JPS61171703A - ヒアルロン酸の製法 - Google Patents
ヒアルロン酸の製法Info
- Publication number
- JPS61171703A JPS61171703A JP1119985A JP1119985A JPS61171703A JP S61171703 A JPS61171703 A JP S61171703A JP 1119985 A JP1119985 A JP 1119985A JP 1119985 A JP1119985 A JP 1119985A JP S61171703 A JPS61171703 A JP S61171703A
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- Japan
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- hyaluronic acid
- raw material
- reducing agent
- treated
- fractionation
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- Pending
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- Polysaccharides And Polysaccharide Derivatives (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
〔産業上の利用分骨〕
本発明は医薬や化粧品のバルクとして有用なヒアルロン
酸の工業的製法に関する。
酸の工業的製法に関する。
ヒアルロン酸はＮ−アセチルグルフサミンとグルクロン
酸が交互に鎖状に結合した酸性ムフ多糖類であり、（資
）万〜３００万０分子量を有し１親水性や粘稠性を示す
。このヒアルロン酸は関節、・眼の硝子体、請帯、・、
軟骨、・皮膚、鳥類のトサカなどの結合組織中にその構
成成分として存在し）これらの結合組織内で蛋白質と結
合してゲル状になり、組織の柔軟性、関節の潤滑作用、
水分の保持等による構造の保持、及び細胞の代謝調節な
どに重要な機能を果している◎ ヒアルロン酸はその粘稠性により、医薬の分野で関節炎
の治療剤や外科手術時の眼組織の保護剤として用いられ
、化粧品の分野でもモイスチュライザーとして用いられ
ている。
酸が交互に鎖状に結合した酸性ムフ多糖類であり、（資
）万〜３００万０分子量を有し１親水性や粘稠性を示す
。このヒアルロン酸は関節、・眼の硝子体、請帯、・、
軟骨、・皮膚、鳥類のトサカなどの結合組織中にその構
成成分として存在し）これらの結合組織内で蛋白質と結
合してゲル状になり、組織の柔軟性、関節の潤滑作用、
水分の保持等による構造の保持、及び細胞の代謝調節な
どに重要な機能を果している◎ ヒアルロン酸はその粘稠性により、医薬の分野で関節炎
の治療剤や外科手術時の眼組織の保護剤として用いられ
、化粧品の分野でもモイスチュライザーとして用いられ
ている。
ヒアルロン酸の製法としては特開昭５８−３７００１号
のほか種々開示されているが、従来の製法はいずれも工
業的製法として不適であり、コストや作業性、品質等の
面から改善が望まれている。
のほか種々開示されているが、従来の製法はいずれも工
業的製法として不適であり、コストや作業性、品質等の
面から改善が望まれている。
本発明者はヒアルロン酸ｐ製法について鋭意研究を行い
、工業的規模で効率よくかつ純度の高いヒアルロン酸を
製造する方法を完成した。
、工業的規模で効率よくかつ純度の高いヒアルロン酸を
製造する方法を完成した。
本発明は原料のヒアルロン酸含有結合組織を還元剤の存
在下で蛋白分解酵素により処理するか１又は粗ヒアルロ
ン酸含有溶液に塩化ナトリウムの存在下でセシル・ピリ
ジニウム・クロライド分画を行うのである。
在下で蛋白分解酵素により処理するか１又は粗ヒアルロ
ン酸含有溶液に塩化ナトリウムの存在下でセシル・ピリ
ジニウム・クロライド分画を行うのである。
本発明の原料は動物のヒアルロン酸含有結合組織であれ
ば特に限定されないが、より好ましい原料は鶏冠（トサ
カ）である。
ば特に限定されないが、より好ましい原料は鶏冠（トサ
カ）である。
本発明はこの原料を用い１次の工程によりヒアルロン酸
を製造する。
を製造する。
（１）加熱処理
原料を充分量の水に浸して７０〜１００℃で１時間加熱
する。
する。
（２酵素処理
加熱ずみの原料を還元剤の存在下で蛋白分解酵素にて処
理する。この処理時に加える水は原料の３〜５倍量とす
る。蛋白分解酵素は特に限定されないが１フストの面か
らパパインが好適である。
理する。この処理時に加える水は原料の３〜５倍量とす
る。蛋白分解酵素は特に限定されないが１フストの面か
らパパインが好適である。
還元剤としては、チオ硫酸ナトリウムやハイドロサルフ
ァイドなどが例示される。添加量としては原料１００を
当たり、蛋白分解酵素０．１〜ｌｐｓ還元剤０．５〜１
．５ｔが好適である。
ァイドなどが例示される。添加量としては原料１００を
当たり、蛋白分解酵素０．１〜ｌｐｓ還元剤０．５〜１
．５ｔが好適である。
酵素処理は６０〜７０℃で３〜５時間、攪拌機を用いて
連続攪拌することにより行う。酵素および還元剤は一度
に添加するよりも数回に分けて添加する方がより効率的
である。酵素処理が終了した後、遠心分離を行い、活性
炭処理を１０〜６０分間施し１サンライトで濾過して粗
ヒアルロン酸を溶解したｒ液を得る。
連続攪拌することにより行う。酵素および還元剤は一度
に添加するよりも数回に分けて添加する方がより効率的
である。酵素処理が終了した後、遠心分離を行い、活性
炭処理を１０〜６０分間施し１サンライトで濾過して粗
ヒアルロン酸を溶解したｒ液を得る。
（３）セシル・ピリジニウム・クロライド分画処理酵素
処理により得た粗ヒアルロン酸含有溶液に塩化ナトリウ
ムを最終濃度０．３〜ＩＭとなるように添加し、２０〜
４０分間攪拌した後、セシル・ピリジニウム・クロライ
ドを原料１００ ｇ当たり２〜４． ｉ添加し、
和〜（資）℃で２０〜４０分間攪拌して主としてコンド
ロイチン硫酸を沈澱させ、続いて２５℃以上でサンライ
）濾過を行ってｆ液を得る。
処理により得た粗ヒアルロン酸含有溶液に塩化ナトリウ
ムを最終濃度０．３〜ＩＭとなるように添加し、２０〜
４０分間攪拌した後、セシル・ピリジニウム・クロライ
ドを原料１００ ｇ当たり２〜４． ｉ添加し、
和〜（資）℃で２０〜４０分間攪拌して主としてコンド
ロイチン硫酸を沈澱させ、続いて２５℃以上でサンライ
）濾過を行ってｆ液を得る。
（４）エタノール分画処理
このＰ液に塩化ナトリウムを最終濃度１〜３Ｍとなるよ
うに添加しＳ２０〜４０分間攪拌した後為溶液１容量に
対して９５％エタノールを０．８〜Ｌ５容量添加し、２
０〜４０分間攪拌した後、遠心分離してヒアルロン酸を
沈澱物として分取する。
うに添加しＳ２０〜４０分間攪拌した後為溶液１容量に
対して９５％エタノールを０．８〜Ｌ５容量添加し、２
０〜４０分間攪拌した後、遠心分離してヒアルロン酸を
沈澱物として分取する。
（５）洗浄工程
得られた沈澱を塩化ナトリウム・エタノール溶液（２Ｍ
塩化ナトリウム：９５％エタノール＋１：０．８〜Ｌ５
）で２回洗浄し、次に７５％エタノールで洗浄し、最後
に９５％エタノールで洗浄した後、減圧乾燥することに
より純度の高いヒアルロン酸を得る。
塩化ナトリウム：９５％エタノール＋１：０．８〜Ｌ５
）で２回洗浄し、次に７５％エタノールで洗浄し、最後
に９５％エタノールで洗浄した後、減圧乾燥することに
より純度の高いヒアルロン酸を得る。
本発明によるときは動物のヒアルロン酸含有結合組織を
還元剤の存在下で蛋白分解酵素にて処理し、又は粗ヒア
ルロン酸含有抽出溶液に塩化ナトリウムの存在下で七シ
ル・ピリジニウム・クロライド分画処理を行うから、操
作が極めて簡単であり１従って工業的規模で効率よくヒ
アルロン酸を製造しうる効果がある。又本発明にて得ら
れるヒアルロン酸は純度が高く、夾雑する蛋白含琶と核
酸含量は充分に低い値−であり、コンドロイチン硫酸の
混入を認められず、従って安全性の優れたヒアルロン酸
を医薬用又は化粧品用として供給しうる効果がある。
還元剤の存在下で蛋白分解酵素にて処理し、又は粗ヒア
ルロン酸含有抽出溶液に塩化ナトリウムの存在下で七シ
ル・ピリジニウム・クロライド分画処理を行うから、操
作が極めて簡単であり１従って工業的規模で効率よくヒ
アルロン酸を製造しうる効果がある。又本発明にて得ら
れるヒアルロン酸は純度が高く、夾雑する蛋白含琶と核
酸含量は充分に低い値−であり、コンドロイチン硫酸の
混入を認められず、従って安全性の優れたヒアルロン酸
を医薬用又は化粧品用として供給しうる効果がある。
鶏冠１０脅を水に浸して９０℃で１時間加熱した後、蒸
留水３２２に漬ける。別に、蒸留水ＩＣ当たりチオ硫酸
ナトリウム＆５ｆ１ ハイドロサルファイド１９．５ｔ
ｓパパイン３９．：ｌｔ−溶解したものを酵素液として
調製する◇加熱ずみの鶏冠にまず酵素液０．４必を添加
して６５℃で１時間酵素処理を行い１硯いて酵素液１６
必を添加して田℃で４時間酵素処理を行う。酵素処理の
終了後、遠心分離を行い、その上清を分取し、活性炭１
即を添加して３０分間攪拌した後、サンライト２時を添
加して濾過を行い、粗ヒアルロン酸を溶解したｒ液を得
る。
留水３２２に漬ける。別に、蒸留水ＩＣ当たりチオ硫酸
ナトリウム＆５ｆ１ ハイドロサルファイド１９．５ｔ
ｓパパイン３９．：ｌｔ−溶解したものを酵素液として
調製する◇加熱ずみの鶏冠にまず酵素液０．４必を添加
して６５℃で１時間酵素処理を行い１硯いて酵素液１６
必を添加して田℃で４時間酵素処理を行う。酵素処理の
終了後、遠心分離を行い、その上清を分取し、活性炭１
即を添加して３０分間攪拌した後、サンライト２時を添
加して濾過を行い、粗ヒアルロン酸を溶解したｒ液を得
る。
この粗ヒアルロン酸含有溶液に塩化ナトリウムを加えて
最終濃度０．５Ｍとしたものを３０分間攪拌した後、セ
チルピリジニウムクロライド２４０ｔを添加し、４５℃
で３０分間攪拌して主としてフンドロイチン硫酸を沈澱
させ、さらにサンライトＩＫｇを加えて３５℃で沢過し
てｒ液を得る。このｆ液に塩化ナトリウム４々をｒ液に
加えて３０分間攪拌した後１９５％エタノール５０２を
添加してヒアルロン酸を沈澱させる。
最終濃度０．５Ｍとしたものを３０分間攪拌した後、セ
チルピリジニウムクロライド２４０ｔを添加し、４５℃
で３０分間攪拌して主としてフンドロイチン硫酸を沈澱
させ、さらにサンライトＩＫｇを加えて３５℃で沢過し
てｒ液を得る。このｆ液に塩化ナトリウム４々をｒ液に
加えて３０分間攪拌した後１９５％エタノール５０２を
添加してヒアルロン酸を沈澱させる。
この沈澱物を塩化ナトリウム・エタノール溶液（２Ｍ塩
化ナトリウム：９５％エタノール＝ＬＯ：１．１）１０
ｇで洗浄する。すなわち、沈澱物を塩化ナトリウム・
エタノール溶液中に懸濁してω分間攪拌した後、濾過を
行う。この操作Ｔｔ２回繰り返した後、７５％５％エタ
ノ−ルミ５用いて同様に洗浄し、さらに９５％エタノー
ル６．５必を用いて同様に洗浄する。
化ナトリウム：９５％エタノール＝ＬＯ：１．１）１０
ｇで洗浄する。すなわち、沈澱物を塩化ナトリウム・
エタノール溶液中に懸濁してω分間攪拌した後、濾過を
行う。この操作Ｔｔ２回繰り返した後、７５％５％エタ
ノ−ルミ５用いて同様に洗浄し、さらに９５％エタノー
ル６．５必を用いて同様に洗浄する。
これを減圧乾燥してヒアルロン酸５９．４＃を得る。
実施例にて得たヒアルロン酸の化学的な性質を次の測定
方法により分析した。その結果を第１表に示す。
方法により分析した。その結果を第１表に示す。
ヒアルロン酸の純度：ヒアルロン酸中には構宸成分とし
てグルクロン酸が含まれているから、カルバソール硫酸
法によりグルクロン酸をグルクロラクトンとして求め、
グルクロラクトン量からヒアルロン酸の純度を算出した
。
てグルクロン酸が含まれているから、カルバソール硫酸
法によりグルクロン酸をグルクロラクトンとして求め、
グルクロラクトン量からヒアルロン酸の純度を算出した
。
分子量：ヒアルロン酸の極限粘度〔η〕をウベローデ型
毛細管粘度計により測定し、次式より分子量Ｍを求めた
。
毛細管粘度計により測定し、次式より分子量Ｍを求めた
。
〔η）＝０．００２２８Ｍ０・８”
蛋白含量： Ｆｏｊｉｎ−Ｌｏｗｖｙ法により測定した
。
。
核酸含量：ヒアルロン酸溶液の２６０！１ｍの吸光度を
測定した。
測定した。
フンドロイチン硫酸：セルロースアセテートＷｋＩＩｔ
気泳動法により、ヒアルロン酸以外のバンドが検出され
ないことを確認した。
気泳動法により、ヒアルロン酸以外のバンドが検出され
ないことを確認した。
水分含ｉｔ：日局争乾燥減量試験法により乾燥減量を求
めた。
めた。
１、。２１．ｆＥ、ＩＥ＃（Ｅ’Ｊア、あ、□
１゛第 １ 表
１゛第 １ 表
Claims (2)
- （１）動物のヒアルロン酸含有結合組織を原料として酵
素分解処理したのち、セシル・ピリジニウム・クロライ
ド分画を行うヒアルロン酸の製法において、原料を還元
剤の存在下で蛋白分解酵素にて処理する工程を含むこと
を特徴とするヒアルロン酸の製法。 - （２）動物のヒアルロン酸含有結合組織を原料として酵
素分解処理したのち、セシル・ピリジニウム・クロライ
ド分画を行うヒアルロン酸の製法において、粗ヒアルロ
ン酸含有浴液に塩化ナトリウムを添加したのち、セシル
・ピリジニウム・クロライド分画を行い、ヒアルロン酸
を上清として分取する工程を含むことを特徴とするヒア
ルロン酸の製法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP1119985A JPS61171703A (ja) | 1985-01-24 | 1985-01-24 | ヒアルロン酸の製法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP1119985A JPS61171703A (ja) | 1985-01-24 | 1985-01-24 | ヒアルロン酸の製法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS61171703A true JPS61171703A (ja) | 1986-08-02 |
Family
ID=11771368
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP1119985A Pending JPS61171703A (ja) | 1985-01-24 | 1985-01-24 | ヒアルロン酸の製法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS61171703A (ja) |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5767106A (en) * | 1992-02-21 | 1998-06-16 | Hyal Pharmaceutical Corporation | Treatment of disease and conditions associated with macrophage infiltration |
| US5990096A (en) * | 1990-09-18 | 1999-11-23 | Hyal Pharmaceutical Corporation | Formulations containing hyaluronic acid |
| WO2007142285A1 (ja) | 2006-06-07 | 2007-12-13 | Kyowa Hakko Bio Co., Ltd. | ヒアルロン酸塩の精製方法 |
| JP2010046039A (ja) * | 2008-08-25 | 2010-03-04 | Adaputogen Seiyaku Kk | 健康飲料及び経口用抗腫瘍剤 |
-
1985
- 1985-01-24 JP JP1119985A patent/JPS61171703A/ja active Pending
Cited By (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5990096A (en) * | 1990-09-18 | 1999-11-23 | Hyal Pharmaceutical Corporation | Formulations containing hyaluronic acid |
| US5767106A (en) * | 1992-02-21 | 1998-06-16 | Hyal Pharmaceutical Corporation | Treatment of disease and conditions associated with macrophage infiltration |
| WO2007142285A1 (ja) | 2006-06-07 | 2007-12-13 | Kyowa Hakko Bio Co., Ltd. | ヒアルロン酸塩の精製方法 |
| JPWO2007142285A1 (ja) * | 2006-06-07 | 2009-10-29 | 協和発酵バイオ株式会社 | ヒアルロン酸塩の精製方法 |
| JP2010046039A (ja) * | 2008-08-25 | 2010-03-04 | Adaputogen Seiyaku Kk | 健康飲料及び経口用抗腫瘍剤 |
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