JPS6119454A - 蛋白質水解物の製造法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 １０発明の背景 技術分野 本発明は蛋白質の水解物の改良された製造法に関する。

乳漿蛋白質や卵白のような蛋白質の水解物は経管栄養剤
や一般栄養剤として利用される。

先行技術 蛋白質の水解物を経管栄養剤として利用する場合には、
アミノ酸を含有していることが必要であることはいうま
でもないが、個々のアミノ酸よシもそれらが２〜３個結
合したジーまたはトリペプチドの方が容易に吸収される
。そこで蛋白質の加水分解反応液中から所望の低分子量
のペナチドのみを採取する方法の開発が望まれる。

蛋白質水解物の精製法として、蛋白質水溶液を加水分解
し、加水分解生成物を加熱処理して含有蛋白質を変性さ
せ、そして最後にその蛋白質を限外ろ過により除去し、
その限外ろ過透過液は精製蛋白質加水分解物よシなる蛋
白質水解物の製造法が知られている（特開昭５５−１２
４４５８　）。この製造法は凝集や遠心分離による精製
にくらべて高分子量蛋白質の残留が少ないという利点を
有するが、反面、ろ過膜上にゲル層を形成して目づまシ
を起す欠点がある。また、採取される水解物の分子量は
、ろ過膜のカットオフ帯によシ決定されるため、カット
オフ帯を厳密に設定する必要がある。

さらに、種々の分子量の水解物が所望される場合にはそ
の都度具なったカットオフ帯を有するろ過膜に交換しな
ければならない。

■０発明の目的 本発明は、低分子量の蛋白質水解物を容易に採取するこ
とができる蛋白質水解物の製造法を提供することを目的
とする。

本発明はさらに分子量の異なった種々の水解物を簡単な
操作で得ることができる蛋白質水解物の製造法を提供す
ることを目的とする。さらに本発明は、蛋白質の加水分
鮮度を任意にコントロール出来、従って所望の分子量の
水解物を収率よく得ることができる蛋白質水解物の製造
法を提供することを目的とする。

■０発明の詳細な説明 本発明は、水媒体中、蛋白質と蛋白質分解酵素とを接触
させて蛋白質水解物を製造する方法において、上記水媒
体中の蛋白質に上記酵素を添加し加水分解反応液を透析
処理し、生成する水解物を逐次回収することを特徴とす
る蛋白質水解物の製造法からなる。

本発明はさらに、上記透析処理は、上記反応液を透析膜
の一方に接触させ他方に回収液を接触させ、さらに上記
反応液または回収液の少なくとも一方を循環させ反応液
中に生成する蛋白質水解物金回収液中に逐次移行させる
ものである上、記蛋白　　　９質水解物の製造法からな
る。

本発明はさらに、蛋白質は、乳漿蛋白質である上記蛋白
質水解物の製造法からなる。

本発明はさらに、酵素は中性プロテアーゼである上記蛋
白質水解物の製造法からなる。

本発明はさらに、中性プロテアーゼがアスペルギルス属
の真菌性プロテアーゼである上記蛋白質水解物の製造法
からなる。

本発明の方法において、水媒体中蛋白質と蛋白質分解酵
素とを接触させて蛋白質を加水分解する反応はそれ自体
公知の方法によって実施される。

即ち、蛋白質を水に溶解または分散させ、これに酵素を
加えて、使用酵素の至適−１温度で加水分解を行なわし
める。原料として使用される蛋白質としては、乳漿蛋白
質、卵白、大豆蛋白、獣肉または魚肉蛋白等があげられ
る。酵素としてはモルシン、オリエンターゼのような酸
性プロテアーゼ、パンクレアチン、ペグシン、ノぞノや
インまたはアスペルギルス属の真菌性プロテアーゼのよ
うな中性プロテアーゼが使用される。原料蛋白質として
卵白や乳漿蛋白質を使用する場合には特に経管栄賽剤に
適した水解物が得られ、その場合の酵素トシてはアスペ
ルギル属の真菌性プロテアーゼが好ましい。

本発明の方法は、上記の加水分゛解反化、の進行中に反
応液を透析処理して生成する水解物を逐次反応系外へ回
収することに特徴を有する。透析処理はそれ自体公知の
方法によって実施される。即ち、反応槽と透析ろ過装置
との間に反応液を循環させる閉鎖回路を形成し、透析膜
を介して反応液を回収液と接触させて低分子量の水解物
を透析する。

回収液としては水、好ましくは蒸留水が使用される。反
応液中に生成した水解物は、分子量の小さいものが優先
的に透析されるが、回収液の流速を遅くすると、分子量
の小さい水解物が優先的に透析される。逆に、回収液の
流速を速くすると、反応液中の中間加水分解物すなわち
、分子量の大きい水解物が透析される。従って透析膜の
カットオフ帯は厳密に設定しなくても、回収液の流速を
変化させることによって回収される水解物の分子量をコ
ントロールすることができる。

回収液を常法に従って、例えばスプレードライ法で濃縮
乾燥して粉末状の蛋白質水解物を得る。

反応槽に原料蛋白質と酵素を連続的に導入すれば反応を
連続的に実施することができる。

次に実施例を示して本発明の方法を具体的に説明する。

実施例 乳漿蛋白質（キタミンＡ：和光堂社製）　２５（ＨＦを
５！の蒸留水に溶解する（基質濃度５　ｗ／ｖ％）。

この溶液を恒温槽に入れ、溶液温度ｆ、４５℃とした。

これにアスペルギルス属の真菌性プロテアーゼ、アマノ
Ａ（大野製薬社製）２０グを添加し、ｐＨ６，５〜７．
２．４５℃で３時間反応させた。反応開始３０分後から
、反応液を５０　＋ｍ／ｍｉｎの流速で循環させ、孔径
分布的１５〜３５Ｘの中空糸型透析器ダイアライザーＴ
ＡＦ　１０型（テルモ社製）ｆ：用いて透析した。回収
液として蒸留水を用い、流速を５　ｍｇ／ｍｉｎとした
。回収液から１０分毎にサンプル５ゴを採取して窒素分
析に供し、回収率を求めた。

結果を表１に示す。

表１から明らかなように、透析開始後３時間までに窒素
として６２５チが回収された。

表１　水解物回収率 透析開始３０〜６０分後および１２０〜１５０　分径の
回収液を０．０６Ｎ酢酸で平衡化したセファデックスＧ
−１０カラムでゲルろ過を行なった際の２２０ｎｍにお
ける吸光パターンを図に示す。

平均分子量は反応中に最大値５２０から最小値２１０ま
で低下した。

次に各サンプルのアミノ酸遊離率およびペプチド平均分
子量を表２に示す。

表２　アミノ酸遊離率の経時変化 表２から明らかなように、アミノ酸遊離率は経時的に上
昇し、３時間後には約３（ｌに達した。

これは反応槽中の基質量が低下し、低分子ペプチドの分
解が行なわれやすくなったためである。

以上の結果から、透析開始後３０〜６０分に回収した画
分がジーおよびトリペプチドを最も多く含み経管栄養剤
に適していることがわかる。

■０発明の効果 本発明においては、蛋白質の加水分解反応物を透析処理
して水解物を回収するので、限外ろ適法とは異なシ、ろ
過膜の目づまりを起こすことがなく、また透析膜のカッ
トオフ帯を厳密に設定しなくても回収液の流速を変える
ことにより所望の分子量の水解物を得ることができる。

さらに本発明においては、加水分解反応を行ないつつ反
応液を透析処理するので回収液の流速を変化させて透析
速度を調節することにょシ加水分解度をコントロールし
、ひいては所望の分子量の水解物の収率をあげることが
できる。

さらに本発明において、原料蛋白質として乳漿蛋白質を
、酵素として中性プロテアーゼ、特にアスペルギルス属
の真菌性プロテアーゼを使用するときは経管栄養剤に適
した蛋白質水解物を得ることができる。

【図面の簡単な説明】

図は実施例において透析開始３０〜６０分後および１２
０〜１５０分後における各回収液のゲルろ過）母ターン
を示す。図において実線は３０〜６０分後回収液の、点
線は１２０〜１５０分後回収液のゲルろ過パターンをそ
れぞれ示す。

Claims (5)

【特許請求の範囲】
1. （１）水媒体中、蛋白質と蛋白質分解酵素とを接触させ
   て蛋白質水解物を製造する方法において、上記水媒体中
   の蛋白質に上記酵素を添加し加水分解反応中の反応液を
   透析処理し、生成する水解物を逐次回収することを特徴
   とする蛋白質水解物の製造法。
2. （２）上記透析処理は、上記反応液を透析膜の一方に接
   触させ他方に回収液を接触させ、さらに上記反応液また
   は回収液の少なくとも一方を循環させ、反応液中に生成
   する蛋白質水解物を回収液中に逐次移行させるものであ
   る特許請求の範囲第１項記載の蛋白質水解物の製造法。
3. （３）蛋白質は乳漿蛋白質である特許請求の範囲第１項
   記載の蛋白質水解物の製造法。
4. （４）酵素は中性プロテアーゼである特許請求の範囲第
   １項または第２項記載の蛋白質水解物の製造法。
5. （５）中性プロテアーゼはアスペルギルス属の真菌性プ
   ロテアーゼである特許請求の範囲第４項記載の蛋白質水
   解物の製造法。