JPS6089428A - 血漿蛋白の加熱処理方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は、加熱に対して不安定な血漿蛋白のキウイルス
不活化のための加熱処理法に関するものである。

従来より、アルブミンなどの血漿蛋白についてそこに混
入してくる懸念のあるウィルスを不活化する最も確実な
方法として、水溶液状態での加熱処理法（以下、液状加
熱法と称す）が、Ｍｕｒｒａ３１ら（Ｔｈｅ　Ｎｅｗ　
Ｙｏｒｋ　Ａｃａｄｅｍｙ　ｏｆ　Ｍｅｄｉｃｉｎｅ＋
　３１　（５）、３４１〜３５８　（１９５５））の報
告に基づいてとられており、以来今日に至るまで長年に
亘り汎用され、疫学的にも液状加熱法のウィルス不活化
効果が立証されている。

゛　しかしながら、アルブミンの様に液状加熱に耐える
ものは、血漿蛋白の中でも極く限られており、特に生理
活性、又は生物活性を有する血漿蛋白は熱に対し非常に
敏感で、熱変性をおこ１７易く、活性の低下、消失を招
きやすい。従って、ある種の安定化剤の存在下に加熱処
理を行っている。

加熱処理（以下、乾熱処理）を行うと、液状加熱法に比
べ、その活性の低下が著しく抑制されることが血液凝固
箱■因子をモデルとする実験で明らかとなった（第１表
参照）。しかし、乾熱処理においても、安定化剤を添加
しなげれば血漿蛋白の活性低下はまぬがれ得ないし、ま
た、水に対する熔解性及び溶状が悪くなる。

ところで、加熱によるウィルス不活化の作用機序は、液
状加熱では主としてウィルスの蛋白質成分の変性に基づ
いているのに対し、乾熱処理では主にウィルスの脂質成
分の酸化によって損害を受け、病原性が失われるといわ
れており、両法のウィルス不活化機構はお互いに重なり
合う部分があるものの、基本的には異なることが示唆さ
れている（Ｒａｈｎ、　Ｐｈｙｓｉｃａｌ　Ｍｅｔｈｏ
ｄｓ　ｏｆ　５ｔｅｒｉｌｉｚａｔｉｏｎｏｆ　Ｍａｃ
ｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｓ、　Ｂａｃｔ、　Ｒｅｖ、９．
　１　４７　（１９４５））。

そこで、本発明者らは血漿蛋白の乾熱処理における安定
化剤の検索を行って来たところ、酸性アミノ酸と塩基性
アミノ酸との塩（以下、アミノ酸塩と称す）が顕著な安
定化効果を有すること、及びアミノ酸塩の存在下に加熱
処理を行ったものは水に対する溶解性、及び液状が良い
ことを見いだして本発明を完成した。

即ち、本発明はウィルス夾雑血漿蛋白を、乾燥状態にて
酸性アミノ酸と塩基性アミノ酸との塩の存在下に、ウィ
ルスが不活化されるまで加熱することを特徴とする血漿
蛋白の加熱処理方法に関する。

本発明における加熱処理対象である血漿蛋白は、血グた
蛋白を分画して得られるもの〜これらの二種以上の混合
物であり、通常は生物活性またｔま９＝理活性を有する
ものがその加熱処理の３４象とされる。かかる血漿蛋白
としてしま、血液凝固第■因子、第■因子、第■因子、
フイブリノゲン、トロンビン、プラスミノゲン、アルブ
ミン、り゛ロフ゛１ノンなどがあげられる。

本発明にて線用されるアミノ酸塩しこおしする酸４生ア
ミノ酸としては、アスパラギン酸、り゛ルタミン酸が、
また塩基性アミノ酸としてしま、ヒスチジン、リジン、
アルギニンがあげられる。これら（まし体、０体、ＤＬ
体のいずれでもよし）力＜１子ましくはＬ体が用いられ
る。塩の具体例としてしま、たとえばリジン−グルタミ
ン酸塩（就中、Ｌ　−ＩＪリジンＬ−グルタミン酸塩、
Ｌ−リジン・Ｌ−アスノくラギン酸塩など）などが例示
される。

アミノ酸塩の量は血漿蛋白に対して通常０．０１〜１０
重量％存在させればよも）。０．Ｏ１重量％希呈度から
安定化効果が発Ｉ屯され、１０重量％で安定化効果が飽
和される。好まい１添加量心よ０．５〜１重量％であり
、この程度の添加量心こおＧ１て安定イヒ効果と製剤化
のバランスが最も良好である。

加熱処理における加熱温度は、通常３０〜１００℃、好
ましくは６０℃程度であり、加熱時間は、通常１０分〜
４８時間、好ましくは１０・時間程度である。

本発明の加熱処理による不活化対象とされるウィルスは
、ヒト血漿蛋白に夾雑が危惧されるウィルスであり、特
に肝炎ウィルスなどである。

また、血漿蛋白の精製度と耐熱性とは相関性が乏しく、
どのような精製度の血漿蛋白を用いても、アミノ酸塩の
安定化効果は変わらない。従って、本発明の加熱処理は
血漿蛋白の精製工程のどの段階で行ってもよい。

本発明乾燥処理における乾燥状態は実質的に無水の状態
であり、可及的に水分の少ない状態であることが好まし
い。

本発明によるときは貴重な血液製剤である血！Ｉｉ蛋白
の活性を大きく損失することなく、製剤中に混入が危惧
されるウィルスを不活化できるから、血漿蛋白製剤の工
業的製法として有益である。

以下、本発明を実験例及び実施例により説１！ＩＪする
が、本発明は実施例によって何ら限定されるものではな
い。

実験例１ 血液凝固第■因子溶液、及び当該溶液を凍結乾燥したも
のをそれぞれオートクレーブ中、６０°Ｃで２０時間加
熱処理し、それぞれにおける第■因子の活性の変化を調
べ、その結果を第１表に示した。

第１表 （余白） 実験例２ 血液凝固第■因子溶液に、第２表記載の安定化。

剤をそれぞれ２重量％づつ添加してから凍結乾燥し、そ
の後、この乾燥床を１２０℃、２０分間、オートクレー
ブ中で加熱し、第■因子活性の残存率を１ｌａｒｄｉｓ
ｔｙ　１段法の八ＰＴＴの測定によりめた。

また、加熱処理後の各乾燥床を蒸溜水に溶解させ、その
溶解性及び液状（澄明度）を視認した。それらの結果は
第２表に示す通りである。

（余白） 第２表 ＊ｌ溶解性二〇・・・ただちに熔ける △・・・溶けにくい ＊２澄明度二〇・・・無色透明、不溶物なし△・・・に
ごりあり ×・・・にごり及び不溶物あり 実施例１ 精製第■因子ペースト１ｇに０．０２Ｍクエン酸塩・食
塩緩衝液（ｐｈ６．８）　１０ｍｌを加えて溶かした後
、Ｌ−リジン・Ｌ−グルタミン酸塩０．１ｇを加えて溶
かし、均一にしたのち除菌濾過し、１ｍｌずつガラスア
ンプルに分注、凍結乾燥、溶封等の一連の操作を行って
第■因子乾燥品を得た。この後、乾燥アンプルを６０℃
、７２時間水浴中で加熱した。加熱後、各アンプルに蒸
溜水１ｍｌを加えて溶解し、溶状観察と第■因子活性測
定とを行った。その結果、Ｌ−リジン・Ｌ−グルタミン
酸塩添加加熱群は、無添加非加熱群よりも良好な溶状を
示し、且つ活性はほぼ１００％保持されていた。また、
■Ｒ：Ａｇ／■：Ｃ比は２．８８を示し、加熱処理によ
る変性がほとんどないことを示した。

実施例２ 第■因子複合体の液状バルクに、Ｌ−リジン・Ｌ−グル
タミン酸塩を１％量添加し、実施例１と同様の加熱処理
条件で実験を行った。その結果、無添加加熱群は加熱処
理前値に比べ約２０％の活性低下をみたのに対し、添加
加熱群では７％以下の活性低下にとどまった。

実施例３ フィブリノゲン、プラスミノゲン及びトロンビンの各溶
液にＬ−リジン・Ｌ−グルタミン酸塩を０．５％量添加
し、以下実施例１と同様に乾熱処理を行った。その結果
、いずれも９０％以上の力価が保持され、溶解性、溶状
も極めて良好な乾熱処理製剤を得、乾熱処理を施してな
い製剤と比べ全く遜色のないものであった。

手続補正書（自船 ２９発明の名称 事件との関係　特許出願人 ■５４１ 住　所　大阪市東区平野町４丁目５３番地３ニューライ
フ平野町４０６号 電話（０６）　２２７−１１５６ ６、補正により増加する発明の数 ７、補正の対象 明細書の「発明の詳細な説明」の欄 （１）明細書記４頁、第１４〜１５行のｒ−Ｌ−グルタ
ミン酸塩、Ｌ−リジン・Ｌ−アスパラギン酸塩などノな
とｊヶ「・Ｌ−グルタミン酸廖バＬ−リジン・Ｌ−アス
パラギン酸塩など」に訂正する０ （２）回書第５頁、第４行の「ｌ（）分〜４８時間、好
フしくは１０時間」ケｒｌｏ分〜１００時間、好互しく
はｌＯ〜：（０時間」に訂正丁／）。

（３）同＄第５頁、下から第５行の「好ましい。」の次
に「水分含量は、通常１．５％以下、好１しくけ１％以
下である。」ケ加入する０ （４）同書第８頁、第２衣中の 手　続　補　正　書（自発） 昭和５８年１１月１斗日 １、事件の表示 昭和５８年特許願第１９（Ｎ（５６号 ２、発明の名称 血ｌ４ｊ１蛋白の加熱処理方法 ３、補正をする者 事件との関係　特許出願人 氏名（名称）　株式会社ミドリ十字 ４、代理人 ■５４１ 住　所　大阪市東区平野町４丁目５３番地３ニューライ
フ平野町４０６号 電話（０６）　２２７−１１５６ ６、補正により増加する発明の数 ７、補正の対象 （１）明細書第２頁、第６行〜第７行の「従って、あ６
種の安定化剤の存在下に加熱処理を行−ンてい＾。」葡
削除テる。

（２）同書第３頁、最終行の「これらの」の前に「あめ
いは」を仲人する〇 （３）同杏第６頁、第６行の「オートクレーブ」ｔ「温
浴」に訂正する。

（４）　同書ｍ　７　頁、７７４４行（／、Ｊｒ１２０
℃」２ｒｉｚ１℃Ｊに訂正する〇 （５）同書第９頁、第３行のｒｌ）ｈ　Ｊ　ｒ　ｒ　Ｉ
）ＨＪに訂正丁７）０ （６）同書（昭第１１５８年ｌＯ月２：）日提出の手続
袖止畏、第２頁、ｍ７行〜第８行ノの［−１Ｏ分〜１０
０時間、好１しくけ１０〜３０時間」葡ｒ　ｒ　。

分〜２０（）時間、好１しくはｌＯ〜ｌ　０１）時間」
に訂正了ゐ。

以Ｆ 手続ネｊｔｉ正書（自発） 昭和５９年１２月６日 特許庁長官　殿 １、事件の表示 昭和５８年特許願第１９６８５６号 ２、発明の名称 血漿蛋白の加熱処理方法 ３、補正をする考 事件との関係　特許出願人 氏名（名称）　株式会社　ミドリ十字 ４、代理人■５４１ 住所　大阪市東区平野町４丁目５３番地３ニューライフ
平野町４０６号 電話（０６）　２２７−１１５６ 明細書の「発明の詳細な説明」の欄 ６、補正の内容 （１）明細書第９頁、第１行の前に下記の記載を挿入す
る。

「実験例３ 血液凝固節■因子溶液にＬ−リジン・Ｌ−グルタメート
を第■因子活性２５１ｉ位／　ｍ　１当たり、５■添加
溶解の後、これに０．０５Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７，１
）のウィルス懸濁液を加え、均一に混和した後、ガラス
ＩＩＨ中にて凍結乾燥を行った。凍結乾燥終了外６５・
窒素ガスにて平圧に戻して密栓し、６０℃の温浴中に浸
漬、加熱した。尚、）１ハ内の温度が６０℃に達するま
で１０〜１５分を要するので、実際は３０分間それぞれ
加熱時間を延長して行った。

各ウィルスの感染性はｐｌａｑｕｅ　ｆｏｒｍｉｎｇ法
にて測定した。

結果は第３表に示す通りである。

第３表 ａ）　ｐｌａｑｕｅ　ｆｏｒｍｉｎｇ単ｆｖｍｌＪ以上

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. ウィルス夾雑血漿蛋白を乾燥状態にて、酸性アミノ酸と
   塩基性アミノ酸との塩の存在下に、ウィルスが不活化さ
   れるまで加熱することを特徴とする血漿蛋白の加熱処理
   方法。