JPS6156134A - コラ−ゲン性医薬組成物 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 （産業上の利用分野） 多くの細胞疾患、例えば、腫瘍の処置は細胞毒性薬物の
使用を包含する。これらの薬物は種々の方法で活性を示
し、通常細胞の複製および／または生存能力に必須の細
胞の機能を妨害する。大部分でないにしても、多くの場
合において、薬物は異常な細胞に対して特異的ではなく
、むしろ、正常な細胞に比較して、異常な細胞のより急
速な増殖のため、その有効性を及ぼす傾向がある。哺乳
動物の宿主の体の多くの器官は細胞をむしろゆっくり再
生するが、幹細胞の急速な増殖を含む他の器官、とくに
骨髄も存在する。したがって、細胞′　　　　　　毒剤
はゆっくり再生する細胞に悪影響を及ばずばかりでなく
、かつまた免疫系にとくに有害な作用を及はす。

強い細胞毒性の薬物を用いるときの多くの欠点および副
作用にかかわらず、それらは陽性の結果を提供するため
、広範な用途に用いられている。

しかしながら、異常に生長する細胞の付近およびそれか
ら遠い区域の感受性の正常細胞を薬物の有害な作用から
保護するために、薬物の活性を異常細胞に向ける方法で
、薬物を用いることを可能とすることＫかなりの関心が
もたれている。

（従来の技術） 米国特許第４，３２２，３９８号、同第４，３４７，３
２４号、同第４，３４９，５３０号および同第４，３９
１，７９７号は薬物のコントロールされた放出を記載し
ている。病変中への薬物の移殖は、次の文献に記載され
ている：マウフ（Ｍａｕｇｈ　）　、サイエンス（５ｃ
ｉｅｎｃｅ　）　（１９８１）　２１２°１１２８−１
１２９；マククラ（Ｍａｕｋ　）等、アブストラクツ・
オブ・イモノロジー（Ａｂｓｔｒａｃｔｓ　ｏｆ　Ｉｍ
ｍｕｎｏｌｏｇｙ）、４１０９．１０５３−２−ジ；ミ
ャタら（Ｍｌｙａｔａ　）等、キャンサー会リサーチ（
Ｃａｎｃｅｒ　Ｒｅ５ｅａｒｃｈ　）（１９８３）４３
：４６７０−４６７５；ビー７ら（Ｂｉｅｒ　）等、マ
クラフリンら（ＭｃＬａｕｇｈｌｉｎ　）等、キャンサ
ー・リサーチ（Ｃａｎｃｅｒ　Ｒｅ５ｅａｒｃｈ　）（
１９７８）３８：１３１１−１３１６：および（発明に
より解決すべき問題点） 異常な固形細胞生長、とくに腫瘍、または腫瘍細胞を含
有することがある隣接組織は、安定な流動性タンパク質
のマトリックス中に分散された十分な量の細胞毒性薬物
を、腫瘍細胞を含有することが疑われる異常な生長区域
または組織中に注入することによって処置される。得ら
れるマトリックスは注入部位からの薬物の移動を実質的
に阻止して、注入区域において薬物の主要な作用を維持
する。薬物のマ）　ＩＪソックスの結合を増大するか、
あるいけ細胞の性質または生理学的応答を変更して注入
部位における薬物の配置をさらに局在化させる、生理学
的に許容されうる物質を使用することによって、移動を
さらに阻止することができる。

（問題点を解決するための手段） 固形腫瘍、細胞の生長、あるいは異常な胛但細胞を含有
しうる隣接組織を化学療法的に処置するための新規な方
法および組成物が提供される。この方法は、少量の生理
学的に許容されうる水性謀質中に分散された、生理学的
に許容されうるマトリックス、とくにタン・Ｐり質、何
気ば、コラーゲン、フィブリノゲン、または生理学的に
許容されうる組成物の濃厚な分散物中の化学療法薬物の
実質的に均一な分散物を用いる。得られる非晶質の塊は
、病変、例えば、腫瘍、またけ病変区域、例えば隣接組
織、あるいは腫瘍を除去した場合に、前もって除去され
た腫瘍に隣接する組織の中に注入される。タンパク質の
マトリックスは注入のために流動性であるが、組織の中
にいったん注入されると、安定な配置を提供する。すな
わち、いったん注入されたタンパク質のマトリックスは
組織へ付着し、有意に移動しない。この処理は、癌腫お
よび肉腫を包含する種々の固形腫瘍について使用できる
。注入後、薬物は隣接する環境の中に解放されて、薬物
の細胞毒作用が望ましくない他の部位へ薬物が実質的に
移動するのが防止される。

こうして、循環血液中の薬物のレベルは低くとどまる。

このようにして、治療効果が増大される。

すなわち、悪性細胞への細胞毒作用は感受性の正常細胞
に比較して大きい。

本発明を応用することができる種々の病気の状態または
治療モードの例は次の通シである：（１）局所的発生が
典型的でありかつ薬物の利用が弱体化される新生物細胞
、例えば、脳；（２）外科的切除後に腫瘍床中に新生物
細胞が残留する疑いのある腫瘍、例えば、胸；（３）外
科的または放射線の処置のだめの劣った候補である腫瘍
、例えば、頭、首、前立線など；（４）物理的または非
化学的処置、例えば、放射線および／または過温治療（
ｈｙｐｅｒｔｈｅｒｍｉａ）と組み合わせた補助的腫瘍
治療；（５）普通の治療に無反応性の過増殖性の病気、
例えば、乾癖；（６）全身的化学療法と同時；（７）全
身的救助（ｓｙｓｔｅｍ１ρｒｅｓｃｕｅ）と同時、例
えば、メソトレキセートとコラーゲンマトリックスの腫
瘍内、ロイコポリン１　、Ｖ　＊の組み合わせ。

本発明の組成物は、非晶質、注入可能かつ粘稠であって
、投与部位から有意に流れないで局在化位置を実質的に
保持する。組成物は適当の圧力下に流れることができる
が、特定の部位に配置された後、有意に動かないであろ
う。タン・やり質は、薬物の治療作用を妨害１．ないで
、薬物と共有的にあるいは非共有的に結合することがで
きると同時に、活性剤を導入部位に保持するかあるいは
導入部位から活性剤の移送を遅延することができる。

好ましくは、組成物は所望の組成物の特性を与知るため
に十分な量のマトリックスから構成されるであろう。マ
トリックスはペプチドまたはタンパク質、例えば、構造
タンパク質、例えば、コラーゲンおよびフィブリノゲン
の単独せたは組み合わせ、あるいは安定の配置を提供す
る他のタンパ　　　　　　１り質、あるいはそれらの組
み合わせから構成されることかできる。コラーケゝン、
フィブリノゲン捷たけそれらの組み合わせはとくに興味
がある。

少なくとも約５重量％、好ましくは少々くとも約１０重
景係、かつ５０重量％以上までを有するタンパク質の組
成物は、トロンビンまたはその酵素同等物と組み合わせ
て使用するとき、とくに興味がある。このようにして、
フィブリノゲンは酵素的に変性されてフィブリンとなっ
て組成物の非移動性を高めると同時に、フィブリルのマ
トリックスを形成して組成物をさらに安定化する。

トロンビンは、フィブリノゲン含有タンパク質組成物と
、使用直前にあるいは注入後短時間に混合することがで
きる。約１〜１０００１Ｕ／ｍｇのトロンビンの使用量
は、使用時間、固体マ）　ＩＪソックス形成に望む速度
、他の成分の量、トロンビン活性への薬物の作用などに
依存して、一般に、存在するフィブリノゲンの約０．１
〜１０ｆｉｌである。

マトリックス物質に加えて、１種または２種以上の化学
治療薬物および生理学的に許容されうる水性媒質が存在
するであろう。水性媒質中にタンバク質組成物は分散さ
れ、そして薬物は溶解、分散、あるいはコラーゲンと複
合体を形成することができる。本発明の組成物の有益々
性質を増大する他の物質の存在は好ましい。

使用するタンノぐり質、とくにコラーゲンまたはフィブ
リノゲン含有物質は、哺乳動物の宿主源、何気ば、ウシ
、ブタまたはヒトから誘導することができ、あるいは他
の技術、例えば、組み換えＤＮＡ技術により調製するこ
とができる。用いるコラーゲンは天然のコラーゲンであ
ることができ、あるいは変性されたもの、例えば、トロ
ポコラーダン、アトロポコラーダンなどであることがで
きる。コラーゲンは非免疫原性、免疫原性、あるいはほ
んのわずかに免疫原性であることができる。

哺乳動物の宿主への投与のために精製された形でコラー
ゲンまたはその誘導体を製造する種々の方法は、文献に
おいて知られている。これらの方法は米国特許第３，９
４９，０７３号のような特許およびその中に引用された
参考文献において見い出される。若い雌牛または子牛か
ら得られ精製されたウシコラーゲンは興味がある。精製
は通常種々の媒質、何気ば、希酢酸中の分散またはそれ
からの沈殿を含むであろう。あるい場合において、異種
コラーゲン（ｘｅｎｏｇｅｎｓｉｃ　ｃｏｌｌａｇｅｎ
　）を用いて注入区域における免疫原性応答を増大し、
あるいは免疫原性補助物質を用いることができる。

広範な種類の化学治療薬物が個々にあるいは組み合わせ
て使用できる。薬物はマトリックスへの複合体形成、塩
形成、配位錯化がどのような結合を介して結合すること
ができ、あるいは結合しないことができるが、いずれの
結合も薬物の生理学的な活性を有意減少させてはない。

化学治療において使用されかつアルキル化剤、酵素阻害
剤、増殖阻外害剤、溶解剤（１ｙｔｌｃ　ａｇｅｎｔ　
）、ＤＮＡ合成阻害剤、膜透過変性剤、ＤＮＡ内位添加
剤（ＤＮＡ（１ｎｔｅｒｃａｌａｔｏｒ　）、抗代謝物
などとして作用する種々の薬物を用いることができる。

薬物の例は次！　　　　　の通りである：クロランプシ
ル、メルフアラン、ブスルファン、カルムステン、ロム
ステン、ストレプトシトシン、チオテパ、ダカルパジン
、メソトレキセート、５−フルオロウラシル、シタラビ
ン、アザリビン、メルカプトプリン、チオグアニン、ビ
ンブラスチン、ビンクリスチン、アクチノマイシンＤ１
アドリアマイシン、ブレオマイシン、ミスラマイシン、
ミドマイシンＣ，Ｌ−アスノぐラギナーゼ、シスプラチ
ン、プロカルバジン、プレドニソン、グレドニシロン、
トリアミジノロン、テストステロン、エストロゲン、イ
ンシュリン、およびヒドロキシ尿素。次の参考文献：カ
ーター（Ｃａｒｔｅｒ　）およびリビングストン（Ｌｌ
ｖｌｎｇｓｔｏｎ　）、癌を処置するために有効な薬物
（Ｄｒｕｇｓ　Ａｖａｉｌａｂｌｅｔｏ　Ｔｒｅａｔ　
Ｃａｎｃｅｒ　）　、癌処理の原理において（Ｐｒ１ｎ
ｃｉｐｌｅｓ　ｏｆ　Ｃａｎｃｅｒ　Ｔｒｅａｔｍｅｎ
ｔ　）　（カーターら編）第１０章、１１１−１４５−
２−ジ、１９８２年、マクグロー・ヒル・インコーホレ
ーテッド、ニューヨーク。薬物はその治療作用を損失す
る非酵素的不安定性結合をマトリックス物質と形成すべ
きではない。

薬物類は、それらの性質、腫瘍、および協働作用が製薬
学的に必要であるかどうかに依存して、個々にあるいは
組み合わせて使用できる。薬物組成物は、薬物を変性す
ることにより、とくに酵素的切シ離し、例えば、加水分
解を可能とする結合により、あるいは導入部位における
薬物保持の維持を促進する物質を組成物中に導入するこ
とにより、さらに変性することができる。

種々の技術を型物移動の減少に使用することができ、例
えば、薬物を特定のリガンド、例えば、脂質、リン脂質
、被プテド、アミノ酸、糖などと結合させることができ
る。これらの変性は個々の薬物、水性媒質中の薬物の溶
解度の変化およびタン・やり質との共有的または非共有
的相互作用の発生に依存するであろう。さらに、種々の
生理学的に許容されうる増量剤または凝集剤（ｃｏｎｃ
ｅｎｔｒａｔｉｎｇａｇｅｎｔ　）を使用することがで
き、これらは薬物およびタンパク質を相互作用させる役
目をし、これＫより薬物の解放速度を減少させる。この
ような物質の例は、無機物質、例えば、水酸化リン灰石
および有機物質、例えば、炭水化物、例えば、アガロー
スおよびセルローステアル。

化学療法剤と組み合わせて使用する仙の薬物は、化学療
法剤の拡散を遅廷して、生理学的傷害を減少しかつ治療
利得（ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ　ｇａｉｎ）を増大する
。とくに興味あるものは、領琥の血管系を、生長および
／または通行開口に関して、制限する物質、例えば、血
管収縮剤または交感神経興奮剤である。これらの物質は
カテコールアミン、何気げ、エピネフリンおよびノルエ
ピネフリン、麦角アルカロイド、グロスタダンジン、ア
ンギオテンシンなどを包含することができる。組織の構
築に影響を及ぼす他の物質は、間質を傷害しうる酵素、
例えば、被ゾテダーゼであるノリヤイン、キモノ′ｆ＋
／母イン、トリプシン、アミラーゼ、コラゲナーゼおよ
びキモ）　ＩＪゾシンを包含する。あるいは、細胞の透
過性に影響を及ぼす物質、例えば、非イオン性清浄剤、
例えば、ツイーン（Ｔｗｅｅｎ　）　８０　、アンフォ
テリシンＢ１ジメチルスルホキシドおよび麻酔剤、例え
ば、ゾロカインを用いることができる。

さらに、薬物の１種または２種以上をリポソームまたは
他のコントロールされた速度の解放組成物中にカプセル
化し、これらのカプセルをタンノ４り質の組成物中に含
めて、薬物を別々の異る速度で解放させることができる
。このようにして、多相組成物を調製して、長い時間に
わたって薬物を持続的に解放させることができる。種々
の物質を含有させたリポソームの形成は、次の参考文献
に記載されている：パパハジョポウルス （Ｐａｐａｈａｄｊｏｐｏｕｌｏｓ　）（１９７８）ア
ナルス・オブ・Ｎ、　Ｙ、アカデハ−・オブ・サイエン
ス（Ａｎｎａｌｓ　ｏｆｔｈｅ　Ｎ、Ｙ、　Ａｃａｄｅ
ｍｙ　ｏｆ　５ｃｉｅｎｃｅ　）　、　３０８　：ブレ
ボリアディス（Ｇｒｅｇｏｒｉａｄｉｓ　）およびアリ
ソン（Ａ１１ｉｓｏｎ　）　（１９８０）生物学的系に
おけるリポソーム（Ｌｉｐｏｓｏｍｅａ　ｉｎ　Ｂｉｏ
ｌｏｇｉｃａｌ　Ｓｙｓｔｅｍｓ）。

ジョン・ウィリー・アンド・サンズ；レザーマン（Ｌｅ
ｓｅｒｍａｎ　）ら、ネイチャー　（Ｎｅｔｕｒｅ　）
（１９８１）２９３　：２２６−２２８　：パーヘラよ
びヘス（Ｈｅａｔｈ　）ら、サイエンス（５ｃｉｅｎｃ
ｅ　）（１９８０）２５５　：８０１５−８０１８゜あ
るいは薬物は生物分解性物質中にカプセル化し、ここで
解放速度は生物分解性被膜の厚さに関係する。

異種コラ−ｒンを用いるほかに、免疫原性応答、例エバ
、マクロファージ、ヘルｚ＋−’ｌ’細胞などの増殖お
よび侵入を高めるために他の物質を含めることができる
。補助剤の例は、次の通シである：コリネバクテリウム
・７ヤルブム（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍｐａｒ
ｖｕｍ　）　、バシルス・カルメツチーブニリン（Ｂａ
ｃｉｌｌｕｓ　Ｃａｌｍｅｔｔｅ−Ｇｕｅｒｉｎ　）の
細胞壁または細胞壁調製物、ミコバクテリウム・デビス
（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ　ｂｏｖｉｓ　）株など
。次の文献を参照：ミャタ（Ｍｉｙａｔａ　）ら、キャ
ンサー・リサーチ（Ｃａｎｃｅｒ　Ｒｅｓ、）　（１９
８３）４３　：４６７０−４６７５；ビーア（Ｂｌｅｒ
　）ら、アチーブス・オブ・オトリノラリンゴロジー（
Ａｒｃｈ　Ｏｔｏｒｈｉｎｏｌａｒｙｎｇｏｌ、）（１
９８２）２３６　：２４５−２５５　；およびメハンジ
リン（Ｍｅｈａｎｊｈｌｉｎ　）ら、キャンサー・リサ
ーチ（ＣａｎｃｅｒＲｅｓ、）（１９７８）３８：１３
１１−１３１６．それらの開示を引用によってここに加
える。

細胞毒活性を増大するため、種々の補助物質をマトリッ
クス中に混入することができる。これらの補助物質の例
は、次の通である：放射性ペレット、例えば、放射性核
種のテクネチウムまたはイリジウム；放射線増感剤、例
えば、εソニダゾール；修復阻害剤、例えば、メチル化
キサンチン：生物還元剤、これは低酸素性細胞中におい
てのみ活性である；免疫調節剤、例えば、インターフェ
ロン、リンフ才力イン、例えばインターロイキン−２；
腫瘍生長阻害剤、例えば、腫瘍壊死因子、腫瘍生長因子
−βなど、および／または血管造影コントラスト媒質。

すでに示したように、組成物中の乾燥物質の比は広い範
囲で変化することができる。しかしながら、タンパク質
マトリックス物質の量は通常３０重量％より少なくかつ
約９５重関係より大きくなく、一般に約４０〜９０重量
、よシ通常約５０〜９０重量係の範囲であろう。このう
ちで、１０〜１００％はコラーダンおよび／′！ｌ：た
はフィブリノタンであろう。化学治療詰物は通常液体ま
たは固体であるか、あるいは固体の形態で提供され、そ
してタンパク質物質の一般に少なくとも約０．１重量％
から約５０重ｉ％でり、より通常約１〜５０重関係、一
般に約１〜４５重関係である。

他の補助的添加剤または物質は合計組成物の乾燥重量の
約０．００５〜１５重量％、通常約０．０１〜１０重量
係の合計針で変化するであろう。

この組成物は生理学的に許容されうる水性媒、例えば、
生理的食塩水、リン酸緩衝生理的食塩水、蒸留水などの
中に均一に分散される。水性娯質は適当の圧力下に流動
することができる非晶質分散物を形成するために十分で
あろう。通常、液状水性媒質は、流動性混合物を形成す
るために、全体の組成物の少なくとも９０重量％、より
通常少なくとも９５重量％であシかつ約９９．８重も［
チ以下、通常約９９．５重ｆｔ％以下であろう。この量
は薬物の性質、マトリックス物質の性質、他の物質の存
在々とに依存して変化するであろう。水性媒質中のタン
／？り質の存在は約５〜７５　ｍｇ／ｍｌの範囲であろ
う。

主要成分に加えて、ある数の少量成分をれ々の目的で含
めることもできる。これらの物質は大部分組成物の安定
性を保護し、−をコントロールするなどの性質を付与す
る。このような物質の例は、リン酸または酢酸塩の緩衝
液、メチルパラベン、プロピルパラベン、ポリエチレン
グリコールなどある。これらの物質は一般に合計組成物
の約２重量％より少量、通常約１重量％より少量で存在
し、そして個々に約０．００１〜約１重量％の間で変化
することができる。

すでに示したように、ある場合において、薬物はとくに
Ｉソーム中にカプセル化されるであろう。

リポソームは種々の層形成性脂質、倒起ば、リン脂質、
例えば、ホスファチジルコリン、ホスファチジルエタノ
ールアミンなど、ガングリオシド、スフィンゴミエリン
、ステロイド、例先ば、コレ１　　　　　ステロールな
どから調製される。通常、薬物の１介に関する脂質の矩
量は両親媒性脂質の１モルにつき１〜５Ｌの捕捉された
薬物の範囲であろう。

組成物は無菌環境において種々の成分を組み合わせるこ
とによって調製することができる。マトリックスは便利
な形で提供され、通常の使用する合計の水性媒質の少な
くとも一部分と混合されるであろう。組成物は、他の物
質と混合したとき、均一な分散物を得ることができるよ
うに、十分に処理可能であろう。コラーダンまたはその
誘導体を使用するとき、コラーケ゛ン質物質は通常水性
奴質中のコラーゲンフィブリルの均一な分散液として提
供され、ここでコラーゲン質物質は約５号ゲから１００
　ｍｙ／ｍ！以下、通常７５　ｒｎｖｆｎｌ以下テある
。

次いで薬物をコラーゲンの分散液に攪拌しながら加えて
、得られる混合物中の薬物の均一な分散を確保すること
ができる。他の物質を、適当ならば、同時にあるいは順
次に加えることができる。混合物中に種々の成分の均一
な分散が確保された後、この混合物を滅菌し、そして適
当な容器内に密封する。

滅菌は通常無菌条件を用いて達成されるであろう０ 本発明の組成物は広範な種類の新生物の病変の処Ｎにお
いて使用できる。腫瘍の例は、次の通りである：癌腫、
肉腫および色素細胞腫、例えば、基底細胞の癌腫、扁平
細胞の癌腫、色素細胞腫、軟組織の肉腫、太陽角化（５
ｏｌａｒ　ｋｅｒａｔｏｓｅｓ　）、力？シ肉腫、皮膚
の悪性リンノ′ｅ肺、ｙＩｒウエフェン病ィルムス肺、
肝癌、結腸直腸癌、脳腫瘍、菌状息肉症、ホジキンスリ
ンパ腫、真性多血球血症、慢性顆粒球白血球白血症、リ
ンツク腫、オートムギ細胞肉腫（ｏａｔ　ｃｅｌｌ　ｓ
ａｒｃｏｍａ　）など。

本発明の組成物は、腫瘍部位に細胞毒性量の薬物を供給
するために腫瘍へ投与される。腫瘍部位へ投与される細
胞毒薬物の量は、薬物の性質、腫瘍の大きさ、および他
の考察に依存して、一般に約０．１〜５００　ｍ９Ａ９
宿主、より通常的０．５〜３００ｍＱＡ９宿主の範囲で
ある。血管収縮剤は一般に治療剤の１〜５０重ｉｔ％で
存在する。広範な種類の腫瘍、腫瘍の性質、薬物の有効
濃度、相対移動度などにかんがみて、明確な範囲は特定
されえない。各腫瘍における各薬物について、最適レベ
ルは経験により提供される。腫瘍部位における薬物の寿
命および薬物に対する腫瘍の応答に依存して、１または
２以上の投与を用いることができる。投与は注射器、カ
テーテル、あるいは流動性組成物の腫瘍中への導入を可
能とする他の手段によることができる。投与は３日毎に
、毎週、あるいはそれらより少ない頻度で、例えば、２
週毎にまたは１月の間隔であることができる。

本発明による投与の例は、ジスーシアｉノジクロロプラ
チナムの投与である。マトリックス中の薬物濃度は０．
０１〜５０　ｍｇ／ｍｌの範囲で変化することができる
。注入は病変の大きさに依存して１または２以上の部位
において行うことができる。直径約１〜２ｍの針は便利
である。多数の注入のため、前もって孔開けされた孔を
有する型を用いることができる。薬物は通常１００１ｎ
９／ｍ２患者より少量である。

本発明の方法は、臨床的に関連する腫瘍または病変につ
いて特に利点が得られる。組成物は、容量が１００＋＋
ｍ　　よシ大きく、とくに１５０鰭　より大きい腫瘍に
ついて治療学的利得を提供する。

本発明の方法は、また、薬物投与の結果として局所的炎
症を減少することがわかった。したがって、局所的また
は隣接組織は薬物により影響を受ける程が少ないように
思われる。さらに、配置部位からの薬物の移動レベルが
少ないため、配置部位から遠い正常組織にあるいはリン
パ球へ悪影響を及ぼさないで、よシ多い量の薬物を投与
することができる。

本発明の方法は、他の治療形態と組み合わせると利点を
提供する。病変をマトリックスの投与の前および／また
はそれに引き続いて照射することができる。線量は、病
変、暴露期間などに依存して、約２０〜２５０ラド／分
、通常５０〜１５０ラド／分であることができる。過温
症（熱）を補助処置として使用できる。処置は通常はぼ
４３℃までの約５〜１００分間の加熱を通常包含するで
あろう。

本発明を明らかにするため、次の研究を実施した。移植
可能な実験ネズミの線維肉腫（２Ｘ１０”ＲＩＦ−１細
胞）を生後５か月の雌のＣ３Ｈマウス〔パンテン・アン
ド・キングマン（Ｒａｎｔｉｎ　ａｎｄＫｉｎｇｍａｎ
、　Ｆｒｅｍｏｎｔ、　ＣＡ　）　）の脇腹において皮
膚内生長させた。シスージアミンジクロロプラチナム（
Ｔ［）　（ｃｉｓ−Ｐｔ　）　［シグマ・ケεカル・カ
ンパ＝　−（Ｓｉｇｍａ　Ｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｃｏ、、
　Ｓｔ、　Ｌｏｕｔｓ、　ＭＯ））］を無菌の生理的食
塩水中に０８．１．６および３２■／ｍｌの濃度で溶解
し、そしてＰＨ１２０ミリモルのリン酸塩、１４０εリ
モルのＮａ　Ｃ１中のウシコラーゲン（ＢＣ）　（３６
ｍｒｙ／ｍｌ　）　［コラ−ｆ＊　ン・コーポレーショ
ン（ＣｏｌＣｏ１１ａ　Ｃｏｒｐ、、　Ｐａ１ｏ　Ａｌ
ｔｏ。

ＣＡ））と１：１で混合した。２，４および８ｍ９７ｋ
ｇ宿主の投与量（７）　ｃ　１ｓ−ＰｔをＱ、　ｌ　ｍ
ｌのコラーゲンの興物混合物中に供給して脇腹において
生長する腫瘍の中心に投与しく腫瘍内＝ｉ、ｔ、）そし
て腫瘍を測定した。同じマウスの対向する脇腹上の第２
の不注入腫瘍の生長をまた測定した。さらに、コラゾー
ンを含まないＰＨ３中に溶解したｃｉａ−Ｐｔ　　　　
　　　　’を他の腫瘍を有するマウス（４胛疫／群）に
腹腔内（ｉ−ｐ、）投与して、コラゾーンを含まない薬
物の腫瘍の生長に対する作用を監視した。さらに、腫瘍
生長へのウシコラーゲンの作用を、また、０、１　ｒｎ
ｌのコラーゲン（１８■冷ｌ）を、前述のように、実験
用線維肉腫中へ注入することにより研究した。腫瘍の生
長を、腫瘍の３つの垂直の直径をノギスで測定し、そし
て次式から腫瘍体積を計算することによって、３回／週
監視した。

Ｖ＝π／６　ＸＤＩ　ＸＤ２　ＸＤ３ 結果を下表１および２に示す。

以下余白 次の研究において、５−フルオロウラシル（５−ＦＵ　
）　［シグマ・ケεカル・カンパニー（Ｓｉｇｍａ　Ｃ
ｈｅｍ、　Ｃｏ、、　Ｓｔ、　Ｌｏｕｉｓ、　ＭＯ）：
］を生理的食塩水中にエピネフリン（シグマ）の存在下
および不存在下に音波処理により懸濁させ（６０Ｉｎ９
７ｍ！　）そしてウシコラーゲン（ＲＣ）［：コラーダ
ン・コ、＋？レーション（ＣｏｌＣｏ１１ａ　Ｃｏｒｐ
、＋　Ｐａ１ｏ　Ａｌｔｏ。

ＣＡ））　（３６ｍｇ／ｍｌ　）または正常の生理的食
塩水と１：１で混合する。被検体は、前述のように、皮
膚内に増殖した移植可能が実験用ネズミ線維肉腫を有す
る、２５ｇの生後１２週の雌のＣ３Ｈ／Ｈｅマウス〔パ
ンテン幸アンド・キングマン（Ｂａｎｔｉｎａｎｄ　Ｋ
ｌｎｇｍａｎ、　Ｆｒｅｍｏｎｔ　、　ＣＡ　）　］で
あった。

腫瘍が１５０＋ｍ３の体積に到達したとき、マウスを次
の群に不規則に割り当てた（４〜６匹のマウス／群）：
（１）未処理対照：　（２）５−　ＦＵ　（１００１１
ｊ９Ａ９）、ｉ、ｐ、、０．　ｌ　ｍｌ　／　マン：ｘ
　；　（３）　５−　ＦＵ（１００ｒＲ９Ａ９　）、ｉ
、　ｔ、、０．１　ｍｅ　／腫瘍：　（４）　５−ＦＵ
−ＢＣ（１００ｍ９５−ＦＵ／ｋｇ　、　ＢＣ（Ｉ　Ｂ
罹／ｍｌ　）中に分散、１．ｔｏ、０、１１１１／／肚
瘍；　５−Ｆ’Ｕ−ＥＰＩ　−ＢＣ（１００ｍ９５−　
ＦＵ／’に９　）　５　タＥＰＩ　／＜９、ＢＣ（１８
ｍＱ／ｍｅ）中に分散、ｉ山、Ｑ、　ｌ　ｍｌ　／腫瘍
。

処置後４日に、白血球（ｗｂｃ）を、尾かなの血液採取
、トルコ溶液（Ｔｕｒｋ’ｓ　ａｏｌｕｔｌｏｎ　）中
の希釈および血球計中の計数により計数した。処置後８
日に、重なる組織中の皮膚の反応を不都合な応答につい
て等級づけた。

下表３に結果を示す。

以下余白 −＊　皮膚の反応。腫瘍の上に横たわる皮膚の注入後８
日の評価。皮膚の反応に次のようにスコアをつける二〇
−作用なし；１＝表面の炎症；２＝伽皮；３＝潰瘍。

＊＊　５−ＦＵ−ＥＰＩ　ｉ、ｐ、はマウスで致死であ
った。

＊申＊　平均士標準誤差。

次の研究において、ドキソルビシン（ｄｏｘｏｒｕｂｉ
ｃｉｎ　）−ＨＣｔ（ＡＤＭ）アドリアマイシンを前述
のグロトコールに従い研究した。蒸留水中のアドリアマ
イシン（４，４５ｍ９／ｒｎｌ　）を３６　ｍｇ／ｍｌ
のウシコラーゲン（ＢＣ）と１＝１で混合して、２．２
５■のアドリアマイシン：１８ｍ９のＢＣ／ｍｅの組成
比を生成した。

１５屹Ａ！９のアドリアマイシンの腹腔内注入はマウス
の７５％に致死的であったが、腫瘍内注入は無毒である
ことがわかった。

下表４は結果を示す。

以下余白 ・［ Ｉ　　ＡＤＭ　１　ｓ　ｒｖＡｑの注入後の動物の生存
。死は通常注入後２日以内に生じた。

２　腫瘍の再生長の遅延（ＲＤ）。腫瘍がそのもとの処
置体積（約１５０ｍｍ）の３倍に生長するのに要する時
間（日）。

３　対側の腫瘍ＲＤ（ＣＨＤ）。未処置の対側の腫瘍が
そのもとの処置体積（約１５０ｍｍ）の３倍に生長する
のに要する時間（日）、ＲＤの低下はＲＤに比較したと
き注入された薬物の区域化の増大を示す。

４　処置後４日に、処置マウスの尾からの採取により測
定した白血球。

５　皮膚の反応。処置後８日に、腫瘍の上に横たわる皮
膚の評価。皮膚の反応に次のようにスコアをつける二〇
＝作用なし；１＝表面の炎症；２＝痴皮；３＝潰瘍。

次の研究において、ビンクリスチン（ＶＣＲ）を生理的
食塩中に音波処理により溶解しく　０．６　ｎｑ／ｍｌ
　）、そして１：１でウシコラ−ｒン（、３６ｍｇ７ｍ
ｌ　）と混合した。それ以外、手順は同一であった。下
表４は結果を示す。

次の研究において、硫酸ブレオマイシン（ｂｌｅｏｍｙ
ｃｉｎ　５ｕｌｆａｔｅ　）　［’／グマ・ケば力／ｌ
／　・カンＡ＝　−（Ｓｉｇｍａ　Ｃｈｅｍｉｃａｌ　
Ｃｏ、、　Ｓｔ、　Ｌｏｕｌｓ＋ＭＯ）〕（１５ｍ９Ａ
ｇ）およびエピネフリン（５ｒｖＡｙ　）の組み合わせ
をウシコラーゲン組成物中において使用し、前述のよう
に、移植可能な実験用ネズεの線絵肉腫のモデルにおい
て抗腫瘍作用を評価した。下表６は結果を示す。

以下余白 （Ｏｑ） 他の実験において、薬物マ）　ＩＪワックス合物の治癒
能力を実験用ネズミの線維肉腫のモデルについて評価し
た。簡単に述べると、前述のように生成した単一の実験
的腫瘍を有する雌のＣ３Ｈ／Ｈｅマウスを、５−フルオ
ロウラシル（５０η／ｋｙ）：ウシコラーダンＢＣ（コ
ラーゲン・ツー４？レーシヨン（ＣｏｌＣｏ１１ａ　Ｃ
ｏｒｐ、、　Ｐａ１ｏ　Ａｌｔｏ、　ＣＡ　）　）　；
エピネフリン〔シグマ・ケミカル・コー？レーション（
Ｓｉｇｍａ　Ｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｃｏ、＋　Ｓｔ、　Ｌ
ｏｕｌｓ、　ＭＯ）　：およびＰＢＳを含有する配合物
で毎週処置した。白血球の数（ＷＢＣ）を各処置後４白
目に決定し、そして皮膚の反応を各処置サイクル後３目
目に決定した。４処置群のうちの３が初期腫瘍体積の４
倍に到達したとき、すべての群について実験を停止した
。腫瘍が１５０ｍに到達したとき、マウスを次の群に不
規則に割り合てた： １、未処置対照。

２、　５−ＦＵ−ＰＢＳ　ｉ、ｐ、　；　５−Ｆ’Ｕ　
（２３へ／ｍｌ）を１：１でＰＢＳ　；　０．１　ｍｌ
注入／ママクｉ、ｐ、　トＭＪミ合わせた。

３、　５−ＦＵ−ＰＢＳ　ｉ、ｔ、　：　５−ＦＵ　（
２３ｍｇ／ｍｌ）を１：１でＰＢＳ　；　０．１　ｍｌ
注入／ママウス、ｔｏと組み合わせた。

４、　５−ＦＵ−ＢＣ１，ｔ、　；　５−ＦＵ　（２３
ｍｇ／ｍｌ）を１＝１でウシコラーゲン（３６ｍｙＡｒ
Ｌｌ　）と組み合わせた；Ｑ、　ｌ　ｍｌを注入した。

５、　５−ＦＵ−ＢＣ−ｅｐｉ　ｉ、ｔ、　；　５−Ｆ
Ｕ　（２３Ｔｎ９／ｍｌ　）を１：１でエピネフリン（
２，４ｍ９Ａｎｌ　）を含有するウシコラーゲン（３６
ｍ９ＡＬｌ）と組み合わせた１Ｑ、　ｌ　ｍｌを注入ｉ
、ｔ、　した。

結果を下の表７に示す。

以下余白 結果が示すように、３回の毎週の注入で腫瘍内に（＋、
１．　）投与された低い投与量の訃ＦＴＪ−ＣＭ薬物−
マトリックスとともにエピネフリン（ｓｍ９Ａ９）を使
用すると、５−ＦＵの抗腫瘍作用はｉ、ｐ、処置腫瘍の
再生長の遅延に関１〜て２〜２．５倍増大された。

他の実験において、５−フルオロウラシル（１００ｍ９
Ａ９　）の抗腫瘍活性へのマトリックス組成の影響を、
前述の実験用ネジスεの線維肉腫のモデルにおいて評価
した。５−ＦＵ　［シグマ・ケばカル・コーポレーショ
ン（Ｓ　ｉ　ｇｍａ　Ｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｃｏ　、　＋
Ｓｔ、　Ｌｏｕｔｇ　、　ＭＯ）を後述するようにウシ
コラーゲンＢＣＣコラーデン・コーポレーション（Ｃｏ
ｌｌａｇｅＣｏｌｌａ、、　Ｐａ１ｏ　Ａｌｔｏ、　Ｃ
Ａ　）　）　；ウシフィブリノゲン（９５ｃＡ凝固性、
シグマ）；ウシトロンビン（２ｏｏｏＮＩｕ単位／■、
シグマ）および注入用リンゲル溶液（Ｒ１ｎｇｅｒ’ｓ
　５ｏｌｕｔｌｏｎ　Ｆｏｒ　Ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ）（
：ＲＦＩ、アボット・ラデラトリーズ（ＡｂｂｏｔｔＬ
ａｂｓ、、　Ｎｏｒｔｈ　Ｃｈｉｃａｇｏ、　ＩＬ　）
　］。腫瘍が１５０■３の体積に到達したとき、マウス
〔パンテン・アンド・キング−ｒ　７　（Ｂａｎｔｉｎ
　ａｎｄ　Ｋｌｒ＋ｇｍａｎ。

Ｆｒｅｍｏｎｔ、　ＣＡ）　）を次の群に不規則に割り
当てた（３〜４匹マウマク群）： １、未処置対照。

２、　フィブリノゲン３　Ｑ　ｍｙ７ｆｎｌ　：フィブ
リノゲン（６０ψｌ）を、１０μｔのトロンビン（Ｉ　
ＮＩＨ単位の活性／ｍｌ）を含有するＲＦＩとともに１
：１で分散させた；　０．１　ｍｌ（７）　１．ｔ’　
６３、　５−ＥＵ−フィブリノゲン：５−ＦＩＴ（３６
号ゲ）を上の２に記載のフィブリノゲン調製物と１；１
で組み合わせた：　０．１　ｍｌ（Ｄ　ｉ、ｔ、。

４、　５−ＦＵ−ＢＣ−フィブリノゲン：５−ＦＵ（３
６ｍ９７ｍｌ　）を、フィブリノダ７　（３０ｒｒｖ′
Ｉｎｌ　）　：　Ｉ　ＮＩＨ単位のトロンビン活性／ｍ
ｌを含有するＲＦＩ中に分散したＢ　Ｃ（３６ｒｎｌ／
ｍｌ　）から成るフィブリノゲンーＢＣ調製物と１：１
で組み合わせた；　Ｑ、　ｌ　ｍｌのｉ、ｔ、。

結果を下表８中に要約する。

以下余白 上の結果から明らかなように、治療薬物がコラーゲン中
の流動性マトリックスとして配合され、そして病変中に
移植されるとき、補助剤の存在下または不存在下の両者
において、実質的な利点が治療学的利得において得られ
る。配合物は化学治療剤の高い活性を保持し、同時に白
血球へ細胞毒作用および隣接表皮組織への炎症活性を実
質的に減少する。

全身的暴露についての証拠は、免疫抑制の欠乏、対側不
注入腫疫への腫瘍退行の相対的不存在、および重なる正
常組織への不都合な作用の相対的欠乏から明らかである
。

次の実験において、ｘＩｆＯと組み合わせた５−フルオ
ロウラシル−マトリックス移植物を評価した。

単一のＲＩＦ−１腫瘍を、前述のように雌のＣ３Ｈマウ
ス（１２〜１６週）（パンチン・アンド・キングマフ　
（Ｂａｎｔｌｎ　ａｎｄ　Ｋｌｎｇｍａｎ、　Ｆｒａｍ
ｏｎｔ、　ＣＡ　）の背止で生長させた。腫瘍が１５０
ｍの体積に到達したとき、それらを次の群に分割した（
４〜６匹のマウス／群）： １、未処置対照。

２、　　Ｘ線（１０００ラド）単独。

３、　ｘＨｓ分前のコラーゲン・マトリ、マウス（ＣＭ
　）　ｉ、ｔ、。

４．５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）（７５Ｉｎ！７
Ａ９　）　ｉ、ｐ、。

５、５−ＦＵ−ＣＭ　（７５ｍｑＡｙ　）　ｉ、ｐ、。

６　Ｘ線５分前の５−ＦＵ　Ｉ−ｐ、。

７、　　Ｘ線５分前の５−ＦＵ−ＣＭ　ｔ、ｔ、。

腫瘍を有するマウスを鉛ジグ内で、腫瘍および上に横た
わる皮膚のみを、２５　ＯｋＶｐ　Ｘ線機械により１２
０ラド／分の線量で暴露した。処置マウスおよび未処置
マウスの腫瘍を３回／週担１１定し、そして前述のよう
に再生長の遅延および皮膚の反応について検査した。

結果を下表９に記載する。

以下余白 結果が示すように、５−Ｆ［１−ＣＭをＸ線と関連させ
た組み合わされた物理療法設定（ｍｏｄａｌｉｔｙｓｅ
ｔｔｉｎｇ　）病変内（ｉ、ｔ、　）投与は再生長の遅
延に関して全身的（ｉ、ｐ、　）　５−ＦＵとｘｌｆｆ
との組み合わせに匹敵する。

次の研究において、シスーＤＤＰ−マトリックス（ＤＤ
Ｐ　＝　ｃｉｓ−Ｐｔ　）の移植を過温症（ｈｙｐｅ　
ｒ　ｔｈｅ　ｒｍ　ｉ　ａ　）と組み合わせて評価した
。単−ＲＩＦ−１腫瘍を前述のように雌のＣ３Ｈマウス
の背止で生長させた。腫瘍が１５０Ｍ３の体積に到達し
たとき、腫瘍を次の群に分割した（４〜６匹のマウス／
群）：１、未処置対照。

２、過温症（４３℃、３０分）単独。

３、過温症＋コラーダンーマトリックス（ＣＭ）＋工ｆ
ネフ１Ｊｙ（ｅｐｉ　）　（２ｍ９Ａ９）。

４、　　ｃｉａ−ＤＤＰ　（６ｍ９Ａｇ）　ｉ−ｐ、。

５、　　ｃｉｓ−ＤＤＰ−ＣＭ−ｅｐｉ　（ｔ、ｔ、　
）。

６、過温症３０分前のｃｉｓ　−ＤＤＰ　（ｉ、ｐ、　
）。

７、過温症３０分前のｃｉｓ−ＤＤＰ−ＣＭ−ｅｐｉ　
（１，ｔ、）。

腫瘍を有するマウスを３０ダージのサーミスタ一温度測
定（±０．２℃）手段を有する精密水浴中で加熱した。

処置マウスおよび未処置マウスの腫瘍を、前述のように
測定しかつ再生長の遅延について検査した。

下表１０は結果を示す。

、以下倉出 結果が示すように、局所的過温症は腫瘍内に投与された
コラーゲンマトリックスに関連するｃｉｓ−ＤＤＰの作
用を増大することができる。エピネフリン単独を有する
コラーゲンマトリックス（ＣＭ）と過温症は過温症の抗
腫瘍作用を増加しなかった。

（発明の効果） 本発明によれば、コラーゲンの水性分散液中に均一に分
散して化学療法薬物組成物を、単独であるいは血管収縮
剤と組み合わせて、含んでなる組成物を腫瘍形成病変へ
適用し、そして粘稠な混合物を前記病変へ適用すること
によって、改良された新生細胞の治療が達成される。薬
物−コラーゲン組成物を用いることにより、大きく増大
された局在化薬物濃度を実現できることが発見された。

さらに、化学療法において用いる薬物の有意の細胞前作
をかんがみて、全身的暴露は実質的に減少される。した
がって、高いレベルの細胞毒性薬物を問題の部位におい
て用いることができ、一方宿主の残部は有意なレベルの
薬物に暴露されない。

さらに、薬物の動態学は、薬物の変更および／またはコ
ラーゲンとの相互作用のために、変更されて、循環する
血液中の薬物のレベルを低くする。

ｋ？ｌ後、薬物の寿命はコラーゲン物質による保護のた
めに延長されることができ、代謝による失活速度は減少
する。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、新生物病変または取り囲む組織を処理する方法であ
   って、 前記病変の部位において、安定に配置することのできる
   タンパク質の組成物を導入し、前記組成物は水性媒質中
   に分散した十分な量の生理学的に許容されうる高分子タ
   ンパク質のマトリックス物質を含んで、少なくとも１種
   の細胞毒性薬物を内部に均一に分散して含有する流動性
   組成物を形成しており、 これにより前記薬物は隣接する環境中にゆっくり解放さ
   れて、有意なレベルの前記薬物を前記導入部位から遠い
   部位において回避する、ことを特徴とする方法。 ２、前記高分子マトリックスは少なくとも一部分コラー
   ゲンである特許請求の範囲第１項記載の方法。 ３、前記高分子マトリックスは少なくとも一部分フィブ
   リノゲンである特許請求の範囲第１項記載の方法。 ４、前記薬物はシス−プラチナム、アドリアマイシン、
   ５−フルオロウラシル、ブレオマイシンまたはビンクリ
   スチンの少なくとも１種である特許請求の範囲第１項記
   載の方法。 ５、前記組成物は前記病変の付近における毛細血管を収
   縮させるために十分な量の血管収縮因子を含む特許請求
   の範囲第１項記載の方法。 ６、前記病変部位を放射線または熱で処理する追加の工
   程を含む特許請求の範囲第１項記載の方法。 ７、水性媒質中に約５〜７５ｍｇ／ｍｌの濃度で分散し
   た３０％〜９５％のコラーゲンおよび／またはフィブリ
   ノゲンと前記コラーゲンに基づいて約０．１〜５０重量
   ％の細胞毒性薬物とからなることを特徴とするコラーゲ
   ンの組成物。 ８、前記細胞毒性薬物はシス−プラチナム、アドリアマ
   イシン、ブレオマイシン、５−フルオロウラシルまたは
   ビンクリスチンである特許請求の範囲第７項記載の組成
   物。 ９、血管収縮量の血管収縮性薬物を有する特許請求の範
   囲第７項記載の組成物。