JPS606630B2 - ２―デオキシ―ｄ―グルコースの製造法 - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】 この発明は２ーデオキシ−Ｄーグルコースの新規な製造
法に関するものである。

この発明の目的物質である２ーデオキシ−Ｄ−グルコー
スは公知物質であり｛例えば「糖質化学便覧」（共立出
版株式会社、昭和４６年８月１５日発行）第２５頁参照
｝例えば生化学的研究用試薬として使用されている。

従来、この２ーデオキシーＤ−グルコースは植物からの
抽出あるいは合成法によって製造されるということが知
られているが、このような方法は２−デオキシ−Ｄ−グ
ルコースの生産にはかならずしも充分ではない。

この発明者等は、このような点から鋭意研究の結果、ス
トレプトマィセス属に属する菌が２−デオキシーＤ−グ
ルコースを生産するという新知見を得、さらに研究を続
けた結果、この発明を完成した。

この発明で使用される２ーデオキシ−Ｄーグルコース生
産菌のうち、この発明者等が高知県宿毛市の±穣から新
たに分離した菌株（Ｎｏ．４９４３と番号を付す）は次
のような菌学的性状を有する。

１ 形態学的性質 シュークロース・硝酸塩寒天、グリセリン・ァスパラギ
ン寒天、イースト・麦芽寒天、オートミール寒天および
スターチ・無機塩寒天の各平板培養基上で２５ｑｏ、１
４日間培養した後、顕微鏡下で観察した結果は次のとお
りである。

‘１｝ 胞子形成菌糸の分枝法 単純分枝 ■ 胞子形成菌糸の形態 直〜曲状（Ｒｅｃｔ船ｘｉｂｉｌｅｓ）。

気菌糸は比較的枝分れが少なく、まつすぐに伸び、時に
は５の固以上の胞子が連鎖している。

（３’胞子の表面構造及び大きさ 平滑（Ｓｍｏｏｔｈ）、０．３〜０．９×１．２〜２．
０山｛４｝ 鞭毛胞子の有無認められない。

【５）胞子のうの有無 認められない。

｛６｝ 胞子柄の着生位置 気菌糸上 ｛７ー 栄養菌糸の分断 認められない。

０ 各種培地における生育状態 下記各種培地における生育状態は、２５００、１０〜１
４日間培養後の観察である。

ｍ 生理学的性質 （１｝ 生育温度範囲〔ベネット（Ｂｅｎｎｅｔｔｓ）
寒天培地上〕１０〜３５００、最適生育温度２５００。

■ ゼラチンの液化（グルコ−ス・ベプトン・ゼラチン
塔地上）液化しない。

糊 スターチの加水分解（スターチ・無機塩寒天培地上
）加水分解する。

【４ー 脱脂牛乳の凝固およびべプトン化凝固しない、
弱くべプトン化する。

｛５） メラニン様物質の生産（チロシン寒天、ベプト
ン・イースト・鉄寒天およびトリプトン・イースト・フ
ロス） 生産しない。

■ 各種炭素源の利用性 Ｌーアラビノース ＋ セ′レロ‐−ス Ｄ−フラクトース ＋ Ｄ−グルコース ＋ ガラクトース ＋ イノシトール マソノース 士 Ｄーマンニトール Ｌーラムノース ラフイノース 士 夕 シェークロース ＋ サリシン Ｄ−キシロース ＋ （十：よく利用する、士：利用性疑わし い、一：利用しない） Ｚ以上のような
菌学的性質を有する菌株について、パージエイズ・マニ
アル・オブ・デイタミナテイブ・バクテリオロジー（Ｂ
ｅｒｇｅｙ’ ｓＮねｎ雌ｌｏｆＤｅにｒｍｉｎａｔｉ
ｖｅＢａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ）第８版（１９７３年）
、ィー・ビー・シヤーリングおよびデＺ一・ゴツトリー
ブ（Ｅ．Ｂ．Ｓｈｉｒｌｉｎｇ ａｎｄ Ｄ．ＧｏｔＵ
ｉｅｂ）著のＩＳＰ（ｌｎｔｅｒｎａｔｉｏ岬ＩＳｔｒ
ｅｐｔｏｍｙｃｅｓＰｒｏｇｅｃｔ）報告｛インターナ
ショナル・ジャーナル・オブ・システマテイツク・バク
テリオロジー第１８巻第６９頁、（１９６８年）、同第
１９巻第３９１頁（１９６ｇ王）および同第２２巻第２
６５頁（１９７２王）｝ およびエス・エ・ワックスマ
ン（Ｓ・Ａ・Ｗａｋｓｍａｎ）著、ジ・アクチノミセテ
ス（ＴｈｅＡｃｔｉｎｏｍｙｃｅにｓ）第２巻（１９６
１年）等の文献をもとに検索を行った。

その結果Ｎｏ．４９４３珠と比較的近縁する菌種として
下記の菌種が挙げられる。すなわち、ストレプトマイセ
ス・オステレオグリゼウス（Ｓｔｒｅｐ■ｍｙｃｅｓｏ
ｓｔｒｅｏｇｎｓｅｕｓ）、トレプトマイセス・ルシフ
エンシス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓｒｅｃｉｆｅｎｓ
ｉｓ）およびストレプトマイセス・キサントシデイカス
（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓｘａｎｔｈｏｃｊｄｉｃｕ
ｓ）。これらのうち、ストレプトマイセス・オステレオ
グリゼウスはラムノースを利用する点で、またストレプ
トマィセス・レシフェソシスは、気菌糸がループ（ｌｏ
ｏｐ）、フック（ｈｏｏｋ）を形成し、マソニトールを
利用する点で、それぞれＮｏ．４９４３珠と異なる。し
かし、ストレプトマィセス・キサントシディカスは該菌
がメラニン様物質の生産は不安定であるという点以外は
Ｎｏ．４９４３株と最も近似し、しかも原記載ではスト
レプトマィセス・キサントシディカスのメラニン様物質
の生産は陰性となっていることから、結局Ｎｏ．４９４
３株をストレプトマィセス・キサントシデイカスＮＯ．
４９４３と命名した。このストレプトマイセス・キサン
トシデイカスＮｏ．４９４３※ま工業技術院微生物工業
技術研究所に微生物受託番号第４１３５号として、寄託
されている。

ストレプトマィセス属に属する２ーデオキシ−Ｄ−グル
コース生産菌は、例えば紫外線、Ｘ線等の照射処理、Ｎ
ーメチルーＮ′ーニトローＮ−ニトロソグアニジン（Ｎ
ＴＧ）、５ーブロモウラシル、２ーァミノプリン等の薬
剤による処理、形質転換、形質導入、接合等の通常用い
られる菌株変異処理方法によって２ーデオキシ−Ｄ−グ
ルコースの生産能を高めることができる。

培養方法は原則的には一般微生物の培養方法に準ずるが
、通常は液体培地による深部培養法が有利である。

培養に用いられる培地としては、ストレブトマィセス属
に属する２ーデオキシ−○ーグルコース生産菌が利用す
る栄養源を含有する培地であればよい。すなわち、合成
培地、半合成培地あるいは天然０培地が用いられ、培地
の組成は、炭素源としては例えばグルコース、マンノー
ス、グリセリン、糠密、でん粉、液化でん粉等が用いら
れ、窒素源としては肉エキス、カゼイン加水分解物、ベ
プトン、グルテンミール、コーンミール、棉実粕、大タ
豆粉、コーンスチープリカー、乾燥酵母、りん酸アンモ
ニウム、硫酸アンモニウム、尿素等が用いられる。

また、例えばりん酸水素２ナトリウム、りん酸２水素カ
リウム、炭酸カルシウム、硫酸第一鉄、硫酸マグネシウ
ム、硫酸鋼、硫酸亜鉛、塩０化マンガン、塩化マグネシ
ウム等の金属のりん酸塩、炭酸塩、塩化物等の無機塩も
必要に応じて添加される。また、培養中発泡の著しい時
には、例えば大豆油、亜麻仁油等の植物油、オクタデカ
ノール・テトラデカノール、ヘブタノール等の高級タア
ルコール類、シリコン化合物等の消泡剤を適宜添加すれ
ばよい。培養温度は３０００前後が適当である。

培養容量の増大に従って適宜種培養を行なうと好結果が
得られることが多い。本培養の培養時間は５０〜１００
時０間位が適当であり、培地の濃厚化に従って、培養時
間をさらに延長してもよい。以上述べた培養条件は使用
生産菌株の特性に応じてそれぞれ最適の条件を選択して
適用される。

このようにして培養物中に蓄積された２ーデオキシ−Ｄ
−グルコースは主に培養液中に含有されているので、遠
心分離またはろ過により培養物から菌株を除去した後、
ろ液から一般抗生物質の製造に用いられる常法の手段に
よって分離、採取、精製される。すなわち、減圧濃縮、
凍結乾燥「溶媒抽出、液性交換、例えば陰イオン交換樹
脂、陽イオン交換樹脂、非イオン性吸着樹脂等による処
理、例えば活性炭、けし、酸、シリカゲル、アルミナ等
の吸着剤による処理、結晶化、再結晶等の手段を単独、
あるいは任意の順序に組合わせ、また反復して用いてろ
液から２−デオキシ−Ｄ−グルコースは分離、採取、精
製される。このようにして得られる２ーデオキシーＤ−
グルコースは、前記のように生化学的研究用試薬として
有用であり、また、この化合物は、スタヒロコッカス・
アウレウス、ェセリヒア・コリ等の病原菌に対し活性を
有するほか、ビールスに対しても活性を有する。

さらにまた、この２−デオキシ−Ｄ−グルコースは他の
抗ビールス剤（例えば３−デアザゥリジン）と併用効果
を有する旨の報告もある｛例えば、アンチミクロバイア
ル・ェ−ゼントアンドケモセラピー（ＡＮＴＩＭＩＣＲ
ＯＢＩＡＬＡＧＥＮＴＳＡＮＤＣＨＥＭＯＴＨＥＲＡＰ
Ｙ）、３月号、１９７７年、第４７５〜４８１頁｝。次
にこの発明の実施例を示す。

実施例 １ グリセリン４％、ファーマメディア（商標、トレーダー
ズ・オイル・ミル社製）０．５％、月率芽０．５％、モ
ラティン（商標、鐘激化学工業株式会社製）０．２５％
、コーンスチープリカ−０．２５％、りん酸２水素カリ
ウム０．５％およびりん酸水素２ナトリウム（ＩＺｋ加
物）０．５％の組成の培地２０夕を３０〆客の発酵槽に
入れ、常法により滅菌した後、これにでん粉１％、ファ
ーマメディア１％およびモラティン１％の組成の培地で
培養したストレプトマィセス・キサントシディカスＮｏ
．４９４３の培養物１そを接種し、３０ｏＣで７雛寺間
培養する。

培養終了後、培養物を炉過し、得られた炉液２０〆を和
光製薬株式会社製クロマト用炭素３０そを充てんしたカ
ラムに通す。有効成分を５０％メタノールで熔出し、溶
出液を減圧下で濃縮し、得られた濃縮液２そをＤＥＡＥ
セフアデツクス（ＯＨサイクル）に吸着させる。有効成
分を水で溶出し、濃縮して得られた濃縮液１０の‘をセ
ルロースカラム（５００地）に吸着させる。有効成分を
ブタノール：水（９０：１０）の漉液で溶出する。活性
区分を濃縮乾固すると白色粉末１夕が得られる。この粉
末をエタノールから再結晶すると無色針状結晶９００の
９が得られる。この結晶の赤外線吸収スペクトルは第１
図の通りであり、２ーデオキシ−Ｄ−グルコースの標品
のそれと一致した。

【図面の簡単な説明】

第１図はこの発明で得られる２−デオキシーＤ−グルコ
ースの赤外線吸収スペクトルを示す。

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. １ ストレプトマイセス属に属する２−デオキシ−Ｄ−
   グルコース生産菌を培地に培養し、得られた培養物から
   ２−デオキシ−Ｄ−グルコースを分離、採取することを
   特徴とする２−デオキシ−Ｄ−グルコースの製造法。