JPS61194035A - γ−グロブリン製剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 本発明は、加熱処理してなるＴ−グロブリン製剤に関す
る。

更に詳しくは、Ｔ−グロブリンに、所望により安定化剤
を添加し、低温殺菌（６０℃、１０時間）した場合、重
合体の増加、抗補体価の上昇を認めない安定なＴ−グロ
ブリン製剤に関する。

〔従来の技術］ 血漿蛋白成分である免疫グロブリンの内、特にＩｇＧを
主成分とするＴ−グロブリン製剤は、これまで広く各種
感染症の予防並びに治療に役立てられてきたが、熱安定
性に欠けること、多種ライ　　ゝルス、細菌等の抗体を
広く含有している等の理由で濾過による除菌方法がとら
れている。しかし、Ｔ−グロブリンを血漿蛋白の分画か
ら得る場合には、肝炎ウィルスやエイズウィルス等の極
微小サイズの夾雑ウィルスはフィルタ一孔を通過するこ
とが可能であり、得たＴ−グロブリン中に混在すること
は１００％否定することはできない。

一方、血漿蛋白成分であるワクチンでは、安定剤の存在
下に６０℃ないし１２０℃に加熱する方法がすでに使用
されており、成果をあげている。

〔発明が解決しようとする間野点〕

本発明の目的は、夾雑を危惧されるウィルスノ不活化さ
れたＴ−グロブリン製剤を提供することである。

〔問題点を解決するための手段〕

本発明者らは、種々検討を重ね、Ｔ−グロブリン、好ま
しくはその水溶液に対して、夾雑ウィルスの不活化方法
として、６０℃、１０時間の加熱処理を施すことが非常
に優れた夾雑ウィルス不活化方法であり、さらに、単糖
類、二糖類および糖アルコールから選ばれる少なくとも
一種を添加すれば加熱処理に対するｒ−グロブリンの熱
安定性が著しく高まることを見出すと共に上記安定化剤
に加えてさらに中性アミノ酸、中性塩、界面活性剤、有
機カルボン酸塩から選ばれる少なくとも一種を共存させ
ることによってγ−グロブリンの熱安定性がより一層高
められることを見出し、本発明を完成した。

また、本発明の製剤では加熱処理することによりＴ−グ
ロブリンを単量体に解離した状態で得ることもできる。

即ち、本発明は、加熱処理されてなるＴ−グロブリン製
剤に関する。

本発明においては、Ｔ−グロブリン含有水溶液の状態で
加熱処理に付すことが好ましい、Ｔ−グロブリン含有水
溶液としては、Ｔ−グロブリンを含む未精製な水溶液か
ら精製された水溶液までいかなる段階のＴ−グロブリン
水溶液であってもよいが、有利には部分精製または精製
段階の水溶液が加熱処理の対象とされる。その蛋白質（
γ−グロブリン）の含量は０．１〜３０％（ｗ／ｖ）の
ものが好ましい、また、当該水溶液のｐ）Ｉは一般にｐ
ｌ（４，５〜１０であり、好ましくは適当な緩衝液によ
ってｐＨ６〜８に調整されることが好ましい。

Ｔ−グロブリン含有水溶液に加えられる安定化剤に関し
て、単ｔＪ！ｍとしてはグルコース、マンノース、ガラ
クトース、果糖等が、二糖類としてはシｇ糖、麦芽糖、
乳糖等が、糖アルコールとしてはマンニット、ソルビッ
ト、キシリフト等が好適なものとして例示されるが、こ
れらに限定されるものではない、当該安定化剤の添加量
は、γ−グロブリン水溶液１００＋１当たり１０−１０
０ｇである。

本発明で使用される捕助安定化剤に関して、中性塩とし
ては塩化ナトリウム、塩化カリウム、塩化マグネシウム
などのアルカリ金属またはアルカリ土類金属のハロゲン
酸塩などが例示され、添加量は、Ｔ−グロブリン水溶液
１００ｍ１当たり０．１〜１０ｇである。

中性アミノ酸（即ち、モノアミノモノカルボン酸）とし
ては、グリシン、アラニン、バリン、ロイシン、イソロ
イシンなどが例示され、添加量は、Ｔ−グロブリン水ン
容液１００ｍ１当たり１〜２０ｇである。

有機カルボン酸としては、炭化水素残基にカルボキシル
基が置換したものをいい、炭化水素残基は飽和されてい
ても不飽和であってもよく、また鎖状（直鎖状または分
枝状）、環状のいずれでもよい、当該炭化水素残基とし
てはアルキル基、アリール基（たとえばフェニル基）な
どが例示される。当該有機カルボン酸におけるカルボキ
シル基は複数個であってもよいが、ｌおよび２個が好ま
しい、また当該有機カルボン酸は、水酸基で置換されて
いてもよい、有機カルボン酸塩における塩としては、生
理的に許容されるものであれば特に制限はなく、好まし
いものとしては、アルカリ金属塩（ナトリウム塩、カリ
ウム塩など）、アルカリ土類金属塩（カルシウム塩など
）、特に好ましくは、ナトリウム塩、カリウム塩があげ
られる。

有機カルボン酸塩の具体例としては、プロパン酸、ブタ
ン酸、ペンタン酸、カプリン酸、°カプロン酸、マロン
酸、コハク酸、グルタル酸、アジピン酸、クエン酸、マ
ンデル酸などの生理的に許容される塩、特にアルカリ金
属塩（ナトリウム塩、カリウム塩）があげられる。

かかる有ｅ！ｌ酸の好ましい炭素数は、３〜１５程度で
ある。

有機カルボン酸塩の添加量は、Ｔ−グロブリン水溶液１
００１当たり１〜３０ｇである。

界面活性剤としては、アルキルフェニルポリオキシエチ
レン（例えばトリ１ン登録商標（Ｔｒｉｔｏｎ＠）及び
ノニデソト登録商標（Ｎｏｎ１ｄｅｔ’　）　）のよう
な非イオン性剤、胆汁酸塩（例えばナトリウムタウロコ
ラート）のようなアニオン性剤、又ベンズアルコニウム
クロライドのようなカチオン性剤、プロピレンオキシド
の高分子量共重合体のような界面活性を持つ多価アルコ
ール（プルロニック登録商標（Ｐｌｕｒｏｎｉｃ＠）　
Ｆ　６８　）などが例示され、その添加量は、Ｔ−グロ
ブリン水溶液１ｏｃａｌ当たり０．００２〜０．０５ｇ
程度が好ましい。

加熱処理は、夾雑ウィルスを不活化するに十分な温度お
よび時間行えばよく、たとえば５０℃〜１３０℃、好ま
しくは約６０℃にて２５分〜２０時間、好ましくは１０
時間行われる。

本発明の加熱効果を検討するため、Ｔ−グロブリン製剤
に含まれる可能性が危惧される各種ウィルスの感染性に
ついて、加熱効果を実験した。この実験は、Ｔ−グロブ
リン試料に痘蒼ウィルス、おたふくかぜウィルス、はし
かウィルス、水泡性口内炎ウィルス、チタングニアウィ
ルス、ポリオウィルス、コクサラキーウィルス、エコー
ウィルスを加え、６０℃で１０時間の加熱処理を行い、
経時的に残存するウィルス感染性を測定したが、１０時
間後には安定化剤の添加、不添加に係わらず、感染性を
完全に失っていた。この結果は用いたウィルス以外のウ
ィルスについても本発明の加熱処理が施されるならば感
染性は失活させうろことを示唆するものである。

本発明は上記加熱処理を行った後、外観、性状はもとよ
り、重合体の定量、抗補体価の測定、麻疹抗体価の測定
および急性毒性実験を行い、ｒ　−グロブリン製剤とし
て医療上極めて安全性の高いまた、有効性の高いものと
いえる。

かくして得られた製剤は、一般に溶液状であり、高度精
製Ｔ−グロブリンを出発材料とした場合はそのまま、粗
製品を用いた場合は公知の精製法に準じて処理を行った
後、必要ならば、透析、除菌濾過を行った後、包装単位
に従って５００〜１０．０００ｍｇのγ−グロブリンを
含むように分注される。貯蔵方法としては、高温を避け
れば特に限定されるものではないが、特に望ましくは、
３０℃以下に保存することであるが、また、これは所望
により凍結乾燥製剤としてもよい。

当該処理を経たＴ−グロブリンは、そのまま、または自
体公知の製剤化処理を行って、例えば注射用蒸留水で希
釈又は溶解して投与される。投与ヱは、通常、成人に対
しては１回にＴ−グロブリンとして、５００〜３０００
ｍｇｌ、小児に対しては、１回にＴ−グロブリンとして
、２５０〜１５００ｓｇｉｉが使用される。

試験方法：・ 外観性状としては、濁りが問題となることから０．０．
、、。ｎｍの吸光度を測定した。

重合体の定量は高速液体クロマトグラフィーで分析した
。

抗補体価の測定は、カパントとマイヤーの方法（エクス
ペリメンタル　イムノケミストリ（Ｅｘｐｅ−ｒｉｍｅ
ｎｔａｌ　Ｋｌｕｎｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ　Ｌ　２２５
．（１９６１））及び西岡、開田の方法〔免疫の生化学
、　１０３．昭４６（共立出版）〕の方法に準じた。す
なわち、１００単位の補体が試料を加えることによって
何単位に減少するかを測定し、その減少単位を抗補体価
として表わした。

麻疹抗体価はへマグルチネーシッン　イン上ビシ１ン　
テスト（Ｈｅｍａｇｇｌｕｔｉｎａｔｉｏｎ　Ｉｎｈｉ
ｂｉｔｉｏｎｔｅｓｔ　）法により測定し、国際単位（
ＩＬＩ／１５ｋｇ）で表わした。

実施例１ 本発明による安定化効果を確認するための実験を行った
。実験には重合体を約３０％含むγ−グロブリンを５％
濃度に調整して行った。各種安定化剤を添加後（添加量
は表中に明記）、６０℃、１０時間の加熱処理を行い、
溶液の濁り（０，０，、。・ｎｍ）、重合体の定量およ
び抗補体価を調べた。この結果、安定化剤を添加するこ
とによってＴ−グロブリンの加熱安定性は増大した（表
１）。

また、重合体特に２１を体の低下が確認された。

実施例２ 重合体を約２０％含むＴ−グロブリン溶液に各ｆＩ濃度
にグルコースを添加、Ｔ−グロブリン濃度を５％に調整
したものにっき６０を加熱処理を行い、経時的に０．０
，５ａｎｌＩ（ｉｉＩ、　Ｉ合体定量、抗補体価、麻疹
抗体価等の測定を行った。

グルコースを加えた系では、加えた量が増すに伴いγ−
グロブリンの安定性が高まった。１００ｇグルコース添
加の系では６０℃、１０時間加熱においても全く白濁せ
ず、麻疹抗体価の減少も見られなかった。しかもダイマ
ーもわずか１０９Ａに低下し、抗補体価も１９単位と低
下した（表２）。

実施例３ 安定化剤であるグルコースに補助安定化剤である中性ア
ミノ酸（グリシン）、中性塩（塩化ナトリウム）、有機
カルボン酸塩（クエン酸ナトリウム）、界面活性剤（ブ
ルロニック・Ｆ１ａ）等を加え、６０℃加熱処理におけ
るＴ−グロブリンの安定性につき調べた。実施例１と同
様重合体を約１５％含むＴ−グロブリン溶液で行った。

グルコース添加量をＴ−グロブリン水溶液１００ｍ１当
たり７５ｇとし、塩化ナトリウム５．８％添加、グリシ
ン５％添加、クエン酸ナトリウム１０％添加、プルロニ
ックＦ６８０．０１％添加および傷化ナトリウム５．８
％とプルロニ−／りＦ１ａ　　０．０１％両補助安定化
荊添加の各基について６０℃加熱処理を施した。結果は
表３に示す、補助安定化剤を添加することによって重合
体および抗補体価をさらに低下させることができた。

実施例４ 安全性試験として急性毒性実験を行った。

実施例３で６０℃、１０時間加熱処理を施したサンプル
Ａ、Ｂ、Ｃ，Ｄ、Ｅ、Ｆにつき無菌生理的食塩水で十分
透析した後、マウスの尾静脈から１匹当たり総量０．５
ｍｌおよび１．０＋ｏｌをそれぞれ１群５匹に投与し、
７日間観察したが、異常は認められなかった。

（以下余白） 手続補正書（１釦 昭和６０年？月　１日

Claims (5)

【特許請求の範囲】
1. （１）加熱処理されてなるγ−グロブリン製剤。
2. （２）安定化剤の存在下に加熱処理することを特徴とす
   る特許請求の範囲第（１）項記載の製剤。
3. （３）安定化剤が単糖類、二糖類、糖アルコールから選
   ばれた少なくとも一種である特許請求の範囲第（２）項
   記載の製剤。
4. （４）加熱処理が、６０℃、１０時間処理である特許請
   求の範囲第（１）項記載の製剤。
5. （５）上記安定化剤に加えて、中性アミノ酸、中性塩、
   炭素原子数３〜１０の有機カルボン酸塩、界面活性剤よ
   り選ばれた少なくとも一種の補助安定化剤を添加する特
   許請求の範囲第（１）項記載の製剤。