JPS60989B2 - ムラサキ科植物の組織培養方法 - Google Patents
ムラサキ科植物の組織培養方法Info
- Publication number
- JPS60989B2 JPS60989B2 JP56200132A JP20013281A JPS60989B2 JP S60989 B2 JPS60989 B2 JP S60989B2 JP 56200132 A JP56200132 A JP 56200132A JP 20013281 A JP20013281 A JP 20013281A JP S60989 B2 JPS60989 B2 JP S60989B2
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- JP
- Japan
- Prior art keywords
- family
- plants
- tissue culture
- acid
- callus
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- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Description
【発明の詳細な説明】
この発明はシコニン等のナフトキノン系の色素を含有す
るムラサキ料植物の組織培養方法に関する。
るムラサキ料植物の組織培養方法に関する。
さらに詳しくは特定の組成の液体培地を用いて、ムラサ
キ科の植物を組織培養することにより、ナフトキノン系
化合物その他の有用成分を多量に効率よく生産する方法
に関する。ムラサキ料の植物であるムラサキの根には下
記の式 −（Ｒ＝−ＯＨ，一ＯＣＯＣＨ３など） で示されるシコニン（Ｒ＝ＯＨ）等のナフトキノン系の
化合物が含まれており、従来から「紫根」と呼ばれ漢方
薬に用いられている。
キ科の植物を組織培養することにより、ナフトキノン系
化合物その他の有用成分を多量に効率よく生産する方法
に関する。ムラサキ料の植物であるムラサキの根には下
記の式 −（Ｒ＝−ＯＨ，一ＯＣＯＣＨ３など） で示されるシコニン（Ｒ＝ＯＨ）等のナフトキノン系の
化合物が含まれており、従来から「紫根」と呼ばれ漢方
薬に用いられている。
すなわちゴマ油等の油脂によって、紫根からシコニンそ
の他の物質を抽出して得られる軟膏は紫雲菅と呼ばれ各
種皮膚疾患、切傷、火傷、痔疾等の症状に用いられ、血
管透化性冗進、肉芽形成作用等のあることが知られてい
る。しかしながら紫根から抽出できるシコニン等の薬効
成分は徴量であり、またムラサキの裁塔には時間がかか
り、自然環境や天候にも左右される等の問題があり、そ
の安定供給が危ぶまれている。
の他の物質を抽出して得られる軟膏は紫雲菅と呼ばれ各
種皮膚疾患、切傷、火傷、痔疾等の症状に用いられ、血
管透化性冗進、肉芽形成作用等のあることが知られてい
る。しかしながら紫根から抽出できるシコニン等の薬効
成分は徴量であり、またムラサキの裁塔には時間がかか
り、自然環境や天候にも左右される等の問題があり、そ
の安定供給が危ぶまれている。
これに対し、組織培養方法を用いてムラサキ科の植物を
増殖させることが、田端守「水上元らによつて「フアイ
トケミストリ−（Ｐｈｙｔｏｃｈｅｍｉｓｔび）第１９
登第９２７ページ、「薬学雑誌」第９９登第１３７６ペ
ージ、「ファイトケミストリー」（Ｐｈｙめｃｈｅｍｉ
ｓｔび）第１６巻第１１８３ページ、同第１７巻第９５
ページに報告されている。
増殖させることが、田端守「水上元らによつて「フアイ
トケミストリ−（Ｐｈｙｔｏｃｈｅｍｉｓｔび）第１９
登第９２７ページ、「薬学雑誌」第９９登第１３７６ペ
ージ、「ファイトケミストリー」（Ｐｈｙめｃｈｅｍｉ
ｓｔび）第１６巻第１１８３ページ、同第１７巻第９５
ページに報告されている。
この方法によれば、季節、天候に左右されることなく、
ムラサキ科の植物を増殖させることができるので非常に
有利である。しかしながらこれらに開示されている方法
では、いずれも培地を寒天で固体状にして使用しており
、大量生産には不適当である。そこで本発明者らは大量
生産に適している液体塔地を用いて、同機にカルスを生
育させる方法を検討し、まず田端らの用いた培地（リン
スマィヤースクーグの培地）に寒天を添加することなく
液体培地の形態でムラサキの組織培養に使用したが、カ
ルスはある程度増殖するものの、シコニン等の色素生成
量は少量であり、またその生成量もバラッキが大きく安
定した収量を確保することができなかった。
ムラサキ科の植物を増殖させることができるので非常に
有利である。しかしながらこれらに開示されている方法
では、いずれも培地を寒天で固体状にして使用しており
、大量生産には不適当である。そこで本発明者らは大量
生産に適している液体塔地を用いて、同機にカルスを生
育させる方法を検討し、まず田端らの用いた培地（リン
スマィヤースクーグの培地）に寒天を添加することなく
液体培地の形態でムラサキの組織培養に使用したが、カ
ルスはある程度増殖するものの、シコニン等の色素生成
量は少量であり、またその生成量もバラッキが大きく安
定した収量を確保することができなかった。
本発明者らは、特磯昭５５一１１５９０３号で提案した
ようにムラサキ料の植物の組織培養に適し、かつシコニ
ン等のナフトキノン系化合物が多量に生成する液体塔地
について、検討を重ねた結果、培地中の窒素源のうちア
ンモニウムイオンを１０モル％以下にすることにより、
増殖が速やかに行われ、ナフトキノン系化合物が多量に
生成し、その生成量のバラッキも少なく、安定した生産
を確実に行うことができることを見出した。
ようにムラサキ料の植物の組織培養に適し、かつシコニ
ン等のナフトキノン系化合物が多量に生成する液体塔地
について、検討を重ねた結果、培地中の窒素源のうちア
ンモニウムイオンを１０モル％以下にすることにより、
増殖が速やかに行われ、ナフトキノン系化合物が多量に
生成し、その生成量のバラッキも少なく、安定した生産
を確実に行うことができることを見出した。
しかしその後さらに検討を進めた結果、窒素源のうちア
ンモニウムイオンが１０モル％を越えても、コハク酸、
フマル酸およびリンゴ酸から選ばれる少なくとも１種以
上の成分を加えれば、上述の場合と同様にナフトキノン
系化合物の生産を行うことができることを見出し、この
発明を完成するに至った。すなわちこの発明は、窒素源
としてアンモニウムイオンを存在させるとともに、コハ
ク酸、フマル酸およびリンゴ酸からなる群より選ばれる
少なくとも１種以上の有機酸成分をアンモニウムイオン
の１／２０〜５倍モルの割合で含有せしめた液体塔地を
用いることを特徴とするムラサキ科の植物の組織培養方
法に関する。この発明で使用される液体塔地には、アン
モニウムイオンが存在し、上記の有機醸成分の濃度が上
記範囲内である限り、他の培地成分に何ら限定されるも
のではなく、通常の植物の組織培養に用いられる渚地組
成のうちの窒素源、あるいはさらに他の組成を適宜改変
して用いることができる。
ンモニウムイオンが１０モル％を越えても、コハク酸、
フマル酸およびリンゴ酸から選ばれる少なくとも１種以
上の成分を加えれば、上述の場合と同様にナフトキノン
系化合物の生産を行うことができることを見出し、この
発明を完成するに至った。すなわちこの発明は、窒素源
としてアンモニウムイオンを存在させるとともに、コハ
ク酸、フマル酸およびリンゴ酸からなる群より選ばれる
少なくとも１種以上の有機酸成分をアンモニウムイオン
の１／２０〜５倍モルの割合で含有せしめた液体塔地を
用いることを特徴とするムラサキ科の植物の組織培養方
法に関する。この発明で使用される液体塔地には、アン
モニウムイオンが存在し、上記の有機醸成分の濃度が上
記範囲内である限り、他の培地成分に何ら限定されるも
のではなく、通常の植物の組織培養に用いられる渚地組
成のうちの窒素源、あるいはさらに他の組成を適宜改変
して用いることができる。
すなわち通常の渚地は、炭素源またはエネルギー源、無
機塩類「窒素源、ビタミン等の発育因子等を含有してい
る。ここに炭素源またはエネルギー源としては、ショ糠
等の炭水化物とその誘導体、エタノール等の一級アルコ
ール、アスパラギン酸等のアミノ酸などが例示され、無
機塩類としては塩化カルシウム、硫酸マグネシウム、硫
酸鉄、リン酸三水素カリウム等が例示される。また窒素
源としては、通常アンモニウムイオン、硝酸イオン、ア
ミノ酸またはべブトンのような複雑なタンパク質の分解
物等の窒素含有化合物が例示される。
機塩類「窒素源、ビタミン等の発育因子等を含有してい
る。ここに炭素源またはエネルギー源としては、ショ糠
等の炭水化物とその誘導体、エタノール等の一級アルコ
ール、アスパラギン酸等のアミノ酸などが例示され、無
機塩類としては塩化カルシウム、硫酸マグネシウム、硫
酸鉄、リン酸三水素カリウム等が例示される。また窒素
源としては、通常アンモニウムイオン、硝酸イオン、ア
ミノ酸またはべブトンのような複雑なタンパク質の分解
物等の窒素含有化合物が例示される。
この発明に利用される液体塔地として具体的には、リン
スマィヤースクーグの培地「プレイデスの培地、ガンボ
ルグの培地、ニツチ＆ニツチの培地およびそれらの改変
塔地などがあり、これらの培地中のアンモニウムイオン
の割合を窒素源のうちの０．１モル％以上、好ましくは
８０モル％以下、とくに好ましくは５ないし５０モル％
程度とし、さらにコハク酸、フマル酸およびリンゴ酸か
ら選ばれる少なくとも１種以上の有機酸成分をアンモニ
ウムイオンの１′２０〜５倍モル「好ましくは１′５〜
２倍モル添加して用いられる。
スマィヤースクーグの培地「プレイデスの培地、ガンボ
ルグの培地、ニツチ＆ニツチの培地およびそれらの改変
塔地などがあり、これらの培地中のアンモニウムイオン
の割合を窒素源のうちの０．１モル％以上、好ましくは
８０モル％以下、とくに好ましくは５ないし５０モル％
程度とし、さらにコハク酸、フマル酸およびリンゴ酸か
ら選ばれる少なくとも１種以上の有機酸成分をアンモニ
ウムイオンの１′２０〜５倍モル「好ましくは１′５〜
２倍モル添加して用いられる。
該有機酸は遊離の状態で加えてもよく、あるいはナトリ
ウム塩やカリウム塩のような塩の形で使用してもよい。
上記有機醸成分がアンモニウムイオンの１／２び音モル
未満では、ナフトキノン系化合物の生成量が減少し、ま
た５倍モルを越えても大きな変化は見られないが、わず
かに生成量の減少が見られる。この発明においては、液
体塔地中の無機イオンの濃度をとくに特定範囲に調整す
ることにより、さらにナフトキノン系化合物の収量を向
上させることもできる。例えば銅濃度を０．２山Ｍ以上
にすればナフトキノン系化合物の生成量はさらに増大す
る。その他、液体塔地中には、オーキシン類、例えば２
０４−ジクロロフェノキシ酢酸（２１４−Ｄ）、ナフタ
レン酢酸、インドール酢酸等の化合物が０．１〜１００
仏Ｍ、好ましくは０．５〜ｌＯＡＭの濃度で含有されて
いることが好ましく、この場合カィネチン、ゼアチン等
のサィトカィニン類を０。
ウム塩やカリウム塩のような塩の形で使用してもよい。
上記有機醸成分がアンモニウムイオンの１／２び音モル
未満では、ナフトキノン系化合物の生成量が減少し、ま
た５倍モルを越えても大きな変化は見られないが、わず
かに生成量の減少が見られる。この発明においては、液
体塔地中の無機イオンの濃度をとくに特定範囲に調整す
ることにより、さらにナフトキノン系化合物の収量を向
上させることもできる。例えば銅濃度を０．２山Ｍ以上
にすればナフトキノン系化合物の生成量はさらに増大す
る。その他、液体塔地中には、オーキシン類、例えば２
０４−ジクロロフェノキシ酢酸（２１４−Ｄ）、ナフタ
レン酢酸、インドール酢酸等の化合物が０．１〜１００
仏Ｍ、好ましくは０．５〜ｌＯＡＭの濃度で含有されて
いることが好ましく、この場合カィネチン、ゼアチン等
のサィトカィニン類を０。
１〜１００ｒＭ、とくに１〜１５ｒＭの濃度で液体塔地
中に共存させておくと、カルスの生育およびナフトキノ
ン系化合物の生産に良好である。
中に共存させておくと、カルスの生育およびナフトキノ
ン系化合物の生産に良好である。
また液体培地には必要に応じて更にィーストェキス、麦
芽エキス、トマト汁、カザミノ酸、ココナツミルク、ビ
タミン混合物等の栄養物を添加してもよい。
芽エキス、トマト汁、カザミノ酸、ココナツミルク、ビ
タミン混合物等の栄養物を添加してもよい。
この発明の組織培養方法の好適例としては、以下のよう
な方法がある。
な方法がある。
即ちムラサキ料に属する植物の植物体、例えば根、生長
点、葉、茎、種子などから採取された組織片を殺菌処理
後、寒天で固めたりンスマィャースクーグの固体塔地上
に層床し、１０〜３５つ０で７〜３０日程度経過後、組
織片の一部をカルス化させる。このようにして得られた
カルスを継代培養すると生育速度が漸次高まり安定化し
たカルスが得られる。このカルスを前記した液体培地中
に添加して、振とうすることにより組織培養する。この
発明においては、光は必ずしも必要ではなく、かえって
賭所での培養がカルスの生育に望ましい。
点、葉、茎、種子などから採取された組織片を殺菌処理
後、寒天で固めたりンスマィャースクーグの固体塔地上
に層床し、１０〜３５つ０で７〜３０日程度経過後、組
織片の一部をカルス化させる。このようにして得られた
カルスを継代培養すると生育速度が漸次高まり安定化し
たカルスが得られる。このカルスを前記した液体培地中
に添加して、振とうすることにより組織培養する。この
発明においては、光は必ずしも必要ではなく、かえって
賭所での培養がカルスの生育に望ましい。
培養温度は１０〜３５００、とくに２３〜２８ｏｏが好
適である。１０００未満ではカルスの増殖速度が小さく
、３５ｏ０を越えても同様にカルスの増殖速度は小さく
なる。
適である。１０００未満ではカルスの増殖速度が小さく
、３５ｏ０を越えても同様にカルスの増殖速度は小さく
なる。
この発明が適用されるムラサキ科の植物は、とくに限定
されるものではないが、なかでもムラサキ科（Ｌ池ｏｓ
ｐｅｒｍ肌ｍ ｅｒｙ比ｒｏｒｈｉｚｅｎ Ｓｉｅｂ．
ｅｔＺｕｃｃ．）を用いることが望ましく、前記した如
く、シニコン等のナフトキノン系化合物、その他の薬効
成分を有するカルスを得ることができる。
されるものではないが、なかでもムラサキ科（Ｌ池ｏｓ
ｐｅｒｍ肌ｍ ｅｒｙ比ｒｏｒｈｉｚｅｎ Ｓｉｅｂ．
ｅｔＺｕｃｃ．）を用いることが望ましく、前記した如
く、シニコン等のナフトキノン系化合物、その他の薬効
成分を有するカルスを得ることができる。
カルスからシコニン等の有効成分を抽出するには、従来
から紫線の抽出に用いられている方法を採用することが
できる。この発明によれば、液体塔地を用いるので大量
培養、タンク培養が可能であり、さらに生成したカルス
を培地から分離する方法として、デカンテーション、炉
過等の簡便な操作を採用することができるので工業上有
利である。
から紫線の抽出に用いられている方法を採用することが
できる。この発明によれば、液体塔地を用いるので大量
培養、タンク培養が可能であり、さらに生成したカルス
を培地から分離する方法として、デカンテーション、炉
過等の簡便な操作を採用することができるので工業上有
利である。
またカルスの増殖が速やかであり、かつシコニン等の色
素が多量に生成し、生成量のバラッキも小さく、多量の
色素を安定して確実に生産することができる。
素が多量に生成し、生成量のバラッキも小さく、多量の
色素を安定して確実に生産することができる。
以下、実施例によってこの発明の好適な例を詳細に説明
する。
する。
ただしこの発明はこれら実施例によって何ら限定される
ものではない。比較例 １００ｍ‘のェルレンマィャーフラスコに、第１表に示
すリンスマィャースクーグの液体培地（インドール酢酸
１仏Ｍ、カィネチン１０ムＭ、ショ糖３０タ′そを含む
）３０の‘を入れ、１２０ｑ０１０分滅菌した。
ものではない。比較例 １００ｍ‘のェルレンマィャーフラスコに、第１表に示
すリンスマィャースクーグの液体培地（インドール酢酸
１仏Ｍ、カィネチン１０ムＭ、ショ糖３０タ′そを含む
）３０の‘を入れ、１２０ｑ０１０分滅菌した。
冷却後０．５夕のムラサキの湿潤カルス（予め静贋培養
法もしくは液体培養法によって得た）を入れ２５００で
１４日間、ロータリーシェーカー上で旋回培養（振幅２
５肋、１０仇ｐｍ）した。培養後のムラサキカルスを炉
過により採取し、３５ｑｏで２独時間乾燥させた後、そ
の重量（乾重）を測定した。
法もしくは液体培養法によって得た）を入れ２５００で
１４日間、ロータリーシェーカー上で旋回培養（振幅２
５肋、１０仇ｐｍ）した。培養後のムラサキカルスを炉
過により採取し、３５ｑｏで２独時間乾燥させた後、そ
の重量（乾重）を測定した。
また乾燥カルス中のシコニン等のナフトキノン系色素の
含有量を測定した。測定方法は水上元らの「ファイトケ
ミストリー」（ＰｈｙｔｏｃｈｅｍＳｔｒｙ）第１６巻
第１１８５〜ｉ１８６ページ記載の方法に従った。
含有量を測定した。測定方法は水上元らの「ファイトケ
ミストリー」（ＰｈｙｔｏｃｈｅｍＳｔｒｙ）第１６巻
第１１８５〜ｉ１８６ページ記載の方法に従った。
結果を第２表に示す（ただしそれぞれ液体塔地１夕あた
りの収量で示す）。実施例 １〜９ 比較例において、液体培地の培地成分のうち「有機酸の
濃度を第２表に示す値とする以外は比較例と同様に行っ
た。
りの収量で示す）。実施例 １〜９ 比較例において、液体培地の培地成分のうち「有機酸の
濃度を第２表に示す値とする以外は比較例と同様に行っ
た。
結果を併せて第２表に示す。第１表第２表
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １ 窒素源としてアンモニウムイオンを存在させるとと
もに、コハク酸、フマル酸およびリンゴ酸からなる群よ
り選ばれる少なくとも１種以上の有機酸成分をアンモニ
ウムイオンの１／２０〜５倍モルの割合で含有せしめた
液体培地を用いることを特徴とするムラサキ科植物の組
織培養方法。 ２ ムラサキ科の植物がムラサキ （Ｌｉｔｈｏｓｐｅｒｍｕｍ ｅｒｙｔｈｒｏｒｈｉｚ
ｏｎ Ｓｉｅｂ．ｅｔ Ｚｕｃｃ．）であることを特徴
とする特許請求の範囲第１項記載の組織培養方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP56200132A JPS60989B2 (ja) | 1981-12-14 | 1981-12-14 | ムラサキ科植物の組織培養方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP56200132A JPS60989B2 (ja) | 1981-12-14 | 1981-12-14 | ムラサキ科植物の組織培養方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS58101687A JPS58101687A (ja) | 1983-06-16 |
| JPS60989B2 true JPS60989B2 (ja) | 1985-01-11 |
Family
ID=16419329
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP56200132A Expired JPS60989B2 (ja) | 1981-12-14 | 1981-12-14 | ムラサキ科植物の組織培養方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS60989B2 (ja) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20230218644A1 (en) | 2020-04-16 | 2023-07-13 | Som Innovation Biotech, S.A. | Compounds for use in the treatment of viral infections by respiratory syndrome-related coronavirus |
-
1981
- 1981-12-14 JP JP56200132A patent/JPS60989B2/ja not_active Expired
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS58101687A (ja) | 1983-06-16 |
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