JPS6150990A - α―アミラーゼ測定用基質溶液 - Google Patents
α―アミラーゼ測定用基質溶液Info
- Publication number
- JPS6150990A JPS6150990A JP17349284A JP17349284A JPS6150990A JP S6150990 A JPS6150990 A JP S6150990A JP 17349284 A JP17349284 A JP 17349284A JP 17349284 A JP17349284 A JP 17349284A JP S6150990 A JPS6150990 A JP S6150990A
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- Japan
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- glycoside
- substrate
- nonionic surfactant
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- Saccharide Compounds (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
（産業上の１・ｕ用分野ン
本発明は安定な配糖体組成物に関するものであシ、さら
に詳しくに共役酵素法を利用するα−アミラーゼ活性測
定試薬の基質として有用な配糖体に関するものである。
に詳しくに共役酵素法を利用するα−アミラーゼ活性測
定試薬の基質として有用な配糖体に関するものである。
（従来の技術）
血清、尿、膵液等の体液を対象とするα−アミラーゼ活
性の６１１１足は、臨床篩断上重要な意義を有しており
、特に急性或は慢性の膵炎、膵臓癌、更には流行性耳下
腺炎等の鑑別診断に肖っては必須の測定項目となってい
る〇 従来、提案されているα−アミラーゼ活性の測定法の中
で共役酵素法が最近注目されている。共゛役酵素法とし
ては、特に特開昭５３−１１０９２号公報、特開昭５４
−２５８９３号公報、特開昭５４−５１８９２号公報に
開示されているようなオリゴ循の還元性末端にｐ−ニト
ロフェノール、４−メチルウンベリフェロンを代表とす
る吸光性及び感光性のフェノール性ヒドロキシル基を有
する化合物がグリコシド結合した配糖体を基質として用
いる方法が特に優れ、実用化ｉｎている。また％開餡５
６−３５９９８号公報に開示されているようなオリゴ、
塘の還元性末端に２．４−ジクロロフェノール等のフェ
ノール性ヒドロキシル基を有する化合物でろって、例え
ば４−アミノアンチピリン等と酸化縮合して有色色素全
生成するものがグリコシド結合し几オリゴ糖アグリコン
として用いる方法も実用化てれている。
性の６１１１足は、臨床篩断上重要な意義を有しており
、特に急性或は慢性の膵炎、膵臓癌、更には流行性耳下
腺炎等の鑑別診断に肖っては必須の測定項目となってい
る〇 従来、提案されているα−アミラーゼ活性の測定法の中
で共役酵素法が最近注目されている。共゛役酵素法とし
ては、特に特開昭５３−１１０９２号公報、特開昭５４
−２５８９３号公報、特開昭５４−５１８９２号公報に
開示されているようなオリゴ循の還元性末端にｐ−ニト
ロフェノール、４−メチルウンベリフェロンを代表とす
る吸光性及び感光性のフェノール性ヒドロキシル基を有
する化合物がグリコシド結合した配糖体を基質として用
いる方法が特に優れ、実用化ｉｎている。また％開餡５
６−３５９９８号公報に開示されているようなオリゴ、
塘の還元性末端に２．４−ジクロロフェノール等のフェ
ノール性ヒドロキシル基を有する化合物でろって、例え
ば４−アミノアンチピリン等と酸化縮合して有色色素全
生成するものがグリコシド結合し几オリゴ糖アグリコン
として用いる方法も実用化てれている。
（発明の解決しようとする問題点）
法によるα−アミラーゼ活性測定法では、基質の溶液安
定性が十分なものではなく、数日ないし数週間にわｍっ
て使用する場合、保存中にシいて基質が分解して試薬ク
ランクの上昇、更には基質量不足金主ずることがある。
定性が十分なものではなく、数日ないし数週間にわｍっ
て使用する場合、保存中にシいて基質が分解して試薬ク
ランクの上昇、更には基質量不足金主ずることがある。
Ｃ問題点七屏決するｔめの手段ノ
本発明者らは基質を含む溶液の安定化を計る目的で種々
検討したところ、特定濃度のノニオン界面活性剤全配合
すると基質が著しく安定化すること全見出し、本発明に
到達し几。
検討したところ、特定濃度のノニオン界面活性剤全配合
すると基質が著しく安定化すること全見出し、本発明に
到達し几。
すなわち本発明は全組成物に対して０．２〜１００１９
／ ｌＩｅの配砧体および全組成物に対して０．２容
量−以上のノニオン界面活性剤を含有する緩衝液又は水
からなることを特徴とする安定な配糖体組成物である。
／ ｌＩｅの配砧体および全組成物に対して０．２容
量−以上のノニオン界面活性剤を含有する緩衝液又は水
からなることを特徴とする安定な配糖体組成物である。
本発明における配砧体は、繰返し皐位数が１〜１０であ
るマルトオリゴ糖の還元性末端ヒドロキシ基に対し、グ
ルコース以外の化合物がグリコシド結合しｔものである
。グリコシド結合はα−結合、β−結合のいずｎでもよ
い。ここでマルトオリゴ糖としては、例えばマルトース
、マルトトリオース、マルトテトラオース、マルトペン
タオース、マルトヘキサオース、マルトヘプタオースな
どかあジ、特にマルトテトラオース、マルトペンタオー
ス、マルトヘキサオース、マルトペンタオースが好まし
い８ 本発明におけるマルトオリゴ循に結・片し定アグリコン
としては、グルコシダーゼの作用により遊離し、：Ｓ＃
することにより呈色するか、あるいは定量が容易なもの
であれば何ｎでも工゛いが、特に水酸基を有する芳香族
化合物が好ましい。
るマルトオリゴ糖の還元性末端ヒドロキシ基に対し、グ
ルコース以外の化合物がグリコシド結合しｔものである
。グリコシド結合はα−結合、β−結合のいずｎでもよ
い。ここでマルトオリゴ糖としては、例えばマルトース
、マルトトリオース、マルトテトラオース、マルトペン
タオース、マルトヘキサオース、マルトヘプタオースな
どかあジ、特にマルトテトラオース、マルトペンタオー
ス、マルトヘキサオース、マルトペンタオースが好まし
い８ 本発明におけるマルトオリゴ循に結・片し定アグリコン
としては、グルコシダーゼの作用により遊離し、：Ｓ＃
することにより呈色するか、あるいは定量が容易なもの
であれば何ｎでも工゛いが、特に水酸基を有する芳香族
化合物が好ましい。
不発明のマルトオリゴ璧の還元性木端にα−ま几はβ−
結合Ｇてより結合した水り況基ｔ°灯する芳香族化合物
としてに、フェノールの外に、ハａゲン原＋、ヒｌ’−
ロキシ基、炭素原子数１〜６のアルキル基、アルコキシ
基、アルコキシカルボニル基板ｆｃハニトロ基を有する
フェノール類であり、例えばクロロフェノール、ジクロ
ロフェノール、ヒドロキシフェノール、アルキルフェノ
ール、アルコキシフェノール、安息香叡またはニトロフ
ェノール、ハロゲン化ニトロフェノール、アルキル化ニ
トロフェノール、アルコキシ化ニトロフェノール、ニト
ロ化安息香酸、ジニトロフェノールなトカ挙げられる。
結合Ｇてより結合した水り況基ｔ°灯する芳香族化合物
としてに、フェノールの外に、ハａゲン原＋、ヒｌ’−
ロキシ基、炭素原子数１〜６のアルキル基、アルコキシ
基、アルコキシカルボニル基板ｆｃハニトロ基を有する
フェノール類であり、例えばクロロフェノール、ジクロ
ロフェノール、ヒドロキシフェノール、アルキルフェノ
ール、アルコキシフェノール、安息香叡またはニトロフ
ェノール、ハロゲン化ニトロフェノール、アルキル化ニ
トロフェノール、アルコキシ化ニトロフェノール、ニト
ロ化安息香酸、ジニトロフェノールなトカ挙げられる。
１７ｔ ４−メチル−ウンベリフェロンなどの芳香族化
合物であってもよい。
合物であってもよい。
特に少なくとも１つのニドｒ：１基を有するフェノール
類、例えば４−二トロフェノール、２−クロロ−４−ニ
トロフェノール、２．６−ジクロロ−４−ニトロフェノ
ール、２．６−ジプロモー４−二トロフェノール、２−
７一ロ％−４−二トロフェノール、２−ニトロフェノー
ル、２−ヒドロキシ−４−二トロフェノール、３−ヒド
ロキシ−４−ニトロフェノールなどが好ましい。
類、例えば４−二トロフェノール、２−クロロ−４−ニ
トロフェノール、２．６−ジクロロ−４−ニトロフェノ
ール、２．６−ジプロモー４−二トロフェノール、２−
７一ロ％−４−二トロフェノール、２−ニトロフェノー
ル、２−ヒドロキシ−４−二トロフェノール、３−ヒド
ロキシ−４−ニトロフェノールなどが好ましい。
次に本発明の配鳴体で史に４体例によって説明すると、
例えば下記の様なものが挙げられる。
例えば下記の様なものが挙げられる。
α−７２ニルペンタオサイド、α−２−クロロフェニル
ペンタオサイド、α−２，６−シクロロフズニルベンタ
オサイド、α−４−二トロフ１ニルペンタオサイド、α
−２−クロロ−４°−ニトロフェニルペンタオサイド、
α−２−メチル−４−二トロフェニルペンタオサイドな
どがｔりシ、ま几これらのβ−結合体、！几はテトラオ
シド、ヘキサオシド、ペンタオサイドなどがある。こわ
らの混合物でめってもよい。
ペンタオサイド、α−２，６−シクロロフズニルベンタ
オサイド、α−４−二トロフ１ニルペンタオサイド、α
−２−クロロ−４°−ニトロフェニルペンタオサイド、
α−２−メチル−４−二トロフェニルペンタオサイドな
どがｔりシ、ま几これらのβ−結合体、！几はテトラオ
シド、ヘキサオシド、ペンタオサイドなどがある。こわ
らの混合物でめってもよい。
マルトオリゴ用は置換基、例えばハロゲン、アルコキシ
カルボニル基、脂肪族又は芳：香族基を結合しｔスルホ
ニル基、脂肪族又は芳香族基上に合したカルボニル基、
フェニル基又ハグルコース残基が１．６−結合したマル
トオリゴ糖でもよく、またマルトオリゴｆ！鎖の２個の
水酸基が分子内架橋結合したものなど、部分的に修飾さ
れているものも含む。
カルボニル基、脂肪族又は芳：香族基を結合しｔスルホ
ニル基、脂肪族又は芳香族基上に合したカルボニル基、
フェニル基又ハグルコース残基が１．６−結合したマル
トオリゴ糖でもよく、またマルトオリゴｆ！鎖の２個の
水酸基が分子内架橋結合したものなど、部分的に修飾さ
れているものも含む。
不発＋１４において、配糖体は全組成物に対して０．２
〜１００ｑ／、ｒ、好ましくは０．５〜１０翌′２７贋
ｌ當有させる。
〜１００ｑ／、ｒ、好ましくは０．５〜１０翌′２７贋
ｌ當有させる。
基質に対するα−アミラーゼのミカエリス定数（Ｋｍ
）値がＪＩ３０．３ ｍＭであり、通常）（ｍの３〜１
０倍の基“ｐＨ１７２２度下で測定さｎることか基準と
なるか、検査分析に供ぜら几る基質溶故中の８度どして
は更にこｎ、の１〜２０倍であることが好ましい。
）値がＪＩ３０．３ ｍＭであり、通常）（ｍの３〜１
０倍の基“ｐＨ１７２２度下で測定さｎることか基準と
なるか、検査分析に供ぜら几る基質溶故中の８度どして
は更にこｎ、の１〜２０倍であることが好ましい。
本発明ＶＣ令いて用いるノニオン界面活性剤としては、
ＨＬＢ値が１１〜１８の範囲のものであれば何でもよい
が、囲えばポリオキシエチレン−ｐ −インオクチルフ
ェニルエーテル、ポリオキシエチレンラウリルエーテル
、ポリオキシュテレ／ラウリルエステル、ポリオキシエ
チレン−ｐ−ノニルフェニルエーテル、ポリオキシエチ
レンセチルエーテルなどがろる。
ＨＬＢ値が１１〜１８の範囲のものであれば何でもよい
が、囲えばポリオキシエチレン−ｐ −インオクチルフ
ェニルエーテル、ポリオキシエチレンラウリルエーテル
、ポリオキシュテレ／ラウリルエステル、ポリオキシエ
チレン−ｐ−ノニルフェニルエーテル、ポリオキシエチ
レンセチルエーテルなどがろる。
不発明において、ノニオン界面活性剤は全組成物に対し
て０．２容ｆＪｔ％以上、好まり、 （は０・３〜１・
２容量饅含有ざぜる。通常、血液等の体液全測定する之
めの臨床瑛査試系においては体液中の脂質、蛋白グ：１
等に起因する混濁の影響を低減するために、界面活性剤
を添加することが一般に実施で几でいるが、この目的の
ために添加する界面活性剤の世は通常０．２８ ｆｆＬ
’ Ｓ未満である。本発明ではノニオン界面活性剤を全
組成物に対して０．２答ｉ３％以上含有させることによ
り、基質である配糖体の安定ｆヒを行なうことができる
。０．２容ｔ％未満では安定化を行なうことができない
。
て０．２容ｆＪｔ％以上、好まり、 （は０・３〜１・
２容量饅含有ざぜる。通常、血液等の体液全測定する之
めの臨床瑛査試系においては体液中の脂質、蛋白グ：１
等に起因する混濁の影響を低減するために、界面活性剤
を添加することが一般に実施で几でいるが、この目的の
ために添加する界面活性剤の世は通常０．２８ ｆｆＬ
’ Ｓ未満である。本発明ではノニオン界面活性剤を全
組成物に対して０．２答ｉ３％以上含有させることによ
り、基質である配糖体の安定ｆヒを行なうことができる
。０．２容ｔ％未満では安定化を行なうことができない
。
本発明の組成物は上記配糖体およびノニオン界面活性剤
のほかに、緩衝液又は水全含む。
のほかに、緩衝液又は水全含む。
本発明では配糖体を溶解ざぜｔ緩衝液又は水にノニオン
界面活性剤を加えてもよいし、又ノニオン界面活性剤を
溶解ざぜ７’Ｃ緩衝液又は水に配糖体を加えてもよい。
界面活性剤を加えてもよいし、又ノニオン界面活性剤を
溶解ざぜ７’Ｃ緩衝液又は水に配糖体を加えてもよい。
さらに緩衝液又は水に同時に配糖体とノニオン界面活性
剤全添加してもよい。
剤全添加してもよい。
本発明の配糖体の組成物には必要により発色剤、例えば
４−７ミノアンチビリンなど、酵素、例えばα−グルコ
シダーゼ、β−グルコシダーゼなど、駿化剤、例えば過
ヨウ素酸す） ＩＪウムなどが含Ｍされていてもよい。
４−７ミノアンチビリンなど、酵素、例えばα−グルコ
シダーゼ、β−グルコシダーゼなど、駿化剤、例えば過
ヨウ素酸す） ＩＪウムなどが含Ｍされていてもよい。
本発明の配糖本組成物は体液中のα−アミラーゼ活性測
定の基質として利用し得る０ （発明の効果） 本発明ではノニオン界面活性剤を全組成物に対して０．
２容′＆チ以上含有させることにより、配劇体の安定性
向上させることができる。特にノニオン界面活性剤が０
．１谷ｔ％では保管日数（２５℃り１日で安定性が失な
われるに比して、ノニオン界面活性剤が０．２容ｆ＃チ
以上では７日以上安定に保管することができる。
定の基質として利用し得る０ （発明の効果） 本発明ではノニオン界面活性剤を全組成物に対して０．
２容′＆チ以上含有させることにより、配劇体の安定性
向上させることができる。特にノニオン界面活性剤が０
．１谷ｔ％では保管日数（２５℃り１日で安定性が失な
われるに比して、ノニオン界面活性剤が０．２容ｆ＃チ
以上では７日以上安定に保管することができる。
Ｃ実施列ン
以下本発明全実施例により説明する。
実施例］
ビペス緩衝液（ｐＨ６，７） ０．０５Ｍにβ−２，４
−ジクロロフェニルマルトペンタオサイド４μｍｏｌｅ
／−および４−アミノアンチピリン４μｍｏｌｅ／ｄｔ
−加えて基質含有緩ｆｒ′ｆｃｆ、を得た。仄いてトリ
トン−Ｘ（ポリオキシエチレンインオクチルフェニルエ
ーテルノを０．６各８％又は１．２容量チ又は第１表に
示さｎるノニオン界面活性剤ｔ−添加して基質試液とし
几。
−ジクロロフェニルマルトペンタオサイド４μｍｏｌｅ
／−および４−アミノアンチピリン４μｍｏｌｅ／ｄｔ
−加えて基質含有緩ｆｒ′ｆｃｆ、を得た。仄いてトリ
トン−Ｘ（ポリオキシエチレンインオクチルフェニルエ
ーテルノを０．６各８％又は１．２容量チ又は第１表に
示さｎるノニオン界面活性剤ｔ−添加して基質試液とし
几。
得らｎＴ：、基質試液の安定性を測るために下記酵素試
液および発色液全開いて、仄の操作にエフ吸光度全測足
した。
液および発色液全開いて、仄の操作にエフ吸光度全測足
した。
試薬組成
■酵素貢液
ピペス緩衝液 ０．０５ Ｍ （ｐＨ６，
７〕α−グルコシダーゼ １００ｕ／ｓｒβ
−グルコシダーゼ １０ｕ／−トリトンＸ
−１００（ポリオキシエチレンインオクチルフェニルエ
ーテル） ｌ）、１％■発色液 ホウ酸緩衝液 ０．１ Ｍ （ｐＨ８，４
）過ヨウ素酸ナトリウム水溶液１０ミリモル／ｌ検体２
０μｌｔ−試験管にとり酵素試液０，５ｄと混合し、３
７℃で約５分間加温し九〇次いで基質試液０．５ｄｆ添
加し、３７℃で正確に１０分間７１０＠した後、発色液
２．０ｍｔ−添加し、５分間放置の後、吸光度を波長５
００ｎｍで測定しｔ０ 本操作全検体の代りに水２０μＥを用いる場合（試薬ブ
ランフッと２．４−ジクロルフェノール２ミリモル／！
含有する水溶液上用いる場合（標準〕についても繰返し
測定し、得られた吸光度から次式に従ってα−アミラー
ゼ値を計算により求めた。
７〕α−グルコシダーゼ １００ｕ／ｓｒβ
−グルコシダーゼ １０ｕ／−トリトンＸ
−１００（ポリオキシエチレンインオクチルフェニルエ
ーテル） ｌ）、１％■発色液 ホウ酸緩衝液 ０．１ Ｍ （ｐＨ８，４
）過ヨウ素酸ナトリウム水溶液１０ミリモル／ｌ検体２
０μｌｔ−試験管にとり酵素試液０，５ｄと混合し、３
７℃で約５分間加温し九〇次いで基質試液０．５ｄｆ添
加し、３７℃で正確に１０分間７１０＠した後、発色液
２．０ｍｔ−添加し、５分間放置の後、吸光度を波長５
００ｎｍで測定しｔ０ 本操作全検体の代りに水２０μＥを用いる場合（試薬ブ
ランフッと２．４−ジクロルフェノール２ミリモル／！
含有する水溶液上用いる場合（標準〕についても繰返し
測定し、得られた吸光度から次式に従ってα−アミラー
ゼ値を計算により求めた。
前記種々の基質試液全４℃及び２５℃に保管した場合の
試薬ブランクの変化を第１表に示す。試薬ブランクが経
日的に上昇することは該基質（β−２，４−ジクロロフ
；ニルマルトペンタオサイトノが分解して結果的に２．
４−ジクロロフェノールが生成していることに対応する
。故に本発明による試液は配糖体が安定化されているこ
とが明らかである。
試薬ブランクの変化を第１表に示す。試薬ブランクが経
日的に上昇することは該基質（β−２，４−ジクロロフ
；ニルマルトペンタオサイトノが分解して結果的に２．
４−ジクロロフェノールが生成していることに対応する
。故に本発明による試液は配糖体が安定化されているこ
とが明らかである。
以−ｊ・″余白
ｇ １ 表
Claims (1)
- 全組成物に対して０．２〜１００ｍｇ／ｍｌの配糖体お
よび全組成物に対して０．２容量％以上のノニオン界面
活性剤を含有する緩衝液又は水からなることを特徴とす
る安定な配糖体組成物。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP17349284A JPS6150990A (ja) | 1984-08-21 | 1984-08-21 | α―アミラーゼ測定用基質溶液 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP17349284A JPS6150990A (ja) | 1984-08-21 | 1984-08-21 | α―アミラーゼ測定用基質溶液 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS6150990A true JPS6150990A (ja) | 1986-03-13 |
| JPH0145360B2 JPH0145360B2 (ja) | 1989-10-03 |
Family
ID=15961509
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP17349284A Granted JPS6150990A (ja) | 1984-08-21 | 1984-08-21 | α―アミラーゼ測定用基質溶液 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS6150990A (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS63183595A (ja) * | 1986-10-07 | 1988-07-28 | ベーリング・ダイアグノステイツクス・ゲゼルシヤフト・ミツト・ベシユレンクテル・ハフツング | 芳香族置換グリコシド |
| JP2011083237A (ja) * | 2009-10-16 | 2011-04-28 | Eiken Chemical Co Ltd | 卵黄液による発色反応および／または蛍光発色反応増強作用 |
-
1984
- 1984-08-21 JP JP17349284A patent/JPS6150990A/ja active Granted
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS63183595A (ja) * | 1986-10-07 | 1988-07-28 | ベーリング・ダイアグノステイツクス・ゲゼルシヤフト・ミツト・ベシユレンクテル・ハフツング | 芳香族置換グリコシド |
| JP2011083237A (ja) * | 2009-10-16 | 2011-04-28 | Eiken Chemical Co Ltd | 卵黄液による発色反応および／または蛍光発色反応増強作用 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH0145360B2 (ja) | 1989-10-03 |
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