JPS61212285A - キシロースイソメラーゼ - Google Patents

キシロースイソメラーゼ

Info

Publication number
JPS61212285A
JPS61212285A JP61029175A JP2917586A JPS61212285A JP S61212285 A JPS61212285 A JP S61212285A JP 61029175 A JP61029175 A JP 61029175A JP 2917586 A JP2917586 A JP 2917586A JP S61212285 A JPS61212285 A JP S61212285A
Authority
JP
Japan
Prior art keywords
xylose isomerase
glucose
xylose
cluster
isomerase
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
JP61029175A
Other languages
English (en)
Other versions
JP2539373B2 (ja
Inventor
ゲオルグ　スケト
ハンネ　ギルトレール
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Novo Nordisk AS
Original Assignee
Novo Industri AS
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Novo Industri AS filed Critical Novo Industri AS
Publication of JPS61212285A publication Critical patent/JPS61212285A/ja
Application granted granted Critical
Publication of JP2539373B2 publication Critical patent/JP2539373B2/ja
Anticipated expiration legal-status Critical
Expired - Lifetime legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P19/00—Preparation of compounds containing saccharide radicals
    • C12P19/24—Preparation of compounds containing saccharide radicals produced by the action of an isomerase, e.g. fructose
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N11/00—Carrier-bound or immobilised enzymes; Carrier-bound or immobilised microbial cells; Preparation thereof
    • C12N11/02—Enzymes or microbial cells immobilised on or in an organic carrier
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/90—Isomerases (5.)
    • C12N9/92—Glucose isomerase (5.3.1.5; 5.3.1.9; 5.3.1.18)
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
    • Y10S435/8215—Microorganisms
    • Y10S435/822—Microorganisms using bacteria or actinomycetales
    • Y10S435/886—Streptomyces

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Immobilizing And Processing Of Enzymes And Microorganisms (AREA)
  • Enzymes And Modification Thereof (AREA)

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 本発明は、キシロース　イソメラーゼ　、該キシロース
　イソメラーゼの製造方法、固定化キシロース　イソメ
ラーゼおよびグルコースをキシロースに異性化する方法
に関する。
〔従来技術および発明が解決しようとする問題〕グルコ
ースをフルクトースに異性化しうる酵素、すなわちグル
コース　イソメラーゼは多数の異った微生物から得るこ
とができ、そして酵素の収率および酵素の性質は種から
種まで更にしばしば菌株から菌株まで異なる。天然に見
出される全てのキシロース　イソメラーゼ生産菌株にお
いて、キシロースは培地中最大の酵素生産が要求される
・全ての記載されたグルコース　イソメラーゼは基本的
にはキシロース　イソメラーゼである。また、酵素の命
名に関し、該イソメラーゼは団５．３．１．５として分
類されておシ、更にグルコース　イソメラーゼは公的酵
素命名中には見出されない。かぐして、明確に以下にお
いて酵素は通常キシロースイソメラーゼとして同一視さ
れるであろう。たとえそれらの最も重要な応用がフルク
トースへのグルコースの異性化であっても。
キシロース　イソメラーゼの生産に関する経済性は、基
質のコストおよび酵素収率に大きく依存し、そして最も
重要な酵素の性質（これは異性化プロセスにおいて経済
的使用に対し特に重要である）、良好な精製収率並びに
満足な物理的および酵素化学的性質、例えば高温安定性
、物理的圧力に対する抵抗性および良好な半減期を有す
る固定化製品に変換され得る良好な性能である。
商業的グルコース　イソメラーゼ製品を含む公知のキシ
ロース　イソメラーゼのいずれも全ての好ましい性質に
ついて最良値を有していない。しばしば妥協をよぎなく
される。
このようなことから、異った微生物源よシグルコースか
らフルクトースに異性化し得るキシロース　イソメラー
ゼの生産を含む分野において多くの研究がなされた。こ
の研究は、キシロース　イソメラーゼの異った微生物源
を変換する多数の特許を含む特許文献中に見出される。
かぐして、例えばストレプトマイセス属、アクチノプラ
ネス属、バチラス属およびフラぎバクテリウム属に属す
る細菌並びＫ例えばパシディオマイセテス綱に属する菌
類は、キシロース　イソメラーゼ生産微生物として特許
文献中に記載されている。また、多くの例の内から幾つ
かの例を挙げると、ストレプトマイセス属に属する次の
種がキシロース　イソメラーゼ生産微生物として特許文
献に記載されてきている： Ｓ、フラゲビリンス（ｆｌａｖｏｖｉｒｅｎｓ　）番ア
シロモグヌス（ａａｈｒｏｍｏｇ＠ｎｕｓ　）Ｓ、エチ
ナッス（５ｃｈｉｎａｔｕｓ　）Ｓ、クエドモレンシス
（ｗｓｄｍｏｒｏｎｓｉｓ　）Ｓ、アルプス（ａｌｂｕ
ｓ　） （米国特許３，６１６，２２１　） Ｓ、オリゴチロモグネス（ｏｌｉｖｏｃｈｒｍｏｇｅｎ
＠ｓ　）Ｓ、ベネズエラエ（ｖｅｎｅｚｕｓｌａａ　）
（米国特許３，６２２，４６３　） Ｓ、グリセロフラブス（ｇｒｉｓｅｏｆｌａｖｕａ　）
（米国特許４，３５１，９０３　） Ｓ＋グラウェスセンス（ｇｌａｕｅｅｇｅｅｎｓ　）（
米国特許４，１３７，１２６　） Ｓ、オリバセウス（ｏｌｉｖａｃｓｕｓ　）（米国特許
３，６２５，８２８　） Ｓ、ガルプス（ｇａｌｂｕｓ　） Ｓ、グラシリス（ｇｒａｃｉｌｉｓ　）Ｓ、マテンシス
（ｍａｔｅｎｓｉｓ　）Ｓ、ニベウス（ｎｉｖ＠ｕｇ　
） Ｓ、プラテンシス（ｐｌａｔｅｎｓｉｓ　）（へンがリ
ー特許１２，４１５） Ｓ、ビオラセオニーガ（ｖｉｏｌａｃｅｏｎｉｇｅｒ　
）（ドイツ特許２，４１７，６４２） Ｓ、アシドＰウランス（ａｃｉｄｏｄｕｒａｎｓ　）（
米国特許４，３９９，２２２　） Ｓ、ファオクロモグネス（ｐｈａｅｏｃｈｒｏｍｏｇｅ
ｎａｓ　）Ｓ、フラジエ（ｆｒａｄｉａｅ　） Ｓ、ロゼオクロモグネス（ｒｏｓｅｏｃｈｒａｇｎｏｇ
ｅｎｅｓ　）Ｓ、オリバセウス（ｏｌｉｖａｃｓｕｓ　
）Ｓ、カルフォルニカス（ｃａｌｉｆｏｒｎｉｅｕｓ　
）Ｓ、ピナセウス（ｖ、１ｎａｃｅｕｓ　）Ｓ、ピルギ
ニーエ（ｖｉｒｇｉｎｉａ＊　）（日本特許６９，２８
，４７３　） グルコースおよびフルクトースの混合物を含有するシロ
ップは、それらの甘味および低傾向の結晶化の故に産業
界において広く用いられている０このようなシロップは
、フルクトースへのグルコースの異性化を触媒化するた
めグルコース　イソメラーゼ活性を有するキシロース　
イソメラーゼを用いてグルコースシロップから好ましく
製造される〇 このプロセスの経済性に対し、酵素のコストが低いこと
並びにシロップが用いることのできる前に除去されねば
ならない副生成物の形成が無視で５″程度″ｒ６．６ｅ
、！−“１１６°　　　以下余白〔発明の目的〕 かくして、本発明の目的は発酵収率、精製収率、並びに
産生キシロース　イソメラーゼが満足な物理的および酵
素化学的性質を有する固定化製品に変換され得る能力に
関して満足し得る程度で生産できるキシロース　イソメ
ラーゼ、対応する固定化キシロース　イソメラーゼおよ
びフルクトースへのグルコースの異性化方法を提供する
ことに６るＯ 〔発明の構成および効果〕 今や、驚くべきことに以下の内容が見出された。
すなわち、ストレプトマイセス　ムリナス　クラスター
（Ｓｔｒｖｐｔｏｍｙｃ＊ｓ　ｍｕｒｉｎｕｓ　ｃｌｕ
ｓｔｓｒ　）に属する細菌が高い発酵収率でキシロース
　イソメラーゼを産生ずること、更にキシロース　イソ
メラーゼが良好な精製収率並びに工業的グルコース異性
化ゾロセスにおける適用に対し満足な物理的および酵素
化学的性質を有する固定化製品に変換され得る能力を有
して生産できること、並びにストレプトマイセス　ムリ
ナス　クラスクーの構成性でかつグルコース抑制抵抗性
菌株が発酵経済性に関して特別の利点を与えることを見
出した。この出願において、語句「ストレプトマイセス
　ムリナス　クラスター」とは、ロルフージェスターハ
イツェルの論文［ヌメリッシェ　デル　タキンノミー　
デル　アクチノマイセスーＩトウンダンストレデトマイ
セス　クント　ストレプトフェルティシリウムＪ（１９
８１年１月２７日提出、ダームストット工業大学（ドイ
ツ国）、生物学科よシ入蘂可能）において定義される如
く理解すべきである。このことは、Ｓ、ムリナスＤＳＭ
４００９１゜ＤＳＭ４０２４０　（以前、３．ｏゼオル
テウス（ｒｏａｅｏ−１ｕｔｅｕｓ　）と命名）、ＮＲ
ＲＬ８１７１　、　ＦＥＲＭ−Ｐ３７１０゜ＰＳＭ３２
５２、およびＤＳＭ３２５３は全てこのストレプトマイ
セス　ムリナス　クラスターに帰属することを意味する
。次の内容が見出された。
すなわち、上記６群のクラスターによって産生されたキ
シロース　イソメラーゼは、双頭交差免疫電気泳動法に
より測定しＤＳＭ３２５２によって産生されたキシロー
ス　イソメラーゼに反して得られた抗体く関し免疫学的
に同一であシ、この事実はこれらの個々の群のクラスタ
ー閏で′ｇｖＭな分類学的関係を示している。
かくして、本発明によるキシロース　イソメラーゼは、
ストレプトマイセス　ムリナス　クラスクーの菌株の培
養によって得られるキシロースイソメラーゼと同一であ
ることが特徴とされる。
本発明Ｋかかるキシロース　イソメラーゼの好ましい態
様によれば、キシロース　イソメラーゼはストレプトマ
イセス　ムリナス　クラスクー菌株の培養によって得ら
れる。
極めて多数種がキシロース　イソメラーゼ　デロデーー
サーとして知られているにもかかわらず、ストレプトマ
イセス　ムリナス　クラスターのいかなる菌株もキシロ
ース　イソメラーゼ　グロデューサーとしては知られて
おらず、更に驚くべきことに、ストレプトマイセス　ム
リナス　クラスターのいかなる菌株もキシロース　イソ
メラーゼの生産に極めて良好に適合しておシかつ上述の
利点を有していることが判明した。
また、本発明はキシａ−ス　イソメラーゼの製造方法を
含んでなるものであシ、この方法においては好気性液内
培讐が炭素源および窒素源を含有する通常の培地でスト
レプトマイセス　ムリナスクラスクーの菌株を用いて行
なわれ、しかる後得られたキシａ−ス　イソメラーゼを
回収する。
この方法の好ましい態様によれば、ストレプトマイセス
　ムリナス　クラスター菌株はＤＳＭ４００９１゜ＤＳ
Ｍ４０２４０．　ＮＲＲＬ８１７１　、　ＦＥＲＮ　Ｐ
−３７１０、又はＤＳＭ３２５２である。ＤＳＭはドイ
ツチェ　デンムンクウォン　ミクロａルガニスメン、グ
ッチｒン、ドイツである。ＮＲＲＬけノーザン　レジオ
ナル　リサーチ　ラゲラトリ−（ＵＳＡ）である。ＦＩ
ＲＭは微生物工業技術研究所（日本）である。もしもキ
シロースが培地中に存する場合、発酵収率は満足できる
ものであシ、更に又、満足できる固定化キシロース　イ
ソメラーゼが製造できる。
本発明方法の好ましい態様において、ストレプトマイセ
ス　ムリナス　クラスター菌株はキシロース　イソメラ
ーゼ生産に関し構成性である。この場合、培地中に高価
な基質成分であるキシロースを導入する必要はなく、安
価な炭素源、例えばグルコースで足りる。更に、驚くべ
きことに以下の内容が見出された。すなわち、Ｓ、ムリ
ナスクラスターの真に本質的でかつグルコース抑制抵抗
性変異株を見出すことが可能であり；従りてＳ、ムリナ
ス　ＤＳＭ３２５３　（これは、Ｓ、ムリナスＤＳＭの
真の構成的でありグルコース抑制抵抗性変異株である）
は、キシロースを有する培地中よシもグルコースを有す
る培地中でよシ多くキシロース　イソメラーゼを生産す
る点で独得である。
「構成的」として言及されているキシロース　イソメラ
ーゼ生産ストレプトマイセス種の従来変異株（米国特許
４，３９９，２２２、例３およびＵＳ　Ｒｅ２９Ｊ５２
第３表）は全てキシロース　インデューサーのない培地
中よシもキシロース含有培地中でよシ高収率でキシロー
スを生産する０例４を参照されのこと。この例は、本発
明方法で用いることのできる、Ｓ。ムリナス　クラスタ
ーに属する構成性変異株のキシロース　イソメラーゼ生
産能と異った培地に関しキシロース　イソメラーゼ生産
微生物の従来の「構成性」菌株のそれとの比較を示す。
本発明方法の好ましい態様によれば、ストレプトマイセ
ス　ムリナス　クラスターの菌株はＤＳＭ３２５３であ
る。全くキシロースを含有しない培地でこの菌株から極
めて高収率を得ることが判明した。例１〜３を参照のこ
と。
よシ良い概括のため、次の第１表を参照されたり０この
表は、本明細書において言及したストレプトマイセス　
ムリナス菌株の重要な幾つかの性質を示している。
以下余白 第１表 ＤＳＭ４００９１　　基準株　　　　　　　　　　ＸＤ
ＳＭ４０２４０　　以前はストレプトマイセスロゼオル
　　　　　　　　× テラスと命名 変異 ＮＲＲＬ８１７１　　　　　　　　　　　　　　　ＸＦ
ＥＰＭＰ−３７１０Ｘ 次の第２表は、４種のストレプトマイセス　ムリナス　
クラスター菌株の分類学的特徴を示している。
＋ａｃ＋’　　＋　÷　、１４−　　　１．　　　　＋
ｆｌ１４１　　＋　千　■　　　１１．＋ べ Ｅ　　　＋Ｅ　Ｘ　　　Ｍ÷】フ　　＋１　１÷＋　１
　　＋　１　、一■＋　＋日１日日日÷「の 第２表で用いて略記号の意味は次の通りである：十　＝
　陽性テスト ←）＝　疑わしい −＝　陰性テスト ｎｄ　＝＝　　測定せず Ｒ＝赤 Ｇｒ　＝灰 Ｙ＝黄 Ｓ　＝　らせん形 ８ｍ　＝　　平滑 ＤＳＭ４００９１　（Ｓ　、ムレナス基準株）に対し、
ＤＳＭ３２５２およびＤＳＭ３２６３は抗生物質を産生
しなかった。第２表第１９項目参照。培養プロス内に抗
生物質が存在しないことは、食品産業において酵素の生
産に対し必須である。
上記表中の試験に関し更に詳細には、ＤＳＭ発行の「メ
ンーデン　ツアー　ウンターズーフング７オン　ストレ
プトマイセチン　ラント　マイニダ／　アンプレン　ア
クテノマイセテンＪ（Ｊ。
クッナー、ライネルＭ、クロペンステッドおよびフェリ
シタス　コーンウェン　ディシェにより編集）を参照の
こと。
また、本発明は相当するキシロース　イソメラーゼが本
発明に係るキシロース　イソメラーゼであることを特徴
とする固定化キシロース　イソメラーゼであることを含
んでなる。固定化酵素製品は、それ自身公知の幾つかの
固定化方法により製造でき、そして固定化キシロース　
イソメラーゼは、グルコース異性化カラム内で極めて秀
れて遂行することが見出された。以下の実施例を参照の
こと。
また、本発明はフルクトースへのグルコースの異性化方
法を含むものであり、この方法はグルコースの水溶液が
、本発明方法によりて得られるキシロース　イソメラー
ゼの可溶性調製品によって異性化されることを特徴とす
る。可溶性キシロース　イソメラーゼを用いるプロセス
を行う場合には、異性化プロセスは満足に進行する。
最後に、本発明はフルクトースへのグルコースの異性化
方法を含むものであり、この方法はグルコースの水性溶
液が本発明の固定化キシロースイソメラーゼによって固
定化されることを特徴とする。連続的グルコース異性化
が秀れた経済性および操作安定性を有して工業的スケー
ルで実現することができることを見出した。
本発明を次の実施例により説明する。
例１〜４は、キシロース　イソメラーゼの発酵を説明し
ておシ、例５および６は固定化キシロース　イソメラー
ゼの製法を説明しておシ、更に例７は固定化キシロース
　イソメラーゼの応用を説明する。
〔実施例〕
振とうフラスコ内での発酵 この例においては、上記６種のストレプトマイセス　ム
リナス　クラスター菌株を培養しキシロース　イソメラ
ーゼを得た。各々の菌株を、蒸留水１ノ当たシｙ単位で
表わされた次の組成の寒天斜面で１時間３７℃で増殖さ
せた。
以下東白 ペプトン（ディフコ）　　　　　　　６ペデチカーゼ（
フムコ）　　　　　　４酵母エキス　　　　　　　　　
　　　　３グルコース　　　　　　　　　　　　　１牛
肉エキス　　　　　　　　　　　　　１．５寒天　　　
　　　　２．０ ｐｉ（７，３ 次いで各菌株からの細胞懸濁液５ゴを、・ヤツフル底エ
ーレンマイヤーフラスコ５００　ＷＬｌ中（７）生産培
地１００−に移した。生産培地ａおよびｂ（ｐｉ（７，
２）は（水道水１１当たりｇ単位で表わされた）表示量
で次の成分から成っていた。
ａ：ツー／ステイープリカー　　　６０（ＮＨ４）　２
８０４　　　　　　　　　　５に２Ｉ（ＰＯ４１，５ ゾルロニツク　　　　　　　　　　０．３キシロース　
　　　　　　　　　５ ｂ＝コーンステイープリカー　　　６０（ＮＨ４）　２
８０４　　　　　　　　　　５に２ＨＰＯ４１，５ プルロニック　　　　　　　　　０．３グルコース　　
　　　　　　　　５ キシロースおよびグルコースを別々にオートクレーブ処
理し次いで室温に冷却後無菌的に添加した。接種したフ
ラスコを３０℃でインキュベートした。７２時間インキ
ュベーションした後、培養物をキシロース　イソメラー
ゼ活性について測定した。
得られた結果を第３表に示す◇ 第３表 キシロース　イソメラーゼ生産 イソメラーゼ活性ＧＩＮＵ〜。
２−４個の独立発酵の平均 １　ＧＩＮＵハ、毎分１μモルのグルコースをフルクト
ースに異性化せしめる酵素の量である。異性化に先立ち
、サンプルを３７℃で３０分間ライソンーム（２１１１
９／ｌｄ）で予備処理し次いでＭｇ　　およびＣＯをそ
れぞれ０．１　Ｍおよび０．００２Ｍｇ度を得るのに十
分な量で加えた。異性化は、５チ十十 のグルコース、０．０５ＭのＭｇ　　、０．００２Ｍの
十＋ Ｃｏ　　および０．０５％のＣＨ（Ｊ　５を含有する、
ｐＨ６，５０の緩衝液０．２５Ｍ中、６５℃で生起する
。２０分後、０．１Ｍの過塩素酸を加えて反応を停止す
る。
次いで得られたフルクトースを、システィン−カルバゾ
ール反応（ロイド等、Ｃａｒｅａｌ　Ｃｈｓｍｉａｔｒ
ｙ４９．５４４（１９７２）’）Ｋより決定する。
例２ １．５１の発酵器での発酵 この例においては、ＤＳＭ３２５２およびＤＳＭ３２５
３を例１と同様に（但し、３０℃で）寒天斜面上で増殖
させた。１日間インキュベーションした後、コロニーを
集め次いで１．５ノの発酵器内で接種のため用いた。発
酵器内の発酵培地は次の物から成る：コーンステイーブ
リカー（４０Ｉｉ／Ｉｔ＞、（ＮＨ４）２３０４（４，
５１１／ｌ　）、Ｋ２ＨＰＯ４（１，５１１／ｌ’）、
消泡（プルロニック０．３３ゴ／ｊ）および殺菌後節エ
タグルコース（５，Ｆ＃）又はキシロース＜５９／ｌ）
のいずれか。殺菌前に−をＮａＯＨで７．０に調節した
。発酵器を３０℃で、かつ７５０ｒｐｍの攪拌速度で更
に空気流速を毎分当り０．βｖｏｗ／ｖｏＬで運転した
。３日後、次の結果を得た：第４表参照。
第４表 カー〆ハイトレート　グルコース　キシロース　グルコ
ース　キシロースＧＩＮＵ／ｄ　　　　　　　　Ｏ，３
５３，２０４，７８４，８７例３ １５００Ｊの発酵器内での発酵 この例においては、ＤＳＭ　３２５３を例１におけると
同ａ！（但し、３０℃で）寒天斜面上で増殖させた０２
日間インキュベーションした後、コロニーヲコーンステ
ィーデリカー（１２ｋｇ）、グルコース（別途殺菌した
、１．５ゆ）および消泡剤（７゜ルロニツク５０１１ｔ
ｌ）を含む３００Ｊの殺菌発酵器内に移した。殺菌に先
立って、−をＮａＯＨで７．０に調節した。この発酵器
を、３０℃、２００　ｒｐｍの攪拌速度および空気流速
２００１／分で運転した。２５時間後、この発酵器から
１５０１を、コーンステイーブリカー（６ｏｋｇ）、　
硫酸ｙンモニウム（６，７５ｋｌ？）、リン酸二水素カ
リウム（２，２５ｋｇ）および消泡剤（プルロニック２
５０１１’ｌｌ）を含む１５００Ｉｌの発酵器内に接種
した。ｐＨを、１２１℃で６０分間殺菌前に７．０に調
節した。操作温度、攪拌速度および通気はそれぞれ３０
℃、１９０ｒｐｍおよび１ｏｏｏｌ！、、’分であった
。３時間後、８ｋｇのグルコースを添加し次いで１０時
間目から後、グルコースを０．５ｋｇ／時間の割合で連
続的に添加した。
接種後８７時間目には発酵器は１１．９　ＧＩＮＵ／ｄ
又は全体で１８　ＭＧＩＮＵを有していた。
例４ 振とりフラスコ中での比較発酵 この例は幾つかの発酵を含む、その内の幾つかは従来技
術に属し、幾つかは本発明に属するが全て振とりフラス
コ内で行った０発酵は、第５表で示したように異った培
地中で行った。発酵は３０℃で２日間行った。培地を含
有するグルコースに対する収率と培地を含有するキシロ
ースに対する収率とのパーセンテージ割合は、「構成性
のノｆ　−七ンテーゾ度」と相称したカラムに示される
。
「構成性のノ譬−センテージ度」はグルコース抑制に対
する抵抗性を含むことを注意すべきである。
全ての収率は、全ａｒＮｕＡｎｌとして示され、数値は
２〜８個の独立発酵の平均で次表に示される。
以下金白 第４欄中の培地ｂ′はｂ′が０．５％のグルコースの代
シに１％のグルコースを含む以外は第１欄中の培地すと
同じである。培地ａ′およびａは同様に相互に関係づけ
られる。
ＤＳＭ３２５３に対し例示される如く（１１欄）、構成
性の／？−センテージ度は培地を含有するグルコースに
対する収率（ＧＩＮＵ／ｄ）と培地を含有するキシロー
スに対する収率との一割合として計算される。すなわち ＤＳＭ３２５３に関し第３個から、ＤＳＭ３２５３はキ
シロース含有培地ａにおけるよシもグルコース含有培地
すでよシ多くキシロース　イソメラーゼを生産すること
が判る。掲げられた他のいかなる菌株もこの特別な特徴
を示していない。また、前記衣は以下の内容を示してい
る。すなわち、従来の「構成性」菌株の構成性の一度は
本発明方法で用いられる構成性菌株ＤＳＭ３２５３の構
成性の一度と比較して非常に小さい。第９欄の培地Ｂ′
は本発明者により構成性の一度のより公正な計ＪＥを得
るため企図される。
例５ この例はＤＳＭによって生産されるキシロースイソメラ
ーゼの固定化を示す。培地内に例２で説明した如く得ら
れたキシロース含有培養物を遠心分離し、次いで上澄み
を棄てた。キシロース　イソメラーゼ活性を有する細胞
を含む底部相を凍結乾燥した。
６Ｉの凍結細胞を、３ｇのスプレ乾燥卵アルブミンを有
する脱イオン水に溶解した。−を５．９０〜７．５５に
調節し、次いで５０チグルタルアルデヒド溶液２．７５
ｊｔ／を添加しタンパクを架橋させた。
ＰＩ（を、７．５で３０分間保持し、しかる後、２５０
ｇの脱イオン水で希釈した。混合物を、３０ａＡ’のス
ーツ母−フロックＣ８３５１、カチオン性凝集剤および
４．５コのＡ１３０、アニオン性凝集剤で凝集させた。
凝集物をろ過して集め、次いでフィルターケークを粒状
化し、乾燥した。乾燥粒状物の活性は、７８．８グルコ
ース　イソメラーゼ単位／ｌ（活性単位はＮ０ＶＯドキ
ユメン）Ｆ−８５０３９９で定義される）であった。
例に の例は、ＤＳＭ３２５３によって生産されるキシロース
　イソメラーゼの固定化を説明する。グルコースと共に
培地内で例２において記載した如く得られた培養プロス
を遠心分離し、次いで上澄みを廃棄した。細胞スラッジ
を固定化実験に直接用いた。
６ｇのスプレー乾燥卵アルブミンを、８．９％の乾燥物
質を有する１００１の細胞スラッジに添加した。脱イオ
ン水を全量１２０　Ｑｍｌに添加後、−を７．０に調節
した。５０％グルタルアルデヒド４．６４を添加し、次
いでＮａＯＨ溶液を添加して−を７．５に保持し次いで
例５で記載したものと同じ凝集剤を用いて混合物を凝集
させた。フロックをろ過して回収し、粒状化し次いで乾
燥させた。乾燥粒質物の活性は１８４．５．＠グルコー
ス　イソメラーゼ単位／Ｉであシ、この活性単位はＮ０
ＶＯドキユメン）Ｆ−８５０３９９で定義される。
例７ この例は、ＤＳＭ３２５３から生産された固定化グルコ
ース　イソメラーゼの適用を説明する。例６で得られた
乾燥粒質物１１．７１を、４５　Ｔｏ　ｖｒ／ｗグルコ
ースシロップ２００ゴ（ｐ）１７．５）内に２時間浸漬
した。次いで酵素粒子を水ジヤケツト付カラムに移し次
いで０．４ｇのＭｇＳＯ４・７Ｈ２０および２ｍＭのＮ
ａＨ８Ｏ４を有する４５％ｗ／ｗグルコースシロップを
ｐＨ７，５でカラムに室温で連続的にボンデ送入した。
１時間後、カラム温度を６０℃に上昇させ次いでフルク
トースへの変換率４１〜４４．５チを得るため流れを調
節した。活性は、異性化の最初の１３７時間中に増加し
た。１３７時間後のシロップの流れは、１時間当シ酵素
１ｇにつきｏ、ｓｓｙのシロップ乾燥物質であり、更に
流出ロシロッデの変換度は４４．３％であった。実験は
３２８時間後に終了させたが、最終シロラグ流は１時間
当たシ酵素１ｇにつき１．０３ｐのシロップ乾燥物質で
あシ流出口シロップの変換度は４２．０チであった。

Claims (1)

  1. 【特許請求の範囲】 １、ストレプトマイセス　ムリナス　クラスター（Ｓｔ
    ｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ　ｍｕｒｉｎｕｓ　ｃｌｕｓｔｅ
    ｒ）の菌株を培養することによって産生されるキシロー
    スイソメラーゼと同一であることを特徴とする、キシロ
    ース　イソメラーゼ。 ２、ストレプトマイセス　ムリナス　クラスターの菌株
    を培養することによって産生されるキシロース　イソメ
    ラーゼであることを特徴とする、キシロース　イソメラ
    ーゼ。 ３、炭素源および窒素源を含有する通常の培地でストレ
    プトマイセス　ムリナス　クラスター菌株を用いて好気
    的液内培養を行い、しかる後得られたキシロース　イソ
    メラーゼを回収する、特許請求の範囲第１項又は第２項
    記載のキシロースイソメラーゼの製造方法。 ４、ストレプトマイセス　ムリナス　クラスター菌株が
    ＤＳＭ４００９１、ＤＳＭ４０２４０、ＮＲＲＬ８１７
    １、ＦＥＲＭ−Ｐ３７１０又はＤＳＭ３２５２である、
    特許請求の範囲第３項記載の方法。 ５、ストレプトマイセス　ムリナス　クラスター菌株が
    構成的である、特許請求の範囲第３項記載の方法。 ６、ストレプトマイセス　ムリナス　クラスター菌株が
    ＤＳＭ３２５３である、特許請求の範囲第５項記載の方
    法。 ７、固定化キシロース　イソメラーゼであって、該キシ
    ロース　イソメラーゼが特許請求の範囲第１項又は第２
    項記載のキシロース　イソメラーゼである、前記固定化
    キシロース　イソメラーゼ。 ８、グルコースをフルクトースに異性化する方法であっ
    て、グルコースの水溶液を特許請求の範囲第１項又は第
    ２項記載のキシロース　イソメラーゼの可溶性調製品に
    よって異性化する、前記方法。 ９、グルコースをフルクトースに異性化する方法であっ
    て、グルコースの水溶液を、特許請求の範囲第７項記載
    の固定化キシロース　イソメラーゼにより異性化する、
    前記方法。
JP61029175A 1985-03-12 1986-02-14 キシロ−スイソメラ−ゼの製造方法 Expired - Lifetime JP2539373B2 (ja)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
DK111185A DK111185A (da) 1985-03-12 1985-03-12 Xyloseisomerase, fremgangsmaade til fremstilling deraf, immobiliseret xyloseisomerase og fremgangsmaade til isomerisering af glucose til fructose
DK1111/85 1985-03-12

Publications (2)

Publication Number Publication Date
JPS61212285A true JPS61212285A (ja) 1986-09-20
JP2539373B2 JP2539373B2 (ja) 1996-10-02

Family

ID=8101126

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP61029175A Expired - Lifetime JP2539373B2 (ja) 1985-03-12 1986-02-14 キシロ−スイソメラ−ゼの製造方法

Country Status (11)

Country Link
US (1) US4687742A (ja)
EP (1) EP0194760B1 (ja)
JP (1) JP2539373B2 (ja)
KR (1) KR960013132B1 (ja)
AT (1) ATE66248T1 (ja)
CA (1) CA1316477C (ja)
DE (1) DE3680802D1 (ja)
DK (2) DK111185A (ja)
ES (1) ES8703523A1 (ja)
HU (1) HU196841B (ja)
IN (1) IN161740B (ja)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2002330763A (ja) * 2001-05-02 2002-11-19 Ajinomoto Co Inc 発酵法による目的物質の製造法

Families Citing this family (16)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4894331A (en) * 1985-09-27 1990-01-16 Amgen Inc. Partial marker cassette mutagenesis of xylose isomerase
US5047511A (en) * 1989-08-28 1991-09-10 Pitman-Moore, Inc. Method for recovering recombinant proteins
US5219751A (en) * 1990-10-19 1993-06-15 Novo Nordisk A/S Novo Alle, Xylase isomerase purified from thermotoga maritima and thermotoga neapolitana
US5268280A (en) * 1990-10-19 1993-12-07 Novo Nordisk A/S Method for glucose isomerization using xylose isomerase purified from Thermotoga Maritima and Thermotoga Neapolitana
GB9502413D0 (en) * 1995-02-08 1995-03-29 Primalco Ltd Xylose isomerase
AR026433A1 (es) 1999-11-10 2003-02-12 Novozymes As Variantes de alfa-amilasa tipo fungamyl
BRPI0910091A2 (pt) 2008-03-27 2017-05-30 Novozymes As processo para produzir um produto de fermentação
CN102171350B (zh) 2008-09-30 2013-09-11 诺维信北美公司 对用干酒糟预处理含木素纤维素材料的酶水解的改进
ES2667812T3 (es) 2008-11-20 2018-05-14 Novozymes Inc. Polipéptidos que tienen actividad potenciadora amilolítica y polinucleótidos que codifican los mismos
WO2010078391A2 (en) 2008-12-30 2010-07-08 Novozymes North America, Inc. Improvement of enzymatic hydrolysis of pretreated lignocellulose-containing material with dissolved air flotation sludge
US20120276585A1 (en) 2009-12-21 2012-11-01 Cofco Corporation Method for producing fermentation products from lignocellulose-containing material
EP2553110B1 (en) 2010-03-30 2017-05-17 Novozymes North America, Inc. Processes of producing a fermentation product
EP2591119B2 (en) 2010-07-07 2022-09-28 Novozymes North America, Inc. Fermentation process with GH61 polypeptides
AU2016293487B2 (en) 2015-07-13 2021-07-01 MARA Renewables Corporation Enhancing microalgal metabolism of xylose
ES3038027T3 (en) 2017-08-31 2025-10-09 Novozymes As Polypeptides having d-psicose 3-epimerase activity and polynucleotides encoding same
WO2025111274A2 (en) 2023-11-20 2025-05-30 Novozymes A/S Epimerase variants and polynucleotides encoding same

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPS4836394A (ja) * 1971-09-17 1973-05-29
JPS5282783A (en) * 1975-12-27 1977-07-11 Mitsui Seitou Kk Production of fixed glucose isomeraze

Family Cites Families (12)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US29152A (en) * 1860-07-17 August friedrich and conrad walter
NL147477B (nl) * 1965-05-11 1975-10-15 Agency Ind Science Techn Werkwijze voor het omzetten van glucose in fructose met behulp van een glucose isomeriserend enzym.
US3625828A (en) * 1969-04-16 1971-12-07 Miles Lab Process for production of glucose isomerase
US3622463A (en) * 1969-08-11 1971-11-23 Cpc International Inc Production of extracellular glucose isomerase by streptomyces
USRE29152E (en) 1971-09-17 1977-03-15 Cpc International Inc. Process for the enzymatic isomerization of dextrose to levulose
US3989596A (en) * 1974-03-28 1976-11-02 R. J. Reynolds Tobacco Company Aggregate of dried flocculated cells
US4137126A (en) * 1975-05-03 1979-01-30 Givaudan Corporation Process for preparing glucose isomerase using streptomyces glaucescens mutants
US4399222A (en) * 1979-08-06 1983-08-16 A. E. Staley Manufacturing Company Carbohydrases from acidophilic streptomyces
ES485580A1 (es) * 1979-10-31 1980-08-01 Espanola Petrol Procedimiento de obtencion de glucosa-isomerasa
US4532208A (en) * 1983-05-05 1985-07-30 Uop Inc. Constitutive glucose isomerase producer
US4551430A (en) * 1983-10-27 1985-11-05 Uop Inc. Constitutive producer of a thermostable glucose isomerase
DK152764C (da) * 1985-06-14 1988-10-03 Novo Industri As Fremgangsmaade til fremstilling af et immobiliseret enzymprodukt

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPS4836394A (ja) * 1971-09-17 1973-05-29
JPS5282783A (en) * 1975-12-27 1977-07-11 Mitsui Seitou Kk Production of fixed glucose isomeraze

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2002330763A (ja) * 2001-05-02 2002-11-19 Ajinomoto Co Inc 発酵法による目的物質の製造法
US8497087B2 (en) 2001-05-02 2013-07-30 Ajinomoto Co., Inc. Method for producing target substance by fermentation

Also Published As

Publication number Publication date
ES552017A0 (es) 1987-02-16
KR960013132B1 (ko) 1996-09-30
EP0194760A3 (en) 1988-05-04
JP2539373B2 (ja) 1996-10-02
HUT40160A (en) 1986-11-28
HU196841B (en) 1989-01-30
EP0194760B1 (en) 1991-08-14
ATE66248T1 (de) 1991-08-15
KR860007375A (ko) 1986-10-10
DK71086A (da) 1986-09-13
EP0194760A2 (en) 1986-09-17
IN161740B (ja) 1988-01-30
DK111185D0 (da) 1985-03-12
US4687742A (en) 1987-08-18
DK111185A (da) 1986-09-13
DK157886C (da) 1990-07-30
DK71086D0 (da) 1986-02-14
DK157886B (da) 1990-02-26
CA1316477C (en) 1993-04-20
DE3680802D1 (de) 1991-09-19
ES8703523A1 (es) 1987-02-16

Similar Documents

Publication Publication Date Title
EP0606899B1 (en) Processes for production of optically active 4-halo-3-hydroxybutyric acid esters
JP2539373B2 (ja) キシロ−スイソメラ−ゼの製造方法
JPS6155948B2 (ja)
Tsugawa et al. Production of l-Glutamic Acid from dl-Hydantoin-5-propionic Acid by Microoganisms: Part I. Screening of l-Glutamic Acid-Producing Microorganisms and Some Optimal Conditions for Production of l-Glutamic Acid
US3979261A (en) Production of glucose isomerase by bacillus coagulans
RU2288263C2 (ru) Штамм bacillus coagulans sim-7 dsm 14043 для получения l(+)-лактата и способ получения l(+)-лактата
US5702939A (en) Glucosamine-6-phosphate deaminase and process for producing the same
EP0219673B1 (en) Method of preparing novel thermostable transglucosidase
US2978384A (en) Method for the production of 1-glutamic acid
US4283496A (en) Preparation and use of glucose isomerase
US4061539A (en) Preparation and use of glucose isomerase
EP0032987B1 (en) Thermophilic aspartase, processes for producing, culture used, and l-aspartic acid preparation process using the same
JP3799784B2 (ja) ２，６−ジアミノプリン−２’−デオキシリボシドおよび２’−デオキシグアノシンの製造法
WO1992018637A1 (en) Method for the production of d-gluconic acid
Kopper An atypical strain of Pseudomonas aeruginosa
JP3957053B2 (ja) 新規な微生物及びプラバスタチンの製造方法
JPS60995B2 (ja) ７−アミノ−セフアロスポラン酸およびその誘導体の新規製造法
US5565343A (en) Process for the production of dulcitol from lactose
SU1095645A1 (ru) Способ получени эндонуклеазы рестрикции
JP3757598B2 (ja) Ｌ−リボースの製造方法
JPWO1989007147A1 (ja) 光学活性２―ヒドロキシ―４―フェニル酪酸の製造法
RU1788011C (ru) Штамм бактерий ВRеVIвастеRIUм LастоFеRмеNтUм-продуцент лизина
JPH0616704B2 (ja) フッ化物イオンに耐性な細菌カタラーゼ及びそれを生産するミクロコッカスｓｐ．ｋｗｉ‐５菌株
JPH0324197B2 (ja)
JPH0738792B2 (ja) プロトカテキュ酸の製造方法

Legal Events

Date Code Title Description
R250 Receipt of annual fees

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250

R250 Receipt of annual fees

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250

EXPY Cancellation because of completion of term