JPS6156186A - 生体処置方法，処置用化合物及びその製造方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は臨床移植及び自己免疫疾患のｔｌｌ、置に関す
る。本発明は受容体による供給体Ｉ′ｌ＃１の移植ハ拒
否反応を防止できる食作用ｆｉｌ　ｄ−ＰＩの、また免
疫変化特性をイｊする一市の化合物を同定することを目
的とする。

免疫抑制剤は従来臨床移植、自己免疫疾患の処置及び基
礎的免疫機能の研究を含む広範囲の医療用途に用いられ
ている。特に臓器の移植は人間の臓器不全に対し主たる
解決を与えるが、不適合な供給体／受容体の組合ゼでは
受容体の免疫抑ｆｌ＋ｌｌ　／Ｊ＜移植組織の生存に必
須である。従来の移ｌｌ１ｉハ１！′ｉ否反応の理解で
は供給体ｊｌｌｌのパツセンジセ−（ｐａｓｓｅｎｇｅ
ｒ　）抗原提供細胞が受容体の動物移Ｍ片ＩＦ否反応を
引き起す等、免疫反応生成の前提条例と考えられている
。長期間にわたる試験管内での供給体臓器のｊハ養（高
い酸素溶几下で数週間）は選択的にかかる細胞を減じて
ゆき、臓器移植を＝　６− 可能ならしめる。

不都合イｒことに一般に免疫抑制に用いられている檗は
自身６市であり、かつ、系統的に投桑せねばｔｒらヂ、
Ｔ？；　Ｊ−の免疫系を損い他の有害な効果を引起こ寸
。

研究の結采カビのイ１成物であるシクロスポリン（ｃｙ
ｃｌｏｓｐｏｒｉｎ　）がある程度の成功を６って臨床
移植に用い得ることが確立された。しかし腎毒性。

肝臓ｍ性、系統的投桑による忠名の日和見感染。

自発リンパ腫、及び高価な長期治療はこの製品を用いる
場合の主な欠点である。この初期の研究からより良くよ
り重性の少ない免疫変化剤の要求が存在することが明ら
かとなった。

種々のカビイ１−成物は晋通ブイヨン中で培養されると
１ビボリチオジオ−１：ソピペラジン（ｅρ叩ｏ１ｙｔ
ｈｉｏｄｉｏｘｏｐｉｐｃｒａ（Ｉｉｎｅｓ　）を１−
成することは十分確立されている（総説としてはテーラ
−、ニー。

１９７ＢＦ、スポリデスミン及び他のエビポリグアジオ
−１−ソビペラジンの毒物学、ニス、カデイス、ニー、
シーグラ−及びニス、アシル編　微生物毒素Ｖ　Ｉ　Ｉ
　、　　３３７−３７６頁、ニコー］−り、アカデミツ
クプレスを前照）。これら化合物は試験管内で抗菌性、
抗カビ竹、抗つィルス竹及び殺アメーバ性（ａｍｏｅｂ
ｉｃｉｄａｌ　＞潜在活性につきＩＡ究された。

しかしそれらのイ１一体中への応用は１乳動物のもつ高
い細胞障害性により非常に限られていた。事実、同じこ
とがトロウンの（１〜ロウン、■−、ダブリ］、−，１
９６８，バイオケミストリー　アンド　バイオフィジッ
クス　リリーブ　］ミコニケーシ］ン３３、　４０２）
合成モデル化合物、１４−ジメチル−３，６−１ビジデ
ア−２，５−ジ第１ソビペラジンについても示されてい
る。従って生体中でのこれらカビ又は合成化合物の効果
はほとんど知られていない。

実験的アレルギー性脳を髄炎は中枢押杆系の自己免疫性
鋭部疾患であり、用孔のところ多重硬化症の最適な実験
モデルと考えられている。このモデル疾患の発病学的研
究は免疫性損傷の細胞的刊質を強く示し、従って実験的
アレルギー１１脳を髄炎の病理学的状態へ導く免疫反応
の求心性及び達心竹肢において大食細胞が重要であると
考えられる。ここでもまたエビボリブＡジオキソピペラ
ジンに属り−るこれらカビににる、また合成の化合物の
本疾患の病因に関する効果は全く知られていない。

本発明の目的は不適合な供給体／受容体組合せにおける
移植片拒否反応を防ぐための生体を処置する方法を提供
するにある。「生体」なる表現は例えば単細胞、細胞凝
集塊、完全な臓器、臓器の集合、あるいはこれらの絹合
せであり、供給体又は受容体のどちらのものでもよい、
臓器移植過程に含まれるあらゆる１一体を意味する。

本発明の他の目的は人間以外の動物における自己免疫疾
患を処置する方法を提供するにある。

本発明は−Ｌに定義した生体を処けする方法であって、
生体を一般式（１） の化合物単体、又は一又は複数の製薬学的に許容される
単体又は希釈剤と共におくことを特徴とし、こ）で、Ｒ
Ｏ及びＲ１は水素、ヒドロ−１シル。

アルキル、アルコキシ及びアシロキシよりｌｚるグルー
プから選ばれる基であり、１Ｔｉ２及びＲ３は別々に水
素及びアルキルよりなるグループより選ばれる基であり
；又は共に一般式（Ｚ ｎ２ の基を表わし、 こ′−’ｒＲ５、Ｒ６、Ｒ’　、Ｒ”及びＲワは水素。

アル−１−ル、ヒト［］１シ、アル］二１シ、リルファ
イド及びハロゲンよりなるグループより別々に選ばれ；
あるいはＲ２及びＲ３は共に一般弐〇の基を表わし こ）で、ＲＩＯ及びＲ１１は両者共水素を表わし；ある
いは共に原子価結合を表わし；Ｒ１２，Ｒ１３゜Ｒ１４
，Ｒ１５は水素、ヒドロキシ、アルコキシ　＋Ｊルファ
イド及びアシロキシよりなるグループより選ばれる基で
あり；ｎは２から４の範囲の整数より選ばれる、牛体処
置方法を提供する。

式（１）に従うエビボリヂオジ第４−ソピペラジンとし
て知られている一群の化合物は食作用阻止性及び免疫変
化的特性を示すことが見出された。

］−ビボリブＡジＡ１ソビペラジンのクラスに入る多数
の化合物、特にグリオトキシン、グリＡ）〜キシンート
リー１ノルファイト、グリＪ　＋−：１シン−テトラ−
サルファイド、スポリデスミン、　　Ｃｌジメヂル−３
６−■ビジブオー　２．５−ジオ〜−ソビペラジン及び
デヒドログリ第１〜ｔシンは特に移植片Ｊｒ＋否反不反
応止するのに有効であることが見出された。

本発明の利点は移植過程中における例えば臓器など、必
ずしも受容体のものとは限らない供給された！１：体の
処置を可能とすることである。

供給された生体を処置することの−の利点はイれが現在
用いられている免疫抑制薬の副作用を除去することであ
る。本発明になる処置に関係する副作用は受容体器官へ
の毒性、肺炎等の日和見感染、高価な長期治療等が含ま
れる。

本発明による供給体の処理は供給体内にあり受容体中に
移植片ＩＦ否反応を開始させるパラセンジャー白血球の
選択的不活性化を生じるものと仮説する。本発明による
処置Ｇ、を従来の処置と巽なり不土逆狗にパラセンジャ
ー白血球を不活１１化し、もって受容体の長期間治療の
必要１Ｑ及びイれに起因づる不都合な副作用の必要性が
回避される。

アスペルギルス属及びペニシリウｌＸａのカビ。

及び他の関連するカビの種は試験管培養でグリオド４−
シンがその−であるエビポリヂオジ第４ソピペラジンの
クラスの化合物に属する代謝産物を生じることが公知で
、これは広く刊行された方法（例えばロウ、ジー他、　
１９６６、ジャーナル　オブケミカル　ソ１ノイエテイ
、　１７０９　　あるいはディングレイ他、　１９６２
．ジャーナル　オブ　ジェネテイツク　マイクロバイオ
ロジー、２９．　１２７＞の変形により得られる。

本発明者はかかる化合物は、プラスチックへの大食細胞
付着及び微粒子物の食作用によりテストした結果食作用
ｍ　、＋ｌ二ｔ／Ｉの活動を示し、ステイミュレータの
牌細胞を処理すると細胞の異常反応的な、また主要組織
適合道伝了複合体に制約される細胞障害Ｔ細胞を生じる
能力が抑止されることを確立した。これが移植片ＩＥ否
反応のモデル系である。

代謝産物（第１図参照）はクロロホルムに可溶で薄層ク
ロマトグラフィー上で３つの生物学的に活＋ｌｌな化合
物に別々に精製される。これら化合物は精製され（第２
図）、その一つはグリオＩ・↑シン（第１図でｎ−２）
であることが確認された。貞のグリオトキシンは精製さ
れた試料と同様４ｒ抗食細胞竹で免疫変化竹活竹を有す
ることが見出された。

実質的に純粋なグリオトキシンをカビ培養から分離する
方法を以下の例に示す。

例１ （ａ）寒天スロープに明色麹菌ケムカビを接種でる。

（ｂ）該寒天スロープより取られた分！［胞了柄をイー
グルの最少必須培地に懸濁する。

（Ｃ）該分生胞子柄を攪拌せずに２０−３７℃で半分ま
で満たされた丸底フラスコ中でカビの生成のため十分な
表面積が確保されるようにして培養する。５−１０日間
カビを成長させる。

（ｄ）カビ菌糸体を培地より分断する。

（ｅ）該培地を一過にＪ：り滅菌する。

（［）該１８地をり１］ロボルム等の有機溶媒で抽出Ｊ
る。

（ｇ）かく（ｑられた有機溶液を乾燥さゼ、該有機溶媒
を真空下で蒸発させる。

（ｈ）グリオド」−シンを残渣より、予備的ＷＪＰｔク
ロマトグラフィー（シリカ上で５％のメタノールを含む
ジクロロメタンにより展開する）により、又はカラムク
ロマトグラフィー（シリカ及びメタノール・り１０ボル
ム　グラジェントを用いて溶Ｍ、Ｏ−５％メタノール）
を用いて分離する。分離されたグリ第１−１シンはエタ
ノールより再結晶される。

例２ （ａ）寒天スロープにペニシリウム　テルリ］ウスＬイ
（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ　ｔｅｒｉｌｉｋｏｗｓｋｉ
ｉ）　　１３６　（７１〜ランプツク　リサーチ　ラボ
ラトリーズ、ナシ、　　　　　′１）−ル　リサーチ　
カランスル・カナダ・ハリ７アツクス　エヌ　ニス、よ
り入手可能）又は培養によりグリオトキシンを生ずるの
が知られている多数の入手可能なカビ類のどれか（例え
ばアイシー。ニー、　１９７１，スポリデスミン及び他
のＥ［ビボリチアジオキソビペラジンの毒物学、ニス、
カデイス、ニー、シーグラ−及びニス、ジエー、アシル
編、微生物高素Ｖ　Ｉ　１　、　３３７−３７６頁、二
１−ヨーク、アカデミツクプレス参照）を接種する。

（ｂ）以下の段階【よ極めて同様であるが、栄養ブイヨ
ン、カビが成長する温度及び旧聞はカビに必要な条件に
より変化し得ることが理解されよう。

明色麹菌ケムカビは試験管培養でプラスブックへの大食
細胞Ｈａによりテストシたところ食作用阻止性の活動を
示す従来知られてい４７かった２つの代謝産物をさらに
生ずることが見出された。代謝産物は３日間の培養で現
われ、５〜７日で最大濃度に達した（第４図）。代謝産
物はクロ「１ホルムに可溶でＲＦＩＪクロマトグラフィ
ー（第２図）にＪ：り分離・精製された。それらはグリ
オ＋−１シントリリルファイド（第１図にてｎ−３）及
びグリオトキシン　テトラ１ノルフアイト（第１図にて
ｎ＝４）であるのが同定された。

このように本発明はさらに実質的に純粋なグリフ１１〜
キシン　トリー及びテトラ１ルフアイトを明色麹菌ケム
カビＪ、り分子ｌｉする方法を提供１１る。これは以下
のものを含む。

例３ （ａ）寒天スロープに明色麹菌ケムカビを接種する。

（ｂ）該寒天スロープより取られた分住胞子柄をイーグ
ルの最少必須培地に懸濁する。

（Ｃ）該分子１−胞子柄を攪拌けずに２０−３７℃で半
分まで満たされた丸底フラスコ中でカビの生成のため十
分な表面積が確保されるようにして培養づる。５−１０
口間カビを成長させる。

（ｄ）カビ菌糸体を培地より分離する。

（ｅ）該培地を一過により滅菌する。

（ｆ）該Ｊ８地をクロロホルム等の有機溶媒で抽出する
。

（ｇ）か＜１８られた有機溶液を乾燥さゼ、該有機溶媒
を真空下で蒸発させる。

ｆｈ）グリオトキシン　トリー又はテトラリルフアイド
を残渣より、予備的ＮＦＦｔクロマトグラフィー（シリ
カ上で５％のメタノールを含むジクロロメタンにより展
開する）にＪ：す、又はカラムク［１マドグラフイー（
シリカ及びメタノール・クロロホルム　グラジエン１〜
を用いて溶１１ｆ、Ｏ−５％メタノール）を用いて分離
する。分離されたグリ第１−キシンはエタノールＪ：り
再結晶される。

例４ （ａ）寒天スロープにペニシリウム　テルリ］ウスキイ
　１３６（アトランチツク　リサーチ　ラボラトリーズ
、ナショナル　リサーブ　カランスル。

カナダ、ハリファックス　エヌ　ニスより入手可能）又
は培養によりグリ第１・キシンを生ずるのが知られてい
る多数の入手可能なカビ類のどれか（例えばティラー、
ニー、１９７１，スポリデスミン及び他のエビポリチア
ジオキソピペラジンのｍ物学、ニス、カディス、ニー、
シーグラ−及びニス。

ジエー、アシル編、微生物毒累Ｖｌ＋、３３７−３７６
頁、ニコーヨーク、アカデミツクプレス参照）を接種す
る。

（ｂ）双手のｒＱ階は全く同様であるが、栄養ブイ］ン
、カビが成長Ｍる温度及び］１，１間はカビに必要な条
ｆ１にＪ、りゆ化しく９ることが理解されよ−う。

グリオド１−シン、グリオド」シン−トリリールファイ
ド及びグリＡ−１−１シン−デ１〜う４１ルフイド及び
関連した化合物は大食細胞、感染に対抗して宿″［の防
御システムに参加し他の免疫細胞と協働して免疫反応を
（Ｉする白色細胞、の食作用（第１表）を抑１１するＴ
ピボリヂオジ第４−ソピペラジンのクラスに属づるのが
見出さねた。本防御システムで【ま、これはまた全ての
スｊイミコレータ細胞でも同じだが、−７ｊの動物の細
胞により抗原が他方の動物のレスボンダーリンパ球（別
の白色細胞）へ勺えられ、ぞの結未細胞陣害１１又１，
ＬキラーＴ細胞がノ１−しる。このモデル、すなわＪう
試験管内での異常反応竹細胞陣害ｆｌＴ細胞の誘導は移
植ハ１１否反応のモデルを表わしまた一方で臓器移植の
１−要（７障害でｂある。この異常反応性細胞障害Ｍ　
Ｔ細胞はエビボリチＡジＡ−Ｖソビベラジンに属するグ
リΔトー１ニシン及び伯の化合物により廃されることが
見された。さらに他の免疫機能もまたこれら化合物によ
り玉且逆聰に抑１トされる。

このように本発明は他方で構造的にはグリオトキシンに
関係し、実質的に純粋ぐ、グリオ１・：１シンと同様な
食作用田止牲かつ免疫変化性を示し、一般式（１）を有
する一群の化合物を提供する。

本発明はさらに一般式（１）の一又は複数の化合物を投
薬することによる（人間以外の）動物の免疫反応を変化
又は抑制する方法を提供する。

本発明はさらに動物（人間を含む）の組織又は供給体動
物を受容体への移植のその場で処置する方法であって、
該組織の、該受容体への内移植前の、一般式（１）の一
又は複数の化合物の存在下での培養、あるいは供給体動
物への、受容体動物への該［１の内移植前にお【プる一
般式（１）の一又は複数の化合物の投薬よりなる方法を
提供する。

本発明はさらに受容体動物への移植前において感作され
た供給体免疫細胞を一般式（１）の化合物により処置す
ることにより実験的アレルギー竹脳を髄炎の開始を防ぐ
方法を提供する。

以下本発明で用いられた材料及び方法を詳しく説明づる
。本発明においては温度は全て摂氏で示し、Ｊ：た技術
用語及び略語は本技術分野にお（）る通常の意味を右号
る。粗製の試薬、〈１−酸物及び製剤はここに述べる手
段あるいは公知の下段により精製できる。

【礼艷物：両性の、牛（す６−１２週間のＣＦ’３Δ／
Ｈ，ＩＩ△１，、１１　／　ｃ及びＣ５７Ｂｌ−／１０
マウス及びＤΔラツ］・を用いた。

乳部艷に敷仏功２迎１］」」Ｌ仁し’ｔ　（Ｊ　（７）
皿員先に明色麹菌ケムカビが接種された寒天スロープよ
り取られた分牛胞了柄はイーグルの最少必須１ｉ３１１
１！ｒ　１５　（グランド　アイランド　バイオロジカ
ル　カンパニー、グランド　アイランド、ニコーー＝１
−り）に懸濁され、１１社なしに５−７日間。

２４度又は３７１ｆで培養された。カビ菌糸体は培地を
ナイ［１ン網を通ずことで分離され、濾過により滅菌さ
れる（ミレツクスージーエス、０２２μｍ。

ミリボア　■スニ［−９モルスハイム、フランス）へ臥
り刀つＪＬｊヲ四男］力じしＬイ辺」［」Ｌ遣９調１ 先にペニシリウム　テルリ］ウス“Ｖイが接種された寒
天ス１］−ブより取られた分生胞子柄はワインドリング
（Ｗｅｉｎｄｌｉｎ（１）培地（グルー１−ス２５り、
酒石酸アンモニウム２９．　Ｋ１１２　ＰＯ４１００”
１，　Ｍ（ＪＳＯ４５００１ｉｇ、　１ｉｆＱＩキス１
００＃Ｉ３７゜Ｆｅ５Ｏ４ＸＨ２０１ｍｇ、ＣＬＩＳＯ
ａ　Ｘｔ−１２００，１５１１７９，Ｚ　ｎ５Ｏ４Ｘ　
Ｈ２０１１＋１９．　Ｍｎ５Ｏ４Ｘ　Ｈ２Ｏ０，１５Ｉ
Ｒｇ及びに２　ＭＯＯ４０，１５ｍｇよりなる）中に懸
濁され、攪拌せずに１Ｏ−２５Ｅ１間２０−２４度で培
養した。カビ菌糸体は培地を一ノーイロン網を通すこと
で分Ｉｌｌされ、−過により滅菌される。

（１のエピボＩ　　　ジ　　飄ビベーク゛の　［以下に
大要を述べる研究で用いられる天然に産するエビポリチ
オジオキソピペラジンのメンバーは文献中の記述に従っ
て得られ、グリオド４−シン。

グリオ］〜キシンートリー与ルファイド及びグリＡトキ
シンーテトラーυルファイドについて番ま手に詳述する
如くにして得られた。グリオ１・キシン。

デヒドログリオ１〜１−シン及びスボリｆスミンの確実
４１試１’ｌは以下の一方又（ま双プノの入手′Ｉｒ！
、Ｊ、りの好意により人手しＩこ一アール・ギャラガー
、ルアク＞ｊ’ニマフルリザーブ　スｊ−シーン、ハミ
ルトン、二１−シーラント及び１−・ｊイラー、アトラ
ンブック　リ−ＩＪＩ　　ラボラ１〜リー、ハリファ゛
ソクス、ツバ　スコシア、カノグ。１４−ジグ−ブルー
　３６−ＪピジブＡ−２，５−ジＡＸソビペラジンｔま
トロランに従って調製した（ト［１ウン、　］−−。

ダブリ］−，１４１６８，バイオケミス１〜リー　アン
ドバイオフィジックス　リザーブ　］ミ］ニケーシ〕ン
ズ　３３．　４０２頁）。全ての１ピポリヂＡジ第４ソ
ピペラジンｔ、Ｌ無水１タノール中にＩ　ＩＩ＋！？／
　ｒｙｅの割合で溶解され、必要になるまで部分標本と
して＝７０度で保管した。

１血」 ブＡグリ］−ル耐塩誘導腹腔マクロファージ（Ｔ　Ｇ　
Ｍ　）　Ｉまブオグリ］−ル酸をン↑入しＩこマウス（
５−８Ｅ１間経過した２ＩＲＩｌの３％（Ｗ／Ｖ）ブＡ
グリ］−ル酸（ディ７］　ラブズ、デ１−ロイ１〜。

ミシガン）溶液の腹腔内（１・ｐ・）注入）Ｊ、り汀Ｉ
Ｉ器及び２０−ゲージ霞１を用いた氷冷された！１理食
塩水の１−ｐ−注入及びぬぎ取りにより）９られ、細胞
遠心塗抹の染色法（ディフ　クイックヒツト、ニーＴイ
ヂエス／オーストラリア）により決定したところ８３％
以」ニの大食細胞と中核細胞とよりなっていた。Ｔ　Ｇ
　Ｍ　ｔ、ｉさらに遠心法に３１こりベレット化されＦ
ｌ５に５％の１１を胎児の血清（Ｆｅ２）を加えたもの
中に懸濁された。

］ンカナバリンΔ（Ｃｏｎ　　△）−活性リンパ細胞、
　３Ｗ５１４７及びＰ８１５腫瘍細胞を生育させ中竹赤
又はムルバツヒャー、ニー６．パリッシコシー、アール
３．マンディ、ジエー、ビー（１９８４）、ジャーナル
　オ　　イ≧コノロぐ゛カル　　〜゛ゝＡゝＡユＧ８，
０５−２１５頁）により記述された如く５１Ｃｒを用い
て表示した。

腫瘍細胞系Ｌ　９２９　、　Ｂ　Ｗ５１４７．　Ｆで１
”、Ｆｌ−、／１及びＰ８１５．及び２次マウス胎児線
麗封細胞（ＦＢ）が５−６％のＦｅ２を含むダルベラ］
（１）　ｕｌｂｅｃｃｏ　）の変形イーグル培地１」１
６　（グツンド　アイランド　バイＪ　ｎジカル　カン
パニー。

グランド　アイランド、ニュー二１−り）中で成長され
ｌｃ。

ラットの多形核細胞もまたブＡグリ］−ル酸処理された
動物より１９られアイヒナ−、アール・ディー及びスミ
−トン、チー・シー０．ス≦類企竺之ｆｆｉノア゛　ぐ
゛　−ル　　−ミュノロジー　１８２５９−２６３頁（
１９８３）に記述の如くイ」着細胞から解放される。

常在性かつインフルエンザに誘発された（鼻内投薬され
た５００１−ＩＡＵのＡ／ＷＳＮインフルエン＋ｆ　）
肺胞大食細胞がラットよりＰＢＳを用いた肺洗浄のくり
かえしにより得られた。

以止１Ｎ二五且鳳ｌユ１りＪＪ Ｃｏｎ八−活性細胞上澄の調整及び試合はラファテイ、
ケー・ジＴ−他（１９８２）オース１−ラリア５８、　
５３３−５４４に従った。

””）＞）＜　　　１３−ｕ霞［Ｌ」」−リソンダ−（
ＲｅｓｏｎｄＯｒ　）　ｐ細胞懸濁液（１ｍｇ当り２×
１０６個の細胞を有す）は５日間、３７℃で加湿された
５％ＣＯ２／９５％空気中で２×１０６個の同種免疫牌
細胞（６０Ｃｏ源にりの２００ＯＲにＪ：り不活性化さ
れた）と共に、又は１ｘｌｏ’ｉ個の同種免疫ＴＧＭと
共に、５％の糟胎児の血清及び１０−’Ｍの２−メルカ
プｌ−Ｉタノールを含む５−のイーグル最少必須培地Ｆ
１５内で培養される。

凱ｌ」昌１１皿皿イＬ髪碩帽１件ゴロ！１漕Ｐ８１５　
、　ｌ　２９２　、　ＢＷ５１４７．　Ｃｏ　ｎＡＷ細
胞及びＴＧＭを用いたｍ胞障害竹細胞の！ｉ　１　ｃ　
ｒ放出試合及び崩壊はムルバッヒャー、ニー、バリシコ
。

シー、アール及びマンディ、ジエー、ビー（１９８４）
、ジャーナル　オブ　イミコノ［ｌジカノＬ−人ｙｌ左
２６８２０５−２１５に記述された過程に従った。

東１克■１丑ＩＩ塗 ムルバツヒヤー、ニー、及びアイヒソ−。アール、ディ
ー（１９８４）　、　　Ｄシー−インゲス　本プ１　−
ぐヨ　ル　　カーミー　オブ　サイ、Ｉ−ン≦ス−〇−
］フツー二」、−村３８９３５−３８３７負）に記述さ
れｌｃ方法を用いた。要約すると５×１０６−５Ｘ１０
’個のＴＧＭ、ｌ　９２９又番；Ｌ　Ｆ　Ｉ３が懸濁状
態で１５分間、３７℃にてバンク（Ｈａｎｋ）の工商塩
溶液中ニＴ　５　ｒｒｄｌノ０．０４％（Ｗ／Ｖ）Ｉ＋
’１赤（ＮＲ＞　　（Ｃ１５００４０，ＢＤＩ−１）中
で標示された。細胞はペレット化され２度１％のＦｅ２
を含む「１５中で洗浄され、１１ｄ当り５×１０５個の
細胞製電で再懸濁された。部分標本（０，１ｄ）が９６
個のウェルを有する丸底絹織培養板（カタログ番号７５
−０１３−０５　ニリンプロ　アイビジョン。

フローラボラトリーズ、ハムデン、］ネテイカツ１〜）
の各々のつＴルに分配された。板は当初ＮＲ−標示細胞
を加える前においてエビボリヂオジ第１−ソビペラジン
又はその希釈物に属づる化合物を含む０．１ｐｎｅの部
分標本溶液を右していた。３７℃にて適当な培養の後培
地は投棄され、細胞甲一層ｔ　　　　　はマイクロプレ
ー１〜をリン酸Ｉｎ　１１ｉ１ｉ生理食塩水（Ｐｎｓ）
浴（０，１４３Ｍ塩化すｌ−リウム、　　０．０１Ｍリ
ン酸す１−リウｌｘ、　　ｐｌ−１７，４）中に一度浸
洒することで洗浄されＩご。ＰＢＳは棄てられＮＲは、
各ウェル当り０．１−の５０％エタノールに００５）Ｍ
の酢酸を加えたものを加えることにより残留イ・１着細
胞より解放された。この際５４０＃Ｉ＃ｌでの光学的密
度がマイクロプレート読取器により測定された（ダイナ
チック５００．　ＤＶｎａｔｅｃｈ　５００　、又（ま
■リサ　　ＥＩ　　Ｉｓ△）。

用いた方法はムルバツヒヤー他、（１９８４）　、　２
−　ル　　　　　々コーノロジカル　メソツズ−１２０
５−２１５頁による。要約すると雌のＣ５７Ｒ１−／１
０マウスがｉ−ｐ・にＪ：す１０７個の同系のＭｌの牌
臓細胞により免疫され、少なくと６４週間のポストブラ
イミングの後使用されＩこ。異常反応性で１また主要組
織適合遺伝子複合体（Ｍ　ｌ−Ｉ　Ｃ＞に拘束された細
胞障害竹Ｔ細胞の発／）のため、先に免疫された動物の
牌臓レスポンダ細胞が５　ｘ　１０６個のＣＢＡ／Ｈ，
又は５５Ｘ１０６個の紐のＣ５７ＢＬ／１０の照射され
た（６０ＣＯ源よりの２０００Ｒで）牌臓ステイミ１１
ノータ１１１胞とそれぞれと６に培養される。細胞（ま
５％の１Ｏ８に１０−４Ｍの２−メルカプト　エタノー
ルを加えたものを含む５ｍｅの「１５中で１２つＪル培
養曲（］スター、ケンブリッジ、マリブコーセツツ）中
で５日間、３７℃にて加湿された５％ＣＯ２空気中で培
養された。

培養物（，１取り出され０．１の部分標本細胞が３段階
希釈により９６つＴルの丸底組織１ｇｌ板へ滴定される
。Ｔ　Ｇ　Ｍ標的細胞は５１Ｃｒ（アメルシャム。

芙ｒｌｌ）で１時間標示され、Ｊ：り洗浄し０１ｍｅの
部分標本に１　ｍｅ当り２×１０５個の細胞数の割合で
加えられ３７℃で６ｈ間培養された。０．１ｍｅの各々
のつＴルト澄は除去されガンマ線削数器で放射能測定さ
れた。培地による散出は標的細胞を効宋器細胞のない状
（ｍで培養することによりＭｌ定された。／ｌり出可能
５１ｃの全品は標的細胞を１％１〜リドン−Ｘ溶液中で
溶解することでｉｌｌ定された。

−２９＝ 比溶解百分率は式 比溶解百分率−）焚−＃ｉＩト」４情−ＩＨｉ−・　１
００％により算出される。

精」泣イ（１（−の　　　　　　・　　作プロトン核磁
気共鳴スペクトロス］ビーを３７度にて８９．５６　Ｍ
　Ｈ７で動作するＪＥＯＩ−ＦＸ９０Ｑスペクトロメー
タにより行った。ケミカル　シフトは加えたトリメデル
シラン（ＴＭＳ）からｐｐ＋＋＋単位でダウンフィール
ド測定された。赤外スペクトル（ＩＲ）はコニカム５Ｐ
１００Ｏスペク］−ロメータでＫＢｒ中でなされた。！
’［ｆＦｌスペクトル（ＭＳ）はＭＳ−９スペクトロメ
ークによりなされた。

′−゛の 中性赤で標示された残留付着ＴＧＭ個体１！■の存在を
示す５４０ｎｍでの吸収をエビボリヂＡジ第４ソピベラ
ジン含有溶液の希釈に対してプロツトシた。

同様なブロワ１〜を既知の、あるいは同定された物質の
ｉ１１度の関数として作製した。未知試料の有効希釈は
イ・１肴Ｔ　Ｇ　Ｍの最大観測損失の５０％をもだらＪ
希釈であると定義される。また既知化合物のｌＩ′Ｉ製
された部分に対応するパラメータを［ＤｒｉＪ又ｔｉｔ
右効投′ｊ吊と表現する。培養又は精製された部分の／
１物学的活性の吊は次式 で決定され、（グリ利−キシン）ｍｉＬは真のグリオト
キシン溶液のｌＮ１麿（通常１ｍ当り１〜１０１１（１
）を意味１Ｊる。濃縮り［１０小ルム抽出物を分析する
際はさらに希釈因子が加わる。

Ｖ１２ｉの　に・１Ｊる　■ ５％のＦｅ２を補われた、イーグルの最少必須培地Ｆ１
５（グランド　アイランド　バイオロジカル　カンパニ
ー、グランド　アイランド、ニコー］−り）中の細胞（
１ｍｅ当り５Ｘ１０６個）はＧ　Ｔ　（１−１ｏｏｏｎ
Ｍｄ　）のない状態又は存在上で３０分間３７℃で予備
培養された。次いで３０−１８０分間種々の微粒子の食
作用が開始され、ここで試合は４℃へ初期急冷される。

特に炭素（ペリカン　インディア　インク、西独）県取
をＸ７ツノエ、ピー及びヨッフエイ、ジエー、エム、２
１＝ル　　−　−−・マー　１３４．　　７２９−　７
４０頁（１９８２）に述べられた方法により測定した。

定量化は、細胞の遠心分離による非食管用物質の除ノ、
の後溶解された（５０ｍＭの酢酸と５０％のＴタノール
による）細胞の８００ｎｍでの混濁麿の測定及び／又は
２００個のｉｐ核細胞の８４数による光鏡検を含んだ。

対照に対する百分率で表現される食作用は、１）対照試
料中の細胞数で割られた処理された試ｒ１中の炭素を含
む細胞数又は、２）対照試料の懸濁度で割られた処理さ
れた試ｒｌ中の８００ｒ＋Ｉｌｌにお【ノる懸濁庶どし
て定義される。

鉄カルボニルの食作用はコレン、■イブ・ニス・及びホ
ップス、アール、エフ、］ニニエしピｊ−ンー２゛−−
ル　　　　　々ユノロジー　７．　３９１１−４００頁
（１９７７）に述べられた方法に従って測定されｌこ。

螢光微小球（直径０．５７ｕｍ　、ポリηイＪンシズイ
ン］−ボレーテッド、つＡリントン、ペンシルバニア）
の−１取は螢光活性細胞選別器により分析された。螢光
強度の粒子数（試別当り２００．０００事象）の関数と
してのプロットが得られ、次いで積分された（ブラニク
ス７．タマＶ　アンド　カンパニー、東京）。

ＧＴの食作用抑１に効果は一般に測定され７．：　ｌｎ
＋　１）効果の半分をもたらしたＧ　Ｔ　１１１度で定
義される「０艶の値により表現される。

以下本研究で得られた結果の詳細を説明する。

ノ　−　力′　゛　Ｌｉ！ＪＬ！！１ＪｆｉＪ烟色麹菌
ケムカビ培養上澄より取られた生物学的に活性な化合物
はクロロホルム抽出、薄層クロア１〜グラフィー及び再
結晶化（第６表）により１０００　（Ｒ以上に精製され
た。この上澄から分離された他の化合物はＴ　Ｇ　Ｍ　
４４着試試合不活性であった。

ふ邦」）　　１ル１コｒス　　′産　の製 実質的に同等な過程が該カビの培養上澄中の活性代謝産
物を精製し、分離するのに用いられた。

烟」「麹−菌ノ　　　ノ　　１ｆＩＬ１のノ　リ　　〜
　１−２ラー−予備的研究によりこれら上澄中に存在づ
る粘ｆ１成分（第２図中の△、　Ｂ、ｃ＞は以−トの特
１’ｌを右することが示されていた。

（１）ゲル濾過法により決定された分子量はＦ；００以
下である。

■　１〜リブシン、プロテア−１，及びオリガーゼの消
化作用に対し安定である。

Ｇ）弱アルカリ中での加熱に弱く、耐酸鉛ｊス］〜で測
定したどころ随伴して硫化物放出をな１゜化合物Δ、Ｂ
及びＣについてのｌｌ物学的に活性な成分のＲｆ値はそ
れぞれ０．４９，０．４１及び０３４であった。生成さ
れた真のグリオトキシンのＲｒ値は０．５０であった。

第３図は真のグリ第１・キシン（下図）及びＲ７値が０
．４９の化合物（−１図）のＮＭＲスペクｉ・ルを示づ
。（：＃ｌ”’をＩＦ　（ｆ／とする以下の周波数は該
化合物につぎ赤外で観測されたピークを表す。３４５０
（ｍ）、　２９３０（Ｗ）　、　ＩＧ７０（Ｓ）、　１
４６０（ｗｌ　。

１３８０（ｗ）　、　１２８０　（ｗ）　、　１２４０
（ｗ）　、　１２００（ｗ）　、　１０６０　（ｗ）　
、　７２０（２１，６６０（Ｗ）及び６４０（ｗｌ、た
だしｓ、ｍ及びＷは強。

中、あるいは弱吸収を表す。貞のグリＡ−１−二Ｉ＝シ
ン試石も同一の赤外スペクトルを有していた。

表６ 生物学的に活＋Ｑな化合物の精製 段階　　　　　活性　　回収　非＞８　性’　　粘’Ｉ
’Ｊ度（ｎｏ／１）　　（χ）　　　　　　　　　（償
）ＳＡＦ　　　　　　　１２．０　　　　１００　　０
．０００７　　　　１クロロホルム 抽出　　　　　１０．６　　　８８　０．１６　　　２
３０ＴＩ０　　　　７．４　　　６２　０．７６　　１
１００再結晶０ 成分△　　　２．１　　　　　０．　り５±２１％６、
　　　　　　　　成分ＩＩ　　　　１，６　　　　　１
，２　　±２９％成分Ｃ３，７０，６±２２％ （ａ）ＴＧＭ付着試金試合ける有効希釈又は［０印の値
の真のグリオトキシンの値に対する比。比には希釈され
てないグリオ１・−ヤシン標準溶液の温石が乗じられて
いる。

（ｂ）非揮発性成分の重量により除された活性。

（Ｃ）　　個々の生物学的活性成分であり、△、Ｂ。

ＣはそれぞれＴｉＣ板より除去されエタノール又はクロ
ロボルム−シクロへキリンより再結畠されたグリオトキ
シン、グリオトキシンートリーリ′ルファイド及びグリ
オ１・キシン−テトラ−１ノルフアイトを意味する。

（ｄ）　　非活性士真のグリオトキシンと比較した変動
係数。

成分△の電子衝撃質量スペクトロコピーはＭ“を２６２
．２４４．２２６及び２１４で与えた。用／ｅが２６２
．Ｌり大きい細片は観測されなかった。成分への化学イ
オン化はＭ＋＋１を３２７．２６３（Ｍ”　＋１−３２
　）、　２４５（Ｍ”　＋１−３２−１１２０１及び２
２７（Ｍ”　＋１−３２−２Ｈ２０）で与えた。成分Ｃ
の化学イオン化はＭ４＋１を３９１，３５９（Ｍ”　＋
１−３）、３２７（Ｍ＋＋ｉ〜８２）。

２６３（Ｍ”　”１−３４）、２４５（Ｍ”　＋１−３
．＋　−１１２０）及び２２７（Ｍ”　＋１−３４〜２
１１　、　Ｏ）で与えた。

高分解能化学イオーン化質吊分析は以下のことを示した
。

成分へについては３２７．０４７２においてＭ”　＋１
゜最適化学式−ＣＩ３１−ＩＩ４Ｎ２０４　Ｓ２（期待
値＝　３２７．０４７３）、成分Ｂについては３！ｉ９
．０１９３　、最適化学式−（、＋３１−１１４　Ｎ２
０４８３　　（Ｉｌｌ］ｔＪｒ１ｆｆｔ＝　３５９．０
１９４）、成分Ｃについては３９０．９９１／ｌ　、最
適化学式−〇＋３１−ｌ＋鴫Ｎ２０４Ｓ＋（期ｔｌ＋値
−３９０，９９１５）となった。成分Ｂ及びＣについて
の高分解能ＮＭＲのデータを質量スペクトルデータのフ
ラギコメンテーションパターンど結びつ１フるとグリフ
ｔ　ｌ−＝１シン類似の構造が裏付（）られる。

成分Ｃの光学回転（ＣＩ−ＩＣＩ　３．１ｉ−２，３３
Ｘ１０　　　　Ｍ　　目ユ　（Ｍ）　　４ｏ４−１８！
１０’　　　、　　　（Ｍ）　　４３゜−１５００°、
　　（Ｍ）　５ｏｏ　−９７０’　、　　（Ｍ）　５７
７−〇２０°であった。真のグリオｌ−１−シンの文献
植は（Ｍ　）　５８９−８９０°　（ＣＨＣｌａ、濃度
−＝　０．１０３Ｍ）である。発明省の手許にある真の
グリオドキー　３７　＝ シンの対応づ−る（ｖｉは（Ｍ　）　４０４−１４８０
°、（Ｍ）４３５−１２００°、　　（Ｍ）　５００−
８１３４°、（Ｍ）５７７−５９３°　（ＣＩ−ＩＣ１
３，１１１度１，１８　ｘ　１０−”Ｍ　）であった。

このように成分Ｃ又はグリオド１シン−テトラサルファ
イドの０Ｒｒ）曲線１ま４００から５７７ｎｍの間で１
３−３０％の増加を除くと真のグリオトキシンのものと
同一であり、−硫化物成分の同じ絶対構造を示す。

化学的性質、安定特性、ＴＬＣ易動度、高分解能ＮＭＲ
，ＩＲ及び質量スペクトロス］ピーを絹合わせて真のグ
リオトキシン試料と比較すると成分Ａ、Ｂ、Ｃはそれぞ
れグリオトキシン、グリオトキシン−トリ−サルフアイ
ド及びグリオｌ−１シンーテ１〜ラーサルフアイドであ
ると同定された。

事実成分Ａ、Ｂ、Ｃの高分解能質量スベク１〜ルにおい
てフラギ］メンテージョンパターンは成分Ｂ及びＣの場
合の初期の硫黄の損失を除けば同一である。

エビボリヂＡジ　キ＼ビベ：−″゛の　　　〜の洟呈 これらの効果を第１表に示す。ＴＧＭによる炭素の県取
はグリオトキシン（１ｄ当り１０００ｎ（１）により８
２％まぐ抑１にされた。　ｖＡ測された効果の２分の１
を／１じるグリＡ１−キシン濃度（ｎＱ／ｍｅで表した
ＥＤｓ）は全ての粒子及び誘発及び常在性細胞個体群に
ついて同様であった。

大食細胞及び中核細胞の食作用と類似のプラスチック表
面への付着はグリオトキシンにより、ＦＤ＋３］の値（
第１表）に反映されている如く投与量に応じて抑１１さ
れる。第７表は大食細胞による食作用に対する種々の１
ビボリチオジオキソピベラジンの効果を示す。これらの
化合物は全て食作用を抑止する。第８表はエビポリチオ
ジオキソピペラジン部分を有しない他のカビ代謝産物は
かかる活性を有しないことを示す。グリ第１ヘキシンの
ジメチルチオエーテル誘導体が本試合にて活性を有しな
い事実はこれら化合部の１ピボリチオジオキ、　　　　
　ソビベラジンの必須（’ｌを強調するものである。

第１表 グリオトキシンの食作用及び関係のある過程への効果 基質　　　　　細胞　　　　　Ｆ　Ｄ　、１１ａ　　抑
、＋、　ｂｎｏ／　ｄ　　　　　％ 炭素　　　　ラットＴＧ−１４０１００±１４８２±７
ラツト　常在性　　９５±１５１３±１ＯＮ。

鉄カルボ０　ラットＴＧ−Ｈ０８８±１０５４±フル 螢光ラテツ　ラットＴＧ−Ｎ０　　１０５±５　８６−
！：１４クスビード アラ２ブーツ　ラットＴＧ−Ｎｏ　　　　７６±１７　
　≧９５りへの付着 ラツ１゛　常在性　　８２±１３　　ン９５Ｏ ラット　肺胞Ｈ０３７±１０　　）０５ラツト　インフ
ル エンザ肺胞Ｈ０４９±８　≧９５ マウスＴＧ−ＮＯ３４±５　≧９５ 人の抹消面液単 核細胞　　　　　　１９±１〉９５ マウスの２次的 線緒芽細胞　　　１６８±１８　　＞り５１９２９細胞
　　　　　３１１±３５　　＞９５８）値は少なくとも
３個の測定の平均値と＋／−の標準誤差を表す。

ｂ）　　１０００ｔ＋ｏ／　ｔｔｄ！グリオトキシンに
おいて対照と比較して定義。

第７表 ＴＧＭ食作用に対するエビポリチオジオキソビベラジン
の効果 化合物　　　　　　　　　　　　　　ＥＣ（７）８グリ
第１〜キシン　　　　　　　　　　　　　３４グリオト
キシン−トリ−サルフアイド　　　３０グリオトキシン
−テトラ−サルフアイド　　５６スポリデスミン　　　
　　　　　　　　　　４１，４−ジメチル１−３．６−
エピジチオ−２゜５−ジオキソピペラジン　　　　　　
　　　　６７デヒドログリオトキシン　　　　　　　　
　３９グリオトキシンのＳ、Ｓ−ジメヂルヂオａ）大食
細胞付着試合におけるｎＱ／　ｄ単位で表したＥＤ５０
値。

ｂ）この系統にあってエビボリヂオジオキソビベラジン
の完全な二値化物部分を有しない唯一の化合物を代表す
る。

第８表 大食細胞付着へのカビ代謝産物の効果 化合物　　　　　　　　　　　　　　ＥＤ＝ｎ”グリオ
トキシン　　　　　　　　　４４ｎＬＪ／ｍｅヘルボン
酸　　　　　　　　　＞　１，３ＩＩＩｇ／　ａｌｌリ
ーイトカラシンＢ　　　　　　　＞５■／　ｍ（！フー
マギリン　　　　　　　　＞０５■／　ｍｆｌペニシリ
ン　　　　　　　　　３０．５■／　ｍ（１ストレプト
マイシン　　　　　≧０５■／　ｍｌ）ａ）　　ＦＤ８
ｎはＴ　Ｇ　Ｍ接着を５０％抑１１するのに必要な化合
物の濃痩の意である。

特に指摘しない限り以下に述べる値は全て通常の実験誤
差範囲内にあり、当業者は１記及び下記の発明の変形及
び多様化が本発明の概念より逸脱することなく可能であ
ることを理解しよう。

巾　試験管内でのエビポリチオジオキソピペラジンの８
△ＬＢ／Ｃ抗Ｃ５７Ｂ＋／１０異常反応竹細胞陣書＋’
ＩＴＩ胞発生に対する効果は下の通りである。

第２表 ２Ｔ！ＺＩＬｙ−夕　　化合物　　　　　Ｅｒ）切細胞 ＩＩＩＩＩＩ　　　　　　　　　グリオトキシン　１０
００ｇ／ｍ（’ＴＧＭ　　　　　　　　グリオトキシン
　３０ｎΩ／−牌臓　　　　　　　　スポリデスミン　
１０ｎａ／ｄＴＧＭ　　　　　　　　スポリデスミン　
　４ｎａ／Ｉｌｉ！■　試験管内でのグリオ）・キシン
のＣＢＡ抗ＢＡ　Ｌ　Ｂ　／　Ｃ異常反応性細胞障害性
Ｔ細胞の誘発は下の通りである。

第３表 ステイミコルータ　　　　％５１Ｃｒ−Ｐ８１５の比崩
壊細胞の処理 なし　　　　　　　　　　　　　５５．３（１，３）グ
リオトキシン（１０００ｎｏ／ｍｉり　　　　−０，４
（０，３）グリオトキシン（１００ｎ（１／ｍｅ）　　
　　　４．１（０，４）グリオ１・キシン（１０００ｎ
Ｏ／ｄ　）及びＣ８０，１（０，５） グリオトキシン（１００ｎ（１，／ｄ　）及びＣ８５８
，８（１，５） 紫外線照射　　　　　　　　　　　３．３（０，６）紫
外線照射及びＣ８６０，５（４，１）ｃｓ−ｃｏｎ△−
活性リンパ細胞上澄 ０４時間以上にわたる５１　ｃ　ｒの比放出の平均百分
率。自発放出は１６％であった。滴定曲線による値は培
養の１／３０であった。３回のくりかえしのＳＦＭを括
弧内に示す。

■　試験管内での細胞障害＠ＴＩＩＩＩＩＩ試金におけ
るタ試合ット細胞崩壊に対するグリオトキシンの効果は
下の通りである。

第４表 ＥＤ５０　　　ＴＧＭ　　　１，９２９　　　ＢＷ　　
ＣｏｎＡ′ｊＪ細胞 グ１ノＡ−ト　　３０　　　　１０００　　８００　　
１０００キシン ★ＥＤ５Ｄ値はｎｇ／−で示され、ターゲット細胞の崩
壊を５０％抑止したグリオトキシンＩＩＩを表す。

４）試験管内でのマイトジェンに応答したＴ及びＢリン
パ細胞増殖に対するエビポリチオジオキソピペラジンの
効果は下の通りである。

第５表 化合物　　　　　　　　　　　　　Ｆｒ）５Ｑ★グリオ
トキシン　　　　　　　　　　　　１５スポリデスミン
　　　　　　　　　　　　２デヒドログリオトキシン　
　　　　　　　２５１，４−ジメチル　１−３．６−ニ
ビジチオ−２，５−ジオキソピペラジン　　　　　　　
１５０★［１）５Ｄ値はｎ（１／ｄｌｉ位であり、これ
ら化合物のマイトジェン１ＰＳ及びＣｏｎ△に対するＴ
及びＢリンパＩｌｌ胞の増殖的応答を抑止する濃度を表
寸。

Ｔピボリチオジオキソビベラジンは上述の標準テス１〜
に示された如く液素竹及び細胞免疫に対する効果により
有用である。それらは免疫細胞あるいはリンパ細胞の抑
制あるいは形成あるいは増殖に有用であり、従って自己
免疫疾患の治療に有用であり、例えば甲状腺、皮膚及び
牌臓等の移植の拒否を抑制する。その詳細は下の通りで
ある。

ＣＩ）甲状腺：供給体動物（マウス）から甲状腺を麻酔
下で取り出１，グリオトキシン（１耐当り０−１０００
ｎ（１）を含有する滅菌培地（Ｆ１５）へ移した。

甲状腺は３７度で加湿ＣＯ２定温器中（空気中に５％の
ＣＯ２含有）で６−１８時間培養した。組織は新しいＦ
１５又はその同等物で洗浄され受容　４７一 体の同種マウスの腎臓股下に内移植された。植接用性機
能は組織学的及び機能的に評価され、後者は放射性ヨウ
素の実際の県取ににり評価された。

これらの実験においてグリオトキシンを受けなかった２
０例の同種移植のうち受容体マウスにより受入れられた
のは１例もなかった。しかし３０例の処理された植接用
片のうち９例は成功した。これらの実験において受容体
動物は処ｗ（１なわら免疫抑制）を手術のための麻酔以
外には受けなかった。

［Ｆ］　皮膚：マウスの尾の皮膚についての初期の研究
は、供与体皮膚の前処理が処理なしの組織に比較して主
要［１１ｆ！適合遺伝子複合体不適合のマウスの生存期
間を延長することを示した。特にグリオトキシン（１−
当り１０１０００ｎの存在下でのＦ１５の如き適当な培
地中における供給体Ｉ］織の試験管培養は植接用片の生
存を７−１５日間延長した。

■　膵島；供給体マウスの膵島のグリオトキシン（１７
！当り１１０００ｎ、　３７℃で１２−１８ｖｊ間）試
験管培養は異系統の５体の動物中５つの植接用片、すな
わち同種移植の成功をもたらした。膵島の移植及びその
準備は十分に公刊されている。これらの植接用片はその
部位に３１７２ヶ月以ト存在した。グリオトキシンのな
い状態での照射同種移植が行われたもので成功したもの
はなかった。形態学的及び機能的研究はこれらの結果を
Ｗ認した。

特に４体の胎児供給体の膵島を上記の如くグリオトキシ
ンで処理しストレプトシトシンにより糖尿病１つにされ
た同種受容体の腎被膜下に移植した。

この動物では４−６週間後に正常白糖が達成された。上
記の如くグリオトキシンで処置された１０例の同系移植
は全て拒絶反応の徴候なしに成功裡に移植された。

本疾患の免疫損傷の外見上の細胞的ｆ／ｌ質及びその大
食細胞は試験管内における大食細胞機能に対する該化合
物の効果の良いモデルを与える。かかる疾患の誘発は受
動免疫を含み、その除光にミニリンｆ！基牲タンパク質
で免疫された牌ｌｌｌ１ｌ胞が純真動物に移される。こ
れら牌臓細胞のグリオトキシン（１−当り１００−１０
０Ｏｎ（１）、スポリデスミン（１−当り３−３−３０
０ｎあるいは１，４−ツメブルー３，６−エピジチオ−
２６５−ジオキソピペラジン（１−当り３００−１００
０ｎｇ　）による予備的培養は各処理において５例中５
例、完全に疾患を防止したく神経学的徴候及び中枢神経
系の病理学的検診による測定）。

牌臓細胞にこれら化合物による処理をしなかった１０例
の対照中９例は麻痺した。

上記の使用において投与量は当然用いる化合物。

投薬の方式及び望まれる治療により変化する。

【図面の簡単な説明】

第１図は本発明になるグリオトキシン（ｎ−２）。 グリオトキシン−トリ−サルフアイド（ｎ−３）。 及びグリオトキシン−テトラ−サルフアイド（ｎ−４）
の一般式を示す図、第２図は上記化合物を薄層クロマト
グラフィーにて精製した結果を示す写真、第３図は明色
麹菌ケムカビの代謝産物から単離されたグリオトキシン
と真のグリオトキシンのＮＭＲスベク］・ルを示す図、
第４図は明色麹菌ケムカビの培養により代謝産物の出現
を示す図である。 特許出願人　ロナルド　デビット　アイヒナ−ＦＩＧＵ
ＲＩＥ　　Ｉ り は 区 、シー ム ＜Ｑ）Ｑ

Claims (12)

【特許請求の範囲】
1. （１）生体を一般式（１） ▲数式、化学式、表等があります▼（１） の化合物単体、又は一又は複数の製薬学的に許容される
   担体又は希釈剤と共におくことを特徴とし、 こゝで、Ｒ＾０及びＲ＾１は水素、ヒドロキシル、アル
   キル、アルコキシ及びアシロキシよりなるグループから
   選ばれる基であり；Ｒ＾２及びＲ＾３は別々に水素及び
   アルキルよりなるグループより選ばれる基であり；又は
   共に一般式（２）▲数式、化学式、表等があります▼（
   ２） の基を表わし、 こゝでＲ＾５、Ｒ＾６、Ｒ＾７、Ｒ＾８及びＲ＾９は水
   素、アルキル、ヒドロキシ、アルコキシ、サルファイド
   及びハロゲンよりなるグループより別々に選ばれ；ある
   いはＲ＾２及びＲ＾３は共に一般式（３） ▲数式、化学式、表等があります▼（３） の基を表わし こゝで、Ｒ＾１＾０及びＲ＾１＾１は両者共水素を表わ
   し；あるいは共に原子価結合を表わし；Ｒ＾１＾２、Ｒ
   ＾１＾３、Ｒ＾１＾４、Ｒ＾１＾５は水素、ヒドロキシ
   、アルコキシ、サルファイド及びアシロキシよりなるグ
   ループより選ばれる基であり；ｎは２から４の範囲の整
   数より選ばれる、生体を処置する方法。
2. （２）該生体を単独で又は一又は複数の製薬学的に受入
   れ得る担体又は希釈剤と共に、一般式（１）の化合物と
   共に培養することを特徴とする生体処置方法。
3. （３）単独で、又は一又は複数の製薬学的に許容される
   担体又は希釈剤と共に、一般式（１）の化合物を投薬す
   ることによる、人間以外の動物の免疫反応を変化又は抑
   制する方法。
4. （４）該生体をグリオトキシン、グリオトキシン−トリ
   −サルフアイド、グリオトキシン−テトラ−サルフアイ
   ド、スポリデスミン、１，４−ジメチル−３，６−エピ
   ジチオ−２，５−ジオキソピペラジン及びデヒドログリ
   オトキシン又は一般式（２）及び（３）に示したそれら
   の誘導体の存在下で培養することよりなる特許請求の範
   囲第１、２又は３項記載の方法。
5. （５）一般式（１）を有する化合物を治療学的有効投与
   量、治療の必要に応じて動物に投薬することよりなる人
   間以外の動物の自己免疫疾患を処置する方法。
6. （６）グリオトキシン、グリオトキシン−トリ−サルフ
   アイド、グリオトキシン−テトラ−サルフアイド、スポ
   リデスミン、１，４−ジメチル−３，６−エピジチオ−
   ２，５−ジオキソピペラジン及びデヒドログリオトキシ
   ン、又は一般式（２）及び（３）に示したそれらの誘導
   体を治療学的有効投与量、治療の必要に応じて動物に投
   薬することよりなる人間以外の動物の自己免疫疾患を処
   置する方法。
7. （７）グリオトキシン−トリ−サルフアイド（Ｃ＿１＿
   ３Ｈ＿１＿４Ｎ＿２Ｏ＿４Ｓ＿３）を生成するカビの菌
   株（烟色麹菌ケムカビ、ペニシリウム　テルリコウスキ
   イ、又はその明白な系統的同一物又は関連菌株、又はそ
   の突然変異体あるいは変種）を栄養培地と接触せしめ、
   それからグリオトキシン−トリ−サルフアイドを分離す
   ることを特徴とするグリオトキシン−トリ−サルフアイ
   ドの製造方法。
8. （８）グリオトキシン−テトラ−サルフアイド（Ｃ＿１
   ＿３Ｈ＿１＿４Ｎ＿２Ｏ＿９Ｓ＿４）を生成するカビの
   菌種（烟色麹菌ケムカビ、ペニシリウム　テルリコウス
   キイ、又はその明白な系統的同一物又は関連菌株、又は
   その突然変異体あるいは変種）を栄養培地と接触しせめ
   、それからグリオトキシン−テトラ−サルフアイドを分
   離することを特徴とするグリオトキシン−テトラ−サル
   フアイドの製造方法。
9. （９）グリオトキシン−トリ−サルフアイド。
10. （１０）グリオトキシン−テトラ−サルフアイド。
11. （１１）一又は複数の製薬学的に許容される担体又は希
    釈剤と共に、又はなしで、特許請求の範囲第７項記載の
    方法により調製されたグリオトキシン−トリ−サルフア
    ド。
12. （１２）一又は複数の製薬学的に許容される担体又は希
    釈剤と共に、又はなしで、特許請求の範囲第８項記載の
    方法により調製されたグリオトキシン−テトラ−サルフ
    アイド。