JPS612078A - 凝集免疫検定における非特異的干渉を減少する方法 - Google Patents
凝集免疫検定における非特異的干渉を減少する方法Info
- Publication number
- JPS612078A JPS612078A JP60072460A JP7246085A JPS612078A JP S612078 A JPS612078 A JP S612078A JP 60072460 A JP60072460 A JP 60072460A JP 7246085 A JP7246085 A JP 7246085A JP S612078 A JPS612078 A JP S612078A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- acid
- additive
- agglutination
- serum
- mixture
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/543—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals
- G01N33/54393—Improving reaction conditions or stability, e.g. by coating or irradiation of surface, by reduction of non-specific binding, by promotion of specific binding
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S436/00—Chemistry: analytical and immunological testing
- Y10S436/815—Test for named compound or class of compounds
- Y10S436/817—Steroids or hormones
- Y10S436/818—Human chorionic gonadotropin
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S436/00—Chemistry: analytical and immunological testing
- Y10S436/825—Pretreatment for removal of interfering factors from sample
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Hematology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Pathology (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
発明の背景
本発明は、免疫化学的検定、例えば抗原および抗体を反
応成分として利用する検定法、とくにラテックス担体粒
子を含む凝集免疫検定に関する。
応成分として利用する検定法、とくにラテックス担体粒
子を含む凝集免疫検定に関する。
現在利用できる多くの不均質および均質の免疫学的検定
法のうちで、凝集免疫検定（αｇｇｌｒｂｔｔ−ｎａｔ
ｉｏｎ １ｔｎｆｒＬｒｂｎｏａｓｓａｙ ）は生物学
および医学において流体試験試料中の少量の問題の抗体
または抗原を検出するために広く使用され続けている。
法のうちで、凝集免疫検定（αｇｇｌｒｂｔｔ−ｎａｔ
ｉｏｎ １ｔｎｆｒＬｒｂｎｏａｓｓａｙ ）は生物学
および医学において流体試験試料中の少量の問題の抗体
または抗原を検出するために広く使用され続けている。
凝集反応は微視的担体粒子の生体外凝集を含む。
この凝集（ａｇｇｒｅｇａｔｉｏｎ ）は抗体と抗原と
の間の特異的反応によシ中介され、それらの一方は担体
粒子の表面上に固定化される。１つのフォーマットにお
いて、問題の配位子を含有する流体を増感された担体粒
子の懸濁液中に導入し、そして凝集の出現は配位子を指
示するものと認められる。
の間の特異的反応によシ中介され、それらの一方は担体
粒子の表面上に固定化される。１つのフォーマットにお
いて、問題の配位子を含有する流体を増感された担体粒
子の懸濁液中に導入し、そして凝集の出現は配位子を指
示するものと認められる。
凝集検定の１つの特別に価値ある使用は、°人間の体液
、例えば、血清の中の問題の配位子または分析物（αｎ
ａｌｙｔｅ）の検出においてである。さらに、凝集反応
はいくつかの異なる方式で次のように抗原または抗体（
問題の配位子）を検出するために使用できる： 抗原固定化担体粒子を特定の抗体の検出に問題の配位子
として使用する； 抗体固定化担体粒子を特定の抗原またはノ・ブテンの検
出に問題の配位子として使用する；抗原固定化粒子を用
いる凝集抑制方式において：固定量の抗体を問題の配位
子を含有する試験試料の稀釈物と混合する。次いで、反
応混合物を抗原固定化担体粒子と組み合わせる。試験試
料中の問題の配位子（抗原）がそうでなければ起こる担
体粒子の凝集を抑制する程度は、試料中に存在する配位
子の濃度を示す； 抗体固定化粒子を用いる凝集抑制方式において：固定量
の抗原を、問題の配位子−特別の抗体−抗原の一部を不
活性化する−を含有する試験試料の稀釈物と混合する。
、例えば、血清の中の問題の配位子または分析物（αｎ
ａｌｙｔｅ）の検出においてである。さらに、凝集反応
はいくつかの異なる方式で次のように抗原または抗体（
問題の配位子）を検出するために使用できる： 抗原固定化担体粒子を特定の抗体の検出に問題の配位子
として使用する； 抗体固定化担体粒子を特定の抗原またはノ・ブテンの検
出に問題の配位子として使用する；抗原固定化粒子を用
いる凝集抑制方式において：固定量の抗体を問題の配位
子を含有する試験試料の稀釈物と混合する。次いで、反
応混合物を抗原固定化担体粒子と組み合わせる。試験試
料中の問題の配位子（抗原）がそうでなければ起こる担
体粒子の凝集を抑制する程度は、試料中に存在する配位
子の濃度を示す； 抗体固定化粒子を用いる凝集抑制方式において：固定量
の抗原を、問題の配位子−特別の抗体−抗原の一部を不
活性化する−を含有する試験試料の稀釈物と混合する。
次いで、この混合物を抗体固定化担体粒子と組み合わせ
る。試験試料中に存在する配位子（抗体）が担体粒子の
凝集を抑制する程度は、そのでなければ起こったであろ
う凝集に比較して、存在する抗体の濃度を示す。
る。試験試料中に存在する配位子（抗体）が担体粒子の
凝集を抑制する程度は、そのでなければ起こったであろ
う凝集に比較して、存在する抗体の濃度を示す。
しかしながら、多くの体液、例えば、血清は、問題の特
定の配位子または分析物に刃口えて、他の特定されない
物質をしばしば含有し、これらの物質は凝集を起こしあ
るいは抑制し、こうして検定における干渉および誤差を
生じさせる。このような干渉は、干渉剤の性質およびそ
の干渉機構がよく理解されておらずかつ特定の原因とな
る物質または条件の組がこれらの効果に寄与できないこ
とにおいて、名目上非特異性と呼ばれる。その上、これ
らのタイプの干渉は、検定の結果を、ブランク試料とし
て問題の配位子または分析物を含有しない試料を用いる
同様な検定と比較することにより、補正することができ
ない。なぜ々ら、ブランクは試験される特定の血清を真
に代表することができず、そしてしばしば干渉は非常に
大きいので、特異的反応は起こらないからである０結局
、非特異的干渉を排除する手段の探求に多くの時間およ
び努力が消費されてきた。
定の配位子または分析物に刃口えて、他の特定されない
物質をしばしば含有し、これらの物質は凝集を起こしあ
るいは抑制し、こうして検定における干渉および誤差を
生じさせる。このような干渉は、干渉剤の性質およびそ
の干渉機構がよく理解されておらずかつ特定の原因とな
る物質または条件の組がこれらの効果に寄与できないこ
とにおいて、名目上非特異性と呼ばれる。その上、これ
らのタイプの干渉は、検定の結果を、ブランク試料とし
て問題の配位子または分析物を含有しない試料を用いる
同様な検定と比較することにより、補正することができ
ない。なぜ々ら、ブランクは試験される特定の血清を真
に代表することができず、そしてしばしば干渉は非常に
大きいので、特異的反応は起こらないからである０結局
、非特異的干渉を排除する手段の探求に多くの時間およ
び努力が消費されてきた。
凝集検定における非特異的干渉を減少する現在の概知の
方法は、次の方法を包含する：少なくとも２０倍までの
試験試料の大量の稀釈；米国特許４．０６０，５９７号
に教示されているような洗浄剤の推力Ｑ ； Ｍｅｒｚ
ｇｔ ａｌ＋ Ｊ、Ｃ１１ｎ、 Ｍｉｃｒｏ、、 １
）ｏｌ。
方法は、次の方法を包含する：少なくとも２０倍までの
試験試料の大量の稀釈；米国特許４．０６０，５９７号
に教示されているような洗浄剤の推力Ｑ ； Ｍｅｒｚ
ｇｔ ａｌ＋ Ｊ、Ｃ１１ｎ、 Ｍｉｃｒｏ、、 １
）ｏｌ。
５、ｐ ５９６．１９７７ 中に記載されているよ
うな５６℃における３０分間の熱処理を含む試験試料の
酷烈な予備処理； Ｃｏ１１ｅｔ −Ｃａｓｓａｒｔ
ｅｔａｌ、 Ｃ１１ｎ、 Ｃｈｅｍ、、 ｖｏｌ、 ２
７． ｏｇ １２０５．１９８１中に記載されているよ
うなプロチアーゼ反応を用いる酵素処理； Ｃａｍｂｉ
ａｓｏ ｅｔ ａｌ、 Ｊ、 Ｉｍｍｕｎｏ。
うな５６℃における３０分間の熱処理を含む試験試料の
酷烈な予備処理； Ｃｏ１１ｅｔ −Ｃａｓｓａｒｔ
ｅｔａｌ、 Ｃ１１ｎ、 Ｃｈｅｍ、、 ｖｏｌ、 ２
７． ｏｇ １２０５．１９８１中に記載されているよ
うなプロチアーゼ反応を用いる酵素処理； Ｃａｍｂｉ
ａｓｏ ｅｔ ａｌ、 Ｊ、 Ｉｍｍｕｎｏ。
Ｎ１ｅｔｈ、、 ｖｏｗ、 ２８． ｐ １３．１９
７９中に記載されているような還元剤／酸化剤を用いる
処理および米国特許４．２７０，９２３号中に記載され
ているようなイオン交換クロマトグラフィーな用いる成
分の分離。これらの手順は個々におよび全体として有効
であるが、時間を消費し、そして要求される取扱い法の
結果として免疫検定の潜在的感度および精度を著しく減
少するという望ましくない影響を伴うことがある。他の
アプローチは、例えば、米国特許第４，３６２，５３１
号中に記載されているように、特別の化学物質を添加し
て凝集反応における非特異的干渉を減少してきた。しか
しながら、記載される物質は変化する程度に互いに関し
て影響を及ばず広い範囲の非類似の無関係の化合物な包
含する。これらの理由で、このような免疫検定における
非特異的血清の干渉の影響を減少または排除する、凝集
反応混合物への添加剤の探求がなされてきている。
７９中に記載されているような還元剤／酸化剤を用いる
処理および米国特許４．２７０，９２３号中に記載され
ているようなイオン交換クロマトグラフィーな用いる成
分の分離。これらの手順は個々におよび全体として有効
であるが、時間を消費し、そして要求される取扱い法の
結果として免疫検定の潜在的感度および精度を著しく減
少するという望ましくない影響を伴うことがある。他の
アプローチは、例えば、米国特許第４，３６２，５３１
号中に記載されているように、特別の化学物質を添加し
て凝集反応における非特異的干渉を減少してきた。しか
しながら、記載される物質は変化する程度に互いに関し
て影響を及ばず広い範囲の非類似の無関係の化合物な包
含する。これらの理由で、このような免疫検定における
非特異的血清の干渉の影響を減少または排除する、凝集
反応混合物への添加剤の探求がなされてきている。
発明の要約
抽出されない体液中の問題の配位子の存在を決定するた
め、改良されたラテックス免疫検定法が提供される。改
良は、ラテックス免疫検定の非特異的干渉を減少するた
めに、反応混合物中に少なくとも１種のハロゲン置換カ
ルボン酸またはその酸の塩から構成される化学添加剤を
包める工程からなる。添加剤は個々の血清試料、プール
した血清試料、および血漿、唾液、髄液、尿などを包含
する他の体液における非特異的干渉を減少する。
め、改良されたラテックス免疫検定法が提供される。改
良は、ラテックス免疫検定の非特異的干渉を減少するた
めに、反応混合物中に少なくとも１種のハロゲン置換カ
ルボン酸またはその酸の塩から構成される化学添加剤を
包める工程からなる。添加剤は個々の血清試料、プール
した血清試料、および血漿、唾液、髄液、尿などを包含
する他の体液における非特異的干渉を減少する。
このような推力０剤の添加は、内生代謝物の量的レベル
の決定を可能とし、かつ試料中の問題の配位子、例えば
、薬物、治療剤および特定の結合タンパク質の監視を可
能とする。
の決定を可能とし、かつ試料中の問題の配位子、例えば
、薬物、治療剤および特定の結合タンパク質の監視を可
能とする。
好ましい実施態様の詳細な説明
本発明は、化学的添加剤を免疫化学的反応混合物に加え
て、非特異的血清の干・渉の影響を実質的に減少しある
いは排除する免疫検定法である。化学的添加剤は少なく
とも１種のノ・ロゲン置換カルボン酸またはその塩から
なり、そして好ましくはトリハロ酢酸の金属塩、例えば
、トリクロロ酢酸ナトリウムである。本発明において有
用な添〃口剤は、式■ 式中、Ｒ１はＣＪ、ＢＴまたは工であり、Ｒ２はｉ（、
Ｃ／’、ｆ３ｒまたは工であり、そしてＲ３はＨ，ｃＨ
３−１ＣＨ３ＣＨ２′″、ＣＩ！、Ｂｙまたは■である
、 により定義される酸または式Ｉの酸の水溶性塩、例えば
、ナトリウム塩である。式■の化合物、例えば、トリク
ロロ酢酸ナトリウム（以後ＮａＴＣＡ）を凝集反応混合
物中に添加すると、血清または非血清の体液の試験試料
における非特異的抑制剤の影響および他の干渉は実質的
に減少されあるいは完全に排除される。好ましい試薬は
クロロ酢酸、ジクロロ酢酸、トリクロロ酢酸、ブロモ酢
酸、ジブロモ酢酸、トリブロモ酢酸、ヨード酢酸または
それらの混合物であり、ＮｊＩＬＴｃＡは最も好ましい
添加剤である。とくに血清試料へのＮｃＬＴＣＡの作用
は、血清濃度が約５０％までであるとき、添加剤の濃度
を０．０１モル〜２．０モルの範囲内で増力口させると
、非特異的干渉の影響が絶えず減少するというようなも
のである。この作用は、血清濃度が非特異的干渉の程度
を比例的に増加する場合であってさえ、不変でありかつ
再現性がある。こうして、比較的大量のＮａＴＣＡを比
例的に大きい体積の血清と組み合わせることは、試料中
の問題の配位子の存在を決定しかつこの検定手順におい
て通常直面する非特異的阻害剤および干渉を排除するた
めに、実際に有用でありかつ経済的である。
て、非特異的血清の干・渉の影響を実質的に減少しある
いは排除する免疫検定法である。化学的添加剤は少なく
とも１種のノ・ロゲン置換カルボン酸またはその塩から
なり、そして好ましくはトリハロ酢酸の金属塩、例えば
、トリクロロ酢酸ナトリウムである。本発明において有
用な添〃口剤は、式■ 式中、Ｒ１はＣＪ、ＢＴまたは工であり、Ｒ２はｉ（、
Ｃ／’、ｆ３ｒまたは工であり、そしてＲ３はＨ，ｃＨ
３−１ＣＨ３ＣＨ２′″、ＣＩ！、Ｂｙまたは■である
、 により定義される酸または式Ｉの酸の水溶性塩、例えば
、ナトリウム塩である。式■の化合物、例えば、トリク
ロロ酢酸ナトリウム（以後ＮａＴＣＡ）を凝集反応混合
物中に添加すると、血清または非血清の体液の試験試料
における非特異的抑制剤の影響および他の干渉は実質的
に減少されあるいは完全に排除される。好ましい試薬は
クロロ酢酸、ジクロロ酢酸、トリクロロ酢酸、ブロモ酢
酸、ジブロモ酢酸、トリブロモ酢酸、ヨード酢酸または
それらの混合物であり、ＮｊＩＬＴｃＡは最も好ましい
添加剤である。とくに血清試料へのＮｃＬＴＣＡの作用
は、血清濃度が約５０％までであるとき、添加剤の濃度
を０．０１モル〜２．０モルの範囲内で増力口させると
、非特異的干渉の影響が絶えず減少するというようなも
のである。この作用は、血清濃度が非特異的干渉の程度
を比例的に増加する場合であってさえ、不変でありかつ
再現性がある。こうして、比較的大量のＮａＴＣＡを比
例的に大きい体積の血清と組み合わせることは、試料中
の問題の配位子の存在を決定しかつこの検定手順におい
て通常直面する非特異的阻害剤および干渉を排除するた
めに、実際に有用でありかつ経済的である。
通常の実施において、０．５モルのＮ ａ Ｔ ＣＡお
よび５．０％（Ｖ／Ｖ）の血清を含有する混合物は最適
であることがわかったが、添加剤と血清とのいかなる組
み合わせも上に示した範囲において有用であシかつ有効
である。
よび５．０％（Ｖ／Ｖ）の血清を含有する混合物は最適
であることがわかったが、添加剤と血清とのいかなる組
み合わせも上に示した範囲において有用であシかつ有効
である。
本発明において、添加剤をラテックス凝集免疫検定（以
後ＬＩＡ ）において使用し、ここで直径０．０５〜１
．０μｍのラテックス粒子の懸濁液は、血清試料中の決
定すべき配位子のための特異的結合相手（抗原または抗
体）と共有結合するかあるいは緊密に吸収する。化学的
添加剤、好ましくはＮｃＬＴＣＡを反応混合物中に含有
させ、化学的添加剤の添加は測定時における凝集におけ
る特異性のレベルを増大させるであろう。次いで、凝集
度の増大を、視的に決定するか、あるいは通常の手順、
例えば、濁度測定、比濁分析、普通の光散乱技術、準弾
性散乱法（ｑｕａｓｉｅｌａｓｔｉｃ ｓｃａｔｔｅｒ
ｉｎｇｍｅｔｈｏｄ）または角異方性散乱決定法（ａｎ
ｇｕｌａｒａｎｉｓｏｔｒｏｐｉｃ ｓｃａｔｔｅｒｉ
ｎｇ ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ）により測定でき
る。
後ＬＩＡ ）において使用し、ここで直径０．０５〜１
．０μｍのラテックス粒子の懸濁液は、血清試料中の決
定すべき配位子のための特異的結合相手（抗原または抗
体）と共有結合するかあるいは緊密に吸収する。化学的
添加剤、好ましくはＮｃＬＴＣＡを反応混合物中に含有
させ、化学的添加剤の添加は測定時における凝集におけ
る特異性のレベルを増大させるであろう。次いで、凝集
度の増大を、視的に決定するか、あるいは通常の手順、
例えば、濁度測定、比濁分析、普通の光散乱技術、準弾
性散乱法（ｑｕａｓｉｅｌａｓｔｉｃ ｓｃａｔｔｅｒ
ｉｎｇｍｅｔｈｏｄ）または角異方性散乱決定法（ａｎ
ｇｕｌａｒａｎｉｓｏｔｒｏｐｉｃ ｓｃａｔｔｅｒｉ
ｎｇ ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ）により測定でき
る。
先行技術において知られている添力ロ剤と異シ、凝集混
合物への添加剤として使用するＮｃＬＴＣＡは非特異的
血清の干渉の作用のすべてを実質的に減少させるかある
いは排除する。免疫検定法における化学的添加剤にこの
ようなハロゲン置換カルボン酸の塩類を使用すると、血
清または血漿の試料中の問題の配位子、例えば、薬物、
抗生物質および他の治療剤を監視することができる。
合物への添加剤として使用するＮｃＬＴＣＡは非特異的
血清の干渉の作用のすべてを実質的に減少させるかある
いは排除する。免疫検定法における化学的添加剤にこの
ようなハロゲン置換カルボン酸の塩類を使用すると、血
清または血漿の試料中の問題の配位子、例えば、薬物、
抗生物質および他の治療剤を監視することができる。
しかしながら、トリフルオロ酢酸の金属塩は非特異的干
渉を減少するための添加剤として適当ではないことがと
くに認められる。本発明において使用する化学的添加剤
は、事実、２種以上のハロゲン置換カルボン酸の金属塩
であることができる。
渉を減少するための添加剤として適当ではないことがと
くに認められる。本発明において使用する化学的添加剤
は、事実、２種以上のハロゲン置換カルボン酸の金属塩
であることができる。
例えば、トリクロロ酢酸のナトリウム塩（またはカリウ
ム塩）とトリブロモ酢酸のナトリウム塩（またはカリウ
ム塩）との混合物は添ヵロ剤として有効である。添加剤
のｐＨは、最高の効果を得るためには、８．０〜１０．
０の間に維持することが好ましい。この範囲は個々の試
験系において最適の免疫化学的比率を収容するように調
節することができる。
ム塩）とトリブロモ酢酸のナトリウム塩（またはカリウ
ム塩）との混合物は添ヵロ剤として有効である。添加剤
のｐＨは、最高の効果を得るためには、８．０〜１０．
０の間に維持することが好ましい。この範囲は個々の試
験系において最適の免疫化学的比率を収容するように調
節することができる。
添加剤の最適濃度は、α）ラテックス粒子の組成、ｂ）
抗体の性質および添加剤に対するその感受性、ｃ）抗原
またはハプテンの性質および添加剤に対するそれらの感
受性、およびｄ）温度−それらのすべては系を定める−
を包含する多数の因子に依存する。添加剤の最適濃度は
各基について実験的に決定しなくてはならない。血清に
よる干渉とまったく関係のない理由で、添加剤と完全に
不適合性でありうる系の存在が考えられる。
抗体の性質および添加剤に対するその感受性、ｃ）抗原
またはハプテンの性質および添加剤に対するそれらの感
受性、およびｄ）温度−それらのすべては系を定める−
を包含する多数の因子に依存する。添加剤の最適濃度は
各基について実験的に決定しなくてはならない。血清に
よる干渉とまったく関係のない理由で、添加剤と完全に
不適合性でありうる系の存在が考えられる。
短鎖のカルボン酸の一置換および／または二置換・・ロ
ゲン化物の塩は、血清試料における非特異的干渉を減少
する添加剤としてまた有効であることが示された。
ゲン化物の塩は、血清試料における非特異的干渉を減少
する添加剤としてまた有効であることが示された。
次の実施例により、本発明を説明する。
実施例Ｉ
０．０２モルのナトリウムバルビタール、０．１５モル
のＮａＣｅ、 ０．１チのウシ血清アルブミン、ｈＣＧ
で被覆されたラテックス粒子（Ｐｒｅｇｎｏｓ−、８（
榎 ラテックス、Ｒｏｃｈｅ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ
ｓ。
のＮａＣｅ、 ０．１チのウシ血清アルブミン、ｈＣＧ
で被覆されたラテックス粒子（Ｐｒｅｇｎｏｓ−、８（
榎 ラテックス、Ｒｏｃｈｅ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ
ｓ。
Ｎｕｔｌｅｙ、 ＮＪ ） の１／９２稀釈物、およ
び系統的に稀釈された抗ヒト絨毛性ゴナドトロピン（抗
ＡＣＧ ）抗血清ＣＭｉｌｅｓ−Ｙｅｄａ、 ＋ ６７
−０７３ ）を含有する凝集混合物（ｏ、４ｗ 、 ｐ
Ｈｓ、ｏ ）を調製した。
び系統的に稀釈された抗ヒト絨毛性ゴナドトロピン（抗
ＡＣＧ ）抗血清ＣＭｉｌｅｓ−Ｙｅｄａ、 ＋ ６７
−０７３ ）を含有する凝集混合物（ｏ、４ｗ 、 ｐ
Ｈｓ、ｏ ）を調製した。
凝混合物を２５℃に維持し、そして濁度を測定を分光光
度計で実施した。６６０ ｎｒｎにおける吸収の読みを
、すべての成力を一緒にした直後と、３０分のイ〉・キ
ュペーション後に再び行った。各混合物についてのその
期間中の吸収の変化を、ゼロ時間の読みを３０分の読み
から減することにより計算した。さらに、抗体が存在し
ない適当なブランクを並行して実施し、そして吸収の名
目上の変化を減じ、各混合物について△Ａ値を得た（表
Ｉ）。
度計で実施した。６６０ ｎｒｎにおける吸収の読みを
、すべての成力を一緒にした直後と、３０分のイ〉・キ
ュペーション後に再び行った。各混合物についてのその
期間中の吸収の変化を、ゼロ時間の読みを３０分の読み
から減することにより計算した。さらに、抗体が存在し
ない適当なブランクを並行して実施し、そして吸収の名
目上の変化を減じ、各混合物について△Ａ値を得た（表
Ｉ）。
表１から明らかなように、血清の存在かつＮａＴＣＡの
不存在において、凝集は有意な程度に起こらず、また存
在する抗ｈＣＧ抗血清の量に明瞭に関係づけることがで
きる程度に起こらない。
不存在において、凝集は有意な程度に起こらず、また存
在する抗ｈＣＧ抗血清の量に明瞭に関係づけることがで
きる程度に起こらない。
しかしながら、ＮｃＬＴＣＡが血清含有混合物中に含め
られると、凝集は事実起こり、そして凝集の程度は存在
する抗体の量に関係づけられる。
られると、凝集は事実起こり、そして凝集の程度は存在
する抗体の量に関係づけられる。
実施例Ｉ
対する凝集の感受性
抗ｈＣＧ抗血清の１／７，０００ 稀釈物（ＮｃＬＴ
ＣＡを含有する混合物において１／３，５００）、０．
０２モルのナトリウムバルビタール、０．１５モルのＮ
ＩＺＣＩ！、０．１％のウシ血清アルブミンおよび変化
量のｈＣＧを含有するインキュベーション混合物（３５
０μｌ、 ｐＨ８，０）を調製した。さらに、０．５３
モルのＴＣＡ、５．７％の正常の男性の血清（ｈｃＧ不
含）または両者を含む他の混合物をまた調製した。１５
分間のインキュベーション後、５０μＥの希んＣＧ−ラ
テックス（Ｒｏｃｈｇ ）懸濁液を各混合物に加えた。
ＣＡを含有する混合物において１／３，５００）、０．
０２モルのナトリウムバルビタール、０．１５モルのＮ
ＩＺＣＩ！、０．１％のウシ血清アルブミンおよび変化
量のｈＣＧを含有するインキュベーション混合物（３５
０μｌ、 ｐＨ８，０）を調製した。さらに、０．５３
モルのＴＣＡ、５．７％の正常の男性の血清（ｈｃＧ不
含）または両者を含む他の混合物をまた調製した。１５
分間のインキュベーション後、５０μＥの希んＣＧ−ラ
テックス（Ｒｏｃｈｇ ）懸濁液を各混合物に加えた。
＜ｈｃａ−ラテックスの最終希釈度は１／１００であっ
た。）濁度を最初および３０分の期間後に測定し、そし
て△Ａを実施例Ｉに記載するように計算した。（表１参
照）０すべての工程は２５℃において実施した。
た。）濁度を最初および３０分の期間後に測定し、そし
て△Ａを実施例Ｉに記載するように計算した。（表１参
照）０すべての工程は２５℃において実施した。
表 １
（０，２８２＝＝１００チの応答） （０，２７８３＝
１００−の応答）表Ｉからかなうように、血清の存在か
つＮａＴＣＡの不存在において、凝集は有意な程度に起
こらず、または存在するｈＣＧの量に明瞭に関係づける
ことができる程度に起こらない。しかしながら、ＮａＴ
ＣＡが血清含有混合物中に含められると、凝集は事実起
こり、そして凝集の程度は存在するｈＣＧの量に関係づ
けられる。
１００−の応答）表Ｉからかなうように、血清の存在か
つＮａＴＣＡの不存在において、凝集は有意な程度に起
こらず、または存在するｈＣＧの量に明瞭に関係づける
ことができる程度に起こらない。しかしながら、ＮａＴ
ＣＡが血清含有混合物中に含められると、凝集は事実起
こり、そして凝集の程度は存在するｈＣＧの量に関係づ
けられる。
（外５名）
手続補正書（方式）
昭和 ６Ｑ年 ７月ＩＱ日
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １、感作されたラテックス粒子の凝集の程度が流体試料
中の分析物の測度である、感作されたラテックス粒子お
よび必要に応じて結合相手を含む試薬と組み合わされた
流体試料中の分析物の凝集免疫検定法において、前記粒
子の凝集の非特異的干渉を減少する添加剤を反応混合物
に添加する工程からなり、前記添加剤は少なくとも１種
のハロゲン置換カルボン酸またはその水溶性塩からなり
、ここで前記酸は式 ▲数式、化学式、表等があります▼ 式中、Ｒ＿１はＣｌ、ＢｒまたはＩであり、Ｒ＿２はＨ
、Ｃｌ、ＢｒまたはＩであり、そしてＲ＿３はＨ、ＣＨ
＿３−、ＣＨ＿３ＣＨ＿２−、Ｃｌ、ＢｒまたはＩであ
る、 を有することを特徴とする凝集免疫検定法。 ２、前記添加剤はクロロ酢酸、ジクロロ酢酸、トリクロ
ロ酢酸、ブロモ酢酸、ジブロモ酢酸、トリブロモ酢酸、
ヨード酢酸、それらの水溶性塩およびそれらの混合物か
ら成る群より選択される特許請求の範囲第１項記載の方
法。 ３、前記添加剤は０．０１〜２．０モルの範囲の濃度で
存在する特許請求の範囲第１項または第２項記載の方法
。 ４、前記添加剤はその水溶性塩として存在する特許請求
の範囲第１項または第２項記載の方法。 ５、前記添加剤の組成は前記添加剤の少なくとも２種の
混合物である特許請求の範囲第１項または第２項記載の
方法。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US06/597,129 US4536478A (en) | 1984-04-05 | 1984-04-05 | Method for reducing non-specific interferences in agglutination immunoassays |
| US597129 | 1984-04-05 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS612078A true JPS612078A (ja) | 1986-01-08 |
Family
ID=24390217
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP60072460A Pending JPS612078A (ja) | 1984-04-05 | 1985-04-05 | 凝集免疫検定における非特異的干渉を減少する方法 |
Country Status (7)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4536478A (ja) |
| EP (1) | EP0163393A3 (ja) |
| JP (1) | JPS612078A (ja) |
| CA (1) | CA1247523A (ja) |
| DK (1) | DK149685A (ja) |
| FI (1) | FI851326L (ja) |
| NO (1) | NO851392L (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2011257243A (ja) * | 2010-06-08 | 2011-12-22 | Shino-Test Corp | 試料中のｃ反応性蛋白質の測定試薬、測定方法及び測定範囲の拡大方法 |
Families Citing this family (20)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4695537A (en) * | 1982-05-21 | 1987-09-22 | The University Of Tennessee Research Corp. | Particles sensitized with detergent-treated antigen for agglutination immunoassay |
| US4703001A (en) * | 1985-10-23 | 1987-10-27 | Synbiotics, Corporation | Immunoassay for the detection of serum analytes using pH dependent chastropic acids |
| US4847209A (en) * | 1987-11-09 | 1989-07-11 | Miles Inc. | Latex agglutination immunoassay in the presence of hemoglobin |
| DE3840605A1 (de) * | 1988-12-02 | 1990-06-07 | Behringwerke Ag | Mittel fuer immunchemische tests enthaltend carboxylgruppenhaltige polymere |
| FR2645967B1 (fr) * | 1989-04-12 | 1994-04-01 | Diagnostica Stago | Procede d'adsorption d'un materiel immunologique, utilisation dans le domaine des reactions antigene/anticorps |
| US5100805A (en) * | 1989-01-26 | 1992-03-31 | Seradyn, Inc. | Quantitative immunoassay system and method for agglutination assays |
| WO1992016846A1 (fr) * | 1991-03-18 | 1992-10-01 | Shiseido Co., Ltd. | Procede et materiel de dosage de collagene |
| US5484706A (en) * | 1993-05-19 | 1996-01-16 | Pasteur Sanofi Diagnostics | Immunoassay for analytes in samples using alkylating agents |
| CA2127605A1 (en) * | 1993-12-23 | 1995-06-24 | Peter J. Degen | Affinity separation method |
| CA2316130A1 (en) * | 1999-08-19 | 2001-02-19 | Masanori Fukui | Method for detection or determination of hcv core antigens and reagent for detection or determination for use therein |
| US7045098B2 (en) | 2001-02-02 | 2006-05-16 | James Matthew Stephens | Apparatus and method for removing interfering substances from a urine sample using a chemical oxidant |
| US6890765B2 (en) * | 2001-11-02 | 2005-05-10 | Roche Diagnostics Operations, Inc. | Particles for immunoassays and methods for treating the same |
| US6927071B2 (en) | 2001-12-07 | 2005-08-09 | Beckman Coulter, Inc. | Method for reducing non-specific aggregation of latex microparticles in the presence of serum or plasma |
| US6777246B2 (en) | 2001-12-18 | 2004-08-17 | Roche Diagnostics Gmbh | Tertiary amine compounds for use in immunoassays |
| US6984497B2 (en) * | 2002-04-05 | 2006-01-10 | Bio-Rad Laboratories, Inc. | Reducing non-specific binding in immunoassays performed on polymeric solid phases |
| US20030022390A1 (en) * | 2002-05-30 | 2003-01-30 | Stephens James Matthew | Method and kit for making interfering substances in urine undetectable |
| WO2007111847A2 (en) * | 2006-03-24 | 2007-10-04 | Aokin Ag | Use of additives for the reduction of non-specific binding in assays |
| US7504200B2 (en) | 2007-02-02 | 2009-03-17 | Konica Minolta Medical & Graphic, Inc. | Photothermographic material |
| WO2011125912A1 (ja) * | 2010-03-31 | 2011-10-13 | 積水メディカル株式会社 | 測定系外成分による干渉を低減させる方法 |
| ES2740851T3 (es) | 2013-12-13 | 2020-02-06 | Siemens Healthcare Diagnostics Inc | Agente de tratamiento previo en ensayos sin aglutinación |
Family Cites Families (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US3689633A (en) * | 1969-01-13 | 1972-09-05 | Teikoku Hormone Mfg Co Ltd | Preparation of test sample for immunological assay of pregnancy of mares |
| US3857931A (en) * | 1971-02-01 | 1974-12-31 | Hoffmann La Roche | Latex polymer reagents for diagnostic tests |
| JPS5933228B2 (ja) * | 1978-12-25 | 1984-08-14 | 武田薬品工業株式会社 | 妊娠診断反応用被検液の前処理方法ならびに前処理剤 |
| CA1146852A (en) * | 1979-01-31 | 1983-05-24 | Koichi Kondo | Reagent for latex agglutination |
| AU543007B2 (en) * | 1980-04-15 | 1985-03-28 | Technicon Instruments Corportion | Agglutination immunoassay |
-
1984
- 1984-04-05 US US06/597,129 patent/US4536478A/en not_active Expired - Fee Related
-
1985
- 1985-04-02 FI FI851326A patent/FI851326L/fi not_active Application Discontinuation
- 1985-04-02 DK DK149685A patent/DK149685A/da not_active IP Right Cessation
- 1985-04-03 NO NO851392A patent/NO851392L/no unknown
- 1985-04-04 CA CA000478389A patent/CA1247523A/en not_active Expired
- 1985-04-04 EP EP85302453A patent/EP0163393A3/en not_active Withdrawn
- 1985-04-05 JP JP60072460A patent/JPS612078A/ja active Pending
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2011257243A (ja) * | 2010-06-08 | 2011-12-22 | Shino-Test Corp | 試料中のｃ反応性蛋白質の測定試薬、測定方法及び測定範囲の拡大方法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| NO851392L (no) | 1985-10-07 |
| DK149685A (da) | 1985-10-06 |
| EP0163393A3 (en) | 1987-05-27 |
| FI851326A7 (fi) | 1985-10-06 |
| DK149685D0 (da) | 1985-04-02 |
| CA1247523A (en) | 1988-12-28 |
| US4536478A (en) | 1985-08-20 |
| EP0163393A2 (en) | 1985-12-04 |
| FI851326L (fi) | 1985-10-06 |
| FI851326A0 (fi) | 1985-04-02 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JPS612078A (ja) | 凝集免疫検定における非特異的干渉を減少する方法 | |
| JPH0240983B2 (ja) | ||
| GB1575425A (en) | Specific binding assay with an enzyme modulator as a labelling substance | |
| JPH03502244A (ja) | 試験方法およびそのための試薬キツト | |
| JPS6314783B2 (ja) | ||
| JPH0264459A (ja) | 結合可能の物質を測定する方法及び試薬 | |
| JPS61265571A (ja) | 異なる比重をもつ相補的粒子を用いる遠心の場におけるイムノアツセイ法 | |
| EP0145242B1 (en) | Assay pretreatment method, compositon therefor and agglutination assay kit containing it | |
| EP2309265B1 (en) | Method of assaying complex and kit to be used therefor | |
| JPWO2002048711A1 (ja) | 免疫学的分析試薬及び分析方法 | |
| JPS59151061A (ja) | 免疫学的ラテツクス凝集法 | |
| Seabrook et al. | The distinction of bone and liver isoenzymes of alkaline phosphatase in serum using a monoclonal antibody | |
| JPH0646893A (ja) | 分析物の測定方法および測定手段 | |
| JPH0712818A (ja) | 免疫学的検出方法 | |
| JPS62502633A (ja) | 体液の酵素検定 | |
| JP2004191332A (ja) | 免疫学的分析試薬及び免疫学的分析方法 | |
| JPS6150066A (ja) | 液体試料中の物質の免疫定量法 | |
| JP3220546B2 (ja) | 免疫複合体存在下の抗原または抗体の測定方法 | |
| JPH026023B2 (ja) | ||
| US6927071B2 (en) | Method for reducing non-specific aggregation of latex microparticles in the presence of serum or plasma | |
| EP0682254B1 (en) | Enzyme linked chemiluminescent assay | |
| JP4455688B2 (ja) | 分析物遊離段階を可能にするアッセイ用表面 | |
| CA2414704A1 (en) | Tertiary amine compounds for use in immunoassays | |
| JP3618797B2 (ja) | 免疫測定法 | |
| JPH03118472A (ja) | インスリン定量方法及び定量試薬 |