JPS6118799A - 効力のあるサイモペンチン類似体 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は、一般に新規な免疫変調（ｉｍ恥ル。ｍｏ−ｃ
Ｌｕ、１ａｔｏｒｙ　）に関し、とくに大きく増大した
効力を有するペプチドのサイモベンチン（ｔｈｙｍｏｐ
ｅｎ−ｔｉｒＬ）の類似体に関する。

米国特許第４．１９０．６４６号および同第４，２６＋
、　８８６号は、米国特許第４，００２，７４０号およ
び同第４．０７７．９４９号に記載されているサイモポ
イエチンとし７て知られている長鎖ポリペプチドに類似
する活性を有する種々のペンタペプチドを開示している
。サイモポイエチンはＴ細胞の分化を選択的に刺激する
。米国特許第４．１９０．６４６号中に開示されている
ペンタペプチドは、配列Ｈ−ＡＲＧ−ＬＹＳ−ＡＳＰ−
Ｖ、４Ｌ−ＴＹＲ−ＯＨを有し、サイモポイエチンのペ
ンタペプチドまたは［サイモベンチン（ｔｈｙｍｏｐａ
ｎｔ隨）」として知られている。これらのペプチドのあ
るものの生物学的活性は、文献ＭＥウェクスラ−（Ｗｔ
ｋｚｌｔｒ　）ら、ツヤ−ナル・オブ・エクスベリメン
タル・メデイシ７　（Ｊ、　Ｅｘｐ、　Ｍｔｄ、）　１
４８：９９６−１００６（１９７８）に記載されている
。上記の米国特許および文献をここに引用によって加え
る。米国特許第４．３６１．６７３号および同第４．４
２０．４２４号は、また、サイモポイエチンに類似する
活性を有すると主張されている種々のペプチドを開示し
ティる。ウシ牌から単離されがっ［スプレニン（ｚｐｌ
ｅｎ、ｉｎ　）Ｊと呼ばれる同様な構造は、アウドヒ７
　（Ａｕｄｈｙａ）ら、バイオケミストリー（Ｂｉｏｃ
ｈｇ−ｍｉｚｔｒｙ）、２０．６１９５−６２００（１
９’８１）オよびプロシーディング・オプ・ナショナル
・アカデミ−・オブ申すイエンシｘ　（Ｐｒｏｃ、Ｎａ
ｔ、Ａｃａｃｔ。

Ｓｃｉ、）（ＵＳＡ）、８１．２８４７−．２８４９　
（ＭｃＬｙ１９８４）Ｋ記載されている。この物質はＴ
細胞およびＬａ胞の両者の誘導（ｉｎｄ、ｗｃｔｉｏｎ
　）を刺激する。

ある種の酵素抵抗性免疫変調ペプチドは、１９８３年１
１月１８日に提出したわれわれの同時係属米国特許出願
筒５５３，２８１号（ここに引用によって加える）に記
載されている。

サイモベンチンは動物および人間の免疫系へ変調効果を
及ぼすことが示され、そしてこうして免疫機能の欠乏ま
たは過剰として現われる免疫機能の欠陥を包含する病気
の処置に有用である。例えば、次の文献を参照：アウド
ヒア（Ａｕｄｈｙα）、Ｔ。

およびボルドスティン（Ｇｏｌｔｔｓｔｅｉル）、Ｇ、
、インターナショナル・ジャーナル・オブ・ペプチド・
アンｒ−プロティン・リサーチ（、ＩｒＬｔ、　Ｊ、　
Ｐｔｐｔ。

Ｐｒｏｔｇｉｎ、　Ｒａｇ、　　２．２．５６８−５７
２（１９８３）；アイウチ（Ａｉｔｂｔｉ）　ら、ラン
セント（Ｌａｎｃｅｔ　）　１；５５１−５５５（１９
８３）；およびレビンスキ−（Ｌｅｖｉｎｓｋｙ　）ら
、１次免疫欠損病（ＰｒｉｒｎａｒｙＩｍｒｎｔｔｒＬ
ｏｄ、５ｆｉｃｉｅｒＬｃｙ　Ｄｉｒｇαｔｔｓ　）、
ウエッジウツ）”　（ＷｔｃＬｇｔｗｏｏｄ　）、Ｏ−
セｙ　（Ｒｏ、ｒｇｒｂ　）およびパウル（Ｐ（ＬｌＬ
Ｚ　）編、１９．２７３−２７６　（１９８６）。本発
明に含まれる他の背景の物質および生物学的方法につい
て、これらの文献お２よび前述の特許を参照されたい。

本発明は、サイモペンチンまたはスプレニンよりも驚く
ほどに効力があり、こうして免疫欠損（ｉｍｍｕｎｏ　
ｄ、ｇｆｔｃｔｔ　）の処置において有意な利点を提供
する。

本発明は、次の式を有する新規なペプチドおよびその製
薬学的に許容されうる酸または塩基の付〃口塩に関する
： Ｒ−Ｖ−Ｆ−Ｘ−Ｙ−Ｚ−Ｒ１（Ｉ） 式中、 ＲはＨ１低級アルキル、ホルミル、または低級アルカノ
イルであり、 ｙＢＡＲＧｉたＢｎ−ＡＲｃであり、 ＦはＬＹ、Ｓ、Ｄ−ＬＹ、Ｓ、ＰＲＯ，デヒドロ、ＰＲ
Ｏ，またはＡＩＢであり、 Ｘ？−１ＡｓＰ、、Ｄ−ＡＳＰＸ　ＧＬＩＪまたｎＤ−
ＧＬＵであり、 ＹはＶＡＬＸＬＹＳ、ＬＥＵ、、ＩＬＥ、ＧＬＵ、ＡＬ
Ａ、ＧＬＮ、Ｄ−ＶＡＬＸＤ−ＬＹＳＸＤ−ＬＥＵＳＤ
−ＩＬＥＸＤ−ＧＬＵ、Ｄ−ＡＬＡおよびＤ−ＧＬＮで
あり、ＺはＰＨＥ、Ｈｌ、５ＸＴＲＰ、Ｄ−ＰＨＥ。

Ｄ−ＨＩＳまたばＤ−ＴＲＰであり、 ＲＩはＯＨ甘たはＮＲ２Ｒ３であり、そしてＲ２および
Ｒ３は各々独立にＨおよび低級アルキルから選択され、 ただしＷがＬＹＳでおり、ＸがＤ−ＡＳＰ。

ＧＬＵまたはＤ−ＧＬＵであ妙かつＹがＶＡＬであると
き、ＺはＰＨＥ以外である。

本発明のペプチドはサイモＲンチンまたはスプレニン自
体のそれらのほぼ１０倍の効能でサイモベンチン様また
はスプレニン様活性を有することが驚くべきことには発
見された。

ＷがＰＲＯ，デヒドロＰＲＯまたはＡＩＢである本発明
のペプチドは、また上の特許出願に開示されているよう
に、酵素による分解に対して驚くほどの抵抗性を有する
。

上に示したように、本発明はサイモポイエチン様活性を
有する新規なペプチド、これらのペプチドを含有する治
療学的組成物、およびそれらの使用法に関する。

広い範囲において、本発明は次式 ％式％（） 式中、Ｒ，Ｖ、　ＦＸＸ、　Ｙ、　ＺおよびＲ１け上に
定義したとおりである、 を有するペプチドまたはその製薬学的に許容されうる酸
または塩基の付加塩を提供する。本発明の好ましいペプ
チドは、ＺがＰＨＥＸＤ−ＰＨＥ。

ＨＩＳまたけＤ−Ｈｌｓであり、と＜ＫＦが永′たＰＲ
Ｏである式（Ｉ）のものである。より好ましいペプチド
は、Ｒが水素、または低級アルキルであり、ＶがＡＲＧ
であり、ＸがＡＳＰであり、そしてＺがＰＨＥまたはＨ
ＩＳであり、とくにＦがまたＰＲＯである式■のもので
ある。なおより好ましいペプチドは次のものである：　
Ｉｆ　−Ａ　ＲＧ　−ＬＹＳ−ＡＳＰ−ＶＡＬ−Ｐｌ：
ＩＥ−ＯＨ，Ｈ−ＡＲＧ−ＬＹＳ−ＡＳＰ−ＶＡＬ−Ｈ
ｌｓ−ＯＨ。

Ｈ−ＡＲＧ−Ｊ）ＲＯ−ＡＳＰ−ＶＡＬ−ＰＨＥ−ＯＨ
，Ｈ−ＡＲＧ−ＰＲＯ−ＡＳＰ−ＶＡＬ−ＨＩｓ−ＯＨ
，ＨづＡＲＧ−ＬＹＳ−ＡＳＰ−ＶＡＬ　−ＴＲＰ　−
ＯＨ，α−アセチル−ＡＲＧ−ＰＲＯ−ＡＳＰ−ＶＡＬ
−ＰＨＥ−ＮＨ，、および低級アルカノイル−ＡＲＧ−
ＰＲＯ−ＡＳＰ−ＶＡＬ−１）ＨＥ−ＯＨ ここで使用するとき、［低級アルキルＪという語は、１
〜６個の炭素原子を有する分枝鎖状および直鎖状の飽和
炭化水素、例えば、メチル、エチル、プロピノペイソプ
ロビル、ペンチル、ペキンルなとであり、一方「低級ア
ルカノイル」という語は Ｉ 低級アルキル−０Ｃ− を意味する。

これらのペプチドと塩を形成できる酸として、次のもの
を述べることができる：無機酸、例えば、塩酸、臭化水
素酸、過塩素酸塩、硝酸、チオシアン酸、硫酸、リン酸
など、および有機酸、例えばギ酸、酢酸、プロピオン酸
、グリコール酸、乳酸、ピルビン酸、ンユウ酸、マロン
酸、コハク酸、マレイン酸、フマル酸、アントラニル酸
、桂皮酸、ナフタレンスルホン酸、スルファニル酸ナト
。

これらのペプチドと塩を形成できる塩基として、次のも
のを述べることができる：無機塩基、例えば、水酸化ナ
トリウム、水酸化アンモニウム、水酸化カリウムなど、
および有機塩基、例えば、モノ−、ジーおよびトリーア
ルキルおよびアリールアミン（例えば、トリエチルアミ
ン、ソイソプロビルアミン、メチルアミン、ツメチルア
ミンなト）および置換されていてもよいエタノールアミ
ン（例えば、エタノールアミン、ソエタノールアミンな
ど）。

この開示を通じて、それらの製造において使用されるペ
プチドのアミノ酸成分およびある種の物質を便宜上略号
により識別する。これらの略号は次の通りであるニ アミノ酸　　　　　　　略　号 Ｌ−アラニン　　　　　　ＡＬＡ Ｄ−アラニン　　　　　　Ｄ−ＡＬＡ Ｌ−アルギニン　　　　　Ａ　ＲＧ Ｄ−アルギニン　　　　　Ｄ−ＡＲＧ Ｌ−アスパラギン酸　　　ＡＳＰ Ｄ−アスパラギン酸　　　Ｄ−ＡＳＰ Ｌ−グルタミン酸　　　　ＧＬＵ Ｄ−グルタミン酸　　　　Ｄ　−ＧＬＵＬ−グルタミン
　　　　　ＱＬＮ Ｄ−グルタミン　　　　　Ｄ４；ＬＮ Ｌ−ヒスチジン　　　　　ＨＩＳ Ｄ−ヒスチジン　　　　　Ｄ　−Ｈ１，ＳＬ−インロイ
シン　　　　ＩＬＥ Ｄ−インロイシン　　　　Ｄ、　−Ｉ　Ｌ’　ＥＬ−ロ
イシン　　　　　　ＬＥＵ Ｄ−ロイシン　　　　　　Ｄ−ＬＥＵ Ｌ−リソン　　　　　　　ＬＹＳ Ｄ−リソン　　　　　　　Ｄ−ＬＹＳ α−メチルアラニン　　　ＡＩＢ Ｌ−フェニルアラニン　　ＰＨＥ Ｄ−フェニルアラニン　　Ｄ　−ＰＨＥＬ−ゾロリン　
　　　　　　ＰＲＯ Ｌ−）リゾトファン　　　ＴＲＰ 、Ｚ）−）リプトファン　　　Ｄ　−ＴＲＰＬ−バリン
　　　　　　ＶＡＬ Ｄ−バリン　　　　　　Ｄ−ＶＡＬ 本発明のペプチドは一般に既知に技術に従い製造できる
。便利にはペプチドは最初にメリフイー／ｌ／　）”　
（ＭｅｔｒｉｆｉｇＬｄ、）、ＪＡｃｓ、Ｂ５．２１４
　＋５−２１５４　（１ｑ６ｓ）に記載された固相合成
技術により製造できる。このような方法は、前述の先行
技術のあるものに開示されている。他の技術は、例えば
、Ｍ、ｚダ７７．Ｘ’キー（ＢｏｔＬａｎｚｚｋｙ　）
ソヨン・ウィリー・アンド・サンズ（ＪｏｈｒＬｆＶｉ
Ｌｇｙ＆Ｓｏル、？）、第２版、１９７６ならびにこの
分野において知られている他の参考文献において見出・
すことができる。このような合成において有用な保護基
およびそれらの略号は、上のテキストならびＫ　Ｊ、　
Ｆ、　Ｆ、　７クオミー（ＭｃＱｒｎｉｔ）、有機化学
（Ｐｌｅｎｗｍ　Ｐｒｅｓ、？）、ニュー佃−り（Ｎａ
ＷＹｏｒｋ　）、１９７６中に見出されるである。これ
らの本の両者を引用によってここに加える。ここで使用
する普通の保護基は一一プチルオキシカルボニル（ＢＯ
Ｃ）、ベンジル（ＢＺＬ）、ｔ−アミルオキシカルビニ
ル（ＡＯＣ）、トシル（ＴＯ５）、Ｏ−ブロモフェニル
メトキシカルボニル（ＢｒＺ）、２．６−ソクロロベン
ソル（ＥＺＬＣＩ、）およびフェニルメトキシカルボニ
ル（Ｚまた１１’１ｃＢＺ）である。

ＸがＡＳＰまたはＤ−ＡＳＰである本発明のペプチドは
、前述の米国特許および文献中に開示されているように
、サイモポイエチンに類似する生物学的活性を示す。こ
の生物学的活性は、ヒトＴ細胞系統における環式ＧＮＰ
の生産の誘導をサイモポイエチンと比較して検定測定す
ることにより立証される。この検定における試験ペプチ
ドによる環式ＧＮＰ生産の誘導は、試験ペプチドが細胞
上のサイモポイエチン受容体部位に結合し、そしてサイ
モポイエチン様生物学的活性を誘導する能力を示す。下
に表わす結果から理解できるように、本発明ペプチドは
サイモベンチンよりも約１０倍まで効力があり、こうし
て有意な利点を提供する。

ペプチドを製造する費用および生きている系においてし
ばしば観測されるペプチドの急速な分解のた−め、増大
した効能を有するここにおけるもののようなペプチドは
高く評価される。

ＸがＡＳＰまたはＤ−ＡＳＰである主題のペプチドの生
物学的活性は、また、これらのペプチドをサイモポイエ
チンの活性部位のだめの細胞膜へ結合することにより示
される。

ＸがＧＬＵまたはＤ−ＧＬＵである本発明のペプチドは
、シエイド（Ｓｃｈｇｉｄ）ら、ツヤ−ナル・オツ・エ
クスペリメンタル・メデイシン（Ｊ、ＥｘｐＭａｄ、）
１４７：１７２７−１７４３．（１９７８）の検定にお
いて示されるように、スジレニンに類似する生物学的活
性を示し、そしてＴＡｙ−１−細胞のｒｈｙ−１＋ｒ細
胞への分化およびＬｙｂ４−細胞のＬｙｂ−２十Ｂ細胞
への分化を起こす。

本発明がなされる以前において、５位置のアミノ酸チロ
シンをフェニルアラニン、ヒスチジンまたはトリシトフ
ァンで置換することにより、サイモペンチンに比較して
このような増大した効能を有するヘプチドを製造できる
であろうことは完全に予測されえなかった。前述の参考
文献は、一般に、５位置におけるチロシンまたはチロシ
ン様アミノ酸残基の必要性を示す。本発明のペプチドの
使用によりこのような大きく増大した効能を達成できる
であろうことは、この分野において確かに示唆は存在し
なかった。

本発明のペプチド類の免疫変調特性のために、それらは
人間および動物の処置において有用である。なぜなら、
それらは体の免疫応答において参加できる胸腺誘導（ｔ
ｈｙｍｔｔ、ｓ　−ｃｔｇｒｉｖｔｄ　）細胞（Ｔ細胞
）への造血組織中のリンパ造成幹細胞の分化を誘導する
（ｉｒＬｄ、ｔｂｃｇ　）能力を有するからである。そ
の結果、本発明のペプチドは多数の治療学的用途を有す
ると考えられる。

主として、前記化合物は胸腺の示した機能のあるものを
実施する能力を有するので、それらは種々の病腺機能お
よび免疫の領域における用途を有する。１つのこのよう
な用途はジソヨーソ症候群（Ｄｉ　Ｇｇｏｒｇｇ　Ｓｙ
ｎｄｒｏｍｅ　）　、すなわち、胸腺の先天性不存在が
存在する状態の処置である。ソジョーソ症候群の患者へ
の本発明のペプチドの１種の適用は、この欠損を克服を
促進するであろう。免疫学の分野における専門家は、適
当な投与の道筋（好ましくは非経口的）を容易に決定で
き、そしてソショーソ症候群の処置のための本発明のペ
プチドの１種の有効量を容易に決定できるであろう。

本発明のペプチドはサイモペンチンよりも効力があるの
で、先行技術のペプチドよシも治療学的に有用である。

さらに、本発明のペプチド類は体の全体の免疫（ｃｏＬ
Ｌ７１ｃｔｉｖｅ　ｉｒｎ′ｎＬｕｎ１ｔｙ　）を促進
する上で有用であると考えられ、それらは細胞の免疫の
治療学的刺激を増加または助進し、これにより慢性の感
染、例えば、菌またはマイコプラズマの感染、結核、癩
、急性および慢性およびウィルスの感性などを包含する
病気の処置において有用である。

本発明の化合物は、細胞免疫が１つの結果（αル１ｓｓ
ｔＬｅ　）である領域において、とくに前述のソショー
ソ症候群におけるような免疫の欠損が存在する場合に有
用である。こうして、バランスされないＴ細胞およびＢ
細胞のため過剰に抗体が生産される場合、本発明のペプ
チド類はＴ細胞の生産を刺激することによりこの状態を
正すことができる。

こうして、それらは傷害性抗体が生産されるある種の自
己免疫病、例えば、全身の紅斑性狼癒、リウマチ様関節
炎などにおける治療学的使用が期待される。

ＸがＧＬＵまたはＤ−ＧＬＵである本発明のペプチド類
は、抗体を生産できる成熟Ｂ細胞への前駆体Ｂ細胞の分
化を誘導するためにまた有用である。こうして、それら
はこのような分化機構の欠損が存在する、Ｘ結合乳児ノ
・イポガンヤグロブリネミア（Ｘ　−ＬｉｎｋｔｃＬ　
１ｎｆａａｔｉＬｉ　ｈｙｐｏ　ｇａｍｒｎａ−ｇＬｏ
ｂｕＬｉｎｅｍｉａ　）のような状態の処置において有
用である。

最も広い用途において、本発明の化合物は、調節が必要
である患者である人間または動物の免疫系の調節におい
て有用である。ここで使用するとき、「調節」は本発明
の化合物が免疫系を異常な病気の状態から正常のバラン
スされた状態にもどさせることを意味する。この調節は
免疫学的欠損（例えば、ソジョーソ症候群）の補正にお
いて大きい用途を良好に見出すことができるが、またそ
れは過剰の免疫学的活性（例えば、自己免疫・病）の状
態を補正するために使用できる。したがって、本発明は
、調節を必要とする患者に免疫調節的に有効量の本発明
の化合物の１種を投与することからなる患者の免疫を調
節する方法、ならびにこれらの方法を実施するための製
薬学的組成物を包含する。

本発明は相対的または絶対的Ｔ細胞またはＢ細胞の欠損
から生ずる状態を有する患者（人間また法を提供する。

また、患者に治療学的に有効量の式（Ｉｌのペプチドを
投与することからなる、患者の胸腺の相対的または絶対
的欠損から生ずる状態を処置する方法を提供する。ここ
で使用するとき、「治療学的に有効量」は、それぞれ、
Ｔ細胞またけＢ細胞の欠損、あるいは胸腺の欠損から生
ずる状態を処置するために有効な量を意味する。

また、本発明は、患者に有効誘導量の式（ＩＪのペプチ
ドを投与することからなる、患者のリンパ造成幹細胞（
Ｌｙｍｐｈｏｐｏｉｅｆ、ｉｃ　５ｔｔｎｃ　ｃａｌｌ
　ｌを誘導して胸腺誘導リンパ球の特性を発現する方法
を提供する。また、本発明は、患者に有効誘導量の式（
Ｉ）のペプチドを投与することからなる、患著の前駆体
Ｂ細胞を誘導して成熟Ｂ細胞の特性を発現させる方法を
提供する。さらに、本発明はそれらの方法を実施するた
めの製薬学的組成物を提供する。

本発明の製薬学的組成物を調製するため、式Ｉのペプチ
ドまたはその塩基もしくは酸の付加塩を活性成分として
慣用の製薬学的配合技術に従い製薬学的担体と組み合わ
せる。この担体は投与、例えば舌下、経痕腸、鼻または
非経口の投与に望む調製の形態に依存して広範な種々の
形態を取ることができる。経口的投与形態の組成物を調
製するとき、通常の製薬学的媒質、例えば、経口的液体
の製剤（例えば、懸濁液、エリキシルおよび溶液）の場
合において、水、油、アルコール、香味剤、防腐剤、着
色剤など、あるいは経口的固体の製剤（例えば、粉剤、
カプセル剤および錠剤）の場合において、でんぷん、糖
、希釈剤、造粒剤、潤滑剤、結合剤、崩壊剤などのよう
な担体のいずれを使用することもできる。調節された解
放形態を用いることもできる。投与が容易であるため、
錠剤およびカプセル剤は最も有利な経口的投与単位形態
を表わし、この場合固体の製薬学的担体が明らかに用い
られる。必要に応じて、標準技術によシ糖で被覆するか
あるいは腸溶皮で被覆することができる。

非経口的製品のために、担体は通常無菌の水からなるが
、例えば、溶解を促進する成分またｉｒｉ防腐剤を含む
ことができる。また、注射用懸濁液を調製することがで
き、この場合において適当な液状担体、懸濁剤などを用
いることができる。

本発明の目的は、一般に、約１ｔＩｒ／ｋｇ体重以上の
量で非経口的に投与するとき活性である。ジショーソ症
候群（Ｄｉ　Ｇｅｏｒｇｅ　ＳｙｒＬｄｒｏｍｔ　）を
処置するため、ペプチドは約０．１〜約１０＋＋ｖ／ｋ
ｇ体重の量で非経口的に投与できる。一般に、同一範囲
の投与量を免疫欠損を処置すべき他の病気または状態の
処置において使用できる。これらより多い量（例えば、
約１０〜１１０００７Ｒ／ゆ体重）は過剰の免疫の活性
のために有用である。

次の実施例により本発明をさらに説明する。これらの実
施例および明細書を通じて、特記しないかぎり、部は重
量による。

実施例Ｉ アルキニルーリシルーアスバルチルーノ（リルーフェニ
ルアラニン、溶媒和ＢＯＣ−ＰＨＥ−０．−クロロメチ
ル化樹脂（１，０４ミリモルｃｔ７ｙ；ｓｒ）おＪ：び
無水ｘｐ＜ｏ、４４ｙ：ｙ、５ミリモル）を、オーバヘ
ッドの攪拌機をもつ丸底フラスコ内のＤＭＦ　（４０ｍ
ｇ）中のＢＯＣ−ＰＨＥ−ＯＨ（１，３３ｔ　ｉ　５　
ミ１，１モル）の溶液に加えた。この反応混合物を６５
°Ｃにおいて２４時間攪拌した。

次いで樹脂を濾過し、ＤＭＦ、ＤＭＦ／Ｈ，０（１：　
０　；Ｈ，Ｏ、ＥｔＯＨ／Ｈ２０（１：　１　）、Ｅｔ
ＯＨおよびＣＨ，Ｃ１，でよく洗浄した。樹脂上のＢＯ
Ｃ−ｐＨＥ−ＯＨの置換は、アミノ酸分析に基づいて、
樹脂の１１につき０．５４５ミリモルであった。

Ｚ−ＡＲＧ　（Ｚ　、Ｚ）−ＬＹＥ　（Ｚ）−ＡＳＰ（
・ＢＺＬ）−ＶＡＬ−ＰＨＥ−００Ｈ，−樹脂を固相法
により手動的に組み立てた。このアミノ酸誘導体および
ＤＣＣを次の結合のため６倍過剰量で使用した：Ｚ−Ａ
ＲＧ（Ｚ、Ｚ）−ＯＨ，ＢＯＣ−ＬＹＳ（Ｚ）−ＯＨ，
ＢＯＣ−ＡＳＰ　（・ＢＺＬ）−ＯＨおよびＢＯＣ−Ｖ
ＡＬ−ＯＨ０次いでこのペプチド−樹脂（３，１り）を
ＨＦ／アニソール（Ａｎｉｓｏｌ）（９：　１　；　３
０ｍ）で０℃において１時間切ｂｙした。ＨＦ／アニソ
ールの除去後、ペグチドー樹脂混合物を濾過し、エーテ
ル（３×２０ｍ／りで洗浄した。このペプチドを５％の
ＨＯＡｃ　／Ｈ２０（３Ｘ　５０　ｍ　）で抽出し２、
凍結乾燥して８００■の生成物を得た。次いでこの粗成
ペプチドをセファデックス（，５ｅｐｈａｄｅｘ　）　
−５ＰＣ−２５カラム（８０ｃｍＸ２．５α）（０，２
モルのＨＥ４０ＡｃＸ　ｐＨ５で平衡化した）で精製し
た。

流速は８５−７時であり、そしてＩＤｒｎ／！／管の分
画を集めた。所望生成物は管１４５−１／）７間で溶離
された。これらの分画をプールし、そして凍結乾燥して
７５０■の物質を得だ。このペプチドをさらにセファデ
ックスＧ−１０カラム（８０αＸ　２．５　ｃｍ　）の
クロマトグラフィーにかけ、Ｈ２Ｃで溶削した。流速は
１Ｂｍｐ１時であムそして１０−／管の分画を集めた。

表題ペプチドは管２１−２６間で溶離された。

薄層クロマトグラフィー（シリカグル１６０１２００ミ
クロン） ＲｆＯ，２３（ｎ−ＢｕＯＨ／ＨＯＡｃ／Ｈ，０＝４　
：　３：１） ＲｆＯ，１１（ＮＨ４０Ｈ／　２−；’ａハ／−＃−３
７：８４） アミノ酸分析： Ａ　７１７　＋　１．０４　ＨＬ　ｖａ　＋　１．００
　：”　ｐ　＋　１．０４　ＢＶＣＬＬ、ＣＪ、９７お
よびｐ　ｈ　ｅ　＋　１．００　；ペプチド含量二８８
％ ＨｐＬＣ”、ワットマン・パートシル（ＴＦ’ｈａ　ｔ
ｍａｎｐａ７ｔｉｓｉｌ　）　−０Ｄ　Ｓ　−１力ラム
１０％のＣＨ，０Ｈ７０，０２Ｍ　　ＫＨ，ＰＯ４；　
’ＰＨ６，５ 流速＝２ゴ／分 保持時間：８１０分 実施例■ Ｎα−アセチル−アルギニルーグロリルーアスノクルテ
ルーハリルーフェニルアラニン 固相法により、ＢＯＣ−ｐＨＥメリフィールド（Ｍｅｒ
ｒｉｆｉｅｌｄ　）樹脂（１２，０３Ｆ、０．５１ｍｅ
ｑ／２）を用いて出発して、表題ペプチドを得た。

この樹脂を順次に６当量のＢＯＣ−ＶＡＬ、ＢＯＣ−β
−ＢＺＬ−ＡＳＰ、およびＢＯＣ−ＰＲＯと結合した。

結合剤は合成を通じて４　：　Ｉ　ＣＨ２Ｃｌ。

ｒＤＭＦ中の１　：　Ｉ　ＤＣＣ：ＨＯＢＴであった。

このテトラペプチド樹脂のほぼ％を保存した。

残りをＮＱ−ＴＯ５−Ｎ　　−ＡＯＣ−ＡＲＧと前述の
結合条件下で結合した。

このペンタペプチド樹脂のほぼ棒を保存した。

残りをＴＦＡで処理し、ＤＩＥＡで中和した。次いで、
これをＣＨ２ＣＣｌ、（４０ｍ１）中のＡｃ、０（６ゴ
）およびＤＭＡＰ　（０，３１）で６０分間処理した。

この樹脂を洗浄し、乾燥し、ＩＩＦ（４０−）：アニソ
ール（１ｏｉ）中で０℃において６０分間切り離した。

残留固体を１０％のＨＯＡｃで抽出し、凍結乾燥して１
．３６の粗製ペプチドを得た。

この粗製ペプチドをセファデックスＤＥＡＥ２．６Ｘ９
０σで粗製した：０．０５モルのＮ九ＨＣＯ３、ｐＨ５
（３，５７）、１００ｄ／時の流速、１３ｆｎ／！のフ
ラクション、２０６ｎ’ｍの検出器。分画１７〇−２０
５を集め、凍結乾燥して表題化合物、８３０■、を得た
。

ＴＬＣニジリカグル、２５０μ 溶媒　　　　　　　　Ｒ１ ５：　５　：　５　：　　Ｉ　　ＥｔＯＡｒ：ｐｙｒ：
Ｂ２０：ＨＯＡｃ　　　　　　　Ｏ，３８４：　１：　
５　ｎＢｕＯＨ：ＨＯＡｃ：Ｈ，Ｏ。

上の相　　　　　　　　　　　　　　　　０．４１１：
１　トリフルオロエタノール： ＮＨ４ＯＨ０，７５ アミノ酸分析： Ａｒｃｔｔｌ、０２：ＰｒｏｒＣＪ、９８：Ａｓｐ＋０
．９７；Ｖａｌ　、１．０２１Ｐｈｅ　、１．０１ペプ
チド含量：　　６５．３％ 実施例■ α Ｎ　−ホルミルーアルギニルーグロリルーアスバルチル
ーハリルーフェニルアラニン 固相法により、実施例■がらの（Ｎ　ｇ　−Ｔ　ＯＳ−
＃　　−ＡＯＣ）−ＡＲＧ−ＰＲＯ−（β−ＢＺＬ）−
ＡＳＰ−ＶＡＬ−ＰＲＥ樹脂（約２ミリモル）を用いて
出発して、表題ペプチドを製造した。

１　：　１（ＤＴＦＡ／ＣＨ２Ｃｌ２Ｔ：脱保護し一’
ｆ：Ｌ、てＤＩＥＡで中和した後、この樹脂をｐ−ニト
ロフェニルホルメート（ｊ、　Ｏｆ　）およびＨＯＢＴ
（０，９？　）で５　：　１（ＤＣＨ，Ｃ１２：ＤＭＦ
（３０ｍ）中で１６時間処理した。この樹脂を洗浄し、
７’−二トロンエニルホルメー）（１，ｏｒ）およびＤ
ＭＡＰ　（０，２９）でｃｇ、ｃｔ、中において１時間
処理した。

このホルミルペプチド樹脂をＨＦ（６ｏｒｎｌ）および
アニソール（１ｏｔｎり中においてｏｏｃで１時間切り
離した。残留固体を０．２％のＮＨ４ＯＨで処理し、抽
出液を凍結乾燥して１．０Ｏｆの無色固体を得た。

−このペプチドを７エフアデツクスＤＥＡＥ。

２．６Ｘ９０αで精製した二０．１モルのＮＨ４ＨＣＯ
Ｂ％ｐｘＺ５．１００ｍｌ／時の流速、１３献の分画、
２０６ｎ情の検出器。分画１０５−１３０を集め、凍結
乾燥すると、表題化合物、６７５η、が無色固体として
得られた。

ＴＬＣニジリカグル、２５０μ Ｎｏ　　　　　　　　　　　　　　　　　　０．４０茸 アミノ酸分析： Ａｒｇｒ　１．０１　ＨＰｒｏ＋　１．００；Ａ８ｐｌ
　１．０ＤＢＶａｌ　、０．９８ＨＰｈｅ　、１．００
ペプチド含量ニア８５％ 実施例■ アルギニループロリルーアスノ！ルチル−バリル−フェ
ニルアラニン ＢＯＣ−ＰＨＥメリフィールド樹脂（８，０６？　。

ｏ５／ｍｅｑ／ｙ　）を用いて出発して、固相法に従い
、表題ペプチドを合成した。この樹脂を次のものと順次
に結合した＝６当量のＢＯＣ−ＴＩＡＬ（ＤＣＣ／４−
ビロリジノビリソンと１回、ＤＣＣ／ＨＯＢＴと再結合
した）ＢＯＣ−β−ＢＺＬ−ＡＳＰ　（ＤＣＣ／ＨＯＢ
Ｔ　）、ＢＯＣ−ｐＲｏ（ＤＣＣ／ＨＯＢＴ）およびＮ
ｇ−ＴＯ５−Ｎα−ＡＯＣ−ＡＲＧ　（ＤＣＣ／ＨＯＢ
Ｔ）。溶媒は合成を通じて４：１のＣＨ，Ｃ１２：　Ｄ
ＭＦであった。

この樹脂のほぼＡを乾燥し、ＢＰ（４０ｍｌ）：アニソ
ール（１０＋＋＋ｊり：メルカゾトエタノール（１−）
中で０℃において６０分間切り離した。

残留固体を１０％のＢＯＡｃで抽出し、凍結乾燥して１
．６４の粗製ペプチドを得た。

この粗製ペプチドをセファデックスＣＭ２５．２．６Ｘ
９０儂で精製しだ：勾配溶離、０．０５モルのＮＨ４０
Ａｃ、　　ｐＨ５（２，１１）〜０．６モルのＮＨ４０
Ａｃ、　　ｐＨ５（２，１’ｌ　）、　１００ｍ１／時
の流速、１３−の分画、２０６ｎｍの検出器。分画６１
−１００を集め、凍結乾燥した。固体をＧ−１０セフア
デツクスのクロマトグラフィーにかけ（１％のＨＯＡｃ
で溶離）、集め、凍結乾燥して表題化合物、７８０ｍ７
、が得られた。

ＴＬＣニジリカグル０．２５０μ Ｈ，０，上の層　　　　　　　　　　　　　０．２５ア
ミノ酸分析： Ａｒａ＋　１．００Ｂ、Ｐｒ（＋＋　１．００；ｎ８］
＋　１．ＯＯ：Ｖａｔ　、１．０３　ＨＰｈｅ　、０．
９６ペゾチド含量：６１９６′ 実施例Ｖ アルギニルーリシルーアスバルチルーバリルーヒ固相法
により、０．２１ミリモル／ｉの置換レベルでメリフィ
ールド樹脂へ結合しだＢＯＣ−（ｉｒｎ−ＴＯ５）ヒス
チジンを用いて出発して、表題化合物を合成した。洗浄
順序は次のとおりであっだ： バリンを除外してすべての結合は対称の無水物技術によ
シ実施した。ＣＨ，Ｃ１，中において０℃で誘導化アミ
ノ酸およびＩ）ＣＣ（２：１のモル比）を用いることに
より、対称無水物を合成した。ノシクロヘキシル尿素を
濾過により除去し、ろ液を同相反応器へ加えた。

注： １、　Ｂｏｃバリンの第３結合は、ツメチルホルムアミ
ド（２０ｍＡ）／塩化メチレン（６ａｙ）中においてヅ
シクロへキシルカーボッイミド（９，００ミリモル）お
よび１−ヒドロキシベンゾトリアゾール−水和物（９，
ＯＯミＩＪモル）を用いて実施した。

２、ＢＯｃバリンの第６結合後、樹脂ペプチドを５％の
無水酢酸でＣＨｔｅ１２　（１００ｍｌ、）中において
１００■の４−ソメチルアミンピリソンの存在下にアセ
チル化した。

６、樹脂ペプチドをアセチル化後に半分に分けた。

４、樹脂ペプチドを脱保護およびリソン残基後半分に分
割した。

樹脂ペプチドの収量は６．７２である。このペプチドを
脱保護し、そしてスキャベンソヤーとしてアニソール（
６−）を用いるＨＦ（６０１ｎ１．）切り離しによυ樹
脂から除去した。

ＨＦおよびアニソールを減圧により除去した後、残留物
をソエチルエーテルで粉砕し、濾過により集め、ソエチ
ルエーテルで洗浄し、５０％のＴＦＡ／ＣＭｔＣ１，（
４Ｘ２５ｍｇ）で抽出した。

抽出液を合わせ、溶媒を減圧によシ除去し、そして残留
物をソエチルエーテルで粉砕した。生ずる固体を濾過に
より集め、ソエチルエーテルで洗浄し、室温で一夜真空
乾燥すると、１．８４４の粗製ペプチドが得られた。

１．０１の粗製ペプチドをセファデックスＣ−２５（２
，６Ｘ９５ｃｍ）のクロマトグラフィーにかけ、０．２
モルのＮＨ４ＣＨ３ＣＯ，で７）　Ｈ６，０において溶
離した。流速は９０ｍｅ／時でアシ、そして分画を７５
分ごとに集めた。２０００分画が集められた後、緩衝液
を０．２５モルのＮＨ，ＣＨ，Ｃｏ、、・７）　Ｈ７，
Ｏｌに変えた。分画２４０〜２８０をプールし、凍結乾
燥した。この物質を水から２回凍結乾燥して０．８２を
得た。これをセファデックスＧ−１０（２タンデム２．
６Ｘ９５ｃｍＯカラム）のクロマトグラフィーにかけ、
水で溶離した。流速は４０ｆｎｌ／時であり、そして分
画け１５０滴（６，５ｒｎｌ）であった。分画７８〜８
７をプールし、凍結乾燥して２８６■の表題化合物を得
た。

ＴＬＣシリカダル０２５０〔Ｊ、Ｔ、ベイカー（Ｂａｋ
ｅｒ）　５Ｘ２０ｃ１ｎ’） スポット４０μ１ ＨＰＬＣは９９．４％の純度を示す。

Ａγｖ　　　　　　　　１．０　　　　　　１．０３Ｌ
　ｕ　８　　　　　　　１．０　　　　　　１．００Ａ
ｓｐ　　　　　　　　１．０　　　　　　０．９５Ｖａ
ｔ　　　　　　　　１．０　　　　　　１．０２Ｈｉ　
ｓ　　　　　　　　１．０　　　　　　０．９９７６．
１％のペプチド 旋光度〔α〕γ＝−３２，９°　（Ｃ＝０．１１２４．
１モルのＨＯＡｃ） 実施例■ アルギニルーリシルーアスノ４ルチル−バリル−トリプ
トファン溶媒和物 このペプチドはＤＣＣ結合技術に従い次の出発物質を用
いて合成した： き −八　　　　　　＼　２ （）　　　　　　？　　　　　　　＋１　　／／／喚　
　　　　　　　　　　費　℃　東 Ｃ−）り　　　　　　余　　へ　　１ −　　　　ト費＼ 入　　　　　邂　　　　　ｌ　苓　１Ｎト　　　　　　
Ｘ　　　入　　東　　く　　ンへ　　　　　費　　　Ｒ
ヘ　セ　ム ＋Ｉ−Ｉ凶　づム余＼ Ｊ−１ト　　°クト東　　也　　ｋ　　（へ１　に　　
　　１　　　１１ト　　　　１１＋１’ｌｒ＊）（ｏ　
　　ｏべ　　ｏｏ％　　ロ 固相の手順は次の通シであった： 樹脂を同相の攪拌された反応器に入れ、４時間膨潤させ
た。溶媒を濾過によシ除去し、残留物を１００ｍＪの次
の溶媒および試薬で特定した時間およびサイクルの間処
理した。各処理後、液体を濾過により除去した。

１、　　ＣＨ，ＣＬ、　　　　　　　　　　３　Ｘ　１
分−洗浄２゜　５０％ＴＦＡ／ＣＨ，Ｃ１，１分−説プ
ロック ４、ＣＨ２Ｃｌ、　　　　　　　　　３％１分−洗浄６
、ＣＨ，Ｃ１，３％１分−洗浄 ８、ＣＨ，Ｃ１，３％１分−洗浄 １０、ＣＭ、Ｃ１，３％１分−洗浄 １１．２０％ＤＭＦ／ＣＨ，Ｃ１，３Ｘ１分−洗浄１２
結　合　　　　　　　　　　１．５〜４゜０時間１３．
ＤＭＦ　　　　　　　　　　　３Ｘｉ分−洗浄４０ｍ１
のＣＨ２Ｃｌ２　のフ゛ロックされたアミノ酸および２
０ゴのＤＭＦ中のＨＯＥ　ｔを添加し、１分間攪拌し、
次いで４０−のＣＨ，Ｃ１２中のｆ）ＣＣを加え、次い
で１．５〜４．０時間攪拌することによシペグチド結合
を形成した。樹脂ペプチドをＤＭＦおよびＣＨ２Ｃｌ２
ですべての結合が完結した後洗浄し、そしてＢｏａ基を
通常の方法で除去した。

ＴＦＡ塩をＣＨ２Ｃｌ、でよく洗浄し、反応器から取シ
出し、そして一定重量、８．６９グ、に真空乾燥した。

ペプチドを樹脂から、液体ＨＦ（アニソールおよびトリ
プトファンを加える）中で［＋’Ｃにおいて１時間攪拌
することにより、切り離した。固体をエーテルで洗浄し
、ペプチドを樹脂から２５弦のＨＯＡｃ／ＩＩ、Ｏで抽
出した。この物質を凍結乾燥して３．４５　ｆの粗生成
物が得られ、これはトリプトファン上になおホルミル基
を有した。この物質を１．０モルのＮＨ，ＨＣＯ，、％
Ｈ９ｙＯ’（１００−）中で２４時間攪拌することによ
り脱ホルミル化した。この粗製物質を凍結乾燥し、セフ
ァデックス５Ｐ−Ｃ−２５カラム（２，６Ｘ９０儒）の
クロマ）・グラフィーにかけた。０．２モルのＮＨ４０
Ａｃ。

７）Ｈ６００で溶離すると、適当な分画を合わせかつ凍
結乾燥した後、２．０９９の生成物（９３％の純度）が
得られた。この物質を調製用ＨｐＬＣ。

Ｍ−２０カラム（ワットマンＯＤＳ　−３）のクロマト
グラフィーにかけ、Ｏ，０１モルのＮＨ，ＯＡｃ。

１２％のＣＨ３ＣＮＸ７）Ｈ５，００で溶離すると、適
゛当な分画を合わせた後、Ｏ，，７４Ｍの純粋外生放物
が得られた。

実施例■ アセチル−アルギニル−α−アミノインプチリルーアス
／Ｊルチルーバリル−フェニルアラミナミド、溶媒和物 Ａ、ＴＦＡ　　Ａｓｐ（ＯＥｚｌ）−Ｖｉｘｌ−Ｐｈ、
ｅ−ＮＨ−ＭＢＨＡ−樹脂 ７）−メチルベンズヒドリルアミン−ｍＪＪｉｔ（７゜
ｆ３０．５ミリモル／９樹脂）をＣＢ’、ＣＬ、中で１
時間膨潤させた。Ｂｏａ−ｐｈｅ、Ｂｏｃ−Ｖａｔおよ
びＢｏｃ−Ａｓｐ（ＯＢｚｌ）−０Ｈを樹脂にＤＣＣ仲
介結合を介して組み込んだ。Ａｒ−末端Ｂｏａ基を除去
した後、このペプチド−樹脂を乾燥し、他のペプチドの
合成のために使用した。

Ｂ、Ａｃ−Ａｒｇ−Ａｔｂ−Ａｓｐ−Ｖａｌ−ｐ　ｈ　
ｅ　−ＮＨ２ ＴＦＡ　Ａｓ　ｐ　（ＯＢｚ　ｌ　）　−Ｖａ、　ｔ　
−ｐｈ　ｅ−ＮＨ−ＭＢＨＡ−樹脂（６２）をＢｏｃ−
ＡｉｂおよびＡｏＣ−Ａｒｇ（Ｔｏｓ）−０，Ｈと、Ｄ
ＣＣ／ＨＯＢｔ結合を用いて、順次に結合した。Ａｒｇ
のＡｏＣ基の除去後、被ゾチドー樹脂（５２）をＨＦ／
アニソール（９：１７５０ゴ）で０℃において１時間切
、？１１ｉ１ｆした。ペプチドを５％のＨＯＡｃ／Ｈ２
０（３×５０１ｒＬｅ）で抽出し、凍結乾燥シテ５７０
ｍ？の固体物質を得た。粗製ペプチドをセファデックス
ＤＥＡＥ−カラム（８ＱｃｒｒＬＸ　２．５ｃ＋ｉ　）
（０，０５モルの緩衝し々い（ＨＥ、）、ＨＣＯ３で平
衡化した）のクロマトグラフィーにかけた。流速は８５
−７時であり、そして１０ｍ１の分画を集めた。

ペプチドは管３５−４８の間で溶離され、次いでこの分
画を凍結乾燥して４５０■の生成物を得た。

薄層クロマトグラフィー（シリカグルＦ６゜；２００ミ
クロン） ＲｆＩ　　０．４５　（Ｎ１１４０Ｈ／インプロパノー
ルー３７：８４） ＲｆＩＩ　０．２５　（ｎ　−ＢｗＯＨ／ＨＯＡｃ／Ｈ
，Ｏ＝６　：１：１） アミノ酸分析： ＡｒＱ、’１．０１：ＡｉｂＴ　１．ｏ３Ｂ＃ｐ、１．
０３ｉＶａｌ　、０．９９　ＨＰｈｅ　、１．ＯＤ。

ペプチド含量：８８３％ 実施例■ ７セｆルーアルギニル−プロリル−アスパルチルＡｃ−
Ａｒｇ（’Ｔｏｓ）−Ｐｒｏ−Ａｓｐ（ＯＢｉｌ）−Ｖ
ａｌ−Ｐｈ、ｅ−ＮＨ−ＭＢＨＡ−樹脂を、５ＰＰＳに
より１０２のｐ−メチルベンズヒドリルアミン−樹脂（
置換０．６ミリモルＮＨ２／２樹脂）を用いて出発して
合成した。アミノ酸誘導体およびＤＣＣを次の結合のた
めに５倍過剰量で使用した：Ａｏｃ−Ａｒｇ（Ｔｏｓ）
−０，Ｈ。

Ｂｏｃ−ｐｒｏ、Ｂｏｃ−Ａｓｐ（ＯＢｚｌ）−ＯＨ，
Ｂ　ｏ　ｃ−Ｖａ　ｌおよびＢｏＣ−ｐｈｅ０次いでペ
グチドー樹脂（１’）をＨＦ／アニソール（９：１ｉ４
０ｄ）で０℃において１時間切り離した。ＨＦ／アニソ
ールの除去後、混合物を涙過し、エーテル（３ｘ３ｏ＊
）で洗浄した。ペプチドを５％ノＨＯＡ　ｃ　／Ｈ２０
（３Ｘ　５０　ｍｌ　）で抽出し、凍結乾燥して６１５
■の生成物を得た。次いで粗製ペプチドをセファデック
スＤＥＡＥカラム（２，５ｃｒｎＸ　８０ｃｍ）　（０
，０５モルの緩衝化されていないＮＨ４ＨＣＯ３で平衡
化した）で精製した。流速は８５−７時であり、そして
１２−／管の分画を集めた。所望のペプチドは管３０−
４０の間で溶離された。この分画を凍結乾燥すると、３
００■の物質が得られた。

薄層クロマトグラフィー（シリカｒルＦ６０；２００ミ
クロン） ＲｆＩ　０．５５　（ＮＨ４ＯＨ／イソプロパツール＝
３７：８４） ＲｆＩ［０，３（ｎ　−ＢｕＯＨ／Ｈ□　Ａ　ｃ　／Ｈ
ｚＯ＝　３　：１　：　１） アミノ酸分析： Ａ　ｒ　ｇ　＋　１−００　；Ｐｒｏ　＋　０．９９　
；Ａ　８ｐ　Ｈｏ、　９９　＋〆ａｌ　ｒ　１．００７
Ｐ　ｈｅ　＋　１．００゜ペプチド含量＝　５７５％ 実施例■ アルギニル−リシル−グルタミル−バリル−ヒス０．２
１ミリモル／２の置換レベルでメリフィールド樹脂へ取
９付けられた５、０１のＢｏｃ−（ｉｎ−Ｔｏｓ）ヒス
チジンを用いて出発して、固相法により、この化合物を
合成した。洗浄順序は次の通りであった： 等モル量の保護されたアミノ酸、ジシクロへキシルカル
ボジイミドおよびヒドロキシベンゾトリアゾールを用い
ることによシ、すべての結合を実施した。用いた溶媒は
ジメチルホルムアミド（（１２ｔｒＬｌ）と塩化メチレ
ン（３８ｍ１）との混合物であった。

く　　く　也−く（ 注： 最終の結合後、樹脂−ペプチドをジメチルホルムアミド
（２Ｘ　５０ｍ）、インプロパツール（２Ｘ５０ｍＺ）
で洗浄し、そして５０°Ｃにおいて、２０時間真空乾燥
した。

樹脂ペプチドの収量は６．９ｇであった。６．７ｇの樹
脂ペプチドを脱保護し、そして樹脂からＨＦ（５０ｍ６
）の切シ離しによシスキャベンジャーとしてアニソール
（１−）を用いて除去した。

ＨＦおよびアニソールを減圧によシ除去した後、残留物
をジエチルエーテルで粉砕し、濾過によυ集め、ジエチ
ルエーテルで洗浄し、５％の酢酸／水（４Ｘ　２５ｍｇ
）で抽出し、次いで水（４Ｘ２５（２，６Ｘ９５ｃ＋ｘ
）のクロマトグラフィーにかけ、０、２５　％ルｃＱ　
ＮＨ，ＨＣＯ，、ｐＨ７，０’ｔ’溶離した、流速は１
００ｍ／時であシ、そして分画を２００滴ごとに集めた
。分画１６１〜２１０をプールし、凍結乾燥した。この
物質を水から６回凍結乾燥すると、５６８■の表題化合
物が得られた。

分析データ： ＴＬＣシリカゲルＧ２５０　Ｃ１，Ｔ−、ヘイカー（Ｅ
ａｋｅｒ　）　５　ｘ　２０ｃＩｒＬ）溶媒系 ｆ ｎ−ブタノール／酢酸／水　　　　　　　ｏ、２９（１
：１：１） ｎ−ブタノール／酢酸／水／ビリミ　　　ｏ、６２ジン
＜４：２：３：１） クロロホルム／メタノール／　　　　　　　０．３０濃
ＮＨ，ＯＨ（２：２　：　１　） Ａ　ｒ　ｇ　　　　　　１．０　　　　１．０５ＬＶ８
　　　　　　１．０　　　　１．０１Ｇｌｕ　　　　　
　１．０．　　　　１．０２Ｋａ　ｌ　　　　　　　１
．０　　　　０．９９ＨＩＳ　　　　　　　１．０　　
　　０．９５７４．７％のペプチド 旋光度ｃａ〕”ｄ＝−２４，ｓ′′　（ｃ＝ｏ、１１５
４．０．１モルのＨＯＡｃ） 実施例　Ｘ アルギニルーリシルーアスパルテルーパリルーグロリン 固相法によ’Ｂ、Ｂｏａ−ｐｒｏベンジルエステル樹脂
（５，０８，９，０，６４情ｅ　ｑ／ｇ　）を用いて出
発して、表題化合物を調製した。次の標準ルーチンを用
いた： 脱保護：５０７５０％ＴＦＡ／ＣＨ２Ｃｌ、５分間次い
で５０ｍ５０％ＴＦＡ／ＣＨ，Ｃｔ。

２０分間； 洗　浄：　５０ｍ１ＣＨｔＣ１，各回１分次いで５０ｍ
ｔ′ｔｐｒｏｇ　　１分間次いで５０艷ＣＨ２Ｃｌ、２
回； 中　和：　５０ｔｎ１５％Ｄ　Ｉ　ＥＡ／ＣＢ、Ｃｌ　
、各回２．５分２回； 結合、方法１：１５．０ミリモルの保護されたアばノ酸
およびＨＯＢＴＩ２．５１／） を１０ｍのＤＭＦ中に溶解し、次 いで３０ばのＣＨ２Ｃｌ２で希釈 した。ＤＣＣ（３，０９９）を１０ −のＣＨ２Ｃｌ２中に溶解し、反 応成分と樹脂との混合物に加え、 ２〜２．５時間攪拌した。

結合、方法２：１５．０１モルの保護されたアミノ酸ヒ
ドロキシースクシンイεド エステルを５０ｄのＣＢ、Ｃ１゜ 中に溶解した。Ａ’　Ｍ　Ｍ　（３，５ｍｌ　）を加え
、そしてこの混合物を１８ 時間樹脂とともに攪拌した。

順次に、樹脂を１同各々Ｂｏｃ−Ｖａｌ（方法１）およ
びＢｏｃ−Ｂｚｌβ−Ａｓｐ−Ｏ５ｓ（方法２）と結合
した。この樹脂（３９５２−１３７Ｂ’）の半分を取り
出し、そして残りを１゜同各ｋＢｏｃα−Ｃｂｚｔ−Ｌ
ｙｓおよび（Ｃｂｚ）。

Ａｒｇと結合した（両者とも方法１）。樹脂を洗浄し、
空気乾燥し、そしてＨＦ／アニソール（３０ｔｎｔ／　
８　Ｄ　ｒｎｌ）中で０℃で６０分間切シ離した。

樹脂残留物をＥ　ｔ、Ｏで急冷し、濾過した。固体を１
０％のＨＯＡ　ｃ　（１００ｍ）で１時間濾過し、そし
て抽出液を凍結乾燥すると、塩酸塩が無色のガム、’１
．Ｏｇ、として得られた。

粗製ペプチドを０Ｍセファデックス（２，６Ｘ８７ｃｒ
ｒＬのカラム、０．１５モルのＮＨ，ＯＡｃ、緩衝せず
１００ｍ／時の流速、１２ｍ／分画、２２５　ｎｍの検
出器）で精製した。分画２０６−２６５をプールし、凍
結乾燥して８８０ｄの表題化合物を得た。

■、分析ニ アミノ酸　　　　　　　比 Ａｒｇ　　　　　　　　１．０１ Ｐｒｏ　　　　　　　　０．９９ Ａｓｐ　　　　　　　　１．００ Ｖαｌ　　　　　　　　Ｏ，９６ Ｔγτ　　　　　　　１．０３ ５６．７％のペプチド含量 薄層クロマトグラフィー　　２５０ミクロン、シリカゲ
ル　Ｇ ω　　　寸　　ｈ ＰＮ″）　　　へ ＣＩ　　　Ｃ３（５ ・・　　・・　　シ □Ｃ）　　　・・ °゛°“　町 喝　　（Ｏ 村　　−蝙 実施例　ＸＩ アルギニル−リシル−グルタミル−ハリルートリブトフ
ァン溶媒和物 ゾペテドをｈｃｃ結合技術にょシ次の出発物質を用いて
合成した： Ｂｏｃ−トリプトファン（Ｃｌ：ＩＱ）−樹脂エステル
Ｂｏｃ　　バリン Ｂｏｃ　　ｆルタミン酸−δ−ベンフリエステルＢｏ　
ｃ　−Ｎ’−Ｚ−１）シン Ｂｏ　ｃ　−Ｎ”　−Ｔｏｓｙｌ　−フルギ＝ンジシク
ロへキシルカーポジイミド ヒドロキシベンゾトリアゾール 源　　　　　　　　　　　量　　　　　　　モルー−６
，０ｇ　　　　０．００３ ベテエム　　　　　１．９６ｇ　　　Ｏ，００９６、ｏ
４Ｉ！ｃ＋：０ｏ９ ３．４２．９　　　　０．００９ ３．８６．！ｉ’　　　　　０．００９固相の手Ｊ＠は
、次のとおシであった：樹脂を固相の攪拌された反応器
に入れ、４時間膨潤させた。溶媒を濾過にょシ除去し、
残留物を１００ゴの次の溶媒および試薬で特定した時間
およびサイクルの間処理した。各処理後、液体を沖過過
により除去した。

１、　　ｃＨ，ｃｔ。

２．５０％の　ＴＦＡ／ＣＨ２Ｃｌ２ ３、５０％の　ＴＦＡ／ＣＨ２Ｃｌ。

４、　　ＣＨ，Ｃ１２ ５，５％の　Ｎ−メチルモルホリン／ＣＢ２Ｃ１゜６、
　　ＣＨ，Ｃ１゜ １５％の　Ｎ−メチルモルホリン／ＣＢ２Ｃ１゜８、　
　ＣＨ２Ｃｌ２ ２５％の　ジインプロピルエテルアミン／ＣＨ２Ｃｌ２
１ｏ、　　ｃｌｌ、Ｃ１２ １１，２０％の　ＤＭＦ／ＣＨ２Ｃ１２１２、結合 １ＤＭＦ ３×１分−洗浄 １分−説フ゛ロック ６０分−説グロック ３Ｘ１分−洗浄 １分−中和 ５×１分−洗浄 １分−中和 ３×１分−洗浄 ０．５分−中和 ６×１分−洗浄 ３×１分−洗浄 １、５　Ｗ　４．　’０時間 ６×１分−洗浄 ４０ゴのＣＢ、Ｃ１，中のブロックしたアミノ酸および
２０ゴのＤＭＦ中のＢＯＢｔを加え、１分間攪拌し、次
いで４０ｒｎｌのＣＨ，Ｃ１２中の１）ＣＣを加え、１
．５〜４．０時間攪拌することによって、ペプチド結合
を形成した。すべての結合が完結した後、樹脂ペプチド
をＤＭＦで洗浄し、Ｂｏｃ基を通常の方法で除去した。

ＴＦＡ塩をＣＭ、Ｃ１，でよく洗浄し、そして反応器か
ら取り出し、一定重量のａ７５Ｊに真空乾燥した。

ペプチドを樹脂から、液体ＨＦ（アニソールおよびトリ
プトファンを加える）中で０℃において１時間攪拌する
ことによシ、切ｐ離した。ＨＦを減圧において除去した
。固体をエーテルで洗浄し、そしてペプチドを樹脂から
２５％のＨＯＡｃ／Ｈ２０で抽出した。これを凍結乾燥
して、３．６ＤＩのトリプトファン上になおホルミル基
をもつ粗製生成物を得た。この物質を１．０モルのＮＨ
，、ＨＣｏ、　、ｐＨ９，０（１００ｍ１）中で２４時
間攪拌することによシ脱ホルミル化した。この粗製物質
を凍結乾燥し、セファデックス５Ｐ−Ｃ−２５カラム（
２，６Ｘ９０α）のクロマトグラフィーにか′けた。０
．１モルのＨＥ、ＯＡａ、ｐＨ５，５８で溶離すると、
適当な分画を合わせかつ凍結乾燥した後、２．１０ｇの
生成物（約９６％の純度）が得られた。

この物質をワットマンＯＤＳ　−５ＮＰＬＣカラムで精
製し、セして０，０１モルのＮＨ，ＯＡｃ。

１２％のＣＨ，ＣＭ、ｐＨ５，ｏＯで溶離すると、適当
の分画を合わせた後、０．９Ｃ１の純粋な生成物が得ら
れた。

ＴＬＣ：　　Ｒｆ（溶媒系） Ｒｆ、　　　Ｄ、１５（ＢｗＯＨ：ＨＯＡｃ：Ｈ，０３
：１：１） Ｒｆ２　０．２８　（ＢｗＯＨ：ＨＯＡｃ　：Ｈ，Ｏ：
ＥｔＯＡｃ　　１：１：ｊ：１） Ｒｆ、　　０．０９（ＣＢＣＩｓ　：ＭｅＯＨ：ＮＨ。

ＯＨ１２：９：４） アミノ酸分析：Ａｒｃｔ　（０，９９）Ｌｙ８　（０，
９Ｂ）ＧＬｗ（０，９７）Ｖａｌ　（１，０’５）Ｔｒ
ｐＣｏ、９６） 組成＝８８．４％のペプチド 実施例　Ｘ■ アルギニル−リシル−グルタミル−バリル−トリ固相法
によシ樹脂−ペプテドＶａｌ−Ｔｒｐ−ＮＨ−ベンズヒ
ドリルアミン樹脂を用いて出発して、この化合物を合成
した。

アばノ酸 Ｂｏｃ−γ−ベフリルーＧｌｕ Ｎ”−Ｂｏ　ｃ　−Ｎ’−ＣＢＺ−ＬｙｓＮα−ＣＢＺ
−Ｎｒ　Ｉ△−ｄｉ−ＣＢＺ−Ａｒｇ量　　　　ミリモ
ル　　　源　　　　ロット番号２．２３．！ｉＪ　　　
１６．５０　　　パテエム　　Ｒ５７８５６，２９１！
　　１６．５ＯＲ５２６Ｂ９．５６１１　　１６．５０
　　　　　　　　　Ｒ５９３１１、　　＃　　−Ｂｏｃ
−ＮダーＣＢＺ−Ｌｙｓの結合後、樹脂ペプチドを５％
の無水酢酸でＣＨ２Ｃｌ。

（１００ｒｎｌ）で１００■の４−２メチルアミノピリ
ジンの存在下にアセチル化した。

樹脂ペプチドの収量は１５，５．９であった。９．０ｇ
の樹脂ペプチドを脱保護し、樹脂からＨＦ（８０ｍ／り
の切り離しによシスキャペンジャーとしてアニソール（
９０ｍ／）を用いて切り離した。

溶媒を減圧により除去し、残留物をジエチルエーテルで
粉砕した。固体を濾過により集め、水中の５％の酢酸（
４Ｘ５０ｄ）で抽出した。抽出液を合わせ、凍結乾燥し
て１．４ｇの粗生成物を得た。

この粗製物質を２　’５０　ｍｌの１．０モルのＮＩＰ
４ＨＣＯ３中に溶かし、ｐＨを９５に調節した。この溶
液を２４時間室温に静置し、次いで凍結乾燥し゛て１．
２ｇの粗生成物を得た。

この粗ペグチドをセファデックスＣ−２５（２，６ｘ９
０σ）のクロマトグラフィーにかけ、０．６モルのＭＥ
、ＯＡｃ、ｐＨ’６．０で溶離し、流速は１５０ｄ／時
であり、そして分画は２０−であった。管９０〜１１０
はＨＰＬＣによシ純粋な生成物を含有することが示され
、これらをプールし、そして凍結乾燥して４５０〜の表
題化合物を得た。

分析データ： ＴＬＣシリカゲル　ＧＦ　　２５０ミクロン外−ブタノ
ール／酢酸／水　　　　　　　０．１６ｉ１：１：１） ｎ−ブタノール／酢酸／水／酢酸エチル　０．１０（１
：１：１） ＨＰＬＣは９９．１％の純度を示す。

Ａ　ｒ　ｇ　　　　　　１．０　　　　１．　［１２Ｌ
　１／　８　　　　　１．０　　　０．９６Ｇ　ｌ　ｕ
　　　　　　１．０　　　０．９９Ｖ　ａ　ｌ　　　　
　　１．０　　　１．０４Ｔ　ｒ　ｐ　　　　　　１．
０　　　０．９４８２．１％のペプチド 旋光度〔α］Ｄ＝−）ｏｊｏ　（Ｃ＝０．９９７．０、
１％ルのＨＯＡ　ｃ　） 実施例　正 アルギニルーリシルーアスパルテルーバリルートヘンス
ヒトリルアミン樹脂を用いて、この化合物を合成した。

洗浄順序は次のとおシであった：＝１１０ １　）　　　ＣＨ２Ｃｌ。

２）　５０％の　ｒｐＡ７ｃｍ、ｃｔ。

３）　５０％の　ＴＦＡ／ＣＢ、Ｃｌ。

４）　　　ＣＢ、ＣＬ。

５）　６５％の　（ＣＨ，）２ＣＢＯＢ／ＣＭ、Ｃ１２
６）　　　ＣＨ，Ｃ１２ ７）６．５％の　ジイソプロピルエチルアミン／ＣＨ２
Ｃｌ。

８）　　ＣＨ，Ｃ１２ ９）　７）２同− １０）　　ＣＭ、Ｃ１２ １１）　結合工程 １２）　ジメチルホルムアミド １３）　　ＣＨ，Ｃ１゜ 量Ｘ回数　　　時間（分） １００Ｘ３　　　　　２ １００　Ｘ　、１　　　　　２ １００Ｘ１　　　　２０ １００Ｘ３　　　　　２ １００Ｘ３　　　　　２ １００Ｘ３　　　　　２ １００Ｘ１　　　　　４ １００Ｘ３　　　　　２ １００Ｘ１　　　　　４ １００Ｘ’３　　　　　２ １００Ｘ１　　　　　２ １００Ｘ３　　　　　．２ すべての結合は等モル量の保護されたアミノ酸、ジシク
ロへキシルカーポジイミドおよびヒドロキメテレン（６
０ｒｎｌ）を溶媒として用いた。

アミノ酸 ＢＯｃ−Ｔｒｐ　（ＣＨＯ） Ｂｏｃ−バニリン Ｂｏｃ−ベンジル−Ａｓｐ Ｎｃｌ−Ｂｄｃ、−Ｎ　’−ＣＢＺ−ＬｙｅＮ（ｔ−Ｃ
ＢＺ−ＮｒＩ△ｄｉｃＢＺ−Ａｒｇ量　　　　ミリモル
　　　源　　　　ロット番号１０．９７ｇ　　３３．０
０　　　ベニスラ　　０００６１３７．１７ｇ　　３３
．００　　　パテエム　　　Ｒ４５４４５，５２１１１
６，５０Ｒ５２９ｉ ６．２Ｄ１１　　１６．５ＯＲ５２６８９，５５１１１
６，５０Ｒ５９３１ １、樹脂ペプチドを脱保護およびバニリン残基の中和後
に半分に分割した。

α ２、Ｎ　　−ＣＢＺ−Ｎ”　」”−ｄｉｃＢＺ−Ａｒｇ
の結合後、樹脂ペプチドを５％の酢酸無水物でＣＨ，Ｃ
１２（１０Ｄｔｎｌ）中において１００叩の４−ジメチ
ルアミノピリジンの存在下にアセチル化した。

樹脂ペプチドの収量は１５．７．９であった。ＺＯＩの
樹脂ペプチドを脱保護し、ＨＦ（６０ｍｌ）の切シ離し
によシスキャベンジャーとしてアニソール（５−）を用
いて樹脂から除去した。溶媒を減圧によシ除去し、残留
物をジエチルエーテルで粉砕した。固体を濾過によシ集
め、水中の５％の酢酸（５Ｘ　２０　ｍｌ　）で抽出し
た。抽出を合わせ、凍結乾燥して１．２Ｉの粗生成物を
得た。

粗製物質を２５０−の１．０モルのＨＥ４ＨＣＯ。

中に溶かし、ｐＨを９．５に調節しへた。この溶液を２
４時間室温において静置し、次いで凍結乾燥して１．２
９の粗生成物が得られた。

粗製ペプチドをセファデックスｃ−２５＜２．６Ｘ　９
０　ｃｍ　）のクロマトグラフィーにかけ、０．６モル
のＮＨ，ＯＡｃ、ｐＨ６，０で溶離し、流速は１５０ｍ
／時であシ、そして分画は２ｏ−であった。管１９７〜
２２１はＨＰＬＣによシ純粋な生成物を含有することが
示され、これらをブールし、凍結乾燥して４５０■の表
題化合物が得られた。

分析データ： ＴＬＣシリカゲル　ＧＦ　　２５０ミクロンｎ−ブタノ
ール／酢酸／水　　　　　　　Ｑ、１６＋１：１：１） アミノ酸分析　　　計算値　　実測値 Ａｒｇ　　　　　　１．０　　　１．００Ｌｙｓ　　　
　　　１．０　　　０．９７Ａｓｐ　　　　　　１．０
　　　０．９８Ｖａｌ　　　　　　１．０　　　１．０
６Ｔ　ｒ　ｐ　　　　　　１．０　　　０．９６７５．
１％のペプチド 旋光度〔α）Ｄ＝−３５，６°　（Ｃ＝１．００２．０
．１モルのＢＯＡｃ） 実施例　ＸＩＶ Ｎα−アセチル−アルギニル−６，４〜デヒドロープロ
リルーアスパルチルーバリルーチロシンアＡ、　　　Ｂ
ＯＣ−６，４−デヒドロ−ゾロリン６．４−デヒドｏ−
Ｐｒｏ　（２００Ｗ；　１．フロミリモル）をジオキサ
ン７Ｂ２０１８ｒｒＬｅ；　２　：　１　）中に溶解し
た。この溶液に、１ＮのＮａＯＨおよびジ−ｔ−ブチル
ジカーボネート（４３６ｍ９；２ミリモル）を０℃にお
いてかきまぜながら加えた。

次いでこの混合物を室温において一夜がきまぜた。

ジオキサンを除去し、残留する水相に、酢酸エチル（２
０ｍ６）を加えた。この混合物を水浴中で冷却し、０．
５Ｎ（ｆ）ＨＣｌでｐＨ２，ＯＫ酸性化し、分液漏斗の
中に移した。有機層を分離し、水層をＥｔＯＡｃ　（２
ｘ２０ゴ）で２回抽出した。合わせた有機相をＮα、Ｓ
Ｏ，で乾燥し、濾過しだ。

溶媒を除去し、残留物を乾燥し、それ以上精製しないで
使用した。

試料Ｏ’　ＨＡ’　Ｍ　Ｒ（（’　、Ｚ）　Ｃｌ　ｓ　
　ＨＡ　ｒ　Ｎｎ　５０３０−８５ンは１．４５ｐｐｍ
ＫＢＯｃ基の存在を示した。

Ｂ、　Ｎα−アセチル−アルギニル−ｓ、４−デヒドロ
ープロリルーアスパルテルーバリル−テロシンアはド ペプチドを（ｐ−メチル）ベンズヒドリルアミン−樹脂
（２，９の樹脂；樹脂の１ｇにつき０．２５ミＩＪモル
）のＮＨ２の置換）上で同相法にょシ合成した。ＢＯＣ
−Ｔｙｒ　（Ｂｚ　ｌ　）　−ＯＨ。

ＢｏＣ−〆αｌＸ　ＢＯＣ−５，４−デヒドロ−ｐｒｏ
およびＡｏｃ−Ａｒｇ（Ｔｏｅ）−０Ｈの組み込みをＤ
ＣＣ結合を経て実施した。結合を定量的ニンヒドリン試
験により監視した。アルギニンのアセチル化を５０％の
無水酢酸／ピリミジン（１５ｒｎ１．）およびＤＭＡＰ
　（１５Ｗ）を用いて実樹脂（２ｇ）をＨＦ／アニソー
ル（２０ｍ；９：１）で０℃において１時間切シ離した
。ペプチド−樹脂混合物をエーテル（３Ｘ　２０　ｍｌ
　）で洗浄し、セしてベプＪ−トを５％のＢＯＡ　ｃ　
／Ｈ２０（２００ｒｎｌ）で抽出した。凍結乾燥後、ペ
プチドをセファデックス５ＰＣ−２５カラム（５０儂×
０．９鋸）中に適用し、そして０．０２モルのＮＨ４０
Ａｃ。

ｐＨ４，６で平衡化した。流速は８０７／時であり゛、
そして１２ｒｎｌの分画を集めた。生成物は管２２〜３
９溶離され、これらをプールし、凍結乾燥した。

凍結乾燥した物質を再びセファデックス５ＰＣ−２５カ
ラム（６０ｃＷＬｘ　２．５ｃｍ）　（０，０２モルの
ＭＥ、ＯＡｃで平衡化した。ｐＨ４，５〜６．８）で前
述と同じ条件下で精製した。ペプチドは管５５〜７５の
間に溶離され、これらをプールし、凍結乾乾燥して８０
■の生成物を得た。

ＲｆＯ，４５（ｎ−ＢｕＯＨ／ＨＯＡｃ／Ｂ、０／ＰＦ
ｒ＝１５：３：１２：１０； シリカゲル　Ｆ２Ｏ） ＲｆＯ，２７（ｎ　−Ｂ　ｕ　ＯＨ／　Ｚ７０Ａ’　ｃ
　／　Ｈ２０−３：１：１．シリカゲル　Ｆ２Ｏ） アミノ酸分析： Ａ　ｓ　７）　Ｎ　　ｉ、０４　；　Ｆ　ａ　Ｘ　ｓ　
　１．００　；　ＴＹ　ｒ　ｓ　　［］、８５　＋Ａγ
（Ｊ、Ｄ、９６．３．４−デヒドｏ−ｐｒｏ。

１．０８ ペプチド含量ニア２％；吸湿性物質 ＢＰＬＣ：　！７ツトマンーパー）　／ｌ／　（Ｗｈ　
ａ　ｔ　ｍａｎｐａｒｔｉｓｉｌ　）　−０ＤＳ　　カ
ラム１０％のＣＨ，ＣＭｌｏ、０２Ｍ　　ＮＨ，ＯＡｃ
　＋ｐＨ４，６ 流速”、２ｍ１１分 ペプチドは９９７％の純度であり、そして１４．５分の
保持時間を有する。

実施例ＸＶ 環式−ＧＭｐの検定 この検定は、サイモポイエチン自体がなすような、試験
ペプチドが完全なＯＥＭ細胞の細胞膜受容体へ結合しか
つ環式−ＧＮＰの生産を選択的に刺激するその能力を測
定する。

ＯＥＭ細胞系統はアメリカン・タイプ・カルチャー・コ
レクショｙ　（Ａｍｅｒｉｃａｎ　Ｔｙｐｅ　Ｃｕｌ　
ｔｕｒｅＣｏｌｌｅｃｔｉｏｆＬ）から入手し、そして
１０％の熱不活性化胎児ウシ血清、１０チの熱不活性化
ウマ血清、２ミリモルのＬ−グルタミンおよび５ｏＩｌ
／ｄのゲンタマイシンを補充したＲＰＭＩ−１６４０培
地中で、３７℃において５チのｃｏ、を含有する湿った
雰囲中で３〜４Ｘ１０’細胞／　ｍｌの最終密度に培養
した。この濃度において、細胞は生長曲線の早期の静止
相にアシ、そしてトリプトファンブルーの排除により９
饅生存可能であることがわかった。細胞を４日間生長さ
せ、そして収穫した。収穫後、細胞をＰＢＳ中で３回洗
浄し、ＲＰＪ／ｌ’−１６４０培地中に３．１２Ｘ１０
７細胞／プの濃度で懸濁させた。細胞を３７℃で３０分
間平衡化させた後、２５μｌの培地中の種々の濃度の試
験ペプチドを１ｍｌの細胞に加え、添加する試験化合物
の初期濃度は培地中の試験ペプチドの所望の最終濃度を
生ずるように選択した。試験ペプチドを細胞懸濁液と瞬
間的に混合した。インキュベーションを振盪水浴中で３
７℃において４〜５分間進行させ、次いで水冷トリクロ
ロ酢酸（１０％；１ゴ）の添加により停止した。

次いでＴＣＡ中の細胞を均質化し、超音波処理して環式
ヌクレオチドを解放した。生ずる懸濁液を３０００＃お
よび４℃において２０分間遠心し、生ずる沈殿を０．Ｉ
ＮのＮ　ａ　ＯＨ中に溶解し、さらに３０分間超音波処
理し、その後タンパク質含量をカドマン（Ｃαｄｍｔｔ
ｎ）ら、アナリテイカル・バイオケミストリー（Ａｎａ
ｌ、　　Ｂｉｏｃｈｅｍ、　）、　９６　、２１−２３
　（１９７９）の方法によシ決定した。ＴＣＡを上澄み
分画から５ゴの水飽和ジエチルエーテルで４回抽出する
ことにより除去した。最終の抽出後、残る微量のエーテ
ルを上澄み分画から５０℃の水浴中の１０分間の加熱に
より除去した。抽出された上澄み分画を凍結窺燥した後
、検定キットＮＥＸ−１３３、二ニー・イングランド−
ニュークリアー（Ｎｅｗ　Ｅｎｇｌａｎｄ　Ｎｕｃｌｅ
ａｒ、　Ｂｏｓｔｏｎ。

ＭＡ０２１１３）を用いる環式ヌクレオチドの放射線免
疫検定のため、それを５０ミリモルの酢酸緩衝液中で再
構成した。

放射線標式環式ＧＮＰに対する慣用の対抗放射線免疫検
定（ｃｏｍｐｅｔｉｔｉｏｎ　ｒａｄｉｏｉｒｒｍｕｔ
、ｎｏａｓｓａｙ）を実施して、各濃度の試験ペプチド
によシ誘導される環式ＧＭｐＯ量を決定した。結果を第
１図および次表に示す。ここで代表的な本発明のペプチ
ドがサイモベンチン（Ｔｐ−５”色表示）オよび「ナン
センス」ペプチドＨ−ＡＳＰ−ＡＲＧ−ＴＹＳ−ＶＡＬ
−ＯＨと比較して検定されている。

これらの結果は本発明のペプチドはサイモベンチンより
もすぐれた効力をもっことを立証し、そしテマたサイモ
ペンチン様活性を有するペプチドについての検定の特異
性を示す。

この検定においてすぐれた結果を示す他の代表的化合物
は次の通りであった：Ｈ−ＡＲＧ−ＬＹＳ−ＡＳＰ−Ｖ
ＡＬ−ＴＲＰ−ＯＨｊＮ−α−アセチル−ＡＲＧ−ＰＲ
Ｏ−ＡＳＰ−ＶＡＬ−ＰＨＥ−ＮＨ，；Ｎ−α−アセチ
ル−ＡＲＧ−ＡＩＢ−ＡＳＰ−ＶＡＬ−ＰＨＥ−ＮＨ，
：Ｈ−ＡＲＧ−ＬＹＳ−ＡＳＰ−ＶＡＬ−ＴＲＰ−ＮＨ
２ｉおよびＮ−α−アセチル−ＡＲＧ−３，４−デヒド
ロ−ＰＲＯ−ＡＳＰ−ＶＡＬ−ＴＹＲ−ＮＨ，。

実施例ＸＷ 受容体の検定 この検定は、ＣＥＭ細胞から単離されたサイモポイエチ
ン細胞表面の受容体タンパク質へ結合するために、標識
サイモポイエチンと対抗する試験ペプチドの能力を測定
する。

材料 ＣＥＭ細胞系統はアメリカン・タイプ・カルチャー・コ
レクションかう得り。３−ニトロ−２−ピリジンスルホ
ニルクロライドおよび２−ピリジンチオール１−オキシ
ドは、レイ・マツエダ（Ｒｅｉ　Ｍａｔｓｕｅｄａ）博
士（す７’Ｅｉつ研究所、東京）によシ提供された。Ｒ
ＰＭＩ−１６４０、胎児ウシ血清およびＬ−グルタミン
はギプコ（Ｇｉｂｃｏ）から入手し、ゲンタマイシンは
シェアリング（Ｓｃｈｅｒ　ｉｎｇ）から入手し、そし
てレクチン結合アガロースビーズはベクター研究所（〆
ｅｃｔｏｒ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）から入手した
。セファデックス（Ｓｇｐｈαｄｇｚ）は７アーマシア
・ファイン・ケミカルズ（ｐｈａｒｍａｃｔａＦｉｎｅ
　Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ）から購入し、そしテヒトＩｇＧ
はマイルス研究所（Ｍｉｌｅｓ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉ
ｅｓ）から購入した。すべて他の化学物質は普通の商業
的源から購入し、そして試薬級であった。ウサギ抗サイ
モポイエチン抗体およびユビクイチン（ｗｂｔｑｗｉｔ
　ｉｎ）は次の既知に従って生産した。

次の略号を用いる：ｐＢＳ、　　リン酸塩緩衝塩化ナト
リウム水溶液；ＴＣＡ、ｐリクロロ酢酸；ＳＤＳ、　　
ドデシル硫酸ナトリウム：ＣｏｎＡ、コンカナビリンＡ
；ＴＰ、サイモポイエチン；ｐＥＣ；。

ポリエチレングリコールｒＢｓＡ、ウシ血清アルブミン
；１．Ｐ、腹腔内：ＰＭＳＦ１フェニルメチルスルホニ
ルフルオライド；ＦＴＳ、ツクツール、サイミーク・セ
リクーげａｃｔｅｔｂｒ　ｔｈｙｍｉｑｘｅｓｅｒｉｑ
ｕｅ）　；　ＣＲＦ、　コｈチコトロビン解放因子；Ａ
ＣＴＨ，７）’レノコルチコトロビックホルモン（ａｄ
ｒｅｎｏｃｏｒｔｉｃｏｔｒｏｐｉｃ　ｈｏｒｍｏｎｅ
）　；　Ｈｅｐｅｓ、Ｎ−２−ヒドロキシエチルピペラ
ジンＮ−２−エタン−スルホン酸。

膜糖タンパク質の調製 ＯＥＭヒトリンパ様細胞系統は、１０％の熱不活性化胎
児ウシ血清、２ミリモルのＬ−グルタミンおよび５０μ
ｇ／ゴのゲンタマイシンを補充したＲＰＭＩ−１６４０
中で３７℃において５チのＣＯ！を含有する湿った雰囲
気中で、３〜４Ｘ１０’！細胞／　ｙ、Ｊの最終密度に
培養した。この濃度において、細胞は生長曲線の早期の
静止相にアリ、そしチドリバンプルー排除により９０チ
より大きい生存率であることがわかった。

膜の糖タンパク質は、ヘト（Ｈｅｄｏ）ら、バイオケミ
ストリー（Ｂｉｏｃｈｅｍ、）ｔ　２０　、３３８５−
３３９３　（１９８１）の技術の変更により調製した。

細胞をＰＢＳで１回洗浄し、そして４０チの゛スクロー
ス、５０％の５０ミｋ　モにのＨｅｐｅｓ、１チのＥＤ
ＴＡ、Ｏ，Ｌ％のＯ−７エナントリンおよび１ミリモル
のｐＭｓＦ（エタノール中）、ｐＨ７，８、中に懸濁し
、そしてガラスのホモジナイザーで室温において均質化
した。次いで全体の懸濁液を、カップ・ホーン（ｃｕｐ
　ｈｏｒｎ）取付けを有する細胞粉砕ソニ’ｒ−１−（
ｃｅｌｌ　ｄｉｓｒｗｐｔｏｒｓｏｎｉｃａｔｏｒ）　
（Ｆ−２２５Ｒ）によシ３５℃において１０分間超音波
処理した。この懸濁液を６００ｘｇおよび４℃において
１０分間ソーパル（Ｓｏｒ−ταｔ）ＧＬＣ−３遠心機
によし遠心し、そして上澄み液をソーパル（Ｓｏｒτα
１）５Ｂ遠心機によシ４℃において３分間さらに遠心し
た。この沈殿物から得られる粗製膜分画を５０ミリモル
のＨｅｐｇｓ、１０ミリモルのＭＱＳＯ，および１ミリ
モルのＰＭＳＦ中にｓｘｑ／−の最終タンパク質濃度に
懸濁した。

この懸濁液を２５℃において２時間１％のトリトｙＸ−
１００（最終濃度）および０．１　％のｂｒｔｊ−’９
６（ボ！Ｊオキシエチレン１０、オレイルニー゛チル）
（最終濃度）の存在下に攪拌することにより、タンパク
質の可溶化を実施した。この懸濁液を２００．　ＯＯＯ
Ｘ　ｇおよび４℃において遠心し、そして上澄み液を一
７０℃において貯蔵した。可溶性タンパク質濃度はカド
マン（Ｃａｄｍａｎ）らの技術により標準としてＢＳＡ
および対照として緩衝液を用いて測定した。

小麦の胚のアグルチニンまたはリシヌス・コム＝、ｘ、
　（ｒｉｃｉｎｕｓ　ｃｏｒｖｍｂｎｉｓ）のアグリニ
チ７−１を受容体タンパク質の精製のために使用した。

すべてのレクチンのビーズを４℃において対応する単糖
阻害剤（３００ミリモル）とともに貯蔵した。

各精製のため、２ゴのレクチン−アガロースを直径ＩＣ
１ｒＬＯカラム中に詰め、そして室温において２５＋＋
＋ｔ（７）０．１５モ＃のＮａＣ１，５０ミリモルのＨ
ｏｐｅｓ、０．１％のトリトンｘ−ｉおよび０．０１俤
の、５　Ｄ　Ｓ　Ｘｐ　Ｈ７，８、で洗浄した。

このカラムを２００ｄの０．１５モｋ（ＤＮｃＬＣｌ。

５０ミリモルのＨｅｐｅｓおよび０．１チのトリトンＸ
−１００、ｐ　Ｈ７，ｓで洗浄し、次いでｌＯミリモル
のＭＱＳＯ４を含有するこの緩衝液で最後に洗浄した。

ｐＭｓＦ（１ミリモル）をすべての緩衝液系に加えた。

可溶化された膜のタンパク質（約１０η）を個々のカラ
ムを通して５回再循環させた。次いでこのカラムを１０
０−のα１５モルのＮａＣ１，５０ミリモにのＨｅｐｅ
ｓ、１０ミリモルのＭｇＳＯ４およＵｏ、Ｉｎの）　リ
）ンＸ−１００、ｐＨ７，８で洗浄した。単糖の阻害剤
を、３０ｄの洗浄緩衝液中の４００ミリモルの濃度で、
個々のカラムの溶離に使用した；小麦の胚のアグリチニ
ンについてＮ−アセチルグルコサミンおよびリシヌス嗜
コムニスのアグリチニンー■についてβ−メチルＤ−ガ
ラクトシドを使用した。単糖をカラムに適用し、これを
３０〜４０分間停止して平衡化させ、次いでさらに溶離
した。タンパク質の溶離液を５００−の５０ミリモルの
Ｈｏｐｅｓ、　　１０ミリモルのＭｇＳＯ４および００
ｌｔｓのトリ）ｙＸ−１００、ｐ　Ｈ７，８に対して４
℃に対して透析した。

放射線標識サイモポイエチンの調製 サイモポイエチンを０．２モルの炭酸塩−重炭酸塩緩衝
液、ｐＨ９，８中に溶解して反応性アミン基を得た。ジ
オキサン中の３−ニトロ−２−ビリジスルホニルクロラ
イド（１０：１モル）を上のサイモポイエチン溶液に加
え、２０℃において５時間攪拌した。水の添加後、不溶
性物質を遠心した。

保護されたペプチドをセファデックスＧ−２５のクロマ
トグラフィーにより精製し、次いでボスト−プロリン切
り離酵素（ｐｏｓｔ−ｐｒｏｌｉｎｅ　ｃｌｅａｖ−ｉ
ｎｇ　ｅｎｚｙｍｅ）で消化してＮＨ，末端ブロックさ
れたプロリンを除去した。メチル３，５シ（ｔｔｓ　Ｉ
］ヨウドヒドロキシベンズイミデート（４ｏｏｏｃｉ／
ミリモル）がメタノール中の５、５　ｍＣｉ　／ｍｌの
濃度で得られ、これを蒸発乾燥した。このヨウ素化イミ
ドエステル（１，４＋　１モル）を保護されたサイモポ
イエチン（５μｑ；０、９　＋　１モル）と、ウッド（
Ｆｏ　ｏ　ｄ　）ら、アナリテイカルーバイオケミスト
リー（Ａｎａｌ、　Ｂｉｏｃｈｅｍ、　Ｌ互９，３３９
−３４９（１９７５）の方法に従い、次の変更をもちい
、反応させた。この反応を５００μｌの０．１６モルの
ホウ酸塩緩衝液、ｐＨｔａ、１、中で４℃において２４
時間実施した。この反応を５００μｌの２モルのクエン
酸塩緩衝液、ｐＨ５，５の添加により４℃において停止
した。試料をバイオゲル（Ｂｉｏｇｅｌ）　Ｐ　−１０
カラムのクロマトグラフ宥−にかけ、４℃においてビロ
リン酸ナトリウム、ｐＨ７，５（１５滴／フラクション
）で溶離して遊離のヨウ素を除去した。

ヨウ素化されたペプチドを水中に溶解し、そして２−ピ
リジンチオール１−オキシド”（１０：１モル）で５時
間室温において処理して保護基を除去した。脱保護され
た標識ペプチドをバイオゲルＰ−１０カラムで精製した
。３つの放射能のピークが得られ、それらのうち最初の
ピークはウサギ抗すイモホ・イエチン抗体と免疫反応性
でちった。

次いで第１ピークをＤＥＡＥ−セファテックスＡ−２５
（ｓｏミリモルのトリス緩衝液、ｐＨ７，０で平衡化し
た）のｌＸ６０ｃｉのカラムへ適用した。

このヨウ素化混合物をこの緩衝液で、平衡濃度から１．
０モルまでの増大するイオン強度の直線勾配を用いて溶
離した。各分画の放射能をＬＫＢ１２８０ウルトラ（Ｕ
ｌｔγα）ガンマ分光計により決定した。

各精製のスキーム（ｓｃｈｅｍｅ）からのピーク放射能
をもつ分画を、過剰のサイモポイエチン抗体との結合に
ついて分析した。ＤＥＡＥセファデックスＡ−２５カラ
ムのピーク■からの分画（クラクション３５〜４５）は
、最高の特異的結合を示し、そして放射線受容体検定に
おいて引き続いて使用した。

ヨウ素化サイモポイエチンは、神経筋の検定におけるそ
の作用〔コルトスティｙ　（Ｇｏｌｄｓｔｅｉｎ）　。

ネイチャー（Ｎａｔｕｒｅ）　、　２４７　、１１−１
４（１９７４））およびＣＥＭ細胞による環式ＧＮＰの
合成へのその作用を評価することによシ決定きれるよう
に、生物学的活性を保持した。

結合の検定 １２ＩのＨｏｐｅｓ、　　１．２１７のＭＱＳＯ，およ
び１．２ｇのＢＳＡを１０００　ｍｌのガラス蒸留水に
加えることにより、検定緩衝液を調製した。ｐＨｒ、６
５をＩＮのＮａＯＨ７によシ得た。検定緩衝を使用して
原標準溶液をつくり、そして１週間使用した。１２×７
５襲のガラス製試験管中で１００麻の標準溶液、２５μ
ｌの受容体タンパク質（１５０〜２００μｇ／ゴ）、２
５μｌの”Ｉ−Ｔｐ　（ｓ　ｏ、ｏ　ｏ　。

ｃｐｍ）を２０ｆｉｌの１％のトリトンＸ−１００に加
えることによシ検定を実施し、そして体積を検定緩衝液
で２００μノにした。４℃において１８時間インキュベ
ーションしｆｔ　４ｋ、Ｐ　Ｂ　Ｓ　、　ｐＨ７，５６
中の２００μｌのヒトＩ　ｙ　Ｇ　（１，ｓダ／ゴ）（
ｍｌ：Ｌテ）オ！ヒ２００　ｆｉｌｌｃ）３５　％（Ｄ
ＰＥＧ−８０００を加え、混合し、そして氷上で３０分
間インキュベーションした。試験管を遠心し、そして残
留物をＰＢＳ、ｐＨ７，３中の１０チのｐＥＧで洗浄し
、そしてり、ＫＥ−ガンマカウンターで計数した。

１■／ｍｌの非放射性サイモポイエチンの存在下に沈殿
物における放射能を測定して非特異的結合を表わした。

ＴＣＡを上澄みに加え（最終濃度５チ）そして沈殿しう
る放射能を測定した。すべての時間において、これは９
５％を越え、トレーサーからの遊離の′Ｉの最小の解放
を示した。

対抗実験（Ｃｏｍ７ｙｅｔｉｔｉｏｎ　Ｅｘｐｅｒｉｍ
ｅｎｔ）上の結合手順に従い、２．３　Ｘ　１０”モル
の１２５Ｉ−ＴＰを４μｇの受容体及び試験ペプチドな
らびに同じ濃度のサイモボイエンチン３７〜４５ノナペ
プチド（Ｈ−ＶＡＬ−ＧＬＵ−ＬＥＵ−ＴＹＲ−ＬＥＵ
−ＧＬＮ−５ＥＲ−ＬＥＵ−ＴＮＲ−ＯＨ）と−緒にイ
ンキュベーションした。インキュベーションを１２時間
続け、その後遊離および結合した＋２１１−７’　ｐを
上のように決定した。ノナペプチドを用いて受容体Ｚン
パク質上の隣接受容体部位をブロックする。この隣接受
容体部位がブロックされない場合、多少の標識Ｔｐは、
サイモベンチン受容体部位が試験ペプチドによりブロッ
クされている場合でさえ、この部位を介して受容体タン
パク質へ結合することができる。このような結合は試験
ペプチドの活性に対して関係づけられず、そして（Ｔｐ
３ｒ−４ｓノナペプチドによジブロックされない場合）
不精確な結果を与えるであろう。

本発明の次の代表的化合物は、等しい濃度においてサイ
モポイエチンの自己置換により引き起こされるものの少
なくとも５０チの置換を引き起こしだ： Ｈ−ＡＲＧ−ＬＹＳ−ＡＳＰ−ＶＡＬ−ＰＨＥ−ＯＨ； Ｎ−α−アセチル−Ａ　ＲＧ　−ｐ　Ｒ，Ｏ−Ａ　Ｓ　
Ｐ　−ＶＡＬ−ＰＲＥ−ＯＨｒ Ｎ−ｃｔ−＊ルミｈ−ＡＲＧ−ｐＲＯ−ＡＳＰ−ＶＡＬ
−ＰＲＥ−ＯＨ； Ｎ−ＡＲＧ−ＰＲＯ−ＡＳＰ−ＶＡＬ−ＰＨＥ、−ＯＨ
； Ｈ−ＡＲＧ−ＬＹＳ−ＡＳＰ−ＶＡＬ−ＨＩＳ−ＯＨ−
。

Ｈ−ＡＲＣ，ＬＹＳ−ＡＳＰ−ＶＡＬ−ＴＲＰ−ＯＨ；
および Ｈ−ＡＲＧ−ＬＹＳ−、イ　５Ｐ−ＶＡＬ−ＴＲＰ−Ｎ
Ｈ，。

比較のため、他のペプチド、例えば、インシュリン、ダ
ルカゴン、生長ホルモン、ソマトスタチン、β−ニドル
フィン、ＦＴＳＸ　ＡＧＨＸ　ＣＲＦ。

およびウビクイチンは検出可能々置換を引き起こさなか
った。

【図面の簡単な説明】

第１図は実施例ＸＶの結果を示すグラフでちる。 ＩＩＧ

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、式 Ｒ−Ｖ−Ｗ−Ｘ−Ｙ−Ｚ−Ｒ＾１ 式中、 ＲはＨ、低級アルキル、ホルミルまたは低 級アルカノイルであり、 ＶはＡＲＧまたはＤ−ＡＲＧであり、 ＷはＬＹＳ、Ｄ−ＬＹＳ、ＰＲＯ、デヒド ロ−ＰＲＯ、またはＡＩＢであり、 ＸはＡＳＰ、Ｄ−ＡＳＰ、ＧＬＵ、または Ｄ−ＧＬＵであり、 ＹはＶＡＬ、ＬＹＳ、ＬＥＵ、ＩＬＥ、Ｇ ＬＵ、ＡＬＡ、Ｄ−ＶＡＬ、Ｄ−ＬＹＳ、 Ｄ−ＬＥＵ、　Ｄ−ＩＬＥ、Ｄ−ＧＬＵ、Ｄ−ＡＬＡ、
   またはＤ−ＧＬＮであり、 ＺはＰＨＥ、ＨＩＳ、ＴＲＰ、Ｄ−ＰＨＥ、Ｄ−ＨＩＳ
   、またはＤ−ＴＲＰであり、 Ｒ＾１はＯＨまたはＮＲ＾２Ｒ＾３であり、そしてＲ＾
   ２およびＲ＾３は各々独立にＨまたは低級アルキルから
   選択され、 ただしＷがＬＹＳであり、ＸがＤ−ＡＳＰ、ＧＬＵまた
   はＤ−ＧＬＵであり、かつＹが ＶＡＬであるとき、ＺはＰＨＥ以外である、を有するペ
   プチドまたはその製薬学的に許容されうる酸または塩基
   の付加塩。 ２、ＺはＰＨＥ、ＨＩＳ、Ｄ−ＰＨＥ、またはＤ−ＨＩ
   Ｓである特許請求の範囲第１項記載のペプチド。 ３、ＷはＰＲＯである特許請求の範囲第２項記載のペプ
   チド。 ４、Ｒは水素または低級アルキルであり、ＶはＡＲＧで
   あり、ＸはＡＳＰであり、そしてＺはＰＨＥまたはＨＩ
   Ｓである特許請求の範囲第１項記載のペプチド。 ５、ＷはＰＲＯである特許請求の範囲第４項記載のペプ
   チド。 ６、式α−アセチル−ＡＲＧ−ＰＲＯ−ＡＳＰ−ＶＡＬ
   −ＰＨＥ−ＯＨを有するペプチドまたはその製薬学的に
   許容されうる酸または塩基の付加塩である特許請求の範
   囲第１項記載のペプチド。 ７、式α−ホルミル−ＡＲＧ−ＰＲＯ−ＡＳＰ−ＶＡＬ
   −ＰＨＥ−ＯＨを有するペプチドまたはその製薬学的に
   許容されうる酸または塩基の付加塩である特許請求の範
   囲第１項記載のペプチド。 ８、式α−（低級アルカノイル）−ＡＲＧ−ＰＲＯ−Ａ
   ＳＰ−ＶＡＬ−ＰＨＥ−ＯＨを有するペプチドまたはそ
   の製薬学的に許容されうる酸または塩基の付加塩である
   特許請求の範囲第１項記載のペプチド。 ９、式Ｈ−ＡＲＧ−ＰＲＯ−ＡＳＰ−ＶＡＬ−ＰＨＥ−
   ＯＨを有するペプチドまたはその製薬学的に許容されう
   る酸または塩基の付加塩である特許請求の範囲第１項記
   載のペプチド。 １０、式Ｈ−ＡＲＧ−ＰＲＯ−ＡＳＰ−ＶＡＬ−ＨＩＳ
   −ＯＨを有するペプチドまたはその製薬学的に許容され
   うる 酸または塩基の付加塩である特許 請求の範囲第１項記載のペプチド。 １１、式Ｈ−ＡＲＧ−ＬＹＳ−ＡＳＰ−ＶＡＬ−ＨＩＳ
   −ＯＨを有するペプチドまたはその製薬学的に許容され
   うる酸または塩基の付加塩である特許請求の範囲第１項
   記載のペプチド。 １２、式Ｈ−ＡＲＧ−ＬＹＳ−ＡＳＰ−ＶＡＬ−ＰＨＥ
   −ＯＨを有するペプチドまたはその製薬学的に許容され
   うる酸または塩素の付加塩である特許請求の範囲第１項
   記載のペプチド。 １３、有効Ｔ細胞またはＢ細胞誘導量の特許請求の範囲
   第１項記載のペプチドと製薬学的に許容されうる担体と
   からなることを特徴とする製薬学的組成物。 １４、相対的または絶対的Ｔ細胞欠損から生ずる状態を
   有する患者に治療学的に有効量の特許請求の範囲第１項
   記載のペプチドを投与することを特徴とする前記患者に
   おける前記状態を処置する方法。 １５、相対的または絶対的Ｂ細胞欠損から生ずる状態を
   有する患者に治療学的に有効量の特許請求の範囲第１項
   記載のペプチドを投与することを特徴とする前記患者に
   おける前記状態を処置する方法。 １６、患者に有効誘導量の特許請求の範囲第１項記載の
   ペプチドを投与することを特徴とする胸腺誘導リンパ球
   の特性を発現するため患者のリンパ造成幹細胞を誘導す
   る方法。 １７、患者に有効誘導量の特許請求の範囲第１項記載の
   ペプチドを投与することを特徴とする成熟Ｂ細胞の特性
   を発現させるために患者の前駆体Ｂ細胞を誘導する方法
   。