JPS61293384A - Ｄ−パント酸または／およびｄ−パント酸塩の製造方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 以降の説明において、ケトバント酸または／およびその
塩をＫＰＡ、パント酸または／およびその塩をＰＡ、ケ
トバントラクトンをＫＰＬ、　　パントラクトンをＰＬ
と略記する。また、ＰＡ、ＰＬが光学活性を持つ場合は
、ＤＰＡ、ＬＰＡおよびＤＰＬ、ＬＰＬと記した。

本発明は、ＤＰＡの製造方法に関する。

ＤＰＡよシ容易に導くことのできるＤＰＬは、パントテ
ン酸、ＣｏＡ等の重要な合成中間体である。従来、ＤＰ
Ｌは （１）化学的に合成されたＤＬ−ＰＬより光学分割剤を
用いて、Ｄ一体のみを取り出す方法。

（２）ＫＰＬをキラルなリガンドを持つロジウム触媒で
不斉還元する方法が知られているが（１）では、キニー
ネプルシン等の高価な分割剤が必要であること。（２）
では高価な触媒を多量に用いねばならないこと、水素加
圧下の反応であること等の欠点があった。

本発明者らは、工業的に有利なりＰＡの製造方法を種々
検討した結果、微生物の有する還元力を利用してＫ　Ｐ
　ＡをＤＰＡに有利に導き得ることを見出し、本発明に
至った。

即ら、本発明は次式で示すことができる。

ＫＰＡは、化学的に容易に合成できるＫＰＬ（特開昭５
８−１９８４８０）の加水分解により簡単に合成できる
。

菌を培養した培養物、培地あるいは菌体懸濁液にＫＰＡ
を加えると、立体特異的に還元が起こりＤＰＡとな５Ｓ
０この生成物は、酸性条件下で容易に閉環が起こりＤＰ
Ｌとなる。

微生物を用いるＫＰＡよυＤＰＡへの還元は、現在まで
ほとんど報告がない。関連する事項として、わずかにウ
ィルケン（Ｗｉ　１ｋｅｎ　）等が、サツカロマイセス
　セレビシェ、エシェリヒア　コリノ菌体処理物にＫＰ
Ａ還元酵素活性が認められると記しているにすぎない。

ザ　ジャーナルオブバイオロジカルケミストリ−（Ｔｈ
ｅ　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆＢｉｏｌｏｇｉｃａｌ　Ｃｈ
ｅｍｉｓｔｒｙ）　　２５立、　　２３１１−２３１４
本発明者らは、広（Ｔｙｐｅ　Ｃｕ１ｔｕｒｅおよび土
壌よシ、スクリーニングを重ねた結果、ＫＰＡを還元し
て、ＤＰＡを与える菌株が広く存在し、その種類は、カ
ビ、酵母、細菌、放線菌、担子菌、乳酸菌にわたってい
ることを知った。中でも、放線菌特にノカルディア属、
ロドコッカス属、ノカーディオアイデス属、マイコバク
テリウム属、ストレプトスプランギウム属、ストレプト
マイセス属に属する菌株が強い還元能力を示した。

菌の培養条件は使用する菌株により多少異なるが一般的
にいえば炭素源として、グルコース、フラクトース、シ
ェークロース、マルトース等の糖質、エタノール、グロ
パノール等のアルコール類。

炭化水素類、有機酸類等、窒素源として硫酸ア゛ンモニ
ウム、塩化アンモニウム等のアンモニウム塩。

硝酸カリウム等の硝酸塩類、尿素、アミノ酸、ペプトン
、カザミノ酸、コーンスチープリッカー。

ふすま、米ぬか、酵母エキス等、無機塩類として硫酸マ
グネシウム、塩化ナトリウム、炭酸カルシウム、リン酸
−水素カリウム、リン酸二水素カリウム等、他の栄養源
として麦芽エキス、肉エキス。

ファーマメディア等を含む培地が用いられるが、特例、
これらに限定されるものではない。この培地に菌株を接
種し７、好気的または嫌気的に培養する０ 培養温度は、１５〜６０℃が、さらに好ましくは２０〜
４０℃である。また菌は、通常１日ないし４日の培養で
菌を生育させて後、基質のＫＰＡを添加するが、ＫＰＡ
を最初から加えてもよいし、数回に分けて添加する方が
良い結果を与える場合もある。基質のＫＰＡは固体また
は、水溶液あるいは、そのナトリウム塩、カリウム塩、
アンモニウム塩等の形で添加する。

一般に反応は、基質添加後１２〜９６時間、回転振盪下
にて行なう。反応中の培養液または酵素反応液のｐＨは
使用する菌株によシ多少異なるが一般的にｐＨ６〜１０
．好ましくはｐＨ７〜８の範囲が好結果を与える。

一定時間後の培養液または酵素反応液は、ペーパークロ
マトグラフィーを用いることにより、パント酸が生成し
ていることを確認した。ザジャーナルオプバイオロジ力
ルケミストリー（４’ｈｅＪｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｂｉ
ｏｌｏｇｉｃａｌ　Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ）　２４９゜こ
れらの液より遠心分離によシ菌体を取シ除いた上清は、
塩酸等で酸性とした後、加熱す不とＫＰＡおよびＰＡは
、それぞれＫＰＬおよびＰＩ、へと閉環した。

生じたＫＰＬとＰＬの量は、ガスクロマトグラフィー（
ＧＣ）によシ、定量した。さらに、このＰＬは、Ｄ−ク
ロル炭酸メンチルによりジアステレオマーとした後、Ｇ
Ｃで分析する方法、アナリティカルバイオケミストリー
（Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ　Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓ−ｔｒｙ
）　ｕＪ、９−１６（１９８１）により、その中にしめ
るＤＰＬの比率を正確に求めた。その結果、上掲のいず
れの菌株においても生じたＰＬは、すべてＤＰＬである
ことがわかった。

本発明の実施態ｉと一例を説明すると、例えばペプトン
１．５％、酵母エキス０．３Ｘ、肉エキス１９ｃ。

Ｋ２ＨＰＯ４０，３％、　ＮａＣｊ！　０．２％、１．
２−プロパンジオール１４５％よりなるｐ　Ｈ７，０の
液体培地に１ノカルデイア　アステロイデス　ＩＦ０３
３８４の種菌を接種し、２８℃で２日間、回転振盪機上
で好気的に培養した。この培養液よシ遠心分離によシ菌
体を得た。

この湿菌体３ｇ、ケトバント酸１００■および炭酸カル
シウム０．１　ｇよシなるｐＴ（７に調整した溶液１０
−を２８°Ｃで４日間１、回転振盪することにより反応
を行なった。反応液のペーパークロマトグラフィにより
生成物がＰＡであることを確認した。所定の方法によυ
処理後、分析するとＤＰＬ７４ηが生成していた。

反応の酵素液としては、菌体のほかに菌体より公知の処
理方法によシ得られた自該酵素活性画分も利用できる。

例えば、公知の方法で得た固定化菌体、あるいは固定化
酵素も有効である。

固定化に用いる担体としては、カラギーナン。

アルギン酸、寒天、コラーゲン、ゼラチン、ペクチン等
の天然化合物、あるいはまたポリアクリルアミド、ポリ
アクリル酸、エチレンアクリル酸共重合体、光架橋性樹
脂等の合成高分子が利用できる０まだ、ａｃｅｔｏｎｅ
　ｐｏｗｄｅｒやｄｒｙ　ｃｅｌｌに処理した菌体を用
いたり、界面活性剤を添加する方法がよい結果を与える
場合もある。変異処理をほどこした菌体であっても、当
該酵素活性を有する限シ本発明に含まれる。

以下に実施例をあげて本発明を具体的に説明する。

実施例１゜ ペプトン１．５９＜　、酵母エキス０．３　’Ｘ　、肉
エキス１　’Ｘ　、　Ｋ２ＨＰＯ４０，３９に　、　Ｎ
ａＣＸ　Ｏ，２％、１，２−プロパンジオール１６５％
よりなるｐ　Ｈ７，０の液体培地に第１表に示す菌株を
接種し、２８°Ｃで２日間回転振盪機上で好気的に培養
した。この培養液より遠心分離により菌体を得た。この
湿菌体３ｇ。

ケトバント酸１００ηおよび炭酸カル７ウム０．１ｇよ
りなるｐＨ７に調整した溶液１０−を２８℃で２日間、
回転振盪することにより反応を行なった。反応液をペー
パークロマトグラフィーで分析すると、いずれの菌株に
おいてもバント酸が生成していた。所定の方法で閉環後
、分析すると第１表に示す収率で、Ｄ−パントラクトン
およびケトバントラクトンが生じていた。

第　　　１　　　表 実施例２゜ 実施例１．０液体培地に、さらに１％濃度のケトバント
酸を添加して、ｐ　Ｈ７，０に調整した液体培地を用い
、ロドコッカス　エリスロポリス　ＩＦＯ１２５４０を
菌株として、２８℃で５日間回転振盪機上で好気的に培
養した。反応液をペーパークロマトグラフィーで分析す
るとバンド酸が生成していた。

所定の方法で分析すると、Ｄ−バントラクトンおよびケ
トバントラクトンが、それぞれ７７％および２３％収率
で生じていた。

出願人　　製鉄化学工業株式会社 代表者　佐々木　　浩

Claims (4)

【特許請求の範囲】
1. （１）ケトバント酸または／およびその塩を微生物を用
   いて、還元することを特徴とするＤ−バント酸または／
   およびその塩の製造方法。
2. （２）微生物が、ノカルディア（Ｎｏｃａｒｄｉａ）属
   、ロドコッカス（Ｒｈｏｄｏｃｏｃｃｕｓ）属、ノカー
   ディオアイデス（Ｎｏｃａｒｄｉｏｉｄｅｓ）属、マイ
   コバクテリウム（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）属、ス
   トレプトスプランギウム（Ｓｔｒｅｐｔｏｓｐｒａｎｇ
   ｉｕｍ）属およびストレプトマイセス（Ｓｔｒｅｐｔｍ
   ｉｃｅｓ）属に属する微生物よりなる群より選ばれた少
   なくとも１種の微生物である特許請求の範囲（１）記載
   の方法。
3. （３）微生物を用いて還元する際に、培養法を用いる特
   許請求の範囲（１）記載の方法。
4. （４）微生物を用いて還元する際に、培養液より分離し
   た菌体を、新たに調整した基質溶液に添加する特許請求
   の範囲（１）記載の方法。（酵素法）（５）微生物を用
   いて還元する際のｐＨが６〜１０である特許請求の範囲
   （１）記載の方法。