JPS6058071A - 固定化された微生物菌体もしくは酵素の製造法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は固定化された微生物菌体もしくは酵素の製造法
妃関し、その目的とするところは、基質との反応効率が
著しく高められた固定化された微生物菌体もしくは酵素
のゲルを得ることにある。

従来、微生物、酵素等をカラギーナン、寒天もしくはゼ
ラチン等で包括固定化する方法は、固定化に際し活性の
低下が起り難（、又食品衛生上安全な方法として近年食
品、医薬工業への応用が試みられている。

そして通常、微生物菌体もしくは酵素をカラギーナン、
寒天もしくはゼラチン等のゲル基材で包括固定化する場
合、これらのゲル基材を加熱溶解したものに該微生物菌
体もしくは酵素を懸濁したものを、冷却液中に注射器も
しくは多孔板等より滴下もしくは流下させることにより
、球状もしくは糸状のゲルに成型されている。その際、
ゲル粒子径の調整は、一般に滴下の流速を調節すること
により行なわれているが、これらのゲル基材を含有する
液は粘度が高（、又液滴は液体の表面張力と重力とのバ
ランスにより形成されるため１滴下に使用されるノズル
の外径より大きい粒子径のものしか成型することが出来
ない。かぐして、従来は一２勧〜！副程度の粒子径のも
のが得られてりる〇又ゲル包括法により固定化された微
生物もしくは酵素を用いて酵素反応を行なう場合、該酵
素反応を効率的に行なわせるには、該固定化ゲル中へ基
質を充分透過させることが極めて重要である。

この際、該ゲルは基質の移動に対し抵抗（拡散抵抗）を
示すため、ゲル粒子径の小さいもの程反応効率が高く、
又固定化微生物を用いる場合、従来の粒子径の大きいゲ
ル内の微生物はゲル表面の近辺で増殖し易−ｆ−（、該
酵素反応はゲルの表層近辺にしか寄与されない（福井等
編「酵素工学」第３ｇｇ〜３り！頁、東京化学同人社発
行）等の理由で。

反応効率を高めるには物質移動距離を短か（し、ゲル粒
子を微小化し、それに伴いゲルの表面積を増加させるこ
とが望まれている。

一方、マイクロカプセル法により微生物菌体もしくは酵
素を固定化した場合、微小粒子の成型は可能であるが、
このような成型操作が煩雑であることの他、モノマー、
重合触媒もしくは有機溶剤等を使用するため、活性を著
しく低下させる等の欠点がある。

本発明は、このような従来技術の欠点を解消し。

固定化された微生物菌体もしくは酵素のゲル粒子径を微
小とし、基質との反応効率の著しく高められた固定化ゲ
ルを容易に得ることができるようにしたものである。

即ち１本発明は微生物菌体、酵素をタンニンもしくは多
官能性架橋試薬で不溶化したもの、又は酵素を不溶化担
体に吸着したものを、そのまま。

或はこれらを水、または緩衝液、もしくは親水性有機溶
媒に懸濁したものを、水、または緩衝液、もしくは親水
性有機溶媒にゲル基材としてカラギーナン、寒天、もし
くはゼラチンを加熱溶解した液と、ゲル基材が固化せず
、かつ微生物菌体もしくは酵素が死滅もしくは失活しな
い温度で混合し−た液を、冷却液と噴霧接触させ微小ゲ
ルとすることを特徴とする固定化された微生物菌体もし
くは酵素の製造法である。

以下１本発明について詳述する。

先ず１本発明忙用いられる微生物菌体としては、細菌、
酵母、黴、放線菌等、如何なる種別の菌体でも良い０又
酵素も如何なる種別のものでも良く、例えばアルコール
脱水素酵素、グルコースオキシダーゼ、乳酸脱水素酵素
等の酸化還元酵素、Ｄ−グルタミルトランスフェラーゼ
、グルタミントランスアミネース、ヘキンキナーゼ等の
転移酵素、ロイシンアミノペプチダーゼ、カルボキシペ
プチダーゼ、ペプチダ−ゼ等の加水分解酵素、フマラー
ゼ、アスパルターゼ、β−チロシナーゼ等のリアーゼ酵
素、グルコースイソメラーゼ、マンノースイソメラーゼ
等の異性化酵素、グルタチオンシンターゼ、ＮＡＤシン
ターゼ等のりガーゼ酵素等が代表例として挙げられる０ 上記した酵素は、タンニンもしくは多官能性架橋試薬で
不溶化させるか、又は該酵素を不溶化担体に吸着させる
。

先ず、タンニンで不溶化させる場合は、酵素量に対し／
−１０倍量ｃＷ／Ｗ）のタンニンを含有する溶液を加え
、ｐＨざ以下、好ましくはｐＨＪ〜７で攪拌しつつ反応
させ、得られた酵素沈澱物より例えば遠心分離、濾過等
の通常の分離手段を用いて不溶化酵素を得る０ なお上記タンニンとしては、タンニン酸の他。

ピロガロールタンニン例えば没食子タンニン又は五倍子
タンニン、カテコールタンニン例えハ茶。

カカオ等から得られるタンニン質分（カテコール重合体
）等が用いられる。これらのタンニンはタンニン作用を
有する限り精製されていないものでも良（、例えば市販
の柿渋タンニン等も用いられる。これらは単独でも一種
以上のタンニン混合物としても用いることが出来る。

又、多官能性架橋剤で不溶化させる場合は、前記酵素を
ｌ−λ０４ｂＣＷ／Ｖ）の多官能性架橋剤を含有する液
に加え、！〜４１Ｑｃでｉｏ分〜／Ａ時間反応させ、得
られた酵素沈澱物より例えば遠心分離、濾過等の通常の
分離手段を用いて不溶化酵素を得る。

なお、多官能性架橋剤としては、ポリアルデヒ）”ｌＡ
、（／シアネート類等が適しており１例えばジアルデヒ
ドデンプングリオキザール、マロンアルデヒド、コハク
酸アルデヒド、グルタルアルデヒド、ピメリジアルデヒ
ド、ヘキサメチレンイソシアネー）、ｐ−）ルイレンジ
イソシアネート等が挙げられ、特にグルタルアルデヒド
が望ましい〇そして、酵素を不溶化担体に吸着させる手
段としては１通常の吸着剤１例えば活性炭、シリカゲル
、酸性白土、多孔質ガラス等、又ＤＥＡＥ−セファデッ
クス、　ＣＭ−セファデックス、ＤＥＡＥ−セルロース
、　ＣＭ−セルロース、アンバーライトＩＲ−り！、ダ
ウエックスー！θ等のイオン交換体等の不溶化担体をカ
ラムに詰めて前記酵素を通液するか、又は該不溶１し担
体を酵素と混合、攪拌して吸着させた後、これを必要に
より例えば遠心分離。

濾過等の分離手段により不溶化担体に吸着した酵素を得
る。なおその後、必要により、該酵素を吸着した不溶化
担体に前記多官能性架橋剤を加えて反応させてもよい。

次に上記した微生物菌体、酵素をタンニンもしくは多官
能性架橋試薬で不溶化したもの、又は酵素を不溶化担体
に吸着したものを、そのまま、或はこれらを水、または
緩衝液、もしくは親水性有機溶媒に懸濁したものを、水
、または緩衝液、もしくは親水性有機溶媒にゲル基材と
してカラギーナン、寒天、もしくはゼラチンを約７０Ｃ
以上で加熱溶解した液または該液を適当に冷却した液と
。

、ｊｊ−ｊｊＵ程度のゲル基材が固化せず、かつ微生物
菌体もしくは酵素が死滅もしくは失活しない温度で混合
してゲル基材が溶解した液を得る。

これに用いる緩衝液としては、例えば酢酸緩衝液、マツ
キルヴエイン緩衝液、リン酸緩衝液、トリス緩衝液、ベ
ロナール緩衝液等が挙げられ、父親水性有機溶媒として
は、メチルアルコール、エチルアルコール、フロビルア
ルコール、アセトン等が挙げられ、これらの有機溶媒は
通常１０−λθ係（Ｗ／Ｖ）程度で用いられる。

そしてゲル基材としてのカラギーナン及び寒天は通常Ｏ
１ｊ〜３．０係（Ｗ／Ｖ）程度で、又ゼラチンはｇ−コ
ｏｓ（ｗ７ｖ）程度で用いられる。

次に上記した如くゲル基材を混合し溶解した溶液を、噴
霧器、好ましくは加圧噴霧器を用いて冷却液と噴霧接触
させることにより微小な固定化された微生物菌体もしく
は酵素を得る。

これに用いる冷却液としては例えば塩化カリウム、塩化
アンモニウム−塩化アルミニウム笹の索溶液１例えばこ
れらをｌ−一〇壬（Ｗ／Ｖ）程度含有した水溶液、オリ
ーブ油、コーン油、パーム油、マツコー鯨頭油、魚油等
の動植物油、スピンドル油、タービン油等の鉱物油、シ
リコーン油。

ボイル油、スタンド油等の合成油、リノール酸。

リルイン酸、オレイン酸等の不飽和脂肪酸等が用いられ
、これらをＩＯＣ以下に冷却した液が用いられる。

なお、上記ゲル基材としてカラギーナンを用いる場合、
塩１じカリウム、塩化アンモニウム、塩化アルミニウム
等の水溶液の冷却液を用いるのが好ましく、又ゲル基材
として寒天もしくはゼラチンを用いる場合、動植物油、
鉱物油１合成油、不飽和脂肪酸等の冷却液を用いるのが
望ましい０そして固定化された微生物菌体もしくは酵素
を得る際の噴霧接触手段としては、通常加圧噴霧用ノズ
ルを用いて噴霧するのが好ましい０その際。

圧力ノズルとしては例えば単純ジェット型ノズル、衝突
ジェット型ノズル、渦巻き型ノズル、２流体型ノズル等
の加圧噴霧ノズルが用いられる０また。

回転円板噴霧器もしくは音波、静電気、振動等を利用し
た噴霧器等も用いられる。そして加圧噴霧する場合の噴
霧圧力は’　、ｊ−Ａ　００　”ｊ’　／　ｃａ　―Ｇ
　。

好ましくは／　−／ユ’　”ｔ　／　ｃａｔΦＧ程度で
ある。

又、これらの加圧噴霧条件は、使用する菌体及び酵素の
種類、アルギン酸塩の濃度、ノズルの種類等により影響
を受けるので、それにより適宜選択される〇 そして固定化された微生物菌体もしくは酵素のゲル粒子
の大きさは、ａ常平均粒子径が、最大限ｇｏｏ〜？θ０
ミクロン以下であるが、本発明においては平均粒子径が
ｔｏ１１７ミクロン以下となるように調竪することが望
ましく、このような微粒子とすることにより基質との反
応効率を著しく高めることか出来る。

そして、殊に固定１１Ｓ微生物菌体を上記の如（、！θ
Ｏミクロン程度以下の微粒子とすれば、例えば該菌体な
用いて発酵させる際、予じめ培養培地で培養することに
より該菌体な増殖させる操作も不要となり、該微生物菌
体を直接発酵に供し得る等の格段に優れた利点を有する
。

以上の如（、本発明により固定化された微生物菌体もし
くは酵素を用いれば、基質との反応効率を著しく高める
ことが出来、又該酵素を種々の基質に繰り返し使用して
も、該固定化された酵素含有ゲルからの脱離が著しく抑
制される等１本発明は産業上極めて有意義である。

以下、実施例により本発明をさらに具体的に説明する。

実施例　１ タンニン酸〔和光紬薬（株）製〕λノを２０ｍ乙の０．
０才Ｍトリス緩衝液（ｐＨ７，０）に溶解したものと、
アスペルギルス・オリゼーＦＥＲＭ　Ｐ　−／／ゲタの
皺培養物より硫安分画し、ＤＥＡＥ−セルロースを用い
て精製したロイシン・アミノペプチダーゼ標品ユｏｏｍ
９をλ０祷のｏ、ｏｊＭトリス緩衝液ＣｐＨ７，ｏ）に
溶解したものとを充分混合シ、該ロイシン・アミノペプ
チダーゼを不溶１しく沈澱）させた。

該沈澱物を常法により遠心分離した後、上述のトリス緩
衝ｉ＆ｃｐＨ７，０）で４回洗滌した。

得られた不溶１し酵素（乾物量として３００ｍ１）に、
／％（Ｗ／Ｖ）の寒天濃度となるように寒天に水を加え
たものを９ＩＣで加熱溶解し、ついでｙｓｃに冷却した
寒天水溶液−〇ｍｂを加えて混合しく混合時の温度：　
４ｔ　ｏＣ）、これをエアーレス−スプレイヤー〔コ流
体型、ノズル口径：０．！陶、噴霧圧力ニ　、７　、　
ｏＫｙ／ｃｒＡ　＊　Ｇ、英国バーゲス社製〕でｊＣに
冷却したコーン油中に加圧噴霧し、平均粒子径１００〜
λｓｏミクロンの微粒子状に固定化されたロイシン・ア
ミノペプチダーゼを得た（実施例１の固定化酵素）。

実施例１の固定化酵素の活性を、従来法で固定化された
ロイシン・アミノペプチダーゼである対照−１および対
照−２の活性と比較した結果は第１表に示すとおりであ
る。なお、 対照−に上記の不溶化酵素（ロイシン拳アミノペプチダ
ーゼ）　Ｊ　００ｍ９に７１（Ｗ／Ｖ）の寒天濃度とな
るように寒天に水を加えたものをり５溶液ユ０１を加え
て混合しく混合時の温度：＜ｔ。

Ｃ）、これを注射器（口径：λｒａｎ）を用いてＳＣに
冷却したコーン油中に滴下して得た平均粒子径！祁の球
状に固定化されたロイシン・アミノペプチダーゼであり
。

対照−２：上記の不溶化酵素（ロイシン・アミノペプチ
ダーゼ）３００１ｎｇに／％（Ｗ／Ｖ）の寒天濃度とな
るように寒天に水を加えたものを９オＣで加熱溶解し、
ついで４１ＩＣに冷却した寒天水浴液コｏｍｂを加えて
混合しく混合時の温度ニゲＯＣ）、これを注射器（口径
：　／　ａ　）を用いてＩＣに冷却したコーン油中に滴
下して得た平均粒子径２論の球状に固定化されたロイシ
ン・アミノペプチダーゼである。

また、相対酵素活性の測定試験は、上記の各固定化酵素
（Ｏ１λ？）を用いてそれぞれロイシン−ｐ−ニトロア
ニリドを基質として中台の方法〔中台忠信、日本醤油研
究所報告３．　９９（／り７７年〕〕で測定することに
より行ない、得られた活性値を。

した相対＃素活性値（嗟）を示したのが第１表である。

第１表 第１表より明らかな如（、実施例１の固定化酵素は、対
照の固定１し酵素の何れに比しても著しく酵素活性値の
高いものである０ 実施例　２ 豚の心臓起源の乳酸脱水素酵素（ベーリンガー社Ｍ）／
ＤＯダを０．θ！Ｍ酢酸緩衝液（ｐＨ７，０）コｏｍｂ
に溶解し、λ、、＋　１　（Ｗ／Ｖ　）グルタルアルデ
ヒド水浴液を５ｖｒｔ加え、攪拌しつつコＯＴ）：、’
９３θ分間反応させ、得られた不溶化酵素を常法により
遠心分離した後、０，０３Ｍ酢酸緩衝液（ｐＨｊ））３
ｏｏｍｂで洗浄後、不溶化酵素を得た。

得られた不溶化酵素！Ｏ■に０．ｏｊＭ酢酸緩衝ＷＣｐ
Ｈｚ、ｔ）ｔｏ祷を加え懸濁した液に、ｌ−２％（Ｗ／
Ｖ）のゼラチン濃度となるようにゼラチンに水を加えた
ものをｇｏｃで加熱溶解し、ついで４１ＩＣに冷却した
ゼラチン水浴液Ｊ−０７７１８を加えて混合しく混合時
の温度：　３７Ｃ）、これをワグナ−ハンディ−ベイン
ターＷ　−／　７　ｏ　（λ流体型。

ノズルロ径：ｏ、７ｔｒａ、日本ワグナ−スプレーテッ
クス社↓）でＩＣに冷却したシリコーン油中に噴霧圧力
ｌλＯＫｐ／ｃｉ”Ｇで加圧噴霧し、平均粒子径／Ｊ−
１７〜λｓｏミクロンの微粒子状に固定化された乳酸脱
水素酵素を得た（実施例２の固定化酵素）０ 実施例２の固定化酵素の活性を、従来法で固定化された
乳酸脱水素酵素の活性と比較した結果は第２表に示すと
おりである。なお、 対照−１：上記の不溶化酵素（乳酸脱水素酵素）ｔｏｍ
ｇに００−０ｊ酢酸緩衝液（ｐＨｊ、ｊ　）　ｊ　Ｏ罰
を加えて懸濁した液に、１２％（Ｗ／Ｖ）のゼラチン濃
度となるようにゼラチンに水を加えたものをｇＯＣで加
熱溶解し、ついでｌＩＣに冷却したゼラチン水溶液！０
祷を加えて混合しく混合時の温度：、？７Ｃ）、これを
注射器（口径：コ■〕を用いてｊＣに冷却したシリコー
ン油中に滴下して得られる平均粒子径ｊＮＩＩの球状に
固定化された乳酸脱水素酵素であり、 対照−２二上記の不溶化酵素（乳酸脱水素酵素）ｔｏＩ
ｎｇに０．０３ＭＭ￥酸緩衝液（ｐＨｊ、ｚ）ｓ。

ｍｌを加えて懸濁した液に、１２％（Ｗ／Ｖ）のゼラチ
ン濃度となるようにゼラチンに水を加えたものをｇｏＣ
で加熱溶解し、ついでｌｊＣに冷却したゼラチン水溶液
！θ幅を加えて混合しく混合時の温度：、７７Ｃ）、こ
れを注射器（口径：ｉｍ）を用いてＪＣに冷却したシリ
コーン油中に滴下して祷られる平均粒子径ｉ　、ｊａの
球状に固定化された乳酸脱水素酵素である。

また、相対酵素活性の測定試験は、上記の各固定化酵素
（ｏ、２ｇ）を用いてそれぞれピルビン酸を基質として
ストルセンバツハの方法〔ストルセンバツハ、メソッド
−イン・工／チモロジ−９゜４７ｇ−２ｇ’ｇ（１９ｂ
＆）〕で測定することにより行ない、得られた活性値を
、対照−１の標品（酵素活性値；　ｉｏｏ％）と比較し
た相対酵素活性値（％）を示したのが第２表である０第
　２　表 第２表より明らかな如く、実施例２の固定化酵素は、対
照の固定４し酵素の何れに比しても著しく酵素活性値の
高いものである０ 実施例　３ サイロイドコグｌ〔富士デグイソン化学（株）製〕ｉｙ
とウレアーゼ（タイプ９．シグフ社製〕ｉｏｏダをｏ、
ｏ！Ｍトリス緩衝液（、ｐＨ７，０）に加えて混合し、
ＩＣで約１時間攪拌することによりウレアーゼを該サイ
ロイドに吸着させ１次いでこれを常法により遠心分離し
た後、上記ト１ノス緩衝液（ＰＨ７，１７）で洗滌した
。

得られたサイロイドに吸着した酵素ｓｏＩｎｇを、１２
％（Ｗ／Ｖ）のゼラチン濃度となるようにゼラチンに水
を加えたものをｇＯＣで加熱溶解し、ついでｊＯＣに冷
却したゼラチン水浴液−〇ｍＡと混合しく混合時の温度
：　ＩＩ　、ｔＣ）、これを実施例２で用いたワグナ−
ハンディ−ベインターＷ−／７０でｊＣに冷却したリノ
ール酸液中に噴霧圧力ｓ　、ｓＫｙ／ｃｒＡ・Ｇで加圧
噴霧して平均粒子径７５０〜３００ミクロンの微粒子状
に固定化されたウレアーゼを得た（実施例３の固定化酵
素）０実施例３の固定化酵素の活性を、従来法で固定化
されたウレアーゼである対照の活性と比較した結果は第
３表に示すとおりである。

なお、対照は、上記のサイロイドに吸着した酵Ｘ　（ウ
Ｌ’７−セ）　ｊ　Ｏｍｇを７λ％（Ｗ／Ｖ）のゼラチ
ン濃度となるようにゼラチンに水を加えたものをｇｏＣ
で加熱溶解し、ついでｇＯＣに冷却したゼラチン水溶液
コｏｒｎｂと混合しく混合時の温度：ダＩＣ）、これを
注射器（口径：／ｗ）を用いてＩＣに冷却したリノール
酸液中に滴下して得られる平均粒子径コ　ｏｍの球状に
固定化されたウレアーゼである。

また、相対酵素活性の測定試験は、上記の各固定化酵素
（Ｏ２＝？〕を用いてそれぞれ尿素を基質としてライセ
ルの方法〔ライセル・エフ・ジエー、ジ・エンチームス
３版、！、７〜コ／（／９７／））で測定することによ
り行ない、得られた活性値を、対照の標品（酵素活性値
＝ＩＯθ％）と比較した相対酵素活性値（％）を示した
のが第３表である。

第　３　表 第３表より明らかな如く、実施例３の固定化酵素は対照
の固定化酵素に比し著しく酵素活性値の高いものである
。

実施例　４ グルコース２％（Ｗ／Ｖ）、ペプトン１％（Ｗ／Ｖ）、
酵母ｘ　＊　ス／　％　（Ｗ　／　Ｖ　）　、及び食塩
ｉ。

％（Ｗ／Ｖ）を含む培養培地ＣｐＨ！、ｊ）ｔ、１を３
にフラスコに入れ、常法により殺菌した後、該培地にザ
ツカロミセス・ルキシーＡＴＣＣ／　０　、？　ｇ　Ｊ
の種培養液ｉｏ祷を接種し、３０Ｃで７λ時間振盪培養
した。得られた培養終了液ｌ！を遠心分離して集菌し、
これを凍結乾燥した後、！？の乾燥酵母菌体を得た。

得られた酵母菌体！？を、１％（Ｗ／Ｖ）のカラギーナ
ン濃度となるようにカンバー〇カラギーナンにｏ、ｏｓ
Ｍトリス緩衝液（ｐＨ７，Ｏ）を加えたものを９ＤＣで
加熱溶解し、ついでグオＣに冷却したカラギーナン水溶
液６００１ｊＬｂと混合しく混合時の温度ニゲＯ）、こ
れを３！の密閉圧力容器に投入し、これにヘリウムガス
を導入後、該圧力容器内の圧力をｌＯＭ／Ｃ１／Ｉ＠Ｇ
に調整し１次いでノズル〔匂ＭＫＢＯＩｉｏ３ｇ型、ノ
ズルロ径：ｏ、ｔｔｍ、いけうち（株）製〕のコックを
開け、−３Ｃに冷却した７０％（Ｗ／Ｖ）塩化カリウム
水浴液中に加圧噴霧して平均粒子径２！０−３００ミク
ロンの微粒子状に固定化された酵母菌体を得た（実施例
４の固定化酵母）０ 実施例４の固定化酵母のアルコール生産性を従来法で固
定化された酵母菌体である対照−１および対照−２のア
ルコール生産性と比較した結果を第４表に示す。なお。

対照−１：上記の酵母菌体、５′ノを、７％（Ｗ／Ｖ）
のカラギーナン濃度となるようにカツノく−・カラギー
ナンにｏ、ｏタＭトリス緩衝液（ｐＨ７，ｏ）を加えた
ものを９０Ｃで加熱溶解し、ついでなΔ′Ｃに冷却した
カラギーナン水溶ｇ　ｔ　ｏ　ｏ　ｒｎｂと混合シ（混
合時の温度：＋ＯＣ）、これを注射器（口径：コ割−）
を用いて一３Ｃに冷却した７０％（Ｗ／Ｖ）塩化カリウ
ム水溶液中に滴下して得られる平均粒子径５ｔｒｒｒｈ
−の球状に固定化された酵母菌体であり、 対照−２＝上記の酵母菌体！ノを、１％（Ｗ／Ｖ）のカ
ラギーナン濃度となるようにカツノく−・カラギーナン
にＯ，Ｏｊ”Ｍ）リス緩衝液（１）Ｈ７−１７）を加え
たものを９θＣで加熱溶解し、ついで４ｔｊＣに冷却し
たカラギーナン水溶液ＪＯＯｍｌと混合しく混合時の温
度：ｙｏＣ）、これを注射器（口径：　／　ｍｒｈ　）
を用いて一３Ｃ釦冷却したＩＱ％（Ｗ／Ｖ）塩化カリウ
ム水浴液中に滴下して得られる平均粒子径−勤−の球状
に固定化された酵母菌体である。

また、アルコール生産性の測定は、グルコースｇ％（Ｗ
／Ｖ）、ペプトン１％（Ｗ／Ｖ）、酵母ｘキスｏ　、、
７％（Ｗ／Ｖ）、及び食塩／ｇ％（Ｗ／Ｖ）を含む培地
（ｐＨｔ、ａ　）　ｉ　ｏ　ｏｍｂをｔｏ。

！フラスコに入れ、常法により殺菌した後、該培地に上
記の各固定化酵母（湿潤菌体）！ｌ加え。

夫々の培地で３θＣ１３日間靜置培養した培養液のアル
コール濃度を測定することにより行なった。

その結果を第４表に示す。

第４表 第４表より明らかな如（、実施例４の固定化酵母を用い
れば、対照の固定化酵母の何れを用いた場合よりもアル
コール生成量は著しく向上することが認められた。

出願人　キッコーマン株式会社

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 （１）微生物菌体、酵素をタンニンもしくは多官能性架
   橋試薬で不溶化したもの、又は酵素を不溶化担体に吸着
   したものを、そのまま、或はこれらを水、または緩衝液
   、もしくは親水性有機溶媒に懸濁したものを、水、また
   は緩衝液、もしくは親水性有機溶媒にゲル基材としてカ
   ラギーナン、寒天、もしくはゼラチンを加熱溶解した液
   と、ゲル基材が固化せず、かつ微生物菌体もしくは酵素
   が死滅もしくは失活しない温度で混合した液を、冷却液
   と噴霧接触させ微小ゲルとすることを特徴とする固定化
   された微生物菌体もしくは酵素の製造溶液、塩化アルミ
   ニウム水溶液、動植物油、鉱物油１合成油及び不飽和脂
   肪酸より選ばれた少なくとも１種ｉ秦迦卓である特許請
   求の節囲筬ｌ頂記載の固定化された微生物菌体もしくは
   酵素の製造法０ （３）　ｏ　、　ｓ〜ｔ、　ｏ　ｏＫｙ／ｃｌｔ　＊　
   Ｇの噴霧圧力で。 加圧噴霧することを特徴とする特許請求の範囲第１項記
   載の固定化された微生物菌体もしくは酵素の製造法。 （４）固定化された微生物菌体もしくは酵素のゲル平均
   粒子径がｔｏｏ　ミクロン以下である特許請求の範囲第
   １項記載の固定１しされた微生物菌体もしくは酵素の製
   造法。 （５）多官能性架橋試薬がグルタルアルデヒドである特
   許請求の範囲第１項記載の固定化された微生物菌体もし
   くは酵素の製造法０