JPS61271982A - モノクロ−ナル抗体 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は、ヒト以外の霊長動物のモノクローナル抗体、
ハイブリドーマ細胞系統（ｃｅｌｌ　　１ｉｎｅ）およ
びそれらを生産する方法、ならびに前記抗体を生産する
前記細胞系統の使用に関する。

ハイブリドーマは不滅化細胞（ｉｍｍｏｔａｌｉｚｉｎ
ｇ　　ｃｅｌｌ）、例えば、骨髄腫細胞。

はしばしば形質転換されてない相手細胞であるものに融
合され、前記相手細胞はとくに前もって決定した物質（
例えば、抗体を生産するリンパ球）を生産するその能力
について通常選択される。生ずる雑種細胞を選択しかつ
クローニングして、弔−・の構造および／または性質を
有する物質を生産する細胞系統を得ることができる。と
くに、リンパ球を使用して形成したこのようなハイブリ
ドーマはモノクローナル抗体を生産するために使用する
ことができる。

最近におけるハイブリドーマ技術の発展は、安定である
と同時に得ようとする特定の物質を高度にかつ特異的に
生産する細胞系統を得ることに向けられてきた。この問
題に対する種々のアプローチが存在した。なぜなら、そ
れらの歴史的起源は免疫グロブリン／抗体の分野に大き
く集中してきたからである。

この分野における従来の活動を研究すると、直面する問
題のタイプおよびこれまで試みられてきた種々の解決の
概観が提供される。

モノクローナル抗体を生産する細胞系統の研究への本来
の刺激は免疫生物学の分野から生じ、生産物はモノクロ
ーナル抗体である。従来の抗血清は通常抗原結合部位が
構造的に異なる抗体を大寸に含イ１したが、各々は大き
い程度あるいは小さい程度の結合活性および／または特
異性をもっ同一・の抗原に結合する。さらに、従来の抗
血清は、また、他の抗原に向けられかつ抗血清を得た宿
１個体の前の防御反応を反映する多数の抗体を含有する
。大抵の目的に対して、このような「広い」抗血清は１
分であったが、より多くの特異性および再現性を４える
ことは有意な発展を表わし、かつ究めて多数の潜在性を
もつ科学的道具を、とくに診断および治療の分野におい
て、提供すると感じられた。

最初のかつ現在古典的な解決はコーラ−（Ｋ。

ｈ　ｌ　ｅ　ｒ）およびマイルスティン（Ｍｉｌｓｔｅ
ｉｎ）［ネイチャー　（Ｎａｔ　ｕｒｅ）、２５６゜４
９５−４９７　（１９７５）］が記佐したものであり、
彼らは前もって免疫化したマウスの牌細胞を「薬物」感
受性のマウス骨髄腫細胞に融合することに成功した。こ
のように免疫化し融合した細胞は生体外で生長させかつ
生細胞系統からクローニングして、相同抗体の集団（モ
ノクローナル抗体）を生産する相同細胞の集団を生産す
ることができた。多くの固有の細胞で選択を行いかつ選
択的に１ククローニングすることにより、所望の抗原特
異性をもつ抗体を生産する細胞を獲得しかつ生長させる
ことが可能であった。

この方式で生産されたマウスの抗体は研究および診断の
目的に有用であることがケ証され、そしであるものはヒ
トにおいて治療学的に使用さえされてきた。しかしなが
ら、同様な特異性および再現性を有するヒトまたはヒト
以外の′ｉｉ長動物の抗体をこの方法で得ることができ
るならば、それはヒトの免疫グロブリンの治療において
かなりの発展を含むであろう、これは、また、感作の危
険を減少するであろう、ヒト抗体を生体外で生産すると
いう問題に対するいくつかのアプローチは、試みられて
きたが、これまで大抵不成功に終った。

これらは、次のものを包含する： （ｉ）　　　　ニブスティン−バール（Ｅ　ｐ　ｓ　ｔ
ｓｉｎ−Ｂａｒｒ）ウィルス（Ｅ ＢＹ）を用いる正常のヒトリンパ 球の形質転換、この型の細胞は確 ケするために長い面倒なプロセス を必要としかつクローニングおよ び選択することが究めて困難であ るので、この方法はほとんど成功 しなかった。

ＣＬ　ｉ）　　　正常な（ヒト）リンパ球とヒト骨髄腫
細胞との融合、この方法はマ ウス−マウスハイブリドーマのア プローチに著しく類似するが、ヒ トの系において、わずかに１つの 細胞系統が広く入「可能であり、 そしてこれは有効な融合を妨害す るマイコプラズマで汚染されてい ることがわかったとう問題に直面 する。

（ｉｉｌ）　　＋１常なヒトリンパ球のＥＢＶ−形質転
換ヒトリンホブラストイド （ｌｙｍｐｈｏｂｌａｓｔ　ｏｉ ｄ）Ｂ−細胞系統への融合、これ はこれまで記載されてきた多分最 も信頼性がありかつ再現性がある 方法であるが、それはヒドリンホ ブラストイド細胞類を用いて直面 する基本的な生体外の欠点に悩ま される：それらはクローニングす ることが究めて困難であり、そし て、それらはＢ−細胞分化の由来 においてり１９期の段階を表わすの で、抗体を生産しかつ分泌するそ れらのの能力は真の骨髄腫のそれ より約１０倍低い。

（ｉｖ）　　　ヒトリンパ球のマウス骨髄腫への融合、
この方法はマウス−マウス ハイブリドーマと同・の究めてす ぐれた生体外特性をもつ細胞を生 産するが、このような雑種は固有 の遺伝的不安定性を有するという 欠点をもつ、この１つのとくに面 倒な結果はそれらがヒト染色体を 排出し、そのトに免疫グロブリン のカッパー軽鎖を形成するゲノム が位置するということである。

他の細胞へさらに融合するための親として異種間ハイブ
リドーマ細胞を使用することにより、大きく改良された
安定性をもつハイブリドーマ得ることが可能ということ
［オストバーグ（Ｏｓｔｂｅｒｇ）か、ハイプリドー−
ｖ　（ＨＹＢＲＩＤＯＭＡ）冬、Ｎｏ、４．３６１．１
９８３］およびこれらの異種間ハイブリドーマは染色体
の損失おける安定性の改良についていっそう温和な環境
を提供することが引続いて報告された。

未発ＩＩは、異種四相手細胞へ融合した親の不滅化細胞
からなるハイブリドーマ細胞細胞系統に関し１次いで得
られる不滅化細胞をヒト以外の霊長動物のモノクローナ
ル抗体を生産することのできる細胞へ融合する。この後
者の細胞は異種間ハイブリドーマにおける前記相手細胞
と遺伝的に適合性であるべきである。遺伝的に適合性と
は、種および起源の属に関して関連する細胞に類似する
特性、例えば、染色体の有意な損失を回避し、それゆえ
融合後に所望な程度の安定性を保持するという特性を意
味する。

ここで、このような異種間ハイブリドーマの融合技術よ
るヒト以外の霊長動物のモノクローナル抗体の調製およ
び調製された前記抗体の使用は、モノクローナル抗体を
使用するヒトの治療および診断の応用における有用なア
プローチであることをケ証できると、思われる。ヒト以
外の霊長動物のモノクローナル抗体の調製または単離の
先行の報告は知られていない。

したがって、本発明の他の１−１的は、ヒトの治療およ
び１診断において有用であるヒト以外の＝反動物のモノ
クローナル抗体を発生する。安定な細胞系統を生産する
方法を提供することである０本発明の他の目的は、ヒト
において効果的に使用できるヒト以外の霊長動物のリン
パ球から誘導される免疫グロブリンを提供することであ
る０本発明のこの面に含まれるヒト以外の霊長動物は、
木質的には、エイズ類、例えば、オーガングタン類（Ｏ
ｒｇａｎｇｕｔ　ａｎＳ）、ゴリラ類、またはチンパン
ジー類、およびサル類、例えば、ニューワールドモンキ
ー類（ｎｅｗ　　ｗｏｒｌｄ　　ｍｏｎｋｅｙｓ）、例
えば、セブスモンキー類（ｃｅｂｕｓ　　ｍｏｎｋｅｙ
ｓ）、およびオールドワールドモンキー類（ｏｌｄ　　
ｗｏｒｌｄ　　ｍｏｎｋｅｙＳ）、例えば、カカゲザル
類（ｒｈｅｓｕｓ　　ｍｏｎｋｅｙｓ）を包含する。エ
イズ類およびサル類のうちで、実際的目的に対して、実
験室の条件において用意に取扱えるために１−分に小さ
い動物の使用が好ましいが、この面はすべてのヒト以外
の霊長動物類を包含することを意図することが１４らか
である。

特定の面において、不滅化細胞として選択する異種間ハ
イブリドーマは免疫グロブリンを生産するそれ自体の能
力を失った骨髄腫雑種である。このような異種間ハイブ
リドーマ細胞の１つの例は、骨髄腫細胞とリンパ球との
間のものであろう、適当な骨髄腫細胞の例は、マウスお
よびラットから得られかつ好ましくは免疫グロブリンを
生産しないものである。これらの骨髄１挿はそれら自体
実際に骨髄腫である雑種（例えば、マウス骨髄腫×マウ
スリンパ球）であることができる、このような細胞は、
例えば、マウスＳＰ−２骨髄腫細胞系統である０次いで
、これを、例えば、サルリンパ球に融合してサルモノク
ローナル抗体を生産することができる。

前述のハイブリドーマ（ＨＹＢＲＩＤＯＭＡ）ｌの論文
（ならびに対応する特許出願１例えば。

１９８３年８月ｌＯ口に公告された英国特許出願２，１
１３，７１５Ａ）に記載されているように、不滅化に使
用する異種間ハイブリドーマはそれ以Ｅの融合前に薬物
抵抗性とされ、そしてそれを融合させるリンパ球は好ま
しくは所望物質の改良された生産のために予備感作され
た後に得られる。薬物抵抗性および予備感作の処置にお
いて用いられる方法は、これらの細胞を融合する方法と
同様に、慣用法である。所望の雑種の選択およびクロー
ニングは、また、前述のように慣用法で実施され、そし
て、例えば、１に引用した参考文献に発表されている。

本発明による特定の実施態様において、ＳＰ−２細胞系
統を使用する。それは本来それ目体Ｐ３−Ｘ６３−Ａｇ
系統とヒツジ赤血球に対する抗体を生産するマウス牌細
胞との間のハイブリドーマであり、そして抗体を生産す
るその能力を失っている［Ｃ，Ｆ、Ｍ、シュル？７　（
Ｓｈｕ　１ｍａｎｎ）ら、ネイチ＋−（Ｎａｔｕｒｅ）
、２ヱ１．２６９　　（１９７８）］。

それは、例えば、ＮＩＧＭＳ　　ヒユーマン・ジェネテ
ィック・ミュータントΦセル・リボジタリ−（Ｈｕｍａ
ｎ　　Ｍｕｔａｎｔ　　Ｇｅｎｅｔｉｃ　　Ｃｅ１ｌ　
　Ｒｅｐｏｓｉｔｏｒｙ）ＲｅｆＧＭ　　３５６６９　
　Ａ　　から人ＰＮＴ能である（細胞系統のＵＳ　　Ｄ
ＨＨ３１９８２カタログ参照）、この細胞系統を、慣用
技術により、薬物抵抗性とし１次いで正常のヒト抹消リ
ンパ球と融合する［Ｃ、Ｆ　、　Ｇ　、ガルフレ（Ｇａ
　ｌ　ｆ　ｒｅ）ら、ネイチャー　（Ｎａｔ　ｕ　ｒｅ
）、２６６．５５０（１９７７）］およびＲ，ノウイン
スキー（Ｎｏｗｉｎｓｋｉ）ら、サイエンス（ＳＣＩＥ
ＮＣＥ）ム上没、５３７　（１９８０）］　。

多数の雑種が得られ、そして、はぼ５週間後、急速な生
長を示しかつ抗体を生産しない５つのクローンを選択す
る。これらの細胞を８−アザグアニンに対する抵抗性に
ついて選択し、そして、これらの系統のうちの３つを用
いて、２０ｇｇ／ｍｌの８−７ザグアニンに対して抵抗
性である突然変異体を得ることが可能である。これらの
細胞は同時にハイポキサンチン−アミノプテリン−チミ
ジン（）ＩＡＴ）に対して感受性であり、これはそれら
がハイポキサンチンホスホリボシルトラスフェラーゼを
生産する能力を失っていることを示した。これらの細胞
系統の１つはＳＰＡＺ　　４であり、これは抗体生産性
ハイブリドーマを得るためにそれ以上の融合に使用する
ことができる。

ヒト以外の霊長動物のモノクローナル抗体を生産する本
発明の筒中なハイブリドーマ細胞細胞系統は、また、望
むならばあるいは必要に応じて。

例えば、サルからのそれ以Ｅのリンパ球と、さらに融合
して、なおより安定なあるいは多少異なる所望の特性を
もつ細胞を提供することができる。

次いで１本発明による抗体はヒトにおいて感染性病気、
悪性腫瘍、アレルギーを防除するために使用することが
でき、かつ移植の拒絶を抑制するためにおよびこの分野
において知られている他のＩＪ的、例えば、製剤、例え
ば、ジゴキシンにより引き起らされ１１ｉ性に対して使
用することができる。それらは、また１、珍問の用途、
例えば、キットなどにおいて使用することができる。

本発明に関する細胞系統の型の例は、マウス骨髄腫細胞
およびヒトおよびヒト以外の霊長動物の細胞からなる細
胞系統５例えば、マウス−ヒト異種間細胞からの細胞系
統であり、（マウス×ヒト）×ヒト以外の霊長動物の細
胞１例えば、（マウス×ヒト）×サルハイブリドーマ細
胞細胞系統、または（マウス×ヒト以外の霊長動物）×
ヒト以外の霊長動物の細胞系統１例えば、（マウス×サ
ル）×サルの細胞系統を生産する０本発明に従って提供
されるそれ以１；の細胞系統は、例えば、　［（マウス
×ヒト）×ヒト以外の′ｊ：１反動物］×ヒト以外の霊
長動物の細胞系統１例えば。

［（マウス×ヒト）Ｘセブスモンキー］Ｘセブスモンキ
ーの細胞系統、［（マウス×ヒト）Ｘカカゲザル］Ｘカ
カゲザルの細胞系統、［（マウスＸヒト）×チンパンジ
ー］×チンパンジーの細胞系統および［（マウス×ヒト
）Ｘカカゲザル］×チンパンジーの細胞系統を包含する
。

本発明により生産されるモノクローナル抗体は、慣用法
で治療の応用に配合しかつ投ｉ−することができ、そし
てまた診断に使用するための慣用のキットの構成におい
て使用できる。

次の実施例により、本発明を説明する。

Ｘム轡」 ジゴキシンを２ｍｌの無水エタノール中に溶解し、そし
て２ｍｌの０．１モルの過ヨウ素酸ナトリウムを滴々添
加し、そしてこの混合物を４５分間インキュベーション
する６次いで、６０マイクロリツトルのエチレングリコ
ールを添加する。５分間インキュベーションした後、１
０ｍ１の水中の５０ｍｇのキーホールリンペットヘモシ
アニン（ＫＬＨ）をｐＨ９，５において添加する。　ｐ
Ｈが９．５において安定化したとき、２ｍｌの水中の０
．３ｇのＮａＢＨ４を添加する。生ずる調製物を生理的
食塩水（Ｓａｌｉｎｅ）に対して一夜透析する。

容積０　、５ｍ　１（７）約４ｍｇのＫＬＨ−ジゴキシ
ンヲ、０．５ｍｌの７０インド完全アジユバントと　緒
に乳化する。この乳濁液をセブスモンキー（ｃｅｂｕＳ
　ｍｏｎｋｅｙ）の両方のももに筋肉内注射する。この
第１回のｆｌ射後、動物を同様な酸であるが、この時は
０．５ｍｌのフロインド不完全アジュバント中に乳化し
たＫＬＨ−ジゴキシンで４回促進する。この免疫化後、
試験の出血は、動物がジゴキシンと反応性の抗体を生産
し、この抗体は生体外の研究においてジゴキシンの毒性
を不活性化することが可能であることを示す。

これは、サルの血清の希釈物が、細胞培養において感受
性ヒドリンホブラストイド細胞へのジゴキシン［または
その類自体のウーアバイン（ｏｕｂａｉｎ）］のＩＸｉ
性（致死）作用を中和するという°１９実に注目するこ
とによって示される。動物を２か月間体ＩＦさせた後、
生理的食塩水中の０．５ｍｌのＫＬＨ−ジゴキシンをざ
らに静脈内注射した。

最後の静脈内注射後の：ｔＳ３１１に、細胞を融合のた
め動物から取る。

ａ、　　　５０ｇ１のヘパリン溶液（１０、０００ＵＳ
Ｐ単位／ｍ１）を含有する注射器 に、血液を抹消血管から取る。この血液のリンパ球をパ
ーコール（ＰＥＲＣＯＬＬ・）［７アーマシア壷インコ
ーホ− レーテッド（Ｐｈａｍａｃ　ｉ　ａ　、　Ｉ　ｎｃ、、
Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ、Ｎ。

Ｊ、）］のクッション１．の勾配遠心により精製する。

遠心後、細胞をハングの均衡塩溶液（Ｈａｎｋ’　ｓ　
　ｂａｌａｎｃｅｄ　　５ａｌｔ　　５ｏｌｕｔｉｏｎ
）［ギブコ・ラボラトリーズ（Ｇｉｂｃ。

Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、Ｇｒａｎ ｄ　　ｌ５ｌａｎｄ、Ｎ、Ｙ、、カタログ番号３１０−
４０２０．広く商業的に入ｒ−Ｉｉｆ　を后］で洗浄す
る。

ｂ、　無菌外科技術を使用することにより、リンパ節を
ももの付は根の区域から切除する。このリンパ節を微細
な網目の鋼の網を通してすりつぶして、中細側の懸濁液
を調製する。？ｉ離された細胞をバンクの均衡塩溶液で
洗浄する。

Ｃ１無菌外科技術を使用することにより１部分的牌切除
術を動物について実施する。

この器官を微細な鋼の網を通してすりつぶして、牌断月
から中細側の懸濁液を調製する。この中陰された細胞の
懸濁液をハングの均＆塩溶液で洗浄する。

はぼ２ＸＩＯ’の中陰されたリンパ球を血清不合媒質中
で同様なＩ４のＳＰＡＺ−４骨髄腫細胞［先行技術、例
えば、前述のハイブリドーマ（ＨＹＢＲＩＤＯＭＡ）２
に記載される方法に従って入Ｌ１＋）能である］と混合
し、そして低速度で遠心機中で一緒に沈澱させる。細胞
の沈澱物を、ｐＨ８。

Ｏのハングの均衡塩溶液中の５０％のＰＥＧ−１５００
ｃ７）１．０ｍｌで、１分間処理する。３７℃で１分間
インキュベーションした後、１ｍｌのハングの均衡塩溶
液をゆっくり添加する。さらに１分後、さらに１０ｍ１
のハングの溶液を添加する。細胞を遠心により回収し、
そして２０ｍ１のダルベツコの変性イーグル培地（Ｄｕ
ｌｂｅｃｃｏ’ｓ　　Ｍｏｄｉｆｉｅｄ　　Ｅａｇｌｅ
　　Ｍｅｄｆｕｍ）（Ｎｏ、４３０−２１００、ギブコ
・ラボラトリーズ）［ピロロジー（ＶＩＲＯＬＯＧＹ）
旦、３９６　（１９５９）、ビａｏジー（ＶＩＲＯＬＯ
ＧＹ）↓ヱ、１８５　（１９６０）、組織培養標準委０
会（Ｔｉｓｓｕｅ　　Ｃｕ１ｔｕｒｅＳｔａｎｄａｒｄ
ｓ　　Ｃｏｍｍ１ｔｔｅｅ）、生体外（ＩＮ　　ＶＩＴ
ＲＯ）、Ｖｏｌ、６、ＮＯ１２，９３ページ、２０％の
ウシＪｆｆｉ児血清を含有するおよびＨＡＴ　（ハイポ
キサンチン−アミノプテリン−チミジン）を選択系とし
て使用する］中に懸濁する。

約３ｉｌ！１間後、良１１ｆな生長が培養ウェル（ｗｅ
ｔｌ）中に見られるとき、試験のため１−澄み液を培養
物から取る。エリザ（ＥＬＩＳＡ）技術により、抗原と
してウシ血１青アルブミンン（Ｂ　Ｓ　Ａ）に結合した
ジゴキシン（ＢＳＡ−ジゴキシンはＫＬＨ−ジゴキシン
に類似する方法で生産される）を使用して試験を実施す
る。ウサギの抗ヒトまたは抗サルの免疫グロブリン−ペ
ルオキシダーゼ系を使用して、陽性のクローンを検出す
る。陽性のクローンをＪＩＦ、ｌ（ｓｃａｌｉｎｇ　　
ｕｐ）のため取り１．げ、同時に充填細胞としてマウス
胸腺細胞を使用してマイクロタイター（ｍｉｃｒｏｔｉ
ｔｅｒ）中の限定希釈によりクローニングにする。

大きい数の細胞が入ｒできるとすぐに、クローンを一１
９６℃において液体窒素中で凍結する。

静止培養あるいは最高ｌＯ％のウシ１め児血清を含むダ
クベツコのＭＥＭを使用するローラー培養（ｒｏｌｌｅ
ｒ　　ｃｕｌｔｕｒｅ）において、ハイブリドーマ細胞
系統を生長させることにより抗体を生産する。抗体は典
型的には２０〜５０マイクログラム／　ｍ　Ｉの１ＨＪ
ｆｆで、セファローズ（ＳｅｐｈａｒｏＳｅ）蛋白質Ａ
カラム（ファーマシアーインコーボーレーテッド）の親
和クロマトグラフィーにより、クロマトグラフィーにか
けるべさ物質をこのカラムに適用し、カラムの結合容ｔ
βを飽和させ、そしてこの方ラムをリン酸塩緩衝化生理
的食塩水で洗浄することにより精製する。カラムから結
合しない物質を除去した後、この方ラムを０．５モルの
塩化ナトリウムを含有する０、０５モルのクエン産ナト
リウム（ｐＨ３，０）で溶離する。溶離液を１モルのト
リス−ＨＣｌ、ｐＨ８，０の添加により急速に中和する
。

実施例２ 実施例１の細胞の生産および選択の方法に従って生産さ
れた細胞（細胞は時間超過で免疫グロブリンを発生する
能力を失っている）を２０１Ｌｇ／ｍｌの８−アザグア
ニンの存在下に薬物抵抗性とし、慣用の方式で選択系と
してＨＡＴを使用可能とする０次いで、１！Ｉられる細
胞を免疫化セブスモンキーのリンパ球に融合し、ＩＩＴ
びＨＡＴ−培地で処理した後、■−の実施例１に記載す
るｆ順と同一・のＬ順に従い陽性の細胞培養物を選択す
る。

この罫順に従い、セブスモンキーからの細胞を使用する
融合から３つの抗体がず！Ｉられた。これらのハイブリ
ドーマをそれぞれ７−１，１１−１および１１−３と表
示する。すべての３つの抗体をヒドリンホブラストイド
細胞系統、ＩＭ−９へのジゴキシンの、７１性を阻止す
る能力について試験した。抗体を１１００ＪＬ／ｍｌの
最終濃度で使用すると、次の結果が得られたニ リン酸塩緩衝化生理的　２．９Ｘ１０−”モル食塩水 ７−１　　　　　４．７ＸｌＯ−’モル１１−１　　　
　９．４Ｘ１０−７モル１１−３　　　　２．３Ｘ１０
−７モル７−１抗体を、また、ジギタリスアルカロイド
類の他の種類に対するその特異性について試験した。こ
の特異性の試験の結果をド表中に要約する： ウーアバイ　　２×　　　　　２Ｘ ン　　　　　　　　　　　　　　１０−１　　　　　　
　　　１０−”ジギトキシ　　５　、９Ｘ　　　　２　
、３Ｘン　　　　　　　　　　　　　１０−９　　　　
　　　　１０−８デスラノシド　　２　、３Ｘ　　　　
　ｌ　、　９Ｘ（ｄｅｓｌａ　　　１０−”　　　　　
　１０−’ｎ　ｏ　ｓ　ｉ　ｄ） これらのデータを一緒に考慮すると明らかなように、こ
の方法により生産される抗体は薬物の作用に対して保護
的であり、そしてジギタリスアルカロイド類の場合にお
いて、１つの抗体はアウト−クリニック（ｏｕｔ−ｃｌ
ｉｎｉｃ）患者基準で使用した薬物の２種類（ジゴキシ
ンおよびジギトキシン）をカバーすることができかつ１
種類の非経目的に使用した薬物（デスラノシド）に抗す
ることかでさる。それは他の非経口的薬物（ウーアパイ
ン）に対して活性をもたない。

友ム桝ｌ 実施例１に記載する方法と同様な方法において、ＫＬＨ
−ジゴキシンを成体の雄のチンパンジーにおいて免疫源
として使用する。この抗原を合計５回注射した後、本質
的に２週の間隔を置いた後、最後の対抗量を０．５ｍｌ
のＫＬＨ−ジゴキシン（はぼ４ｍｇの蛋白質）を使用し
て静）派内に役ケ・する、最後の静脈内注射後の６日口
に白液の試料を取り、そして、出血後の１日［１に、市
に概説したＬ順に従いＳＰＡＺ−４骨髄腫細胞系統との
細胞融合に使用する。第６１１に得た試料から、ＣＨ４
−１４およびＣＨ４−２５と表示するＩｇＧ生産性ハイ
ブリドーマを得、これらはそれぞれラムダおよびカッパ
の軽鎖を有する。軽鎖の特性づけは慣用の方法でヒト免
疫グロブリンに対する試薬を用いて行う、このような試
薬は明瞭な結果をかえ、そして反応性はマカクザル（Ｃ
ｙｎｏｍｏｌｇｕｓ　　ｍｏｎｋｅｙ）に対して調製し
た抗サル試薬に対するよりも抗ヒト試薬に対して強い、
これらの（マウス×ヒト）×チンパンジー抗体の両者は
、トの実施例２において述べたセブス（ｃ　ｅ　ｂ　ｕ
　ｓ）抗体１１−１よりもＷＪ′Ａに高いジゴキシンに
対する親和性を有する。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、ヒト以外の霊長動物のモノクローナル抗体を生産す
   る細胞に融合した不滅化細胞からなり、前記不滅化細胞
   は親の不滅化細胞および相手細胞からの融合した異種間
   ハイブリドーマ細胞からなり、前記抗体生産性細胞は前
   記相手細胞と遺伝的に適合性であることを特徴とするハ
   イブリドーマ細胞系統。 ２、前記抗体生産性細胞は異種間ハイブリドーマ細胞の
   親における相手細胞と同一の属である特許請求の範囲第
   １項記載のハイブリドーマ細胞系統。 ３、前記抗体生産性細胞は異種間ハイブリドーマ細胞の
   親における相手細胞と同一の種である特許請求の範囲第
   １項記載のハイブリドーマ細胞系統。 ４、ヒト以外の霊長動物のモノクローナル抗体を生産す
   る細胞はリンパ球である特許請求の範囲第２項記載のハ
   イブリドーマ細胞系統。 ５、ヒト以外の霊長動物のモノクローナル抗体はサルの
   モノクローナル抗体である特許請求の範囲第１項記載の
   ハイブリドーマ細胞系統。 ６、親の不滅化細胞はＳＰ−２細胞系統である特許請求
   の範囲第１項記載のハイブリドーマ細胞系統。 ７、異種間ハイブリドーマ細胞を薬物抵抗性とし、この
   後者の細胞を異種間ハイブリドーマにおける相手細胞と
   遺伝的に適合性である抗体生産性細胞に融合し、そして
   所望の雑種を選択することを特徴とする特許請求の範囲
   第１項記載のハイブリドーマ細胞系統を生産する方法。 ８、所望の雑種の選択をＨＡＴに対する感受性の欠如お
   よびヒト以外の霊長動物のモノクローナル抗体を生産す
   る能力についてのアッセイに基づいて実施する特許請求
   の範囲第７項記載の方法。 ９、ヒト以外の霊長動物のモノクローナル抗体生産性細
   胞と、不滅化細胞および前記抗体生産性細胞と遺伝的に
   適合性の相手細胞からの融合した異種間ハイブリドーマ
   細胞とを、前記細胞の融合を促進する因子と一緒に、栄
   養培地中に含んでなることを特徴とする細胞融合系。 １０、ヒト以外の霊長動物のモノクローナル抗体。 １１、サルのモノクローナル抗体である特許請求の範囲
   第１０項記載の抗体。 １２、（マウス×ヒト）×ヒト以外の霊長動物のハイブ
   リドーマ細胞系統。 １３、（マウス×ヒト以外の霊長動物）×ヒト以外の霊
   長動物のハイブリドーマ細胞系統。 １４、（マウス×ヒト）×サルのハイブリドーマ細胞系
   統である特許請求の範囲第１２項記載の細胞系統。 １５、（マウス×サル）×サルのハイブリドーマ細胞系
   統である特許請求の範囲第１３項記載の細胞系統。 １６、ヒト以外の霊長動物のモノクローナル抗体を生産
   する細胞に融合したトリオマ（ｔｒｉｏｍａ）細胞から
   なり、前記トリオマ細胞はヒト以外の霊長動物のリンパ
   球に融合した不滅化細胞からなり、前記不滅化細胞は親
   の不滅化細胞および相手細胞からの融合した異種間ハイ
   ブリドーマ細胞からなり、前記リンパ球は前記相手細胞
   および前記抗体生産性細胞の両者と遺伝的に適合性であ
   ることを特徴とするハイブリドーマ細胞系統。 １７、前記抗体生産性細胞はリンパ球と同一の属である
   特許請求の範囲第１７項記載のハイブリドーマ細胞系統
   。 １８、リンパ球は相手細胞および前記抗体生産性細胞の
   両者と同一の属である特許請求の範囲第１７項記載のハ
   イブリドーマ細胞系統。 １９、［（マウス×ヒト）×ヒト以外の霊長動物］×ヒ
   ト以外の霊長動物の細胞系統である特許請求の範囲第１
   ６項記載のハイブリドーマ細胞系統。 ２０、［（マウス×ヒト）×チンパンジー］×チンパン
   ジーの細胞系統である特許請求の範囲第１９項記載のハ
   イブリドーマ細胞系統。 ２１、（マウス×ヒト）×チンパンジーの細胞系統であ
   る特許請求の範囲第１４項記載の細胞系統。 ２２、チンパンジーのモノクローナル抗体である特許請
   求の範囲第１０項記載の抗体。