JPS61110055A - 分析方法 - Google Patents
分析方法Info
- Publication number
- JPS61110055A JPS61110055A JP59232129A JP23212984A JPS61110055A JP S61110055 A JPS61110055 A JP S61110055A JP 59232129 A JP59232129 A JP 59232129A JP 23212984 A JP23212984 A JP 23212984A JP S61110055 A JPS61110055 A JP S61110055A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- proteins
- protein
- solution
- particle size
- nitrocellose
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims abstract description 34
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims abstract description 34
- 239000002245 particle Substances 0.000 claims abstract description 15
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 7
- 239000012798 spherical particle Substances 0.000 claims abstract description 4
- 239000000020 Nitrocellulose Substances 0.000 claims description 3
- 229920001220 nitrocellulos Polymers 0.000 claims description 3
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 abstract description 14
- 238000005406 washing Methods 0.000 abstract description 5
- 238000000926 separation method Methods 0.000 abstract description 2
- 238000003556 assay Methods 0.000 abstract 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 14
- ZWEHNKRNPOVVGH-UHFFFAOYSA-N 2-Butanone Chemical compound CCC(C)=O ZWEHNKRNPOVVGH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 12
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 9
- 210000000941 bile Anatomy 0.000 description 8
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 7
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 7
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 7
- 102000001554 Hemoglobins Human genes 0.000 description 6
- 108010054147 Hemoglobins Proteins 0.000 description 6
- 229920000742 Cotton Polymers 0.000 description 5
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 5
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 5
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 4
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 4
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 4
- 239000012488 sample solution Substances 0.000 description 4
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 239000012190 activator Substances 0.000 description 3
- 239000003463 adsorbent Substances 0.000 description 3
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 3
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 3
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 3
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 3
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 3
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 3
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 3
- 108010052285 Membrane Proteins Proteins 0.000 description 2
- 102000018697 Membrane Proteins Human genes 0.000 description 2
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 2
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 2
- 238000011088 calibration curve Methods 0.000 description 2
- 230000001086 cytosolic effect Effects 0.000 description 2
- 238000004821 distillation Methods 0.000 description 2
- 239000000975 dye Substances 0.000 description 2
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- NRHMKIHPTBHXPF-TUJRSCDTSA-M sodium cholate Chemical compound [Na+].C([C@H]1C[C@H]2O)[C@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@@H](CCC([O-])=O)C)[C@@]2(C)[C@@H](O)C1 NRHMKIHPTBHXPF-TUJRSCDTSA-M 0.000 description 2
- UMCMPZBLKLEWAF-BCTGSCMUSA-N 3-[(3-cholamidopropyl)dimethylammonio]propane-1-sulfonate Chemical compound C([C@H]1C[C@H]2O)[C@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@@H](CCC(=O)NCCC[N+](C)(C)CCCS([O-])(=O)=O)C)[C@@]2(C)[C@@H](O)C1 UMCMPZBLKLEWAF-BCTGSCMUSA-N 0.000 description 1
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 description 1
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 description 1
- 102000004506 Blood Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010017384 Blood Proteins Proteins 0.000 description 1
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- 229920002134 Carboxymethyl cellulose Polymers 0.000 description 1
- 238000004847 absorption spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 239000008186 active pharmaceutical agent Substances 0.000 description 1
- 150000001408 amides Chemical class 0.000 description 1
- 125000000129 anionic group Chemical group 0.000 description 1
- 239000003945 anionic surfactant Substances 0.000 description 1
- 239000003613 bile acid Substances 0.000 description 1
- 239000001768 carboxy methyl cellulose Substances 0.000 description 1
- 235000010948 carboxy methyl cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 239000008112 carboxymethyl-cellulose Substances 0.000 description 1
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 1
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 1
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 1
- 230000001143 conditioned effect Effects 0.000 description 1
- 238000005336 cracking Methods 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 1
- 238000003370 dye binding method Methods 0.000 description 1
- 239000003995 emulsifying agent Substances 0.000 description 1
- 238000001506 fluorescence spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 210000004907 gland Anatomy 0.000 description 1
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 238000004452 microanalysis Methods 0.000 description 1
- 230000001546 nitrifying effect Effects 0.000 description 1
- 239000002736 nonionic surfactant Substances 0.000 description 1
- 229920002113 octoxynol Polymers 0.000 description 1
- HEGSGKPQLMEBJL-RKQHYHRCSA-N octyl beta-D-glucopyranoside Chemical compound CCCCCCCCO[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O HEGSGKPQLMEBJL-RKQHYHRCSA-N 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 239000012460 protein solution Substances 0.000 description 1
- 238000004445 quantitative analysis Methods 0.000 description 1
- 230000035484 reaction time Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 235000015170 shellfish Nutrition 0.000 description 1
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Pathology (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Solid-Sorbent Or Filter-Aiding Compositions (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
用いて、蛋白質及びその関連物質を定量する微量分析方
法に関する。
法に関する。
（従来の技術）
ニトロセルロース膜（Ｎ ＣＶｉ ）ｔｔｉ 一本領、
Ｄ Ｎ Ａ及び蛋白質を選択的に吸着（蛋白質８０〜１
００μｇ／ＮＣＭ １ｆｆｌ）する性質があり、蛋白質
の水ｇＩｖｉをＳ ＣＭ ４こ塗るだけでＮＣ’Ｍの表
面に強（吸着させることができる。この性質を利用して
抗原。
Ｄ Ｎ Ａ及び蛋白質を選択的に吸着（蛋白質８０〜１
００μｇ／ＮＣＭ １ｆｆｌ）する性質があり、蛋白質
の水ｇＩｖｉをＳ ＣＭ ４こ塗るだけでＮＣ’Ｍの表
面に強（吸着させることができる。この性質を利用して
抗原。
抗体の侠出、同定等を行うことができることは公知であ
る。ところがこの場合、可ｍ化剤の存在によって、ＮＣ
Ｍ表面への蛋白質の吸着は著 しく阻害される場合があ
る。
る。ところがこの場合、可ｍ化剤の存在によって、ＮＣ
Ｍ表面への蛋白質の吸着は著 しく阻害される場合があ
る。
生体蛋白質のうち、細胞質蛋白質ハ、血清蛋白質。
細胞質蛋白質に比べ研究がおぐれでいることの一つの原
因は可溶化剤を必要とする点にある。細胞膜から蛋白質
を分離するには、可溶化剤を用いてこれを溶出させる必
要がある。この水溶液から蛋白質を分離濃縮又は定量す
るのに甚だ手間がか＼ることである。これらのことから
、細胞膜蛋白質は医学ならびに薬学において重要なもの
が多いに本拘らず充分な研究がなされていな力）った。
因は可溶化剤を必要とする点にある。細胞膜から蛋白質
を分離するには、可溶化剤を用いてこれを溶出させる必
要がある。この水溶液から蛋白質を分離濃縮又は定量す
るのに甚だ手間がか＼ることである。これらのことから
、細胞膜蛋白質は医学ならびに薬学において重要なもの
が多いに本拘らず充分な研究がなされていな力）った。
ｃ問題を解決するだめの手段）
可溶化剤の存在によって、ＮＣＭへの蛋白質の吸着は著
しく阻害されるが、その程度は可溶化剤の種類によっ
て異なる。発明者は、可溶化剤を選定することによって
蛋白質の吸着をあまり阻害しない条件がとりつるか歪力
）を検討した。
しく阻害されるが、その程度は可溶化剤の種類によっ
て異なる。発明者は、可溶化剤を選定することによって
蛋白質の吸着をあまり阻害しない条件がとりつるか歪力
）を検討した。
この場合、まず蛋白質とＮＣとの接触効率を良くシ１反
応時間を長くすることを試みた。ＮＣＭを粉砕し、微粉
末吸着剤として蛋白質水溶液と接触させると吸着効果が
大きかったが、吸着された蛋白質だけを残すための洗滌
性に問題があることがわかった。
応時間を長くすることを試みた。ＮＣＭを粉砕し、微粉
末吸着剤として蛋白質水溶液と接触させると吸着効果が
大きかったが、吸着された蛋白質だけを残すための洗滌
性に問題があることがわかった。
発明者は研究の結果ＮＣの形態として、粒径＋Ｏ〜２０
０μｍの粒子状のもの（ＮＣＲと略す）が、定量的吸着
剤としてすぐハたものであることを見出した。粒径が２
００μｍより大きいものｔｉ蛋白質の吸着速度がおそ〈
粒径＋０μｍ以下であると洗滌などハンドリングに問題
が起ってぐる。
０μｍの粒子状のもの（ＮＣＲと略す）が、定量的吸着
剤としてすぐハたものであることを見出した。粒径が２
００μｍより大きいものｔｉ蛋白質の吸着速度がおそ〈
粒径＋０μｍ以下であると洗滌などハンドリングに問題
が起ってぐる。
一方可溶化剤の稚類については非イオン 界面活性剤セ
一般に蛋白質のＮＣＲへの吸着を著 しく阻害するが、
陰イオン界面活性剤は蛋白質の吸着を余シ阻害しないこ
とを見出した。しかしながらこの場合でも試料中の界面
活性剤は比較的低濃度で使用する必要がある。
一般に蛋白質のＮＣＲへの吸着を著 しく阻害するが、
陰イオン界面活性剤は蛋白質の吸着を余シ阻害しないこ
とを見出した。しかしながらこの場合でも試料中の界面
活性剤は比較的低濃度で使用する必要がある。
（発明の効果）
蛋白質吸着剤として、粒径４０〜２００μｍのＮＣＢを
使用すり、ば蛋白質の吸着速度も大きく、ｈｍ性も良好
であり、蛋白質の分離、同定、定量などに適するもので
あった。このＮＣＢは可溶化剤の存在下であっても一定
濃度以下であり、ば定量的に蛋白質を吸着し、定量分析
に使用できる。このことは界面活性剤で可溶化した細胞
膜蛋白質の溶液を簡単に分析できることを意味する。
使用すり、ば蛋白質の吸着速度も大きく、ｈｍ性も良好
であり、蛋白質の分離、同定、定量などに適するもので
あった。このＮＣＢは可溶化剤の存在下であっても一定
濃度以下であり、ば定量的に蛋白質を吸着し、定量分析
に使用できる。このことは界面活性剤で可溶化した細胞
膜蛋白質の溶液を簡単に分析できることを意味する。
ＮＣＲを用いた蛋白質の定量には、紫外線吸収スペクト
ル法１色素結合法、蛍光光度法など公知の技術を用いる
ことができるが、同じく蛋白質の吸着剤として知られて
いるポリアミドやポリスチレンにおいては、使用できな
い色素もＮＣＢには使用できる利点がある。
ル法１色素結合法、蛍光光度法など公知の技術を用いる
ことができるが、同じく蛋白質の吸着剤として知られて
いるポリアミドやポリスチレンにおいては、使用できな
い色素もＮＣＢには使用できる利点がある。
このほか、ＮＣＢに抗原や抗体を吸着させ、酵素標識抗
体を用いた間接法、サンドインチ法などの、エンザイム
イムノアツセイなどにも利用することが可能である。
体を用いた間接法、サンドインチ法などの、エンザイム
イムノアツセイなどにも利用することが可能である。
以下に実施例をあげて本発明を説明する。
調整例１
水湿硝化綿（Ｒ８１／２．ダイセル化学裂、ＤＳ＝２．
２．水分２５チ）２００ｇをメチルエチルケトン５００
ｇに溶解した。純水１０００．９を仕込んだ２１フラス
コに撹拌子硝化綿溶液を投入し。
２．水分２５チ）２００ｇをメチルエチルケトン５００
ｇに溶解した。純水１０００．９を仕込んだ２１フラス
コに撹拌子硝化綿溶液を投入し。
１１０００ｒｐで１ｏ分間撹拌し、乳化状態とした。油
浴でフラスコを加熱し、７００ｒｐｍ で撹拌し・な
がらメチルエチルケトンを留出させ、留出温度が９５℃
になったとき、撹拌、加熱を止め放冷した。
浴でフラスコを加熱し、７００ｒｐｍ で撹拌し・な
がらメチルエチルケトンを留出させ、留出温度が９５℃
になったとき、撹拌、加熱を止め放冷した。
硝化綿粒子は純水で洗滌し、乾燥後篩是七粒径１００〜
１５０μｍの粒子を採取した。このものをＮＣＢ１００
と称する。
１５０μｍの粒子を採取した。このものをＮＣＢ１００
と称する。
調整例２
調整例１と同じ水湿硝化綿２００．９をメチルエチルケ
トン５５０ｇに溶解した。
トン５５０ｇに溶解した。
純水１０００．９にす） ＩＩウム、カルボキシメチル
セルロー１ク に仕込み、撹拌子硝化Ｍｍ液を投入し、１（１００ｒｐ
ｍで１０分間撹拌し，乳化状態とした、油浴でフラスコ
を加熱し．９００ｒｐｍで撹拌しながらメチルエチルケ
トンを留出させ，留出温度が９５℃になったとき，撹拌
，加熱を止め放冷した。
セルロー１ク に仕込み、撹拌子硝化Ｍｍ液を投入し、１（１００ｒｐ
ｍで１０分間撹拌し，乳化状態とした、油浴でフラスコ
を加熱し．９００ｒｐｍで撹拌しながらメチルエチルケ
トンを留出させ，留出温度が９５℃になったとき，撹拌
，加熱を止め放冷した。
硝化綿粒子を洗滌，乾燥．篩づシｔ１粒径６ｏ〜１００
μｍの粒子を採取した。この本のをＮＣＢ６０と称する
。
μｍの粒子を採取した。この本のをＮＣＢ６０と称する
。
実施例１
ます、界面活性剤存在下に８けるＮＣＲへの蛋白質の吸
着性をしらべた。 ２ｆ −ｗｌＭ Ｔｒｉｓ −
ＨＣｌ（ｐＨ７．ｌ；’）緩衝液に，各植界面活性剤を
加え、ウシヘモグロビン０． ５ ｍ９ ／ ｍｌを含
む浴液を作製した。ＮＣＢ１００ Ｑ．５ＩＬｔをミ
ニカラムに充填し．１１０００ｒｐで１０分間遠心して
カラムを調整した。これに上記試料溶液０． ２ ｍｌ
を加えて６０分静置し．１１０００ｒｐの遠心力を５分
間与え，溶出液を採取した。その溶出液の吸光度を４１
０μｍで測定した。測定はマイクロプレート光度計ＭＴ
ｐ２２型（コロナ電気）で行い，その吸光度から次式に
よシ吸光率を求めた。
着性をしらべた。 ２ｆ −ｗｌＭ Ｔｒｉｓ −
ＨＣｌ（ｐＨ７．ｌ；’）緩衝液に，各植界面活性剤を
加え、ウシヘモグロビン０． ５ ｍ９ ／ ｍｌを含
む浴液を作製した。ＮＣＢ１００ Ｑ．５ＩＬｔをミ
ニカラムに充填し．１１０００ｒｐで１０分間遠心して
カラムを調整した。これに上記試料溶液０． ２ ｍｌ
を加えて６０分静置し．１１０００ｒｐの遠心力を５分
間与え，溶出液を採取した。その溶出液の吸光度を４１
０μｍで測定した。測定はマイクロプレート光度計ＭＴ
ｐ２２型（コロナ電気）で行い，その吸光度から次式に
よシ吸光率を求めた。
第１表にその成績を数値で示す。
試料溶液中のヘモグロビンの吸着率が高いのけ（９０，
チ以上）界面活性剤による影響が少ないことを意味する
。第１表の結果から、界面活性剤の清ｖが高いと、蛋白
質のＮＣＢへの吸着が阻害されるが、その程度も界面活
性剤の種類によって差があることが認められる。貝０ち
、 Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ −１００゜’ｐｗｅｅｎ ＋３
０ 、 Ｎｏｎ１ｄｅｔ Ｐ−４０（いずれも非イオン
活性剤）の場合濃度０．２５％以下、ｎ −ｏｃｔｙｌ
ｇｌｕｃｏｓｉｄｅ （非イオン活性ＩＭ＋ Ｌ ＣＨ
ＡＰＳ （両性イオン活性剤）、コール酸ナトリウム（
陰イオン活性剤）の場合濃度１．０壬以下であればヘモ
グロビンはＮＣＲに殆んど（９０％以上）吸着されるこ
とがわかった。
チ以上）界面活性剤による影響が少ないことを意味する
。第１表の結果から、界面活性剤の清ｖが高いと、蛋白
質のＮＣＢへの吸着が阻害されるが、その程度も界面活
性剤の種類によって差があることが認められる。貝０ち
、 Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ −１００゜’ｐｗｅｅｎ ＋３
０ 、 Ｎｏｎ１ｄｅｔ Ｐ−４０（いずれも非イオン
活性剤）の場合濃度０．２５％以下、ｎ −ｏｃｔｙｌ
ｇｌｕｃｏｓｉｄｅ （非イオン活性ＩＭ＋ Ｌ ＣＨ
ＡＰＳ （両性イオン活性剤）、コール酸ナトリウム（
陰イオン活性剤）の場合濃度１．０壬以下であればヘモ
グロビンはＮＣＲに殆んど（９０％以上）吸着されるこ
とがわかった。
次に ２５ ｎＭ Ｔｒｉｓ −ＨＣ１緩衝液に界
面活性剤を含有させた水溶液を作成し、各０．２５ ａ
ｔに（５０Ｘ−１μｇ 、 （ｓ ｏ ｘ−Ｌ）μＩを
それぞれ含有させた試料浴液を調製した。
面活性剤を含有させた水溶液を作成し、各０．２５ ａ
ｔに（５０Ｘ−１μｇ 、 （ｓ ｏ ｘ−Ｌ）μＩを
それぞれ含有させた試料浴液を調製した。
Ｋ科溶液ｌこＮＣ８６００，２５ｄを加え、室温で６０
分間静置し、ヘモグロビンを吸着さぜた。
分間静置し、ヘモグロビンを吸着さぜた。
ヘモグロビンを吸着したＮＣＲは、緩衝液で洗滌し、０
．１％アミドブラック（染料）０．２ ａｔを加え室温
で３０分間静置した。ＮＣ’ＢヲＯ，ｌ Ｍ ＮａＯＨ
１、２ｍｌで処理してアミドブラックを溶出させ浴出液
の６１０μｍにおける吸光度を測定した。その結果を第
１図に示す。
．１％アミドブラック（染料）０．２ ａｔを加え室温
で３０分間静置した。ＮＣ’ＢヲＯ，ｌ Ｍ ＮａＯＨ
１、２ｍｌで処理してアミドブラックを溶出させ浴出液
の６１０μｍにおける吸光度を測定した。その結果を第
１図に示す。
第１図は横軸に試料溶液中のヘモグロビン量、Ｒ１旬に
溶出液の吸光度をプロットしたものであって、良好な直
ａ関係が得られた。但し１図の直巌に添えた英字は、試
料溶液中の界面活性剤に対応するものである。
溶出液の吸光度をプロットしたものであって、良好な直
ａ関係が得られた。但し１図の直巌に添えた英字は、試
料溶液中の界面活性剤に対応するものである。
Ａ：界面活性１ｉ＋Ｊすり、 Ｂ ： ＣＨＡＰＳ
０．５％Ｃ：コール酸ナトリウム ０．５係 １） ： ’ｌ’ｒｉｔｏｎ ％−／ρ＃Ｏ，１％即ち
、ボ１図は、界面活性剤存在下の蛋白質定量のための検
！＃腺として使用できるものである。
０．５％Ｃ：コール酸ナトリウム ０．５係 １） ： ’ｌ’ｒｉｔｏｎ ％−／ρ＃Ｏ，１％即ち
、ボ１図は、界面活性剤存在下の蛋白質定量のための検
！＃腺として使用できるものである。
１！施例２
ＮＣＢ６０ １．Ｏｉｌを１． Ｏｍｔ抗体溶液（抗う
・ン）ＩｇＧ抗体１．０１１１９ ｐｒｏｔｅｉｎ ／
ｍｌ ）と混合し、４℃チー夜放置することにより、
抗体でコーティングしたＮＣＲを作製した。コーティン
グＮＣＢｔｉ。
・ン）ＩｇＧ抗体１．０１１１９ ｐｒｏｔｅｉｎ ／
ｍｌ ）と混合し、４℃チー夜放置することにより、
抗体でコーティングしたＮＣＲを作製した。コーティン
グＮＣＢｔｉ。
ｌ優つシアルブミン溶液２０４りこ浸漬しＮＣＢを均一
にＩＩ！Ａさせながら各０．２ ｍｌを試験管に分注し
た、 コーティングＮＣＲを含有するアルブミン溶液ｎ、 ’
Ｍ−温”Ｔ：３０分間放置した後 ／ｆＯｔｈＭ Ｎ
ａ （：ｌ含有２５ ｍＭＴｒｉｓ−ＨＣ１緩衝液（ｐ
Ｈ７，６）でＮＣＲを洗浄し、それにラットの胆汁（２
００μｌりを濃度を力）えて（原液、 １／２ 、１
／４ 、１／８希権液）添加した。
にＩＩ！Ａさせながら各０．２ ｍｌを試験管に分注し
た、 コーティングＮＣＲを含有するアルブミン溶液ｎ、 ’
Ｍ−温”Ｔ：３０分間放置した後 ／ｆＯｔｈＭ Ｎ
ａ （：ｌ含有２５ ｍＭＴｒｉｓ−ＨＣ１緩衝液（ｐ
Ｈ７，６）でＮＣＲを洗浄し、それにラットの胆汁（２
００μｌりを濃度を力）えて（原液、 １／２ 、１
／４ 、１／８希権液）添加した。
ラット胆汁には、抗原（ラットＩｇＧ約１η／７７ＬＡ
’）が含有されているので添加胆汁中の含有量はそれぞ
れ２００μＮ、１００μｇ、５０μｇ。
’）が含有されているので添加胆汁中の含有量はそれぞ
れ２００μＮ、１００μｇ、５０μｇ。
２５μ、！ｉ’ 、＋２：・Ｓμｇである。
各試験管に０．２ ｍｌの酵素抗体浴液（ｈｏｒｓｅｒ
ａｄｉｓｈｐｅｒｏｘｉｄｅ ｃＤｎｊｕｇａｔｅｄ
ａｎｔｉ −ｒａｔ ＩｇＧ ａｎｔｉ −ｂｏｄｙ
、 ６０００倍希稀液）を加え、室温で２時間放置した
。
ａｄｉｓｈｐｅｒｏｘｉｄｅ ｃＤｎｊｕｇａｔｅｄ
ａｎｔｉ −ｒａｔ ＩｇＧ ａｎｔｉ −ｂｏｄｙ
、 ６０００倍希稀液）を加え、室温で２時間放置した
。
しかる後ＮＣＢを緩衝液で洗滌後、新しい試験１に桜し
１発色用基質浴液（０−ｄｉａｎｉｓｉｄｉｎｅ 。
１発色用基質浴液（０−ｄｉａｎｉｓｉｄｉｎｅ 。
ＨｔＯｘ ’Ｉ １．５ ｍｌを加え室温で３０分放置
（４，た。試験管に遠心力を加え、上澄を採取し、４５
０ηｍにおける吸光度を測定した。
（４，た。試験管に遠心力を加え、上澄を採取し、４５
０ηｍにおける吸光度を測定した。
その結果徂Ｉ足吸光度と、う７）胆汁添加量は良好な直
線関係を示すことかみとめら−だ。第２図は横軸にラッ
ト胆汁中ＩｇＣ量、ＫＥ＠３に１＆元度をプロットした
ものである。胆汁には界面活性剤の一種である胆汁酸が
存在するが、この場曾でも。
線関係を示すことかみとめら−だ。第２図は横軸にラッ
ト胆汁中ＩｇＣ量、ＫＥ＠３に１＆元度をプロットした
ものである。胆汁には界面活性剤の一種である胆汁酸が
存在するが、この場曾でも。
ＮＣＲを利用したサンドイツチ法によりＮＣＢに結合し
た酵素抗体の酵素活性から、試料中の抗原蛋白（ラット
エｇＧ）を定量することが可能であるという結果かえら
れた。即ち、第２図は、エンザイムイムノアツセイによ
る胆汁中のＩｇＧ 定量のための検量線として用いる
ことができる、
た酵素抗体の酵素活性から、試料中の抗原蛋白（ラット
エｇＧ）を定量することが可能であるという結果かえら
れた。即ち、第２図は、エンザイムイムノアツセイによ
る胆汁中のＩｇＧ 定量のための検量線として用いる
ことができる、
第１図は、ニトロセルロース球状粒子を用いた蛋白質の
定量のための検量線であって、横軸に蛋白質量、縦軸に
吸光度をプロントしたものである。 第２図はエンザイムイムノアツセイによる胆汁中のＩｇ
Ｇ 定量のための検量線であって横軸にＩｇＧ ｉ、
縦軸に吸資度をプロントした本のである。 特許出願人 ダイセル化学工業株式会社東洋シ紙株式会
社 第１図 吸 光 度 （ｐｆヘモグロビンｆＩｔ） 第２図 の （ｐｙ ＩｇＧｔ）
定量のための検量線であって、横軸に蛋白質量、縦軸に
吸光度をプロントしたものである。 第２図はエンザイムイムノアツセイによる胆汁中のＩｇ
Ｇ 定量のための検量線であって横軸にＩｇＧ ｉ、
縦軸に吸資度をプロントした本のである。 特許出願人 ダイセル化学工業株式会社東洋シ紙株式会
社 第１図 吸 光 度 （ｐｆヘモグロビンｆＩｔ） 第２図 の （ｐｙ ＩｇＧｔ）
Claims (1)
- 粒径４０〜２００μｍのニトロセルロース球状粒子に蛋
白質を吸着させる工程を含むことを特徴とする微量分析
方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP59232129A JPS61110055A (ja) | 1984-11-02 | 1984-11-02 | 分析方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP59232129A JPS61110055A (ja) | 1984-11-02 | 1984-11-02 | 分析方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS61110055A true JPS61110055A (ja) | 1986-05-28 |
| JPH058785B2 JPH058785B2 (ja) | 1993-02-03 |
Family
ID=16934453
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP59232129A Granted JPS61110055A (ja) | 1984-11-02 | 1984-11-02 | 分析方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS61110055A (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH02138869A (ja) * | 1987-12-21 | 1990-05-28 | Syntex Usa Inc | 抗原検定法 |
| EP0589348A3 (de) * | 1992-09-25 | 1995-04-26 | Behringwerke Ag | Verfahren zur immunchemischen Quantifizierung von inaktivierten, immunreaktiven Antigenen. |
-
1984
- 1984-11-02 JP JP59232129A patent/JPS61110055A/ja active Granted
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH02138869A (ja) * | 1987-12-21 | 1990-05-28 | Syntex Usa Inc | 抗原検定法 |
| EP0589348A3 (de) * | 1992-09-25 | 1995-04-26 | Behringwerke Ag | Verfahren zur immunchemischen Quantifizierung von inaktivierten, immunreaktiven Antigenen. |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH058785B2 (ja) | 1993-02-03 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| EP0162914B1 (en) | Novel immunoassays and kits for use therein | |
| US5447870A (en) | Use of chromatographic supports having immobilized flocculating agent in separating microparticles | |
| EP2063269B1 (en) | Chromatography apparatus for detecting Staphylococcus aureus | |
| JPS60501674A (ja) | 遊離リガンド測定 | |
| JPS6112224B2 (ja) | ||
| HK14894A (en) | Visualization method for the direct or indirect detection of the reaction between a specific binding agent and the corresponding acceptor substance in blot overlay assays | |
| JPS6338668B2 (ja) | ||
| JPH0346561A (ja) | 分析物検出のための方法、試薬及び試験ストリップ | |
| JP2517187B2 (ja) | アナライト変異体分析 | |
| GB2181840A (en) | Method for the immunoassay of a macromolecular analyte | |
| JPS61501111A (ja) | アルコ−ル摂取量を測定する方法 | |
| AU668937B2 (en) | Process for the immunochemical determination of an analyte | |
| US4307190A (en) | Immunoassay using ascitic fluid | |
| JPH028271B2 (ja) | ||
| US5276146A (en) | Liquid perfluorocarbon supports useful as liquid affinity supports | |
| CN118275694A (zh) | 阿尔茨海默相关神经丝蛋白层析检测试剂及其制备方法 | |
| EP4206672A1 (en) | Test kit having specificity improved by inhibiting false positives | |
| EP4206181A1 (en) | Test reagent with improved specificity by suppressing false negatives | |
| JPH058785B2 (ja) | ||
| JP2001305137A (ja) | 特異的複合体の固定化方法および測定方法 | |
| JPH02222836A (ja) | 特異的に結合する物質及び対応する結合性物質の反応生成物の、増大された視覚化のための方法及びそのためのテストキット | |
| JPH0346565A (ja) | 磁性体を利用した酵素免疫測定法 | |
| JPS63191960A (ja) | リガンドのアッセイ法 | |
| Nilsson et al. | An implification technology for improving sensitivity when measuring components in biological samples | |
| JPH01165960A (ja) | トランスフェリンの測定方法 |