅｎｓ
ｌｅｙ他［Ｊ、　Ｇｅｎ、　Ａｐｐｌ、　Ｍｉｃｒｏｂ
ｉｏｌ、、　２１．５ｌ−５９（１９７５））は、この
酵素の製造について研究し、そして培地にゲルコールを
存在させることによってこの酵素が誘導されることを見
す出しだ。
同じ反応混合物において、同時に液化工程と糖化工程を
実施することにより澱粉を加水分解することが望しいこ
とである。このことは、もしも６と７の間のｐＨ値で液
化澱粉を糖化するグルコアミラーゼを手に入れることが
できれば、α−アミラーゼが活性である場合に達成され
ることができる。さらに、反応速度が十分に速くて有用
である温度で糖化反応が行なわれることを可能にするた
めには、グルコアミラーゼはこのｐＨにおいて十分に熱
安定性でなければならない。
本発明者等は、嫌気性醗酵により生産される、Ｅ記要求
に応するグルコアミラーゼを発見したのである。
本発明によればクロストリジウム８ｐ。
（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ　ｓｐ、）ＡＴＣＣＮｏ、　
３９２５１　、　ＡＴＣＣＮｏ、　８９２５２、その変
異株、またはグルコアミラーゼ酵素の製造を暗号づける
遺伝情報をＬ記りロストリジウムｓｐ、微生物よりとね
込む微生物からなる群より選ばれる微生物から誘導され
たグルコアミラーゼ酵素が提供される。
また、本発明によれば、クロストリジウムＳｐ。
ＡＴＣＣＮｏ、　８９２５１、ＡＴＣＣＮｏ、　８９２
５２、その変異株、捷たはグルコアミラーゼ酵素の製造
を暗号づける遺伝情報を上記クロストリジウムＳｐ、微
生物よりとり込む微生物から々る群より微生物を選び、
この選んだ微生物の細胞を栄養培地に培養し、コノ培地
からグルコアミラーゼ酵素を分離することよりなるグル
コアミラーゼの製造法が提供される。
さらに、本発明によれば、マルトデキスリンをグルコー
スに加水分解する方法が提供される。
この方法はマルトデキストリンの水性溶液を、本発明の
グルコアミラーゼ酵素で、３．５〜７．０のｐＨにおい
て、マルトデキス）　＋１ンを加水分解してグルコース
にするのに十分な時間処理することよねなる。
本発明のグルコアミラーゼは、ジョーシア大学のＬａｒ
ｓ　Ｇ、　Ｌｊｕｎｇｄａｈｌ博士およびその協同研究
者等によめアイスランドのＨｖｅｒａｇｅｒｄｉの泥温
泉から分離されたクロストリジウムの２つの新うシー菌
株により生産される。これらの菌株はダラム陽性で、胞
子を形成し、耐熱性で嫌気性の細菌である。Ｌｊｕｎｇ
ｄａｈｌ博士は、これらの菌株に対し、クロストリジウ
ム拳す−モアミロリテイクム（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ
　ｔｈｅｒｍｏａｍｙｌｏｌｙｔｉｃｕｍ）という名を
与えた。
そしてこれらの菌株は、クロストリジウムｓｐ。
ＡＴＣＣＮｏ、　８９２５１　、およびＡＴＣＣＮｏ、
　８９２５２としてアメリカン・タイプーカルチュア・
コレクション（Ａｍｅｒｉｃａｎ　Ｔｙｐｅ　Ｃｕ１ｔ
ｕｒｅ　Ｃｏ１１ｅｃｔｉｏｎ）から一般に自由に手に
入れることができる。
本発明のグルコアミラーゼの製造に対し用いられる微生
物は、炭水化物源として可溶性澱粉またはマルトデキス
トリン、酵母エキス、これに加えてビタミン溶液および
ミネラル溶液を含有する培地中で嫌気性条件下に培養さ
れる。醗酵は一般に約ｐＨ６と７の間で行々ゎれる。こ
れらの微生物−よね生産されるグルコアミラーゼはα−
アミラーゼと一緒に醗酵培地中に見い出される。このこ
とは、とのグルコアミラーゼが細胞外酵素であることを
示す。
醗酵プロスから細胞を除去し、ついで塩化カルシウムで
異物質を沈澱させることによりグルコ了ばラーゼは精製
された。α−アミラーゼとグルコアミラーゼの混合物は
、複合体を形成する粒状澱粉へのα−アミラーゼの吸着
により分離された。和製のグルコアミラーゼのさらにＮ
製は、硫酸アンモニウムでの沈澱、続いていくつかのク
ロマトグラフィ〜による分離により行なわれた。このＭ
製された酵素は、ナトリウムドデシルサルフエー）　（
ＳＤＳ）ボリアクルリアミドゲル電気泳動によね測定す
ると、約７５０００の分子量をもった。
以下のグルコアミラーゼ酵素の製造および性質の記載に
おいて、すべて部および％は、特に指示しない限り１重
量部および重量％である。
ゲルコアミラー・ゼの検定 検定に対１−で用いられる基質はマルトデキストリン〔
アイオワ州Ｍｕｓｃａｔｉｎｅのグレイン・プロセスイ
ング・カンバニイ（Ｇｒａｉｎ　ｐｒｏｃｅａｓｉｎｇ
　Ｃｏｍｐａｎｙ）より手に入れることができるマルト
リフ　（Ｍａｌｔｒｉｎ）−１００１であ。００．１ｍ
ｌの酵素溶液が０．６ｍｌの５％マルトデキストリン溶
液、０．１ｍｌの５００ｍＭ酢酸ナトリウム溶液（ｐＨ
５’）に混合され、そして水を加えて全容量が１ｍｌに
された。この混合物は６０℃に３０分間保温された後、
混合物を沸騰している水浴中Ｋ１０〜２０分間浸漬する
ことにより反応が終了された。つぎに、グルコースがグ
ルコース分析器〔オハイオ州Ｙｅｌｌｏｗ　Ｓｐｒｉｎ
ｇｓのイエロｍ−スフ１１ングス・インストラメント・
カンパニイ（Ｙｅｌｌｏｗ　Ｓｐｒｉｎｇｓ　Ｉｎｓｔ
ｒｕｍｅｎｔ　Ｃｏｍｐａｎｙ））を使用するグルコー
ス−オキシダーゼ法により測定された。１グルコアミラ
一ゼ単位は検定条件下で１時間に１ｇのグルコースを生
産するに要する酵素の量と定義される。
α−アミラーゼの検定 分析されるべき溶液は０．００２５Ｍの塩化カルシウム
溶液で希釈してｍｌｌあたね約０．２５単位の活性最終
濃度にする。適当に希釈した酵素溶液の１ｍｌを、０．
０８Ｍの酢酸緩衝液（ｐＨ６，０）および０．０３Ｍの
塩化カルシウムを含有する１％可溶性澱粉溶液１０ｍ１
に添加する。６０℃で１０分間反応を実施する。反応溶
液１ｍｅを、０．０２Ｎの塩酸５０ｒｎｌを入れた１０
０ｍｄの目盛りつきフラスコに注入し、これに０．０５
％沃素溶液３ｍ１）を添加した後、水を加えて全容量を
１００ｍｄにする。発色する青色を６２０　ｎｍにおけ
る吸収で測定する。１分間に１０ｍｇ／澱粉を分解する
に要する酵素の量が１単位と定義される。
ＩＪｏ　１ＩＪｘｌυ 上記の式にｔ−いて、 Ｄｏ一対照溶液（酵素溶液の代りに水が添加される）の
吸収 Ｄｓ−反応溶液の吸収 グルコアミラーゼの製造 細胞外グルコアミラーゼ酵素調製物はクロスト１１ジウ
ムｓｐ、’　ＡＴＣＣＮｏ、　８９２５１およびＡＴＣ
Ｃ，Ｎｏ、　８９２５２の２つの菌株から得られた。
培地の調製および試料の培養は、１９６９年ニューヨー
クのアカデミツク・プレス（Ａｃａｄｅｍｉｃ　Ｐｒｅ
ｓｓ）発行、Ｊ、　Ｒ，Ｎｏｒｒｉｓおよびり、　Ｗ、
　Ｒｉｂｂｏｎｓ編、［微生物学における方法（Ｍｅｔ
ｈｏｄｓ　ｉｎ　Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ）ＪＶｏｌ
、　８Ｂ、　ｐ、　１１７〜１３２のＨｕｎｇａｔｅ、
　Ｒ，Ｅ、による「絶対的嫌気性菌の試験管回転培養法
（Ａ　Ｒｏｌｌ　Ｔｕｂｅ　Ｍｅｔｈｏｄ　ｆｏｒ　Ｃ
ｕ１ｔｉｖａｔｉｏｎ　ｏｆ　５ｔｒｉｃｔＡｎａｅｒ
ｏｂｅｓ）Ｊに記載され、またＭｉｌｌｅｒおよびＷｏ
ｌｉｎによりＡｐｐｌ、　Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ、１シ９
８５（１９７４）に記載されたような標準の嫌気性菌の
技術を使用することにｉり実施された。
接種物を製造し、そして微生物の保存培養物を維持する
ために用いられる培地は次の組成をもつものであった。
接種用培地 成分　濃度（ｇ／ｌ） 澱粉（リンドナー）　２０ ＫＨ２ＰＯ４１，５ ＮＨ４Ｃ６Ｏ，５ Ｎａ２ＨＰＯ４・１２Ｈ２０４，２ ＭｇＣ６２０，１８ 酵母エキス　２．０ ビタミン溶液　０．５　ｍｌ／ｌ ミネラル溶液　５０　ｍｌ／ｌ Ｌ／−ｔｊ’スリ／（０，１％）　１　ｍｌ／ｌ還元溶
液　４０　ｎ、ｌ、／１ ビタミン溶液 ビタミン　ｒｎｇ／ｌ ビオチノ　２ 葉酸　２ ピリドキシン・ＨＣｌ　１０ リボフラビン　５ チアミンφＨＣ１５ ニコチン酸　５ パントテン酸　５ ＢＩ２　Ｑ、１ ｐ−アミノ安息香酸　５ チオクト酸　５ 還元溶液 成分　量 Ｎａ０Ｈ（０，２Ｎ）　２００　ｍｇ Ｎａ２Ｓ”　９Ｈ２０２，５ｇ システィンＨＣｅ−■２０　２．５ｇ ミネラル溶液 成分　ｍｇ／　１００ｍ１ ニトリロトリ酢酸　１５００ ＭｇＳＯ４・７Ｈ２０３ｏｏ。
ＭｎＳＯ４’Ｈ２０５０Ｏ ＮａＣ１１００゜ ＦｅＳＯ４・７Ｈ２０１ｏ。
Ｃ０（ＮＯ３）２・６Ｈ２０１ｏ。
ＣａＣｌ２　１００ ＺｎＳＯ４・７Ｈ２０１００ ＫＡｌ（Ｓｏ、１）２　１０ Ｈ３ＢＯ３１Ｏ Ｎａ２ＭｏＯ４”２Ｈ２０’　１Ｏ Ｎａ２ＳｅＯ３１ 生存可能な細胞は接種用培地で室温において無期限に維
持されることができる。酵素の製造に対し微生物を増殖
するためには、殺菌した接種用培地に細胞が接種され、
嫌気性条件下に５６℃でほぼ３０時間培養が行なわれた
。これによね迅速に増殖する細胞が生産され、このもの
は醗酵槽に接種するのに用いられた。接種物の容量は醗
酵槽中の増殖培地の容量の１〜５％であった。
この培地は次の組成をもつものであった。
増殖培地 ｇ／　１００ｍ１ −７．トリｙ　（Ｍａｌｔｒｉｎ）　１００　ａ）１プ
ロフロ（ＰＲＯＦＬＯ）ｂ）　５ ブリメツクス（ｐｒｙｍｅｘ’）”　ｌＭｇＳＯ４・７
Ｈ２００，５ ＣａＣ１２”２Ｈ２００，０６ ＭｎＣ１２・２Ｈ２００，００１ ＫＩｑ２ｐｏ４．　ｏ、ｔａ （ＮＨ４）２ＨＰＯ４１ ａ）アイオワ州のＭｕｓｃａｔｉｎｅのグレイン・プロ
セスイング・カンバニイ（Ｇｒａｉｎ　ｐｒｏｃｅｓｓ
ｉｎｇ　Ｃｏｒｎｐａｎｙ）より手に入れることができ
る１０デキストロース・エクイバＬ７７ト澱粉加水分解
物 ｂ）テキサス州のｌｉ’ｏｒｔ　Ｗｏｒｔｈのトレダー
ス・オイル・ミル・カンパニイ（Ｔｒａｄｅｒｓ　Ｏｉ
ｌ　Ｍｉｌｌ　Ｃｏｍｐａｎｙ）より手に入れることが
できる綿実粉 Ｃ）ライスコンシン州のＭｉ　１ｗａｕｋｅｅの了ムバ
ー壷ラボラトリーズ（Ａｍｂｅｒ　Ｉ、ａｂｏｒａｔｏ
ｒｉｅｓ）より手に入れることができる酵母エキス 培地のｐＨは、出発菌株がＡＴＣＣＮｏ；　８９２５１
のときは６に調整された。このｐＨは、出発菌株がＡＴ
ＣＣＮｏ。
８９２５２のときは７に調整された。酵素の製造はＩＯ
Ａの培地を用いた１４Ｉｌの醗酵槽中で行なわれた。細
胞外グルコアミラーゼの収量は醗酵ブロスのｒｎｅあた
わほぼ０．００４単位であった。
酵素の精製 和製のグルコアミラーゼは次の手順によｈ精製された。
醗酵ブロスは第１にガラスウールを通【７て濾過され、
ゴム様の不溶性物質が除去された。ついでシャープレス
の連続渦巻型遠心分離器モデル７４１−２４／８Ｒ４（
ペンシルバニア州のＰｈ１ｌａｄｅｌｐｈｉａのシャー
プＬ／ス＠コーポｖ−ジョン（ＳｈａｒｐｌｅｓＣｏｒ
ｐ、））で４５ボンド圧力で操作することにより濾液か
ら細胞が除去された。清澄な北澄液に、約１．５％Ｗ／
Ｖの最終濃度になるに十分な塩化カルシウムが添加され
、そして混合物は１０分間攪拌された。かさばった沈澱
物は濾過によね除去され、廃棄された。ついで、清澄な
琥珀色の濾液は、マサチュセツツ州のＤａｎｖｅｒｓの
アミコンロコーポレーション（Ａｎｌｉｃｏｎ　Ｃｏｒ
ｐ、）より手に入れることのできるアミコン中空繊維（
ＨＰ−１０）＃縮機タイプＡＣ２により濃縮された。濃
縮は容量が５００ｍ７と１０００ｒｒ＋Ａ’の間になる
まで行々われ、ついでｐＨを６にするだめに濃厚な水酸
化アンモニウムが添加された。
この水酸化アンモニウムの添加は第２の沈澱を形成させ
、この沈澱物は濾過により除去された。
混成しグいるα−アミラーゼ酵素は、　５０ｍＭの酢酸
す）　Ｉｔウムおよび５ｍＭのＣａ＋＋を含有する酢酸
ナト１１ウム緩衝液（ｐＨ６）で平衡にされた粒状澱粉
と複合体を形成させることにより上記濾液から除去され
た。Ｉｇの澱粉が存在するα−アミラーゼ酵素の３００
単位ごとに使用された。澱粉と酵素溶液の混合物は室温
で６０分間おだやかに攪拌され、ついで固体が真空濾過
により集められた。濾液中のグルコアミラーゼ酵素は、
さらに次の工程によｈ精製されて均一にされた。
１、ｍ、液（９１０ｍ６）に１９０．２ｇの硫酸アンモ
ニウムが添加され、そして混合物は室温で１時間攪拌さ
れた。ついで、ａｏｏｏｏ　ｘ　ｇで２０分間遠心分離
され、固体は廃棄された。この上澄液（１０４０ｍ＃）
に３３１．８ｇの硫酸アンモニウムが添加された。この
混合物は沈澱が完全に生成するまで攪拌され、ついでグ
ルコアミラーゼを含有する固体がａｏｏｏｏ　ｘ　ｇで
２，０分間遠心分離することにより分離された。この固
体を８ＱＯｍｌの酢酸す）　＋１ウム緩衝液（５０ｍＭ
、　ｐＨ５，２）に溶解し、同じ緩衝液の２４部分に対
し３回、７℃で４８時間透析した。
２、透析した琥珀色の酵素溶液はニュジャージー州のＣ
１１ｆｔｏｎのホワットマン・インコーボレーテ７１−
　（Ｗｈａｔｍａｎ　Ｉｎｃ、’）から手に入れること
ができるＤＥＡＥセルロースグレードＤＥ−５２を充填
した２、８Ｘ２０ｃｍカラムを通過させた。このセルロ
ースカラムは先ず酢酸ナトリウム緩衝液（５０ｍＭ。
ｐＨ５，２）で平衡にされた。通過した淡黄色のフラク
ションが採集され、そして精製に用いられた。酵素活性
のほぼ８５％がこのフラクションに回収された。
３、　この酵素溶液は、　１０１００Ｏ０カツトのＹＭ
ＩＯ膜を備えたアミコン限外濾過セル〔アミコン・コー
ポレーシＥ　７　（Ａｍｊｃｏｎ　Ｃａｒｐ）、　Ｄａ
ｎｖｅｒｓ、　マサチューセッツ州〕によね約１０ｍｌ
の容量に濃縮された。この混合物は１００００　Ｘ　ｇ
で１０分間遠心分離することによね清澄にされた。つい
で、この上澄液のＡが。
１００ｍＭのＮａＣｌを含有する５０ｍＭの酢酸ナトリ
ウム緩衝液で予め平衡にされたアクリルアミドアガロー
スゲル、ウルトロゲル（ＴＪｌｔｒｏｇｅｌ）ＡｃＡ５
４［ＬＫＢグロダクター（Ｐｒｏｄｕｃｔｅｒ）ＡＢ、
　Ｂｒｏｍｍａｌスｚ−デン〕（Ｄ　１．６　Ｘ　８５
ｃｍ　カラムの上に装填された。このカラムは同じ緩衝
液で１２ｒｎｌ／時間の流量割合で溶出された。３　ｍ
ｌのフラクションが集められ、そしてグルコアミラーゼ
活性に対するチェックカ行ナワれた。酵素活性を含有す
るフラクションが一緒にされ、上記の上澄液の残部は同
じやり方でウルトロゲル力ラムで分離処理された。
４、−緒にされた、上記ゲル濾過からのグルコアミラー
ゼ試料は酢酸塩緩衝液（５０ｍＭ、　ｐＨ５）の３容量
で希釈され、そしてニューシャーシー州のＣ１１ｆｔｏ
ｎのホワットマンΦインコーポレーテット（Ｗｈａｔｍ
ａｎ’Ｉｎｃ、）から手に入れることができるＣＭ−セ
ルロー、ｘ　、　ＣＭ−５２の２．３　Ｘ　２０ｃｍカ
ラムに吸着された。酵素は黄色バンドを形成してこのカ
ラムの頂上部分に吸着された。このカラムは２００ｍ１
ｌの酢酸塩緩衝液で洗浄され、っｂでこのものはＮａＣ
４の線状勾配（酢酸塩緩衝液中０−０．８ＭのＮａＣ１
）で溶出された。酵素は０．１４ＭのＮａｃｌで溶出サ
レタ。高い酵素活性をもっこのフラクションは一緒にさ
れた。
５、工程４からの酵素調製物は、工程３に記載したよう
にしてアミコンの限外濾過セルを用＝−ｃ３ｍｌｖｃ濃
縮され、ウルトロゲ＃　ＡｃＡ３４　”？’　再クロマ
トグラフィー処理されて８ｍ１Ｊのフラクションが集め
られた。蛋白の溶出が２８０　ｎｍでの吸収により測定
された。４つの蛋白のピークが観察された。グルコアミ
ラーゼ活性に対する分析は、この酵素が第３のピークに
濃縮されていることを示した。
６、工程５からの酵素調製物を含有するフラクションは
、７℃でｌｌの酢酸塩緩衝液に対して透析され、４８時
間中に２回緩衝液が変更された。この透析された試料は
、予め酢酸塩緩衝液でｐＨ４，６に平衡にされたＣ’Ｍ
−セファデックスＡ−５０（ＣＭ−セファデックスはニ
ューシャーシー州のｐ　ｉ　ｓｃａｔａｗａｙのファー
マシア・ファイン・ケミカルズ（Ｐｈａｒｍａｃｉａ　
ｌ；’ｉｎｅ　Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ）から手に入れるこ
とができる〕の１．６　Ｘ　２００ｍカラムでクロマト
グラフィー処理された。このカラムは１００ｍＡ’の酢
酸塩緩衝液で洗浄され、そして酵素は０．５ＭのＮａＣ
ｌを含有する緩衝液２００ｍ１で溶出された。グルコア
ミラーゼは鋭利なピークにお込て溶出された。酵素含有
溶液の蛋白含量は、標準として牛の血清アルブミンを用
いるＬｏｗｒｙ他の方法［Ｊ、　Ｂｉｏｌ。
Ｃｈｅｍ　−＝　工ｈ２６５−２７５（１９５１）〕に
よね測定された。
精製工程の要約は第１表に示すとおりである。
この工程により酵素は３２０倍に精製され、１．６単位
／ｍｇ蛋白の特別な活性をもつ精製試料が得られた。
等電点クロマトグラフィーは、とのグルコアミラーゼは
ｐＨ５，６に等電点をもつことを示した。
第１表 ＡＴＣＣＮｏ、　８９２５１からのグルコアミラーゼの
精製限外濾過　９１０　０．０４９６　０．００７７　
８９．８澱粉親和性　９１０　０．０４５４　０．００
７５　８２．２８５−８０（Ｘ（ＮＨ４）２ＳＯ４８２
５０，１１０００，０２７０７１，２ＤＥ−５２力５　
ム４９０　０．０６２０　０．０８０２　６０．５ウル
トロゲルＡｃＡ３４　１７４　０．１８８０　０．０４
１８　４７．８℃Ｍ−５２カラム８１　０．１６４８　
０．１５５５　２６．６ウルトロゲルＡｃＡ　５４　３
０　０．８１３３　０．７８Ｌ３　１８．７℃Ｍ−−１
＝７アデツクス２４．８　０．２１００　１．６２８　
１０．４酵素の分子量 精製したグルコアミラーゼは、ＳＤＳの存在ニおいても
また不存在におりても、ポリアクリルアミドゲル電気泳
動させたときに単一の蛋白バンドとしての移動により均
一であることが決定された。この酵素の分子量は、Ｌａ
ｅｍｍｌｉ、　Ｎａｔｕｒｅ　２２７６８０−６８５（
１９７０）に記載の方法により５ＤＳ−ポリアクリル了
ミドゲル電気泳動によｈ　７５０００であると測定され
た。これは、アスペルギルス・ニガー（Ａｓｐｅｒｇｉ
ｌｌｕｓ　ｎｉｇｅｒ’）菌から誘導されたグルコアミ
ラゼに対し報告された分子量１０００００（１９７２年
ニューヨークのアカデミツク・プレス（Ａｃａｄｅｒｎ
ｉｃ　ｐｒｅｓｓ）発行、ｙ、Ｇｉｎｓｂｕｒｇ編メン
ヅ・イン・エンチモロジー（Ｍｅｔｈｏｄｓ　ｉｎ　Ｅ
ｎｚｙｍｏｌｏｇｙ）Ｖｏｌ、　２８．　Ｔ）、　９１
１−９１４のＰ、ａｚｕｒ。
Ｊ、　Ｈ，の“グルコアミラーゼの分析“〕およびアス
ペルギルスｅオリゼー（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ　ｏｒ
ｙｚａｅ）からのダルコア々゛ラーゼに対し与えられた
分子量８７０００　（５ａｈａ他。
Ｓ　ｔａｒｃｈ、」ｂ３０７−３１４（１９７９））よ
ねやや小さい。
酵素の熱安定性 精製したグルコアミラーゼの熱安定性が２つの他の知ら
れているグルコアミラーゼの熱安定性と比較された。精
製した酵素は１２μｇ／ｍｌｌの蛋白濃度を与えるため
に酢酸ナトリウム緩衝液（１００ｍＭ、所望のｐＨ）で
希釈された。この酵素溶液は７０℃に保持された。適当
な時間の間隔で（通常５分、１０分、２０分、３０分、
６０分、および１２０分）、小びんは取り出され、直接
秀浴中で冷却された。残存する酵素活性が標準漏示方法
を用いてｐＨ５および６０℃で測定された。酵素の半減
−期が回帰線によね計算された。結果は第■表に示され
るが、この結果は、本発明の酵素が、タラロミセス争デ
ュポンティ（Ｔａｌａｒｏｍｙｃｅｓ　ｄｕｐｏｎｔｉ
）ｂよびアスペルギルス・ニガー（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌ
ｕｓ　ｎｉｇｅｒ’）により生産されるグルコアミラー
ゼよりも７０１：および１）Ｈ５または６においてすぐ
れた安定性をもっことを示す。本発明の酵素はｐＨ６ｂ
よび７ｏ℃で３時間以上の半減期をもつ。
第■表 ７０℃でのグルコアミラーゼの熱安定性本発明のグルコ
アミラーゼ　（５６８２１５（注）ａ）米国特許第４２
４７６３７号ｂ）ニューヨーク州ニューヨーク２　Ｐｅ
ｎｎ　Ｐｌａｚａのザ・エンザイム・デイベロブメント
・コーポレーション（ｔｈｅ　Ｅｎｚｙｍｅ　Ｄｅｖｅ
ｌｏｐｍｅｎｔ　Ｃｏ、ｒｐ、　）から手に入れること
のできる市販の酵素 グルコアミラーゼ酵素活性が、次の組成：クエン酸塩（
ｐＨ８，５）、酢酸塩（ｐＨ４〜６）、耶ＰＥＳ　（ｐ
Ｈ６，５〜７，５）およびトリス−酢酸塩（ｐＨｓ〜８
．５）の１００ｍＭ緩衝液を用いて基質のｐＨが３．５
〜８．５に変えられた以外は、標準の方法によね分析さ
れた。下記に示す種々のｐＨにおける相対活性は、この
酵素がｐＨ５，０において最高活性をもつことを示す。
ｐＨ最高活性の％ ３．５　ｆｌｔ５ ４、ＯＴａ ４．５８７ ５．０　１００ ５．５　９６ ６．０　９８ ６．５　８６ ７．０　７５ ７．５　１０ ８．０５ ８．５２ 酵素に対する最適温度 精製した酵素に関する反応温度の影響が、棟々の温度に
おけるグルコアミラーゼ活性に対する標準の（ｐＨ５”
ｌ検定を行なうことによ！２測定された。このｐＨで、
酵素の作用に対する最適温度は７０〜７５℃であった。
酵素の基質特異性 この酵素はマルトデキストリンおよび可溶性澱粉を加水
分解する。この酵素はまたマル）　−スを加水分解する
が、加水分解の割合はマルトデキストリンの加水分解の
割合の半分より小であった。この酵素はグルコース単位
間に主として１．、６−　結合を含むロイコノストック
・メーセンテａイデス（Ｌ、ｒｎｅｓｅｔｅｒｏｉｄｅ
ｓ）からのデキストランを加水分解しなかった。
ヒ記した試験は、本発明により６と７の間のｐＨ値で澱
粉を加水分解するグルコアミラーゼ酵素が本発明により
提供されることを示す。さらに、このグルコアミラーゼ
はこのｐＨ範囲において十分に熱安定性であわ、反応速
度が十分に速くて有用である温度で澱粉を加水分解する
のに用することを可能にする。
本発明については、その特別な具体例を用いて記載した
が、さらに酵素および澱粉の加水分解の業界の専問家達
にとって明白であるような改良、適用、または変化が可
能であることは理解されるべきである。
代理人　江　崎　光　好 代理人　江　崎　光　史 第１頁の続き ■Ｉｎｔ、ＣＩ、’　識別記号　。
＠発明者　ショージョン・エング 庁内整理番号 アメリカ合衆国、イリノイ州、ダウナーズ・グローブ、
ウィントロツブ・ウェイ、７３００−６

Claims (1)

  1. 【特許請求の範囲】 （１）　５ＤＳ−ポリアクリルアミドゲル電気泳動によ
    り測定したとき約７５０００±３０００の分子量をもち
    、ｐＨ６および７０℃で８時間より大きい半減期をもち
    、約５．０のｐＨで最高グルコアミラーゼ活性をもち、
    ｐＨ５で約７０〜７５℃の温度で最高グルコアミラーゼ
    活性をもつ、クロストリジウム・サーモアミロリティク
    ム（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ　ｔｈｅｒｍｏａｍｙｌｏ
    ｌ兎ｕｍ＋微生物から誘導されたグルコアミラーゼ酵素
    。 （２）　りｏｘトリジウＪＡ　ｓｐ、　（Ｃｌｏａｔｒ
    ｉｄｉｕｍ　ｓｐ、）ＡＴＣＣＮｏ。 ３９２５１　、　ＡＴＣＣＮｏ、　８９２５２、その変
    異株、またはグルコアミラーゼ酵素の製造を暗号づける
    遺伝情報を上記クロストリジウムＳｐ、微生物よりとり
    込む微生物からなる群より選ばれる微生物から誘導され
    たグルコアミラーゼ酵素。 （８）　５ＤＳ−ポリアクリルアミドゲル電気泳動によ
    り測定したとき約７５０００十５ｏｏｎの分子量をもっ
    ことを特徴とする特許請求の範囲第２項記載の酵素。 （４）ｐＨ６および７０℃で３時間よね大きい半減期を
    もつことを特徴とする特許請求の範囲第２項記載の酵素
    。 （５）約５，０のｐＨで最高グルコアミラーゼ活性をも
    つことを特徴とする特許請求の範囲第２項記載の酵素。 （６）　ｐＨ５で約７０〜７５℃の温度で最高グルコア
    ミラーゼ活性を起つことを特徴とする特許請求の範囲第
    ２項記載の酵素。 （７）クロストリジウム・サーモアミロリティクム（Ｃ
    ｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ　ｔｈｅｒｍｏａｍｙｌｏｌｙｔ
    ｉｃｕｍ）の菌株の細胞を栄養培地に培養し、っ−でこ
    の培地からグルコアミラーゼ酵素を分離することよりな
    る、５ＤＳ−ポリアクリルアミドゲル電気泳動により測
    定したとき約７５０００±Ｂｏｏｏの分子量をもち、ｐ
    Ｈ６および７０℃で３時間より大きい半減期をもち、約
    ５．０のｐＨで最高グルコアミラーゼ活性をもち、・Ｔ
    ）Ｈ５で約７０〜７５℃の温度で最高グルコアミラーゼ
    活性をもつグルコアミラーゼ酵素の製造法。 （８）　りｏス）　ＩＩジｆｙ　ム８ｐ、　（Ｃｌｏｓ
    ｔｒｉｄｉｕｍ　ｓｐ、）ＡＴＣＣＮｏ。 ８９２５１％ＡＴＣＣＮｏ、　８９２５２、その変異株
    、またはグルコアミラーゼ酵素の製造を暗号づける遺伝
    情報を上記クロストリジウムＳｐ、微生物よりとね込む
    微生物から々る群より微生物を選び、この選んだ微生物
    の細胞を栄養培地に培養し、ついでこの培地からグルコ
    アミラーゼ酵素を分離するこ・とよｈなるグルコアミラ
    ーゼの製造法。 （９）マルトデキス）　ｌ］ンの水性溶液を、特許請求
    の範囲第１項記載のグルコアミラーゼ酵素で、３．５〜
    ７．０のｐＨにおいて、マルトデキストリンを加水分解
    してグルコースにするのに十分り時間処理することより
    なるマルトデキストリンをグルコースに加水分解する方
    法。 （１０）加水分解が約り５℃〜約８０℃の範囲の温度で
    、約４．０〜約６．５のｐＨで行々われる特許請求の範
    囲第９項記載の方法。
JP59164348A 1983-08-17 1984-08-07 新規な熱安定性グルコアミラ−ゼおよびその製造法 Pending JPS6054680A (ja)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US524070 1983-08-17
US06/524,070 US4536477A (en) 1983-08-17 1983-08-17 Thermostable glucoamylase and method for its production

Publications (1)

Publication Number Publication Date
JPS6054680A true JPS6054680A (ja) 1985-03-29

Family

ID=24087640

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP59164348A Pending JPS6054680A (ja) 1983-08-17 1984-08-07 新規な熱安定性グルコアミラ−ゼおよびその製造法

Country Status (17)

Country Link
US (1) US4536477A (ja)
EP (1) EP0135138A3 (ja)
JP (1) JPS6054680A (ja)
KR (1) KR850001528A (ja)
AU (1) AU575844B2 (ja)
CA (1) CA1221326A (ja)
DK (1) DK393284A (ja)
ES (2) ES8506086A1 (ja)
FI (1) FI842916L (ja)
GB (1) GB2145094B (ja)
IN (1) IN160378B (ja)
MY (1) MY101212A (ja)
NZ (1) NZ208420A (ja)
PH (1) PH20176A (ja)
SG (1) SG78187G (ja)
YU (1) YU139984A (ja)
ZA (1) ZA845184B (ja)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPS6342695A (ja) * 1986-08-08 1988-02-23 Hitachi Ltd 糖の製造方法

Families Citing this family (130)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
PH23920A (en) * 1983-12-20 1990-01-23 Cetus Corp Glucoamylase cdna
US4628031A (en) * 1984-09-18 1986-12-09 Michigan Biotechnology Institute Thermostable starch converting enzymes
US4622299A (en) * 1984-11-16 1986-11-11 Grain Processing Corporation Production of high D.E. syrups
US4613570A (en) * 1985-02-08 1986-09-23 Cpc International Inc. Novel thermostable, aciduric alpha-amylase and method for its production
EP0255124A3 (en) * 1986-07-29 1989-04-12 Hitachi, Ltd. Thermostable glucoamylase, a method for production of glucose using same and a plant for production thereof
FI81112C (fi) * 1986-08-27 1990-09-10 Alko Ab Oy Amylas av ny typ.
ATE124719T1 (de) * 1987-07-17 1995-07-15 Modrovich Ivan Endre Stabiles alpha-amylase-reagenz.
US5604128A (en) * 1991-08-13 1997-02-18 Sankyo Company, Limited Isolated cultures of Pestalotiopsis funerea IFO 5427 and Pestalotiopsis negleta FERM BP-3501
CN1261567C (zh) * 1997-11-26 2006-06-28 诺维信公司 热稳定的葡糖淀粉酶
US6255084B1 (en) * 1997-11-26 2001-07-03 Novozymes A/S Thermostable glucoamylase
WO2000075296A1 (en) * 1999-06-02 2000-12-14 Novozymes A/S Novel glucoamylase
US20040063184A1 (en) 2002-09-26 2004-04-01 Novozymes North America, Inc. Fermentation processes and compositions
US20040219649A1 (en) * 2003-03-10 2004-11-04 Novozymes A/S Alcohol product processes
EP1633878A1 (en) 2003-05-30 2006-03-15 Novozymes A/S Alcohol product processes
US20040253696A1 (en) 2003-06-10 2004-12-16 Novozymes North America, Inc. Fermentation processes and compositions
ES2383366T3 (es) 2003-06-25 2012-06-20 Novozymes A/S Enzimas para el tratamiento de almidón
EP1687419B1 (en) 2003-10-28 2010-02-03 Novozymes North America, Inc. Hybrid enzymes
EP1831384B1 (en) 2004-12-22 2015-08-12 Novozymes A/S Polypeptides having glucoamylase activity and polynucleotides encoding same
CN101268195A (zh) 2005-09-20 2008-09-17 诺维信北美公司 产生发酵产物的方法
US20080318284A1 (en) 2005-12-22 2008-12-25 Novozymes North America, Inc. Processes for Producing a Fermentation Product
CN101405397A (zh) 2006-03-22 2009-04-08 诺维信北美公司 发酵方法
BRPI0808513A2 (pt) 2007-03-09 2014-08-19 Danisco Us Inc Genencor Div Variantes de alfa-amilase de espécies de bacillus alcalifílico, composições compreendendo variantes de alfa-amilase e métodos de uso
US8916369B2 (en) 2007-03-14 2014-12-23 Danisco Us Inc. Trichoderma reesei α-amylase is a maltogenic enzyme
DK3219804T3 (da) 2007-04-24 2019-09-30 Novozymes North America Inc Afgiftning af forbehandlede lignocelluloseholdige materialer
US9695549B2 (en) 2007-09-03 2017-07-04 Norozymes Als Detoxifying and recycling of washing solution used in pretreatment of lignocellulose-containing materials
AU2009212526A1 (en) 2008-02-04 2009-08-13 Danisco Us Inc. TS23 alpha-amylase variants with altered properties
JP5746614B2 (ja) 2008-04-15 2015-07-08 ザ ユナイテッド ステイツ オブ アメリカ、 アズ リプレゼンティッド バイ ザ セクレタリー オブ アグリカルチャー 澱粉含有穀物から得られる蛋白質濃縮物、その組成、製造方法及び使用
MX364987B (es) 2008-06-06 2019-05-17 Danisco Us Inc Alfa-amilasas variantes de bacillus subtilis y metodos de uso de las mismas.
CA2726631A1 (en) 2008-06-06 2009-12-10 Danisco Us Inc. Saccharification enzyme composition and method of saccharification thereof
BRPI0913378A2 (pt) 2008-06-06 2015-09-01 Danisco Us Inc Produção de glicose a partir do amido usando alfa-amilase do bacillus subtilis
US20110097779A1 (en) 2008-06-23 2011-04-28 Chee-Leong Soong Processes for Producing Fermentation Products
DK2344650T3 (da) 2008-09-30 2014-07-14 Novozymes North America Inc Forbedring af enzymatisk hydrolyse af forbehandlet lignocelluloseholdigt materiale med distillers dried grain med solubles (ddg/s)
CN102186965B (zh) 2008-10-15 2014-10-08 诺维信公司 酿造方法
EP2857515B1 (en) 2008-11-20 2018-02-21 Novozymes Inc. Polypeptides having amylolytic enhancing activity and polynucleotides encoding same
WO2010078391A2 (en) 2008-12-30 2010-07-08 Novozymes North America, Inc. Improvement of enzymatic hydrolysis of pretreated lignocellulose-containing material with dissolved air flotation sludge
WO2010078392A2 (en) 2008-12-31 2010-07-08 Novozymes North America, Inc. Processes of producing fermentation products
EP2414515A2 (en) 2009-04-01 2012-02-08 Danisco US Inc. Cleaning system comprising an alpha-amylase and a protease
EP2451961A1 (en) 2009-07-07 2012-05-16 Novozymes A/S Process for treating a substrate with an enzyme
MX2012000322A (es) 2009-07-17 2012-02-08 Novozymes As Metodo de analisis del decaimiento de la celulosa en la hidrolisis del material celulosico.
CA2771071C (en) 2009-08-07 2020-03-10 Danisco Us Inc. Alpha-amylase blend for starch processing and method of use thereof
CN101993863B (zh) * 2009-08-14 2012-08-08 中国科学院微生物研究所 一种葡萄糖淀粉酶及其编码基因与应用
WO2011039324A1 (en) 2009-09-30 2011-04-07 Novozymes A/S Steamed bread preparation methods and steamed bread improving compositions
CA2778471A1 (en) 2009-10-23 2011-04-28 Danisco Us Inc. Methods for reducing blue saccharide
CN102933227A (zh) 2009-12-22 2013-02-13 诺维信公司 包含增强性多肽和淀粉降解酶的组合物及其用途
BR112012018422A2 (pt) 2010-01-29 2015-09-15 Novozymes As processo para produção de biogás com pré-tratamento enzimático.
WO2011100161A1 (en) 2010-02-09 2011-08-18 Novozymes North America, Inc. Addition of alpha - glucosidase and cobalt for producing fermentation products from starch
EP3070171B1 (en) 2010-03-30 2018-06-13 Novozymes A/S Process for enhancing by-products from fermentation processes
WO2011127802A1 (en) 2010-04-14 2011-10-20 Novozymes A/S Polypeptides having glucoamylase activity and polynucleotides encoding same
AU2011263706B2 (en) 2010-06-11 2014-07-24 Novozymes A/S Enzymatic flour correction
CA2807312A1 (en) 2010-08-02 2012-02-09 Novozymes North America, Inc. Process of producing a fermentation product
CA2817224A1 (en) 2010-11-19 2012-05-24 Novozymes North America, Inc. Processes of producing a fermentation product
US9816112B2 (en) 2010-12-22 2017-11-14 Novozymes A/S Processes for producing fermentation products
CN103339260A (zh) 2011-01-04 2013-10-02 诺维信公司 从含果胶和木素纤维素的材料产生生物气的方法
US9677094B2 (en) 2011-02-07 2017-06-13 Novozymes A/S Process of producing a fermentation product
WO2012140075A2 (en) 2011-04-15 2012-10-18 Novozymes A/S Method for production of brewers wort
US20120276593A1 (en) 2011-04-29 2012-11-01 Danisco Us Inc. Use of cellulase and glucoamylase to improve ethanol yields from fermentation
BR112013032543A2 (pt) 2011-06-28 2017-01-17 Novozymes As processo de produção de biogás
EP2787070A3 (en) 2011-07-21 2015-03-11 AB Enzymes GmbH Process of lysing yeast cell walls
EP2734633B1 (en) 2011-07-22 2019-05-01 Novozymes North America, Inc. Processes for pretreating cellulosic material and improving hydrolysis thereof
CA2861678C (en) 2011-10-11 2021-02-16 Novozymes North America, Inc. Processes for producing fermentation products
EP4345161A3 (en) 2011-10-28 2024-06-12 Danisco Us Inc Variant maltohexaose-forming alpha-amylase variants
IN2014CN04905A (ja) 2011-12-02 2015-09-18 Novozymes As
WO2013083801A2 (en) 2011-12-09 2013-06-13 Novozymes A/S Biogas from substrates comprising animal manure and enzymes
EP2794899A1 (en) 2011-12-21 2014-10-29 Novozymes, Inc. Methods for determining the degradation of a biomass material
US9856498B2 (en) 2012-03-30 2018-01-02 Novozymes A/S Processes of producing fermentation products
MX2014013402A (es) 2012-05-11 2014-11-26 Danisco Inc Uso de alfa-amilasa de aspergillus clavatus para sacarificacion.
DK4026902T3 (da) 2012-06-08 2025-07-14 Danisco Us Inc Variante alfa-amylaser med øget aktivitet på stivelsespolymerer
EP2870256A1 (en) 2012-07-06 2015-05-13 Novozymes A/S Inactivation of a production strain using a fatty acid
MX2015001818A (es) 2012-08-16 2015-05-07 Danisco Inc Proceso para producir glucosa a partir de almidon con el uso de la alfa-amilasa de aspergillus clavatus y una pululanasa.
MX2015001969A (es) 2012-08-17 2015-05-15 Novozymes As Variantes de asparaginasa termoestables y polinucleotidos que las codifican.
WO2014060474A1 (en) 2012-10-17 2014-04-24 Novozymes A/S Method for production of brewers wort
US20180112203A1 (en) 2012-11-20 2018-04-26 Danisco Us Inc. Amylase with maltogenic properties
WO2014093125A1 (en) 2012-12-14 2014-06-19 Danisco Us Inc. Method of using alpha-amylase from aspergillus fumigatus and isoamylase for saccharification
US20160010128A1 (en) 2012-12-20 2016-01-14 Danisco Us Inc. Method of using alpha-amylase from aspergillus terreus and pullulanase for saccharification
CN104884614A (zh) 2012-12-21 2015-09-02 丹尼斯科美国公司 α-淀粉酶变体
WO2014099525A1 (en) 2012-12-21 2014-06-26 Danisco Us Inc. Paenibacillus curdlanolyticus amylase, and methods of use, thereof
EP2954063A1 (en) 2013-02-05 2015-12-16 Green Biologics Limited Production of butanol
ES2676895T5 (es) 2013-03-11 2022-04-27 Danisco Us Inc Variantes combinatorias de alfa-amilasa
WO2014200657A1 (en) 2013-06-13 2014-12-18 Danisco Us Inc. Alpha-amylase from streptomyces xiamenensis
WO2014200658A1 (en) 2013-06-13 2014-12-18 Danisco Us Inc. Alpha-amylase from promicromonospora vindobonensis
WO2014200656A1 (en) 2013-06-13 2014-12-18 Danisco Us Inc. Alpha-amylase from streptomyces umbrinus
EP3011020A1 (en) 2013-06-17 2016-04-27 Danisco US Inc. Alpha-amylase from bacillaceae family member
EP3022300B1 (en) 2013-07-17 2018-07-11 Novozymes A/S Pullulanase chimeras and polynucleotides encoding same
CN105934518A (zh) 2013-09-11 2016-09-07 诺维信公司 用于生产发酵产品的方法
US20160160199A1 (en) 2013-10-03 2016-06-09 Danisco Us Inc. Alpha-amylases from exiguobacterium, and methods of use, thereof
WO2015050724A1 (en) 2013-10-03 2015-04-09 Danisco Us Inc. Alpha-amylases from a subset of exiguobacterium, and methods of use, thereof
WO2015057517A1 (en) 2013-10-17 2015-04-23 Danisco Us Inc. Use of hemicellulases to improve ethanol production
WO2015065978A1 (en) 2013-10-28 2015-05-07 Danisco Us Inc. Trehalase in fermentations
WO2015066669A1 (en) 2013-11-04 2015-05-07 Danisco Us Inc. Proteases in corn processing
WO2015066667A1 (en) 2013-11-04 2015-05-07 Danisco Us Inc. Proteases in wheat processing
MX2016006489A (es) 2013-11-20 2016-08-03 Danisco Us Inc Alfa-amilasas variantes que tienen susceptibilidad reducida a la escision por proteasas y metodos de uso.
WO2015094809A1 (en) 2013-12-19 2015-06-25 Danisco Us Inc. Chimeric fungal alpha-amylases comprising carbohydrate binding module and the use thereof
WO2015094714A1 (en) 2013-12-19 2015-06-25 Danisco Us Inc. Proteases in grain processing
EP3097192B1 (en) 2014-01-22 2018-07-25 Novozymes A/S Pullulanase variants and polynucleotides encoding same
WO2015143144A1 (en) 2014-03-19 2015-09-24 Novozymes A/S Method for enhancing activity of an x143 polypeptide
EP3129478B1 (en) 2014-04-10 2019-03-27 Novozymes A/S Alpha-amylase variants and polynucleotides encoding same
CN106659168A (zh) 2014-07-08 2017-05-10 卡拉万成分股份有限公司 产生糖和结构改善的焙烤方法和由该方法形成的产品
WO2016062875A2 (en) 2014-10-23 2016-04-28 Novozymes A/S Glucoamylase variants and polynucleotides encoding same
CA2981342A1 (en) 2015-06-18 2016-12-22 Novozymes A/S Polypeptides having trehalase activity and the use thereof in process of producing fermentation products
US11920170B2 (en) 2015-12-09 2024-03-05 Danisco Us Inc. Alpha-amylase combinatorial variants
US10597645B2 (en) 2015-12-22 2020-03-24 Novozymes A/S Process of extracting oil from thin stillage
WO2017173324A2 (en) 2016-04-01 2017-10-05 Danisco Us Inc. Alpha-amylases, compositions & methods
WO2017173190A2 (en) 2016-04-01 2017-10-05 Danisco Us Inc. Alpha-amylases, compositions & methods
CN110088287A (zh) 2016-10-17 2019-08-02 诺维信公司 在乙醇发酵过程中减少泡沫的方法
US10889836B2 (en) 2016-11-23 2021-01-12 Novozymes A/S Yeast for ethanol production
EP3601553B1 (en) 2017-03-31 2025-12-03 Danisco US Inc. Alpha-amylase combinatorial variants
CN110730824A (zh) 2017-06-02 2020-01-24 诺维信公司 用于乙醇生产的改善的酵母
WO2018226569A1 (en) 2017-06-06 2018-12-13 Danisco Us Inc Use of betaine to stabilize and/or increase the activity of enzymes in stressful environments
US11584783B2 (en) 2017-06-28 2023-02-21 Novozymes A/S Processes for producing a fermentation product
US11220679B2 (en) 2017-08-08 2022-01-11 Novozymes A/S Polypeptides having trehalase activity
CA3070730A1 (en) 2017-09-15 2019-03-21 Novozymes A/S Enzyme blends and processes for improving the nutritional quality of animal feed
CA3075907A1 (en) 2017-10-23 2019-05-02 Novozymes A/S Processes for reducing lactic acid in a biofuel fermentation system
EP3710580A1 (en) 2017-11-14 2020-09-23 Danisco US Inc. Alpha-amylase, composition and method
EP3746545A1 (en) 2018-01-29 2020-12-09 Novozymes A/S Microorganisms with improved nitrogen utilization for ethanol production
AU2019222480B9 (en) 2018-02-15 2024-11-28 Microbiogen Pty. Ltd. Improved yeast for ethanol production
WO2019231944A2 (en) 2018-05-31 2019-12-05 Novozymes A/S Processes for enhancing yeast growth and productivity
US20210269833A1 (en) 2018-07-11 2021-09-02 Novozymes A/S Processes for producing fermentation products
MX2021000893A (es) 2018-07-25 2021-03-31 Novozymes As Levadura que expresa enzimas para la producción de etanol.
CN113286889A (zh) 2018-10-08 2021-08-20 诺维信公司 用于生产乙醇的表达酶的酵母
BR112021014873A2 (pt) 2019-01-31 2021-10-05 Novozymes A/S Polipeptídeo, combinação de enzimas, polinucleotídeo, construto de ácido nucleico ou vetor de expressão recombinante, célula hospedeira recombinante, método de produção de um polipeptídeo, e, processo de produção de um produto de fermentação
BR112022000351A2 (pt) 2019-07-09 2022-05-10 Dupont Nutrition Biosci Aps Composições de enzima particuladas revestidas de gordura
WO2021021458A1 (en) 2019-07-26 2021-02-04 Novozymes A/S Microorganisms with improved nitrogen transport for ethanol production
MX2021015818A (es) 2019-08-06 2022-02-03 Novozymes As Proteinas de fusion para mejorar la expresion de enzimas.
WO2021046073A1 (en) 2019-09-05 2021-03-11 Dupont Nutrition Biosciences Aps Feed composition
PY2084892A (es) 2019-12-16 2022-07-26 Novozymes As Proceso para producir productos de fermentación
JP2024536931A (ja) 2021-09-27 2024-10-08 インターナショナル エヌ アンド エイチ デンマーク エーピーエス 飼料添加組成物及びそれを使用する方法
US20250270485A1 (en) 2022-05-04 2025-08-28 Novozymes A/S Brewing with thermostable amg variants
CN119546193A (zh) 2022-05-17 2025-02-28 国际N&H丹麦有限公司 包含酶组合的饲料添加剂
WO2024227153A1 (en) 2023-04-28 2024-10-31 International N&H Denmark Aps Ruminant feed additive compositions
WO2024258820A2 (en) 2023-06-13 2024-12-19 Novozymes A/S Processes for producing fermentation products using engineered yeast expressing a beta-xylosidase

Family Cites Families (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3067108A (en) * 1961-02-15 1962-12-04 Staley Mfg Co A E Method of refining amyloglucosidase
IT1193794B (it) * 1978-07-20 1988-08-24 Cpc International Inc Glucoamilasi neutra e metodo per la sua produzione
JPS5534046A (en) * 1978-09-01 1980-03-10 Cpc International Inc Novel glucoamyrase having excellent heat resistance and production
AU528159B2 (en) * 1978-09-01 1983-04-14 Cpc International Inc. Thermostable glucoamylase
FI64813C (fi) * 1980-12-31 1984-01-10 Ilkka Antero Palva Foerfarande foer producering av ett utvalt aeggviteaemne och vid foerfarandet anvaenda rekombinantplasmidvektorer
US4628031A (en) * 1984-09-18 1986-12-09 Michigan Biotechnology Institute Thermostable starch converting enzymes

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPS6342695A (ja) * 1986-08-08 1988-02-23 Hitachi Ltd 糖の製造方法

Also Published As

Publication number Publication date
FI842916A7 (fi) 1985-02-18
DK393284D0 (da) 1984-08-16
EP0135138A2 (en) 1985-03-27
MY101212A (en) 1991-08-17
CA1221326A (en) 1987-05-05
FI842916A0 (fi) 1984-07-19
ES538272A0 (es) 1985-09-01
ES535210A0 (es) 1985-06-16
ES8507609A1 (es) 1985-09-01
ZA845184B (en) 1985-02-27
FI842916L (fi) 1985-02-18
GB8420820D0 (en) 1984-09-19
NZ208420A (en) 1988-02-29
EP0135138A3 (en) 1986-06-25
ES8506086A1 (es) 1985-06-16
DK393284A (da) 1985-02-18
US4536477A (en) 1985-08-20
IN160378B (ja) 1987-07-11
SG78187G (en) 1988-09-16
GB2145094B (en) 1987-07-08
GB2145094A (en) 1985-03-20
YU139984A (en) 1986-12-31
AU575844B2 (en) 1988-08-11
PH20176A (en) 1986-10-14
KR850001528A (ko) 1985-03-30
AU3170884A (en) 1985-02-21

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JPS6054680A (ja) 新規な熱安定性グルコアミラ−ゼおよびその製造法
US4317881A (en) Process for producing cyclodextrins
JPS6155948B2 (ja)
US4628028A (en) Novel thermostable pullulanase enzyme and method for its production
US4578352A (en) Novel thermostable, aciduric alpha-amylase and method for its production
US4613570A (en) Novel thermostable, aciduric alpha-amylase and method for its production
US4315988A (en) Thermophilic collagenases, thermophilic bacteria capable of producing thermophilic collagenases, and process for producing said collagenases
US4689296A (en) Method of preparing novel thermostable transglucosidase
JPH0118717B2 (ja)
EP0793716A1 (en) $i(THERMOCOCCUS) AMYLASE AND PULLULANASE
US3804718A (en) Method of producing beta-amylase by bacterial fermentation
EP0753056A1 (en) Desulfurococcus amylase and pullulanase
US5714369A (en) Fervidobacterium amylase and pullulanase
JPH05292962A (ja) 新規な枝切り酵素及びその製造法
Gupta et al. Purification and properties of an extracellular α-glucosidase from the thermophilic fungus Malbranchea sulfurea
JPH0364107B2 (ja)
JPS6331194B2 (ja)
US5882906A (en) Staphylothermus amylase
JP2785323B2 (ja) β―グルコシダーゼ及びその製造法
JPS6331195B2 (ja)
JPS61115491A (ja) 耐熱性α−アミラ−ゼ及びその製造方法
Kelly et al. Resolution of the extracellular α-glucosidase system of Bacillus sp. NCIB 11203
JPH0683668B2 (ja) 耐熱性α−アミラ−ゼの製造方法
JPS6342696A (ja) 糖類の製造法
KR960007741B1 (ko) 신규 α-1, 6-글루코시다제 및 그의 제조방법