JPS61268700A - 新規な生理活性ペプチド - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 本発明は新規な生理活性ペプチドに関する。

〔従来の技術〕

１９７０年以降、精製技術、分析法の進歩に伴い、哨乳
類の脳および消化管から従来のアミン系神経伝達物質に
類似した作用を示すペプチド　サフ”スタンスＰ、ニュ
ーロチ／シン、パンアクティブ　インテステイナル　ポ
リペプチドやモルヒネ様作用を示す内在性のペプチド　
β−エンドルフィン、メチオニンエンケアアリ／、ロイ
シンエンケファリン、α−ネオ−エンドルフィン、ダイ
ノルフィン等の生理活性を有する一部のペプチドが発見
されて以来、ペプチドの生理作用の研究が盛んに行なわ
れている。

〔発明が解決しようとする問題点〕

然しなから、その一方では生理活性を有する新規なペプ
チドの開発が望まれていた。

〔問題点を解決するための手段〕

斯かる実状において、本発明者はブタを鎖中から各種の
生理活性ペプチドを抽出し、その−次構造及び生物学的
活性を調べていたところ、その中に従来知られていない
下記の一般式で示される新規化合物が存在すること見出
すと共に、これを合成によって製造することに成功した
。

すなわち本発明は、一般式 ％式％ （式中、ＸはＨ又１ｄ　Ｈ−Ｐｈｅ−Ｌｙａ−ｖａｌ−
Ａｓｐ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｐｈ　ｅ−Ｇｌ　ｎ−Ｇ１　
ｙ−Ｐｒ　ｏ−Ｉ　１　ｅ　−Ｖａ　１−８ｅ　ｒ−Ｇ
ｌ　ｎ−Ａｓ　ｎ−Ａｒ　ｇ−Ａｒｇ−を示す） で表わされる生理活性ペプチド〔以下、ＸがＨのもの金
ペプチド（１）、Ｘが１（−Ｐｈｅ−・・・−Ａｒｇ−
のものをペプチド（２）という〕及びその塩を提供する
ものである。

なお、本明細書において、本発明化合物中の略称は当該
分野において一般に使用されるもので次の意味を有する
。

Ｔｙｒ　；　Ｌ−チロシン、　Ｐｈｅ　；　Ｌ−フェニ
ルアラニンＬｅｕＨＬ−ｏイシｙ、ＡｒｇＨＬ−アルギ
ニ／Ｐｒｏ　；　Ｌ−プロリｙ　、　Ａｓｎ　；　Ｌ−
アスパラギンＬｙｓ　；　Ｌ−リジｙ、ＶａｌＨＬ−バ
リンＡｓｐ　；　Ｌ−アスパラギン酸、　Ｇｌｕ　：　
Ｌ−グルタミン酸Ｇｉｎ　；　Ｌ−グルタミン、Ｇｌｙ
；グリシン１１ｅ　　；　Ｌ−イア０イシ：／　　、　
Ｓｅｒ　：　Ｌ−セｌＪ　ｙ本発明の新規な生理活性ペ
プチドは、ブタを髄から抽出・単離する方法あるいは合
成に′よって得ることができる。

ブタを髄から本発明ペプチドを抽出・単離するには、例
えばブタを髄を適当な酸性溶媒、即ちギ酸水溶液、酢酸
水溶液等の中でホモジナイズ、不溶物を遠心分離するこ
とにより抽出液を得、次いでこの抽出液を有機溶媒によ
る分別沈殿、溶媒抽出、透析、限外濾過、ゲル濾過、イ
オン交換クロマトグラフィー、吸着クロマトグラフィー
、高速液体クロマトグラフィー等のペプチド精製に用い
られる自体公知の手段を使って対応する分子量を有する
物質を収得すればよい。

然し、工業的には合成で得る方が原料の入手、大量生産
、価格といった面で有利である。

本発明ペプチドの合成は、ペプチド合成に常用される面
相法文は液相法によって行うことができる。〔泉庵信夫
等著「ペプチド合成Ｊ１９８４年、九１１−発行；日本
化学会編「生化学実験講座（Ｉ）／タンパク質の化学」
４巻、２０８〜４９５頁、１９７７年、東京化学同人発
行〕。

例えば固相法を本発明に適用する場合、ペプチドアミド
を得るための支持体としては、ベンズヒドリルアミン樹
脂（ポリスチレン）を用いるのが好ましい。また、使用
するアミノ酸のα−アミノ基はいずれの場合もｔｅ　ｒ
ｔ−ブチルオキシカルボニル基（ＢｏＣ基）で保護し、
アスパラギン酸、グルタミン酸のβ、およびγカルボン
酸はべ／ジル基（Ｂｚｌ基）、アルギニ／のグアジノ基
はトシル４　（Ｔｏｓ基）、チロシンの水酸基は２，６
−シクロルペ／ジル基（ＣＬ、−Ｂｚｌ基）、リジンの
ε−アミノ基はベンジルオキシカルボニル基（２基）。

セリンの水酸基はベンジル基（Ｂｚｌ基）でそれぞれ保
護するのが好ましい。更にまた、保護アミノ酸の縮合は
ジシクロへキシルカルボジイミド（Ｄ−ＣＣＩ法又はＤ
ＣＣによる酸無水物法によるが、Ｂｏｃ−Ａａｎ−ＯＨ
，ＢｏＣ−Ｇｉｎ−ＯＨについては活性エステル法を用
いるのが好ましい。

例えば本発明ペプチドは、まずＣ末端アミノ酸であるア
スパラギンをその保護誘導体であるＢｏｃ−アスパラギ
ン−ｐ−ニトロフェニルエステルを用いてベンズヒドリ
ルアミン樹脂に導入し、以後順次アミノ酸を延長し保護
ペプチド樹脂を合成し死後、これをフッ化水素酸（ＨＦ
）で処理することにより粗合成ペプチドを得、必要であ
れば更にこれを精製することにより構造することができ
る。

粗合成ペプチドの精製は常法に従って、ゲル濾過、イオ
ン交換クロマトグラフィー、逆相高速液体クロマトグラ
フィー（ＲＰ−ＨＰＬＣ）等により行うことが出来る。

また、本発明ペプチドの塩は該ペプチドを酢酸、クエン
酸、酒石酸、フマル酸、マレイン酸等の当モル程度に溶
解した後、凍結乾燥することにより得ることができる。

斯くして抽出又は合成されたペプチドがペプチド（１）
するいはペプチド（２）の構造を有するものであること
の確認は、アミノ酸組成をアミノ酸分析計により、また
アミノ酸配列を気相プロティンシーケンサ−によシェド
フッ分解して得られたフェニルチオヒダントイｙ（ＰＴ
ＨＩアミノ酸を逆相高速液体クロマトグラフィーで分析
することにより行なった。Ｃ末端のアミドは、精製した
ペプチドをトリプシン消化後ダンシルクロリドでダンシ
ル化シ、ポリアミドシートによる二次元薄層クロマトグ
ラフィーでの分析によりダンシルアス１くラギンアミド
の生成を確認することにより証明した。

本発明のペプチド（１）及び（２）の物理化学的性質は
次のとおりである。

夏　アミノ酸分析結果の一例を示すもので数字はモル比
を示す。

〔作用〕

本発明ペプチドは平滑筋（ラット子宮筋）を収縮させる
活性並びに血圧上昇作用を有する。

本発明ペプチドの生物学的性質を下記方法により試験し
た。その結果を第２図に示す。

（試験方法） ラット〔ウィスター（ｗｉ３ｔｅｒ　ｌ）雌の子宮筋を
摘出シ、３Ｗｌｌオルガンパスを用いてロック−リンゲ
ル液中に浸した。オルガンパス中のロツクーリンゲル液
には９５％０２−５チＣＯ，ガスを通じ３２℃に保温し
た。筋標本には１？の静圧をかけ１時間程装置し、筋の
自動運動が安定したところで本発明のペプチドを投与し
、３〜４分間筋の収縮を測定した〔等張性トランスデエ
ーサー：モデルＭＥ　−４０１２エム・イー・コマーシ
ャル（ＭＥＣｌ社製〕。測定後すみやかにオルガンパス
を洗い、２０〜３０分おきにこれを繰返した。被験物質
は所定ｊｔ？生理食塩水に溶かし投与した。

（結果） 第２図から明らかなように、アミノ酸残基数が８個のペ
プチド（１）は１．ＱｎＭで活性を示した。一方、アミ
ノ酸残基数が２５個のペプチド（２）は（１）よりも活
性が強く、０．３５　ｎＭで活性を示し、しかもＱ、７
ｎＭでは活性の持続時間が著しく長いという特徴を示し
た。この特徴は生理作用の解明に有効に利用しうるもの
である。

〔発明の効果〕

従来、消化管、子宮、輸精管、胆嚢、血筋等の平滑筋を
収縮又は弛緩させる活性がある生理活性ペプチドは数多
く知られている。例えばモルモット回腸の収縮に強い作
用を示すものとしてサブスタンスＰ、ニューロテンシン
、コレチストキニン。

ニューロメシンに、ニューロメシンＬ、ニューロメジン
Ｎ、カツシニン等が、またラット子宮筋の収縮に強い作
用を示すものとしてオキシトシン。

プラジキニン、ガストリン放出ペプチド、ニューｏ１ジ
ンＢ、ニューロメジンＣ，ボンベシン等カ知られている
。またこれらの物質は平滑筋の収縮。

弛緩だけでなく生体内で独自の生理作用をもつことが知
られており、本発明ペプチドも生体内で新たな生理的役
割をはたしていると考えられる。

さらに従来知られている生理活性ペプチドのアミノ酸配
列は、例えばサブスタンＰではＨ−Ａｒｇ−２ｙｓ−Ｐ
ｒｏ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−ＮＨ，１，ｊ、５−）＋５−ｙ
ＴＩｔｉｆｌ　−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ−Ｐ
ｈｅ−８ｓ　ｒ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ−Ａｒｇ−ＯＨであっ
て本発明の生理活性ペプチドのアミノ酸配列とは全く異
なる。

従って、本発明ペプチドは新規なものであり、かつ生理
学的活性を有し、また生理作用の解明にも有用なもので
ある。

〔実施例〕

次に実施例を挙げて本発明を説明する。

実施例１ 屠殺直後のブタから摘出したを髄２０ｋｌＮ５５０頭分
）を２倍量の２０　ｍＭ塩酸を含有するＩＮ−酢酸中で
１０分間煮沸することにより内在するプロテアーゼを失
活させた。これを冷却した後、４℃においてポリトロン
ミキサーでホモジナイズすることにより抽出をおこなっ
た。得られた抽出液ｔ１２，０ＯＯＸＧで３０分間遠心
分離し、その上清を約４０１得た。さらにＧＦ／Ｂグラ
スフィルター（ワットマン製）で浮遊する脂肪を除き限
外濾過（ＵＭ−２，アミコ／社製）することにより脱塩
濃縮して厳格液量を３．３ｔとした。この調整液にアセ
トンを４℃で滴下し、その最終濃度を７５−にすること
によりアセトン沈殿をおこない、次にこれを遠心分離す
ることにより約１１４の上清を得た。得られた上清を減
圧下で濃縮乾固し、残渣を再度ＩＮ−酢酸に溶かし凍結
乾燥した。この乾燥物を１ル酢酸２ｔに溶かし、ＩＮ−
酢酸で平衡化したｓｐ−セファデックス　Ｃ−２５４０
０−で処理し、１Ｎ−酢酸で溶出する酸性画分（ＳＰ−
ｉ、２Ｍ−ピリジン溶液で溶出する中性弱塩基性画分（
ＳＰ−［）、２Ｍ−ピリジ／−酢酸（ｐＨ５，０）で溶
出する塩基性画分（ＳＰ−１＋を得た。

このＳＰ−璽の画分を凍結乾燥することにより乾燥物１
０．５　Ｌｉ−を得、これをＩＮ−酢酸に溶解しセファ
デックス　Ｇ−５０によりゲル濾過（４４５Ｘ　１４０
　ｃｍ　：流速４０’ｎｌ／時；フラクションサイズ５
０Ｒ１／チューブ）を５回にわけておこなった。

ここでラット子宮筋のアッセイをおこない収縮活性のあ
る両分を凍結乾燥後ＩＮ−酢酸に溶解し、さらにセファ
デックス　Ｇ−２５によるグル濾過（７，５Ｘ　１３５
譚；流速６０ｒｎｔ／時；フラクションサイズ１００ｒ
ｎｌ／チューブ）をおこなった。ここでもラット子宮筋
のアッセイをおこない第１図のようにＡ−Ｆの画分を得
た。

（１）のペプチドはＦの画分を精製することにより得ら
れる。

Ｆの画分をさらに陽イオン交換ＨＰＬＣにかけた。

条件〔カラＡ　：　ＴＳＫゲルＣＭ　−２ｓ　ｗ　、　
４．　Ｑ　ｘ２５０　Ｂ（東洋ソーダ製）：流速１．０
ｒｎｌ／分；溶媒系（Ａ１１０　ｍＭ　）ＩＣＯＯＮＨ
，（ｐＨ６，６）　　ニアセトニ　ト　リ　ル＝９０：
１０　　、　　（Ｂ）　　１．　　ＯＭ　ＨＣＯＯＮＨ
，（ｐＨ６，６）ニアセトニトリル＝９０：１０、（Ａ
）：（Ｂ）＝１００：Ｑから（Ａｌ：（Ｂ）　＝　８５
　：　１５まで４８分の直線グラジェントさらに（Ａ）
：（Ｂ）　＝８５：１５から（Ａ）：（１３１＝：　５
０　：　５０まで４８分の直線グラジェントをかけた。

〕このＨＰ　ＬＣでリテンションタイム１０３〜１０５
分のところに子宮筋の活性がある両分を得た。この画分
をさらに逆相ＨＰ　ＬＣにかけた。条件〔カラムケムコ
ソルプ（Ｃｈｅｍｃｏａｏｒｂ）ｓ　　０ＤＳ−Ｈ，４
，６ｘ２５０朋（ケムコ製）；流速１ｄ／分、溶媒系（
Ａ）水ニアセトニトリル＝１０チドリフルオロ酢酸（Ｔ
ＦＡｌ＝９０　：　１０：１、ＣＢ）水ニアセトニトリ
ル＝１０チＴＦＡ＝４０：６０：１、（Ａ）　：　ｔＢ
）＝１００　：　Ｏから（Ａ）：　（Ｂｌ＝０　：　１
００への８０分の直線グラジェントをかけた。〕リリテ
ンションタイム３９の主要ピークを分取し実質的に純粋
なペプチド（１）を約１μ？得た。

（２）のペプチドはセファデックスＧ−２空のＢの両分
から得られる。Ｂの画分２．６ｙ−を１０１ｎｌのＩＮ
−酢酸に溶かし７回に分けて逆相ＨＰＬＣにかけた。条
件〔カラム、ＴＳＫゲル　ＯＤ　Ｓ　−１２ＯＡ。

°　２０ｘ２５０龍（東洋ソーダ製）；流速５−／分；
溶媒系（Ａ）水ニアセトニトリル：ｌＯ％ＴＦＡ＝９０
：１０：１．（Ｂ）水ニアセトニトリル；１０％ＴＦＡ
＝４０　：　６０　：　１　、　（Ａｌ　：　（Ｂ）＝
９０　：１０から（Ａｌ　：　（Ｂｌ＝３０　：　７０
への２５０分直線グラジェントをかけた。〕この１（Ｐ
ＬＯでリテンションタイム１２８〜１３６分のところに
子宮筋の活性がある画分を得た。次にこの一分を陽イオ
ン交換ＨＰＬＣにかけた。条件〔カラム；ＴＳＫゲル　
ＣＭ−２ｓｗ　　４．６Ｘ２５０朋（東洋ソーダ製）；
流速１ｒｔｔｌ／分溶媒系（Ａｔ　１０　ｍＭ　ＨＣＯ
ＯＮＩ′ｉ４ニアセトニトリル＝　９０　：　１０　、
　　（Ｂ）　ｔ、ｏＭＨｃＯＯＮＨ，ニアセトニトリル
＝９０　：　１０．　　（Ａｌ　：　（Ｂ）　＝１００
：０から（Ａｌ　：　（Ｂｌ＝５０　：　５０への１０
０分直線グラジェントをかけた。〕リリン／ジョンタイ
ム６８〜フ１のところに子宮筋の活性がある両分を得た
。さらにこの両分を逆相ＨＰＬＣにかけた。

条件〔カラム；ケムコソルプ７−ジフェニル。

４、６　Ｘ　２５０鶴（ケムコ製）；流速１．５１１Ｌ
／！／分。

溶媒（Ａ）水ニアセトニトリル＝１０％ＴＦＡ＝９０：
　１０　：　１　（Ｂ）水ニアセトニトリル：ｌＯ％Ｔ
Ｆ’Ａ＝４０：６０：ｉ　（Ａ）：　（Ｂ）＝８０：２
０から（Ａｌ　：　（Ｂ）＝Ｏ：　１００への１２８分
直線グラジエ／ト？かけた。〕リテンションタイム２７
〜８分のところに子宮筋の活性がある両分を得た。最終
ｎＩ製として活性画分を逆相ＨＰＬＣにかけた。条件〔
カラム；ケムコソルブ３　０ＤＳ−Ｈ，４，６Ｘ７５ｍ
ｍ（ケムコ製）；流速１ｄ／分；溶媒系（５）水ニアセ
トニトリル：１０％ＴＦ’Ａ＝９０　：　１０：　１　
（Ｂｌｌ水子アセトニトリル１０チＴ　Ｆ　Ａ＝４０：
　６０　：　１　、　（Ａｌ　　：　（Ｂ）＝８０　：
　２０から（Ａ）：（Ｂｌ　＝　Ｏ：　１００へ１９２
分直線グラジェントをかけた。〕リテンションタイム３
４分の主要ピークを分取し実質的に純粋なペプチド（２
）を約３．５μを得た。

芙施例２ ぺ／ズヒドリルアミン樹脂１ｙ−（０，４ｍｅｑＮＨ２
／１）をジメチルホルムアミド（ＤＭＦ　）５ａ＋Ｊに
よく膨潤させ、これにＢｏａ−アスパラギ／−ｐ−二ト
ロフェニルエステル０．７１５’　（２，Ｏｍｍｏｌ　
）のＤ　Ｍ　Ｆ溶液５ｄを加え室温でゆるやかに攪拌し
６時間反応した。母液を戸去し、樹脂はＤＭＦで３回洗
う。再度同じ反応１［返した。反応の進行および完結は
ニンヒドリンによるカイザーテストでモニターした。つ
いでＤＭＦ　、塩化メチレン。

イソプロピルアルコール、塩化メチレンの順に樹脂を洗
って乾燥した。

保護ペプチド樹脂の合成においては、各構成アミノ酸の
α−アミノ基はすべてＢｏａ基で保護し、活性な側鎖の
うち、チロシ／の水酸基はジクロルベンジル基（Ｃ４−
Ｂｚｌｌで、アルギニンのグアジノ基はトシル基（Ｔｏ
ｓ　ｌで、リジンのξ−７ミノ基はぺ／ジルオキシカル
ボニル基（Ｚ）で保ｆｆ１ｌ、、アスパラギン酸のβ−
カルボン酸はベンジル基（Ｂｚｌ）、クルタミン酸のｒ
−カルボン酸はＢｚｌ基およびセリンの水酸基はＢｚｌ
基で保護した。

保護アミノ酸の縮合にあたっては樹脂に結合している保
護ペプチドの末端アミノ基の保護基であるＢｏａ基を塩
化メチレン中５０％トリフルオロ酢酸で室温下２０分処
理することを２回繰返しほぼ完全に除去した。ついで脱
Ｂｏａ化で遊離したアミノ基を目的のペプチドのアミノ
酸配列における次に位置するアミノ酸のＢｏａ保護誘導
体のカルボキシル基と縮合ｌ−だ。この保護アミノ酸の
縮合忙おいてＢｏｃ−Ａｓｎ、　Ｂｏａ−Ｇｉｎはｐ−
ニトロフェニルエステルとしてこれを５当量用い１０時
間反応する操作を２回おこなった。その他のＢｏｃ−ア
ミノ酸は５当竜用いジシクロカルボジイミドを縮合剤と
して用い縮合した。この操作によって反応が完結してい
ない場合は同じ操作を繰返した。なお反応の進行及び完
結はニンヒドリンによるカイザーテストでモニターした
。

このようにしてベンズヒドリルアミン１？よシＢｏｃ−
Ｔｙｒ　（Ｃ４−Ｂｚｌ　）　−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−Ｐｈ
ｅ−Ａｒｇ　（Ｔｏｓ　）　−Ｐｒ。

−Ａｒ　ｇ　（Ｔｏ　ｓ　）　−Ａｓ　ｎ−ＮＨ−ベン
ズヒドリル樹脂〔以下、保護ペプチド樹脂（Ａ）という
〕を合成した段階でこのものを一部（５００■）取り出
した。残りをさらにＮ端延長の反応にかけＢｏｃ−Ｐｈ
ｅ−Ｌｙｓ　（ｚｌ−Ｖａｌ−Ａｓｐ　（ＯＢｚｌ　ｌ
　−Ｇｌｕ　（ＯＢｚｌ　１ＬＧ１ｕ　（ＯＢｚｌ　−
Ｐｈｅ−Ｇｌｎ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｉ　１ｅ−Ｖａｌ−
８ｅ　ｒ　（Ｂｚ　１１−Ｇｌ　ｎ−Ａｓｎ−Ａｒｇ　
（Ｔｏ　ｓ　ｌ　−Ａｒｇ　（Ｔｏ　ｓ　）　−Ｔｙｒ
　（Ｃ４−Ｂｚ　１　）−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−Ｐｈｅ−Ａ
ｒｇ（Ｔｏｓ）　−Ｐｒｏ−Ａｒｇ（Ｔｏｓ）−Ａｓｎ
−ＮＨ−ベンズヒドリル樹脂〔以下、保護ペプチド樹脂
（Ｂ）という〕１４６０　ｒｎｇを得た。

１１）のペプチドの樹脂からの脱離・楕製は次の方法に
よりおこなった。保護ペグテド樹脂（Ａｌ　３００習を
アニソール１．５　ｍｌと共にＨＦの反応器中に入れＨ
Ｆ　ｆ　８ｍｌ導入し、０℃で６０分反応させた。

ついで過剰のＨＦを留去し、エーテル２５ｄで洗いアニ
ソールを除去し、ＩＮ−酢酸１４．２ｄ’ｉ加え生成物
を抽出する。樹脂および不溶物を炉別し、さらに水でｉ
ｏ倍希釈後、９ＱｍＪのＯＤＳ樹脂〔Ｌ　Ｃ−５ｏｒｂ
　　（ケムコ製）〕を充填したカラム（２、、ＯＸ　４
０　ｃｍ　）に吸着させ、０．　Ｉ　Ｎ酢酸でよく洗浄
後０．１％トリフルオロ酢酸（ＴＦ’ＡＩを含む６０チ
アセトニトリル２００ゴで溶出する。溶出液はアセトニ
トリルを減圧下留去後凍結乾燥し約９０■の粗ペプチド
（１）ｔ−得た。このものを０．１　％　トリフルオロ
酢酸６ｒ！Ｌｌに溶かし６回にわけて逆相）（ＰＬＯニ
カけた。条件’（：カラム；ＴＳＫゲル０ＤＳ１２０Ａ
。

２、、　ＯＸ　２５０　ｃｍ　：流速５ｒｎｌ／分；溶
媒系ＴＡ）水：７セ）＝ｌＪル：１０％ＴＦＡ＝９０　
：　１０　：　１゜［Ｂ）水ニアセトニトリル：１０チ
ＴＦＡ＝４０　：６０　：　１　、　（Ａ）　？　（Ｂ
）＝７５　：　２５から（Ａ）　：　（Ｂ）＝２５＝７
５の１００分間の直線グラジェントをかけた。〕この操
作を６回繰返見してメインピークを分取した。この分画
を減圧下アセトニトリルを留去後凍結乾燥をおこない目
的のペプチド１１）Ｈ−Ｔｙｒ７Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−Ｐｈ
ｅ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ａａｎ−ＮＨ，を５８．
２η得た。

（２）のペプチドの樹脂からの脱離・精製は次の方法に
より行なった。保護ペプチド樹脂（Ｂ１６００■をアニ
ソール２−と共に）（Ｆの反応器に入れ、ＨＦを１０４
導入し０℃で６０分反応させた。ついで過剰のＨＦを留
去後、エーテル３０１Ｒ１で洗いアニソールを除去し、
ＩＮ−酢酸２４．２１１Ｌｌを加え生成物を抽出した。

樹脂および不溶物を戸別し、さらに水で１０倍希釈後９
０ｄのＯＤＳ樹脂〔Ｗ−ｓｏｒｂ（ケムコ製）〕を充填
したカラム（ＬＯＸ４０　ｃｍ　）に吸着させ０．ＩＮ
−酢酸でよく洗浄後０．１％ＴＦＡを含む６０％アセト
ニトリル２００Ｍで溶出する。溶出液はアセトニトリル
を減圧下留去後凍結乾燥し約２２８　ｍ９の粗ペプチド
（２）を得た。

この粗ペプチド６　Ｚ２Ｉｎｇを７−の０．１１ＴＦＡ
に溶かし５回にわけて逆相ＨＰＬＣにかけた。東件〔カ
ラム；’Ｉ’ＳＫゲル、０ＤＳ１２０Ａ、　　２．　Ｏ
Ｘ　２５　ｃｍＨ流速５ｄ／分；溶媒系（Ａ）水ニアセ
トニトリル：１０％ＴＦＡ＝９０　：　１０　：　１　
、　（Ｂ）水ニアセトニトリル＝１０チＴＦＡ＝４０　
：　６０　：　１、（Ａｌ：（Ｂ）＝７５：２５から（
Ａ）　：　ＩＢ）＝２５　：　７５までの１００分間直
線グラジェントをかけた。〕この操作を５回〈り返えし
メインピークを分取した。この分画をアセトニトリルを
減圧下留去後凍結乾燥をして目的のペプチドｉ２）　Ｈ
−Ｐｈ　ｅ　−Ｌｙ　ｓ　−Ｖ’ａ　１−Ａａｐ−Ｇｌ
ｕ−Ｇｌｕ−Ｐｈｅ−Ｇｉｎ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−１１ｅ
−Ｖａｌ−８ｅｒ−Ｇｌ　ｎ−Ａａｎ−Ａｒｇ−Ａｒｇ
−Ｔｙｒ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−Ｐｈｅ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ　
−Ａｒｇ−Ａｓｎ−ＮＨ，を１１．！１１１９得た。

【図面の簡単な説明】

第１図は実施例１における塩基性画分（ｓｐ−Ｉ）のセ
ファデックスＧ−２５によるゲル濾過の結果を示す図面
であって、２８０　ｎｍにおける吸収曲線及び相対活性
を示す図面である。第２図はラット子宮筋の標本に本発
明ペプチドを投与したときの収縮長さの経時変化を示す
図面である。 以上

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、一般式 Ｘ−Ｔｙｒ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−Ｐｈｅ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ
   −Ａｒｇ−Ａｓｎ−ＮＨ＿２（式中、ＸはＨ又はＨ−Ｐ
   ｈｅ−Ｌｙｓ−Ｖａｌ−Ａｓｐ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｐｈ
   ｅ−Ｇｌｎ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｉｌｅ−Ｖａｌ−Ｓｅｒ
   −Ｇｌｎ−Ａｓｎ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−を示す） で表わされる生理活性ペプチド及びその塩。