JPS6084298A - 新規生理活性ポリペプチドおよびその製造法 - Google Patents
新規生理活性ポリペプチドおよびその製造法Info
- Publication number
- JPS6084298A JPS6084298A JP58194539A JP19453983A JPS6084298A JP S6084298 A JPS6084298 A JP S6084298A JP 58194539 A JP58194539 A JP 58194539A JP 19453983 A JP19453983 A JP 19453983A JP S6084298 A JPS6084298 A JP S6084298A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- lys
- asn
- glu
- leu
- phe
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/70—Vectors or expression systems specially adapted for E. coli
- C12N15/72—Expression systems using regulatory sequences derived from the lac-operon
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/52—Cytokines; Lymphokines; Interferons
- C07K14/555—Interferons [IFN]
- C07K14/57—IFN-gamma
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/67—General methods for enhancing the expression
- C12N15/69—Increasing the copy number of the vector
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Zoology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Virology (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Oncology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Saccharide Compounds (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は、新規な生理活性ポリペプチドおよびその製造
法に関する。
法に関する。
本発明における生理活性ポリペプチドは、成熟ヒト・ガ
ンマインターフェロン（免疫インターフェロンとも呼ば
れる）に含まれるアミノ酸配列を右するが、それとは物
理化学的な性質を異にし且つそれに比べ非常に高い抗ウ
ィルス並びに抗細胞増殖活性をイアする新規なポリペプ
チドである。また、本発明は、組換えＤＮＡ技術を用い
た該新規ポリペプチドの製造法並びに該ポリペプチドを
含イＹする培養組改、物に関するものである。
ンマインターフェロン（免疫インターフェロンとも呼ば
れる）に含まれるアミノ酸配列を右するが、それとは物
理化学的な性質を異にし且つそれに比べ非常に高い抗ウ
ィルス並びに抗細胞増殖活性をイアする新規なポリペプ
チドである。また、本発明は、組換えＤＮＡ技術を用い
た該新規ポリペプチドの製造法並びに該ポリペプチドを
含イＹする培養組改、物に関するものである。
インターフェロンは、その物理化学的並びに免疫学的性
質などから、α、β、Ｔ型の３種に分けられている。い
ずれも抗ウィルス活性を有するポリペプチドからなる物
質であるが、特にＴ型インターフェロン（免疫インター
フェロントモ呼ばれる）は、α、β型インターフェロン
に比べ、細胞増殖抑制効果が強いことから、抗ウイルス
製剤の他に抗腫瘍剤や免疫調節剤としての利用が注目さ
れている。ヒト・ガンマインターフェロン（以下ｈｌＦ
Ｎ−７と略す）Ｋついては、１９８１年１０月米国サン
フランシスコで開かれた第２回インターフェロン研究国
際会議（Ｔｈｅ ５ｅｃｏｎｄ ＡｎｎｕａｌＩｎｔｅ
ｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｃｏｎｇｒｅｓｓ ｆｏｒ Ｉｎ
ｔｅｒｆｅｒｏｎＲｅｓｅａｒｃｈ ）において、その
アミノ酸配列が示され、その後該アミノ酸配列をコード
しているヒト遺伝子のＤＮＡ配列も明らかにされている
（Ｒ。
質などから、α、β、Ｔ型の３種に分けられている。い
ずれも抗ウィルス活性を有するポリペプチドからなる物
質であるが、特にＴ型インターフェロン（免疫インター
フェロントモ呼ばれる）は、α、β型インターフェロン
に比べ、細胞増殖抑制効果が強いことから、抗ウイルス
製剤の他に抗腫瘍剤や免疫調節剤としての利用が注目さ
れている。ヒト・ガンマインターフェロン（以下ｈｌＦ
Ｎ−７と略す）Ｋついては、１９８１年１０月米国サン
フランシスコで開かれた第２回インターフェロン研究国
際会議（Ｔｈｅ ５ｅｃｏｎｄ ＡｎｎｕａｌＩｎｔｅ
ｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｃｏｎｇｒｅｓｓ ｆｏｒ Ｉｎ
ｔｅｒｆｅｒｏｎＲｅｓｅａｒｃｈ ）において、その
アミノ酸配列が示され、その後該アミノ酸配列をコード
しているヒト遺伝子のＤＮＡ配列も明らかにされている
（Ｒ。
１） ｅｖｏｓ ら、 Ｎｕｃｌ、Ａｃ１ｄ、Ｒｅｓ、
、匹： ２４Ｂ７．１９８２およびＰ、Ｗ、Ｇｒａｙら
、 Ｎａｔｕｒｅ ２９５＋５０３゜１９８２）。さら
に、ヒトリンパ球由来のｍＲＮＡから調製したｃＤＮＡ
を用いたプレｈＧＩＦ−７および成熟ｈｌＦＮ−Ｔの製
造法に関する特許も公開されている（特開昭５８−９０
５１４）。
、匹： ２４Ｂ７．１９８２およびＰ、Ｗ、Ｇｒａｙら
、 Ｎａｔｕｒｅ ２９５＋５０３゜１９８２）。さら
に、ヒトリンパ球由来のｍＲＮＡから調製したｃＤＮＡ
を用いたプレｈＧＩＦ−７および成熟ｈｌＦＮ−Ｔの製
造法に関する特許も公開されている（特開昭５８−９０
５１４）。
ヒト・リンパ球又は膵臓細胞から得られる天然のｈＩＦ
Ｎ−７は、糖蛋白であるが、その物理化学的性状につい
てはまだ不明瞭なところが多い。成熟ｈｌＦＮ−Ｔの蛋
白あ部分については、組換えＤＮＡ技術により１４６個
のアミノ酸からなるポリペプチドであることが示されて
いるが、その活性部位やＣ末端部位の真の構造（例えば
、Ｃ末端アミノ酸がフリーであるか何らかの修飾を受け
ているか）Ｋついては不明である。
Ｎ−７は、糖蛋白であるが、その物理化学的性状につい
てはまだ不明瞭なところが多い。成熟ｈｌＦＮ−Ｔの蛋
白あ部分については、組換えＤＮＡ技術により１４６個
のアミノ酸からなるポリペプチドであることが示されて
いるが、その活性部位やＣ末端部位の真の構造（例えば
、Ｃ末端アミノ酸がフリーであるか何らかの修飾を受け
ているか）Ｋついては不明である。
本発明者らは、１４６個のアミノ酸からなるｈＩＦＮ−
７（以下ＧＩＦ１４６ と略ず）の活性部位およびＣ末
端部位の生理活性に及ぼす効果について鋭意研究の結果
、特に、１番目から１３５番目までのポリペプチド（以
下ＧＩＦ１３５と略す）が、驚くべきことにＧＩＦ１４
６ Ｋ比べ極めて高い生理活性を有すること、また物理
化学的性質も異なること、さらには該ＧＩＦ１３５ポリ
ペプチドを化学的に合成した遺伝子を用いた組換えＤＮ
Ａ技術で製造できることを見出し、本発明を完成するに
至った。また、ＧＩＦＩ３５で代表される本発明のポリ
ペプチドは、ＧＩＦ１４６ Ｋ比べ形質転換株培養菌体
からの抽出が容易であり、且つ安定性も高いという特徴
を有しており、従来のＧＩＦ１４６とは異なる新規な生
理活性物質と言える。
７（以下ＧＩＦ１４６ と略ず）の活性部位およびＣ末
端部位の生理活性に及ぼす効果について鋭意研究の結果
、特に、１番目から１３５番目までのポリペプチド（以
下ＧＩＦ１３５と略す）が、驚くべきことにＧＩＦ１４
６ Ｋ比べ極めて高い生理活性を有すること、また物理
化学的性質も異なること、さらには該ＧＩＦ１３５ポリ
ペプチドを化学的に合成した遺伝子を用いた組換えＤＮ
Ａ技術で製造できることを見出し、本発明を完成するに
至った。また、ＧＩＦＩ３５で代表される本発明のポリ
ペプチドは、ＧＩＦ１４６ Ｋ比べ形質転換株培養菌体
からの抽出が容易であり、且つ安定性も高いという特徴
を有しており、従来のＧＩＦ１４６とは異なる新規な生
理活性物質と言える。
本発明は、次のアミノ酸配列：
０
Ａｌａ Ｇｌｕ Ａｓｎ Ｌｅｕ Ｔ＋ｙ’ｓ ＬｙＳ
ＴＹｒ Ｐｈｅ Ａｓｎ Ａｌａ０ Ｇｌｙ Ｈｉｓ Ｓｅｒ Ａｓｐ Ｖａｌ Ａｌａ Ａ
ｓｐ Ａｓｎ Ｇａｙ Ｔｈｒ０ Ｌｅｕ Ｐｈｅ Ｌｅｕ Ｇｌｙ Ｉｌｅ Ｌｅｕ Ｌ
ｙｓ Ａｓｎ Ｔｒｐ Ｌｙｓ０ Ｇｌｕ Ｇｌｕ ５ｅｒＡｓｐ Ａｒｇ Ｌｙｓ Ｔｉ
ｅ Ｍｅｔ Ｇｌｎ Ｓｅｒ０ Ｇｉｎ Ｉｌｅ Ｖａｌ Ｓｅｒ Ｐｈｅ Ｔｙｒ Ｐ
ｈｅ Ｌｙｓ Ｌｅｕ Ｐｈｅ０ Ｌｙｓ Ａｓｎ Ｐｈｅ Ｌｙｓ Ａｓｐ Ａｓｐ Ｇ
ｌｎ Ｓｅｒ Ｉｃｅ Ｇｌｎ０ Ｌｙｓ Ｓｅｒ Ｖａｌ Ｇｌｕ Ｔｈｒ ｌｉｅ Ｌ
ｙｓ Ｇｌｕ Ａｓｐ Ｍｅｔ０ Ａｓｎ Ｖａｌ Ｌｙｓ Ｐｈｅ Ｐｈｅ Ａｓｎ Ｓ
ｅｒ Ａｓｎ−Ｌｙｓ Ｌｙｓ００ Ｌｙｓ Ａｒｇ Ａｓｐ Ａｓｐ Ｐｈｅ Ｇｌｕ Ｌ
ｙｓ Ｌｅｕ Ｔｈｒ ＡｓｎＡｌａ Ｇｌｕ Ｌｅｕ
Ｓｅｒ Ｐｒｏ Ａｌａ Ａｌａ Ｌｙｓ ’ｌ’ｈ
ｒ Ｇｌｙテ表わされる新゛規生理活性ポリペプチド。
ＴＹｒ Ｐｈｅ Ａｓｎ Ａｌａ０ Ｇｌｙ Ｈｉｓ Ｓｅｒ Ａｓｐ Ｖａｌ Ａｌａ Ａ
ｓｐ Ａｓｎ Ｇａｙ Ｔｈｒ０ Ｌｅｕ Ｐｈｅ Ｌｅｕ Ｇｌｙ Ｉｌｅ Ｌｅｕ Ｌ
ｙｓ Ａｓｎ Ｔｒｐ Ｌｙｓ０ Ｇｌｕ Ｇｌｕ ５ｅｒＡｓｐ Ａｒｇ Ｌｙｓ Ｔｉ
ｅ Ｍｅｔ Ｇｌｎ Ｓｅｒ０ Ｇｉｎ Ｉｌｅ Ｖａｌ Ｓｅｒ Ｐｈｅ Ｔｙｒ Ｐ
ｈｅ Ｌｙｓ Ｌｅｕ Ｐｈｅ０ Ｌｙｓ Ａｓｎ Ｐｈｅ Ｌｙｓ Ａｓｐ Ａｓｐ Ｇ
ｌｎ Ｓｅｒ Ｉｃｅ Ｇｌｎ０ Ｌｙｓ Ｓｅｒ Ｖａｌ Ｇｌｕ Ｔｈｒ ｌｉｅ Ｌ
ｙｓ Ｇｌｕ Ａｓｐ Ｍｅｔ０ Ａｓｎ Ｖａｌ Ｌｙｓ Ｐｈｅ Ｐｈｅ Ａｓｎ Ｓ
ｅｒ Ａｓｎ−Ｌｙｓ Ｌｙｓ００ Ｌｙｓ Ａｒｇ Ａｓｐ Ａｓｐ Ｐｈｅ Ｇｌｕ Ｌ
ｙｓ Ｌｅｕ Ｔｈｒ ＡｓｎＡｌａ Ｇｌｕ Ｌｅｕ
Ｓｅｒ Ｐｒｏ Ａｌａ Ａｌａ Ｌｙｓ ’ｌ’ｈ
ｒ Ｇｌｙテ表わされる新゛規生理活性ポリペプチド。
（タソし、Ｘは水素原子又はメチオニル基ヲ表わし、Ｙ
は少くとも最鍋の２個が塩シ１［性アミノ酸残基である
２個から１０個のアミノ酸残基からなるペプチドを表わ
す）、それをコードするＤＮＡ配列、その配列が前記ポ
リペプチドを発現させうるＤＮＡ配列に有効に連結して
いる発現ベクター、そのベクターによって形質転換され
た単細胞り孜生物形質転換株、その形質転換株を培養し
て前記のホｌＪヘプチドを製造する方法および前記のポ
リペプチドを含有する前記の形質転換株の培養組成物で
ある。
は少くとも最鍋の２個が塩シ１［性アミノ酸残基である
２個から１０個のアミノ酸残基からなるペプチドを表わ
す）、それをコードするＤＮＡ配列、その配列が前記ポ
リペプチドを発現させうるＤＮＡ配列に有効に連結して
いる発現ベクター、そのベクターによって形質転換され
た単細胞り孜生物形質転換株、その形質転換株を培養し
て前記のホｌＪヘプチドを製造する方法および前記のポ
リペプチドを含有する前記の形質転換株の培養組成物で
ある。
以下、ＧＩＦＩ３５を例として詳しく本発明を説明する
。
。
ＧＩＦＩ３５生産株の１つ（ＷＡ８０２／ｐＹｔａｃＧ
ＩＦ１３５）は、プラスミドｐｔａｃＧＩＦ５４ｃｉ９
（特願昭５８ １６２３３７ ＶＣ開示）Ｋｍみ？ニー
’１ｔＬ７いる化学的に合成したＧＴＦ１４６をコード
する遺伝子の下流領域に、化学的に合成しｆｔ ＤＮＡ
断片を挿入し、さらにランナウェイプラスミドＤＮＡを
挿入して得たプラスミドによって、大腸菌を形質転換す
ることにより得た（第１図参照）。
ＩＦ１３５）は、プラスミドｐｔａｃＧＩＦ５４ｃｉ９
（特願昭５８ １６２３３７ ＶＣ開示）Ｋｍみ？ニー
’１ｔＬ７いる化学的に合成したＧＴＦ１４６をコード
する遺伝子の下流領域に、化学的に合成しｆｔ ＤＮＡ
断片を挿入し、さらにランナウェイプラスミドＤＮＡを
挿入して得たプラスミドによって、大腸菌を形質転換す
ることにより得た（第１図参照）。
他のＧＩＦ】３５生産株（ＷＡ８０２／ｐＩＮＧＩｌ１
３５もしくはＷ３１１０／Ｉ）ＩＮＧＩＦ］３５ ）は
、」二記（第１図）で得たｐｔａｃ Ｇ Ｉ Ｆ １３
５のＢｇｌ ＩＩとＰｓｔＩＫよるＤＮＡ断片（］遺伝
子を含む側の断片）と。
３５もしくはＷ３１１０／Ｉ）ＩＮＧＩＦ］３５ ）は
、」二記（第１図）で得たｐｔａｃ Ｇ Ｉ Ｆ １３
５のＢｇｌ ＩＩとＰｓｔＩＫよるＤＮＡ断片（］遺伝
子を含む側の断片）と。
ｐｌＮ５ＧＩＦ５４ｃ（特願昭５８−１３２５２４第４
１ズに開示）のＢｇｌ ＩＴとＰ８ｔＩＫよるＤＮＡ断
片（１ｐｐプロモーター＋ Ｇ ＩＦＷ伝子を含む）と
をライゲーションして得られるプラスミドｐＩＮＧＩＦ
１３５ （第２図参照）を、大腸菌ＷＡ８０２もしくは
Ｗ３］１０株に形質転換することによって得ることがで
きる。
１ズに開示）のＢｇｌ ＩＴとＰ８ｔＩＫよるＤＮＡ断
片（１ｐｐプロモーター＋ Ｇ ＩＦＷ伝子を含む）と
をライゲーションして得られるプラスミドｐＩＮＧＩＦ
１３５ （第２図参照）を、大腸菌ＷＡ８０２もしくは
Ｗ３］１０株に形質転換することによって得ることがで
きる。
ＷＡ８０２／ｐＹｔａｃＧＩＦ１３５についてさらに詳
Ｌ〈述べるヨ、マず、プラスミドｐｔａｃＧＩＦ５４ｃ
ｉ’を制限酵素Ｂｇｌ ＩＩとＳａｌ■で処理すること
により、ＧＩＦ］４６ をコードする遺伝子の下流のＤ
ＮＡ断片（１３４番目のＡｒｇをコードする部位から翻
訳６ｋ 、１− −１ Ｌ” −、４）、Ｊ＋ ／”τ
Ｊ・： ／７’ｌ ｅ ａ Ｉ Ｔ ’ｍ’＝ 占 徳
−Ｆ／Ａ ｎ Ｍ Δ断片）を除き、その代りに、Ｂ
ｇｌ ＩＩとＳａｌ Ｉ 粘ｆｌ末端（ｃｏｈｅｓｉｖ
ｅ ｅｎｄ）および２つの翻訳終止フドン（ＴＡＡとＴ
ＡＧ ）をもつ化学的に合成したことにより、ＧＩＦ１
３５ をコードする遺伝子を右するプラスミドｐｔａｃ
ＧＩＦ１３５を造成した（第２図参照）。次に、これに
ランナウェイＤＮＡをｐＹＨ３０７より導入り、ｐＹｔ
ａｃＧＩＦ１３５を造成しい該プラスミドを大腸菌ＷＡ
８０２に形質転換した。
Ｌ〈述べるヨ、マず、プラスミドｐｔａｃＧＩＦ５４ｃ
ｉ’を制限酵素Ｂｇｌ ＩＩとＳａｌ■で処理すること
により、ＧＩＦ］４６ をコードする遺伝子の下流のＤ
ＮＡ断片（１３４番目のＡｒｇをコードする部位から翻
訳６ｋ 、１− −１ Ｌ” −、４）、Ｊ＋ ／”τ
Ｊ・： ／７’ｌ ｅ ａ Ｉ Ｔ ’ｍ’＝ 占 徳
−Ｆ／Ａ ｎ Ｍ Δ断片）を除き、その代りに、Ｂ
ｇｌ ＩＩとＳａｌ Ｉ 粘ｆｌ末端（ｃｏｈｅｓｉｖ
ｅ ｅｎｄ）および２つの翻訳終止フドン（ＴＡＡとＴ
ＡＧ ）をもつ化学的に合成したことにより、ＧＩＦ１
３５ をコードする遺伝子を右するプラスミドｐｔａｃ
ＧＩＦ１３５を造成した（第２図参照）。次に、これに
ランナウェイＤＮＡをｐＹＨ３０７より導入り、ｐＹｔ
ａｃＧＩＦ１３５を造成しい該プラスミドを大腸菌ＷＡ
８０２に形質転換した。
そして、該形質転換株（ＷＡ８０２／ｐＹｔａｃＧ Ｉ
Ｆｌ ３５）の抗ウィルス活性を、ＧＩＦ］４６遺伝
子をもつプラスミドｐＹｔａｃＧ Ｉ Ｆによる形質転
換株（ＷＡ８０２／ ｐＹｔａｃ Ｇ Ｉ Ｆ ）と比
較Ｌ＆結果、ＷＡ ８０２／ｐＹｔａｃＧＩＦ］３５
ｈ４おどろくべき高い抗ウィルス活性を示した（第１表
参照）。
Ｆｌ ３５）の抗ウィルス活性を、ＧＩＦ］４６遺伝
子をもつプラスミドｐＹｔａｃＧ Ｉ Ｆによる形質転
換株（ＷＡ８０２／ ｐＹｔａｃ Ｇ Ｉ Ｆ ）と比
較Ｌ＆結果、ＷＡ ８０２／ｐＹｔａｃＧＩＦ］３５
ｈ４おどろくべき高い抗ウィルス活性を示した（第１表
参照）。
ｐＹｔａｃＧＩ Ｆ １３５ は、ｈｌＦＮ−γ遺伝子
の下流領域を除き、プラスミドｐＹｔａｃ Ｇ Ｉ Ｆ
と同じＤＮＡ配列を有するプラスミドであり、また、用
いた宿主細胞も同じである。然るに、本発明におけるＧ
■Ｆ１３５渭伝子をもつプラスミドによって形質転換さ
れた大腸菌ＷＡ ８０２／ ｐＹｔａｃ Ｇ Ｉ Ｆｌ
３５ は、第１表に示した如く、ｐＹｔａｃ Ｇ Ｉ
Ｆ Ｉｃよって形質転換された大腸菌ＷＡ８０２／ｐ
ＹｔａｃＧＩＦ に比べ、驚くべく高い抗ウィルス活性
を示した。即ち、アンピシリンおよびカナマイシンを含
むＴ−−ｂｒｏｔｈで培養（ＩＰＴＧ：イソプロピルβ
−Ｄ−チオガラフトシドによる誘導培養）で得られる形
質転換株細胞を、凍結・融解によって破砕しに後の遠沈
上清液（ｓｕｐ）では約３５倍、遠心残香を８Ｍ尿素と
０，５ＭＮａＣｄでＭｆ＋出１−タ画分（ｐｐｔ ）で
は約９６倍という高い抗ウィルス活性を示した（総活性
量でみると約７３倍）。両形暫転換株のもつプラスミＦ
は、ｈｌＦＮ−７遺伝子の部分だけが異なり各々のポリ
ペプチド（ＧＩＦ１４６とＧｒＦＩ：３ｓ）の生産量は
理論的に同じと考えられることから、第１表に示す結果
は、本発明のＧＩＦ１３５が従来のＧＩＦ１４６ に比
べ、極めて強い生理活性を有するポリペプチドであるこ
とを強く示唆している。
の下流領域を除き、プラスミドｐＹｔａｃ Ｇ Ｉ Ｆ
と同じＤＮＡ配列を有するプラスミドであり、また、用
いた宿主細胞も同じである。然るに、本発明におけるＧ
■Ｆ１３５渭伝子をもつプラスミドによって形質転換さ
れた大腸菌ＷＡ ８０２／ ｐＹｔａｃ Ｇ Ｉ Ｆｌ
３５ は、第１表に示した如く、ｐＹｔａｃ Ｇ Ｉ
Ｆ Ｉｃよって形質転換された大腸菌ＷＡ８０２／ｐ
ＹｔａｃＧＩＦ に比べ、驚くべく高い抗ウィルス活性
を示した。即ち、アンピシリンおよびカナマイシンを含
むＴ−−ｂｒｏｔｈで培養（ＩＰＴＧ：イソプロピルβ
−Ｄ−チオガラフトシドによる誘導培養）で得られる形
質転換株細胞を、凍結・融解によって破砕しに後の遠沈
上清液（ｓｕｐ）では約３５倍、遠心残香を８Ｍ尿素と
０，５ＭＮａＣｄでＭｆ＋出１−タ画分（ｐｐｔ ）で
は約９６倍という高い抗ウィルス活性を示した（総活性
量でみると約７３倍）。両形暫転換株のもつプラスミＦ
は、ｈｌＦＮ−７遺伝子の部分だけが異なり各々のポリ
ペプチド（ＧＩＦ１４６とＧｒＦＩ：３ｓ）の生産量は
理論的に同じと考えられることから、第１表に示す結果
は、本発明のＧＩＦ１３５が従来のＧＩＦ１４６ に比
べ、極めて強い生理活性を有するポリペプチドであるこ
とを強く示唆している。
また、細胞破砕遠沈」二清部（ｓｕｐ ）と沈澱部を８
Ｍ尿素と０．５ Ｍ ＮａＣ，５で抽出されｐｈ分（ｐ
ｐｔ）の抗ウィルス活性の比（ｓｕｐ／ｐｐｔ ）は、
ｐＹｔａｃＧＩＦ では０．６２ 、 ｒ）ＹｔａｃＧ
ＩＦ１３５では０．２３であり、ＧＩＦ１３５ はＧ、
Ｉ Ｆ ］ ４６ とは物理化学的性質（例えば細胞膜
又は細胞壁への吸着性）においても異なると考えられる
（第１表参照）。さらに、ＧｒＦＩ３５ は尿素溶液に
よく溶解するが、ＧｒＦＩ４６は尿素にさらに塩類（た
とえば食塩）を加えた溶液でないとよく溶解しないなど
、各々の溶ｆ’ｌ’ｌ’度に明らかな差異が認められた
。
Ｍ尿素と０．５ Ｍ ＮａＣ，５で抽出されｐｈ分（ｐ
ｐｔ）の抗ウィルス活性の比（ｓｕｐ／ｐｐｔ ）は、
ｐＹｔａｃＧＩＦ では０．６２ 、 ｒ）ＹｔａｃＧ
ＩＦ１３５では０．２３であり、ＧＩＦ１３５ はＧ、
Ｉ Ｆ ］ ４６ とは物理化学的性質（例えば細胞膜
又は細胞壁への吸着性）においても異なると考えられる
（第１表参照）。さらに、ＧｒＦＩ３５ は尿素溶液に
よく溶解するが、ＧｒＦＩ４６は尿素にさらに塩類（た
とえば食塩）を加えた溶液でないとよく溶解しないなど
、各々の溶ｆ’ｌ’ｌ’度に明らかな差異が認められた
。
第 １ 表
抗ウィルス活性の比較
註１：凍結・融解による細胞破砕後の遠沈上清区分
註２二同上速沈沈澱物を８Ｍ尿素と０．５ Ｍ ＮａＣ
，ｇで抽出した区分 これらの小吏は、本発明のポリペプチドは、生理的活性
の面で秀れているばかりか、物理化学的にもＧｒＦＩ４
６とは明らかに累々るすぐれに個１留をイｆしているこ
とを示している。本発明のポリペプチドはＧｒＦＩ４５
のポリペプチドＩ’１１１腎ヨ含唸れてはいるが、本発
明のポリペプチドか上記のような秀れた性質を有するこ
とは、ＧＩＦ１４６の構造からは容易に考えつくもので
はないことは明らかである。
，ｇで抽出した区分 これらの小吏は、本発明のポリペプチドは、生理的活性
の面で秀れているばかりか、物理化学的にもＧｒＦＩ４
６とは明らかに累々るすぐれに個１留をイｆしているこ
とを示している。本発明のポリペプチドはＧｒＦＩ４５
のポリペプチドＩ’１１１腎ヨ含唸れてはいるが、本発
明のポリペプチドか上記のような秀れた性質を有するこ
とは、ＧＩＦ１４６の構造からは容易に考えつくもので
はないことは明らかである。
カくシて、本発明のポリペプチドは、新規な抗ウィルス
剤、抗腫瘍剤又免疫調節剤として非常に興味のあるもの
である。
剤、抗腫瘍剤又免疫調節剤として非常に興味のあるもの
である。
尚、本発明におけるＧＩＦ１３５生産株が、期待通りの
１３５個のアミノ酸残基からなるポリペプチドであるこ
とを、電気泳動による解析並びにアミノ酸分析から明ら
かにすることができた。即ち、アミノ酸分析では、アミ
ノ酸組成値が期待値とよく一致し、さらにカルボキシペ
プチダーゼを用いたカルボキシル末端分析より、ＧＩＦ
１３５のカルボキシル末端部分が期待通りであることを
示唆するデータを得ることができた。
１３５個のアミノ酸残基からなるポリペプチドであるこ
とを、電気泳動による解析並びにアミノ酸分析から明ら
かにすることができた。即ち、アミノ酸分析では、アミ
ノ酸組成値が期待値とよく一致し、さらにカルボキシペ
プチダーゼを用いたカルボキシル末端分析より、ＧＩＦ
１３５のカルボキシル末端部分が期待通りであることを
示唆するデータを得ることができた。
以下、具体的実施例をもって本発明を説明する。
尚、以下の実施例ではＧＩＦ１３５およびｐＹｔａｃ
ＧｒＦＩ３５に関する例を示すが、本発明の範囲はこれ
らに限るものではない〇 実施例 １、ＧＩＦ１３５ の作製 ］）ｐｔａｃＧＩＦ１３５の作製 プラスミドＴ）ｔａＣＧＩＦ５４ｃ＋ （特願昭５８−
１６２３３７第３図に開示）のｐＮＡ ２μｙを１０ｍ
Ｍ塩化マグネシウム、１５０ｍＭ塩化ナトリウム、］０
０ｍＭ２−メルカプトエタノ−を含ｔｒｌ。
ＧｒＦＩ３５に関する例を示すが、本発明の範囲はこれ
らに限るものではない〇 実施例 １、ＧＩＦ１３５ の作製 ］）ｐｔａｃＧＩＦ１３５の作製 プラスミドＴ）ｔａＣＧＩＦ５４ｃ＋ （特願昭５８−
１６２３３７第３図に開示）のｐＮＡ ２μｙを１０ｍ
Ｍ塩化マグネシウム、１５０ｍＭ塩化ナトリウム、］０
０ｍＭ２−メルカプトエタノ−を含ｔｒｌ。
ｍＭトリス塩酸緩衝液（ＰＨ７，４）５０ＩＬｌに溶解
し、Ｂｇ１１１１０単位、５ａ１１１０単位を加え、３
７℃で１時間反応させて、アガロースゲル電気泳動にか
け、目的にする約７ｋｂのＢｇｌ ■−Ｓａｌ Ｉ 断
片を電気泳動的に捕ｕ）シ、フェノール処理後、アルコ
ールを加え、目的とする約７ｋｂのＤＮＡ断片を沈澱物
として得た。次に固相法（特願昭５７−８６１８０参照
）により合成したｌａｍｅｒの２つのオリゴヌクレオチ
ド（第１図ならびに第３図に塩基配列を示す）は各々２
０ ｐｍｏｌｅを１０ＡＩの６．６ｍ Ｍ ｆｉｌ化マ
グネシウムを含む６６ｍＭ）リス塩酸緩衝液（ｐＨ７，
６）に溶かり、 ４ ｍ’Ｍ ＡＴＰ １ｐ（ｌとポリ
ヌクレオチドキナーゼ２単位を加え、３７℃３０分反応
させ、５ ’−ＯＨをリン酸化した。先に調整した約７
ｋｌ）のＢｇｌ ＩＩ −Ｓａｌ Ｉ ＤＮＡ断片を
１０、Ｊの６．６ｍＭ塩化マグネシウムを含む６６ｍ？
ｖｌリス緩衝液（、Ｈ７，６）（以下ライゲーション溶
液と略す）に溶かし、そこに化学合成したＤＮＡ断片１
０ノ詔を加え、Ｔ４ＤＮＡＩＪガーゼ１単位を加え、】
６℃−夜反応を行なった。このＤＮＡを用いて、大腸菌
ＷＡ ８０２を常法に従い形質転換しな。
し、Ｂｇ１１１１０単位、５ａ１１１０単位を加え、３
７℃で１時間反応させて、アガロースゲル電気泳動にか
け、目的にする約７ｋｂのＢｇｌ ■−Ｓａｌ Ｉ 断
片を電気泳動的に捕ｕ）シ、フェノール処理後、アルコ
ールを加え、目的とする約７ｋｂのＤＮＡ断片を沈澱物
として得た。次に固相法（特願昭５７−８６１８０参照
）により合成したｌａｍｅｒの２つのオリゴヌクレオチ
ド（第１図ならびに第３図に塩基配列を示す）は各々２
０ ｐｍｏｌｅを１０ＡＩの６．６ｍ Ｍ ｆｉｌ化マ
グネシウムを含む６６ｍＭ）リス塩酸緩衝液（ｐＨ７，
６）に溶かり、 ４ ｍ’Ｍ ＡＴＰ １ｐ（ｌとポリ
ヌクレオチドキナーゼ２単位を加え、３７℃３０分反応
させ、５ ’−ＯＨをリン酸化した。先に調整した約７
ｋｌ）のＢｇｌ ＩＩ −Ｓａｌ Ｉ ＤＮＡ断片を
１０、Ｊの６．６ｍＭ塩化マグネシウムを含む６６ｍ？
ｖｌリス緩衝液（、Ｈ７，６）（以下ライゲーション溶
液と略す）に溶かし、そこに化学合成したＤＮＡ断片１
０ノ詔を加え、Ｔ４ＤＮＡＩＪガーゼ１単位を加え、】
６℃−夜反応を行なった。このＤＮＡを用いて、大腸菌
ＷＡ ８０２を常法に従い形質転換しな。
形質転換株の選択はアンピシリン４０μｇ／１ｒＬｌを
含む栄養寒天培地で行ない、アンピシリン耐性の多数の
形質転換株より１８株についてプラスミドＤＮＡを分離
し制限酵素による角￥折を行なったところ、すべてのプ
ラスミドが目的のｐｔａｃＧＩＦ１３５であった。
含む栄養寒天培地で行ない、アンピシリン耐性の多数の
形質転換株より１８株についてプラスミドＤＮＡを分離
し制限酵素による角￥折を行なったところ、すべてのプ
ラスミドが目的のｐｔａｃＧＩＦ１３５であった。
２） ｐＹｔａｃＧＩＦ１３５の作製
ＧＩＦ］３５の発現をコピー数増加により上げる目的で
ｐｔａｃＧＩＦ］３５のＥｃｏＲＩ断点にランナウェイ
プラスミドｐＹＭ３０７ の長い方のＥｃｏＲＩＤＮＡ
断片を挿入した。尚、ｐＹＭ３０７ をもつ大腸菌はＷ
６２０ｒｅｃＡ／ｐＹＭ３０７ と命名し、工業技術院
微生物工業技術研究所に寄託されている（徽工研菌条第
３４５号、ＦＥＲＭＢＰ−３４５）。
ｐｔａｃＧＩＦ］３５のＥｃｏＲＩ断点にランナウェイ
プラスミドｐＹＭ３０７ の長い方のＥｃｏＲＩＤＮＡ
断片を挿入した。尚、ｐＹＭ３０７ をもつ大腸菌はＷ
６２０ｒｅｃＡ／ｐＹＭ３０７ と命名し、工業技術院
微生物工業技術研究所に寄託されている（徽工研菌条第
３４５号、ＦＥＲＭＢＰ−３４５）。
まずｐｔａｃＧＩＦ１３５ ＤＮＡ ２μｆ／ 、 Ｔ
）ＹＭ ３０７ ＤＮＡ ２μｇ を各々５０μ４の６
６ｍＭ酢酸カリウム、］ＯｍＭ酢酸マグネシウム及び０
．５ｍＭジチオスレイトールを含む３３ｍＭＩＪス酢酸
緩衝液（ＰＨ７，６）に溶かし、ＥｃｏＲＩ ５単位を
加え、３７℃１時間反応させ、その後６５℃で」５分加
熱することにより、制限酵素を不活化した後、エタノー
ルを加え、ＤＮＡを沈澱物として得た。これを真空乾燥
後、２０μ召のライゲーション溶液に溶解し、Ｔ４ＤＮ
Ａライゲースｌ 、ｑｉ位を加え、１６°Ｃ−夜ライゲ
ーションを行なった。このＤＮＡを用いて大腸菌ＷＡ８
０２を形質転換した。形質転換時の温度は２８℃で行な
った。形質転換株の選択は、アンピシリン４０μｆＩ／
ｍｌカナマイシン２０μｇ／ ｍＡを含む栄養寒天培１
丁！ｌで行斤った。こうして付られた多数のアンピシリ
ン、カナマイシン両耐性を示す形質転換株より適当に１
２株選んでプラスミドを分離し、制限酵素による解析を
行った。その結果、すべての株において目的とするプラ
スミドｐＹｔａｃＧＩＦ１３５をイ丁していることを確
認することができた。
）ＹＭ ３０７ ＤＮＡ ２μｇ を各々５０μ４の６
６ｍＭ酢酸カリウム、］ＯｍＭ酢酸マグネシウム及び０
．５ｍＭジチオスレイトールを含む３３ｍＭＩＪス酢酸
緩衝液（ＰＨ７，６）に溶かし、ＥｃｏＲＩ ５単位を
加え、３７℃１時間反応させ、その後６５℃で」５分加
熱することにより、制限酵素を不活化した後、エタノー
ルを加え、ＤＮＡを沈澱物として得た。これを真空乾燥
後、２０μ召のライゲーション溶液に溶解し、Ｔ４ＤＮ
Ａライゲースｌ 、ｑｉ位を加え、１６°Ｃ−夜ライゲ
ーションを行なった。このＤＮＡを用いて大腸菌ＷＡ８
０２を形質転換した。形質転換時の温度は２８℃で行な
った。形質転換株の選択は、アンピシリン４０μｆＩ／
ｍｌカナマイシン２０μｇ／ ｍＡを含む栄養寒天培１
丁！ｌで行斤った。こうして付られた多数のアンピシリ
ン、カナマイシン両耐性を示す形質転換株より適当に１
２株選んでプラスミドを分離し、制限酵素による解析を
行った。その結果、すべての株において目的とするプラ
スミドｐＹｔａｃＧＩＦ１３５をイ丁していることを確
認することができた。
２、抗ウィルス活性の測定
ガンマ・インターフェロンの活性ｍ′を調べるため、Ｗ
Ａ８０２／ｐＹｔａｃＧＩＦとＷＡ ８０２ ／ ｐＹ
ｔａｃ Ｇ ＩＦ１３５をＬ−ブロス（４０μｇ ／
ｍｅのアンピシリンを含む）２ｍ／で２８℃−夜培養し
、との画体０．２−を４艷のし一ブロス（４０μｇ／ｍ
ｌのアンピシリ・ノシー 今ｔｐ ） ｗ 培ｍ＋ 、
ｑ ｑ ６ｒ−ｒ−ｎｎｒｓｇｎ−ｒ−ｂ ｙ シシ
０．７まで培養し、１００ｍＭＩＰＴＧ溶液を０．２＝
ｍ／添加後、３７℃で３時間培養した。この培養液１
ｍｌを１０．００ Ｏｒｐｍ ５分遠心し、得られた菌
体１て１ｍｇ／−のりゾヂーム、５０ｍＭ塩化ナトリウ
ムを含む０．１５Ｍリン酸ナトリウム緩衝液ＰＨ７，２
”Ｌ ５００ ）ｔｅを加え氷中１０分放置し、溶菌を
行なった。その後ドライアイス−エタノール中で急速に
凍結、３７℃恒温槽で急速融解を３回ぐり返り菌体を破
壊後、Ｉ Ｏ，０００ｒｐｍ １０分遠心し、その」二
清を抗ウィルス活性の測定に用いた。抗ウィルス活性は
特願昭５７−８６１８０に開示した方法に準じて測定し
た。さらに沈澱分画より目的とするポリペプチドをさら
に回収するため、０．１５Ｍ塩化ナトリウムを含ｔｒ８
Ｍ尿素溶液５００μｅを沈澱′に加え、超音波処理を行
ない、１０，０００ｒｐｒｎ１０分速心後の上清を集め
たところ、この上清部に非常に高い抗ウィルス活性を認
めた。これらの抗ウィルス活性について調べた結果は第
１表に示した。上記実施例において、本発明者らは同じ
発現系のベクターを用いたにもかかわらず、第１表に示
すように、ｐＹｔａｃＧＩＦ１３５ Ｋよって形質転換
された大腸菌が、ｐＹｔａｃ Ｇ Ｉ Ｆによって形質
転換された大腸菌に比べ非常に高い抗ウィルス活性（総
活性［１１で約７３倍）を与えたことは、本発明におけ
るＧＩＦ］３５が、従来のＧ、ＩＦ１４６にはない秀れ
た抗ウィルス活性を有するポリペプチドであることを強
く示唆している。
Ａ８０２／ｐＹｔａｃＧＩＦとＷＡ ８０２ ／ ｐＹ
ｔａｃ Ｇ ＩＦ１３５をＬ−ブロス（４０μｇ ／
ｍｅのアンピシリンを含む）２ｍ／で２８℃−夜培養し
、との画体０．２−を４艷のし一ブロス（４０μｇ／ｍ
ｌのアンピシリ・ノシー 今ｔｐ ） ｗ 培ｍ＋ 、
ｑ ｑ ６ｒ−ｒ−ｎｎｒｓｇｎ−ｒ−ｂ ｙ シシ
０．７まで培養し、１００ｍＭＩＰＴＧ溶液を０．２＝
ｍ／添加後、３７℃で３時間培養した。この培養液１
ｍｌを１０．００ Ｏｒｐｍ ５分遠心し、得られた菌
体１て１ｍｇ／−のりゾヂーム、５０ｍＭ塩化ナトリウ
ムを含む０．１５Ｍリン酸ナトリウム緩衝液ＰＨ７，２
”Ｌ ５００ ）ｔｅを加え氷中１０分放置し、溶菌を
行なった。その後ドライアイス−エタノール中で急速に
凍結、３７℃恒温槽で急速融解を３回ぐり返り菌体を破
壊後、Ｉ Ｏ，０００ｒｐｍ １０分遠心し、その」二
清を抗ウィルス活性の測定に用いた。抗ウィルス活性は
特願昭５７−８６１８０に開示した方法に準じて測定し
た。さらに沈澱分画より目的とするポリペプチドをさら
に回収するため、０．１５Ｍ塩化ナトリウムを含ｔｒ８
Ｍ尿素溶液５００μｅを沈澱′に加え、超音波処理を行
ない、１０，０００ｒｐｒｎ１０分速心後の上清を集め
たところ、この上清部に非常に高い抗ウィルス活性を認
めた。これらの抗ウィルス活性について調べた結果は第
１表に示した。上記実施例において、本発明者らは同じ
発現系のベクターを用いたにもかかわらず、第１表に示
すように、ｐＹｔａｃＧＩＦ１３５ Ｋよって形質転換
された大腸菌が、ｐＹｔａｃ Ｇ Ｉ Ｆによって形質
転換された大腸菌に比べ非常に高い抗ウィルス活性（総
活性［１１で約７３倍）を与えたことは、本発明におけ
るＧＩＦ］３５が、従来のＧ、ＩＦ１４６にはない秀れ
た抗ウィルス活性を有するポリペプチドであることを強
く示唆している。
３、アミノ酸分析
ＷＡ ８０２ ／ ｐＹｔａｃ ＧＩ Ｆ １３５およ
びＷＡ ８０２／ｐＹｔａｃ Ｇ Ｉ Ｆの培養菌体か
ら、実施例２に記した方法に準じて各々のポリペプチド
を抽出し、部分精製物をＳＤＳゲル電気泳動にかけた。
びＷＡ ８０２／ｐＹｔａｃ Ｇ Ｉ Ｆの培養菌体か
ら、実施例２に記した方法に準じて各々のポリペプチド
を抽出し、部分精製物をＳＤＳゲル電気泳動にかけた。
次に、ＧＩＦ１３５ならびにＧＩＦＩ４６の分子量に相
当する位置のゲル断片を切り出し、各々のポリペプチド
を抽出し充分に水に対し透析した後アミノ酸分析を行っ
た。
当する位置のゲル断片を切り出し、各々のポリペプチド
を抽出し充分に水に対し透析した後アミノ酸分析を行っ
た。
尚、ＳＤＳゲル」−のＧＩＦ１３５に相当するバンドは
、明らかにＧｌ−Ｆ］４６に相当するバンドより低分子
側にシフトーシており、各々のバンドは期待される分子
量に相当する位置にみることができた。
、明らかにＧｌ−Ｆ］４６に相当するバンドより低分子
側にシフトーシており、各々のバンドは期待される分子
量に相当する位置にみることができた。
（１） アミノ酸組成の分析
約１ｎｍｏｌ の該ポリペプチド抽出物を減圧乾固後、
０．１％７ 工／ フルヲ含ｔｒ １００８．ｇ ノロ
Ｍｌ−ＩＣＩを加え、１１０℃で２４．４８．７２時
間減圧下に加水分解を行った。又、別に過ギ酸酸化後の
す＞ ”；ｆルヲ６ＮＨＣｊ？ ”’ＣＩ １ ｏ℃、
２４Ｒ間加水分解した。加水分解物は、アミノ酸分析
機（日立８３５−５０型）を用い、常法に従いアミノ酸
分析を行った。その結果を第２表に示した。
０．１％７ 工／ フルヲ含ｔｒ １００８．ｇ ノロ
Ｍｌ−ＩＣＩを加え、１１０℃で２４．４８．７２時
間減圧下に加水分解を行った。又、別に過ギ酸酸化後の
す＞ ”；ｆルヲ６ＮＨＣｊ？ ”’ＣＩ １ ｏ℃、
２４Ｒ間加水分解した。加水分解物は、アミノ酸分析
機（日立８３５−５０型）を用い、常法に従いアミノ酸
分析を行った。その結果を第２表に示した。
尚、第２表のＭｅｔ （メチオニン）値から、ｗＡ訳開
開始点アミノ酸であるメチオニンは、両ポリペプチドと
もそのアミン末端に付加されていたとしても多くはない
と考えられる。
開始点アミノ酸であるメチオニンは、両ポリペプチドと
もそのアミン末端に付加されていたとしても多くはない
と考えられる。
第 ２ 表
ＧＩＦ１３５およびＧＩＦ１４６のアミノ酸分析Ａ ：
ＣｙＳＯ３Ｈとしてｃｙｓを計算した。
ＣｙＳＯ３Ｈとしてｃｙｓを計算した。
Ｂｏｏタイムに外挿して計算した。
Ｃニア２時間加水分解の値を示した。
Ｄ：Ｌｅｕの組成値を基準に他のアミノ酸値を算１］Ｉ
した。
した。
Ｅ ： ｔｒｐは本実験の条件では、分解してしまうた
め測定できない。
め測定できない。
Ｆ ： ＧＩＦ １４６は２４時間の値を示した。
（２） カルボキシル末端の分析
上記ＳＤＳゲル電気泳動のバンドから抽出されたサンプ
ルを適当に前処理（、Ｈや容量などの調整）後、適当な
濃度のカルボキシペプチダーゼＡ溶液あるいはＡとＢの
混合酵素溶液を加え、３７℃で４時間反応させた。反応
後、０．０２ Ｍ ＨＣｌを加えさらに７０％ギ酸で、
Ｈ１容量を調整し、常法に従いアミノ酸分析を行った。
ルを適当に前処理（、Ｈや容量などの調整）後、適当な
濃度のカルボキシペプチダーゼＡ溶液あるいはＡとＢの
混合酵素溶液を加え、３７℃で４時間反応させた。反応
後、０．０２ Ｍ ＨＣｌを加えさらに７０％ギ酸で、
Ｈ１容量を調整し、常法に従いアミノ酸分析を行った。
その結果、ＧＩＦ１３５をカルボキシペプチダーゼＡと
Ｂで処理したサンプルでは、５ｅｒ（１，０）。
Ｂで処理したサンプルでは、５ｅｒ（１，０）。
Ａｒｇ （１，８） ’＋ Ｌｙｓ （２，７） 、
Ｇｌｙ （０，９） 、 Ｔｈｒ （■ １’、］ ） 、 Ａｌａ’（１，０）の各アミノ酸の
みが検出され、またカルボキシペプチダーゼＡの場合は
、５ｅｔ（０，７）、Ａｒｇ（０，２）、Ｌｙｓ（０，
１）が検出された。
Ｇｌｙ （０，９） 、 Ｔｈｒ （■ １’、］ ） 、 Ａｌａ’（１，０）の各アミノ酸の
みが検出され、またカルボキシペプチダーゼＡの場合は
、５ｅｔ（０，７）、Ａｒｇ（０，２）、Ｌｙｓ（０，
１）が検出された。
これらの結果は、ＧＩＦ１３５ のカルボキシル末端部
分が期待されるアミノ酸配列を有していることを強く示
唆するものである。
分が期待されるアミノ酸配列を有していることを強く示
唆するものである。
■註：カッコ内の数値は、同ＧＩＦ］３５ サンフリレ
を酸加水分解して得られた各アミノ酸のモル比を基準に
計算した。
を酸加水分解して得られた各アミノ酸のモル比を基準に
計算した。
４ 、ｍ ｉ１１ノＭｉ 、ｒｎ ｆｘ ｍ２ 明第１
図は、ＧＩＦ］３５ ポリペプチド発現ベクター ｐＹ
ｔａｃ Ｇ Ｉ Ｆ １’３５ の造成過程を示す。
図は、ＧＩＦ］３５ ポリペプチド発現ベクター ｐＹ
ｔａｃ Ｇ Ｉ Ｆ １’３５ の造成過程を示す。
第２図は、ＧＩＦ］３５ ポリペプチド発現ベクターｐ
ｌＮｃ、ＩＦ１３５の造成過程を示す。
ｌＮｃ、ＩＦ１３５の造成過程を示す。
第３図は、ＧＩＦ１３５ 生産用ベクターを造成するた
めのＧＩＦＩ４６ のＣ末端付近の塩基配列の改第２図 第３図 （岐）手続補正書 昭和５９年 ９ 月２！１ 特許庁長官殿 １、 事件の表示 新規生理活性ポリペプチドおよびその製造法３、 補正
をする者 事件との関係 特許出願人 住 所 大阪府大阪市北区堂島浜２丁目３番４０号名
称 サントり一株式会社 代表者 佐 治 敬 三 ４ 代理人 ５、 ｌｉ ｉＦ−Ｑ ％の日付 昭和 年 月 日
（自発）拒絶理由通知 （発送日、昭和 年 月 日付） ６、 補１Ｆにより増加する発明の数 ０７、’Ｍｌｉ
ＪＥ （Ｄ ｔｔ ！ｊＡ 叩−？予明〒！す１−明
の−と 、↓補正の内容 ］ 明細書の第９頁、下から６行日「ｈＧＩＦ−γ■ −４を［ｈＩＦＮ−丁］ と訂正します。
めのＧＩＦＩ４６ のＣ末端付近の塩基配列の改第２図 第３図 （岐）手続補正書 昭和５９年 ９ 月２！１ 特許庁長官殿 １、 事件の表示 新規生理活性ポリペプチドおよびその製造法３、 補正
をする者 事件との関係 特許出願人 住 所 大阪府大阪市北区堂島浜２丁目３番４０号名
称 サントり一株式会社 代表者 佐 治 敬 三 ４ 代理人 ５、 ｌｉ ｉＦ−Ｑ ％の日付 昭和 年 月 日
（自発）拒絶理由通知 （発送日、昭和 年 月 日付） ６、 補１Ｆにより増加する発明の数 ０７、’Ｍｌｉ
ＪＥ （Ｄ ｔｔ ！ｊＡ 叩−？予明〒！す１−明
の−と 、↓補正の内容 ］ 明細書の第９頁、下から６行日「ｈＧＩＦ−γ■ −４を［ｈＩＦＮ−丁］ と訂正します。
２ 同頁、下から３行日［膵臓細胞］を「膵臓細胞」と
訂正し１す。
訂正し１す。
３ 同、第１４頁、１−から８行日１ＹＨ３０７Ｊを「
７Ｍ３０７」と訂正します。
７Ｍ３０７」と訂正します。
占
４、 同、第１５頁、」二から７行日「チオガラフシド
」を「チオガラクトシド−１と訂正します。
」を「チオガラクトシド−１と訂正します。
５ 同、第＋ｓＨ１下から７行１１ｒ５４ｃｉＱＪ ヲ
ｒ５４ｃｉＱＪと訂正します。
ｒ５４ｃｉＱＪと訂正します。
６ 同、第２４頁、」二から３行目１’−６ＭＨＣＩＪ
を［６Ｎ ＨＣＩＪと訂正Ｌオす。
を［６Ｎ ＨＣＩＪと訂正Ｌオす。
７、同、第２６頁、上から８行日「２４時間」の次に「
加水分解」の４字を挿入し捷す。
加水分解」の４字を挿入し捷す。
８、 同頁、下から６行目ｒ ｏ、 ０２ Ｍ Ｈｃ６
」を「０゜０２ＮＨＣＩＪと訂正します。
」を「０゜０２ＮＨＣＩＪと訂正します。
９、同、第２７頁、下から４行日「Ｃ末端」を１卜＼
カルボキシル末端」と訂正します。
ます。
以」二
ｇＳｌ 図
Ｃｏｎ５ｔｒｕｃｔｉｏｎ ｏｆ ｐＹｔａｃＧＩＦ１
３５第２［）
３５第２［）
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １ 次のアミノ酸配列： Ｘ Ｃｙｓ Ｔｙｒ Ｃｙｓ Ｇｉｎ Ａｓｐ Ｐｒｏ
Ｔｙｒ Ｖａｉ Ｌｙｓ０ Ｇｌｕ Ａｌａ Ｇｌｕ Ａｓｎ Ｌｅｕ Ｌｙｓ Ｌ
ｙｓ Ｔｙｒ Ｐｈｅ０ Ａｓｎ Ａｈａ Ｇｌｙ Ｈｉｓ Ｓｅｒ Ａｓｐ Ｖ
ａｌ Ａｌａ Ａｓｐ０ Ａｓｎ Ｇａｙ Ｔｈｒ Ｌｅｕ Ｐｈｅ Ｌｅｕ Ｇ
ｌｙ Ｉｌｅ Ｌｅｕ０ Ｌｙｓ Ａｓｎ Ｔｒｐ Ｌｙｓ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ｓ
ｅｒ Ａｓｐ Ａｒｇ０ Ｌｙｓ Ｉｃｅ Ｍｅｔ Ｇｌｎ Ｓｅｒ Ｇｉｎ Ｉ
ｌｅ Ｖａｌ Ｓｅｒ０ Ｐｈｅ Ｔｙｒ Ｐｈｅ Ｌｙｓ Ｌｅｕ Ｐｈｅ Ｔ
−ｙｓ Ａｓｎ Ｐｈｅ０ Ｌｙｓ Ａｓｐ Ａｓｐ Ｇｌｎ Ｓｅｒ Ｉｌｅ Ｇ
ｌｎ Ｔ、ｙｓ Ｓｅｒ０ Ｖａｌ Ｇｌｕ Ｔｈｒ、 Ｉｃｅ Ｌｙｓ Ｇｌｕ
Ａｓｐ Ｍｅｔ Ａ４ｎ°９０ Ｖａｌ Ｌｙｓ Ｐｈｅ Ｐｈｅ Ａｓｎ Ｓｅｒ Ａ
ｓｎ Ｌｙｓ Ｌｙｓ１０ Ｇｌｎ Ａｒｇ Ｌｙｓ Ａｌａ Ｉｌｅ Ｈｉｓ Ｇ
ｌｕ Ｌｅｕ ｌｉｅ２０ Ｇｉｎ Ｖａｌ Ｍｅｔ Ａｈａ Ｇｌｕ Ｌｅｕ Ｓ
ｅｒ Ｐｒｏ Ａｌａ３０ Ａｌａ Ｌｙｓ Ｔｈｒ Ｇａｙ Ｙ で表わされる新規生理活″Ｖ１ミポリペプチド。 （タヌし、Ｘは水素原子又はメチオニル基を表わし、Ｙ
は少くとも最初の２個が塩基性アミン水洩ｊ；ｌ：であ
る２個から１０個のアミノ酸残基からなるペプチドを表
わす。） ２ 次のアミノ酸配列： Ｘ Ｃｙｓ Ｔｙｒ Ｃｙｓ Ｇｌｎ Ａｓｐ Ｐｒｏ
Ｔｙｒ Ｖａｌ Ｌｙｓ０ Ｇｌｕ Ａｌａ Ｇｌｕ Ａｓｎ Ｌｅｕ Ｌｙｓ Ｌ
ｙｓ Ｔｙｒ Ｐｈｅ０ Ａｓｎ Ａｌａ Ｇａｙ Ｔ４ｉｓ Ｓｅｒ Ａｓｐ
Ｖａｌ Ａｌａ Ａｓｐ０ Ａｓｎ Ｇａｙ Ｔｈｒ Ｌｅｕ Ｐｈｅ Ｌｅｕ Ｇ
ａｙ Ｉｃｅ Ｌｅｕ０ Ｌｙｓ Ａｓｎ Ｔｒｐ Ｌｙｓ Ｇｌｕ にＩｕ Ｓ
ｅｒ ＡｓｐＡｒｇ０ Ｌｙｓ Ｉ Ｉｅ Ｍｅｔ Ｇｉｎ Ｓｅｒ Ｇｉｎ
Ｉｌｅ Ｖａｌ ＳｅｒＰｈｅ Ｔｙｒ Ｐｈｅ Ｌｙ
ｓ Ｌｅｕ Ｐｈｅ Ｌｙｓ Ａｓｎ Ｐｈｅ７０ Ｌｙｓ、 Ａｓｐ Ａｓｐ Ｇｔｎ Ｓｅｒ、 Ｉｌｅ
Ｇｌｎ Ｌｙｓ Ｓｅｒ０ Ｖａｌ Ｇｌｕ Ｔｈｒ Ｉｃｅ Ｌｙｓ Ｇｌｕ Ａ
ｓｐ Ｍｅｔ Ａｓｎ０ Ｖａｌ Ｌｙｓ Ｐｈｅ Ｐｈｅ Ａｓｎ Ｓｅ’ｒ
Ａｓｎ Ｌｙｓ ＬｙｓＬｙｓ Ａｒｇ Ａｓｐ Ａｓ
ｐ Ｐｈｅ Ｇｌｕ Ｌｙｓ Ｌｅｕ Ｔｈｒ１０ Ｇｉｎ Ａｒｇ Ｌｙｓ Ａｌａ Ｔｌｅ Ｈｉｓ Ｇ
ｌｕ Ｌｅｕ Ｉｌｅ２０ Ｇｌｎ Ｖａｌ Ｍｅｔ Ａｌａ Ｇｌｕ Ｌｅｕ Ｓ
ｅｒ Ｐｒａ Ａｌａで表わされる特、ｉ′１′請求の
範囲第１項記載の新規生理活性ポリペプチド。 （たマし、Ｘは水素原子またはメチオニル基を表わす。 ） ３ 特許請求の範囲第１項または第２項記載のポリペプ
チドをコードするＤＮＡ配列。 ４ 化学的に合成されたことを特徴とする特許請求の範
囲第３項記載のＤＮＡ配列。 ５ 次のＤＮＡ配列： ＡＡＧ ＧＡＡ ＧＣＴ ＧＡＡ ＡＡＣＣＴＧ ＡＡ
Ｇ ＡＡＡ ＴＡＣＴＴＣＣ，ＴＴ ＣＧＡ ＣＴＴ
ＴＴＧ ＧＡｃＴＴＣＴＴＴ ＡＴＧＴＴＣＡＡＣＧＣ
Ｔ ＧＧＴ ＣＡＴ ＴＣＴ ＧＡＣＧＴＴ ＧＣＴＡ
ＡＧ ＴＴＧ ＣＧＡ ＣＣＡ ＧＴＡ ＡＧＡ ＣＴ
Ｇ ＣＡＡ ＣＧＡＧＡＣＡＡＣＧＧＴ ＡＣＴ ＣＴ
Ｇ ＴＴＣＣＴＧ ＧＧＴ ＡＴＣＣＴＧ ＴＴＧ Ｃ
ＣＡ ＴＧＡ ＧＡＣＡＡＧ ＧＡＣＣＣＡ ＴＡＧＣ
ＴＧ ＡＡＡ ＡＡＣＴＧＧ ＡＡＡ ＧＡＡ ＧＡＡ
ＴＣＴ ＧＡＣＧＡＣＴＴＴ ＴＴＧ ＡＣＣＴＴＴ
ＣＴＴ ＣＴＴ ＡＧＡ ＣＴＧＣＧＴ ＡＡＡ Ａ
ＴＣＡＴＧ ＣＡＧ ＴＣＴ ＣＡＧ ＡＴＣＧＴＴＧ
ＣＡ ＴＴＴ ’ＴＡＧ ＴＡＣＧＴＣＡＧＡ ＧＴＣ
ＴＡＧ ＣＡＡＴＣＴ ＴＴＣＴＡＣＴＴＣＡＡＧ Ｃ
ＴＧ ＴＴＣＡＡＡ ＡＡＣＡＧＡ’ ＡＡＧ ＡＴＧ
ＡＡＧ ＴＴＣＧＡＣＡＡＧ ＴＴＴ ＴＴＧＴＴＣ
ＡＡＧ ＧＡＣＧＡＣＣＡＧ ＴＣＴ ＡＴＣＣＡＧ
ＡＡＡＡＡＧ ＴＴＣＣＴＧ ＣＴＧ ＧＴＣＡＧＡ
ＴＡＧ ＧＴＣＴＴＴＴＣＴ ＧＴＴ ＧＡＡ ＡＣＴ
ＡＴＣＡＡＧ ＧＡＡ ＧＡＣＡＴＧＡＧＡ ＣＡＡ
ＣＴＴ ＴＧＡ ＴＡＧ ＴＴＣＣＴＴ ＣＴＧ Ｔ
ＡＣＡＡＣＧＴＴ ＡＡＧ ＴＴＣＴＴＣＡＡＣＴＣＴ
ＡＡｃ ＡＡＧＴＴＧ ＣＡＡ ＴＴＣＡＡＧ ＡＡ
Ｇ ＴＴＧ ＡＧＡ ＴＴＧ ＴＴＣＡＡＡ ＡＡＧ
ＣＧＴ ＧＡＣＧＡＣＴＴＣＧＡＡ ＡＡＧ ＣＴＴＴ
ＴＴ ＴＴＣＧＣＡ ＣＴＧ ＣＴＧ ＡＡＧ ＣＴＴ
ＴＴＣＧＡＡＡＣＴ ＡＡＣＴＡＣＴＣＴ ＧＴＴ
ＡＣＴ ＧＡＣＣ，ＴＴ ＡＡＴＴＧＡ ＴＴＧ ＡＴ
Ｇ ＡＧＡ ＣＡＡ ＴＧＡ ＣＴＧ ＧＡＡ ＴＴＡ
ＧＴＡ ＣＡＧ ＣＧＴ ＡＡＡ ＧＣＴ ＡＴＣＣＡ
Ｔ ＧＡＡ ＣＴＧＣＡＴ ＧＴＣＧＣＡ ＴＴＴ Ｃ
ＧＡ ＴＡＣＧＴＡ ＣＴＴ ＧＡＣＡＴＣＣＡＧ Ｇ
ＴＴ ＡＴＧ ＧＣＴ ＧＡＡ ＣＴＧ ＴＣＣＣＣＧ
ＴＡＧ’ＧＴＣ−ＣＡＡ ＴＡＣＣＧＡ ＣＴＴ ＧＡ
ＣＡＧＧ ＧＧＣＧＣＴ ＧＣＴ ＡＡＡ ＡＣＴ Ｇ
ＧＴ ＡＡＧ ＣＧＴ ＡＡＡ ＡＧＡＣＧＡ ＣＧＡ
ＴＴＴ ＴＧＡ ＣＣＡ ＴＴＣＧＣＡ ＴＴＴ Ｔ
ＱＴＣＴ ＡＧＡ を含むことを特徴とする特許請求の範囲第３項または第
４項記載のＤＮＡ配列。 ６ 上記ＤＮＡ配列の」二流にはＥＣＯＲＩすＪ断点を
有するＤＮＡ断片を、下流には１及至２個の終止コドン
（ＴＡＡ又はＴＡＧ ）とＳａｌ ｌ切断点を有するＤ
ＮＡ断片を付加したことを特徴とするＤＮＡ配列。 ７ 特許請求の範囲第１項記載のポリペプチドをコード
するＤＮＡ配列が、該ポリペプチドを発現させうるＤＮ
Ａ配列に有効に連結していることを特徴とする発現ベク
ター。 ８ 大腸菌のｔｒｐとＩａｃプロモーターのハイブリッ
ドプロモーターであるｔａｃプロモーター。 ラクト−ス・レプレッサー遺伝子１ａｃｉ’、およびプ
ラスミドコピー数の増加をもたらす機能をイＴするプラ
スミドＤＮＡを含むことを特徴とする１、′１許請求の
範囲第７項記載の発現ベクター。 ９ 大腸菌リポ蛋白質支配構造遺伝子の改変された５′
未非翻訳領域を有していることを特徴とする特許請求の
範囲第７項記載の発現ベクター。 １０ ｐＹｔａｃＧＩＦ １３５もしくはｐｔａｃ Ｇ
ＩＦ １．３５ からなるグループから選択されること
を特徴とする特許請求の範囲第８項記載の発現ベクター
。 １１ ｐｌＮＧＩＦ１３５からなるグループから選択さ
れることを特徴とする特許請求の範囲第９項記１１ｉ９
の発現ベクター。 １２、特許請求の範囲第１項記載のポリペプチドをコー
ドする遺伝子が発現されうるように組み込まれた発現ベ
クターによって形質転換された単細胞微生物形質転換体
。 １３ 上記発現ベクターが、特許請求の範囲第７項から
第１１項記載のい守れかの発現ベクターであることを特
徴とする特許請求の範囲第１２項に記載の形質転換株。 １４ 形質転換される微小物が大腸菌であることを特徴
とする特許請求の範囲第１３項に記載の形質転換株。 １５ ＷＡ ８０２／ ｐＹｔａｃ ＧＩＦ １３５
もしくはＷＡ ８０２／ｐｔａｃＧＩＦ ］ ３５から
なるグループから選択されるとＬを特徴とする特許８青
求の範囲第１４項に記載の形質転換株。 １６ ＷＡ８０２／ｐｌＮＧＩＦ１３５もしくはＷ３］
１０／ｐＩ ＮＧ Ｉ’Ｆ ］ ３５ からなるグルー
プから選択されることを特徴とする特許請求の範囲第１
４項記載の形質転換株。 １７ 特許請求の範囲第９項から第１２項記載のいずれ
かの形質転換株を培養して得ることを特徴とする特許請
求の範囲第１項に記載のポリペプチドを製造する方法。 １８ 特許請求の範囲第１項記載のポリペプチドを含有
することを特徴とする特許請求の範囲第１２項から第１
６項までのいずれかに記載された形質転換株の培養組成
物。
Priority Applications (4)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP58194539A JPH0788398B2 (ja) | 1983-10-17 | 1983-10-17 | 新規生理活性ポリペプチドおよびその製造法 |
| EP84307098A EP0145174B1 (en) | 1983-10-17 | 1984-10-16 | Novel, physiologically active polypeptides and production method thereof |
| AT84307098T ATE46348T1 (de) | 1983-10-17 | 1984-10-16 | Neue, physiologisch aktive polypeptide und deren herstellungsverfahren. |
| DE8484307098T DE3479734D1 (en) | 1983-10-17 | 1984-10-16 | Novel, physiologically active polypeptides and production method thereof |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP58194539A JPH0788398B2 (ja) | 1983-10-17 | 1983-10-17 | 新規生理活性ポリペプチドおよびその製造法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS6084298A true JPS6084298A (ja) | 1985-05-13 |
| JPH0788398B2 JPH0788398B2 (ja) | 1995-09-27 |
Family
ID=16326212
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP58194539A Expired - Lifetime JPH0788398B2 (ja) | 1983-10-17 | 1983-10-17 | 新規生理活性ポリペプチドおよびその製造法 |
Country Status (4)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0145174B1 (ja) |
| JP (1) | JPH0788398B2 (ja) |
| AT (1) | ATE46348T1 (ja) |
| DE (1) | DE3479734D1 (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS6349098A (ja) * | 1986-08-13 | 1988-03-01 | エフ．ホフマン ― ラ ロシュ アーゲー | 均質な組換え免疫インタ−フエロン断片 |
| US11066744B2 (en) | 2018-07-23 | 2021-07-20 | Kokusai Electric Corporation | Substrate processing apparatus, method of manufacturing semiconductor device, and recording medium |
Families Citing this family (11)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS6054685A (ja) * | 1983-09-02 | 1985-03-29 | Suntory Ltd | 改良発現ベクタ−およびその利用 |
| US4855238A (en) * | 1983-12-16 | 1989-08-08 | Genentech, Inc. | Recombinant gamma interferons having enhanced stability and methods therefor |
| JPS60172999A (ja) * | 1983-12-20 | 1985-09-06 | Suntory Ltd | 新規な塩基性ポリペプチドおよびその製造法 |
| DK168016B1 (da) * | 1983-12-26 | 1994-01-17 | Kyowa Hakko Kogyo Kk | Derivat af humant interferon-gamma-polypeptid |
| GB2164650A (en) * | 1984-09-25 | 1986-03-26 | Fujisawa Pharmaceutical Co | Process for production of y-interferon |
| CA2232344C (en) * | 1995-10-20 | 2005-04-05 | University Of Nebraska Board Of Regents | Compositions and methods for enhancing immune responses mediated by antigen-presenting cells |
| US7230081B1 (en) | 1999-11-12 | 2007-06-12 | Maxygen Holdings, Ltd. | Interferon gamma conjugates |
| JP2003513681A (ja) | 1999-11-12 | 2003-04-15 | マキシゲン・ホールディングス・リミテッド | インターフェロンガンマ・コンジュゲート |
| US7038015B2 (en) | 2001-04-06 | 2006-05-02 | Maxygen Holdings, Ltd. | Interferon gamma polypeptide variants |
| US6958388B2 (en) | 2001-04-06 | 2005-10-25 | Maxygen, Aps | Interferon gamma polypeptide variants |
| WO2004005341A2 (en) | 2002-07-03 | 2004-01-15 | Maxygen Holdings Ltd. | Full-length interferon gamma polypeptide variants |
Family Cites Families (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| AU561343B2 (en) * | 1981-10-19 | 1987-05-07 | Genentech Inc. | Human immune interferon by recombinant dna |
| JPS58110548A (ja) * | 1981-12-24 | 1983-07-01 | Asahi Chem Ind Co Ltd | 新規な生理活性ペプチド |
| EP0088540A3 (en) * | 1982-02-22 | 1984-10-17 | Biogen, Inc. | Dna sequences, recombinant dna molecules and processes for producing human immune interferon-like polypeptides |
| IL68100A0 (en) * | 1982-03-24 | 1983-06-15 | Takeda Chemical Industries Ltd | Novel dna and use thereof |
-
1983
- 1983-10-17 JP JP58194539A patent/JPH0788398B2/ja not_active Expired - Lifetime
-
1984
- 1984-10-16 EP EP84307098A patent/EP0145174B1/en not_active Expired
- 1984-10-16 AT AT84307098T patent/ATE46348T1/de not_active IP Right Cessation
- 1984-10-16 DE DE8484307098T patent/DE3479734D1/de not_active Expired
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS6349098A (ja) * | 1986-08-13 | 1988-03-01 | エフ．ホフマン ― ラ ロシュ アーゲー | 均質な組換え免疫インタ−フエロン断片 |
| US11066744B2 (en) | 2018-07-23 | 2021-07-20 | Kokusai Electric Corporation | Substrate processing apparatus, method of manufacturing semiconductor device, and recording medium |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| DE3479734D1 (en) | 1989-10-19 |
| EP0145174B1 (en) | 1989-09-13 |
| JPH0788398B2 (ja) | 1995-09-27 |
| EP0145174A1 (en) | 1985-06-19 |
| ATE46348T1 (de) | 1989-09-15 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Reidl et al. | MalI, a novel protein involved in regulation of the maltose system of Escherichia coli, is highly homologous to the repressor proteins GalR, CytR, and LacI | |
| EP0319049A2 (en) | Growth hormone analogs, pharmaceutical and veterinary compositions containing said analogs and methods for production thereof | |
| JP2014518063A5 (ja) | ||
| JPH03504240A (ja) | インシュリン類似物質 | |
| JPS6054685A (ja) | 改良発現ベクタ−およびその利用 | |
| JPH06510434A (ja) | 組換えコア・ストレプトアビジン | |
| EP0145174B1 (en) | Novel, physiologically active polypeptides and production method thereof | |
| CN108642027A (zh) | 一种壳聚糖酶细胞表面展示体系及其制备和应用 | |
| JP2967557B2 (ja) | ヒトマンガンスーパーオキシドジスムターゼｃＤＮＡ、その細菌中での発現及び酵素活性ヒトマンガンスーパーオキシドジスムターゼの回収方法 | |
| JPH0829098B2 (ja) | 細胞接着活性ポリペプチド | |
| Surin et al. | Purification of the PhoU protein, a negative regulator of the pho regulon of Escherichia coli K-12 | |
| EP0352089B1 (en) | A modified human PSTI | |
| JP3004788B2 (ja) | アルギニンデイミナーゼ発現ベクター、形質転換微生物およびアルギニンデイミナーゼの製造法 | |
| CN114292315B (zh) | ppc突变体及其在制备L-缬氨酸中的应用 | |
| JPS6069098A (ja) | セクレチンの調製法 | |
| JPS62175192A (ja) | ヒトインスリン様成長因子１の製造法 | |
| CN114716566A (zh) | 一种融合蛋白及其在制备肿瘤药物中的应用 | |
| JP2612809B2 (ja) | 新規生理活性ポリペプチドをコードするｄｎａ配列、その発現ベクターおよび形質転換体 | |
| JP2829397B2 (ja) | フィブリン結合活性ポリペプチド | |
| US5316919A (en) | Method of producing 2 KD to 10 KD peptides having no L-methionine residue | |
| JP3012664B2 (ja) | ベクターによる糸状菌類の形質転換方法 | |
| Serikawa et al. | Efficient expression and Zn (II)-dependent structure of the DNA binding domain of the yeast GAL4 protein | |
| CN118307646A (zh) | 一种多肽及其应用 | |
| JPS62246522A (ja) | インタ−ロイキン１を有効成分とする感染症予防・治療剤 | |
| JPH03130088A (ja) | 組み替えｄｎａ法によるポリペプチドの製造法 |