JPS60209530A - 殺腫瘍性物質 - Google Patents
殺腫瘍性物質Info
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- JPS60209530A JPS60209530A JP59066330A JP6633084A JPS60209530A JP S60209530 A JPS60209530 A JP S60209530A JP 59066330 A JP59066330 A JP 59066330A JP 6633084 A JP6633084 A JP 6633084A JP S60209530 A JPS60209530 A JP S60209530A
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- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は、殺ｌＩｉ！瘍性物質に関する。
癌患者が急増している現在、より有効な制ガン剤の開発
が強く望まれている。制ガン剤としては化学療法剤、免
疫療法剤などが用いられているが、副作用などの問題が
ある。
が強く望まれている。制ガン剤としては化学療法剤、免
疫療法剤などが用いられているが、副作用などの問題が
ある。
従来、試験管内において哺乳動物由来のマクロファージ
が種々の植物性レクチンの存Ｙ１下に腫瘍細胞に対し障
害を示す、いわゆるレクチン依存性マクロファージ仲介
性細胞障害性反応（Ｌｅｃｔｉｎｄｅｐｅｎｄｅｎｔ
ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ ｍｅｄｉａｔｅｄ ｃｙｔｏｔ
ｏｘｉｃｉｔｙ；ＬＤＭＣ）の存在することが知られて
いた。
が種々の植物性レクチンの存Ｙ１下に腫瘍細胞に対し障
害を示す、いわゆるレクチン依存性マクロファージ仲介
性細胞障害性反応（Ｌｅｃｔｉｎｄｅｐｅｎｄｅｎｔ
ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ ｍｅｄｉａｔｅｄ ｃｙｔｏｔ
ｏｘｉｃｉｔｙ；ＬＤＭＣ）の存在することが知られて
いた。
そこで、本発明者らは先に見出したセンチニクバエ（Ｓ
ａｒｃｏｐｈａｇａ ｐｅｒｅｇｒｉｎａ）由来のレク
チン様活性を有する複合蛋白〔サルコファーガ・レクチ
ン、（Ｓａｒｃｏｐｈａｇａ １ｅｃｔｉｎ）という。
ａｒｃｏｐｈａｇａ ｐｅｒｅｇｒｉｎａ）由来のレク
チン様活性を有する複合蛋白〔サルコファーガ・レクチ
ン、（Ｓａｒｃｏｐｈａｇａ １ｅｃｔｉｎ）という。
〕においても、先のＬＤＩ’ＩＣ活性が誘導しえろうど
うかを調べたところ、本すルコファーガ・レクチンを共
存させることにより哺乳動物由来のマクロファージは著
しい腫瘍細胞障害活性を示すことが明らかとなった。
うかを調べたところ、本すルコファーガ・レクチンを共
存させることにより哺乳動物由来のマクロファージは著
しい腫瘍細胞障害活性を示すことが明らかとなった。
さらに、本発明者は、本すルコファーガ・レクチンを用
いて哺乳動物由来のマクロファージを刺激したところ、
その培養上清から新規な殺腫瘍性物質が得られること、
および本物質はコンカナバリンＡなどの植物レクチンで
刺激した場合には得られないことを見出し、本発明を完
成した。すなわち、本発明は、哺乳動物由来のマクロフ
ァージを体表を刺傷したセンチニクバエ（Ｓａｒｃｏｐ
ａｇａ ｐｅ−ｒｅｇｒｉｎａ ）幼虫またはその軸化
初期のサナギのホモジネートまたは体液から得られ、ゲ
ル濾過法による分子量が約１８８，０００で、５Ｏ５−
ゲル電気泳動により分子量約３２．０００のサブユニッ
ト４分子と分子量約３０，０（１０のサブユニット２分
子に分かれるサルコファーガ・レクチンで刺激すること
によって得られる殺腫瘍性物質に関する。
いて哺乳動物由来のマクロファージを刺激したところ、
その培養上清から新規な殺腫瘍性物質が得られること、
および本物質はコンカナバリンＡなどの植物レクチンで
刺激した場合には得られないことを見出し、本発明を完
成した。すなわち、本発明は、哺乳動物由来のマクロフ
ァージを体表を刺傷したセンチニクバエ（Ｓａｒｃｏｐ
ａｇａ ｐｅ−ｒｅｇｒｉｎａ ）幼虫またはその軸化
初期のサナギのホモジネートまたは体液から得られ、ゲ
ル濾過法による分子量が約１８８，０００で、５Ｏ５−
ゲル電気泳動により分子量約３２．０００のサブユニッ
ト４分子と分子量約３０，０（１０のサブユニット２分
子に分かれるサルコファーガ・レクチンで刺激すること
によって得られる殺腫瘍性物質に関する。
本発明者は、本物質をＴｕｍｏｒ Ｋ１１ｌｉｒ＋Ｂ
ｌ’ａｃｔｏｒ （ＴＫＦ）と命名した。
ｌ’ａｃｔｏｒ （ＴＫＦ）と命名した。
本発明のＴＫＦは、体表を刺傷したセンチニクバエ（Ｓ
ａｒｃｏｐａｇａ ｐｅｒｅｇｒｉｎａ ）幼虫または
その軸化初期のサナギのホモジネートまたは体液から得
られ、ゲル濾過法による分子量が約１８８，０００で、
５ＤＳ−ゲル電気泳動により分子量約３２，０００のサ
ブユニット４分子と分子量約３０，０００のサブユニッ
ト２分子に分かれるサルコファーガ・レクチンを含有す
る培地中で、哺乳動物由来のマクロファージを培養し、
培養物から採取することにより得られる。
ａｒｃｏｐａｇａ ｐｅｒｅｇｒｉｎａ ）幼虫または
その軸化初期のサナギのホモジネートまたは体液から得
られ、ゲル濾過法による分子量が約１８８，０００で、
５ＤＳ−ゲル電気泳動により分子量約３２，０００のサ
ブユニット４分子と分子量約３０，０００のサブユニッ
ト２分子に分かれるサルコファーガ・レクチンを含有す
る培地中で、哺乳動物由来のマクロファージを培養し、
培養物から採取することにより得られる。
本発明に用いられるマクロファージとしては、ヒト、マ
ウス、ラント、ウシ、ブタ、ヒツジ、ウサギ、イヌなど
の哺乳動物由来のものであって、本発明のＴ Ｋ Ｆを
生産する能力を有するものであればいずれでもよいが、
特に、Ｊ−７７４、Ｐ−，３３８ｆｌ−１。
ウス、ラント、ウシ、ブタ、ヒツジ、ウサギ、イヌなど
の哺乳動物由来のものであって、本発明のＴ Ｋ Ｆを
生産する能力を有するものであればいずれでもよいが、
特に、Ｊ−７７４、Ｐ−，３３８ｆｌ−１。
Ｐｕ５−１．．８などのマウス由来単球性白血病細胞株
またはマウス由来骨髄性白血病細胞株Ｍ１を用いること
ができる。また、末梢血から得られる単球または臓器か
ら得られるマクロファージも使用することができる。
またはマウス由来骨髄性白血病細胞株Ｍ１を用いること
ができる。また、末梢血から得られる単球または臓器か
ら得られるマクロファージも使用することができる。
培養は、通常動物細胞の培養に用いられる条件下に行わ
れる。すなわち、動物細胞用培地（ＲＰＭＩ１６４０な
ど）に血清（ウシ胎児血清など）を添加するか、または
添加することなく、好ましくは、炭ガス卿卵器中、３７
℃、２〜２４時間培養することによって行われる。また
、必要に応じて、分化誘導物質を存在させることもでき
る。
れる。すなわち、動物細胞用培地（ＲＰＭＩ１６４０な
ど）に血清（ウシ胎児血清など）を添加するか、または
添加することなく、好ましくは、炭ガス卿卵器中、３７
℃、２〜２４時間培養することによって行われる。また
、必要に応じて、分化誘導物質を存在させることもでき
る。
サルコファーガ・レクチンは、０．１μｇ ／ ｍ １
から数百μｇ／ｍｌ、好ましくは、１〜１００μｇ／ｍ
ｌ添加すればよい。
から数百μｇ／ｍｌ、好ましくは、１〜１００μｇ／ｍ
ｌ添加すればよい。
このようにして得られた培養液を遠心分離または傾しゃ
することによって、本発明のＴＫＦを含有する培養上清
が得られる。培養上清からのＴＫＦの精製は培養上清を
必要に応じて濃縮し、ゲル濾過法、アフィニティクロマ
ト法、電気泳動法、透析法、限外濾過法、イオン交換法
などの常法を単独で、または好ましくは、任意に組み合
せて行うことができる。
することによって、本発明のＴＫＦを含有する培養上清
が得られる。培養上清からのＴＫＦの精製は培養上清を
必要に応じて濃縮し、ゲル濾過法、アフィニティクロマ
ト法、電気泳動法、透析法、限外濾過法、イオン交換法
などの常法を単独で、または好ましくは、任意に組み合
せて行うことができる。
本発明方法において用いられるサルコファーガ・レクチ
ンはセンチニクバエの幼虫を注射針で刺傷させるなどの
方法で、その体表に障害を与え、その幼虫をブレンダー
を用いて数分間ホモゲナイズし、ついで抽出、精製、単
離することによって得られる。たとえば、得られたホモ
ジネートの遠心上ｌ青をセファロースＣＬ６Ｂのカラム
などによるアフィニティクロマトに付し、カラムを緩衝
生理食塩液で十分に洗浄後、ガラクトース／８液または
ラクトース溶液などを／８離液として用いて吸着蛋白を
溶出さ−ｌると、サルコファーガ・レクチンが溶出する
。これから、透析などにより溶離液を除いて凍結乾燥に
付すと、純粋な粉末として得られる。
ンはセンチニクバエの幼虫を注射針で刺傷させるなどの
方法で、その体表に障害を与え、その幼虫をブレンダー
を用いて数分間ホモゲナイズし、ついで抽出、精製、単
離することによって得られる。たとえば、得られたホモ
ジネートの遠心上ｌ青をセファロースＣＬ６Ｂのカラム
などによるアフィニティクロマトに付し、カラムを緩衝
生理食塩液で十分に洗浄後、ガラクトース／８液または
ラクトース溶液などを／８離液として用いて吸着蛋白を
溶出さ−ｌると、サルコファーガ・レクチンが溶出する
。これから、透析などにより溶離液を除いて凍結乾燥に
付すと、純粋な粉末として得られる。
このザルコファーガ・レクチンは、ｎ１ｏ−Ｇｅｌ Ｐ
−３００を用いたゲル濾過法により、分子量は約１８８
゜０００と算定された。そしてこの蛋白は５ｌ）Ｓ−ゲ
ル電気泳動により分子量約３２．０００と約３０．００
（＋の二つのザブユニットに分かれ、その染色像の濃度
比が常に２：１になっていることから、３２．０＋１０
の男ブユニット４分子と３０，０００のザブユニット２
分子から構成されていることが分る。
−３００を用いたゲル濾過法により、分子量は約１８８
゜０００と算定された。そしてこの蛋白は５ｌ）Ｓ−ゲ
ル電気泳動により分子量約３２．０００と約３０．００
（＋の二つのザブユニットに分かれ、その染色像の濃度
比が常に２：１になっていることから、３２．０＋１０
の男ブユニット４分子と３０，０００のザブユニット２
分子から構成されていることが分る。
本発明で用いられるサルコファーガ・レクチンは、この
ように、体表を刺傷されたセンチニクバエの幼虫または
軸化初期のサナギのホモジネートまたは体液から抽出、
精製、単離されるが、化学的に合成してもよいし、ある
いは、遺伝子操作の手法で微生物学的に製造してもよい
。
ように、体表を刺傷されたセンチニクバエの幼虫または
軸化初期のサナギのホモジネートまたは体液から抽出、
精製、単離されるが、化学的に合成してもよいし、ある
いは、遺伝子操作の手法で微生物学的に製造してもよい
。
このようにして得られた本発明のＴＫＦは、トリプシン
に感受性であり、９０℃、３０分の加熱で失活し、５６
℃、３０分の加熱で約２０％が失活する、分子量約３０
，０００〜約７０，０００ （セファデックスＧ−２０
０によるゲル濾過法により測定）の蛋白性物質である。
に感受性であり、９０℃、３０分の加熱で失活し、５６
℃、３０分の加熱で約２０％が失活する、分子量約３０
，０００〜約７０，０００ （セファデックスＧ−２０
０によるゲル濾過法により測定）の蛋白性物質である。
第１図に、ＴＫＦのセファデックスＧ −２００にによ
るゲル濾過の溶出パターンを示す。
るゲル濾過の溶出パターンを示す。
本発明のＴＫＦは、後述の実験例に示すようにマウス腫
瘍細胞に対し正常胎児細胞の約１ 、０００倍の殺細胞
活性を示すことから、腫瘍細胞のみに作用するという選
択性があり、かつ、マウスの１ｎｖｉｖｏ実験において
も優れた殺腫瘍効果を示す。また、種特異性がないとい
う特長を有する。
瘍細胞に対し正常胎児細胞の約１ 、０００倍の殺細胞
活性を示すことから、腫瘍細胞のみに作用するという選
択性があり、かつ、マウスの１ｎｖｉｖｏ実験において
も優れた殺腫瘍効果を示す。また、種特異性がないとい
う特長を有する。
本発明のＴＫＦを医薬として用いる場合、担体、賦活剤
、希釈剤などと混合し、錠剤、カプセル剤、散剤、顆粒
剤、注射剤、軟膏、坐剤などの形態で投与されうる。投
与量は、腫瘍の種類や症状などにより変わりうるが、通
常成人１日当り０．１〜１００ｍｇが適当である。
、希釈剤などと混合し、錠剤、カプセル剤、散剤、顆粒
剤、注射剤、軟膏、坐剤などの形態で投与されうる。投
与量は、腫瘍の種類や症状などにより変わりうるが、通
常成人１日当り０．１〜１００ｍｇが適当である。
以下余白
以下、製造例、実施例および実験例により本発明を説明
する。
する。
製造例 ザルコファーガ・レクチンの製造センチニクバ
エの幼虫としては、体表を水で濡らすことによって、回
軸殻形成を阻止し、三線に同調しであるものを用いた。
エの幼虫としては、体表を水で濡らすことによって、回
軸殻形成を阻止し、三線に同調しであるものを用いた。
体表に傷害を与える操作は、三線幼虫を氷上に置いて動
きを鈍くし、これをガラス板上に並べ、第一体筒下部に
対し、注射針で刺傷させる、という方法を用いた。
きを鈍くし、これをガラス板上に並べ、第一体筒下部に
対し、注射針で刺傷させる、という方法を用いた。
傷害を与えて２日後、幼虫１０００匹に対し、 １３０
ｍ１の下記組成の緩衝生理食塩液（以下、Ｂ Ｉ Ｓ
−１という。）を加え、冷却下にプレンダーでホモシナ
イスした。ホモジネートをガーゼで濾過した後、濾液を
８０００ ｒｐｍ、３０分遠心分離した。得られた上清
をセファロースＣＬ−６Ｂのカラムに付し、ＢＩＳ−１
、続いて、下記組成の緩衝生理食塩液（以下、ＢＩＳ−
２という。）で洗浄後、０．２Ｍガラクトースを含むＢ
ＩＳ−１溶液で溶出した。
ｍ１の下記組成の緩衝生理食塩液（以下、Ｂ Ｉ Ｓ
−１という。）を加え、冷却下にプレンダーでホモシナ
イスした。ホモジネートをガーゼで濾過した後、濾液を
８０００ ｒｐｍ、３０分遠心分離した。得られた上清
をセファロースＣＬ−６Ｂのカラムに付し、ＢＩＳ−１
、続いて、下記組成の緩衝生理食塩液（以下、ＢＩＳ−
２という。）で洗浄後、０．２Ｍガラクトースを含むＢ
ＩＳ−１溶液で溶出した。
２８０ ｎｍに吸収を示す分画を集め、脱イオン水に対
し透析した後、凍結乾燥し、サルコファーガ・レクチン
を白色粉末として得た。収量は幼虫１万匹から２ｍｇで
あった。
し透析した後、凍結乾燥し、サルコファーガ・レクチン
を白色粉末として得た。収量は幼虫１万匹から２ｍｇで
あった。
ＢＩＳ、−１の組成：
１３０ＩｎＭ 塩化ナトリウム、５ ｍＭ 塩化カリウ
ム、１ ｍＭ 塩化カルシウム、１０ ｍＭ ）リス
（ｐＨ７’、９） ＢＩＳ−２の組成： ２３０ ｍＭ 塩化ナトリウム、５ ｍＭ 塩化カリウ
ム、１ ｍＭ 塩化カルシウム、１０ ｍＭ’ ）リス
−（ｐＨ７，９） 実施例Ｉ ＴＫＦの採取・精製 マウス由来単球性白血病細胞Ｊ−７７４を１０％牛脂児
血清（Ｆ’Ｃ３）を含むＲＰＭ１１６４０培地に４ｘ１
０６細胞１５ｍ１になるように恐濁し、直径６ｃｍのプ
レートで５％ｃｏＬ−９５％空気中で３７°Ｃ５３時間
培養した。培養後、遠心分離し、上清を除き、細胞をＦ
ｅ２を含まないＲＰＭ１１６４０培地に懸濁し、遠心分
離して上清を除き、細胞を洗浄した。洗浄した細胞を５
ｍｌのＦｅ２を含まないＲＰＭ１１６４０培地に懸濁し
、これにサルコファーガ・レクチンを５〜１０μｇ／ｍ
ｌになるように加え、５％Ｃｏ、−９５％空気中で３７
℃、２０〜２４時間培養した。その後、遠心分離し、Ｔ
ＫＦを含む培養液を得た。
ム、１ ｍＭ 塩化カルシウム、１０ ｍＭ ）リス
（ｐＨ７’、９） ＢＩＳ−２の組成： ２３０ ｍＭ 塩化ナトリウム、５ ｍＭ 塩化カリウ
ム、１ ｍＭ 塩化カルシウム、１０ ｍＭ’ ）リス
−（ｐＨ７，９） 実施例Ｉ ＴＫＦの採取・精製 マウス由来単球性白血病細胞Ｊ−７７４を１０％牛脂児
血清（Ｆ’Ｃ３）を含むＲＰＭ１１６４０培地に４ｘ１
０６細胞１５ｍ１になるように恐濁し、直径６ｃｍのプ
レートで５％ｃｏＬ−９５％空気中で３７°Ｃ５３時間
培養した。培養後、遠心分離し、上清を除き、細胞をＦ
ｅ２を含まないＲＰＭ１１６４０培地に懸濁し、遠心分
離して上清を除き、細胞を洗浄した。洗浄した細胞を５
ｍｌのＦｅ２を含まないＲＰＭ１１６４０培地に懸濁し
、これにサルコファーガ・レクチンを５〜１０μｇ／ｍ
ｌになるように加え、５％Ｃｏ、−９５％空気中で３７
℃、２０〜２４時間培養した。その後、遠心分離し、Ｔ
ＫＦを含む培養液を得た。
このＴＫＦを含む培養液を緩衝生理食塩液で平衡化した
セファデックスＧ−２００のカラムに付し、緩衝生理食
塩液で溶出した。溶出液をフラクションコレクターで分
画し、次に述べるａｓｓａｙ法で各分画の活性を測定し
たところ、第１図に示す溶出パターンが得られた。活性
分画を凍結乾燥することにより、ＴＫＦが得られた。
セファデックスＧ−２００のカラムに付し、緩衝生理食
塩液で溶出した。溶出液をフラクションコレクターで分
画し、次に述べるａｓｓａｙ法で各分画の活性を測定し
たところ、第１図に示す溶出パターンが得られた。活性
分画を凍結乾燥することにより、ＴＫＦが得られた。
本物質のトリプシンに対する感受性を調べたところ、ト
リプシン０．１ ｍｇ／ ｍｌで、２７℃、３０分加温
すると、６８．７％、３７℃、３０分では８１．４％、
またトリフシン１．０ ｍｇ／ｍｌで３７°Ｃ１３０分
加温すると、８７゜７％失活した 実施例２ ＴＫＦのａｓｓａｙ法 標的細胞Ｌ−９２９を１０％牛脂児血／ｉ’？（Ｆｅ２
）を含むＭＥＭ培地に２〜３ｘ１０６細胞／１５ｍ１に
し、シャーレ中で３時間培養した。その後、トリチウム
標識チミジンを１〜０．５μｃｉ／ｍｌになるように加
え、１８時間、３７°Ｃで５％Ｃ０Ｌ−９５％空気中で
培養した。１８時間後、培養液を除き、細胞を０．０２
％ＥＤＴＡを含有するカルシウム不合緩衝生理食塩液〔
ＰＢＳ （−））で１回洗浄した後、０．０２％および
０．０５％トリプシンを含むＰＢＳ （−）をシャーレ
当り３ｍｌ入れ、３分間５％Ｃｏニー９５％空気中で３
７°Ｃに保った。次に、少量のＦｅ２を含むＭｌｉＭ培
地を加え、４°Ｃで５分間、１０００ ｒｐｍで遠心し
、上１ｎを除き、細胞を集めた。得られた細胞をｌＯ％
ＦＣ３を含むＨＥＭ培地に懸濁した。
リプシン０．１ ｍｇ／ ｍｌで、２７℃、３０分加温
すると、６８．７％、３７℃、３０分では８１．４％、
またトリフシン１．０ ｍｇ／ｍｌで３７°Ｃ１３０分
加温すると、８７゜７％失活した 実施例２ ＴＫＦのａｓｓａｙ法 標的細胞Ｌ−９２９を１０％牛脂児血／ｉ’？（Ｆｅ２
）を含むＭＥＭ培地に２〜３ｘ１０６細胞／１５ｍ１に
し、シャーレ中で３時間培養した。その後、トリチウム
標識チミジンを１〜０．５μｃｉ／ｍｌになるように加
え、１８時間、３７°Ｃで５％Ｃ０Ｌ−９５％空気中で
培養した。１８時間後、培養液を除き、細胞を０．０２
％ＥＤＴＡを含有するカルシウム不合緩衝生理食塩液〔
ＰＢＳ （−））で１回洗浄した後、０．０２％および
０．０５％トリプシンを含むＰＢＳ （−）をシャーレ
当り３ｍｌ入れ、３分間５％Ｃｏニー９５％空気中で３
７°Ｃに保った。次に、少量のＦｅ２を含むＭｌｉＭ培
地を加え、４°Ｃで５分間、１０００ ｒｐｍで遠心し
、上１ｎを除き、細胞を集めた。得られた細胞をｌＯ％
ＦＣ３を含むＨＥＭ培地に懸濁した。
このようにして得られたＬ−９２９細胞を２ｘ１０”細
胞／ウェルになるように腰これにＴＫＦ溶液を加え最終
２００μＩで５％Ｃｏえ一９５％空気中、３７℃で４２
時間培養した。培養後、上清中の放射能濃度を液体シン
チレーションカウンターで測定した。
胞／ウェルになるように腰これにＴＫＦ溶液を加え最終
２００μＩで５％Ｃｏえ一９５％空気中、３７℃で４２
時間培養した。培養後、上清中の放射能濃度を液体シン
チレーションカウンターで測定した。
その他の標的細胞の場合も同様にし７て測定できる。
実験例Ｉ ＴＫＦの選択的殺細胞作用
上記実施例２のａｓｓａｙ法を用いて、ＴＫＦのＬ−９
２９細胞およびマウス正常胎児線維芽細胞に対する殺細
胞作用を調べたところ、Ｌ−９２９細胞に対して、ＴＫ
Ｆの凍結乾燥品の１／１０００希釈品では２５゜３％、
１／２０００希釈品では１８．７％の殺細胞作用が観察
された。一方、正富胎児線維芽細胞にりＪしては、１／
１０希釈においてさえも、６．５％の殺細胞作用がみら
れたのみであった。
２９細胞およびマウス正常胎児線維芽細胞に対する殺細
胞作用を調べたところ、Ｌ−９２９細胞に対して、ＴＫ
Ｆの凍結乾燥品の１／１０００希釈品では２５゜３％、
１／２０００希釈品では１８．７％の殺細胞作用が観察
された。一方、正富胎児線維芽細胞にりＪしては、１／
１０希釈においてさえも、６．５％の殺細胞作用がみら
れたのみであった。
実験例２ ＴＫＦの殺腫瘍細胞活性
ＩＣＲマウスにサルコーマ１８０細胞をｌＸ１０’１ｌ
ｌｉｌ腹腔内移植し、１日経過後、ＴＫＦの生理食塩水
溶液を腹腔に１００μｍ注射した。１日１回の注射蕃３
日間繰り返し、平均生存日数および治癒例数をめた。結
果は第１表に示した通りであった。
ｌｉｌ腹腔内移植し、１日経過後、ＴＫＦの生理食塩水
溶液を腹腔に１００μｍ注射した。１日１回の注射蕃３
日間繰り返し、平均生存日数および治癒例数をめた。結
果は第１表に示した通りであった。
第 １ 表
第１図は、本発明のＴＫＦのセファデックスＧ−２００
によるゲル濾過の溶出パターンを示す。 縦軸は放射能濃度（ｃｐｍ ）を、横軸は両分番号を示
し、Ａ→はブルーデキストラン、Ｂ−→はウシ血清アル
ブミン（分子量６６２００） 、Ｃ→は卵白アルブミン
（分子量４５０００） 、Ｄ−→はα−キモトリプシン
（分子量２５０００） 、Ｅ−＋はチトクロームＣ（分
子量１２５００）の溶出位置を示す。 代理人 弁理士 高宮城 勝 手続袖正書（自発） 昭和５９６「 ９月１７１１ 特許庁長官 志 賀 学 殿 ２、発明の名称 殺腫瘍性物質 ３、補正をする壱 事件との関係 特許出願人 住 所 大阪市東区平野町１３丁［コ３５番地名称 古
冨製薬株式会社 （６７２）代衷壱 奥田充人 ４、代理人 住 所 〒５４１大阪市東区平野町３−丁目３５番地吉
富製薬株式会社内 ５、？ｉｌｉ正の対象 ６、補正の内容 明ｌ１ｌＩｉ！−および図面を次の通り補正する。 （１）明細書第２頁８行の「誘導しうるうどうか」を「
誘導しうるかどうか」に訂正する。 （２）同書第４頁６〜７行の「炭ガス」を「炭酸ガス」
に訂正する。 （３）同宵第５頁１行の「ホモジナイズ」を「ホモジナ
イズ」に訂正する。 （４）同書第６頁第１０行と第１１行の間に次の記載を
挿入する。 ［第２図に、ＴＫＦのセファクリルＳ−２００によるゲ
ル濾過の溶出パターンを示す。 第３図に、Ｔ’ Ｋ ＦをモノＱカラムを用いた高速液
体クロマトグラフにイ」シ、濃度勾配をかけた食塩液に
より溶出させたときの熔出パタ ンを示す。」（５）同
書第１２頁第１行と第２行の間に次の記載を挿入する。 ［第２図は、本発明のＴＫＦのセファクリルＳ−２００
によるゲル濾過の溶出バク ンを示す。縦軸は殺細胞活
性（％）を、横軸は両分番号を示し、ａ→はウシ血清ア
ルブミン（分子量６６２００ ） 、ｂ−・は卵白アル
ブミン（分子量４’５０００ ） 、ｃ−→はα−キモ
トリプシン（分子量２５［１０９’＞の溶出位置を示す
。 第３図は、本発明のＴ Ｋ Ｆをモノ（ゴカラムを用い
た高速液体クロマ１．グラフ（波長： ２１１０ｎｍ
）に付し、濃度勾配をかけた食塩液により溶出させたと
きの熔出バク ンを示す。縦軸は殺細胞活性（％）、食
塩液の濃度（ｍＭ）を、横軸は両分番号を示し、００−
は殺細胞活性のグラフを、−・・−は食塩液の濃度勾配
のグラフを示す。」（６）図面について、別紙の通り第
２図および第３図を追加する。 以上 第２ 図 面分蚤号 昭３０ 画分蚤も
によるゲル濾過の溶出パターンを示す。 縦軸は放射能濃度（ｃｐｍ ）を、横軸は両分番号を示
し、Ａ→はブルーデキストラン、Ｂ−→はウシ血清アル
ブミン（分子量６６２００） 、Ｃ→は卵白アルブミン
（分子量４５０００） 、Ｄ−→はα−キモトリプシン
（分子量２５０００） 、Ｅ−＋はチトクロームＣ（分
子量１２５００）の溶出位置を示す。 代理人 弁理士 高宮城 勝 手続袖正書（自発） 昭和５９６「 ９月１７１１ 特許庁長官 志 賀 学 殿 ２、発明の名称 殺腫瘍性物質 ３、補正をする壱 事件との関係 特許出願人 住 所 大阪市東区平野町１３丁［コ３５番地名称 古
冨製薬株式会社 （６７２）代衷壱 奥田充人 ４、代理人 住 所 〒５４１大阪市東区平野町３−丁目３５番地吉
富製薬株式会社内 ５、？ｉｌｉ正の対象 ６、補正の内容 明ｌ１ｌＩｉ！−および図面を次の通り補正する。 （１）明細書第２頁８行の「誘導しうるうどうか」を「
誘導しうるかどうか」に訂正する。 （２）同書第４頁６〜７行の「炭ガス」を「炭酸ガス」
に訂正する。 （３）同宵第５頁１行の「ホモジナイズ」を「ホモジナ
イズ」に訂正する。 （４）同書第６頁第１０行と第１１行の間に次の記載を
挿入する。 ［第２図に、ＴＫＦのセファクリルＳ−２００によるゲ
ル濾過の溶出パターンを示す。 第３図に、Ｔ’ Ｋ ＦをモノＱカラムを用いた高速液
体クロマトグラフにイ」シ、濃度勾配をかけた食塩液に
より溶出させたときの熔出パタ ンを示す。」（５）同
書第１２頁第１行と第２行の間に次の記載を挿入する。 ［第２図は、本発明のＴＫＦのセファクリルＳ−２００
によるゲル濾過の溶出バク ンを示す。縦軸は殺細胞活
性（％）を、横軸は両分番号を示し、ａ→はウシ血清ア
ルブミン（分子量６６２００ ） 、ｂ−・は卵白アル
ブミン（分子量４’５０００ ） 、ｃ−→はα−キモ
トリプシン（分子量２５［１０９’＞の溶出位置を示す
。 第３図は、本発明のＴ Ｋ Ｆをモノ（ゴカラムを用い
た高速液体クロマ１．グラフ（波長： ２１１０ｎｍ
）に付し、濃度勾配をかけた食塩液により溶出させたと
きの熔出バク ンを示す。縦軸は殺細胞活性（％）、食
塩液の濃度（ｍＭ）を、横軸は両分番号を示し、００−
は殺細胞活性のグラフを、−・・−は食塩液の濃度勾配
のグラフを示す。」（６）図面について、別紙の通り第
２図および第３図を追加する。 以上 第２ 図 面分蚤号 昭３０ 画分蚤も
Claims (1)
- 哺乳動物由来のマクロファージを、体表を刺傷したセン
チニクバエ（Ｓａｒｃｏｐｈａｇａ ｐｅｒｅｇｒｉｎ
ａ）幼虫またはその軸化初期の号ナギのホモジネートま
たは体液から（ηられ、ケル濾過法による分子量が約１
８８，０００で、５Ｏ５−ゲル電気泳動により分子量約
３２．０００のサブユニット４分子と分子り約３０．（
＋００のザブユニット２分子に分かれるレクチン様活性
を有する複合蛋白で刺激することによってｉ：？られる
、分子量約３０，０００〜約７０，０００の殺腫瘍性物
質。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP59066330A JPS60209530A (ja) | 1984-04-02 | 1984-04-02 | 殺腫瘍性物質 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP59066330A JPS60209530A (ja) | 1984-04-02 | 1984-04-02 | 殺腫瘍性物質 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS60209530A true JPS60209530A (ja) | 1985-10-22 |
| JPH0144199B2 JPH0144199B2 (ja) | 1989-09-26 |
Family
ID=13312723
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP59066330A Granted JPS60209530A (ja) | 1984-04-02 | 1984-04-02 | 殺腫瘍性物質 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS60209530A (ja) |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS6377900A (ja) * | 1986-09-18 | 1988-04-08 | Sanwa Kagaku Kenkyusho Co Ltd | ヤママユガ由来のレクチン様物質及びその分離精製法並びにその用途 |
| US4960756A (en) * | 1986-09-13 | 1990-10-02 | Sanwa Kagaku Kenkyusho Co., Ltd. | Lectin like protein substance, method of obtaining same and anti-tumor agent comprising same |
| JP2016053003A (ja) * | 2014-09-03 | 2016-04-14 | 学校法人 東洋大学 | カイガラムシ由来のポリペプチド |
-
1984
- 1984-04-02 JP JP59066330A patent/JPS60209530A/ja active Granted
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4960756A (en) * | 1986-09-13 | 1990-10-02 | Sanwa Kagaku Kenkyusho Co., Ltd. | Lectin like protein substance, method of obtaining same and anti-tumor agent comprising same |
| JPS6377900A (ja) * | 1986-09-18 | 1988-04-08 | Sanwa Kagaku Kenkyusho Co Ltd | ヤママユガ由来のレクチン様物質及びその分離精製法並びにその用途 |
| JP2016053003A (ja) * | 2014-09-03 | 2016-04-14 | 学校法人 東洋大学 | カイガラムシ由来のポリペプチド |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH0144199B2 (ja) | 1989-09-26 |
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