JPS6155948B2 - - Google Patents

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JPS6155948B2
JPS6155948B2 JP53106354A JP10635478A JPS6155948B2 JP S6155948 B2 JPS6155948 B2 JP S6155948B2 JP 53106354 A JP53106354 A JP 53106354A JP 10635478 A JP10635478 A JP 10635478A JP S6155948 B2 JPS6155948 B2 JP S6155948B2
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temperature
heat treatment
enzyme
glucose
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Masanori Tamura
Mizuho Shimizu
Minoru Tago
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SHII PII INTERN Inc
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    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/14—Hydrolases (3)
    • C12N9/24—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2)
    • C12N9/2402—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2) hydrolysing O- and S- glycosyl compounds (3.2.1)
    • C12N9/2405—Glucanases
    • C12N9/2408—Glucanases acting on alpha -1,4-glucosidic bonds
    • C12N9/2411—Amylases
    • C12N9/2428—Glucan 1,4-alpha-glucosidase (3.2.1.3), i.e. glucoamylase
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P19/00—Preparation of compounds containing saccharide radicals
    • C12P19/20—Preparation of compounds containing saccharide radicals produced by the action of an exo-1,4 alpha-glucosidase, e.g. dextrose
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
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Description

【発明の詳細な説明】
本発明は高度の耐熱性を有する新規なグルコア
ミラーゼ及びその製造法に関する。 現在でんぷんをグルコアミラーゼにより糖化し
てブドウ糖を製造する工程はバツチ法により行な
われている。そしてグルコアミラーゼとしてはリ
ゾプス属（Rhizopus）及びアスペルギルス属
（Aspergillus）の微生物の生産するグルコアミラ
ーゼが使用され、55℃〜60℃の反応温度で２〜４
日の反応時間でブドウ糖の製造が行なわれてい
る。もしグルコアミラーゼを不溶化し、この糖化
工程をカラムによる連続反応に切り換えることが
できれば、反応時間は短縮され、大きなタンクは
必要なくなり、労力及びエネルギーの節約が可能
となる。リゾプス属及びアスペルギルス属の微生
物の生産するグルコアミラーゼはイオン交換法、
物理的吸着法、共有結合法及びゲル包括法等の
種々の方法で不溶化することが可能であるが、し
かしどの方法で不溶化したグルコアミラーゼも50
℃以上の温度で使用するとすみやかに失活し、経
済的に使用することができない。なお不溶化した
グルコアミラーゼを50℃以下の温度で使用すれば
かなり長時記安定であるという報告もあるが
〔Biotechnol.Bioeng.15(3)483（1973）〕、50℃以下
の反応温度では、微生物の汚染のため工業的に実
施不可能である。したがつて50℃以上の温度で安
定な不溶化グルコアミラーゼの開発が工業的連続
糖化反応の実施には必須であり、このためにはま
ず従来のグルコアミラーゼよりずつと耐熱性のあ
るグルコアミラーゼの開発が必要である。 そこで本発明者等は、高度の耐熱性を有するグ
ルコアミラーゼを生産する菌を見い出すべく土壌
中より微生物の分離検索を行なつた。そして土壌
中より約15000株のカビを分離し、それ等のグル
コアミラーゼ生産性及び生産されるグルコアミラ
ーゼの耐熱性をしらべた結果、タラロマイセス属
に属する１菌株が至適反応温度が75℃であり、70
℃、PH4.5、10分間の加熱処理で90％以上の残存
活性を有するグルコアミラーゼを生産することを
見い出し、これに基いて本発明を完成するに至つ
た。 即ち、本発明は至適反応温度が75℃であり、温
度70℃、PH4.5、10分間の加熱処理で90％以上の
残存活性を有する新規なグルコアミラーゼであ
り、又本発明は上記の新規な耐熱性グルコアミラ
ーゼを生産するタラロマイセス属の微生物を培地
に培養し、培養物から該耐熱性グルコアミラーゼ
を採取することを特徴とする高度の耐熱性を有す
るグルコアミラーゼの製造法である。 先ず、本発明の高度の耐熱性を有する新規なグ
ルコアミラーゼの性質について述べると次の如く
である。 (1) 作用及び基質特異性 本酵素はでんぷん、可溶性でんぷん、アミロ
ース、アミロペクチン、グリコゲン等を加水分
解してブドウ糖を生ずる。基質濃度１％では、
各基質からのブドウ糖の収率は100％であり、
又生成したブドウ糖の変旋光は正である。した
がつて本酵素はグルコアミラーゼである。 (2) 至適PH及び安定PH範囲 本酵素の酵素活性（相対値）と作用PHの関係
を公知のリゾプス属及びアスペルギルス属微生
物のグルコアミラーゼのそれと比較して示すと
第１図のとおりである。即ち、本酵素の至適PH
は第１図が示すようにPH4.0である。又本酵素
はPH３〜５で最も安定であるが、PH２〜９の範
囲で室温に24時間放置しても失活がみられな
い。 (3) 力価の測定法 ２％デキストリン（DE10）―0.1モル酢酸バ
フアー（PH4.5）0.5mlに適当に希釈した酵素液
0.5mlを加え、60℃で正確に10分間反応させ
る。反応後、沸騰水溶中で５分間加熱して酵素
反応を停止させる。生成したブドウ糖をグルコ
ースオキシダーゼ法で測定する。１分間に１マ
イクロモルのブドウ糖を生成する酵素量を１単
位とする。 (4) 作用適温の範囲 本酵素の酵素活性（相対値）と作用温度の関
係を公知のグルコアミラーゼ中で最も耐熱性の
強いと思われるアスペルギルス・ルチユエンシ
ス・U2（Aspergillus Iuchuensis U2、特公昭
53―7513）のグルコアミラーゼ及びフミコー
ラ・ラヌギノーサ〔Humicola Ianuginosa，
Carbohydrate Research，61 301（1978）〕の
グルコアミラーゼのそれと比較して示すと第２
図のとおりである。第２図から明らかなよう
に、本酵素の作用適温は75℃であり、アスペル
ギルス・ルチユエンシス及びフミコーラ・ラヌ
ギノーサのグルコアミラーゼのそれより10℃高
い値を示す。 (5) PH、温度などによる失活の条件 本酵素はPH２以下又はPH８以上で70℃、１時
間の加熱処理により完全に失活する。第３図は
本酵素の耐熱性とフミコーラ・ラヌギノーサの
グルコアミラーゼ、アスペルギルス・ニガーの
グルコアミラーゼ及びリゾプス・ニベウスのグ
ルコアミラーゼのそれとを比較して示したもの
である。即ち第３図は各々のグルコアミラーゼ
をそれぞれの最も安定なPHにおいて70℃で処理
した時の酵素活性の失活曲線を示したものであ
る。第３図から明らかなように、本酵素は従来
公知のグルコアミラーゼよりずつとすぐれた耐
熱性を有し、70℃、10分間の加熱処理では92.5
％の残存活性を示し、１時間の加熱処理でもな
お48％の残存活性を示している。したがつて本
酵素が従来公知のグルコアミラーゼに比べ、著
しく耐熱性が強いことがわかる。 (6) 阻害、活性化及び安定化 本酵素は特別な活性化剤や安定化剤を必要と
しないが、塩化第２水銀やトリス〔トリス（ヒ
ドロキシメチル）―アミノメタン〕によつて阻
害を受ける。 (7) 精製法 本酵素の精製方法は無機塩による塩析、有機
溶剤による分別沈殿、活性白土処理、各種クロ
マトグラフイ等の一般的方法を組合わせて行な
うことができる。本酵素の精製方法の具体例は
実施例に示すとおりである。 (8) 電気泳動 精製酵素をデービスの方法（B.J.Davis，
Ann.New York Acad.Sci.，121 Art.2 404
（1964）〕によりPH8.8でデイスク電気泳動を行
なつた結果、精製酵素は陽極に移動し、単一の
バンドを示した。 (9) 分子量 本酵素の分子量はアンドリウスの方法（P.
Andrews，Biochem.J.96，595，1965）に基づ
き、セフアデツクスＧ―150カラムを用いて測
定した結果、約31000と認められた。 次に本酵素が従来公知のグルコアミラーゼと
異なる点を挙げ、本酵素が高度の耐熱性を有る
新規なグルコアミラーゼである理由を説明す
る。 第１表は本酵素と従来公知のグルコアミラーゼ
の至適反応PH、至適反応温度及び分子量を比較し
たものである。本酵素の至適反応温度は75℃で従
来公知のグルコアミラーゼより５℃〜15℃も高い
値を示している。又分子量は他のグルコアミラー
ゼに比べて著しく小さいのが特徴である。
【表】
【表】 また第３図は、上記したように本酵素、フミコ
ーラ・ラヌギノーサのグルコアミラーゼ、アスペ
ルギルス・ニガーのグルコアミラーゼ、リゾツプ
ス・ニベウスのグルコアミラーゼをそれぞれ最も
安定なPHにおいて、70℃で加熱処理した時の酵素
活性の失活曲線を示したものであるが、この第３
図から本酵素の失活は他のグルコアミラーゼに比
べて著しく遅いことがわかる。 以上の事実から本発明のグルコアミラーゼは現
在までまつたく知られていない高度の耐熱性を有
する新規なグルコアミラーゼであると結論でき
る。 次に本酵素の製造方法について説明する。 本発明において用いられる上記酵素生産菌の具
体例としては、本発明者等によつて土壌中より分
離されたG45―632株がある。この菌株の菌学的
性質を述べると次のとおりである。 なお本菌株の形態的特徴は、以下の研究者が
各々述べている方法に従つて調べたものである。 D.C.COONEY及びR.EMERSON
（「THERMOPHILIC FUNGI」W.H.FREEMAN
及びCOMPANY，SAN FRANCISCO AND
LONDON）；K.B.RAPER及びC.THOM（「Ａ
MANUAL OF PENICILLIA」HAFNER
PUBLISHING COMPANY，NEW YORK AND
LONDON）；T.AWAO及びK.MITSUGI
（Trans.mycol.Soc.Japan 14，145―160，
1973）；K.MINOURA et.，al（Trans.mycol.
soc.Japan 14，352〜361，1973）。 (1) 形態的特徴 ペトリ皿で、下記の２種類の培地上で本菌株
を培養して得た単離されたコロニーについて観
察された形態的特徴を示す。 バレイシヨ・ブドウ糖寒天培地 40℃で６日間インキユベーシヨン処理した
ものでは、直径６〜７cmの円形のコロニーで
ある。栄養菌糸は無色で、コロニー周辺では
培地上に薄く生育するが、中心近くでは厚さ
１〜２mmの綿毛状に生育し、分生子が数多く
存在する。コロニーの中心部及び外周部には
緑色を帯びた灰白色で、直径0.3mm以下の子
嚢球（cleistothecia）が散在する。コロニー
下部は黄褐色であるが、子嚢球生成部付近で
は赤褐色であり、培地中に黄褐色の色素を分
泌する。 栄養菌糸は巾２〜4.5μで、隔膜を有し分
岐した繊維よりできており、その繊維から分
生子構造を支える隔膜のある分生子柄が突き
でている。分生子柄は表面が滑らかであり、
長さ30μ〜2000μ×２〜３μであり、長いも
のはしばしば不規則に分岐している。 分生子の生成方法は極めて不規則であり、
分生子柄先端から直接生成される場合と、１
〜４本の梗子（Phialide）の先端に生成され
る場合があり、梗子が二段のものもある。梗
子は10〜15μ×２〜3.5μで基部がふくらん
だ形をしている。分生子は鎖状に連つてお
り、10個以上連鎖する場合もある。表面が滑
らかな楕円又は長楕円形で、５×３μもしく
はそれ以下の大きさであり、透過光下では褐
色を帯びている。子嚢果は直径300μ以下の
球形もしくは楕円形であり、子嚢は10×８μ
で子嚢膜は見られず、子嚢胞子は黄色く、大
きさ３〜４μ、平面的には円形であるが、側
面から見ると赤道面に溝がある。 酵母エキス・ブドウ糖培地 40℃で６日間インキユベーシヨン処理した
ものは、直径６〜７cmの円形のコロニーであ
り、厚さ１〜２mmの細かい綿毛状に生育し、
表面は若いコロニーでは白色であるが、徐々
に褐色を帯びた灰白色になる。それと同時に
分生子が豊富に生成され、表面が粉状にな
る。コロニー下部は生育初期には赤褐色であ
るが、次第に茶褐色になり、培地中に茶褐色
の色素を分泌する。この培地では子嚢果の生
成は認められない。 (2) 生理学的特徴 生育温度 本菌は25〜50℃で生育できるが、55℃では
生育は認められない。最適生育温度は40℃付
近である。 生育PH 本菌はPH３〜９の範囲で生育できるが、最
適生育PHは６〜７である。 炭素源 ブドウ糖、果糖、ガラクトース、マンノー
ス、サツカロース、マルトース、でんぷん等
の炭素源を資化する。 以上の菌学的特徴から、K.B.RAPER及びC.
THOM「A.MANUAL OF PENICILLIA」，C.
COONEY及びR.EMERSON「THERMOPHILIC
FUNGI」及びT.AWAO及びK.MITSUGI
「Trans.mycol.Soc.Japan，14」等の記述より、
G45―632株はタラロマイセス・レイセタヌス
（Talaromyces Ieycettanus）と同定されるが、
G30―632株は25℃でも生育でき、又55℃で全く
生育できない点、及び分生子柄の長さが2000μに
達する場合もある点で、上記の３文献の記述と一
致しないので、G45―632株はタラロマイセス・
レイセタヌスの変種と思われる。 なお、タラロマイセス・レイセタヌス
（Talaromyces Ieycettanus）G54―632〔旧名
タラロマイセス・デユポンテイ（Talaromyces
duponti）G45―632〕は、微工研菌寄第4566号と
して、工業技術院微出物工業技術研究所に寄託さ
れている。 本発明における使用菌としては、タラロマイセ
ス・レイセタヌスG45―632株はその具体例であ
つて、この菌株またはその変異株ばかりでなく、
タラロマイセス属に属し、上記した新規な耐熱性
グルコアミラーゼを生産する微生物はすべて用い
ることができる。 本発明における使用菌の培養については、カビ
の培養に関する一般的知識及び技術が適用され
る。 すなわち培地としては、通常カビの培養に使用
されている培地を用いることができる。培地の炭
素源としては、例えば各種でんぷん、でんぷん加
水分解物、コーンミール、小麦粉、癈糖蜜等が使
用され、窒素源としては、例えばペプトン、綿実
油カス、肉エキス、酵母エキス、カゼイン、コー
ンスチープリカー、麦芽エキス、大豆粉、脱脂粉
乳、無機アンモニウム塩、無機硝酸塩等が使用さ
れる。また無機塩としては、例えば塩化カルシウ
ム、硫酸マグネシウム、リン酸塩、食塩、塩化カ
リウム等を使用することができる。これ等の炭素
源、窒素源及び無機塩類は単独に、又はそれ等を
適宜組合わせて用いることができる。その他必要
に応じて菌の生育を助長し、酵素の生産を増加さ
せるために微量の金属塩、ビタミン類、アミノ酸
等を使用することができる。 培養条件もカビの培養に通常使用される条件が
適用される。即ち液内深部培養においては、通常
撹拌しつゝ、30℃〜45℃、PH５〜８で３〜10日間
培養すれば本酵素が培地中に蓄積される。又〓等
の固形物を用いて固体培養することもできる。 培養物より目的とする新規な耐熱性グルコアミ
ラーゼの採取は例えば次のようにして行なうこと
ができる。 液体の培養の場合は、公知の方法で菌体を除去
し、液を減圧濃縮するか、又は液に硫安等の
無機塩を加えて塩析するか、あるいはアセトン、
イソプロパノールのような有機溶剤を加えて該酵
素を沈殿させ濃縮することができる。 固体培養の場合は、酵素を培養物から水又はバ
ツフアーを用いて抽出した後、液体培養の場合と
同様にして濃縮酵素を得ることができる。このよ
うにして得られた粗製の耐熱性グルコアミラーゼ
は後記の実施例に示す方法で精製することができ
る。 本発明の高度の耐熱性を有する新規なグルコア
ミラーゼはでんぷんからブドウ糖を製造する際、
液化でんぷんの糖化に使用することができる。特
に本酵素を各種の不溶化法を用いて不溶化し、連
続糖化反応を行なえば、60〜65℃の反応温度にお
いて、収率よく長期間の反応を実施することがで
きるので有利である。 次に本発明の実施例を示し、本発明をさらに詳
細に説明する。 実施例 可溶性でんぷん５％、コーンスチープリカー２
％、綿実油カス0.5％、酵母エキス0.5％、第２リ
ン酸カリ0.1％、硫酸マグネシウム0.05％、塩化
カルシウム0.01％を含む液体培地のPHを7.0に調
節後、その100mlを500mlの三角フラスコに分注
し、121℃で10分間滅菌し、タラロマイセス・デ
ユポンテイG45―632株を植菌し、40℃で７日間
振とう培養し、この培養液より菌体を別した。
液１ml当りのグルコアミラーゼ活性は60単位で
あつた。 この液を２規定の塩酸によりPH6.0に調節
し、活性白土を液１ml当り0.1ｇ加え、室温で
15分間撹拌後、活性白土を別した。この液に
２倍量の冷イソプロパノールを加えて酵素を沈殿
させ、沈殿物を遠心分離によつて回収し、少量の
トリス―塩酸バツフアー（PH7.5）に溶解した。
この酵素液を同じバツフアーに対して４℃で１晩
透析した後、同じバツフアーで緩衝化したDEAE
―セルロースカラムに吸着させた。このカラムか
らの酵素の溶出は、0.05モルトリス―塩酸バツフ
アー中の食塩を０から0.5モルまで直線的に上昇
させて行つた。溶出された酵素畫分を集め、２倍
量のイソプロパノールを加えて酵素を沈殿させ、
0.05モル酢酸バツフアー（PH5.5）に溶解した、
次にこの酵素溶液を同じバツフアーで緩衝化した
CM―セルロースに吸着させた。このカラムから
の酵素の溶出は、0.05モル酢酸バツフアー中の食
塩濃度を０から0.2モルまで直線的に上昇させて
行つた。溶出された酵素畫分を集め、２倍量のイ
ソプロパノールを加えて酵素を沈殿させ、0.05モ
ルトリス―塩酸バツフアー（PH7.5）に溶解し
た。次にこの酵素溶液を同じバツフアーで緩衝化
したセフアデツクスＧ＝150カラムにかけ、同じ
バツフアーを用いて溶出を行つた。酵素活性を示
す畫分を集め、２倍量のイソプロパノールを加え
て酵素を沈殿させ、少量の0.05モル酢酸バツフア
ー（PH4.5）に溶かして、精製酵素の溶液標品を
得た。この精製酵素の溶液比活性は蛋白１mg当り
110単位であつた。 次に上記の活性白土処理をした後、イソプロパ
ノールで沈殿させ、この沈殿物をトリス―塩酸バ
ツフアーに溶解した酵素液をグラスマイヤー等の
方法〔C.K.Glassmeyer et al，Biochemistry，
10No.５ 786（1971）〕にしたがつて、グルタール
アルデヒドを用いて、AE―セルロースに結合さ
せて、酵素の不溶化を行つた。この方法により担
体１ｇ当り2000単位の活性を持つ不溶化酵素を得
た。 次にこの不溶化酵素３ｇをカラムにつめ、この
カラムを60℃に保温し、２規定の塩酸でPH5.0に
調節した25％デキストリン（DE15）溶液を
SV0.5で連続的に流して糖化反応を行つた。糖化
液のブドウ糖含量を高速液体クロマトグラフイに
より定量したところ、96.5％で、１ケ月の連続糖
化を行つたが糖化液のブドウ糖含量の低下はみら
れなかつた。 比較のため、公知のグルコアミラーゼ中耐熱性
の高いアスペルギルス・ニガーのグルコアミラー
ゼ（CPC社自家用酵素）を上記と同じ方法で不
溶化し、PH4.5に調節した25％デキストリン溶液
を用いて上記と同じ条件で連続糖化反応を行つ
た。この場合、初期の糖化液のブドウ糖含量は
95.5％であつたが、反応時間と共にブドウ糖含量
は低下し、２週間後には糖化液のブドウ糖含量は
85％であつた。
【図面の簡単な説明】
第１図は本酵素の酵素活性と作用PHの関係を、
公知のリゾプス属及びアスペルギルス属の微生物
のグルコアミラーゼのそれと60℃に於て比較して
示す図であり、第２図は本酵素の酵素活性（PH
4.5）と作用温度の関係を、公知のアスペルギル
ス属（PH4.5）及びフミコーラ属の微生物（PH
6.0）のグルコアミラーゼのそれと比較して示す
図であり、第３図は本酵素の耐熱性（PH5.0）と
公知のフミコーラ属（PH6.0）、アスペルギルス属
（PH4.5）及びリゾプス属（PH5.0）の微生物のグ
ルコアミラーゼのそれとを基質非存在下で比較し
て示す図である。

Claims (1)

  1. 【特許請求の範囲】 １ 下記の理化学的性質 作用及び基質特異性 でんぷん、可溶性でんぷん、アミロース、ア
    ミロペクチン、グリコゲン等を加水分解してブ
    ドウ糖を生ずる。基質濃度１％では、各基質か
    らのブドウ糖の収率は100％であり、又生成し
    たブドウ糖の変旋光は正である。 至適PH及び安定PH範囲 至適PHはPH4.0である。PH３〜５で最も安定
    であるが、PH２〜９の範囲で室温に24時間放置
    しても失活がみられない。 作用適温の範囲 作用適温は75℃であり、アスペルギルス・ル
    チユエンシス及びフミコーラ・ラヌギノーサの
    グルコアミラーゼのそれより10℃高い値を示
    す。 PH、温度などによる失活の条件 PH２以下又はPH８以上で70℃、１時間の加熱
    処理により完全に失活する。従来公知のグルコ
    アミラーゼよりずつとすぐれた耐熱性を有し、
    70℃、10分間の加熱処理では92.5％の残存活性
    を示し、１時間の加熱処理でもなお48％の残存
    活性を示す。 阻害、活性化及び安定化 特別な活性化剤や安定化剤を必要としない
    が、塩化第２水銀やトリスによつて阻害を受け
    る。 分子量 アンドリウス（Andrews）の方法に基づ
    き、セフアデツクスＧ―150カラムを用いて測
    定した結果、分子量は約31000と認められる。 を有する、至適反応温度が75℃であり、温度70
    ℃、PH4.5、10分間の熱処理で90％以上の残存活
    性を有する新規な耐熱性グルコアミラーゼ。 ２ 下記の理化学的性質 作用及び基質特異性 でんぷん、可溶性でんぷん、アミロース、ア
    ミロペクチン、グリコゲン等を加水分解してブ
    ドウ糖を生ずる。基質濃度１％では、各基質か
    らのブドウ糖の収率は100％であり、又生成し
    たブドウ糖の変旋光は正である。 至適PH及び安定PH範囲 至適PHはPH4.0である。PH３〜５で最も安定
    であるが、PH２〜９の範囲で室温に24時間放置
    しても失活がみられない。 作用適温の範囲 作用適温は75℃であり、アスペルギルス・ル
    チユエンシス及びフミコーラ・ラヌギノーサの
    グルコアミラーゼのそれより10℃高い値を示
    す。 PH、温度などによる失活の条件 PH２以下又はPH８以上で70℃、１時間の加熱
    処理により完全に失活する。従来公知のグルコ
    アミラーゼよりずつとすぐれた耐熱性を有し、
    70℃、10分間の加熱処理では92.5％の残存活性
    を示し、１時間の加熱処理でもなお48％の残存
    活性を示す。 阻害、活性化及び安定化 特別な活性化剤や安定化剤を必要としない
    が、塩化第２水銀やトリスによつて阻害を受け
    る。 分子量 アンドリウス（Andrews）の方法に基づ
    き、セフアデツクスＧ―150カラムを用いて測
    定した結果、分子量は約31000と認められる。 を有する、至適反応温度が75℃であり、温度70
    ℃、PH4.5、10分間の熱処理で90％以上の残存活
    性を有する新規な耐熱性グルコアミラーゼを生産
    するタラロマイセス（Talaromyces）属の微生物
    を培地に培養し、培養物より該耐熱性グルコアミ
    ラーゼを採取することを特徴とする高度の耐熱性
    を有するグルコアミラーゼの製造法。
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