JPS61293998A - デカペプチド - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 用を有ずろ新規なデカベプチドに係る。

技術文献及び特許明細書により、哺乳動物において動脈
血圧の低下を引起こす作用を有するアミノ酸残基数５な
いしｌ３の各種ペプチド（蛇毒から抽出される）が知ら
れている。

ボスロブス・ジャララカ（１３ｏｔｈｒｏｐｓ　ｊａｒ
ａｒａｃａ）種の蛇の毒から抽出されたペプチドの中で
も、ノナペプチドＩ！ＰＰｅ３　（ＴｅｐｒｏＬｉｄｅ
として公知）は強力な降圧剤である。

しかしながら、この化合物は静脈系を介して投与された
場合のみ作用し、経口投与法では不活性である。

イタリー国特許願第４９７２７Ａ／８２（１９３２年１
２月２２日出願）には、ク〔Ｉタルス・アｌ−　ａクス
（　Ｃｒｏｔａｉｕｓａｔｒｏｘ　）種の蛇の毒から単
離された下記構造式Ｈに相当する降圧作用を有する新規
なデカペプチド（ｎ）が開示されている。

ｉＭ造式■ Ｇｌ　ｐ−Ｌｅｕ−Ｔｒｐ−Ｐｒｏ一人ｒｇ−Ｐｒｏ−
Ｇｉｎ−ｌｉｅ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｏｉｌかかる構造式
■で表されるデカペプチドを高収率で合成することは困
難であり、経済的に好ましくなく、大規模での製造には
適していない。

同相での合成におけるこのような欠点の原因は、主とし
て下記の点にある。

ａ）ベブヂド鎖組立の第３工程ＵｊＩ始時における環状
化合物ジケトピペラジン（　（Ｐｒｏ）を環〕の生成、
及び ｂ）アルギニン誘導体の使用（グアニジン部分保護基の
最終的な酸性除去が不十分である）。

発明者らは、デカペプチド（１１）の５位に存在するア
ルギニンをオルニチンと交換することににリ、その生．
理活性を保持する以外に、構造式Ｉｔで表わされる公知
のデカペプチドの調製用前駆体として使用されるデカペ
プチドが得られることを見出した。

さらに、発明者らは、デカペプチド（１１）の７位及び
８位に存在するジペプチドフラグメントＧｌｎ−１１ｃ
をジペプチドフラグメントＩｌｉｓ−Ｖａｌで交換する
ことにより、降圧作用を保（！ｉする以外に、アンジオ
テンシン１をアンジオテンシンＨに変化さ仕る酵素の阻
害に関する顕著な効力を発揮する類似体を得た。

かかるデカペプチドは重合体マトリクス上において固相
で合成され、このような合成法では上記欠点を解消でき
る。

上述の如く、本発明の目的は、下記一般式Ｉで表される
降圧作用を有するデカペプチド及び薬学上許容される塩
又はそのアルキルエステルのアミドを提供することにあ
る。

一般式Ｔ Ｇｌｐ−Ｌｃｕ−Ｔｒｐ−Ｐｒｏ−Ｘ−Ｉ’ｒｏ−Ｙ−
Ｚ−１’ｒｏ−１’ｒｏ−０１１式中、Ｘ＝Ａｒｇ又は
Ｏｒｎ，　Ｙ　＝　ｌｌｉｓ又はＧｌｎ及びＺ−１１ｅ
又はＶｉｌである（ただし、Ｘ＝Ａｒｇの場合には、Ｙ
＝ＩＩｉｓ及びＺ＝Ｖａｌであり、Ｘ＝Ｏｒｎの場合に
は、Ｙ＝にｌｎ及びＺ＝ＩＩｅ，又はＹ＝ｌｌｉｓ及び
Ｚ＝Ｖａｌである）。

上記一般式（１）において、各記号は次の意味を有する
。

Ｇｌｌ）−ビログルタミン酸 Ｌｅｕ−ロイシン ｒ’ｒｏ＝プロリン ’ｒｒｐ＝）リプトフγン ＾ｒｇ−アルギニン １１ｉｓ＝ヒスチジン Ｖａｌ＝バリン １１ｅニイソロイシン ０「ｎ＝オルニチン Ｇｌｎ−グルタミン 本発明の他の目的は、下記の事項を特徴とする一般式ｌ
で表されるデカペプチドの製法を提供することにある。

ａ）　ジペプチド誘導体 Ｆｍｏｃ−７，−Ｐｒｏ−Ｏｌｌ （ここで、Ｚは」二足と同意義である）を予しめ調製ず
ろこと、 ｂ）アルギニン誘導体の代わりに、誘導体Ｆｍｏｃ　−
０ｒｎ　（Ｂｏｃ）　−０１１を使用すること、及び Ｃ）　ヒスチジンの代りに、誘導体 Ｆｍｏｃ−１１ｉｓ（Ｔｒｔ）−０１１を使用すること
。

特に、一般式１においてＸ　＝Ｏｒｎ、　Ｙ　＝Ｇｌｎ
及びＺ＝１１ｅであるデカペプチド（下記構造式Ｉｌｌ
に相当する）の製造では、ジペプチド誘導体 １’ｍｏｃ−ｌ　１ｅ−Ｐｒｏ−０１１を予じめ調製す
る。

構造式１１１ ％式％ このような誘導体を調製することにより、ペプチド鎖組
立の間におけるジケトピペラジン〔（Ｐｒｏ）を環〕の
生成を回避できる。

雄ラットの大腿静脈に注射されたデカペプチド（■１）
は、デカペプチド（ＩＩ）よりも強くかつ長時間持続す
る降圧効果を生じ、最小時２５ａ＋＋ｎ１１ｇ、最大時
２０ｍｍ１１ｇの差圧を示す。

さらに、このデカペプチドは、ブラジキニンの降圧作用
を増強し、脈博調斉作用を発揮する。

デカペプチド（Ｔｒｌ）は、構造式（ＩＩ）で表される
デカペプチドの製造用の有用な前駆体である。

Ｃ，Ｇ、　Ｇｒａｎｉｅｒらの方法〔［ヨーロピアン・
ジャーナル・オブ・バイオケミストリー（Ｅｕｒ、　Ｊ
。

Ｂｉｏｃｈｅｍ、）Ｊ　８２　、２９３　（１９７８）
）に従って、０−メチルイソ尿素を使用して、グアニジ
ル部分をデカペプチド（ＩＩＩ）に導入することによっ
て、７０％以上の収率で簡単にデカペプチド（ｎ）を得
ることができる。

本発明によれば、一般式ｌにおいてＸ＝Ｏｒｎ。

Ｙ＝ｌｌｉｓ及びＺ＝Ｖａｌであるデカペプチド（下記
構造式■で表される）の製造では、 ａ）　ジ・ペプチド誘導体 Ｆｍｏｃ−Ｖａｌ−Ｐｒｏ−Ｏｆｆ を予じめ訳１製し、及び ｂ）ペプチド鎖組立の際、ペプチド誘導体Ｉ’ｍｏｃ−
１１ｉｓ（Ｔｒｔ）−０１１を使用する。

構造式■ Ｇ　ｌｐ　−Ｌｅｕ　−Ｔｒｐ−１’ｒｏ−Ｏｒｎ−Ｐ
ｒｏ−ＩＩ　Ｉｓ　−Ｖａ　Ｉ　−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ　−
０１ｌ誘導体Ｆｍｏｃ−Ｖａｌ−Ｐｒｏ−０１１を予じ
め調製することにより、上述の如く、組立の際の環化の
問題を回避できる。

本発明によれば、上記ジペプチド誘導体は、Ｐａ＋ｏｃ
−Ｖａｌ−０−ＰＰＩ’ （ペンタフルオロフェニルエステル） をＩ’ｒｏ−０１１と縮合させることにより合成される
。

この合成手段により、Ｆｍｏｃ　−（Ｖａ　ｌ　−Ｐｒ
ｏ）　ｔ−０１１の如き不純物及びデカペプチドの調製
で使用されるペプチド誘導体Ｆｍｏｃ−Ｖａｔ−Ｐｒｏ
−０１１の二重アシル化生成物の存在を回避でき、従っ
て、余分のバリン及びブ（Ｊリン残基を含有するペプチ
ド類原体の生成を回避できる。

誘導体１コｍｏｃ−！ｌｉｓ　（Ｔｒｙ）−０１１の合
成及びデカペプチド（１■）の組立におけるその使用に
より、デカペプチド中にｌ１ｉｓ及びＴｒｐｆｌＪＪが
ノ（存することに由来する問題を解消できる。

ベンジルオキシメチル基は、デカペプチドの合成の間ａ
効な保護を与えること及び接触水素化により温和な条件
下で除去されろことから、ヒスチジンのイミグゾール部
分の保護用の選択基と考えられる。

しカシながら、接触水素化によるこの保護基の除去は、
同時に、トリプトファン残基のインドール環の還元をも
生ずる。

ペプチド誘導体 フルオレニルメトキシカルボニルヒスチジン−ＮＩＩＢ
　トリチル（Ｆａ＋ｏｃ−旧ｓ　（Ｔｒｔ）　−０１１
）の合成及び使用により、重合体支持体からペプチドを
分離ずろために５ｈｅｐｐａｒｄ民法（ＩＥ、　ＡＬｈ
ｃｒＬｏｎ　ｒジャーナル・オブ・ケミカル・ソザエテ
イ−（Ｊ、　Ｃｂａｍ。

Ｓｏｃ、）　Ｊ　Ｐｅｒｋｉｎ　Ｉ　、　５３ｇ　（１
９８４）　）を使１【１ずろ際には、酸分解の間にｌ１
ｌｓ残基からの保護基の除去が可能となり、トリプトフ
ァン残基の還元が回避されろ。

この工程では、更に、酸性条件下で不安定な側鎖のず欠
ての保Ｎ基が同時に除去される。デカペプチド（■゛）
は、０−イソメデル尿素によるグアニジル化によって、
収率７０％で下記構造式Ｖで表されるデカペプチドに変
化する。

構造式■ Ｇｌｐ−Ｌｃｕ−Ｔｒｐ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−旧
５−ＶａＬ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−０１１デカペブヂド（［
Ｖ）及び（Ｖ）はいずれも、インビボにおいて降圧作用
を発揮し、ブラジキニンの活性を増強する。

本発明によれば、デカペプチド（１）は、公知の手法に
より、ポリアミド系の重合体マトリクス上において固相
で合成される。

５ｈｅｐｐａｒｄらにより記載された方法（Ｅ、＾Ｌｈ
ｅｒｔｏｎ「ジャーナル・オブ・ケミカル・ソザエテイ
ー」１’ｅｒｋｉｎ　１　、５８３　（１９８１）　）
に従って活性化された樹脂を、°フルオレニルメチルオ
キシカルボニルノルロイシン（Ｆｍｏｃ　Ｎｌ、ｅ）、
０の対称無水物で処理して変性し、ピペリジンの２０％
ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）溶液でＦｍｏｃを除去
した後、ｐ−ヒドロキシメヂルフェノキシ酢酸２，４．
５−）リクロロフェノールでアシル化する。

このように変性した樹脂に、別個に適当な条件下で活性
化せしめた第１のアミノ酸を、その対称無水物としてエ
ステル結合により結合させる。

所望の順序に従って他のアミノ酸を重合体に順次導入し
、アＡご結合の形成完了を、ＩＥ、　Ｋａｉｓｅｒ民法
〔「アナリテイカル・バイオケミストリー（＾ｎａ１．
　Ｂｉｏｃｈｅｍ）　Ｊ　３４．５９５（１９７０））
に従って確認する。

合成終了時、デカペプチドを樹脂から分離し、高速液体
クロマトグラフィーにより精製する。代表的には、かか
る操作は、Ｊｏｂｉｎ　−Ｙｖｏｎ　（登録商標）クロ
マトグラフモデルＭｉｎｉｐｒｅｐを使用し、Ｌｉｃｈ
ｒｏｐｒｏｐ（登録商ｔ’Ｊ］？Ｐ−１８（２０−４０
μ）を充填剤とし、トリフルオロ酢酸０．１％及びＣ１
１３ＣＮ　２８％（容量）を含有する水溶液混合物で溶
出することによって行なわれる。

アミノ酸の中に存在する官能基は、ペプチド合成におい
て使用される公知のものの中から、採用する反応法に応
じて選択される一時的保護基を使用することにより保護
される。

合成された生成物の同定は、プロトン核磁気共鳴スペク
トル分析（ＪＩＮＭＲ）によって行なわれる。

さらにデカペプチドの純度は、逆転用高速液体クロマト
グラフィー法（ＲＰ　−１１［’Ｌｃ）に従って、Ｂｏ
ｎｄａｐａｋ（登録商標）　ｃ　−１８（１０μｍ）を
充填したカラムを使用し、トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）
　０．１％及びＣ１１３ＣＮ　３４−３６％（容量）を
含有する水相で溶出することにより確認される。

アミノ酸の分析は、密封管内において１２０℃、１８時
間で行なわれる６Ｎ塩酸又は３Ｎメタンスルホン酸によ
る酸分解を介して行なわれる。

本発明によるデカペプチドは塩、アミド又はアルキルエ
ステルを生成する。これらも本発明の範囲内に含まれる
。

好ましくは、薬学上許容される無毒性の塩、たとえばカ
リウム又はナトリウム塩及びアミノ酸塩を調製される。

これらの塩又は薬学上許容されない塩も、本発明による
デカペプチドの単離及び精製の段階では使用可能である
。

一般式Ｉで表わされるデカペプチドの有効量及び薬学上
許容される爪体を含有する組成物を投与することにより
、ヒトを含むすべての哺乳動物において、高血圧症が緩
和される。

本発明のデカペプチドの活性は、エチルウレタンで麻酔
したＣ、Ｄ、ｉｌｌの雄ラット（Ｃｈａｒｌｅｓ　−Ｒ
ｉｖｅｒ社）についてインビボで測定される。

動脈血圧及びプラジキニン増強に関する効果は、０．３
ないしｏ、２ｔｇ／体重Ｋｇの屯でデカペプチド（１）
を大腿静脈に注射することにより測定される。

以下の実施例は、本発明を説明するためのものであって
、限定するものではない。

実施例１ Ｒ，１１，Ｂ、°Ｄｅ　Ｌｅｅｒらにより開示された方
法（ルキュイユ・デ・トラヴオー・シミツク・デ・ペイ
μ（Ｒｅｃ、　Ｔｒａｙ、　ＣｈｅＩｌ、　Ｐａｙｓ　
−Ｂａ５）Ｊ　９２　、　（１９７３）　。

１７４〕に従って調製したＢｏｃ−１１ｅ−Ｐｒｏ−０
１１３，２７９（１０モル）を、ＣＩｌ、ＣＬ／　トリ
フルオロ酢酸（Ｔ［’＾）混合物（１：　ｌ　、　ｖ／
ｖ）２０ｉ＋Ｑと、室温（２０−２５℃）において３０
分間反応させた。

この時間の経過後、溶媒を留去して乾固し、残渣をメタ
ノール／エチルエーテル混合物（１：２゜ｖ／ｖ）５０
１１２に再度溶解させ、エチルエーテル（Ｅｔ＊０）２
０Ｊ１１２を添加することにより残渣を沈殿させた。そ
の間、混合物を３時間攪拌し、その後、Ｉｆｆ　ｒＩ！
することなく！夜（約１２時間）静置した。

ついで沈殿物を窒素流下で濾取した。

融点（Ｍ、Ｐ、）１５１−１５２℃の生成物２．６９が
得られた。

このようにして得られた生成物を１０％ＮａｚＣＯ＋溶
液２５ｊＩＱ及びジオキサン２０ｘ（ｌでなる混合物中
に溶解さＵ・た。

この混合物に、０℃で攪拌しながら、ジオキサン９ＩＩ
ＩＱ中に溶解したフルオレニルメヂルクロロホルメーＮ
、５９を約１０分間で滴加した。

混合物を０℃で２時間、１５℃で！時間反応させた。

ついで、混合物をｌＩ＊０５０１ｆ２に添加し、各回Ｅ
ｔ　ｔ０５０ｘＱずつで３回洗浄し、０．ＩＮ　ＩＩｃ
Ｉで酸性化してｐｌ＋３とし、各回ｔ：ｔ、ｏ　１００
１１２ずつで３回抽出した。

分離後、有機抽出相を併わせ、Ｍｇ５Ｏ，で乾燥し、濾
過し、再び乾固させた。

このようにして、〔α〕２５゜＝　７３．２°（ｃ＝１
．５ジメヂルホルムアミド（ＤＭＦ）　）を有する生成
物Ｆｍｏｃ−１１ｓ−Ｐｒｏ−０１１２，７９が得られ
た（収率６０％）。

’ＩＩＮＭＲ分析（ＣＤ５ｓｏ）　　：０．７０−２．
２０　（１３１１，７ＣＨ，ｌｉｅ、　　δＣ１ｂ　　
Ｉｌｅ、　　７Ｃ１１，Ｉｌｅ、　　βＣ１ｌ　ｌｉｅ
、　　βＣ１１ｔ　Ｐｒｏ、　　７ＣＩｌ！　Ｐｒｏ）
。

３．５５　（２＋１．　　δＣＩ［２Ｐｒｏ）、　　３
．８５−４．５０（５１１，αｃＩＩＰｒｏ、　　αＣ
１ｌ　　Ｉｌｅ、　　Ｃ１１ｔ　Ｆｌｌｏｃ、　　Ｃ１
ｌ　Ｆｍｏａ）、　　７．１０−８゜００（９＋１．Ｃ
０ＮＩＩ　　φ）。

実施例２ Ｎ、Ｎ・−エチレン−ビス−アクリルアミドで架橋した
ポリジメヂルアクリルアミドーコーアクリロイルサルコ
シンメチルエステルの小球でなる重合体支持体０．５ｇ
を１．２−ジアミノエタンで活性化させた。

このようにして活性化させた樹脂を（Ｐｍｏｃ　ＮＬθ
）、ＯＯ，６２０９（０，９ミリモル）と反応させ、つ
いで、ピペリジン（２０％ＤＭＦ中）でＦｍｏｃを除去
した後、ｐ−ヒドロキシメチルフヱノキシ酢酸２，４．
５−）ＩＪクロロフェノール０．３２５１？（０，９ミ
リモル）でアシル化した。

上記の如く変性した樹脂は実質的にノルロイシン０．５
５ミリモル／ｇを含有する。

変性した樹脂を、Ｎ−メチルモルホリン０．９ミリ ９　（０．０９ミリモル）の存在下、ＤＭＦＢＪＩＩ２
に溶解させた（Ｆｍｏｃ　Ｐｒｏ）ｔｏ　０．５９１ｇ
（０．９ミリモル）により、２〇−２５℃、３０分で処
理して第１のアミノ酸とのエステル結合を形成せしめた
。

つづいて、後述の第１表に示す順序で、かつ後述の第２
表に示す処理及びアシル化反応の１つに従って、重合体
に他のアミノ酸を順次導入した。

なお、デカペプチドの合成にあたっては、Ｂｅｃｋｍａ
ｎ（登録商標）モデル９９０Ｂ自動合成器を使用し、そ
の後、第２表に示すアシル化反応を行なった。

以下の如く操作することにより、アシル化反応前に、予
じめ対称無水物を生成した。

すなわち、アミノ酸誘導体１．８ミリモルを、Ｃｌ１ｔ
Ｃ１＊　２０ｘ（ｌ中において室温でＮ．Ｎ’　−ジシ
クロへキシルカルボジイミド０．１８５９（０．９ミリ
モル）と１０分間反応させ、生成したジシクロヘキシル
尿素を濾去し、ＣＩＬＣｌｔを蒸発させる。

このようにして得られた対称性無水物ヲＤＭＦ　ＢｘＱ
中に溶解させ、アシル化に使用した。

各アシル化反応において、アミド結合生成の完了を、Ｋ
ａｉｓｅｒ氏法（Ｅ、　Ｋａｉｓｅｒｒアナリティカル
・バイオケミストリーＪ　３４５９５（１９７０））に
従って樹脂のサンプルをニンヒドリンと反応させること
により確認した。

最後のアミノ酸を付加仕しめた後、樹脂をエタンジオー
ルの１０％（Ｖ／Ｖ））リフルオロ酢酸溶液２゜ｚＱ中
に２時間懸濁化させた。

ついて　窒素下での濾過により、樹脂を反応混合物から
分離し、樹脂をＩＩ、０．２０３１１Ｊで３回洗浄し、
濾過した。併わせた濾液を、各回Ｅｔ＊０５ＯｘＱずつ
で４回抽出した。

ついで、水相を留去せしめ、ｍ製ペプチド（Ｉ［［）２
４０μモルを回収した。

得られたペプチドを水に溶解し、各々ペプチド１０μモ
ルを含有するフラクションを、Ｊｏｂｉｎ−Ｙｖｏｎモ
デルＭｉｎｉＰｒｅｐクロマトグラフィーを使用し、Ｌ
ｉｃｈｒｏｐｒｅｐ　ＲＰ　−１８（２０−４０μｍＸ
Ｍｅｒｃｋ社）を充填し、ＩＩ、０７２％及びＣＩｌ、
ＣＮ　２８％でなり、ＴＦＡ　０．１％を含有する溶液
で溶出することにより、高速液体クロマトグラフィー法
に従って処理した。

各クロマトグラフィー処理液について、蒸発及び凍結乾
燥を行なったところ、ペプチド６．６μモルが単離され
た。

６ＮＩＩＣＩを使用する酸分解によるアミノ酸の分町 ２　Ｇｌｕ　２．１０；　４　Ｐｒｏ　４．０６；　ｌ
　Ｉｌｅ　Ｏ，９４；　１０ｒｎ１．００３；　Ｉ　Ｌ
ａｕ　１．００゜２　Ｇｌｕ　２．１０；　４　Ｐｒｏ
　３．８０；　Ｉ　ＩＩｓ　１．ＯＬ；　１０ｒｎ１．
０６：　ｌ　Ｔｒｐ　Ｏ，９３；　ＩＬｅｕ　１．００
゜ペプチドが純粋であることを、８ｏｎｄａｐａｋ　Ｃ
−１８（１０μｍＸＥ、　Ｍｅｒｃｋ社）を充填した直
径０．５ＣＩ１１％長さ１０ｃｍ＋のカラムを使用し、
ＴＦＡ　０．１％及びＣ！ｌ５ＣＮ　３４％（容量）を
含有する水相によって溶出を行なう高速液体クロマトグ
ラフィーにより確認した。

実施例３ 実施例２で得られた化合物（Ｊｌｌ）　５．９４μモル
を０．５Ｍ　Ｏ−メチルイソ尿素ＳｘＱ中に溶解し、０
．０５Ｎ　　Ｎａ０ＩｉでｐＨｉｏとした。

溶液を室温に２０時間維持した。

この時間の経過後、減圧下で２゜５ｊＩＱとなるまでｄ
１縮した溶液をＴＩ’八で酸性化してｐｌ＋　３．５と
し、最後に、Ｌｉｃｂｒｏｐｒｃｐ　ＲＰ−１８（２０
−４０μｍ）樹脂（Ｍｅｒｃｋ社）を充填したＪｏｂ＋
ｇ　−ＹｖｏｎモデルＭｉｎｉｐｒｅｐクロマトグラフ
ィー及び溶出剤としてＩＩ、０−ＣＩＩＯＣＮ−ＴＦＡ
（７５：　２５　：　０．１）混合物を使用して、高速
液体クロマトグラフィーに従って処理した。

ペプチドに相当するフラクションを蒸発、凍結乾燥さＵ
・たところ、ペプチド（ｎ）４．３２μモルが得られた
（収率７２．７％）。

６ＮＩＩＣＩを使用する酸分解によるアミノ酸の分ネ丘 ２　　Ｇｌｕ　　２．１０；　　４　　Ｐｒｏ　３．７
８；　　ｌｉｅ　　Ｏ，９１；　　ｌ　　ＡｒｇＯ，９
９：　　　Ｉ　　Ｌｃｕ　　１．００゜２　　Ｇｌｕ　
　２．１０：　　４　　Ｐｒｏ　　３．８５；　　ｌ　
　ｌｉｅ　　Ｏ，９９；　　１へｒｇ　　Ｑ、９３；　
　　ｌ　　Ｔｒｐ　　Ｑ、９２；　　　ｌ　　Ｌｅｕ　
　１．００゜ペプチドが純粋であることを実施例２の記
載に従って確認した。

実施例４ １４．　Ｋ１５ｒａｄｕｌｙらにより開示された方法〔
「合成（Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ）Ｊ　３２５（１９８３）
　）に従って調製したフルオレニルメトキシカルボニル
バリルプロリン・ペンタフルオロフェニルエステル３．
４１８９（７ミリモル）を、プロリン０．８０５９（７
ミリモル）及びトリエチルアミンｌ　、　９ｘＱを含有
するＤＭＦ　ｌｏｇｉｃ中に溶解した。

得られた混合物を攪拌しなから２０−２５℃に１０分間
維持した。

溶媒を留去して乾固し、残渣をクロロホルム５ロついで
、混合物を、各回ＩＮ　ｌｌＣｌ　５０１１２ずつで３
回及び各回１１ｔ０　１０ｘＱずつで２回洗浄した。

有機抽出液を併わせ、Ｍｇ５Ｏ．で乾燥し、濾過し、最
後に回転蒸発器モデルＢＬｌｅｈｉ　ＥＬ１３０で溶媒
を留去して、乾固した。

このようにして粗生成物４．７ｇが得られた。

この生成物を酢酸エチル／エチルエーテル（ＥＬＯＡ’
Ｃ／　ＥｔｔＯ）（１　：　３　、　ｖ／　ｖ）混合物
２０峠中に溶解し、ヘキ°サン５０ｚＱを添加して沈殿
を開始させ、４℃に２時間放置した。デカンテーション
により沈殿物０．５ｇを分離し、Ｔ．Ｌ．Ｃ．分析した
ところ、沈殿物は２種類の生成物で構成されていること
がわかった。

一方、母液に、約５分間でヘキサノ２５０３！１２を滴
加し、得られた液から、濾過後、　〔α）　５’８９　
−２５。

５８、２°（ｃ＝１．５　Ｄ肝）を有する固状の白色沈
殿２．８９が得られた（収率６４．１％）。

夏１１ＮＭＲ　　分析（ＣＤＣｌ２）：δ　１，９５　
（ｄ．　　６ｔｌ，　Ｃ１１．　Ｖａｌ）、１．５０−
２．３５　（５１．１。

β　Ｃ１１．　　Ｐｒｏ，　　　７　　　Ｃ１１．　　
Ｐｒｏ．　　β　Ｃ１ｌ　　Ｖａｔ）、　　３．６３（
ｍ．２１−１，　　δ　ＣＩｌ＊　Ｐｒｏ）、　　３．
９０−４．５０　（５．Ｌ７，　　Ｃ１ｌＣ１１Ｐ，　
　ＣＩＩ＊　Ｆｍｏｃ．ａ　　Ｃ１ｌ　Ｖａｌ，　　ａ
　　Ｃ１ｌ　Ｐｒｏ　）。

７、１０−８．０　（９１１、φ，　　ＣＯＮ！Ｉ）、
　　１２．００（ｂｒｏａｄ　ｓ．　１１−［　、　　
Ｃ００Ｉ＋） 実施例５ Ｇ．Ｃ．　５ｔｅｌａｋａｔｏｓら〔［ジャーナル・オ
ブ・アメリカン・ケミカル・ソサイエティ−（Ｊ．八ｍ
．　Ｃｈｅｍ。

Ｓｏｃ．）　Ｊ　８１，　２８８４（１９５９）　）及
びＹｏｎ　Ｇｕｎｔｅｒ　Ｆｏｓｓｅ及びＶ．　Ｋｒｙ
ｃｈｖｓｋｉ　（　ｒｌ．　Ｐｒａｋｔ．　Ｃｈｅａｐ
．　Ｊ　１１　３１２。

１０９７（１９７０）　）の報告に従って得たＮ　”−
（Ｔｒｔ］ｌ１ｓ−０１１　２．４６１９　（６．２ミ
リモル）を、１０％Ｎａ，Ｃｏ．溶液３０ｒｘＱ及びジ
オキサン２５次（２でなる混合物中に溶解させた。この
溶液に、ジオキサン２０ｙｒ（ｌに溶解したフルオレニ
ルメチルクロロホルメート　２．１ｇ（８．１ミリモル
）を添加した。

ついで、反応混合物を０℃に１時間、室温に２時間維持
した。

溶媒を留去して乾固し、残渣をＩＩｚＯ　２００ｘＩ２
中に再び溶解させた。

水溶液を、各回Ｅｔ！０　２０３１（２ずつで３回洗浄
し、酸性化してｐ１１６とし、各回ＥｔＯＡｃ　１００
ｚ１２ずつで３回抽出した。

分離した有機抽出液を併わせ、Ｍｇ５Ｏ＋で乾燥し、濾
過し、減圧下で濃縮して乾固した。

Ｍ．Ｐ．　＝　１８５−　１８８℃を有するスポンジ状
固形物３、４５９が得られた（収率８８．９％）。

この生成物をＥｔａ／　ｒ，ｔ＊Ｏ（　１　：　４　、
　ｖ／ｖ）混合物から再結晶させて精製したところ、　
〔α：ｌ　５８９−２５°　− 十１．５°（ｃ＝１．５，無水エタノール）、Ｍ．Ｐ．
−１９２−１９７℃を有する純粋な生成物２．４５ｇが
得られた。

’ＩＩＮＭＲ分析（ＣＤ３ＳＯ）　： δ２．９２（ｍ．　２１１，βＣ１１．　！ｌ１ｓ）、
　３．８５−４．５０（４１１。

Ｃ１１．　Ｐｍｏｃ，　Ｃｌｌ　Ｆｍｏｃ，　ａ　Ｃ１
ｌ　１ｌｉｓ）、　６．７５−８．００（２４）Ｉ，　
Ｃ１ｌ　ｌ１ｉｓ，　Ｃ０ＮＩＩ，φ）。

実施例６ （化合物（■））の合成 実施例２と同様に反応を行なったところ、終了時、ノル
ロイシン０．８１ミリモル／９を含有する変性樹脂が得
られた。

第３表に示す順序に従って、重合体にアミノ酸を順次導
入し、つづいて第２表に示ずアシル化を行なった。

粗製ペプチド２２０μモルが得られ、ついで実施例２と
同様に高速液体クロマトグラフィー処理し、蒸発し、凍
結乾燥したところ、ベプヂド７．２μモルが得られた。

６ＮＩＩＣＩを使用する酸分解によるアミノ酸分析ｌ　
Ｇｌｕ　１．ｌＱ；　４　Ｐｒｏ　４．２１；　Ｉ　Ｖ
ａｌ　１．０５；　ｌ　ｌ１ｉｓ及び１　０ｒｎ　（測
定不能）：　Ｉ　Ｌｅｕ　１。

３Ｎメタンスルホン酸を使用する酸分解によるアミノ酸
分析 ｌ　Ｇｌｕ　１．１０；　４　Ｐｒｏ　４．１８；　Ｉ
　Ｖａｔ　１．０６；　ｌ　ｌ１ｉｓ及びｌ　Ｏｒｎ　
（測定不能）；　Ｉ　Ｔｒｐ　Ｏ，９４：　Ｉ　Ｌｅｕ
　ｌ。

ベブヂドが純粋であることを、実施例２に従って確認し
た。

実施例７ 実施例゛６で得られた化合物（１ｖ）４．２μモルを使
用して、実施例３と同様にして合成を行なった。

ペプチドに相当するクロマトグラフィーのフラクション
を蒸発させ、凍結乾燥したところ、ペプチド２．９８８
モルか単離された（収率７１％）。

ＧＮＩＩＣＩを使用する酸分解によるアミノ酸分析ｉ　
Ｇｌｕ　１，０５；　４　Ｐｒｏ　３．９７；　ｌ　Ｖ
ａｌ　Ｏ，ＨＨ１１１１ｇ＋、０４：　ｌ　Ａｒｇ　Ｏ
，９７；　Ｉ　ＬＱｕ　ｌ。

３Ｎメタンスルホン酸を使用する酸分解によるアミノ酸
分析 ｌ　Ｇｌｕ　１，０６；　４　Ｐｒｏ　４．０９；　Ｉ
　Ｖａｔ　Ｏ，９９：　ｌ　ｌ１ｉｓ１、Ｑ；　ｌ　Ａ
ｒｇ　Ｏ，９５；　ｌ　Ｔｒｐ　Ｏ，９３；　ｌ　Ｌｅ
ｕ　１゜１ｉｉｊ記の如く液体クロマトグラフィーによ
り、ただし溶離剤をＣＩｌ、ＣＮ　４６％（容量）で構
成して、ペプチドが純粋であることを確認した。

実施例８ 動脈血圧に関するデカペプチドの効果 体重２００−３００ｇのＣ，Ｄ、雄ラット（Ｃｈａｒｌ
ｅｓ　Ｒ３ｖｅｒ社）５匹をエチルウレタン（１，７５
９／Ｋｇ腹腔内投与）により麻酔して使用した。

気管カテーテルを挿入した後、右側頚動脈を取出しカニ
スーレにより血圧変換器１！ｅｗｌｅｔｔ−Ｐａｃｋａ
ｒｄモデル１２８０に接続した。

取出した左側頚動脈から、動脈流ｍを電磁流ｍ計Ｂ　ｉ
ｏｔ　ｒｏｎｅｘ　（登録商標）で測定し、血圧の経時
変化（ｄｐ／ｄｔ）、電気心音曲線（ＥＣＧ）及び脈搏
（ＢＰＭ）を前記ＨｃｖｌｅＬｔ　−Ｐａｃｋａｒｄポ
リグラフで記録した。

０．３−０．２ｖｇ／　Ｋ９体重の用量で左大腿静脈に
注射することにより本発明によるデカペプチドを従来の
デカペプチド（ｎ）と比較テストした。

降圧作用及び持続時間に関する結果を第４表に示した。

第４表から明らかな如く、デカペプチド（Ｉｎ）は、従
来のデカペプチド（［１）より６強くかつ持続時間の長
い降圧作用を有する。

実施例９ ブラジキニン増強剤としてのデカベプチｉ果Ｃ，Ｄ、雄
ラット（Ｃｈａｒｌｅｓ　＝Ｒｉｖｅｒ社）を実施例８
と同様に処置し、ブラジキニンによるテストに供した。

ブラジキニンは、大腿静脈に注射された際・アンジオテ
ンシン変換酵素（ＡＣＥ）によって肺循環レベルで急速
に劣化されるため、迅速ではあるが持続性に乏しい降圧
作用を生ずる生理活性ペプチドである。

ブラジキニンの投与直後に、右大腿静脈に注射すること
により、本発明のペプチドを従来のデカペプチドと比較
テストシた。

゛ブラジキニン増強効果及びその持続性に関する結果を
第５表に示した。

第　　１　　表 １）　Ｆｍｏｃ　ｔｉｅ−Ｐｒｏ　　　　４ｂ２）　Ｆ
ｍｏｃ−Ｇｌｎ　　　　　４ｃ３）　Ｆｍｏｃ　　Ｐｒ
ｏ　　　　　　　　　　　　　　　　４ａ４）　Ｎ　　
−Ｆｍｏｃ、Ｎδ−［３ｏｃ　Ｏｒｎ、　　　　　４ａ
５）　　Ｆｍｏｃ　　Ｉ’ｒｏ　　　　　　　　　　　
　　　　　４ａ６）　　Ｆｍｏｃ　Ｔｒｐ　　　　　　
　　　　　　　　　　４ａ？）　　Ｆｍｏｃ　１．ｃｕ
　　　　　　　　　　　　　　　　４ａ８）　Ｆｍｏｃ
　Ｇ１％ｐ　　　　　　　　　　　　　４ｄ第　　２　
　表 重合体」二での固相合成に関する操作法１）ＤＭＩ’に
よる洗浄　５回 ２）ピペリジンの２０％ＤＭＦ溶液による処理３）ＤＭ
Ｐによる洗浄　１０回 ４ａ）対称無水物（０，９ミリモル）によるアシル化ア
シル化時間＝６０分 ４ｂ）ヒドロキシベンゾトリアゾールエステル（０，９
ミリモル）及びＤＣＣによるアシル化アシル化時間＝２
４０分 ４ｃ）　ｐ−ニトロフェニルエステル（０，９ミリモル
）によるアシル化 アシル化時間＝６Ｑ分 ４ｄ）ペンタクロロフェニルエステル（０，９ミリモル
）によるアシル化 アシル化時間＝６０分 ５）ＤＭＦによる洗浄　５回 第　　３　　表 １）　Ｆａ＋ｏｃ　Ｖａｔ−Ｐｒｏ　　　　４ｂ２）　
Ｎａ−Ｆｍｏｃ、　Ｎ”−Ｔｒｐ　ｌｌｌ５　　　４ａ
３）　Ｆｍｏｃ　Ｐｒｏ　　　　　４ａ４）　Ｎ　　−
Ｆｍｏｃ、　Ｎａ−Ｂｏｃ　Ｏｒｎ　　　　４ａα ５）　Ｆｍｏｃ　Ｐｒｏ　　　　　４ａ６）　Ｆｍｏｃ
　Ｔｒｐ　　　　　４ａ７）　Ｆｍｏｃ　Ｌｅｕ、　　
　　　４ａ８）　ＦＬＩＩｏｃ　Ｇｌｐ　　　　　４ｄ
第　　４　　表 ｕ　　（０，３ｍｇ／Ｋｇ）　　　　ｔｏ（分）　　　
１５（ａｕａｌｌｇ）　１５（＋ｎ＋＋＋ｌＩｇ）（対
照） ＩＩＩ　　（０，３ｍｇ／Ｋｇ）　　　＞ｔｏ　　　　
　２０　　　　２５ＩＶ　（０，２ｍｇ／に５Ｆ）　　
　＜１０　　　　２０　　　　２５Ｖ　　Ｃ０，２Ｒ９
７に９）＜１０　　　　１５　　　　１５ＩＩ　　（０
，３ｘ９／Ｉｎ）　　　　１０（分）　　　１５（ａｕ
ａｌｌｇ）　１５（ｍｍｌ１ｇ）ｍ　　Ｃ０，３ｍｇ７
に９）　　　　９０　　　　１５　　　　１５Ｎ　　（
Ｑ、２ＪＥ９／に９）　　　　４５　　　　２５　　　
　３０Ｖ　　（０，２ｆｆｇ／にｆ）　　　　３０　　
　　１５　　　　３Ｇ（ばか１名）

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １　一般式 I Ｇｌｐ−ｌｅｕ−Ｔｒｐ−Ｐｒｏ−Ｘ−Ｐｒｏ−Ｙ−Ｚ
   −Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−ＯＨ（式中、Ｘ＝Ａｒｇ又はＯｒｎ
   、Ｙ＝Ｈｉｓ又はＧｌｎ及びＺ＝Ｉｌｅ又はＶａｌであ
   り、ただし、Ｘ＝Ａｒｇの場合には、Ｙ＝Ｈｉｓ及びＺ
   ＝Ｖａｌであり、Ｘ＝Ｏｒｎの場合には、Ｙ＝Ｇｌｅ及
   びＺ＝Ｉｌｅ、又はＹ＝Ｈｉｓ及びＺ＝Ｖａｌである）
   で表わされるデカペプチド。 ２　構造式 Ｇｌｐ−Ｌｅｕ−Ｔｒｐ−Ｐｒｏ−Ｏｒｎ−Ｐｒｏ−Ｇ
   ｌｎ−Ｉｌｅ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−ＯＨ （ここで、アミノ酸はすべてＬ−配置を有する）で表わ
   される特許請求の範囲第１項記載のデカペプチド。 ３　構造式 Ｇｌｐ−Ｌｅｕ−Ｔｒｐ−Ｐｒｏ−Ｏｒｎ−Ｐｒｏ−Ｈ
   ｉｓ−Ｖａｌ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−ＯＨ （ここで、アミノ酸はすべてＬ−配置を有する）である
   表わされる特許請求の範囲第１項記載のデカペプチド。 ４　構造式 Ｇｌｐ−Ｌｅｕ−Ｔｒｐ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｈ
   ｉｓ−Ｖａｌ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−ＯＨ （ここで、アミノ酸はすべてＬ−配置を有する）で表わ
   される特許請求の範囲第１項記載のデカペプチド。 ５　一般式 I Ｇｌｐ−Ｌｅｕ−Ｔｒｐ−Ｐｒｏ−Ｘ−Ｐｒｏ−Ｙ−Ｚ
   −Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−ＯＨ（式中、Ｘ＝Ａｒｇ又はＯｒｎ
   、Ｙ＝Ｈｉｓ又はＧｌｎ及びＺ＝Ｉｌｅ又はＶａｌであ
   りただし、Ｘ＝Ａｒｇの場合には、Ｙ＝Ｈｉｓ及びＺ＝
   Ｖａｌであり、Ｘ＝Ｏｒｎの場合には、Ｙ＝Ｇｌｎ及び
   Ｚ＝Ｉｌｅ、又はＹ＝Ｈｉｓ及びＺ＝Ｖａｌである）で
   表わされるデカペプチドの製法において、ペプチド鎖の
   組立にあたり、 ａ）一般式 Ｆｍｏｃ−Ｚ−Ｐｒｏ−ＯＨ （ここで、Ｚは前記と同意義である）で表わされるジペ
   プチド誘導体、 ｂ）アルギニン誘導体の代わりに、構造式 Ｆｍｏｃ−Ｏｒｎ−（Ｂｏｃ）−ＯＨ で表わされる誘導体、及び ｃ）ヒスチジンの代りに、構造式 Ｆｍｏｃ−Ｈｉｓ（Ｔｒｔ）−ＯＨ で表わされる誘導体、 を使用することを特徴とする、デカペプチドの製法。 ６　一般式 I Ｇｌｐ−Ｌｅｕ−Ｔｒｐ−Ｐｒｏ−Ｘ−Ｐｒｏ−Ｙ−Ｚ
   −Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−ＯＨ体中、Ｘ＝Ａｒｇ又はＯｒｎ、
   Ｙ＝Ｈｉｓ又はＧｌｎ及びＺ＝Ｉｌｅ又はＶａｌであり
   、ただし、Ｘ＝Ａｒｇの場合には、Ｙ＝Ｈｉｓ及びＺ＝
   Ｖａｌであり、Ｘ＝Ｏｒｎの場合には、Ｙ＝Ｇｌｎ及び
   Ｚ＝Ｉｌｅ又はＹ＝Ｈｉｓ及びＺ＝Ｖａｌである）で表
   わされるデカペプチド及び薬学上許容される担体を含有
   してなる、高血圧症治療薬。